Реферат

Отчет 50 с., 00 рис,14 табл., 103 источника, 00 прил.

БИОПРЕПАРАТЫ, КОРМОВЫЕ ДОБАВКИ, ЖИВОТНЫЕ, ПТИЦА, ПРОДУКТИВНОСТЬ, ПРОДУКЦИЯ

Объектом исследования является индюки, пороcята, телята, аквакультура.

Цель работы — научное обоснование, технологическая и эколого-экономическая оценка применения новых функциональных кормовых добавок и лечебно-профилактических препаратов биорегулирующей терапии в органическом сельском хозяйстве.

Работа выполняется на основании технического задания на проведение НИР за счет федерального бюджета по заказу МСХ РФ.

В результате проведенных лабораторных, научно-хозяйственных и клинических исследований для органического сельского хозяйства предложена система биорегулирующей терапии с использованием симбиотических препаратов на основепробиотических микроорганизмов B.subtilis и B.licheniformi, природных олигосахаридов, сорбентов и функциональной кормовой добавки«Асидо-Био-Цит» жидкий на основе растительных пептидно-белковых биорегуляторов.

Комплексные исследования позволили установить, чтофункциональная кормовая добавка «Асидо-Био-Цит» жидкий и препарат Стимул 2+ оказывают ростстимулирующее, иммуномодулирующее и гепатопротекторное влияние на организм молодняка индеек, поросят и телят, молоди стерляди, что улучшает физиологическое состояние, функциональную активность органов и тканей, усвояемость кормов и способствует увеличению энергии роста молодняка на 13,1-16,2%. Использование в технологической схеме производства мяса и аквакультурына органических фермах и промышленных комплексахпозволит повысить сохранность поголовья и конверсию корма, снизить применение химических средств защиты и улучшить качество получаемой продукции.

Введение

Пищевая безопасность — одна из актуальныхпроблем современности, так как загрязнение биосферы в последние годы достигло глобальных размеров. Наиболее сильная контаминация вредными и токсичными веществами воздушной и водной среды, почвы, продуктов питания наблюдается в регионах с развитой промышленностью и интенсивным сельским хозяйством. Традиционные способы индустриального производства сельскохозяйственной продукции истощают почву и водные ресурсы, наносят существенный вред окружающей среде и биологическим природным ресурсам [8]. Употребление человеком загрязненных различными ксенобиотиками продуктов питания, чрезмерное использование химических пищевых добавок, генномодифицированных и рафинированных продуктов — все это является причиной нарушения обмена веществ, онкологических, аллергических, кожных и других заболеваний, снижения продолжительности жизни населения. Ксенобиотики вызывают бесплодие и аборты у женщин, имеют отдаленный тератогенный и мутагенный эффект [8,24,65,72].

Единственный путь решения этой актуальнейшей проблемы – это биологизация земледелия и животноводства. Поэтому в начале2000 г. в ЕС возникла европейская инициатива органического сельского хозяйства. (TheEuropeanInitiativeforSustainableDevelopmentinAgriculture — EISA) [1,3,16,18,50].

Основные задачи органического сельского хозяйства: получение продуктов экологически безопасных для человека; охрана природных свойств почв, воды и воздуха; поддержание плодородия почвы; создание максимальных условий для сохранения энергии и сырья [77,78,80,96,97].

Органическое сельское хозяйство в мире развивается высокими темпами. С 2000 по 2018 год он вырос более чем в пять раз (с 18 до 97 миллиардов евро). По прогнозам GrandViewResearch рынок продолжит свой рост со скоростью 10 – 12 % в год и достигнет в 2025 г. порядка 212-230 млрд. долларов. Планируется, что к 2025 году объём рынка органических продуктов может составить от 3 до 5% от мирового рынка сельхозпродукции. Лидером по объёму рынка органической продукции являются США, на которые приходится 44% рынка. Далее идут страны ЕС и Китай.

Российский рынок органической продукции находится в самом начале своего развития. Ее доля в структуре продовольствия в России — около 0,1 %. Для производства «органики» в РФ используется всего 0,3 % пашни. Объем продаж «органики» составляет порядка 10 млрд. рублей при общей емкости рынка продуктов питания в 10 трил. рублей. По разным данным, от 80 до 90 % продаваемых в нашей стране органик-продуктов – импортные [85,92].

По прогнозу аналитиков, в ближайшие годы российский рынок органической продукции будет расти со средним темпом 10-12 %. С 1 января 2020 года вступил в силу федеральный закон об органической продукции, который определил принципы ее производства в РФ и стандарты маркировки. Утвержден и  введен в  действие ГОСТ Р 56508-2015 «Продукция органического производства. Правила производства, хранения, транспортировки», который гармонизирован с регламентами по органическому сельскому хозяйству ЕС.

К производству органической продукции применяются строгие требования. Производство органической продукции должно быть расположено вдали от источников загрязнения окружающей среды, объектов промышленной деятельности, территорий интенсивного ведения сельского хозяйства. Продукция может выращиваться только на чистой почве. Минимальное время для «очищения» земли от химикатов в растениеводстве составляет, в среднем 2–3 года, переходный период в животноводстве и аквакультуре равен 4–24 месяцам[32,93,98].

По требованиям ГОСТ Р 56508-2015 «Продукция органического производства. Правила производства, хранения, транспортировки» в органическом производстве запрещается применять генно-инженерно-модифицированные организмы (ГМО) и продукцию, изготовленную из ГМО или с помощью ГМО, антибиотики, гормоны, ограничен перечень химических средств защиты растений и животных[62,63,64].

В связи с этим, одним из перспективных направлений для органического сельского хозяйства является более широкое внедрение в практику достижений биотехнологии, использования экологически безопасных биологических препаратов, способствующих повышению объемов производства и качества сельскохозяйственной продукции. Весьма перспективным является применение в системе производства органических продуктов питания биологических средств защиты животных, в частности, полиферментных, пробиотических и симбиотических препаратов комплексного действия, созданных на основе биотехнологических приемов культивирования микроорганизмов и природных компонентов растительного и минерального происхождения [29,30,33,39,43,44].

Следует отметить, что производство органических продуктов питания запрещает использование гормонов роста и необоснованное применение антибиотиков. Из-за системного применения антибиотиков в животноводстве,  эффективность их воздействия на организм  заметно снизилась, так как патогенные и условно патогенные бактерии выработали устойчивость к ним. В организме животных развиваются негативные процессы — снижается  численность полезной кишечной микрофлоры. Генетические детерминанты антибиотикоустойчивости, попадая в геномы патогенных видов бактерий, делают вызываемые  ими инфекционные заболевания практически неизлечимыми существующими медикаментами. Нарушения физиологических, иммунологических механизмов защиты организма животных создают условия для развития инфекционных процессов, вызываемых его собственной  патогенной микрофлорой и бактериями-сапрофитами из окружающей среды.

Кроме того, микробный дисбаланс и негативные последствия в отношении здоровья и продуктивности связаны с промышленными приемами ведения животноводства [4,34,40,41,100,101]. Ограничен контакт с почвой, растениями, другими естественными факторами, которые в обычных условиях являются для животных донорами нормальной микрофлоры [2,7,13,15,36,47,48].

Поэтому ведется поиск альтернативных путей профилактики, лечения и кормления продуктивных животных, что предусматривает экологически безопасную коррекцию ветеринарных мероприятий, рационов питания на основе традиционных кормов, создание нового поколения функциональных продуктов, соответствующих требованиям современного животноводства. Особо актуально встает эта проблема при организации органического производства.

В настоящее время теоретическое обоснование получает актуальное направление – биорегулирующая терапия, в основе которой лежит повышение естественной резистентности сельскохозяйственных животных и птицы путем направленного воздействия естественными метаболитами (пептиды, пептоны, органические кислоты, олиго- и полисахариды)[12,45,57,86].

В повышении защитных сил организма важное значение имеют факторы, влияющие непосредственно на активизацию адаптационных способностей и иммунобиологической реактивности птицы, в частности, биологические стимуляторы различной природы. К ним относятся естественные метаболиты, витамины, адаптогены, хелатные соединения микроэлементов, а также бактериальные препараты комплексного действия [16, 17,46,52,53,59,67].

Поэтому при производстве лечебных препаратов и кормовых добавок в последнее время широко используют бактериальные вещества. Микроорганизмы содержат большое количество биологически активных веществ, регулирующих обменные процессы, влияющие на иммунную систему макроорганизма, что позволяет использовать их для созданияиммуномодулирующих препаратов. При этом показано, что действующим началом, полученных из препаратов микроорганизмов, являются соединения ферментной природы, глюканы и пептиды. Они активируют макрофаги, иммунокомпетентные клетки, гормональные процессы в организме [10,11,19,26,28,31,68,70,90,91].

В настоящее время на основе биомассы микроорганизмов непатогенных штаммов разработаны уникальные лечебно-профилактические препараты.Например, «Баксин-вет» [46], «Баксин-КД» [56]. Применение различных дозпрепарата «Баксин-вет» на курах-несушках яичных и мясных кроссов показало положительное влияние оптимальных доз препарата не толькона продуктивность родительского стада кур, естественнуюрезистентность, а также инкубационные качества яиц, вывод цыплят[56].

По данным Е.В. Бессарабовой и др. (2011), использование препарата ГидроЛактиВ, изготовленного из молочной сыворотки с добавлением лактобактерий, оказывает положительное влияние на зоотехнические показатели выращивания бройлеров. ГидроЛактиВ содержит легко усваиваемый кальций и другие микроэлементы в виде высокоэнергетических соединений – лактатов, которые служат источником энергии, способствуют усвоению углеводов и являютсятопливом для печени при производстве глюкозы и гликогена [9].

Перспективной группой являются пептидно-белковые биорегуляторы

с доказанным репаративным и протекторным действием. Многие из них имеют широкий спектр действия за счет восстановления биохимической нормы внутриклеточных процессов. Видонеспецифическое действие позволяет максимально увеличить сферы их применения[38, 61,83,84].

Одним из перспективных направлений является замена антибиотиков пробиотиками – препаратами, содержащими микроорганизмы и вещества микробного и иного происхождения, использующихся в терапевтических целях [5,55,58].

Применение пробиотиков в животноводстве и аквакультуреявляется реинтродуцированием полезной микрофлоры в виде чистой культуры без риска вызвать заболевание. Применение пробиотиков способствует возвращению организма в нормальное физиологическое и поведенческое состояние путём восстановления баланса кишечной микрофлоры и тем самым служит одним из факторов, поддерживающих их здоровье. Лечебный и профилактический эффект этих препаратов обусловлен высокой антагонистической активностью производственных штаммов микроорганизмов относительно патогенной и условно-патогенной микрофлоры, повышении функциональной деятельности иммунной системы и лучшем усвоении питательных веществ корма [14,16,25,36,76,102,103].

Пробиотики в отличие от антибиотиков, не приводят к привыканию со стороны условно-патогенной микрофлоры, продукты их жизнедеятельности не скапливаются в органах и тканях животных и не влияют на качество продукции. Поэтому применение пробиотиковспособствует получению животноводческой продукции высокого качества, безопасной в бактериальном в химическом отношении [24,36,101].

В состав пробиотических препаратов включают типичных представителей нормальной микрофлоры толстого отдела кишечника животных.

К пробиотикам относятся следующие микроорганизмы: лактобактерии (L. acidophilus, L. plantarum, L. casei, L. bulgaricus, L. lactis, L. reuteri, L. rhamnosus, L. fermentum, L. jonsonii, L. gassed); бифидобактерии (B. bifidum, B. infantis, B. longum, B. breve, B. adolescents); непатогенные разновидности EscherichiaColi; непатогенные разновидности Bacillus (В. subtilis); непатогенные разновидности Enterococcus (Enterococcifaecium, Е. salivarius); молочнокислый стрептококк (Str. thermophylus); дрожжевые грибки Saccharomycesboulardii.

Как показывает практический опыт, пробиотики могут быть использованы длястимуляции неспецифичного иммунитета животных; профилактики и лечения смешанных желудочно-кишечных инфекций, при расстройствах пищеварения алиментарной этиологии (дисбактериозы, острые ацидозы и др.); замены антибиотиков в кормах для молодняка животных и птицы, аквакультуры; повышения эффективности использования кормов и продуктивности животных, птицы и аквакультуры; преодоление следствий технологических стрессов, обусловленных вакцинацией, транспортировкам и др. [27,36,37,47,54,55,64,66,71,82,87,89,95].

Действие пробиотических препаратов может быть усилено за счет пребиотиков — веществ, которые не всасываются в тонкой кишке, но создают благоприятные условия и стимулируют рост нормальной микрофлоры толстого кишечника. Собственно к пребиотикам относятся следующие вещества: олигофруктоза, инулин, галактоолигосахариды, парааминобензойная кислота, пантотенат кальция, лактулоза, пищевые волокна (клетчатка), ксилит, хитозан и др.Пребиотики также нормализуют моторику кишечника, адсорбируют микотоксины.

В настоящее время ведутся исследования по разработке эффективных комплексов пробиотиков и пребиотиков (симбиотических препаратов) для животноводства[49,79,81,99].

Сотрудники ВНИИ мясного скотоводства ведут разработки симбиотического препарата, содержащего пребиотик инулин, носитель — пшеничные отруби, на которых адсорбированы живые бактерии Streptoccusfaecium и Lactobacilusacidofilus. Использование препарата при выращивании молодняка крупного рогатого скота способствовало развитию нормальной микорофлоры кишечника, которая уничтожает патогенные микроорганизмы, повышению продуктивности и эффективности производства говядины [66].

На экспериментальной базе ГНУ Всероссийский НИИТИ биологической промышленности РАН был осуществлен комплекс исследований по разработке технологии производства новых симбиотических препаратов — продуцентов лизина с использованием в качестве основы штаммов Е.соli. Симбиотический препарат получают периодическим управляемым глубинным культивированием штамма Е.соli VL 613 в питательной среде на основе перевара Хоттингера, концентрируют полученную культуру, бактериальную массу ресуспендируют в защитной среде и лиофильно высушивают для длительного сохранения биологических свойств симбиотического препарата. Исследована эффективность применения препарата при выращивании цыплят-бройлеров [37].

Установлена эффективность применения в промышленном птицеводстве пробиотических, пребиотических и симбиотических препаратов Ветом 4, Велес 6,59, Витал, Хлорелла, Микросорб. Препараты оказывают положительное влияние на формирование в организме здорового микробиоценоза, который способствует повышению переваримости и усвояемости кормов [79].

Однако в последнее время отмечают, что активность многих пробиотических препаратов не всегда соответствует заявленному эффекту [4]. Врачи не всегда знают о различиях пребиотиков, пробиотиков, симбиотиков. Не учитывают особенности механизма действия, который в первую очередь зависит от того, какие виды микроорганизмов включены в препарат. Негативный результат при работе с конкретным пробиотиком часто вызывает скептическое отношение ко всей группе. Следовательно, необходимы дальнейшие исследования и разработка высокоэффективных средств биологической защиты животных и птиц.

Эффективность пробиотических препаратов определяется многими факторами: составом, направленностью селекции производственных штаммов, технологией производства. Не менее важна схема применения, которая для каждого препарата строго индивидуальна и в значительной степени определяет результативность [4, 6,73,74]. Одной из сложнейших проблем при изготовлении пробиотиков является отбор бактериальных штаммов, предназначенных для эффективной колонизации желудочно-кишечного тракта, так как штаммы должны выборочно подавлять рост патогенных культур, иметь высокую ферментативную, синтетическую и метаболическую активность, стимулировать иммунобиологические системы организма [25, 75, 76, 87, 88].

Таким образом, разработка эффективных функциональных кормовых добавок и биологических препаратов для биорегулирующей терапии при производстве органических продуктов животноводства и аквакультуры является актуальной.

Цель исследований – научное обоснование, технологическая и эколого-экономическая оценка применения новых функциональных кормовых добавок и лечебно-профилактических препаратов биорегулирующей терапии в органическом сельском хозяйстве.

Задачи исследований:

– изучение мирового опыта, информационных источников и проведение патентного поиска в тематическом поле биорегулирующей терапии и органического сельского хозяйства;

– разработка функциональных кормовых добавок и биологических лечебно-профилактических препаратов на основе пептидно-белковых биорегуляторов, пробиотических микроорганизмов с выраженными ростстимулирующими, иммуномодулирующими, репаративными и гепатопротекторными свойствами;

— оценка влияния кормовых добавок и биопрепаратов на физиологическое состояние, продуктивность животных и качество продукции;

— анализ результатов, оформление отчета по НИР, публикации результатов в ведущих отечественных и зарубежных журналах.

1 Собственные исследования

1.1 Материал и методы исследований

Исследования проводились в ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ, ООО «Агрофирма «Залесный» Зеленодольского района,ООО «Тукаш» Тюлячинского района, МПТК «Джалиль»Сармановского района, КФХ И. И. БатыршинЛаишевского районаРеспублики Татарстан.

Объекты иccледования: индюки, пороcята, телята, аквакультура.

В экспериментальных исследованиях изучалась эффективность применения функциональной кормовой добавки «Асидо-Био-Цит» жидкий(ООО «БИОПЛАЗМА» по ТУ ВY 391157257-011-2014 изм. №1,2,3) и симбиотического препарата Стимул 2+ (ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ)при выращивании сельскохозяйственных животных и птицы, аквакультуры. Препарат Стимул 2+ разработан на основе комплекса пробиотических микроорганизмов B.subtilis и B.licheniformi, природных олигосахаридов и сорбентов.Схема экспериментальных исследований представлена в таблице 1.

Таблица 1 — Схема экспериментальных исследований

Изучение эффективности применения препаратов при выращивании индюковпроводилось в ООО «Агрофирма «Залесный» Зеленодольского района Республики Татарстан. Для опыта были подобраны 150 индюшат самок кросса «Hybrid Converter» в возрасте 28 суток с живой массой 730-740 г, которых разделили по принципу аналогов на 3 группы [69]. Индюки всех групп получали полнорационный комбикорм (ОР+ основой рацион) в соответствии с зоотехническими нормами [42, 65]. Дополнительно к ОР индюки II подопытной группы получали препарат «Асидо-Био-Цит» жидкий, IIIподопытной группы препарат «Асидо-Био-Цит» жидкийи симбиотический препарат Стимул 2+ в дозировке 20 г на 1 кг комбикорма. Кормовую добавку «АсидоБио-ЦИТ жидкий»задавали посредством медикатора в питьевую воду в дозировке 1,0 г/голову в сутки.Продолжительность опыта составила 77 дней.

В течение опыта постоянно проводили наблюдения за физиологическим состоянием птицы, определяли динамику изменения живой массы по результатам индивидуального взвешивания в течение всего периода выращивания, сохранность поголовья. Ежедневно проводили учет заданного и съеденного корма. По результатам поедаемости корма и приростов живой массы была рассчитана конверсия корма.

В начале (фон) и в конце эксперимента у подопытной птицы были взяты пробы крови для определения морфологических и биохимических показателей.

В конце периода откорма индюков (в возрасте 105 суток) были проведены контрольный убой птицы с патологоанатомической оценкой органов и тканей, анатомическая разделка тушек, морфометрический анализ. Отбора проб был проведенсогласно ГОСТ 50396.0-92 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовки к микробиологическим исследованиям», подготовка проб к испытанию по ГОСТ 26669-87 «Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологического анализа».Качество мяса определяли в соответствии с ГОСТ 31473-2012 « Мясо индеек (Тушки и их части)».

Исследования мяса по микробиологическим показателям проводились согласноГОСТ 32031-2012 «Продукты пищевые. Методы выявления бактерий Listeriamonocytogenes»,ГОСТ Р 50396.1-2010 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов», ГОСТ 31468-2012 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы метод выявления сальмонелл».

В пробах мяса определяли содержание сухого вещества, белка, жира по общепринятым методикам: сухого вещества — высушиванием навески в сушильном шкафу при температуре 105±5°С, белка – на приборе ДК-20; УДК-132 по методике Къельдаля, жира – в аппарате Сокслета.

Для оценки вкусовых качеств мяса проведена комиссионная дегустация мяса и бульона по методике, изложенной А.Т. Мысиком (1986). При органолептическом исследовании мяса определяли: внешний вид, запах, консистенцию, качество бульона при варке мяса (ГОСТ Р 51944-2002 Мясо птицы. Методы определения органолептических показателей, температуры и массы). Дегустационная оценка мяса и бульона проводилась после тепловой обработки (варки) по 9-ти бальной шкале.

Научно-хозяйственный опыт по определению эффективности применения «Асидо-Био-Цит» жидкийи симбиотического препарата Стимул 2+при выращивании поросят-отъемышей был проведён в ООО «Тукаш» Тюлячинского района. Для этих целей было подобрано 90 поросят — отъемышей в возрасте 21 день с живой массой 7,2 кг, которых по принципу аналогов разделили на три группы. Кормление и поение поросят в соответствии с зоотехническими нормами [68]. Поросята в соответствии с возрастным периодом получали полнорационный комбикорм СПК-5 и СПК-6 (ОР-основой рацион).ПоросятамIIи IIIподопытных группдополнительно c питьевой водой выпаивали препарат «Асидо-Био-Цит» жидкийв дозировке 1,0 г/голову в сутки, поросятам IIIподопытной группы –дополнительно добавлялив кормсимбиотический препарат Стимул 2+в дозировке 20 г на 1 кг комбикорма.Продолжительность опыта составила 33 дня.

В течение опыта постоянно проводили наблюдения за физиологическим состоянием поросят, консистенцией кала, определяли динамику изменения живой массы по результатам индивидуального взвешивания в начале и конце опыта, сохранность поголовья. Ежедневно проводили учет заданного и съеденного корма. По результатам поедаемости корма и приростов живой массы была рассчитана конверсия корма.

В начале (фон) и в конце эксперимента у подопытных животных были взяты пробы крови для определения морфологических и биохимических показателей.

Научно-хозяйственный опыт по определению эффективности применения препарата «Асидо-Био-Цит» жидкийпри выращивании телят молочного периода был проведен в МПТК «Джалиль»Сармановского района. Для опыта было отобран 21 животное в возpасте 5 суток, которых разделили по принципу аналогов на 3 группы. Во II подопытной группе на начало опыта было 3 теленка, больных с эймериозом и вирусной диареей крупного рогатого скота. Телята всех гpупп получали хозяйственный рацион, состоящий из ЗЦМ, сена, комбикорма-престартера, соли поваренной, мела кормового. Телятам II подопытной гpуппыи III подопытной группы дополнительно выпаивали c ЗЦМ препарат «Асидо-Био-Цит» жидкий в дозировке 40 мл в сутки на голову по 20 мл с утренним и вечерним кормлением соответственно.Продолжительность опыта составила 38 суток.

В течение опыта постоянно проводили наблюдения за физиологическим состоянием телят, поедаемостью кормов, консистенцией кала, определяли динамику изменения живой массы по результатам индивидуального взвешивания в начале и конце опыта, сохранность поголовья.

Зоотехнический анализ кормов был проведен по общепринятым методикам: сухое вещество — высушиванием навески в сушильном шкафу при температуре 105±5°С, содержание протеина – на приборе ДК-20; УДК-132 по методике Къельдаля, жира – в аппарате Сокслета, сырой клетчатки – по методу Геннеберга и Штоманаобработкой навеки смесью концентрированной азотной и 80%-ной уксусной кислот; сырой золы – методом сухого озоления; кальций – трилонометрическим методом с индикатором флуорексоном; фосфора – спектрофотометром УВ-1280.

В начале (фон) и в конце эксперимента у подопытных животных были взяты пробы крови для определения морфологических и биохимических показателей. Подсчет форменных элементов выполняли согласно методу, описанному в Справочнике по клиническим лабораторным методам исследования (М., 1975). Показатели средний объем эритроцита (MCV), содержание гемоглобина в отдельном среднем эритроците (MCH) и цветовой индекс определяли методом расчета по соответствующим формулам. Лейкоцитарную формулу подсчитывали на мазках, окрашенных по Романовскому-Гимза, СОЭ определяли по методу Панченкова.

Содержание кальция и глюкозы определяли колориметрическим методом, общего белка – биуретовым колориметрическим методом, мочевину – уреаза-глютамат-дегидрогеназный кинетическим методом, глюкозу – колоpиметpичеcким методом, холестерин – ферментным колориметрическим методом, аланинаминотpанcфеpазу (АЛТ), аcпаpтатаминотpанcфеpазу(АCТ), общий билиpубин – колоpиметpичеcким методом.

Научно-хозяйственный опыт по определению эффективности применения препарата Стимул 2+ при выращивании аквакультуры(молодняк стерляди) был проведен в КФХ И.И. Батыршина Лаишевского района. Базой для эксперимента служили аквариумы объемом 50-60 л. Температура воды в течение дней выращивания находилась в пределах +20°С. Во всех аквариумах применялась аэрация. Кормили рыбу комбикормом SteCoSUPRIME (произ. Нидерланды). Вторая подопытная группа дополнительно получала сухой пробиотик «Субтилис» из расчета 40 г на 1 кг комбикорма, третья подопытная группа дополнительно получала препарат Стимул 2+ из расчета 20 г на 1 кг комбикорма. Продолжительность опыта составила 30 дней.

В течение опыта постоянно вели наблюдения за состоянием рыбы, поедаемостью корма, изменение живой массы определяли путем взвешивания в начале и в конце эксперимента.

Цифровой материал, полученный в результате исследований, обработан по стандартным программам вариационной статистики. Разницу по средним показателям считали достоверной по t-критерию Стьюдента.

1.2 Результаты исследований

1.2.1 Изучение химического состава, органолептических показателей и токсикологических свойств препаратов

Изучение химического состава и органолептических показателей препарата «Асидо-Био-Цит» жидкий»показало, что препарат соответствует требованиям ТУВY 391157257-011-2014 (изм. №1,2,3) (таблица 2).

В составе «Асидо-Био-Цит» жидкий»содержатся:инозитольные, лецитиновые,эссенциальныеполиеновые кислоты, в т.ч. арахидоновая и омега-3антиоксиданты (кофермент Q10, каротиноиды); ферменты рибонуклеаза, протеаза, коллагеназа, полисахариды (маннаны, b-глюканы), органические кислоты, микроэлементы ( K, Mg, F и др.), витамины А, группы В, F, H [1].

Таблица 2 — Органолептические показатели и химический состав препарата

Изучение токсикологических свойств (острой токсичности) препарата проведены сотрудниками кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы академии. Опыты проводили на клинически здоровых лабораторных мышах в соответствии с «Методическимирекомендациями по токсико-экологическойоценкелекарственных средств, применяемых в ветеринарии» (Аргунов М.Н., Сафонова Л.Б., Василенко В.В., Воронеж, 1998).

Изучение острой токсичности было проведено на 5 группах белых мышей (n=10) , массой 18-20 г.

Мышам первой группы ввели натощак в желудок 0,5 мл 50% суспензии на крахмальном клейстере рабочего раствора препарата, что соответствует 12500 мг/кг массы животного. Мышам второй группы ввели натощак в желудок 0,25 мл 50% суспензии на крахмальном клейстере рабочего раствора препарата, что соответствует 6250 мг/кг массы животного. Мышам третьей группы ввели натощак в желудок 0,25 мл 25% суспензии на крахмальном клейстере рабочего раствора препарата, что соответствует 3125 мг/кг массы животного. Мышам четвертой группы ввели натощак в желудок 0,25 мл 12,5% суспензии на крахмальном клейстере рабочего раствора препарата, что соответствует 1562,5 мг/кг массы животного. Мышам пятой группы ввели натощак в желудок 0,5 мл крахмального клейстера. Наблюдение за животными проводили в течение 14 дней.

Результаты исследований показали, что в период опыта гибели животных не было. Обще состояние мышей было удовлетворительным, животные всех групп охотно принимали воду и корм. Поведенческие рефлексы не нарушены, реакция на внешние раздражители нормальная. Побочных явлений не наблюдалось. Среднесмертельная доза (LD 50) для лабораторных мышей препарата «Асидо-Био-Цит» жидкий»составляет более 25000 мг/кг массы тела, что согласно ГОСТ 12.1007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования» позволяет классифицировать препарат как малотоксичный – IV класс токсичности.

1.2.2Изучение эффективности применения биологических препаратов и функциональной кормовой добавки при выращивании индюков

Наши исследования показали, что использование препаратов «Асидо-Био-Цит» жидкий» и Стимул 2+ при выращивании молодняка индеек оказало положительное влияние на улучшение всех основных зоотехнических показателей у птицы. К концу опыта сохранность поголовья в контрольной группе составила 96%, во второй и третьей группе 98,0%.Живая масса птицы контрольной группы составила 8520 г, у индеек, получавших препараты, этот показатель увеличился на 12,2% и 13,5% и составил соответственно по группам 10377 г и 10500 г (р<0,001). Среднесуточные приросты живой массы индеек также были больше контроля: во второй группе на 13,1%, атретьей группе — на 14,6%, При этом затраты корма на 1 кг прироста живой массы у птицы, получавших препараты уменьшились на 11,8% и 13,0%, что связано с повышением усвояемости комбикорма (таблица 2).

Таблица 2 – Влияние препаратов «Асидо-Био-Цит» жидкий» и Стимул 2+на рост индеек и конверсию корма

Примечание: здесь и далее (р<0,05) *, (р<0,01) **, (р<0,001) ***

Физиологическое состояние экспериментальной птицы оценивалось по общему внешнему виду, поведению и результатам морфологического и биохимического исследования крови.Было отмечено, что в течение опытного периода все экспериментальные индейки были клинически здоровы, имели хороший аппетит, хорошую реакцию на внешние раздражители, не было никаких признаков заболеваний. Помет индеек всех групп имел нормальный внешний вид, цвет и консистенцию и не было признаков нарушения пищеварения, что указывало на нормальное функционирование желудочно-кишечного тракта.

Гематологический анализ относится к числу методов, которые могут способствовать выявлению некоторых изменений в состоянии здоровья и могут быть полезными для диагностики заболеваний у птиц.Морфологический состав крови индеек представлен в таблице 3.

Таблица 3 – Морфологические показатели крови подопытных индеек(n=5)

Анализ таблицы 3 показывает, что использование «АсидоБио-ЦИТ» жидкий» и Стимул 2+достоверно увеличивает по сравнению с контрольными показателями в крови экспериментальных индеек количество гемоглобина и эритроцитов: во второй группе на 8,15% и 8,29% , в третьей группе – на 3,7% и 10,6% соответственно. По содержанию нейтрофилов, эозинофилов и лимфоцитов в крови между группами достоверной разницы не отмечено.

Биохимические показатели сыворотки крови индеек представлены в таблице 4. По сравнению с контрольной группой в крови индеек, получавших препараты «АсидоБио-ЦИТ» жидкий» и Стимул 2+достоверно увеличилось содержание кальция: в крови индеек второй подопытной группы на 4,0%, третьей группы на 3,3% соответственно.

Таблица 4 — Биохимические показатели сыворотки крови подопытных индеек(n=5)

Таким образом, увеличение количества эритроцитов и гемоглобина в крови индеек экспериментальных групп может свидетельствовать о том, что препарат стимулирует процессы эритропоэза и синтеза белка, что подтверждается более высокими темпами роста, продуктивности и развития птицы.

В конце опыта был проведен убой по пять голов индеек из каждой группы. Убой проводили после 12-тичасового голодания. Результаты исследований представлены в таблицах5 и 6.

Таблица 5 – Мясная продуктивность подопытных индеек(n=5)

Анализ данных контрольного убоя показал, что использование биологических препаратов при выращивании индеек положительно повлияло на мясную продуктивность птицы. Индейки второй и третьей подопытной групп имели большую предубойную массу, массу полупотрошенной и потрошенной тушек. У индеек, получавших «АсидоБио-ЦИТ» жидкий», эти показатели были больше контроля соответственно на 0,11% и 0,09%, препарат «АсидоБио-ЦИТ» жидкий» в сочетании с препаратом Стимул 2+ — на 0,35% и 0,29%(р<0,001).

При изучении морфометрических параметров массы тушек и некоторых внутренних органов выявили достоверное повышнеие абсолютноймассы печени, селезенки и сердца у индеек подопытных групп, что коррелирует с их большей предубойной массой (таблица 5). Однакоотносительная масса этихорганов находилась в пределах физиологической нормы для данного вида и возраста птицы.

Макроскопические данные показали, что морфология мышечной ткани белого и красного мяса, а также внутренних органов (селезенка, печень, почки, желудочек, желудок и сердце) не имеет существенных различий и без патологических изменений.

Таблица 6 – Масса внутренних органовподопытных индеек(n=5)

Как известно, микробиологическое исследование является одним из важнейших показателей качества мяса.Как правило, в мышцах и внутренних органах любого здорового животного, которые были забиты по асептическим правилам, нет микроорганизмов. Однакоиз-за посмертной инфекции убойных животных на мясоперерабатывающих заводах продукты убоя могут содержать различные сапрофитные микроорганизмы (гнилостные бактерии, бактерии семейства Escherichiacoli, споры плесени, актиномицеты и т. д.), а иногда и сальмонеллы, листерии и др.

Результаты оценкимяса всех групп показали, что микробиологические показатели не превышают допустимый предел (таблица 7). Однако по сравнению с первой контрольной группой в мясе индеек второй и третьей подопытных групп уменьшилось количество КМАФАнМ.

Таблица 7 — Микробиологическая оценка мяса подопытныхиндеек(n=3)

Качество мяса по органолептическим и физико-химическим показателям соответствует требованиям ГОСТ.

Таким образом, использование «АсидоБио-ЦИТ» жидкий» и симбиотического препарата Стимул 2+ при выращивании индеек приводит к улучшению общего состояния здоровья птиц и повышению продуктивности. Добавление в питьевую воду препарата «АсидоБио-ЦИТ» жидкий»предотвращает размножение в воде патогенных микроорганизмов, увеличивает «кислотосвязывающую способность» корма,поддерживает уровеньpH по всей длине пищеварительного тракта за счет синергетического действия органических кислот, которые функционально дополняют друг друга, что укрепляет иммунную систему птицы и уменьшает количество патогенных бактерий в пищеварительном тракте, улучшает усвояемость корма, положительно влияет на рост и развитие птицы. Действие препарата Стимул 2+ дополняет положительный эффект, который обусловлен еговысокой антибактериальной активностью в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и выраженными иммуномодулирующими свойствами.

1.2.3 Изучение эффективности применения биологических препаратов и функциональной кормовой добавки при выращивании поросят

Исследованиями установлено, что использование препаратов «Асидо-Био-Цит» жидкий» и Стимул 2+ оказало положительное влияние на рост и развитие поросят-отъемышей(таблица 8). К концу опыта сохранность поголовья в контрольной и подопытных группах, получавших биопрепараты, составила 100%.

Живая масса поросят контрольной группы к концу эксперимента составила 18,41 кг, у животных второй подопытной группы 19,81 кг и третьей подопытной группы — 20,20 кг. По сравнению с контролем использование препарата «Асидо-Био-Цит» жидкий»увеличило живую массу поросят на 7,6%(р<0,001), использование препарата «Асидо-Био-Цит» жидкий»в сочетании с препаратом Стимул 2+ на 9,7%(р<0,001). Среднесуточные приросты живой массы поросят также были больше контроля: во второй группе на 14,0%, ав третьей группе — на 15,9%,

Таблица 8 – Влияние препаратов «Асидо-Био-Цит» жидкий» и Стимул 2+ на рост подопытных поросят и конверсию корма

При этом затраты корма на 1 кг прироста живой массы у животных, получавших препараты уменьшились на 11,4% и 12,8%, что связано с повышением усвояемости комбикорма.

Физиологическое состояние экспериментальных животных оценивалось по общему внешнему виду, поведению и результатам морфологического и биохимического исследования крови.Было отмечено, что в течение опытного периода все подопытные поросята были клинически здоровы, имели хороший аппетит, хорошую реакцию на внешние раздражители, не было клинических признаков заболеваний. Кал у животныхподопытных групп имел нормальный внешний вид, цвет и консистенцию, не было выявлено клинических признаков нарушения пищеварения, что указывало на нормальное функционирование желудочно-кишечного тракта.

Следует отметить, что использование препарата «Асидо-Био-Цит» жидкий» способствует уменьшению выделения газов в помещении, где содержались поросята.

Анализ данных морфологических и биохимических показателей крови показал, что в конце опыта у поросят контрольной и опытных групп все биохимические показатели крови были в пределах физиологической нормы (таблица 9).

Нами установлено, что в крови поросят, получавших препараты, увеличилось содержание гемоглобина и эритроцитов. Так, в крови животных второй подопытной группы содержание этих показателей составило 98,8 г/л и 7,46*10¹²/л, третьей подопытной группы — 90,4 г/л и 7,22*10¹²/л, что больше контроля соответственно на 14,6% (р<0,01) и 8,7%, 4,8%(р<0,05)и5,2%.

Анализ крови на лейкоциты проводят для диагностики состояния организма, так как лейкоциты – это важная составляющая иммунной системы человека и животных. Повышение лейкоцитов свидетельствует о воспалительном процессе в организме. По нашим данным, в крови животных второй группы, получавших препарат «Асидо-Био-Цит» жидкий», количество лейкоцитов составило 8,16*10⁹/л, а у поросят третьей группы, получавших «Асидо-Био-Цит» жидкий» в комплексе с препаратом Стимул 2+, этот показатель составил 7,79*10⁹/л, что на 20,4% и 24,1% достоверно меньше контрольных показателей.

Аналогичная тенденция была установлена и по СОЭ. Как известно, скорость оседания эритроцитов можетпоказать на воспалениев организме. Нами установлено, что применение препаратов способствовало уменьшению СОЭ в крови поросят второй и третьей подопытных групп. Однако разница была недостоверной.

Таблица 9 – Морфологические показатели крови подопытных поросят(n=5)

Биохимический анализ крови – исследование, которое используется для выявления сведений о функциональном состоянии организма в целоми органов в отдельности. Комплексное исследование основных биохимических показателей крови, позволяет оценить особенности кроветворения, функцию печени, поджелудочной железы и почек, белковый, липидный и углеводный обмен, обмен нуклеиновых кислот, а также баланс железа и кальция в организме. Биохимические показатели крови подопытной птицы представлены в таблице 10.

Нами установлено, что в крови поросят второй и третьей групп, получавших препараты,довостоверно повысилось содержание глюкозына 1,63 ммоль/л и 1,03 ммоль/л (р<0,001)и уменьшилось содержание холестерина на 0,72 ммоль/л и 0,76 ммоль/л(р<0,05).

Глюкоза является показателем состояния обмена веществ у животных. Вероятно, более высокое содержание глюкозы в крови подопытных поросят свидетельствует о повышении эффективности использования углеводов комбикорма и получении большего количества обменной энергии, что способствует повышению интенсивности роста.

Таблица 10 — Биохимические показатели сыворотки крови поросят(n=5)

По анализу показателей, характеризующих гепатопротекторные свойства препарата «Асидо-Био-Цит» жидкий», можно сказать, что у поросят второй и третьей группы улучшились некоторые изученные биохимические показатели крови, в частности, содержание ферментов аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы, общего билирубина.

Как известно, показатели АЛТ и АСТ являются своеобразными маркерами функционального состояния печени [2]. Аспартатаминотрансфераза (АСТ) – фермент, который находится во всех клетках организма, но главным образом в клетках сердца и печени и в меньшей степени в почках и мышцах. В норме активность АСТ в крови очень низкая. При повреждении тканей печени или мышц она высвобождается в кровь. Таким образом, АСТ является показателем повреждений печени.

Аланинаминотрансфераза (АЛТ, АлАт)– это эндогенный фермент из группы трансфераз, подгруппы аминотрансфераз (трансаминаз), широко используемый в практике для лабораторной диагностики повреждений печени. АЛТ синтезируется внутриклеточно, и в норме лишь небольшая часть этого фермента попадает в кровь. При повреждении печени (при гепатитах, циррозе печени) в результате цитолиза (разрушения клеток) этот фермент попадает в кровь. В нашем эксперименте по сравнению с контролем наблюдалась тенденция к уменьшению содержания ферментов в крови поросят второй и третьей группы: АЛТ на 0,54ед/л (9,31%) и 0,46 ед/л (7,93%), АСТ на 0,47 ед/л (8,30%) и 0,51 ед/л (9,01%), что вероятно, свидетельствует об улучшении функции печени.

Метаболизм билирубина – это сложный химический процесс, постоянно происходящий в организме, при его нарушении на каком-либо этапе и появляется изменение уровня этого вещества в сыворотке крови. Поэтому билирубин является важным показателем работы сразу нескольких систем организм, в первую очередь, функционирования печени и процесса распада гемоглобина. Повышение общего и прямого билирубина свидетельствует о клинических нарушениях функции печени. В нашем экспериментепо сравнению с контролем у поросят, получавших препараты, содержание билирубина уменьшилось (однако разница была недостоверной). Для подтверждения данного предположения необходимо определение фракций билирубина.

Экономическая эффективность применения функциональной кормовой добавки «Асидо-Био-Цит» жидкий» при выращивании поросят-отъемышей составила в расчете на 1 рубль дополнительных затрат 2,57 руб., «Асидо-Био-Цит» жидкий» и препарата Стимул 2+ — 1,50 руб.

Таким образом, результаты экспериментальных исследований показали, что применение препаратов «Асидо-Био-Цит» жидкий» и Стимул 2+ улучшает физиологическое состояние, положительно влияет на функциональную активности печени и иммунитет, повышает продуктивность поросят.

1.2.4 Изучение эффективности применения биологических препаратов и функциональной кормовой добавки при лечении и выращивании телят

Для изучения эффективности применения биологических препаратов при выращивании телят в качестве элементов биорегулирующей терапии было сформировано три группы. В третьей подопытной группе на начало эксперимента былотри теленка, больных эймериозом и вируcной диареей крупного рогатого скота.

В начале опыта телятам второй подопытной группы однократно была сделана инъекция антикокцидийного препарата Толтрекс в дозе 3 мл суспензии на 10 кг массы животного; телятам третьей подопытной группы однократно была сделана инъекция антикокцидийного препарата Толтрекс в дозе 3 мл суспензии на 10 кг массы животного и Тетравитферонв дозе 1,0 см³/10 кг(комбинированный препарат для профилактики и лечения гиповитаминозов и вирусных заболеваний).

Исследованиями установлено, что использование препарата«Асидо-Био-Цит» жидкий»в целях профилактики заболеваний и укрепления иммунитета эффективно, препарат оказывает положительное влияние на улучшение физиологического состояния, рост и развитие животных (таблица 11). По нашим данным, живая масса телят контрольной группы к концу эксперимента составила 45,86 кг, у животных второй подопытной группы — 53,8кг и третьей подопытной группы — 51,22 кг. Среднесуточные приросты живой массы телят в контрольной группе за период опыта составили 381,1 г, второй подопытной группы — 677,8 г, третьей подопытной группы – 573,9 г.

Физиологическое состояние подопытных телят оценивали по общему внешнему виду, поведению, выраженности рефлексов, а также результатам морфологического и биохимического исследования крови.

Таблица 11- Влияние препарата «Асидо-Био-Цит» жидкий» на рост подопытных телят

Нами установлено, что в третьей подопытной группе на начало эксперимента было три теленка, больных эймериозом и вируcной диареей крупного рогатого скота. Результаты эксперимента показали эффективности примененных методов профилактики и лечения телят. К концу опыта животные второй и третьей подопытных групп были клинически здоровы, имели хороший аппетит, хорошую реакцию на внешние раздражители, не было клинических признаков заболеваний. Кал у животныхподопытных групп имел нормальный внешний вид, цвет и консистенцию, что указывало на нормальное функционирование желудочно-кишечного тракта.

Анализ данных морфологических и биохимических показателей крови показал, что в конце опыта у телятвторой и третьей подопытных групп все изученных показатели крови были в пределах физиологической нормы (таблицы 12,13). Нами отмечено повышение в крови гемоглобина 6,8 г/л и 14,2 г/л, что на 6,88% и 14,3% больше, чем в крови поросят контрольной группы. Следовательно, применение препаратов позволило улучшить физиологическое состояние телят, активизировать процесс гемопоэза, что способствовало увеличению снабжения кислородом органов и тканей подопытных животных.

Таблица 12 – Морфологические показатели крови подопытных телят(n=5)

Таблица 13 — Биохимические показатели сыворотки крови телят (n=5)

В тоже время к концу эксперимента в контрольной группе у трех телят наблюдались клинические признаки вирусной диареи. В крови телят первой группы было отмечено выше физиологической нормы количества лейкоцитов, СОЭ, общего белка, ферментов АЛАТ и АСАТ, а также уменьшении содержания мочевины. Изменение этих показателей свидетельствует о воспалительном процессе и снижении уровня функциональной активности печени.

Экономическая эффективность выпаивания «Асидо-Био-Цит» жидкий» илечения с применением препаратов Толтрекс и Тетравитферонсоставила в расчете на 1 рубль дополнительных затрат во второй подопытной группе 0,18 руб., в третьей подопытной группе — 0,63 руб.

Таким образом, результаты экспериментальных исследований показали, что применение препарата в комплексной профилактике и терапии заболеваний телят молочного периода улучшает физиологическое состояние, положительно влияет на функциональную активность печени и иммунитет, повышает продуктивность телят.

1.2.5 Изучение эффективности применения пробиотических препаратовпри выращивании аквакультуры

При выращивании молоди стерляди использовали комбикорм SteCoSUPRIME (произ. Нидерланды).По нашим данным, комбикорм содержал 59,1% сырого протеина, 16,3% жира, 3,3% сырой клетчатки, 7,4% сырой золы, 1,21% фосфора. Кормление рыбы производили 4раза в сутки, норма кормления 10% от массы тела.Результаты выращивания молоди стерляди на продукционном комбикорме с добавлением пробиотиков «Субтилис» и Стимул 2+ представлены в таблице 14.

Таблица 14 -Результаты выращивания молоди стерляди на продукционном комбикорме SteCoSUPRIMEс добавлением пробиотиков «Субтилис» и Стимул 2+

Как видно из данных таблицы 14, включение в состав корма пробиотических препаратов способствовало повышению сохранности рыбы, среднесуточных приростов живой массы. В первой контрольной группе среднесуточный прирост рыбы составил 0,45 г, во второй подопытной группе — 0,48 г, в третьей подопытной группе 0,49 г. К концу эксперимента живая масса рыбы второй и третьей подопытных групп составила 36,4 г.

Потребление корма во всех группах было одинаковым, так как кормление проводили нормировано. Соответственно массе рыб уменьшились и затраты кормов на 1кг прироста, по сравнению с контролем, во второй группе на 3,3%, в третьей — на 5,8%.

Таким образом, применение пробиотических препаратов при кормлении молоди стерляди эффективно, так как повышаются среднесуточные приросты живой массы и снижаются затраты корма.

Следует отметить, необходимо проведение эксперимента более продолжительное время и на большем поголовье, чтобы было возможно оценить и проанализировать скорость роста и массонакопление у рыбы, а также необходимо изучение механизмов влияния пробиотических препаратов на организм и микробиом желудочно-кишечного тракта рыбы.

Заключение

В результате проведенных исследований впервые для органического сельского хозяйства предложена система биорегулирующей терапии с использованием симбиотических препаратов на основе пробиотических микроорганизмов B.subtilis и B.licheniformi, природных олигосахаридов и сорбентов и функциональной кормовой добавки«Асидо-Био-Цит»жидкий на основе растительных пептидно-белковых биорегуляторов.

Комплексные исследования позволили установить, что биопрепараты и функциональная кормовая добавка оказывают ростстимулирующее, иммуномодулирующее и гепатопротекторное влияние на организм молодняка индеек, поросят и телят, молоди стерляди, что улучшает функциональную активность органов и тканей, переваримость кормов и способствует увеличению энергии роста молодняка на 13,1-16,2%. Использование биопрепаратов и функциональной кормовой добавки в технологической схеме производства мяса на органических фермах и промышленных комплексах позволит повысить сохранность поголовья и конверсию корма11,4-13,0%, снизить применение химических средств защиты и улучшить качество получаемой продукции.

Таким образом, применение симбиотического препарата Стимул 2+ и функциональной кормовой добавки «Асидо-Био-Цит» жидкий позволит увеличить объемы производства молочной и мясной продукции, соответствующей по качеству требованиям органических продуктов класса «био-органик».

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Аварский, Н.Д. Рынок органической продукции России: современное состояние и потенциал развития / Н. Д. Аварский [и др.] // Экономика сельского хозяйства России.- 2014.- № 5. С. 29–37.
2. Андреева, С.Д. Клиническое и биохимическое исследование печени у животных / С.Д.Андреева, Ж.В. Вараксина.- Киров, 2000. 29 с.
3. Акимова, Ю.А. Перспективы развития органического сельского хозяйства в России / Ю.А. Акимова, Т.М. Полушкина // Современные проблемы науки и образования. — 2015. — № 2-1. (Элект. журнал).
4. Алямкин, Ю. Пробиотики вместо антибиотиков – это реально / Ю. Алямкин // Птицеводство. – 2005. – №2. – С. 17-18.
5. Андрусенко, С.Ф. Обогащенные безлактозные продукты из козьего молока / С.Ф. Андрусенко, П.А. Омельченко // Молочная промышленность.- 2008. — №11. – С.78-79.
6. Антипова, Л. Прослеживаемость безопасности птицепродуктов / Л. Антипова, С. Полянских, З. Ибрагимова // Птицеводство. – 2010. — № 3. – С.43-44.
7. Бевзюк, В. Н. Целловиридин вкомбикормахнестандартной рецептуры / В. Н. Бевзюк, Т. М.Околелова// Комбикорма. — 2003. — №5. – С. 46-47.
8. Берестенко, Е.Д.Факторы среды обитания и состояние здоровья населения / Е.Д. Берестенко, Ю.И. Григорьев // Российский медико-биологический вестник им. академика И.П. Павлова. — 2011. — №4. — С.147-153.
9. Бессарабова, Е.В. Влияние кормовой добавки «Гидролактив» на рост и развитие бройлеров/ Е.В.Бессарабова, Л.П.Гонцова, Ю.В. Краснобаев// Птица и птицепродукты.- 2011.- №2.- С.46-48.
10. Билалова, В.А. Рост и развитие гусят при использовании ферментов / В.А. Билалова, Д.Д. Хазиев // Интеграция аграрной науки и производства: состояние, проблемы и пути решения: Матер. Всеросс. научно-практ. конф. Ч.III. – Уфа, 2008. – С. 322-323.
11. Бодров, Д. Влияние ферментных препаратов на мясную продуктивность бычков /Д. Бодров // Молочное и мясное скотоводство. — 1998. — №3. -С.9-11.
12. Борук, В.В. Эффективность применения комплексных препаратов аминокислот («абиопептид») и микроэлементов («ферропептид») на различных стадиях онтогенеза бройлеров: дис. …канд.биол.наук/ В.В.Борук, Москва — 2012.
13. Булгаков, А.М. Эффективность кормления ферментными препаратами за счет усвоения питательных веществ животными / А.М. Булгаков.- Барнаул, 2009.-175 с.
14. Бурдаева, К. Кормовые пробиотики / К. Будаева // Корма и кормовые добавки. – 2015. – №2. – С. 37-41.
15. Влияние ферментных препаратов на физиолого-продуктивный потенциал цыплят- бройлеров на фоне замены зерновой части пшеницы на тритикале /А.Ю. Никитин [и др.] // Вестник Оренбургского государственного университета. – 2017. – №8 (208). – С. 65-69.
16. Волкова, И. Пробиотики как альтернатива кормовым антибиотикам / И. Волкова // Комбикорма. – 2014. – №2. – С. 63-64.
17. Волчкова, Л. Применение адаптогенов для бройлеров/ Л. Волчкова, Н.Калюжный, М.Тотоева// Животноводство России.-2006. — №3.- С.23-24.
18. Волынкина, М.Г. Ферментные препараты в кормлении коров в период раздоя / М.Г. Волынкина, В.А. Хлыстунова // Аграрный вестник Урала.- 2009.- №19- С.88-89.
19. Гайнуллина, М.К. Влияние скармливания премикса на продуктивность, состав и свойства молока коров черно-пестрой породы / М.К. Гайнуллина, А.Р. Фахрутдинова // Мат. междунар. науч.-прак. конф. «Инновационные пути импортозамещения в АПК», Донской ГАУ, апрель 2015, пос . Персиановский, 2015.С.12-17.
20. ГОСТ 25179-90 Молоко. Методы определения белка. Межгосударственный стандарт. – М.: Стандартинформ, 2006. — 6 с.
21. ГОСТ 5867-90 Молоко и молочные продукты. Методы определения жира. Межгосударственный стандарт. – М.: Стандартинформ, 2006. -15 с.
22. ГОСТ 3626-73 Молоко и молочные продукты. Методы определения влаги и сухого вещества. Межгосударственный стандарт. – М.: ИПК Издательство стандартов, 2006. -14 с.
23. Государственная программа развития сельского хозяйства и регулирования рынков сельскохозяйственной продукции, сырья и продовольствия на 2013-2020 годы ФГБНУ «Росинфомагротех». М., 2012. — 204 с.
24. Гущин, В.В. Безопасность продуктов питания – одна из основных проблем птицепромышленности / В.В. Гущин, Г.Е. Русанова, Н.И. Риза-Заде // Птица и птицепродукты. – 2012. — №1. – С. 53-56.
25. Данилевская, Н.В. Фармакологические аспекты применения пробиотиков / Н.В. Данилевская //Ветеринария. – 2005. — № 11.
26. Данилова, Н. Эффективность ферментного препарата «Гимизим» / Н. Данилова // Птицеводство. – 2005. — №3. – С. 25.
27. Данилов, И. ПробиотикСубтилис в промышленном птицеводстве / И. Данилов, О. Сорокин, М. Сафонов // Птицеводство. – 2010. – №5. – С. 23.
28. Дзагуров, Б. Подкормка для цыплят / Б. Дзагуров, И. Джелиева, З. Псхациева // Животноводство России. – 2009. — № 10. – С.23-24.
29. Добрук, Е.А. Влияние добавки «МиксОптима К» на продуктивность крупного рогатого скота : дис…. канд. с.-х. н./ Е.А.Добрук, 2013.- 136 с.
30. Егоров, И. Ферменты для рационов с повышенным вводом ячменя /И. Егоров // Комбикорма.- 2004.- №8.- С.73.
31. Ежова, О. Ферментный препарат в ячменном рационе уток / О.Ежова, А. Сенько, А. Лукьянов // Птицеводство. – 2004. — №12. – С. 14-15.
32. Елисеева, Л.Г. Международная интеграция в области обеспечения безопасности и повышения конкурентоспособности продукции агропромышленного производства /Л.Г. Елисеева // Техника и технология пищевых производств.- 2011.- №3.- С. 46-51.
33. Ефрюшин, А.Д. Влияние ферментного препарата Мацеробациллин ГЗХ в сочетании с витаминно-минеральным премиксом на переваримость питательных веществ дойными коровами / А.Д. Ефрюшин, А.М. Булгаков // Кормление сельскохозяйственных животных и кормопроизводство.- 2014.- №12.-С.53-58.
34. Зорикова, А.А. Специальные ферментные добавки в стартерных комбикормах для поросят /А.А. Зорикова / Материалы международного симпозиума, С.-Пб., 2005. —С. 132-134.
35. Зоотехнический анализ кормов / Е.А. Петухова [и др.]. – М.: Колос, 1981. – 256 с.
36. Илиеш, В.Д. Пробиотики в животноводстве — путь к качеству и безопасности продуктов питания / В.Д. Илиеш, М.М. Горячева // Свиноводство.- 2017.- №6.
37. Использование симбиотического препарата в кормлении цыплят-бройлеров / И.В. Павленко [и др.] // Птица и птицепродукты. – 2013.- № 1.- С. 45-46.
38. Изучение эффективности использования подкислителя кормового «АсидоБио-ЦИТ» жидкий» в рационах поросят группы доращивания / В.В Богомолов [и др.] /Генетика и разведение животных .- 2016.-№3.- С.64-68.
39. Кислухина, О.В. Ферменты в производстве пищи и кормов / О.В. Кислухина//М.: Делипринт, 2002. — 336 с.
40. Кислюк, С. Оптимальный набор кормовых добавок в условиях повышения цен на сырье / С. Кислюк // Птицеводство. – 2008. — № 7. – С. 21-22.
41. Комаров, А. Стандартизация методов определения активности ферментных препаратов / А. Комаров, Л. Телишевская, А. Панин // Комбикорма. – 2007. — № 3. – С. 64-65.
42. Кормление сельскохозяйственной птицы / В.И. Фисинин [и др.]. – Сергиев Посад.: Загорская типография, 2001. – 281 с.
43. Кормозим ферментный препарат нового поколения в рационах животных / В.Г. Гугля [и др.] // Сельские новости. -2004. -№12.-С. 46-49.
44. Корнилова, В. Влияние ферментного препарата на продуктивность индюшат/ В. Корнилова, М. Маслов// Комбикорма. – 2008. — № 3. – С. 79.
45. Костомахин, Н.М. Использование ферментных препаратов в кормлении сельскохозяйственных животных и птицы /Н.М. Костомахин // Главный зоотехник.- 2006.- № 8. — С. 20-22.
46. Кочиш, И.И. Влияние кормовой добавки «Баксин-КД» на естественную резистентность и продуктивность бройлеров/ И.И.Кочиш, М.С.Найденский, В.В.Нестеров [и др.]// Птица и птицепродукты.- 2011.- №5. — С.20-22.
47. Кузнецов, А. Универсальный фермент в рационах с люпином / А. Кузнецов, П. Кундышев, Е. Краевская // Комбикорма. 2012. — №3. – С. 75-76.
48. Корниенко, С.И. Влияние ферментных препаратов на продуктивность / С.И. Корниенко // Научный журнал КубГАУ.- 2013.- №87(03).- С. 1–28.
49. Кузнецова, В.Ф. Использование пробиотиков, пребиотиков и симбиотиков в птицеводстве / В.Ф. Кузнецова // Сергиев Посад, 2007. — С. 27.
50. Кундиус, В. И. Организационно-экономические предпосылки развития органического сельского хозяйства в условиях вступления России в ВТО / В. И. Кундиус, О Ю. Воронкова // Вестн. алтайского гос. аграр. ун-та. — 2014. — № 6. — С. 140–144.
51. Кощаев, А.Г. Экологизация продукции птицеводствапутем использования пробиотиков как альтернатива антибиотикам / А.Г. Кощаев // Юг России: экология, развитие.- 2007.- №3.- С.94-98.
52. Ленкова,Т.Н. Мультиэнзимы в комбикормах для бройлеров / Т.Н. Ленкова // Птицеводство. – 2007. — № 2. – С.15-16.
53. Ленкова, Т.Н. Новый отечественный энзим / Т.Н. Ленкова, Т.А. Егорова, И.Г. Сысоева // Птицеводство. — 2016. — №6. – С. 17-20.
54. Лысенко, С. Пробиотики для цыплят-бройлеров / С. Лысенко, А. Бараников, А. Васильев // Птицеводство. – 2007. – №5. – С. 31 – 32.
55. Лыско, С. Влияние пробиотиков на иммунную систему цыплят-бройлеров /С. Лыско // Птицеводство. – 2008. – №7. – С. 15 – 16.
56. Макаров, С.В. Влияние биологически активной добавки «Баксин-КД» на резистентность, продуктивность бройлеров и репродуктивную способность кур: дисс. … канд.биол.наук/ С.В.Макаров,Москва, 2012.- 122с.
57. Марков, Ю. О роли ферментов в свиноводстве / Ю. Марков // Свиноводство.- 2000.- №4.- С. 13–16.
58. Мастерских, Д.Г. Свойства молока коз зааненской породы разного возраста / Д.Г. Мастерских, А.С. Шувариков // Овцы, козы, шерстяное дело.- 2004.- №3.- С. 39-40.
59. Молоскин, С. Универсальный фермент для зерновых рационов/ С. Молоскин // Комбикорма.- 2003. — №1. — С. 56-57.
60. Мысик, А.Т. Справочник по качеству продуктов животноводства / А.Т. Мысик, С.М. Белова – М.: Агропромиздат, 1986. – 239 с.
61. Надаринская, М.А.Выпаивание добавки «АсидоБио-ЦИТ» жидкий телятам о рождения / М.А. Надаринская, О.Г. Голушко// Мат. национальной научно-практической конференции, посвященной 80-летию со дня рождения Заслуженного работника высшей школы РФ, Почетного профессора Брянской ГСХА, доктора ветеринарных наук, профессора А. А. Ткачева «Актуальные проблемы ветеринарии и интенсивного животноводства, Брянск, 20–21 сентября 2018 года. Кокино: Брянский государственный аграрный университет, 2018. — С. 11-114.

62. Национальный доклад «О ходе и результатах реализации в 2013 году Государственной программы развития сельского хозяйства и  регулирования рынков сельскохозяйственной продукции, сырья и продовольствия на 2013–2020 годы». М., 2014 [Электронный ресурс].

63. Национальный стандарт Российской Федерации ГОСТ Р 56508-2015. Продукция органического производства. Правила производства, хранения и транспортировки. М.: Стандартинформ, 2015 [Электронный ресурс].

64. Новые экологически безопасные препараты для бройлерного производства / И.В. Павленко [и др.] // Птица и птицепродукты. – 2015.- № 1.- С. 55-57.

1. Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных / А.П. Калашников [и др.] – М.: КолосС, 2003. – 456 с.
2. Нуржанов, Б.С. Использование симбиотиков в животноводстве / Б.С. Нуржанов, Ю.И. Левахин, И.М. Агеев // Вестник мясного скотоводства.- 2013.- № 4.- С. 107-110.
3. Нуртдинов, М.Г. Ферментные препараты в животноводстве / М.Г. Нуртдинов. – Казань: Фэн, 2002 – 96 с.
4. Нуртдинов, М.Г. Ресурсосберегающая технология производства свинины с использованием ржи и полиферментного препарата «Универсал» : дис…. д-ра. с.-х. н.: 06.02.02/ М.Г. Нуртдинов. — Казань, 2006.- 192 с.
5. Овсянников, А.И. Основы опытного дела / А.И.Овсянников. М.: Колос. – 1976. — 302 с.
6. Околелова, Т.М. Включение комплексных ферментных препаратов в комбикорма с повышенным содержанием трудногидролизуемых компонентов / Т.М. Околелова, Э.В. Удалова // Сергиев Посад, 1996.-7 с.
7. Олькова, А.С. Влияние новых пептидных биорегуляторов на активностьDaphniamagna в чистых и загрязненных тяжелыми металлами водах [электронный ресурс] / А.С.Олькова, М.С.Краснов, В.П.Ямскова и дор.// Современные проблемы науки и образования.- 2015. — №5. URL^http^//www/science-education.ru/ru/article/view?id=21927.
8. Османов, Р.О. Современное состояние и перспективы оценки влияния факторов окружающей среды на состояние здоровья детского населения страны / Р.О. Османов, З.Г. Мусаева, С.О. Курбиева // Медицинская экология. Юг России: экология, развитие. — 2008. -№2. — С.119-122.
9. Околелова, Т. Определение эффективности добавок в комбикормах для птицы / Т. Околелова, О. Просвирякова // Птицеводство.- 2008. — № 9. – С. 26-27.
10. Околелова, Т. Актуальные вопросы в кормлении птицы/ Т. Околелова// Животноводство России. – 2009. — № 5. – С.21-22.
11. Панин, А.Н. Иммунобиология и кишечная микрофлора / А.Н. Панин, Н.И. Малик, Е.В. Малик // Аграрная наука, ИК «Родник». — 1998.- 48 с.
12. Панин, А.Н. Пробиотики в промышленном птицеводстве/ А.Н. Панин, Н.И. Малик, Е.В. Малик // Материалы 1 Международного конгресса по птицеводству. — 2005.
13. Папцов, А. Г. Органическое сельское хозяйство ЕС: тенденции развития и опыт регулирования / А. Г. Папцов, Л.Г. Ахметшина // Агропродовольственная политика России. — 2014. — № 8 (20). — С. 80–84.
14. Перспективы органического сельского хозяйства в России. Генное редактирование на службе у человека (подг. по итогам Научно-методического семинара Аналитического управления Аппарата Совета Федерации Федерального Собрания РФ,10 ноября 2016 г.) // Аналитический вестник. — 2016. — № 49 (648). — 77 с.
15. Подчалимов, М.И. Эффективность использования разных пробиотиков и пребиотиков в кормлении цыплят-бройлеров / М.И. Подчалимов, Е.М. Грибанова // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии.- 2013.- № 4.- С. 53-55.
16. Пономарев, С.В. Биологические и технологические аспекты применения методов органического сельского хозяйства для получения продукции аквакультуры / Пономарев С.В. [и др.] // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. -2015. -Т.17, №4(3). -С. 557-564.
17. Потгютер, Р. Пути оптимизации кормления птицы/ Р. Потгютер// Животноводство России. – 2011. –№ 2. –С. 19-21.
18. Применение ферментативного пробиотика в кормлении цыплят-бройлеров / В.А. Манукян [и др.] // Птица и птицепродукты. – 2013. – №5. – С. 22 – 24.
19. Протасова, Д.Г. Свойства козьего молока / Д.Г. Протасова // Молочная промышленность. -2001. -№8. -С.25-26.
20. Птицеводство и технология производства яиц и мяса птиц / Б.Ф. Бессарабов [и др.].- СПб.: Лань, 2005. – 352 с.
21. Рынок органической продукции России: современное состояние и потенциал развития / Н. Д. Аварский [и др.] // Экономика сельского хозяйства России.- 2014.- № 5.- С. 29–37.
22. Сапай, А.Н. Влияние бульона белкового концентрированного сухого кормового на рост, развитие и мясную продуктивность молодняка крупного рогатого красной степной породы скота: автореф. дис. …канд.с-х.наук/ А.Н,Сапай, Барнаул, 2009.
23. Субботин, В.В. Биотехнология пробиотиков ветеринарного назначения/ В.В. Субботин // Аграрная наука. – 1998.- № 3.
24. Субботин, В.В. Опыт применения пробиотикалактобифадол в различных отраслях животноводства и в птицеводстве/ В.В. Субботин, Н.В. Данилевская // Эффективное животноводство. – 2009.- № 4 (62).- С. 40-41.
25. Тедтова, В. Пробиотический препарат для бройлеров / В. Тедтова // Птицеводство. – 2007. — №10. — С. 28.
26. Ферментная активность как реальный показательпитательностирационов животных/ Р.У. Бикташев [и др.]//Кормопроизводство.- 2005. — №7.- С. 19-20.
27. Ферментные препараты для улучшения усвояемости корма и снижения его стоимости / И. Егоров [и др.] // Комбикорма. – 2010. — №7. – С. 73-76.
28. Фисинин, В.И. Современные подходы к кормлению птицы / В.И. Фисинин, И.А. Егоров // Птицеводство. – 2011. — № 3. – С. 7-10.
29. Фисинин, В.И. Стратегия инновационного развития птицеводства России/ В.И. Фисинин // Комбикорма. -2012. -№ 4. –С. 3-6.
30. Хорошевская, Л. Эндогенный фермент в рационах цыплят-бройлеров/ Л. Хорошевская, А. Хорошевский, О. Ларичев, К. Масловский // Комбикорма. -2009. -№ 1. –С. 73-74.
31. Швыдков, А. Обоснование применения пробиотиков в бройлерном птицеводстве / А. Швыдков [и др.] // Птицеводство. – 2012. – №12. – С. 44-48.
32. Шульце, Э. Традиционное и органическое сельское хозяйство: анализ сравнительной эффективности с позиции концепции устойчивого развития / Э. Шульце [и др.] // Вестник С.-Пб. университета. — 2015. -Сер.5. Вып.4. -С. 4-39.
33. Шванская, И.А. Проблемы и перспективы развития органического сельского хозяйства в России / И.А.Шванская//http://nf-innovate.com
34. Шульга, Е.А. Эффективность применения пробиотика «Субтилис» в составе полнорационных комбикормов для осетровых рыб / Е.А. Шульга, Ю.А. Лапухин / Материалы первой ежегодной научной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН.- Ростов на Дону, 2005.- С.340-341.
35. Эффективность нового симбиотического комплекса для птиц Авилакт форте/ Л.А. Неминущая[и др.] // Птицеводство. — 2010. — №1. – С. 45-
36. Biernasiak, J. The effect of a new probiotic preparation on the performance and faecal microflora of broiler chickens / J. Biernasiak, K. Slizewska // VeterinarniMedicina. – 2009. — № 11. — Р. 525-531.
37. Korosi, L. Effects of natural products for broiler production parameters. / L. Korosi // 11th Europen Poultry Conference. Abstracts. — Bremen, 2002. -P. 106.
38. Luo, J. Effect of probiotic Propionibacterium jensenii 702 supplementation on layer chicken performance / J. Luo, S.King, M.C.Adams // Benef. Microbes. — 2010. — V.1. — N 1. — P. 53 — 60.
39. Vargas-Rodriguez, L.M. Effect of Probiotic and Population Density on the Growth Performance and Carcass Characteristics in Broiler Chickens / L.M. Vargas-Rodriguez, L.A. Duran–Melendez [е.а.] // International Journal of Poultry Science. – 2013. — №7. — Р. 390-395.

Реферат

Отчет 73 с., 21 табл., 13 источников, 6 прил.

Ключевые слова: НОВЫЙ ГИГИЕНИЧЕСКИЙ ПОДСТИЛОЧНЫЙ МАТЕРИАЛ, МИКРОКЛИМАТ, МОРФОБИОХИМИЧЕСКИЕ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ, СОХРАННОСТЬ ПОГОЛОВЬЯ, ПРОДУКТИВНОСТЬ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ПТИЦ, ОЦЕНКА ЖИВОТНОВОДЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ

Объектом исследования является новый гигиенический подстилочный материал, который представляет собой древесную стружку, полученную путем строгания сухой древесины хвойных и лиственных пород, а также переработанные отходы деревообрабатывающей промышленности, с удалением металлических примесей, обработанные термохимическими и биотехнологическими методами. Изучаемый материал представляет собой обеспыленную, обеззараженную сыпучую массу от светло- до темно-коричневого цвета со специфическим запахом, влагоемкостью подстилки 480% и массовой долей влаги 3-10%. Изучаемый подстилочный материал не обладает аллергизирующим действием, устойчив к механическому и биологическому воздействию с выраженным антисептическим и адсорбционным действием, а также способен поглощать из воздуха птицеводческих помещений вредные газы.

Цель работы-обосновать оптимальные значения функциональных характеристик и толщины нового гигиенического подстилочного материала, а также изучить его влияние на параметры микроклимата, организм, сохранность, продуктивность и качество мясной продукции сельскохозяйственных птиц в условиях промышленного животноводства.

Работа выполняется на основании технического задания на проведение научно-исследовательской работы по заказу Минсельхоза России за счет средств федерального бюджета в 2020 году.

Введение

В настоящее время при содержании сельскохозяйственных птиц в промышленных условиях используются различные виды подстилочного материала, например: древесная стружка, сфагновый торф, солома, лузга подсолнечника и т.д. Однако у каждого материала имеются как положительные стороны, так и, отрицательные, и в первую очередь – это либо высокая цена, либо неудовлетворительное качество подстилки[1].

Особое зоогигиеническое значение подстилочного материала при индустриальных технологиях содержания животных обусловлено тем, что высокая продуктивность выращиваемых пород, определяемая генотипом, реализуется на практике только в очень узком диапазоне комфортных условий, в которых должны содержаться животные. Даже незначительные отклонения от оптимальных условий приводят к резкому снижению продуктивности животных, падает уровень естественной резистентности животных, что в конечном итоге может привести к появлению многих заболеваний незаразной этиологии, а в некоторых случаях и к появлению вспышек инфекционных заболеваний и их распространению [2].

Эффективные подстилочные материалы способствуют комфортному содержанию птиц, позволяют достичь плановых показателей продуктивности выращиваемых животных, что гарантирует экономическую состоятельность птицеводческих хозяйств, снижают риски развития эпизоотий, позволяют снизить масштабы использования антибиотиков. Обычные подстилочные материалы, такие как торф, древесные опилки, солома и лузга подсолнечника и другие, даже хорошо себя проявившие при традиционных технологиях животноводства, такими свойствами не обладают и нуждаются в значительной дополнительной обработке. Без дополнительной обработки их использование многократно повышает риски хозяйств, связанные с не достижением плановой продуктивности животных, вспышками эпизоотий и ухудшением экологической обстановки [3; 4; 5].

Зоотехническая наука уделяет особое внимание качеству подстилочного материала. Назначение подстилки — обеспечение животных теп­лым, мягким и сухим ложем и улучшение свойств воздуха в помещении. Подстилка должна быть сухой, мягкой, влагоемкой, гигроскопической, без наличия патогенной микрофлоры, обладать большой влагоемкостью, способностью поглощать газы, бактерицидными и бактериостатическими свойствами [6].

Одним из перспективных направлений проведения научных исследований являются работы по совершенствованию технологий использования зоогигиенического подстилочного материала в промышленном животноводстве, что позволит улучшить параметры микроклимата в животноводческом помещении и оказать благоприятное воздействие на организм и продуктивность сельскохозяйственных животных и птицы.

В настоящее время при выращивании цыплят-бройлеров применяют различного вида подстилочные материалы, наиболее распространенными из которых являются солома, опилки, торф, различные синтетические материалы и другие. По мнению некоторых авторов, лучшим видом подстилочного материала является верховой торф, обладающий бактерицидными свойствами [7]. Другие авторы считают, что верховой торф лучше использовать в смеси с такими материалами, как опилки, солома и стружка [8]. В нашей стране наиболее доступными видами подстилочного материала являются опилки и солома. Солома обладает неплохой влагоемкостью, примерно до 275%, достаточно хорошими теплоизоляционными свойствами, но достаточно часто она поражается грибами Penicillium, Fusarium иAspergillus, продуцирующих различные микотоксины, опасные для организма птиц [9].

1. Основная часть

1.1 Обоснование, цель и задачи исследований

Учитывая высокие требования, предъявляемые к подстилочному материалу, исследования по внедрению новой технологии его обработки являются актуальными.

Целью нашей работы было обоснованиеоптимальных значений функциональных характеристик и толщины нового гигиенического подстилочного материала, а также изучение его влияния на параметры микроклимата птицеводческого помещения, сохранность, продуктивность сельскохозяйственных птиц. В связи с этим, перед нами стояли следующие задачи:

— определить аллергизирующее действие нового подстилочного материала на лабораторных животных;

— определить раздражающее действиенового гигиенического подстилочного материала на кожу и слизистые оболочки глаз лабораторных животных;

— обосновать оптимальные значения функциональных характеристик и толщины нового гигиенического подстилочного материала в зависимости от вида птицы;

— изучить влияние нового гигиенического подстилочного материала на параметры микроклимата животноводческого помещения, сохранность поголовья, организм и продуктивность птиц, а также качество и себестоимость полученной продукции.

1.2 Материалы и методы исследований

Исследования были проведены с новым гигиеническим подстилочным материалом, который представляет собой древесную стружку толщиной 0,1-0,6 мм, полученную путем строгания сухой древесины хвойных или лиственных пород, а также переработанные отходы деревообрабатывающей промышленности, с удалением металлических примесей, обработанные термохимическими и биотехнологическими методами.При этомсама стружка, в направлении поперек волокон, изогнута и имеет стрелу прогиба неменее 1 мм.Подстилочный материал обеспыливается от мелкодисперсионных частиц размеромсвыше 1 мм, а количество частиц менее 1 мм не превышает 10%. Обработанный подстилочный материал упаковывается в полиэтиленовую пленку, а затем обеззараживается ионизирующим излучением, представляющимсобой поток гамма-квантов от соответствующего источника, направленным равномернона брикет с двух сторон (например, сверху и снизу).При этом гамма-излучениевоздействует на электроны молекул подстилочного материала, создавая высокоактивныерадикалы, тем самым разрушает ДНК патогенной микрофлоры. Упаковочная пленка сохраняет стерильность во время транспортировки и хранения, предотвращая загрязнение подстилочного материала. Изучаемый материал представляет собой обеспыленную, обеззараженную сыпучую массу от светло- до темно-коричневого цвета со специфическим запахом, влагоемкостью подстилки 480% и массовой долей влаги 3-10%. Подстилка выпускается производственным комплексом ООО «Омега» и отвечает требованиям ТУ 16.29.14-001-19235409-2018, является сельскохозяйственной продукцией ипредназначена для сельскохозяйственных животных и птиц.

1. Опыты по изучению местного раздражающего действия на слизи­стую оболочку глаза и раздражающего действия вещества при апплика­ции на кожу нового подстилочного материала проводили согласно «Методическим указаниям к постанов­ке исследований по изучению раздражающих свойств и обоснованию предельно-допустимых концентраций, избирательно-действующих ве­ществ в воздухе рабочей зоны» (1989).

2. Были проведены исследования по обоснованию оптимальных значений функциональных характеристик древесной стружки, толщину нового гигиенического подстилочного материала для различных видов сельскохозяйственных птиц. Опыты по изучению влияния нового гигиенического подстилочного материала на параметры микроклимата в птицеводческих помещениях, организм и продуктивность проводили в сельскохозяйственных предприятиях Республики Татарстан: на цыплятах-бройлерах мясного четырехлинейного кросса Кобб 500 в КФХ «Ахметов» и Зеленодольском филиале ООО «ПВК «Ак Барс», гусятах-бройлерахлиндовской породы-КФХ «Ахметов» и утятах-бройлерах пекинской породы французской селекции — ООО ФХ «Рамаевское».

В работе был использован метод санитарно-гигиенического обследования и описания птицеводческих помещений, включая технологическое оборудование. Оценку микроклимата проводили по показаниям датчиков температуры, влажности, содержания в воздухе газов (углекислого газа и аммиака)и освещенности, установленных в помещении, скорость движения воздуха определяется расчетным методом с помощью специальной программы, установленной на компьютере, а 1 раз в неделю – термоанемометром. Датчики определения параметров микроклимата установлены в трех местах и посередине здания, а для предотвращения повреждения, они ограждены сеткой, а данные — автоматически передаются на компьютер. В случае отклонения от оптимальных параметров, подается сигнал. Оценкузапыленности проводили гравиметрическим и микробную обсемененность – седиментационным методами.

Условия кормления всех подопытных бройлеров соответствовали общепринятым рационам.

Взвешивание бройлеров проводили каждые 7 дней на электронных весах.

Морфологические исследования крови бройлеров включали определение количества эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина по общепринятым методам.

Содержание общего белка, холестерина, глюкозы, общего кальция и неорганического фосфора определяли на автоматическом анализаторе «BioChemSA».

Фагоцитарную активность нейтрофилов (ФА) и фагоцитарное число периферической крови определяли общепринятыми методами, объектом фагоцитоза служила однодневная культура StaphylococcusAureus.

Данные, полученные в ходе исследования, были обработаны общепринятыми методами вариационной статистики программой MicrosoftOfficeExcel на персональном компьютере.

1.3 Результаты исследований

1.3.1 Изучение влияния нового подстилочного материала на организм лабораторных животных

1.3.1.1 Определение раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки глаз

Эксперименты по определению раздражающего действия на кожу были проведены на 4 кроликах обоего пола. Для этого участки кожи 5×5 см за день эксперимента тщательно выстригли на спине слева, и справа от позвоночника. На шею кроликов надевали пластиковые воротники для исключения слизывания испытуемого вещества. Испытуемый подстилочный материал измельчали в лабораторной мельнице и, слегка смешивая с дистиллированной водой, в виде влажной кашицы наносили на выстриженный участок кожи в нативном виде (из расчета 20 мг/см²) справа от позвоночника, контроль — 0,02 мл дистиллированной воды/см² слева от позвоночника, время экспозиции составляло 4 часа, а затем нанесенный препарат удаляли теплой водой с мылом. После смыва реакцию кожи регистрировали через 1 и 18 часов, оценивали в сравнении с симметричными участками кожи того же животного, где была нанесена дистиллированная вода. Наблюдение за кроликами вели в течение 7 дней.

В период наблюдения в опытах с изучаемым подстилочным материалом каких-либо функциональных нарушений со стороны кожи отмечено не было, и она не отличались от контрольного участка. По выраженности раздражающего влияния, исследуемый подстилочный материал можно отнести к веществам, не обладающих раздражающим действием на кожу кроликов.

При определении раздражающего действия на слизистую оболочку глаз в опыт были взяты 4 кролика, для чего в конъюнктивальный мешок левого глаза кроликов вносили измельченную нативную взвесь из испытуемого подстилочного материала в количестве 20 мг, правый глаз служил контролем, куда вносили дистиллированную воду в количестве 2-3 капель. После внесения измельченного подстилочного материала на 1 минуту, прижимали слезноносовой канал у внутреннего угла глаза. Наблюдение за состоянием слизистой оболочки и прозрачностью роговицы проводили в течение недели.

В опытах с испытуемым подстилочным материалом отека слизистой оболочки глаз не наблюдалось, роговицы глаз были чистые, отмечалась небольшая гиперемия слизистой оболочки, исчезающая через 1-1,5 часа. Данные опыта показывают, что испытуемый подстилочный материал является веществом, не вызывающим раздражение слизистых оболочек глаз кроликов.

Таким образом, испытуемый подстилочный материал не обладает раздражающим действием на кожу и не вызывает раздражение слизистых оболочек глаз кроликов.

1.3.1.2 Определение аллергизирующего действия

Опыты по определению аллергизирующего действия изучаемого подстилочного материала были проведены на 4 кроликах, которым предварительно выстригали участки кожи (5×5 см) на спине, слева и справа от позвоночника. Правый бок служил для аппликации влажной кашицы из изучаемого материала, а левый — для контроля (дистиллированная вода). Эксперимент проводился в течение 30 дней, т.е. ежедневно на выстриженный участок кожи наносили влажную кашицу из испытуемого подстилочного материала. За этот период аллергических реакций, за исключением незначительного покраснения на 25 и последующиедни, которые исчезли через сутки после окончания эксперимента, поэтому испытуемый подстилочный материал можно отнести к веществам, не вызывающих аллергических реакций.

1.3.2 Обоснование оптимального значения функциональных характеристик и выбор толщины нового гигиенического подстилочного материала для выращивания бройлеров

Современное промышленное птицеводство предъявляет высокие требования к качеству подстилочного материала по влагоемкости, теплопроводности и безвредности для выращиваемых птиц. Подстилочный материал должен обеспечивать благоприятные условия для бройлеров в течение всего периода выращивания с суточного возраста и до убоя, не смотря на пропитывание его продуктами жизнедеятельности птиц.

Перед проведением эксперимента в производственных условия, было обосновано оптимальное значения функциональных характеристик нового гигиенического подстилочного материала, изготовленногоООО «Омега» по требованиям ТУ 16.29.14-001-19235409-2018.Так опытным путем было установлено, что наиболее оптимальным решением для содержания птиц будет содержание в подстилочном материале древесной стружки толщиной 0,1-0,6 мм, при этом сама стружка изогнута в направлении поперек волокон со стрелой прогиба не менее 1 мм и длиной от 5 до 40 мм. Удаление частиц меньше 5 ммпроводится путем сепарации через сита [10].

Поскольку для каждого вида птицы толщина подстилочного материала будет различна, были выполнены опыты по ее определению.Исходя из проведенных экспериментов, был сделан вывод о том, что для цыплят бройлеров наиболее оптимальная толщина для нового гигиенического подстилочного материала составляет 2-3 см, утят бройлеров – 4-5 см, а гусят бройлеров -7-8 см.В процессе выращивания бройлеров, по мере загрязнения,сверху подсыпали свежий слой подстилочного материала.

1.3.3 Изучение влияния испытуемого гигиенического подстилочного материала на организм и продуктивность цыплят-бройлеров

1.3.3.1 Изучение влияния нового подстилочного материала на микроклимат птичника

Производственный опыт по изучению влияния испытуемого подстилочного материала на организм цыплят был проведен в условиях КФХ “Ахметов” Высокогорского района Республики Татарстан в июне-июле 2020 года с использованием бройлеров мясного четырехлинейного кросса Кобб 500. Цыплят выращивали в помещениях с регулируемым микроклиматом, на глубокой подстилке, процессы кормления и поения автоматизированы.

В птичнике установлены системы взвешивания, системы транспортировки и хранения корма, системы кормления и поения, системы отопления, системы вентиляции, системы освещения для оптимальной стимуляции приема пищи и уменьшения стрессового состояния птицы, автоматизированной системы создания микроклимата птицеводческих помещений. На основе поступающих от датчиков сигналов и заданной пользователем информации, регулируется объем удаляемого и приточного воздуха из помещения. Свежий воздух подают в помещение из расчета 5 м³/ч на 1 кг живой массы птицы.

Климат-компьютер для контроля и регулировки системы вентиляции поддерживает оптимальные параметры микроклимата в помещении и учитывает:

— возрастные потребности птицы (молодая, растущая птица требует большего количества тепла и меньшего количества свежего воздуха);

— равномерность распределения температуры и влажности в птичнике;

— влияние извне – ветер, наружную температуру, влажность.

Система вентиляции в помещении птичника комбинированная: естественная на притоке и механическая на вытяжке. Приток воздуха происходит за счет регулируемых открывающихся фрамуг окон в продольных стенах птичника. Вытяжка воздуха из помещения обеспечивается вытяжными трубами, расположенными в коньке крыши с вентиляторами и датчиками температуры.

Обогрев помещения осуществляется пеллетным котлом, размещенным в подсобном помещении, сблокированным с основным зданием. Пеллетный котел, мощностью до 100 кВт, оборудован водным контуром для горячего водоснабжения, идущим на высоте 2,6 м по периметру всех несущих стен. Для равномерного распределения теплого воздуха рядом с теплым водным контуром подвешены осевые вентиляторы, имеющие угол наклона до 45⁰ к полу, за счет чего добивается достаточно равномерное распределение теплого воздуха по всему помещению. Однако в птичнике для молодняка цыплят первых дней жизни необходима более высокая температура, чем может дать данный обогрев. В связи с этим при посадке цыплят в первые дни жизни на высоте 0,9-1,3 м подвешивают электрические брудеры с инфракрасными лампами, что позволяет поддерживать локальную температуру воздуха на уровне 31-32 С⁰. Относительная влажность воздуха в помещении поддерживалась на уровне 50-70%.

Одним из важных факторов, оказывающих большое влияние на организм и продуктивность птицы, является свет. Отсутствие света в помещении компенсируется искусственным освещением. Источники освещения, представленные светодиодными лампами, объединяются в осветительные системы, которые регулируются централизовано через компьютер. Регулировка системы освещения связана с циклами кормления и поения, и в первую очередь зависит от возраста птицы. Продолжительность светового дня первые сутки составляла 23 часа, со вторых суток и до 10 дней выращивания световой день снижался до 22 часов, с 11 по 32 день — 16 часов, с 33 по 35 день — 18 часов, с 36 и до убоя — 18 часов, при мощности светового потока 20-30 лк до 38 дня, а в последние 1-2 дня – 10 лк.

Напольное оборудование состоит из двух основных частей: линии поения и линии кормления. В системе поения используются ниппельные поилки. Фронт поения составляет 1,5 см на голову.

Во всех цехах установлены кормовые бункеры, в которых корм может храниться в течение 10 дней. Подача корма из бункеров к суточным емкостям производится спиральным транспортером, а дальше, по линиям системы кормления, корм распределяется по кормушкам. Кормушки заполняются автоматически. Датчик на последней контрольной кормушке обеспечивает, по мере надобности, автоматическое включение и выключение оборудования. Система кормления подвешивается с помощью специальной подвески с лебедкой, поэтому при высадке птицы и очистке здания может быть быстро поднята на необходимую высоту.

В линию кормления входит система подвески, с помощью которой происходит регулировка линии кормления по высоте. Система подвески крепится к потолочным перекрытиям здания и состоит из тяги, канатов, блоков и лебедки с ручным или электроприводом. Лебедка устанавливается в середине линии кормления, на барабан лебедки крепится основной тяговый канат диаметром 4,6 мм, который протягивается в оба конца птичника и проходит через концевые блоки. К тяговому канату, с помощью зажимов, крепятся канаты диаметром 2 мм и длиной 3 м, с шагом 3 м. Канаты проходят через промежуточные блоки и с помощью крюков, закрепленных на их концах, поддерживают линию кормления на нужной высоте.

При включении транспортера корм через спускные рукава поступает в бункера линий кормления. В спускном рукаве, установленном на последней линии кормления, имеется устройство, отключающее подачу корма при заполнении бункеров кормом. После заполнения бункеров кормом, включаются привода линий кормления, и корм подается в кормушки до тех пор, пока не заполнит все кормушки и в том числе концевую, после чего срабатывает отключающее устройство, установленное в последней кормушке. По всей длине кормопровода в трубах сделаны отверстия для подачи корма в кормушки, которые установлены под ними. Кормушки крепятся к трубам хомутами. Фронт кормления на одну голову составляет 4 см.

Исследования были проведены в июне-июле 2020 года в КФХ «Ахметов» Арского района на цыплятах четырехлинейного кросса «Кобб 500» с суточного и до 38-40 дневного возраста. Для этого птицу отбирали методом аналогов. Условия кормления, содержания и выращивания птицы соответствовали рекомендация ВНИТИП по технологии производства мяса цыплят-бройлеров, руководству по содержанию и выращиванию бройлеров кросса «Кобб»[11]

Комбикорма поставлялись из Глазовского комбикормового завода. Первые десять дней жизни использовали комбикорм ПК 5-0 — «Предстартер», а количество корма в начале периода составляло от 13 г на голову и конце — до 48 г; 11-22 дней — ПК 5-1 (Старт) — 53-110 г/голову; 23-27 дней – ПК 5-2 (Рост) — 122-145 г/голову; 28-35 дней — ПК 6-1(Финиш-1) 151-186 г/голову; от 36 дней – ПК 6-2(Финиш-2) -191-214 г/голову. В стартовый период кормление цыплят проводились комбикормами в виде крупки размером 1,0 мм, а ростовой и финишный периоды гранулы были размером 2,2-3,2 мм. Количество комбикорма, затраченного на выращивание цыплят, суммировали в каждый период из ежедневной массы потребления корма в процессе всего периода их выращивания.

Подопытные птицы содержались в здании размером 8х60 м, поперечно разделенное временной перегородкой на две половины. Каждая половина была разбита на 8 секций, которая предназначена для содержания 200 цыплят. В качестве подстилочного материала, для контрольной группы (первая половина здания), использовались отходы деревообрабатывающего цеха, а для опытной (вторая половина здания) – доставлялся испытуемый подстилочный материал, разработанный ООО «ОМЕГА» по ТУ 16.29.14-001-68499146-2018.

Испытуемый подстилочный материал (опытная группа) — это древесная стружка, полученная путем строгания сухой древесины, а также переработанные отходы деревообрабатывающей промышленности, обработанные термохимическими и биотехнологическими методами. Изучаемый материал представляет собой обеспыленную, обеззараженную сыпучую массу от светло- до темно-коричневого цвета со специфическим запахом, влагоемкостью подстилки 480% и массовой долей влаги 3-10%. Изучаемый подстилочный материал устойчив к механическому и биологическому воздействию с выраженным антисептическим и адсорбционным действием. Кроме того, он способен поглощать из воздуха животноводческих помещений вредные газы.

Птичник тщательно подготовили к приему цыплят. Особое внимание уделяли очистке от пыли и грязи воздуховодов, кормовых бункеров, бытовых помещений, ремонту и налаживанию оборудования.

Подстилочный материал рассыпали на предварительно продезинфицированный ипрогретый пол (28-30°С), распределяя ровным слоем толщиной в2-3 см. За два дня до приема цыплят в птичнике создали необходимый температурно-влажностный режим. Температуру в здании измеряли в различных точках и уровня. После подготовки здания к приему птицы, помещение единовременно заполнили одновозрастными суточными цыплятами

Во время распределения подстилочного материала в первой половине здания (контрольная группа) столкнулись с проблемами большой запыленности, что приводило к раздражению слизистых оболочек, по сравнению со второй половиной помещения, где использовался обработанный подстилочный материал (опытная группа). При визуальном осмотре после распределения подстилочного материала по полу было отмечено хорошее качество подстилки в обеих половинах здания: цвет соответствовал доброкачественным опилкам, мелко измельченные (длина стружки от 0,5 до 4,0 см), без признаков плесени и посторонних запахов.

Животноводческие помещения предназначены для защиты животных от неблагоприятных условий окружающей среды в любое время года. Для этого в помещении необходимо создавать оптимальный микроклимат, что, в особенности, имеет важное значение при содержании птицы в закрытых безоконных помещениях. В случае неудовлетворительного микроклимата птица вынуждена приспосабливаться к окружающей среде, что способствует увеличению расходов корма на единицу продукции, снижению иммунитета к различным заболеваниям, сохранности поголовья и продуктивности [12]. В связи с вышеизложенным, в обеих половинах птичника были проведены исследования отдельных параметров микроклимата за исследуемый период, которые представлены в таблице 1.

Таблица 1 — Основные параметры микроклимата

*- Р<0,05

Данные таблицы 1 свидетельствуют о том, что использование обработанного подстилочного материала в опытной группе способствует улучшению параметров микроклимата, что выразилось в уменьшении влажности на 5,3%, амми­ака — 3,9 мг/м³, угле­кислого газа – 0,04%, пыли – 0,9 мг/м³ и микроорганизмов – 18,6 тыс. м.т./м³,по сравнению с контрольной группой соответственно. Вероятнее всего, это связано с большим разложением необработанного подстилочного материала (контроль) по сравнению с обработанным (опыт), что неизбежно способствует большему выделению вредных газов, пыли и микроорганизмов.

Таким образом, результаты исследования параметров микроклимата в двух птичниках, свидетельствуют о том, что использование необработанного подстилочного материала (контроль) способствуют повышению влажности, вредных газов, пылевой загрязненности и микробной обсемененности, по сравнению с использованием обработанного (опыт).

В ходе проведения эксперимента было изучено качество подстилочного материала в течение выращивания цыплят от суточного возраста и до убоя в 38-40 дней. По мере загрязнения подстилки сверху подсыпали свежий материал в обеих группах (таблица 2).

Таблица 2 – Отдельные санитарно-гигиенические показатели подстилочного материала

Результаты таблицы свидетельствуют о том, что в течение всего периода исследования испытуемый подстилочный материал (опыт) отличался более высокими качествами по сравнению с необработанными опилками (контроль). Так, в первую неделю влажность испытуемого подстилочного материала была ниже по сравнению с необработанной подстилкой на 7,7%, во вторую – 4,2%, третью – 4,9%, четвертую – 5,3%, пятую – 7,3% и шестую – 9,3% соответственно.

Число микробных тел и микроскопических грибов увеличивалось по мере увеличения возраста цыплят, так, в первую неделю исследования общее микробное число в обработанном подстилочном материале (опыт) было меньше, по сравнению с необработанным материалом (контроль) на 51,8% и микроскопических грибов 47,3%, во вторую неделю — 55,4% и 51,9%, третью –58,7 и 53,1%, четвертую – 64,9 и 58,6%, пятую – 70,0 и 60,9% и шестую – 75,1 и 62,1% соответственно. Вероятно, более низкое содержание микробных тел и микроскопических грибов в обработанном подстилочном материале в опытной группе, по сравнению с необработанной подстилкой в контрольной группе, стала ее более низкая влажность и высокая влагоемкость.

1.3.3.2 Морфобиохимические и иммунологические показатели крови подопытных цыплят

Кровь является важной жизненной средой для всех клеток, тканей и органов животных. Она снабжает клетки и ткани питательными веществами и переносит от них продукты обмена веществ к органам выделения, выполняет защитную, гуморальную и терморегуляторную роль. Учитывая важнейшие свойства крови, нами были изучены её морфологические и биохимические показатели в зависимости от различных факторов. Поскольку любые изменения в условиях содержания неизбежно найдут свое отражение на физиологическом состоянии организма птиц, в связи с этим были проведены исследования отдельных морфологических (таблица 3) и биохимических показателей крови (таблица 4).

Таблица 3 — Морфологический состав крови подопытных цыплят

Анализируя результаты, представленные в таблице 3 можно отметить, что в опытный период количество эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина во все сроки исследования оставались примерно на одном уровне в обеих группах, как в контроле, так и опыте, и находились в пределах физиологической нормы, однако в конце исследования количество эритроцитов у цыплят в опытной группе превышало контроль на 7,04% и гемоглобина – 5,87% соответственно.

Таким образом, можно сделать вывод о том, что использование экспериментального обработанного подстилочного материала (опыт) оказывает положительное воздействие на отдельные морфологические показатели крови опытных цыплят по сравнению с контролем, у которых применяли необработанный материал.

Биохимические исследования крови при современном уровне развития про­мышленного птицеводства является важной составляющей эффектив­ного производства. Передовые хозяйства с высоким уровнем производства перио­дически проводят биохимические исследования крови поголовья с целью контроля и коррекции обменных веществ в организме птиц, что послужило основанием для нашего исследования.

Таблица 4 – Отдельные биохимические показатели крови подопытных цыплят

Анализируя полученные данные, было выявлено увеличение содержания общего белка в сыворотке крови цыплят опытной группы, у которых в качестве подстилочного материала использовался обработанный подстилочный материал на 6,5% по сравнению с цыплятами контрольной группы, содержавшимися на необработанном материале, общего кальция – 6,1%, неорганического фосфора – 4,9%, глюкозы – 5,3% соответственно.

Таким образом, можно сделать заключение о положительном действии лучших условий содержания опытных цыплят, укоторых использовали исследуемый обработанный подстилочный материал, на отдельные биохимические показатели крови по сравнению с контрольными птицами, в содержании которых использовали необработанный подстилочный материал.

Таблица 5 — Отдельные показатели иммунного статуса подопытных цыплят

Анализируя данные, приведенные в таблице 5, можно сделать вывод о том, что использование обработанного подстилочного материала способствовало повышению фагоцитарной активностипсевдоэозинофилов, показывающая процент фагоцитирующих клеток от их общего количества, у цыплят опытной группы на 2,41%, а фагоцитарного числа, показывающего способность псевдоэозинофилов поглотить определенное количество микробов, – 4,5% по сравнению с цыплятами контрольной группы, содержавшимися на необработанном материале, соответственно.

Улучшение отдельных морфо-биохимических и иммунологических показателей крови у цыплят опытной группы, у которых использовали исследуемый подстилочный материал, по сравнению с контролем, вероятно, можно объяснить улучшением микроклимата во второй половине здания по сравнению с первой половиной помещения, что способствовало улучшению их здоровья.

1.3.3.3 Мясная продуктивность подопытных цыплят-бройлеров

Основной целью промышленного птицеводства является получение мяса. Поэтому перед нами стояла задача сравнения мясной продуктивности цыплят-бройлеров в зависимости от вида опилок, используемых в качестве подстилочного материала. Контроль мясной продуктивности подопытных цыплят осуществляли путем еженедельного взвешивания на электронных весах, результаты которых представлены в таблице 6.

Таблица 6 – Мясная продуктивность цыплят-бройлеров при их выращивании на различных видах подстилочного материала

В результате проведенных исследований, было установлено, что использование обработанного подстилочного материала во второй половине здания (опытная группа) при выращивании цыплят-бройлеров способствовало увеличению среднесуточного прироста на 3,13% и сохранности поголовья – 3,0%, а также уменьшению затрат корма на 1 кг прироста на 3,7% по сравнению с контрольными цыплятами, которые содержались на необработанном подстилочном материале. Экономическая эффективность на 1 рубль дополнительных затрат составила 2,94 рублей.

1.3.3.4 Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса

По окончании эксперимента был проведен убой птиц: в контрольной группе 93 и опытной – 96 голов. Предубойным осмотром и послеубойной ветеринарно-санитарной экспертизой тушек и внутренних органов патологоанатомических изменений не установлено, степень обескровливания была хорошей. Поверхность кожи птицы была золотисто-желтого цвета. Тушки цыплят всех групп по состоянию упитанности были не ниже I сорта (ГОСТ 31962-2013) и имели крупные ноги и широкую грудку, мышцы хорошо развиты, а в области нижней части живота были отложения подкожного жира. Через 24 часа с момента с момента убоя тушки птицы имели сухую корочку подсыхания золотисто-желтого цвета с розоватым оттенком, мышцы были плотные, упругой консистенции, на разрезе слегка влажные, грудные – бело-розового, ножные – красноватого цвета, характерного для данного вида птицы, запах с поверхности и в глубине разреза мышц специфический, свойственный свежему мясу. Жир золотисто-желтого цвета, упругий, эластичный без посторонних запахов.

Ветеринарно-санитарный осмотр внутренних органов начали с сердца, которое имело конусовидную форму и было равномерного красно-коричневого цвета. Легкие были вытянутой формы, слегка мягковатой консистенции, малоэластичные, светло-красноватого цвета. Воздушные легочные мешки серовато-красноватого цвета, прозрачные, а сосуды стенок мешков умеренно кровенаполнены. Печень – темно-коричневого цвета, края острые, консистенция упругая. Селезенка была небольшая, округлой формы, красновато-коричневого цвета, плотной консистенции. С поверхности разреза при соскобе снималось незначительное количество пульпы. Строма и трабекулы хорошо просматривались. Почки были темно-коричневого цвета, мягкой консистенции, а граница между мозговым и корковым слоем четко выражена. Щитовидная железа состояла из двух долей, соединенных тонким перешейком, и была немного вытянутой формы, что указывает на нормальное состояние. Поджелудочная железа, была вытянутой формы и имела светло-коричневый цвет. Зобные железы, служащие для увлажнения корма, поступающего в зоб, были расположены в слизистой оболочке зоба и имели светло-коричневый цвет. Железистый отдел желудка имел вид короткой толстостенной трубки коричневого цвета, внутренняя поверхность которого была выстлана складчатой слизистой оболочкой, мышечный — дискообразную, сдавленную с боков, форму темно-коричневого цвета, внутри которого имелась кутикула светло-коричневого цвета с зеленоватым оттенком, под которой находилась вторая плотная слизистая оболочка бледно-серого цвета.

Органолептическая характеристика мяса и внутренних органов подопытных цыплят отвечали требованиям стандарта, и, в ветеринарно-санитарном отношении, была признана доброкачественной.

Вкусовые качества мяса подопытных цыплят оценивала специальная дегустационная комиссия в количестве 5 человек по пятибалльной шкале согласно методикам ВНИТИП (1994) отдельно оценивая мясной бульон (табл. 7) и мясо в жареном и вареном виде (табл. 8).

Таблица 7 — Дегустационная оценка бульона и мяса, баллы

Оценка нежности бульона, вкуса и аромата жареного мяса подопытных цыплят было примерно на одном уровне в обеих группах.

Исследования бактериальной обсемененности мышечной ткани, которые имеют важное значение для оценки продуктов животного происхождения, свидетельствовали о доброкачественности мяса всех подопытных цыплят. При микроскопии мазков-отпечатков с поверхности тушек, а также из глубоких слоев мышц и внутренних органов во всех группах были выявлены единичные микроорганизмы, преимущественно кокки, а также наблюдалось плохое окрашивание мазков, что подтверждает свежесть мяса.

Таблица 8 — Физико-химические показатели и микробная обсемененность мяса подопытных цыплят

Величина рН мышц, являющаяся важным показателем качества мяса, находилась в пределах допустимых для созревшего свежего мяса, свидетельствуя о его полноценности.

Содержание аминосоединений и аммиака в мясе является постоянным, и во всех образцах избыточного количества обнаружено не было. Мясной экстракт во обеих группах окрашивался в желтоватый цвет и сохранял прозрачность. Существенных отличий между мясом контрольных и опытных птиц установлено не было. Количество аминоаммиачного азота в мышечной ткани подопытных цыплят колебались в пределах нормы — 0,76-0,85 мг.

Активность пероксидазы, сохраняющейся только в свежем и доброкачественном мясе, была положительной в обеих группах. Количество летучих жирных кислот, изменение которых свидетельствует об ухудшении качества мяса, колебалось в пределах 2,05 мг в группе контрольных цыплят и 1,78 мг — опытных, свидетельствовало о его свежести.

Таким образом, можно сделать вывод, что использование нового гигиенического подстилочного материала не оказывает отрицательного влияния, а наоборот несколько улучшает биохимические и бактериологические показатели мяса.

1.3.3.5 Изучение влияния исследуемого гигиенического подстилочного материала на организм и продуктивность цыплят-бройлеров в условиях Зеленодольского филиала ООО «Птицеводческий комплекс  «Ак Барс» РТ

Для подтверждения результатов, полученных в КФХ “Ахметов” Арского района РТ, был проведен производственный опытв условиях промышленного птицеводства — Зеленодольском филиале ООО «Птицеводческий комплекс  «Ак Барс»на цыплятах кроссаКобб 500.Для этого были взяты 2 группы бройлеров размещенных в различных позициях: в контроле был использован необработанный, а опыте – изучаемый гигиенический подстилочный материал.Толщина подстилочного материала составляла 2-3 см.

От начала и до конца выращивания цыплят все основные процессы по уходу механизированы. Поение цыплят осуществляется посредством ниппельных поилок, афронт поения составляет 1,5 см на голову. Кормление производится из кормораздаточных линий. Управление кормораздатчиками программировано, частота включения регулируется оператором по мере роста цыплят. Дежурный оператор контролирует работу механизмов по выполнению заданных программ и следит, чтобы не было россыпи кормов и разбрызгивания воды. Для этого высоту подвеса кормораздатчиков и автопоилок регулируют в зависимости от возраста цыплят. Верхний край автокормушки устанавливают на высоте спины цыплят, а верхний край поилки на 2 см выше. Фронт кормления на одну голову составляет 4,5 см.

Кормление птицы 4-фазное, с рождения до 15 дней (СТАРТ), с 16 до 21 дня (РОСТ), с 22 до 33 дней (ФИНИШ-1) и с 34 до окончания выращивания (ФИНИШ-2).Все комбикорма готовятся в ОАО «Казаньзернопродукт» в соответствии с ГОСТ Р 51851-2001 «Комбикорма для сельскохозяйственной птицы» ирекомендациями для кросса Кобб 500.Для повышения эффективности использования корма птицами разработана система САКПБ, применяемая при напольном содержании бройлеров. Принцип работы заключается в том, что в птичнике устанавливаются электронные весы с малогабаритной платформой, наступая на которую птица автоматически взвешивается, и информация о ее живой массе регистрируется в программируемом контроллере (ПК). После определенного количества взвешиваний, необходимых для обеспечения репрезентативности выборки, производится статистическая обработка информации в ПК. В результате ежесуточных измерений массы птицы и обработки статистических данных ПК выдает информацию о текущих показателях продуктивности бройлеров в центральный компьютер для дальнейшей обработки.

В результате сравнительного анализа текущих показателей продуктивности птицы с соответствующими технологическими нормами, система позволяет своевременно обнаружить отклонения и скорректировать дальнейший режим кормления, а также определить сроки отправки цыплят бройлеров в убойный цех.

Параметры микроклимата в помещениях поддерживаются автоматически. Климат-компьютер для контроля и регулировки вентиляции поддерживает оптимальные параметры микроклимата в помещении и учитывает возрастные потребности птицы; равномерность распределения температуры и влажности в птичнике.Центральный компьютер регулирует также систему искусственного освещения в птичнике,связанную с циклами кормления и поения, и зависит от возраста птицы.

Таблица 9 — Основные параметры микроклимата

*- Р<0,05

Таким образом, можно сделать вывод о том, что использование изучаемого подстилочного материала при выращивании опытных цыплят способствовало улучшению параметров микроклимата, что выразилось в снижении влажности на 5,3%, содержа­нию амми­ака — 3,9 мг/м³, угле­кислого газа – 0,04%, пыли – 0,9 мг/м³ и микроорганизмов – 18,6 тыс. м.т./м³,по сравнению с контролем.

Таблица 10– Морфобиохимические и иммунологические показатели крови

Таким образом, результаты, отраженные в таблице, свидетельствуют о том, что улучшение микроклимата в опытной группе способствовало увеличению эритроцитов на 5,4%, гемоглобина – 4,9%, общего белка — 5,2%, общего кальция – 5,2%, неорганического фосфора – 4,8%, глюкозы – 4,3%, и иммунологических показателей крови (фагоцитарной активности на 2,1%, фагоцитарного числа – 3,7%).

Таблица 11 – Мясная продуктивность подопытных цыплят-бройлеров

В результате проведенных исследований, было установлено, что использование обработанного подстилочного материала во второй половине здания (опыт) при выращивании цыплят-бройлеров способствовало увеличению среднесуточного прироста на 2,94% и сохранности поголовья – 2,1%, а также уменьшению затрат корма на 1 кг прироста на 2,8% по сравнению с контролем. Экономическая эффективность на 1 рубль дополнительных затрат составила 2,67 рублей.

1.3.4 Изучение влияния исследуемого гигиенического подстилочного материала на организм и продуктивность гусят-бройлеров

1.3.4.1 Изучение влияния нового подстилочного материала на микроклимат птичника

Производственный опыт по изучению влияния испытуемого подстилочного материала на организм гусят-бройлеров был проведен в условиях КФХ “Ахметов” Арского района Республики Татарстан в июле-августе 2020 года с использованием гусей линдовской породы двухлинейного кросса.

В птичнике установлены системы взвешивания, транспортировки и хранения корма кормления и поения, отопления, вентиляции, освещения для оптимальной стимуляции приема пищи и уменьшения стресса у птиц, автоматизированной системы регулирования микроклимата. На основе поступающих от датчиков сигналов и заданной пользователем информации, регулируется объем удаляемого и приточного воздуха из помещения, при этом учитываются:

— возрастные потребности птицы (молодая, растущая птица требует большего количества тепла и меньшего количества свежего воздуха);

— равномерность распределения температуры и влажности в птичнике;

— влияние внешних условий – ветер, наружную температуру, влажность.

Система вентиляции в помещении птичника комбинированная: естественная на притоке и механическая на вытяжке. Приток воздуха происходит за счет регулируемых открывающихся фрамуг окон в продольных стенах птичника. Вытяжка воздуха из помещения обеспечивается вытяжными трубами, расположенными в коньке крыши с вентиляторами и датчиками температуры.

Обогрев помещения осуществляется пеллетным котлом, размещенным в подсобном помещении сблокированным с основным зданием. Пеллетный котел, мощностью до 100 кВт, оборудован водным контуром для горячего водоснабжения, идущим на высоте 2,6 м по периметру всех несущих стен. Для равномерного распределения теплого воздуха рядом с теплым водным контуром подвешены осевые вентиляторы, имеющие угол наклона до 45⁰ к полу, за счет чего добивается достаточно равномерное распределение теплого воздуха по всему помещению. Для дополнительного обогрева гусят в первые дни жизни, на высоте 0,9-1,3 м подвешивают электрические брудеры с инфракрасными лампами, что позволяет поддерживать локальную температуру воздуха на уровне 30-32 С⁰. Относительная влажность воздуха в помещении поддерживалась на уровне 60-70%.

В качестве источников освещения используются светодиодные лампы, которые объединяются в осветительные системы и контролируются централизовано. Регулировка системы освещения связана с циклами кормления и поения, и зависит от возраста птицы. Освещенность на уровне кормушек и поилок составляла в среднем 40 лк, а режим освещения – 23 часа света и 1 час темноты. С четвертой по восьмую неделю каждые 2-3 дня освещенность снижают на 1 лк, а режим освещения – четверть часа.

В системе поения до 10 дней используются вакуумные поилки. С 10 дня поение гусят проводят из желобковых подвесных поилок, оборудованных поплавковой камерой с клапанным устройством для поддержания уровня воды в желобе. Вода в поилке проточная. Фронт поения составляет 2 см на голову.

Система кормления представлена круглыми кормушками на 16 кормовых мест с высокими бортиками для предотвращения потери корма гусятами. Кормушки сделаны из высокопрочных материалов, устойчивых к воздействию различных типов очистки и дезинфекции, применяемых на птицефабриках. Кормушка состоит из пяти частей: тарелки, разработанной с учетом наименьшей потери корма, регулятора, точно распределяющего корма, решетки, обеспечивающей легкий доступ к корму и имеющая высокую кромку (бортик), предотвращающую его рассыпание, центрального конуса с двумя отверстиями облегчающий поступление корма, защелки-колпачка для фиксации кабеля, не позволяющего птицам забираться в кормушку. Фронт кормления птиц составляет 3 см на 1 голову.

Кормление гусят осуществляли по общепринятым нормам [13]. Количество комбикорма, затраченного на выращивание гусят, суммировали в каждый период из ежедневной массы потребления корма в процессе всего периода их содержания. Из Глазовского комбикормового завода доставлялись полнорационные комбикорма(ПК-31 и ПК-32).

Птичник тщательно очистили от пыли и грязи, побелили внутри и снаружи, после чего провели дезинфекцию, санировали 5 дней. За 2 дня до приема гусят в птичнике создали необходимый температурно-влажностный режим.

Для проведения эксперимента птицу отбирали методом аналогов по породе, возрасту, экстерьеру, живой массе. Условия кормления, содержания и выращивания птицы соответствовали рекомендация ВНИТИП по технологии производства мяса гусят-бройлеров. Плотность посадки гусят в суточном возрасте составляла 7,5 голов на 1 м², а в четырехнедельном возрасте – 3 головы на 1 м².

Нами был проанализирован результат выращивания гусят-бройлеров с суточного возраста до 35 дней при напольном содержании. Подопытные птицы содержались в здании размером 8х60 м, поперечно разделенное временной перегородкой на две половины. Каждая половина была разбита на секции, каждая была предназначена для содержания 100 гусят. В качестве подстилочного материала для контрольной группы (первая половина здания) были использованы отходы деревообрабатывающего цеха, которые доставлялись из хозяйственной пилорамы, а для опытной (вторая половина здания) – доставлялся подстилочный материал, разработанный ООО «ОМЕГА» по ТУ 16.29.14-001-68499146-2018.

Испытуемый подстилочный материал (опытная группа) — это древесная стружка, полученная путем строгания сухой древесины, а также переработанные отходы деревообрабатывающей промышленности, обработанные термохимическими и биотехнологическими методами. Изучаемый материал представляет собой обеспыленную, обеззараженную сыпучую массу от светло- до темно-коричневого цвета со специфическим запахом, влагоемкостью подстилки 480% и массовой долей влаги 3-10%. Испытуемый подстилочный материал устойчив к механическому и биологическому воздействию с выраженным антисептическим и абсорбционным действием. Кроме того, он способен поглощать из воздуха животноводческих помещений вредные газы.

В ходе проведения эксперимента было изучено влияние нового подстилочного материала на параметры микроклимата, организм, сохранность и продуктивность гусят, с суточного до 35 дневного возраста. Кроме того, определяли влажность и микробную обсемененность подстилки в течение всего периода эксперимента.

Подстилочный материал равномерно распределили по обеим половинам здания, из расчета толщины подстилочного материала 7-8 см. Во время распределения подстилки в первой половине здания (контрольная группа) наблюдалась большая запыленность по сравнению со второй половиной помещения, где использовался исследуемый подстилочный материал. Оба вида подстилочных материалов имели хорошее качество, (длина стружки от 5 до 40мм), без признаков плесени и посторонних запахов.

Перед нами была поставлена задача исследования отдельных параметров микроклимата, в обеих половинах птичника за время эксперимента, результаты, которых представлены в таблице 12.

Таблица 12 — Основные параметры микроклимата

Данные таблицы 12 свидетельствуют о том, что использование необработанного подстилочного материала в контроле способствует ухудшению параметров микроклимата, что выразилось в увеличении влажности к концу эксперимента на 8,6%, содержа­нию угле­кислого газа –0,11 %, амми­ака -0,33 мг/м³, пыли – 0,9 мг/м³ и микроорганизмов – 8,9 тыс. м.т./м³ по сравнению с опытом, соответственно. Возможно, это связано с большим разложением необработанного подстилочного материала (контроль) по сравнению с обработанным (опыт), что неизбежно вызывает большее выделение вредных газов, пыли и микроорганизмов.

Таким образом, результаты исследования параметров микроклимата в двух отделениях животноводческого помещения, свидетельствуют о том, что использование необработанного подстилочного материала в контроле способствуют повышению влажности, вредных газов, пылевой загрязненности и микробной обсемененности, по сравнению с использованием обработанного материала в опыте

Результаты исследований, в ходе которых определяли качество подстилки за весь период выращивания гусят-бройлеров, представлены в таблице 13.

Таблица 13 – Санитарно-гигиенические показатели подстилочного материала

Данные таблицы свидетельствуют о том, что в течение всего периода исследования испытуемый подстилочный материал (опытная группа) отличался более высокими качествами по сравнению с необработанными опилками (контрольная группа). Так, в первую неделю влажность испытуемых опилок была ниже по сравнению с необработанными опилками на 65,9%, во вторую – 57,8%, третью – 14,7%, четвертую – 16,5% и пятую – 28,5% соответственно.

Число микробных тел и микроскопических грибов увеличивалось по мере использования подстилочного материала, как в контроле, так и в опыте, однако во втором случае в меньшем количестве. Так, в первую неделю исследования общее микробное число в обработанных опилках (опытная группа) было ниже по сравнению с необработанными опилками (контрольная группа) на 46,4% и микроскопических грибов 64,9%, во вторую неделю — 33,3% и 57,7%, третью – 49,1 и 54,4%, четвертую – 21,1 и 19,7%, пятую – 13,3% соответственно. Возможной причиной большего числа микробных тел и микроскопических грибов в подстилке из необработанных опилок в контроле, по сравнению с обработанными опилками в опыте, стала ее более высокая влажность и небольшая влагоемкость.

1.3.4.2 Морфобиохимические и иммунологические показатели крови подопытных гусят

Учитывая важное значение крови для организма животных, нами было проведено исследование отдельных ее показателей. В связи с тем, что условия содержания оказывают большое влияние на организм и, соответственно, на состав крови, нами были изучены ее отдельные морфологические и биохимические показатели.

Таблица 14 — Морфологический состав крови подопытных гусят.

Анализируя результаты, представленные в таблице 14 можно отметить, что за время исследования количество эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина во все сроки исследования оставались примерно на одном уровне в обеих группах, как в контроле, так и опыте, и находились в пределах физиологической нормы, однако в конце исследования количество эритроцитов у гусят опытной группы превышало контроль на 7,04% и гемоглобина – 5,20% соответственно.

Таким образом, можно сделать вывод о том, что использование изучаемого подстилочного материала (опытная группа) оказывает положительное воздействие на отдельные морфологические показатели крови опытных гусят-бройлеров по сравнению с контролем.

Таблица 15 – Отдельные биохимические показатели крови подопытных гусят-бройлеров

Полученные данные свидетельствуют об увеличении содержания общего белка в сыворотке крови гусят опытной группы (обработанный подстилочный материал) по сравнению с гусятами контрольной группы (необработанный подстилочный материал) на 6,3%, общего кальция – 5,8%, неорганического фосфора– 5,1%, глюкозы – 5,4% соответственно.

Таким образом, можно сделать заключение о положительном действии лучших условий содержания опытных гусят, укоторых использовали исследуемый подстилочный материал, на отдельные биохимические показатели крови по сравнению с контрольными птицами.

Таблица 16 — Отдельные показатели иммунного статуса подопытных гусят

Данные, приведенные в таблице 16, свидетельствуют о том, что использование обработанного подстилочного материала способствовало улучшению отдельных показателей естественной резистентности организма, так применение нового гигиенического подстилочного материала у опытных гусят фагоцитарная активностьпсевдоэозинофилов повысилась на 2,24%, а фагоцитарное число – 4,3% по сравнению с контрольными гусятами соответственно.

Резюмируя вышесказанное, можно сделать вывод о том, что улучшение отдельных морфо-биохимических и иммунологических показателей опытных гусят по сравнению с контролем, вероятно, можно объяснить улучшением микроклимата во второй половине здания по сравнению с первой половиной помещения, благодаря использованию нового гигиенического подстилочного материала.

1.3.4.3 Мясная продуктивность подопытных гусят-бройлеров

Целью промышленного птицеводства является получение мясной продукции. В связи с этим была поставлена задача сравнения мясной продуктивности гусят-бройлеров в зависимости от вида подстилочного материала. Контроль мясной продуктивности подопытных гусят проводили путем еженедельного взвешивания на электронных весах (таблица 17).

Таблица 17 – Мясная продуктивность гусят-бройлеров при их выращивании на различном подстилочном материале

Полученные результаты свидетельствуют о том, что использование обработанного подстилочного материала в опытной группе при выращивании гусят-бройлеров способствовало увеличению среднесуточного прироста на 7,51% и сохранности поголовья – 1,8%, а также уменьшению затрат корма на 1 кг прироста 4,98% по сравнению с гусятами, содержавшимися на необработанном подстилочном материале (контрольная группа).Экономическая эффективность на 1 рубль дополнительных затрат на приобретение подстилочного материала составила 3,05 рублей.

1.3.5 Изучение влияния испытуемого гигиенического подстилочного материала на организм и продуктивность утят-бройлеров

1.3.5.1 Изучение влияния нового подстилочного материала на микроклимат птицеводческого помещения

Производственный опыт по изучению испытуемого подстилочного материала был проведен в производственных условиях ООО ФХ «Рамаевское» Верхнеуслонского района РТ, с использованием утят-бройлеров пекинской породы французской селекции.

В птичнике установлены системы взвешивания, кормления, поения, отопления, вентиляции, освещения, путем автоматизации регулирования микроклимата. На основе поступающих от датчиков сигналов в заданной пользователем информации, регулируется объем удаляемого и приточного воздуха из помещения, при этом учитываются: возраст птицы, равномерность распределения температуры и влажностивлияние внешних условий – ветер, наружную температуру, влажность.

Система вентиляции в помещении птичника комбинированная: естественная на притоке и механическая на вытяжке. Приток воздуха происходит за счет регулируемых открывающихся фрамуг окон в продольных стенах птичника. Вытяжка воздуха из помещения обеспечивается вытяжными трубами, расположенными в коньке крыши с вентиляторами и датчиками температуры.

Обогрев помещения осуществляется централизованной отопительной системой. Для дополнительного обогрева утят в первые дни жизни, на высоте 0,9-1,3 м подвешивают электрические брудеры с инфракрасными лампами, что позволяет поддерживать локальную температуру воздуха на уровне 28-30 С⁰. Относительная влажность воздуха в помещении поддерживалась на уровне 60-70%.

В качестве источников освещения используются светодиодные лампы, которые объединяются в осветительные системы и контролируются централизовано. Регулирование освещения зависит от возраста птицы:в первые 1 – 4 недели – 17-20люкс, а с 5 недели и до убоя- до 7 – 10 люкс. Режим освещения: первую неделю – круглосуточно,с постепенным уменьшением до 16-18 часов во вторую неделю и 10 часов в третью и до убоя.

В системе поения до 10 дней используются вакуумные поилки. С 10 дня поение утят проводят из ниппельных поилок. Фронт поения составляет 1,5 см на голову до 3 недель и 2 см с четвертой недели и до убоя.

Система кормления представлена круглыми кормушками на 16 кормовых мест с высокими бортиками для предотвращения потери корма утятами. Фронт кормления птиц составляет 1,5 см на 1 голову до 3 недель, а затем до убоя 2 см.

Кормление утят осуществляли по общепринятым нормам [5]. Количество комбикорма, затраченного на выращивание утят, суммируется в каждый период из ежедневной массы потребления корма в процессе всего периода их содержания. Полнорационный комбикорм ПК-21-1, предназначенный для утят с рождения до 2 недель и сделанный в виде крупки, и ПК-22-1 – до 7 недель, размером гранул 3,2 мм, доставлялся из комбикормового заводаООО «МАРИЗЕРНОПРОДУКТ».

Условия кормления, содержания и выращивания птицы соответствовали рекомендация ВНИТИП по технологии производства мяса утят-бройлеров. Плотность посадки утят в суточном возрасте составляла 13-15 голов на 1 м², а с 15 дней и до убоя – 6-8 голов на 1 м².

Птичник тщательно очистили от пыли и грязи, побелили внутри и снаружи, после чего провели дезинфекцию, санировали 5 дней. За 2 дня до приема утят в птичнике создали необходимый температурно-влажностный режим.

Нами был проанализирован результат выращивания утят-бройлеров с суточного возраста до 49 дней при напольном содержании. Подопытные птицы содержались в здании размером 12х96 м, поперечно разделенное временной перегородкой на две половины. Каждая половина была разбита на секции, каждая предназначена для содержания 150 утят. В качестве подстилочного материала для контрольной группы (первая половина здания) были использованы отходы деревообрабатывающего цеха, которые доставлялись из хозяйственной пилорамы, а для опытной (вторая половина здания) –подстилочный материал, разработанный ООО «ОМЕГА» по ТУ 16.29.14-001-68499146-2018.

В ходе проведения эксперимента было изучено влияние нового подстилочного материала на параметры микроклимата, организм, сохранность и продуктивность утят, с суточного возраста и до убоя. Кроме того, определяли влажность и микробную обсемененность подстилки в течение всего периода эксперимента.

Подстилочный материал равномерно распределили по обеим половинам здания, из расчета толщины подстилочного материала 4-5 см. Во время распределения подстилки в первой половине здания (первая контрольная группа) наблюдалась большая запыленность по сравнению со второй половиной помещения, где использовался исследуемый подстилочный материал. Оба вида подстилочных материалов имели хорошее качество, (длина стружки от 5 до 40мм), без признаков плесени и посторонних запахов.

Перед нами была поставлена задача исследования отдельных параметров микроклимата, в обеих половинах птичника за время эксперимента, результаты которых представлены в таблице 18.

Таблица 18 — Основные параметры микроклимата

Таким образом, исходя из полученных результатов, можно сделать вывод о том, что изучаемый подстилочный материал способствует улучшению микроклимата в птичнике, а именно снижении влажности на 5,9%, амми­ака — 1,2 мг/м³, угле­кислого газа – 0,06%, пыли – 1,0 мг/м³ и микроорганизмов – 10,3 тыс. м.т./м³,по сравнению с контролем.

Результаты исследований, в ходе которых определяли качество подстилки за весь период выращивания утят-бройлеров, представлены в таблице 19.

Таблица 19 – Санитарно-гигиенические показатели подстилочного материала

Данные таблицы свидетельствуют о том, что в течение всего периода исследования испытуемый подстилочный материал (опыт) отличался более высокими качествами по сравнению с необработанными опилками (контроль). Так, в первую неделю влажность испытуемых опилок была ниже по сравнению с необработанными опилками на 2,9%, во вторую – 4,7%, третью – 6,4%, четвертую – 6,8%, пятую – 8,1%, шестую – 11,1% и седьмую –14,2%соответственно.

Число микробных тел и микроскопических грибов увеличивалось по мере использования подстилочного материала, как в контроле, так и в опыте, однако во втором случае в меньшем количестве. Вероятно, более низкое содержание микробных тел и микроскопических грибов в обработанном подстилочном материале в опытной группе, по сравнению с необработанной подстилкой в контрольной группе, стала ее более низкая влажность, а также обработка термохимическими и биотехнологическими методами.

1.3.5.2 Морфобиохимические и иммунологические показатели крови подопытных утят—бройлеров

В связи с тем, что условия содержания оказывают большое влияние на организм и, соответственно, на состав крови, нами были изучены ее отдельные морфологические и биохимические показатели подопытных утят-бройлеров.

Таблица 20– Морфобиохимические и иммунологические показатели крови

Таким образом, результаты, отраженные в таблице, свидетельствуют о том, что улучшение микроклимата в опытной группе способствовало увеличению повышению эритроцитов на 7,8%, гемоглобина – 6,1%, общего белка — 6,8%, общего кальция – 6,1%, неорганического фосфора – 5,8%, глюкозы – 5,7%, и иммунологических показателей крови фагоцитарной активности на 2,5%, фагоцитарного числа – 4,5%по сравнению с контрольными утятами, которые содержались на необработанном подстилочном материале.

1.3.5.3 Мясная продуктивность подопытных утят-бройлеров

Одной из основных целей птицеводства является получение мяса. Поэтому перед нами стояла задача сравнения мясной продуктивности утят-бройлеров в зависимости от вида подстилочного материала. Контроль мясной продуктивности подопытных утят осуществляли путем еженедельного взвешивания на электронных весах (таблица 21).

Таблица 21 – Мясная продуктивность утят-бройлеров при их выращивании на различных видах подстилочного материала

В результате проведенных исследований, было установлено, что использование обработанного подстилочного материала во второй половине здания (опыт) при выращивании утят-бройлеров способствовало увеличению среднесуточного прироста на 3,10% и сохранности поголовья – 2,01%, а также уменьшению затрат корма на 1 кг прироста на 2,4% по сравнению с контрольными цыплятами, которые содержались на необработанном подстилочном материале. Экономическая эффективность на 1 рубль дополнительных затрат составила 2,78 рублей.

1.3.5.4 Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса

По окончании эксперимента был проведен убой всех подопытных утят. Предубойным осмотром и послеубойной ветеринарно-санитарной экспертизой тушек и внутренних органов патологоанатомических изменений не установлено, степень обескровливания была хорошей. Поверхность кожи утят была золотисто-желтого цвета. Тушки утят обеих групп по состоянию упитанности были не ниже I сорта (ГОСТ 31990-2012), мышцы хорошо развиты, киль грудной кости не выделяется, а на груди, животе и спине были отложения подкожного жира.

Через 24 часа с момента с момента убоя тушки птицы имели сухую корочку подсыхания желтого цвета с розоватым оттенком, мышцы были плотные, упругой консистенции, на разрезе слегка влажные, от бледно-розового до розового цвета, характерного для данного вида птицы, запах с поверхности и в глубине разреза мышц специфический, свойственный свежему мясу, оперение полностью удалено. Жир желтого цвета, упругий, эластичный без посторонних запахов. Кожа чистая, с одним двумя разрывами, имеются единичные царапины, ссадины и у нескольких тушек в контроле небольшие намины в виде слабо выраженного уплотнения кожи и точечные кровоизлияния. Киль грудной кости хрящевидный, легко сгибаемый. Сердце имело форму конуса и было равномерного красно-коричневого цвета.Легкие были вытянутой формы, малоэластичные, светло-красноватого цвета. Воздушные легочные мешки серовато-красноватого цвета, прозрачные, а сосуды стенок мешков умеренно наполненыкровью. Печень – темно-коричневого цвета, края острые, консистенция упругая. Селезенка — небольшая, округлой формы, красновато-коричневого цвета, плотной консистенции. С поверхности разреза при соскобе снималось незначительное количество пульпы. Строма и трабекулы хорошо просматривались. Почки были темно-коричневого цвета, мягкой консистенции, а граница между мозговым и корковым слоем четко выражена. Щитовидная железа состояла из двух долей, соединенных тонким перешейком, и была немного вытянутой формы, что указывает на нормальное состояние. Поджелудочная железа, была вытянутой формы и имела светло-коричневый цвет. Зобные железыбыли расположены в слизистой оболочке зоба и имели светло-коричневый цвет. Железистый отдел желудка имел вид короткой толстостенной трубки коричневого цвета, внутренняя поверхность которого была выстлана складчатой слизистой оболочкой, а мышечный — дискообразную, сдавленную с боков, форму темно-коричневого цвета, внутри которого имелась кутикула светло-коричневого цвета с зеленоватым оттенком, под которой находилась вторая плотная слизистая оболочка бледно-серого цвета.

Органолептическая характеристика мяса и внутренних органов подопытных утят отвечала требованиям стандарта и в ветеринарно-санитарном отношении была признана доброкачественной. Оценка нежности бульона, вкуса и аромата жареного мяса подопытных утят было примерно на одном уровне в обеих группах.

Исследование бактериальной обсемененности мышечной ткани, свидетельствовало о доброкачественности мяса подопытных утят. При микроскопии мазков-отпечатков с поверхности тушек, а также из глубоких слоев мышц и внутренних органов во всех группах были выявлены единичные микроорганизмы, преимущественно кокки, а также наблюдалось плохое окрашивание мазков, что подтверждает свежесть мяса.

Таким образом, можно сделать вывод, что при использовании нового гигиенического подстилочного материала ветеринарная экспертиза, органолептические показатели и патологоанатомические характеристики внутренних органов подтверждают свежесть мяса и состояние внутренних органов соответствующее здоровой птице.

2 Заключение

При испытании нового подстилочного материала в птицеводстве представляющего собой древесную стружку, обработанную термохимическими и биотехнологическими методами можно сделать следующие выводы:

— обеспечение нормативного уровня микроклимата способствовало снижению влажности, содержанию аммиака, углекислого газа, пылии количества микроорганизмов;

— улучшение микроклимата привело к увеличению эритроцитов и гемоглобина, общего белка, общего кальция, неорганического фосфора, глюкозы, а также иммунологических показателей крови птиц; ЭТО КАК?

— использование нового подстилочного материала оказывает благоприятное влияние на среднесуточные приросты, сохранность поголовья, уменьшение затрат корма на 1 кг прироста;

— экономическая эффективность, при использовании нового подстилочного материала, на один рубль дополнительных затрат составила в пределах от 2,5 до 3,0 рублей.

Задачи, поставленные при выполнении изучаемой темы на всех пяти этапах исследования, выполнены полностью, что подтверждается актами производственных испытаний.

При выполнении темы были разработаны и внедрены в производство содержания сельскохозяйственной птицы «Временные ветеринарные правила по применению нового гигиенического подстилочного материала в птицеводстве» и подана заявка на получение патента на изобретение№ 2020116789/20(027980): «Способ применения зоотехнического подстилочного материала в животноводстве и птицеводстве», заявителем которого является ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ.

Учитывая результаты каждого этапа выполнения темы, экономическая эффективность использования нового подстилочного материала составляет от 2,5 до 3,0 рублей на один рубль дополнительных затрат.

Анализируя результаты достижений в области использования различных подстилок в птицеводстве, применение нового подстилочного материала, выпускаемого ООО «ОМЕГА» по ТУ 16.29.14-001-19235409-2018, предназначенного для сельскохозяйственных животных и птиц,выгодно отличается от предлагаемых в настоящее время подстилочных материаловв птицеводстве другими исследователями, на что указывают выводы, сделанные при анализе выполняемой работы.

3 Список использованных источников

1. Оськин Р.И., Зайцев А.В., Сидыганов Ю.Н., Онучин Е.М., Рыбаков П.А., Каменских А.Д.Функциональные свойства подстилочных материалов для индустриального птицеводства // Вестник аграрной науки Дона.— 2019.—№ 4. (48) С. 80-86. ISSN: 2075-6704.

2. Способ подготовки подстилки из соломы при выращивании цыплят-бройлеров : пат. 2333637 С1 Российская Федерация, МПК А 01 К 29/00 (2006.01) / Салеева И.П., Гусев В.А., Офицеров В.А., Зуев. И.В. ; заявитель и патентообладатель ГНУ Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства.—№ 2006142208/12, заявл. 30.11.2006.—опубл. 20.09.2008.—Бюл. № 26.-5 с. : ил.

3. Скрипкин В.С., Ожередова Н.А., Епимахова Е.Э., Светлакова Е.В., Александрова Т.С. Изучение санитарно-гигиенических показателей подстилки от различных видов сельскохозяйственных животных и птиц // Ветеринария, зоотехния и биотехнология.—2017.—№ 11.—С. 37-42.ISSN: 2311-455Х.

4. Цыганов А.Р., Томсон А.Э., Наумова Г.В., Мартыненко А.А., Бохан В.В., Пономаренко Ю.А. Сорбционные подстилочные материалы для птичника // Наше сельское хозяйство.—2013.—№ 16. С. 61-65.

5. Епимахова Е.Э., Самокиш Н.В., Барсукова М.Г. Связь качества подстилочных материалов и жизнеспособности бройлеров в предстартовый период // Актуальные вопросы патологии, морфологии и терапии животных. Материалы 19-й Международной научно-методической конференции по патологической анатомии животных / г. Ставрополь,  (20-22 сентября 2017 г.).—Ставрополь: «АГРУС».- 2018.—С. 157-160.

6. Чарыев А.Б., Аманнепесов А.А. Зоогигиеническая оценка подстилочных материалов для бройлеров // Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 гг. Материалы II Международной молодежной научной конференции (форума) молодых ученых России и Германии в рамках Федеральной целевой программы / г. Уфа, (13-17 июня 2012 г.).—Уфа: Башкирский ГАУ.—2012.— C. 291-295.

7. Peltola, J. Use of peat as litter milking cows // Odour prevention and control of organic studge and livestock farming.—1987.—P. 181-187.

8. Kemppainen, E. Ammonia binding capacity of peat, straw, sawdust and cutter shavings // Animal agro Fenn.—1987.—V. 26.—№ 2.—P. 89-94.

9. Гадиев Р.Р., Чарыев А.Б., Аманнепесов А Эффективность обработки соломы химическими средствами при использовании ее в качестве подстилки // Аграрная наука – основа инновационного развития АПК. Материалы Международной научно-практической конференции / Курган, (19-20 апреля 2011 г.).— Курган: Курганская ГСХА, 2011.—С.16-19.

10. Материал подстилочный зоотехнический :пат. 2 689 707 С1 Российская Федерация, МПК А 01 К 1/015 (2006.01) / Оськин Р.И., Зайцев А.В. : заявитель и патентообладатель Оськин Р.И., Зайцев А.В.-№ 2018131402, заявл. 30.08.2018.-опубл. 28.05.2019.-Бюл. № 16.-4 с. : ил.

11. Руководство по содержанию и выращиванию бройлеров “КОББ”. [Электронный ресурс] // URL: https:/ kfhmakosh.ru. — 26.01.2004. (дата обращения: 15.09.2018).

12. Самарин Г.Н., Иванов С.И., Полторакова Н.С. Влияние влажности воздуха на расход кормов и приросты животных // Научно-технический прогресс в сельскохозяйственном производстве. Материалы международной научно-практической конференции / Минск, (19-21 октября 2011 г).—Минск: РУП НПЦ НАН Беларуси по механизации сельского хозяйства.—2011.— Т. 3.–С. 22-24.

13. Фисинин В.И., Егоров И.А., Драганов И.Ф. Кормление сельскохозяйственной птицы.—Сергиев Посад: ВНИТИП, 2003. — 375 с.

Приложения

Реферат

Общий объем отчета — 161 стр., количество книг отчета — 1, иллюстраций — 6, таблиц — 53, использованных источников -110.

Ключевые слова: туберкулез крупного рогатого скота, картограмма, фармако-токсикологические свойства, противотуберкулезная активность, химиопрофилактика

Цель работы: изыскание новых средств и методов профилактики туберкулеза молодняка крупного рогатого скота в неблагополучных по данному заболеванию хозяйствах.

Методы или методология проведения работы. Исследования проведены

с использованием эпизоотологических, клинических, патоморфологических, микробиологических, гематологических, биохимических, фармакологических и токсикологических методов исследования.

Результаты работы и их новизна: впервые проведен ретроспективный анализ эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота в Республике Татарстан в период с 1960 по 2016 годы, установлены коэффициент заболеваемости и цикличность возникновения новых очагов туберкулезной инфекции, составлена картограмма и определен нозоареал болезни в республике.

Определены туберкулостатические свойства и минимальные ингибирующие концентрации для ряда новых препаратов: соли бис(оксиметил)фосфиновой кислоты с гидразидом изоникотиновой кислоты (Тубофен), 45-ти соединений относящихся к изоциануратам, 3-х — относящихся к триазинам, 34-х – относящихся к α,ω – бис(амидо- и гидразидометилсульфинил- и сульфонил)алканам

Впервые изучена специфическая химиопрофилактическая и химиотерапевтическая активность Тубофена, Линарола и Линарола Ф-1 на экспериментальной модели туберкулеза у белых мышей и морских свинок, установлены дозы и схема их применения. В производственных условиях доказана их химиопрофилактическая активность в отношении микобактерий туберкулеза у молодняка крупного рогатого скота.

Область применения результатов: оздоровление неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота животноводческих предприятий.

Рекомендации по внедрению результатов НИР: практическая значимость проведенных исследований состоит в разработке новых противотуберкулезных препаратов, которые позволят повысить устойчивость телят к заражению микобактериями туберкулёза и предупредить развитие туберкулёзного процесса у инфицированных животных.

Рекомендации по внедрению результатов НИР: практическая значимость проведенных исследований состоит в разработке новых противотуберкулезных препаратов, которые позволят повысить устойчивость телят к заражению микобактериями туберкулёза и предупредить развитие туберкулёзного процесса у инфицированных животных.

Экономическая эффективность или значимость работы: применение нового противотуберкулезного препарата позволит сократить сроки оздоровления хозяйств, длительно неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота, даст возможность гарантированно выращивать на таких фермах телят, полученных от реагирующих на туберкулин коров, обеспечит снижение затрат на ликвидацию туберкулеза.

Прогнозные предположения о развитии объекта исследования: дальнейшие исследования будут направлены на изучение, в производственных условиях профилактической эффективности нового антимикобактериального препарата на телятах, в неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйствах.

Работа выполнялась на основании Тематического план-задания на выполнение научно-исследовательских работ федеральным государственным бюджетным образовательным учреждением высшего образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» по заказу Минсельхоза России за счет федерального бюджета в 2019 году.

Перечень сокращений и Обозначений

В настоящем отчете о НИР применяют следующие сокращения и обозначения.

РФ Российская Федерация

РТ Республика Татарстан

ВОЗ Всемирная организация здравоохранения

МЗ Министерство здравоохранения

МЭБ Международное эпизоотическое бюро

НБ неблагополучный пункт

МБТ микобактерии туберкулеза

МИК минимальная ингибирующая концентрация

КОЕ колониеобразующие единицы

МЛУ множественная лекарственная устойчивость

ШЛУ широкая лекарственная устойчивость

ЛД₅₀ среднесмертельная доза

МПД максимально переносимая доза

СОЭ скорость оседания эритроцитов

АЛТ аланинаминотрансфераза

АСТ аспартатаминотрансфераза

ГИНК гидразид изоникотиновой кислоты

РЭС ретикуло-эндотелиальная система

РСЛЛ реакция специфического лизиса лейкоцитов

МПБ мясо-пептонный бульон

КРС крупный рогатый скот

ВВЕДЕНИЕ

Распространение туберкулезной инфекции в длительно неблагополучных стадах, настолько своеобразно, что принятые в практике меры приводят не к ликвидации туберкулеза, а лишь к ослаблению эпизоотической напряженности инфекции. Новые случаи заболевания животных туберкулезом заставляют держать подобное хозяйство, как неблагополучное, на особом режиме, в течение длительного времени, а в дальнейшем вынуждают применять более решительные меры, включая единовременную полную замену всего восприимчивого поголовья (Александров Н.А. и соавт., 1974, 1975, Сафин М.А. и соавт., 1992; Хазипов Н.З. и соавт., 1997; Баратов М.О. и соавт., 2007).

Переход на интенсивные методы ведения животноводства также создает новые проблемы и вызывает настоятельную необходимость разработки комплексных систем борьбы с туберкулезом, так как простыми методами добиться положительных успехов в условиях интенсификации и укрупнения хозяйств уже труднее. В этих условиях для борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота необходимо эпизоотологическое обоснование, использование всех средств и методов, имеющихся в нашем распоряжении (Джупина С.И., 1985, 1986, 1987; Смолянинов Ю.И. с соавт., 1986; Коромыслов Г.Ф., 1982, 1983; Урбан В.П., 1983; Косилов И.А. с соавт., 1987; Хайкин Б.Я., 1988; Сафин М.А. с соавт., 2002; Сатторов С.Ф., 2012; Ощепков В.Г. с соавт., 2013).

В подобных ситуациях верный путь к оздоровлению хозяйств — изыскание более эффективных методов борьбы, с включением в комплекс общих санитарно-оздоровительных мер и средств химиопрофилактики (Ротов В.И. и соавт., 1964; Хайкин Б.Я. и соавт., 1983; Донченко Н.А., 2008; Баратов М.О., 2017).

Открытие противотуберкулезных химиопрепаратов, обладающих бактериостатическими и бактерицидными свойствами, расширило возможности для борьбы с туберкулезом и успешно используется во всех странах мира для лечения и профилактики туберкулеза у людей (Рабухин А.Е., 1970; Шебанов Ф.В., 1976; Фисенко В., 2006; Морозова Т.И. и соавт., 2013; Ким М.Е. и соавт., 2016).

Внедрению химиопрофилактики в ветеринарную практику первоначально мешали дефицит противотуберкулёзных препаратов и их дороговизна. Однако, с тех пор как выяснилось, что профилактический эффект достигается от сравнительно малых доз, внимание к этим средствам усилилось (Ротов В.И., 1964, 1974; Хайкин Б.Я., 1976).

Опыты по использованию изониазида для профилактики туберкулёза крупного рогатого скота были проведены вначале за границей, а затем в нашей стране. Так, Moretti B., Pedini B. (1953), Bartmann K. (1958), Rosati T. (1959), Badiali L. (1962) провели опыты на телятах, содержащихся совместно с туберкулёзными коровами, у которых было доказано выделение возбудителей туберкулёза во внешнюю среду. При этом телятам внутримышечно вводили изониазид в дозе 10 мг/кг массы. При туберкулинизации телят и последующем убое было установлено наличие туберкулёзной инфекции у тех животных, которые не получали изониазида, и отсутствие туберкулёза у тех, которым вводили изониазид.

Опыты по химиопрофилактике туберкулёза с помощью применения изониазида в дозе 4 мг/кг в течение двух месяцев провёл Rosati T. (1957) на 4 телятах, два из них получали препарат, а два были в контроле. Все телята содержались в контакте с коровами – бактериовыделителями. Через два месяца животные, не получавшие изониазид, дали положительные туберкулиновые реакции, а животные, которым вводили препарат, реагировали на туберкулин отрицательно. При вскрытии и проведении биопробы на морских свинках туберкулёз был обнаружен только у контрольных животных.

По сообщению Kleeberg H. (1959) при даче изониазида 110 телятам, размещённым в скотном дворе среди туберкулёзных животных, получил отрицательные туберкулиновые пробы у всех подопытных телят. В 1967 году автор провёл опыт на 7000 головах крупного рогатого скота, среди которых 30% положительно реагировали на туберкулин. Через 7 – 10 месяцев непрерывной дачи изониазида различным группам скота в дозах 10 – 20 мг/кг массы тела большинство ранее реагирующих животных (75%) утратили чувствительность к туберкулину. Распространение инфекции прекратилось в стадах через 2 месяца после дачи препарата.

О производственном применении изониазида при оздоровлении крупного рогатого скота от туберкулёза в Чехословакии сообщил Straka I. (1968). В крупном промышленном хозяйстве телятам перорально задавали препарат в дозе 10 мг/кг в течение 2 месяцев после рождения, при этом до 20 дневного возраста телята содержались совместно с туберкулёзными коровами. В этих условиях из 375 телят, которым давали препарат, 92,4% оказались здоровыми. В контрольной группе туберкулёзом заболело 44% телят.

С начала 60-х годов прошлого столетия и в последующие годы, в ветеринарной практике с целью химиопрофилактики туберкулеза сельскохозяйственных животных в нашей стране начато испытание изониазида, как одного из наиболее эффективных и обладающих высокой бактериостатической активностью туберкулостатиков, широко применяемого во фтизиатрии (Смирнов Г.А., 1969; Ротов В.И. и соавт., 1978; Хайкин Б.Я. и соавт., 1983). Изониазид, являясь наиболее эффективным синтетическим противотуберкулезным препаратом, отличается хорошей переносимостью при лечении больных туберкулезом людей (Васильев Н.А. с соавт., 1990; Перельман М.И. с соавт., 1990, 2004; Ушакова В.А., 2007; Израилова Г.Г., 2011).

Благодаря свойствам высокой бактериостатической и бактерицидной активности, способности проникать в клетки поражённых тканей и органов, отсутствие кумуляции и способности угнетать общую и специфическую резистентность организма, изониазид привлёк пристальное внимание ветеринарных учёных разных стран, которые использовали и используют его в экспериментах по разработке новых методов профилактики и лечения заразных и незаразных заболеваний сельскохозяйственных животных.

В нашей стране первые опыты по применению изониазида для профилактики туберкулёза телят провёл Андрущенко В.А. (1962, 1969). На 353 подопытных и 276 контрольных телятах показана его высокая профилактическая эффективность. Среди подопытных животных заболело 3,9%, а среди контрольных – 34,4%.

Ротов В.И., Богаевский В.М., Рубан М.Д. (1964), для профилактики туберкулёза использовали фтивазид, изониазид и ПАСК в дозах от 5 до 25 мг/кг массы. Дачу химиопрепаратов и заражение животных микобактериями бычьего вида проводили перорально через каждые 3 дня из расчета 1 мг/кг микобактерий бычьего вида. Опыты проводили в течение 5,5 месяцев. Подопытные и контрольные животные подвергались аллергическим исследованиям и контрольному убою. Все подопытные телята не реагировали на туберкулин, а у контрольных животных были выраженные положительные туберкулиновые реакции. При убое через 70, 115 и 160 суток после начала опыта у контрольных животных туберкулёз был подтверждён патологоанотомически, бактериологически и биопробой. У подопытных животных этими же методами туберкулёз не был установлен. При этом была показана высокая эффективность как комбинированного применения различных бактериостатических препаратов (фтивазид, тубазид, ПАСК), так и применение одного изониазида для профилактики заболевания животных туберкулёзом.

Ротов В.И. (1974, 1978) сообщил об оздоровлении 150 хозяйств в 6 областях УССР с использованием туберкулостатических препаратов.

О целесообразности химиопрофилактики у телят старшего возраста в случае опасности их заражения при контакте с неблагополучными по туберкулёзу животными сообщил Калишин Н.М. (1966).

Учитывая положительные результаты экспериментальных исследований в ряде неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота регионах страны, в системе оздоровительных мероприятий стали широко применять химиопрофилактику (Ли А.Б. с соавт., 1985; Хазипов Н.З., 1985; Гуркин А.В., 1986).

Так, в Кустанайской области (Казахстан) только в период с 1974 по 1979 годы практикуя химиопрофилактику изониазидом, выращено более 42,6 тысяч здоровых телок и оздоровлено 12 крупных совхозов (Пионтковский В.И., 1980; Новак Д.Д., 1983).

За 1976 – 1982 годы в Северном Казахстане химиопрофилактикой тубазидом в системе оздоровительных мероприятий было охвачено 305,4 тысячи телок, выращено 180 тысяч здоровых коров и нетелей, что способствовало оздоровлению 30 крупных длительно неблагополучных по туберкулезу хозяйств. В технологии специализированных ферм по изолированному выращиванию ремонтных телок, в условиях повсеместного эпизоотического неблагополучия по туберкулезу крупного рогатого скота, химиопрофилактика туберкулеза, как вынужденное дополнительное мероприятие, позволила в 95,01 – 99,8% случаев вырастить здоровых ремонтных телок, полученных от коров неблагополучных стад, в том числе и от реагирующих на туберкулин (Пионтковский В.И., Сафин М.А., 1984).

В 1977 – 1979 годах в Омской области при использовании в общем комплексе противотуберкулезных мероприятий тубазида, путем скармливания и подкожной инъекции в виде 20% эмульсии на рыбьем жире, оздоровлено от туберкулеза 7 хозяйств (Крюков С.Я., 1980).

В неблагополучных по туберкулезу хозяйствах Украины в течение 7 лет применения химиопрофилактики заболевания тубазидной и тубазидно-стрептомициновой эмульсией на витаминизированном кашалотовом жире и рафинированном подсолнечном масле было охвачено свыше 200 тысяч голов крупного рогатого скота, в результате чего оздоровлено 50 хозяйств, в которых через 6 лет не отмечено рецидивов туберкулеза (Дидовец С.Р. с соавт., 1980).

Ли А.Б. (1980) использовал изониазид в дозах 5 и 10 мг/кг для оздоровления ферм крупного рогатого скота, неблагополучных по туберкулёзу в Узбекистане. Химиопрофилактика успешно проводилась на 11000 голов крупного рогатого скота.

Химиопрофлактику туберкулёза при выращивании молодняка, полученного от реагирующих на туберкулин коров в Казахстане, успешно проводили Баранников В.М., Кусаинова К.Т., Баркитова К.Е. (1980). Указанные авторы в эксперименте на 116 подопытных и 104 контрольных животных показали высокую профилактическую эффективность изониазида при туберкулёзе молодняка крупного рогатого скота.

В хозяйствах Ростовской области, неблагополучных по туберкулёзу крупного рогатого скота, Гуркин А.В. (1980) использовал изониазид в дозах 0,6 г на животное (до 10 мг/кг массы). В опытах находилось 1447 животных различных возрастов, которым вводили препарат перорально и подкожно. Установлено, что его применение снижало заболеваемость животных туберкулёзом по сравнению с контролем от 1,8 до 8,6 раза.

Кравец А.Т., Хайкин Б.Я. и др. (1986) утверждают, что при применении тубазидной эмульсии на рыбьем жире при двукратном подкожном введении в течение месяца предохранило от туберкулеза 60% телят, зараженных микобактериями туберкулеза бычьего вида. Во всех случаях и при любом методе введения доза тубазида должна быть не менее 10 мг на 1 кг массы животного. Проведенные ими исследования показали, что тубазид лучше применять в длительно неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйствах, курсами по 2,5 – 3 месяца и с такими же интервалами между ними до получения двух отрицательных результатов исследования. Применение препарата как профилактического средства в системе противотуберкулезных мероприятий, позволило им оздоровить от туберкулеза ряд хозяйств Омской области с тяжелой эпизоотической обстановкой.

Смолянинов Ю.И. и Кощеев Н.Н. (2001) в экспериментальных условиях установили 100% профилактический эффект применения изониазида в контролируемом опыте с предварительным 3-х кратным заражением возбудителем туберкулёза бычьего вида телят в двухнедельном возрасте. Заболевших животных, профилактируемых изониазидом в течение 45 дней после экспериментального заражения, не было и через 7 месяцев. Но в условиях производства эффективность изониазида оказалась несколько ниже. Это, по их мнению, связано с некоторыми условиями. Так, в хозяйствах с высокой степенью распространения туберкулёза среди всех возрастных групп животных (более 50%), опытные телята содержались не изолированно, а совместно с животными отделений, где проводились опыты. Такое содержание не исключало заражение телят возбудителем туберкулёза от больных животных, и после прекращения курса химиопрофилактики. После окончания курса химиопрофилактики прекращается и защитное действие изониазида и происходит перезаражение большинства животных. Поэтому в данной категории хозяйств среди животных, профилактируемых только изониазидом, в течение 35 дней заболело до 62,5%, а в контрольных – 78%. В то же время в хозяйствах с незначительным распространением туберкулёза (до 10%) заболеваемость в аналогичных группах составляла 1,5 – 2%. При условии изолированного содержания профилактируемых изониазидом телят, исключающего повторного заражения туберкулёзом, исследователи получали 100% профилактический эффект, при заболеваемости в контрольных группах от 8 до 10%.

В свою очередь Хайкин Б.Я., Литовченко А.Н. и другие (1990) при исследовании нового противотуберкулёзного препарата отметили, что при экспериментальном туберкулёзе телят, изониазид в дозах 25 – 50 мг/кг, задаваемый перорально в течение 60 дней, 4 раза в неделю, оказался менее активным и не предотвратил развитие патологического процесса туберкулёзного характера.

При туберкулезе животных испытаны различные способы введения в организм противотуберкулезных препаратов. С целью профилактики туберкулеза у телят раннего возраста тубазид рекомендовано вводить per os с молоком или водой, а животным старших возрастных групп – с комбикормом или в составе кормовых гранул (Кравец А.Т. с соавт., 1979; Ли А.Б., 1980, 1985).

Наряду с пероральным способом применения изониазида в чистом виде, были предложены туберкулостатические препараты для подкожного введения: тубазид в 20% водном растворе, тубазидно-стрептомициновая суспензия на рыбьем жире, пролонгированные формы на полимерной основе (Чепуров К.Л., 1978; Показий А.Г., 1987; Давыдова Т.Н. с соавт., 1990; Донченко Н.А., 2008). Кроме того, Зининой Н.Н. (1991) были предприняты попытки аэрозольного применения водных растворов изониазида при экспериментальном туберкулезе морских свинок.

По данным Щелканова К.Г. и Аверихина А.И. (1986), тубазид, применяемый телятам подкожно в виде эмульсии из расчета 10 мг сухого вещества на 1 кг массы тела, 1 или 2 раза в месяц, не предохраняет животных от заражения туберкулезом. Противоположный результат показал опыт по применению телятам тубазида в виде порошка, которые ежедневно с молоком получали препарат в дозе по 0,2 г. При вскрытии телят через 7 месяцев после заражения во внутренних органах и лимфатических узлах туберкулезных изменений не установлено. Отмечена лишь незначительная гиперемия подчелюстных, заглоточных, бронхиальных и брыжеечных лимфатических узлов. Авторы утверждают, что тубазид применяемый в виде порошка из расчета 10 мг сухого вещества на 1 кг живой массы, ежедневно, в течение 1,5 месяцев, предохраняет животных от заражения туберкулезом.

По заключению ряда исследователей (Алюшин М.Т. с соавт., 1974; Ветра Ф.Я. с соавт., 1981), дальнейшее совершенствование химиопрофилактики туберкулеза животных возможно с использованием пролонгированных форм изониазида, присоединенного к полимерам, увеличения периода между введениями препарата и повышения их активности путем различных комбинаций.

На основании вышеизложенного, были предложены препаративные формы на пролонгированной основе для профилактики туберкулеза сельскохозяйственных животных. Так, для профилактики туберкулеза у телят разработан препарат Альдозон – аналог изониазида, синтезированный на углеродной матрице. Препарат оказался высокоактивным in vitro и in vivo, и значительно менее токсичным, чем изониазид, что позволило расширить диапазон его терапевтического действия, не опасаясь побочных реакций со стороны макроорганизма (Приймак А.А., 1987; Власова Е.Е. с соавт., 1988).

На полимерной основе изониазида был синтезирован и противотуберкулезный препарат Ветизон, не обладающий эмбриотоксическим и тератогенным действием на организм самок белых крыс и развитие плода (Давыдова Т.Н., 1989, 1990).

Увенчались успехом попытки использования при туберкулезе крупного рогатого скота комбинированного и последовательного метода использования химиопрофилактических средств и вакцины БЦЖ (Хайкин Б.Я., 1980; Кравец А.Т. с соавт., 1980; Кощеев Н.Н., 1989, 2000; Жумаш А.С. с соавт., 1995, 2006; Прокопьева Н.И. с соавт., 2006).

Так, Кощеев Н.Н. (1989) и Кушалиев К.Ж. (1993), исследуя последовательное применение изониазида и вакцины БЦЖ, отмечали полную защиту телят от заражения высоковирулентной культурой возбудителя туберкулеза бычьего вида. Новорожденные телята в возрасте 10 – 15 дней получали с молоком изониазид один раз в сутки, в дозе 10 мг/кг массы животного в течение 35 дней. Через 10 дней после прекращения дачи изониазида телят вакцинировали вакциной ВЦЖ. По истечению 14 месяцев в неблагополучном хозяйстве с заболеваемостью туберкулезом до 5% всех возрастных групп животных, данный метод позволил защитить от заражения всех опытных телят. При этом в контрольной группе заболело 5,3% животных. В длительно неблагополучном хозяйстве с заболеваемостью туберкулезом более 50% коров и молодняка, метод последовательного применения изониазида и вакцины БЦЖ обеспечил защиту от заражения 77% телят, при этом в контрольной группе заболело 78% животных.

Несмотря на то, что большинство исследований было направлено на усовершенствование мер профилактики туберкулеза у крупного рогатого скота, положительные результаты использования изониазида как химиопрофилактического средства получены и в свиноводстве (Василенко К.Ф., 1975, 1983), мараловодстве (Капустин Л.А., 1969, 1970; Омарбеков Е.О. 1972), пушном звероводстве (Хайкин Б.Я., 1970, 1973), птицеводстве (Воробьев А.Н., 1973; Емельянов В.А., 1976).

Как химиотерапевтическое средство изониазид применяли и при лечении респираторных заболеваний. Наиболее обстоятельные исследования по определению эффективности изониазида при бронхопневмонии телят провели Мустакимов Р.Г., Марантиди А.Г. (1979). Авторы испытали эффективность применения изониазида в сравнении с другими лекарственными средствами при лечении серозно-катаральной и катарально-гнойной пневмоний и установили высокий процент выздоровления (98,7 — 100) при всех способах лечения, в том числе с применением изониазида.

Результаты химиопрофилактики неспецифических бронхопневмоний у телят изониазидом, путём групповой дачи его внутрь в дозе 25 мг/кг массы 1 раз в неделю с 1 по 60 день жизни, в сравнении с новарсенолом показали, что заболеваемость телят сокращается в 1,7 раза, а по сравнению с чистым контролем – в 2,2 раза. При этом изониазид не оказывал тормозящего или стимулирующего влияния на рост и развитие телят, однако, способствует достоверному повышению содержания белка, глобулинов, каротина и витамина С. Литвенко В.В. (1982) при респираторных болезнях рекомендует телятам изониазид в дозе 15 мг/кг.

В большинстве своем препаративные формы противотуберкулезных средств, синтезированы на основе гидразида изоникотиновой кислоты (ГИНК) и поэтому в определенной степени являются токсичными для организма человека и животных, вызывая функциональные и морфологические нарушения в органах и тканях (Лысов А.В. с осавт., 2006; Васильева О.А с соавт., 2008; Овчаренко Л.П. с соавт., 2009; Гриценко Н.С. с соавт., 2009; Израилова Г.Г., 2011). В связи с этим, поиск новых противотуберкулезных препаратов, а также средств и методов снижающих токсические свойства препаратов, весьма актуальны и в настоящее время (Донченко Н.А., 2003, 2008; Бочарова И.В., 2014).

С целью снижения токсичности в 1990 году Гладких С.П. (цит. по Мишиной А.В. с соавт., 2012) синтезирован новый препарат – феназид, который представляет собой хелатный комплекс двухвалентного железа и изониазида. При этом, благодаря блокаде хелатного центра молекулой железа, феназид окисляется в крови и не метаболизируется в печени, как изониазид. Феназид полностью лишен гепатотоксических побочных эффектов, практически не вызывает ангио- и нейротоксических осложнений и с успехом применяется в РФ у больных туберкулезом с сопутствующей патологией печени, сердечно-сосудистой и нервной системы, а также у больных пожилого и старческого возраста (Мишин В.Ю., 2007; Хаертынова И.М., 2008).

Как аналоги изониазида также были синтезированы метазид и фтивазид, которые по сравнению с изониазидом, медленнее всасываются из желудочно-кишечного тракта и при их применении создается несколько меньшая концентрация ГИНК в крови. Применяют их при впервые выявленном туберкулезе легких внутрь, в комбинации с другими основными препаратами, в том числе при непереносимости изониазида, как альтернативные препараты (Мишин В.Ю. с соавт., 2007).

На основе изониазида был синтезирован туберкулостатический ветеринарный препарат пролонгированного действия – ниазон, который представляет собой прозрачный, вязкий водный раствор, в состав которого входят изониазид, гидразон изониазида, полимер – пролонгатор метилцеллюлоза, стабилизатор трилон-Б, антимикробные вещества и вода для инъекций (Донченко Н.А., 2008). Препарат, по данным авторов, не обладает эмбриотоксическим, тератогенным, мутагенным, гонадотоксическим, и аллергизирующим действием, не угнетает аллергическую активность к туберкулину и стабилен при хранении в течение года. Применение ниазона в системе оздоровительных мероприятий при туберкулезе крупного рогатого скота по схеме 20 мл/кг живой массы подкожно, 4 раза каждые 10 дней, а затем ежемесячно, до прекращения выявления реагирующих на туберкулин животных, позволяет оздоровить стадо в течение 12 -16 месяцев (Дончеко Н.А. с соавт., 2001, 2002).

Таким образом, приведенные экспериментальные и производственные материалы показали, что в условиях промышленного развития животноводства, когда существующие методы ликвидации туберкулеза бывают недостаточно эффективны, четкая и обоснованная система химиопрофилактики в общем оздоровительном комплексе, может способствовать получению высокого профилактического эффекта в борьбе с туберкулезом крупного рогатого скота.

В настоящее время существует широкий арсенал противотуберкулезных средств для профилактики туберкулеза и лечения, больных данным заболеванием людей и животных, однако они не отвечают современным требованиям из-за высокой токсичности, длительного курса применения, образовавшейся лекарственной устойчивости к ним у микобактерий и дороговизны [Визель А.А., 1998]. Поэтому поиск, создание новых фармацевтических препаратов, обладающих антимикобактериальными свойствами и позволяющих повысить эффект химиопрофилактики и химиотерапии туберкулеза, остается весьма актуальной задачей.

Целью работы явилось изыскание новых средств и методов профилактики туберкулеза молодняка крупного рогатого скота в неблагополучных по данному заболеванию хозяйствах.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Провести анализ эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота в Республике Татарстан.
2. Определить минимальную ингибирующую концентрацию синтезированных препаратов в отношении микобактерий туберкулеза.
3. Изучить противомикробную и фунгистатическую активность «соединений – лидеров».
4. Определить дозы и изучить профилактическую эффективность исследуемых препаратов на экспериментальной модели туберкулеза.
5. Изучить в производственных условиях профилактическую эффективность исследуемых препаратов на телятах при туберкулезе крупного рогатого скота.
6. Разработать научно-обоснованную систему профилактических противоэпизоотических мероприятий при туберкулезе крупного рогатого скота с использованием предложенных препаратов.

1. Основная часть отчета о НИР

1.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИСЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на кафедре эпизоотологии и паразитологии ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана».

Объектами исследования являлись статистико–эпизоотологическая информация, лабораторные животные и молодняк крупного рогатого скота сельскохозяйственных предприятий республики, патологический материал (кровь, паренхиматозные органы, лимфатические узлы), синтезированные противотуберкулезные препараты.

В опытах было использовано 210 белых мышей, 383 белые крысы, 16 кроликов, 143 морских свинок и 129 телят. Животные для опытов подбирались по принципу аналогов, с учётом пола, породы, возраста и живой массы тела (Западнюк И.П. и др., 1974). Группы опытных и контрольных животных содержали с соблюдением правил, норм кормления, ухода и гуманного обращения, согласно ветеринарно-санитарным требованиям (Приказ Минздравсоцразвития РФ от 23.08.2010 г., № 708н «Об утверждении Правил лабораторной практики»).

Мониторинг эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота в республике, проводился путем изучения ветеринарной отчетности Главного управления ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан. Анализ собранной информации осуществлялся согласно методическим указаниям и учебным пособиям по порядку проведения эпизоотологического исследования сельскохозяйственных предприятий (Джупина С.И., 1991; Кисленко В.Н., 2000; Бакулов И.А. и др., 2008).

Определение минимальной ингибирующей концентрации исследуемых химических соединений в отношении микобактерий туберкулеза проводили в опытах in vitro, используя методы последовательных серийных разведений (Першин Г.Н., 1971) и вертикальной диффузии на плотной питательной среде «Новая», а также стандартную радиометрическую ростовую систему BACTEC MGIT 960 (Becton Dickinson).

Лекарственную устойчивость микобактерий к исследуемым препаратам проводили, используя метод абсолютных концентраций на среде Левенштейна – Йенсена, согласно приказа МЗ РФ №109 от 21.03.2003 г.

Оценку спектра действия, степени антибактериальной и фунгистатической активности синтезированных противотуберкулезных препаратов Тубофена, Аликона, Линарола и Линарола Ф-1 проводили согласно «Руководству по экспериментальному изучению новых фармакологических веществ» под редакцией Хабриева Р.У. (2005).

Общетоксическое действие изучаемых средств определяли на лабораторных животных согласно «Методических указаний по доклиническому изучению общетоксического действия лекарственных препаратов» (утверждены Фармакологическим комитетом МЗ СССР 1985 г.).

Гематологические исследования проводили общепринятыми методами (Кудрявцев А.А. и др., 1969; Меньшиков В.В., 1987). Биохимические исследования крови, проводили с использованием биохимического анализатора Selectra Junior. Для определения количества альбуминов и глобулинов крови использовали устройство для электрофореза сыворотки крови УЭФ – 01 «Астра».

Эмбриотоксическое и тератогенное действия препаратов оценивали в соответствии с «Методическими указаниями по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияния их на репродуктивную функцию» (утверждены МЗ СССР 14.03.1986 г.).

Для изучения хронической токсичности препаратов использовали «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» под редакцией Хабриева Р.У. (2005).

Для изучения специфической антимикобактериальной активности и определения профилактических доз, синтезированных химических соединений на заражённых лабораторных животных, воспроизводили экспериментальный туберкулёз морских свинок, по методике Першина Г.Н. (1971).

Аллергические исследования морских свинок и крупного рогатого скота, проводили в соответствии с «Наставлением по диагностике туберкулеза животных» (утвержденным Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ 18.11.2002 г.) и «Инструкцией по применению туберкулина очищенного (ППД) для млекопитающих, стандартного раствора» (утв. Зам. руководителя Россельхознадзора РФ 30.09.2011 г.).

Для проведения патоморфологических и гистологических исследований кусочки печени, селезёнки, почек, легких и сердца фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине и этанол-формалине. Уплотнение фиксированного материала проводили путем заливки в парафин и изготавливали гистологические срезы толщиной 5 – 10 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином (Меркулов Г.А., 1969; Хонин Г.А., Барашкова С.А. и др., 2004).

Бактериоскопические и бактериологические исследования патологического материала от зараженных животных, проводили в соответствии с рекомендациями по «Лабораторной диагностике туберкулеза» (разработанными Всесоюзным научно-исследовательским институтом бруцеллеза и туберкулеза животных) и «Наставлением по диагностике туберкулеза животных» (утвержденным Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ 18.11.2002 г.).

Изучение профилактической противотуберкулезной эффективности Линарола Ф-1 проводили на новорожденных телятах, 3 — 12 дневного возраста, полученных от не реагирующих и реагирующих на туберкулин коров из хозяйств Республики Татарстан неблагополучных по туберкулезу.

Статистическую обработку цифрового экспериментального материала проводили в программе «Microsoft Excel XP», по показателям средних значений (M±m). Достоверность устанавливали по методу Стьюдента-Фишера.

1.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1.2.1 Эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота в Республике Татарстан

В результате проведенного мониторинга и анализа эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота в Республике Татарстан было установлено, что в прошлом многие районы республики в той или иной степени, были неблагополучны по туберкулезу. Широкие аллергические исследования скота на туберкулез начаты в республике в 1934 году, тогда было исследовано 150370, а в 1935 году – 223383 животных. Установлен туберкулез в 355 селениях. Значительное количество неблагополучных пунктов по туберкулезу крупного рогатого скота было выявлено и в последующие годы. В это время аллергический метод диагностики еще слабо внедрялся в ветеринарную практику, поэтому официальная статистика не отражала истинной эпизоотической обстановки по туберкулезу крупного рогатого скота в Татарской АССР. Но и эти неполные данные свидетельствуют о широком распространении инфекции.

Отечественная война нанесла серьезный ущерб ветеринарно-санитарному состоянию общественного животноводства. За четыре года войны, туберкулинизации было подвергнуто всего 625896 животных. Причем наибольшее количество реагирующих животных (5100 голов) было выделено в 1945 году.

В послевоенные годы шло нарастание количества выявляемых неблагополучных пунктов. Так, на 1 января 1949 года в республике зарегистрировалось 380 неблагополучных пунктов, а в течение года вновь было выявлено 318. Ежегодно на передержке в хозяйствах оставался больной туберкулезом скот, достигая в отдельные годы 43,7% (1955 г.), 46% (1958г.). Из общего количества исследованных животных до 1963 года в среднем 25% положительно реагирующего скота оставалось на следующий год в зимних помещениях без надлежащей изоляции.

Таким образом, причинами распространения туберкулеза крупного рогатого скота явилось: отсутствие изоляторов, отвечающих ветеринарно-санитарным требованиям; передвижение скота без учета эпизоотической обстановки; использование для пополнения стада молодняка, полученного от больных животных; плохая санация животноводческих помещений и территории ферм.

В дальнейшем борьба с туберкулезом крупного рогатого скота в регионе шла с переменным успехом. В этот период эпизоотическая обстановка по туберкулезу крупного рогатого скота в республике оставалась напряженной. Давность и множественность очагов инфекции, а также систематическое инфицирование животных, в силу нарушения хозяйствами профилактических мер снижали эффективность проводимых оздоровительных мероприятий.

За 40 лет (с 1960 по 2000 годы) было оздоровлено 726 неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота пунктов, в которых заболело 130479 животных. Наиболее тяжелым, в эпизоотическом плане, для республики был период с 1960 по 1975 годы. В указанный период по республике в целом состояло на учете ежегодно более 50 неблагополучных пунктов. Кроме того, к указанному количеству неблагополучных пунктов ежегодно добавлялись новые пункты (рисунок 1).

Как видно из рисунка 1, наблюдалась цикличность возникновения новых очагов туберкулезной инфекции, которая регистрировалась с интервалами 5-7 лет. Линия многолетнего тренда неблагополучия крупного рогатого скота по туберкулезу, т.е. общая однонаправленная тенденция изменения интенсивности эпизоотического процесса в республике, стремилась к убыванию.

Рисунок 1 — Ежегодная динамика регистрации первичных неблагополучных пунктов по туберкулезу КРС в РТ (1960-2000 гг.)

Максимальное количество неблагополучных пунктов по туберкулезу крупного рогатого скота было выявлено в 1965 и 1966 годах. К началу 1966 года в 20 из 36 районов РТ было 138 неблагополучных пунктов. В течение года было оздоровлено от туберкулеза 54 пункта, вновь выявлено — 34, в которых заболело 10248 животных, т.е. 1,5% к числу исследованных. Таким образом, только за 2 года (1965 — 1966 гг.), было выявлено порядка 20498 больных животных, что по «нынешним меркам» может сравняться с поголовьем скота 2 – 3 районов республики.

Из года в год в неблагополучных хозяйствах оставалось на передержке довольно большое количество больного скота. Он размещался в совершенно не отвечающих санитарным требованиям изоляторах. Следует отметить, что к концу 1987 года эпизоотическая ситуация становится менее напряженной. Так, за этот год было выявлено всего 2 неблагополучных пункта, оздоровлено 7. Впервые на начало 1988 года не осталось на передержке больного скота и не было ни одного неблагополучного по туберкулезу пункта. Этот период характеризовался успешным осуществлением комплекса противотуберкулезных мероприятий.

Однако в течение 1988 года вновь появилось 3 неблагополучных пункта, которые явились началом нового роста количества неблагополучных пунктов и реагирующего на туберкулин скота. Если на начало 1991 года оставалось 13 неблагополучных пунктов, то к 1 января 1995 года их уже стало 21, в 1997 – 31, а вот к 2000 году — осталось 18.

Многолетние наблюдения за распространением туберкулеза крупного рогатого скота в республике позволили прийти к выводу о недостаточной эффективности проводимых противотуберкулезных мероприятий, объективному течению эпизоотического процесса. Несмотря на весьма успешное проведение оздоровительных мероприятий, эпизоотическая ситуация по туберкулезу оставалась стабильно неблагополучной, появилась проблема длительно неблагополучных хозяйств, где туберкулез регистрировался стационарно по 10-15 лет, оздоровить такие предприятия общепринятыми методами не удавалось.

В период с 1995 по 2000 годы были усилены профилактические мероприятия по охране благополучных хозяйств от заноса в них туберкулезной инфекции, строго осуществлялись мероприятия по своевременному и полному выявлению и удалению из стада больных и инфицированных животных. Все ранее неблагополучные пункты по туберкулезу крупного рогатого скота находились под строжайшим ветеринарным контролем, особенно хозяйства Бавлинского, Верхнеуслонского, Дрожжановского, Камско-Устьинского, Муслюмовского, Новошешминского и Черемшанского районов РТ, где туберкулез имел значительное распространение, а в ряде хозяйствах на протяжении десятка лет регистрировался стационарно. В хозяйствах, длительно неблагополучных, с сильным поражением скота туберкулезом более эффективным оказалась полная замена маточного поголовья здоровым молодняком. В результате проведенной ветеринарной службой республики работы к 2000 году были оздоровлены последние 18 неблагополучных по туберкулезу пунктов, новых пунктов в этот год выявлено не было.

В период с 2000 по 2018 годы борьба с туберкулезом крупного рогатого скота в РТ шла с переменным успехом. На основании результатов эпизоотологического мониторинга туберкулеза крупного рогатого скота в РТ, в период с 2000 по 2018 годы, нами построена эпизоотическая кривая, отображающая годовые изменения динамики эпизоотического процесса при данном заболевании, как отражение изменения числа новых неблагополучных пунктов за исследуемый период (инцидентность), рисунок 2.

Рисунок 2 — Ежегодная динамика регистрации первичных неблагополучных пунктов по туберкулезу КРС в РТ (2000-2018 гг.).

По результатам, отраженным на рисунке 2, видно, что эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота, в сравнении с предыдущим периодом исследования (1960-2000 гг.), значительно улучшилась. За 18 лет наблюдения в республике выявлено 45 неблагополучных пунктов. Из 43 районов республики туберкулез регистрировался только в 16. Максимальное количество неблагополучных пунктов было зарегистрировано в 2001 и 2013 годы, в которые выявлено 11 и 12 пунктов, соответственно. По количеству первичных неблагополучных пунктов, «лидером» оказался Черемшанский район, в котором за 18 лет было выявлено 9 очагов инфекции, причем 8 из них было зарегистрировано в 2013 году.

За исследуемый период были годы, когда новые неблагополучные пункты по туберкулезу крупного рогатого скота в республике не регистрировались (2000, 2003, 2006, 2011 и 2012 годы), однако и в это время оставались неблагополучные хозяйства, в которых заболевание было зарегистрировано ранее.

Как видно из рисунка 2, эпизоотическая кривая за период наблюдения имеет весьма широкую амплитуду. Линия многолетнего тренда, т.е. общая однонаправленная тенденция изменения эпизоотического процесса (неблагополучия) при туберкулезе КРС в республике, имеет небольшую склонность к убыванию. Это может быть обусловлено целым рядом факторов: неудовлетворительным осуществлением общих противоэпизоотических и ветеринарно-санитарных мероприятий; нарушением в проведении специальных противоэпизоотических мероприятий; неконтролируемым завозом племенного молодняка из неблагополучных по данному заболеванию регионов; запоздалой диагностикой туберкулеза и несвоевременным проведением противотуберкулезных мероприятий.

В результате изучения динамики количества неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота пунктов в республике за период с 2000 по 2018 годы, нами составлена карта территориального расположения неблагополучных по данному заболеванию пунктов, с целью определения нозоареала болезни (рисунок 3).

Рисунок 3 — Картограмма эпизоотической ситуации по туберкулезу КРС в районах РТ за период с 2000 по 2018 годы.

В результате анализа этой картограммы, нами установлено, что неблагополучные по туберкулезу пункты территориально приурочены к определенной местности: т.е. расположились в основном на юге, и разрозненно (небольшими группами – «очагами») в центральной части республики.

Так, в районах Предволжья и Предкамья (Арский, Атнинский, Балтасинский, Высокогорский, Зеленодольский, Кукморский, Сабинский, Тюлячинский и др.) заболевание скота протекает в виде энзоотии или проявляется спорадически, в таких хозяйствах после удаления выявленных больных животных достигается полное оздоровление стад и редко когда наблюдаются рецидивы болезни.

Более тяжелое по широте охвата поголовья и количеству неблагополучных пунктов течение туберкулезной инфекции наблюдается в Заволжье и Закамье. Это Алькеевский, Алексеевский, Дрожжановский, Лениногорский, Черемшанский, Чистопольский и другие районы. В указанных зонах регистрируется выраженная мозаичность поражения отдельных территорий и животноводческих ферм. Проведение оздоровительных мер в ряде хозяйств этой зоны связано с большими усилиями и значительными затратами. Именно здесь ранее имелись стационарные неблагополучные пункты и, как правило, в оздоровленных от туберкулеза хозяйствах через 3-5 лет вновь регистрировались рецидивы болезни.

Таким образом, туберкулез крупного рогатого скота в Республике Татарстан носит стационарный характер, линия многолетнего тренда имеет тенденцию к снижению. За 40 лет (1960-2000 годы) было оздоровлено 726 неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота пунктов. В период с 2000 по 2016 годы выявлено 45 новых эпизоотических очагов в 16 из 43 районов республики. В районах Предволжья и Предкамья инфекция протекает в виде энзоотии или проявляется спорадически. Более интенсивное по широте охвата поголовья и количеству неблагополучных пунктов течение эпизоотического процесса наблюдается в районах Заволжья и Закамья, именно здесь ранее имелись стационарные неблагополучные пункты и, как правило, в оздоровленных от туберкулеза хозяйствах через 3-5 лет вновь регистрировались рецидивы болезни.

В течение последних десятилетий в РТ проводится большая работа по изучению и совершенствованию диагностики туберкулеза животных. Ветеринарными специалистами ведется постоянная работа по недопущению заноса возбудителя туберкулеза в стада животных и обеспечение их благополучия, проводится постоянный ветеринарный надзор за перегруппировками, поступлением и выбытием скота, выполнением в хозяйствах ветеринарно-санитарных правил.

1.2.2 Определение туберкулостатической активности Тубофена, изоциануратов, триазинов и α,ω – бис(амидо- и гидразидометилсульфинил- и сульфонил)алканов

1.2.2.1 Определение туберкулостатической активности Тубофена

Туберкулостатическая активность Тубофена была изучена in vitro на 3 видах микобактерий туберкулёза (музейных штаммах: Mycobacterium bovis (штамм 14), Mycobacterium tuberculosis (штамм Н37Rv) и Mycobacterium fortuitum) в концентрации препаратов от 10 до 0,018 мкг/мл. В качестве дополнительного контроля, исследовали также и туберкулостатик первого ряда — изониазид.

Минимальную ингибирующую концентрацию Тубофена изучали используя метод последовательных серийных разведений по общепринятой в бактериологии методике (Першин Г.Н., 1971). Для этого в пробирках, подлежащих посеву, готовили двукратные разведения препаратов, предварительно растворяя их в 96⁰ спирте из расчета 10 мг препарата в 10 мл спирта (разведение 1:1000). Далее растворы с препаратами в количестве 0,1 мл вносили в 9,9 мл питательной среды Сотона и получали первое разведение 1:100000, являющееся исходным. Путем последовательного переноса 5 мл жидкости из предыдущей пробирки в последующую, содержащую 5 мл питательной среды Сотона, готовили следующие разведения препаратов: 5,0; 2,5; 1,25; 0,6; 0,3; 0,15; 0,075; 0,037 и 0,018 мкг/мл. Параллельно этому готовили аналогичные разведения препаратов со средой Сотона, содержащей 1 мл лошадиной сыворотки.

Тест культуры стандартизировали по стандарту БЦЖ, содержащему 5 мг бацилл в 1 мл. Полученную взвесь разводили средой Сотона 1:10 и использовали для дальнейших посевов, путём внесения 0,2 мл разведенной взвеси (0,1 мг бацилл) в каждую опытную пробирку. За титр активности изучаемого вещества принимали то его наибольшее разведение, или ту наименьшую концентрацию, которые полностью подавляли рост микобактерий туберкулёза.

Оценка ростовых свойств микобактерий определялась по количеству выросших колоний, которая обозначалась в в крестах по схеме, предложенной Першиным Г.Н.: обильный рост (+++); глубинный рост штаммов менее обилен, осадок меньших размеров, комочки культуры меньше чем в контроле (++); глубинный рост в виде слабозаметного осадка, зерна мелкие в небольшом количестве (+); полный бактерицидный эффект, когда засеянная культура не даёт роста (-).

Результаты исследования бактериостатической активности противотуберкулёзных препаратов отражены в таблице 6. Из данных таблицы 6 видно, что бактериостатическая активность тубофена высока и не уступает таковой изониазида. Тубофен в концентрации 0,075 мкг/мл оказывал полное бактериостатическое действие на штамм 14 М.bovis и штамм Н37Rv M. tuberculosis как на чистой питательной среде, так и с добавлением в неё лошадиной сыворотки.

Концентрации Тубофена 0,037 и 0,018 мкг/мл с теми же штаммами, на среде Сотона и среде Сотона, содержащей раствор лошадиной сыворотки, оказывали лишь частичное подавление размножения микобактерий туберкулёза в виде слабо заметного осадка с мелкими зернами.

В свою очередь, изониазид оказывал полное бактериостатическое действие на штамм 14 М. bovis и штамм Н37Rv M. tuberculosis только при концентрации препарата 0,15 мкг/мл среды. Причем штамм Н37Rv M. tuberculosis оказался более устойчив к изониазиду, чем штамм 14 М. bovis, и в концентрации 0,037 мкг/мл рост культур микобактерий туберкулёза практически не отличался от таковых в контрольных пробирках как на среде Сотона, так и с добавлением в неё лошадиной сыворотки. Концентрации изониазида 0,075; 0,037 и 0,018 мкг/мл на среде Сотона и среде Сотона, содержащей лошадиную сыворотку, оказывали лишь частичное подавление размножения микобактерий туберкулёза штамма 14.

Атипичные микобактерии М. fortuitum, оказались не чувствительны к испытуемым препаратам даже в концентрациях 10 мкг/мл. В контрольных посевах рост тест культур был обильный, характерный для каждого вида микобактерий.

Таблица 1 — Показатели туберкулостатической активности Тубофена in vitro

Примечание: * – титр активности.

1.2.3 Оценка бактерицидных свойств Тубофена

С целью изучения бактерицидного действия Тубофена, также использовали метод последовательных серийных разведений. Взвесь микобактерий туберкулёза штамма 14, стандартизированную по стандарту БЦЖ вносили в пробирки с питательной средой Сотона, содержащие различные концентрации Тубофена. Пробирки помещали в термостат, при температуре 37⁰С и через 1, 3, 6, 24 часа и 2, 5 и 8 суток содержимое бактериальных пробирок переносили в центрифужные пробирки и центрифугировали при 3000 оборотов в минуту, в течение 15 минут. Осадок после удаления физиологического раствора пересевали в 2 пробирки со средой Левенштейна-Йенсена. Посев выдерживали в термостате при температуре 37⁰С в течение 2,5 месяцев. Отсутствие в этот срок колоний микобактерий туберкулёза свидетельствовало о бактерицидном действии соответствующих концентраций Тубофена.

Результаты исследования бактерицидной активности Тубофена отражены в таблице 2. Из данных таблицы 2 видно, что препарат в минимальной концентрации – 0,75 мкг/мл оказывает полное бактерицидное действие на штамм 14 микобактерий туберкулёза бычьего вида, только при максимальном времени контакта – 8 суток. При воздействии на штамм микобактерий минимальной концентрации Тубофена в течение 5 суток, на питательной среде Левенштейна-Йенсена обнаруживались лишь единичные колонии (частичный бактерицидный эффект). Частичное бактерицидное действие Тубофена впервые начало проявляться через 6 часов контакта препарата со штаммом микобактерий туберкулёза в концентрациях 50,0; 25,0 и 12,5 мкг/мл. Полная гибель всех микобактерий туберкулёза бычьего вида наступала через 5 суток при концентрации препарата 6,2 мкг/мл. При максимальном сроке экспозиции Тубофена с микобактериями туберкулёза (8 суток), отмечалось выраженное бактерицидное действие препарата во всех экспериментальных концентрациях. Во всех контрольных пробирках отмечался сплошной рост микобактерий туберкулёза бычьего вида.

Таблица 2 — Показатели бактерицидной активности Тубофена in vitro

Условные обозначения: — отсутствие роста;

+ — от 1 до 10 колоний;

++ — от 11 до 30 колоний;

+++ — от 31 до 100 колоний;

++++ — сплошной рост.

1.2.4 Определение туберкулостатической активности изоциануратов

Изучение туберкулостатической активности изоциануратов в отношении микобактерий туберкулеза штамма H37Rv проводили, используя стандартную радиометрическую ростовую систему BACTEC MGIT 960 (Becton Dickinson).

Содержимое пробирки MGIT – это питательный бульон, благодаря которому достигается ускоренный рост микобактерий. Пробирка содержит 7 мл стерильного питательного бульона Мидлбрук 7Н9, в который перед использованием вносится обогатительная добавка ВАСТЕС MGIT OADC (олеиновая кислота, альбумин, декстроза и каталаза). Для предотвращения контаминации добавляли MGIT PANTA.

Кроме жидкой среды, в пробирке содержится бескислородный флюорохром — трис-4,7–дифенил–1,10–фенантролин пентагидрат хлорида рутения, помещенный на дно пробирки и покрытый силиконом. Во время бактериального роста внутри пробирки происходит поглощение свободного кислорода и его замещение углекислым газом. По мере расходования свободного кислорода прекращается ингибирование флюорохрома. Флюоресценция становится видимой при облучении пробирки УФ светом и автоматически регистрируется фотодатчиками, встроенными в прибор. Интенсивность свечения прямо пропорциональна уровню расходования кислорода активно делящимися клетками в среде. Детекция роста микобактериальных культур проводится каждый час с помощью программного обеспечения Epicenter (BD, USA) и регистрируется в единицах роста (GU) или в относительных единицах флюоресценции (ОЕФ).

Система BACTEC MGIT 960 расценивает пробирку как положительную, если количество живых микроорганизмов в ней достигло 100 000 на 1 мл среды (GU > 75). Пробирка инкубировалась при температуре 37 ⁰С с последующим анализом.

Для определения минимальной ингибирующей концентрации 45 исследуемых химических соединений, относящихся к изоциануратам, в отношении микобактерий туберкулеза, готовили их исходные растворы в диметилсульфоксиде (ДМСО) и добавляли в пробирки MGIT в количествах, обеспечивающих получение конечных концентраций 50,0; 25,0; 10,0; 5,0; 1,0; 0,5; 0,1 и 0,05 мкг/мл среды. В виду дороговизны проводимых исследований 20 химических веществ под номерами с 26 по 46 исследовали лишь в минимальных концентрациях – 0,1 и 0,05 мкг/мл среды.

Культуру микобактерий туберкулеза штамма H37Rv, выращенную на плотной яичной среде, растирали в пробирке и суспензировали в 0,9% стерильном растворе поваренной соли. Через 20 минут после отстаивания взвесь микроорганизмов отбирали пипеткой и переносили в другую пробирку. Необходимую оптическую плотность, соответствующую 5-му стандарту мутности (в 1 мл суспензии, соответствующей пятому стандарту оптической плотности, содержится 5×10⁸ микробных тел) получали добавлением в пробирку физиологического раствора. Стандартизированную суспензию микобактерий добавляли в среду из расчета 0,2 мл на одну пробирку.

Для сравнения проводили аналогичные исследования с туберкулостатиком первого ряда – изониазидом. В качестве контроля использовали:

1 — среды без добавления штамма микобактерий туберкулеза, но с добавлением 0,2 мл физиологического раствора – контроль №1;

2 — среды без добавления испытуемых соединений, но с добавлением растворителя (диметилсульфоксида) и штамма микобактерий туберкулеза – контроль №2;

3 — среды без добавления испытуемых соединений и растворителя (диметилсульфоксида), но с добавлением суспензии микобактерий туберкулеза штамма H37Rv – контроль №3.

Все пробирки инкубировали при 37ºС в приборе. Наличие или отсутствия роста микобактерий прибор регистрировал ежедневно в течение 11 суток. Если в указанный период роста микобактерий не отмечалось, то наблюдения проводили до 21 суток. Некоторые концентрации химических соединений для большей достоверности исследовали повторно. Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) синтезированных соединений определяли по результатам исследования на Bactec MGIT 960 как наименьшую концентрацию, которая сдерживала рост микобактерий на сутки по сравнению с контрольными пробирками.

Все выросшие культуры были подвергнуты контролю на видовую специфичность. Для контроля специфичности роста культуры микобактерий осуществляли визуальный просмотр положительных пробирок (среда прозрачная, на дне пробирки зернистость или облако культуры) и микроскопию по Цилю-Нильсену. Во всех положительных образцах был подтвержден рост культуры микобактерий туберкулезного комплекса. При посеве осадка на кровяной агар рост культуры через сутки инкубации не визуализировался, что свидетельствовало об отсутствии в пробирке посторонней микрофлоры. Подтверждение или отсутствие роста культуры микобактерий туберкулеза и отсутствие контаминации неспецифической микрофлорой позволило считать результаты эксперимента адекватными.

Результаты анализа антимикобактериального действия исследуемых изоциануратов на приборе Bactec MGIT 960 приведены в таблице 3.

Из таблицы 3 следует, что большинство испытанных химических соединений обладают бактериостатическим действием в отношении микобактерий туберкулеза. Однако не все испытуемые соединения оказывают выраженное и продолжительное ингибирующее действие. Так, химические соединения под номерами 1, 2, 6, 8, 12, 16, 18, и 19 оказывали лишь частичное бактериостатическое действие на штамм микобактерий лишь в больших концентрациях – 50 мкг/мл среды в течение 4 суток. На 5 сутки эксперимента отмечался резкий и обильный рост микобактерий туберкулеза.

Таблица 3 — Изучение туберкулостатической активности изоциануратов в относительных единицах флуоресценции (ОЕФ), с использованием стандартной радиометрической ростовой системы Bactec MGIT 960

Исследуемые химические соединения и их №	Конц. мкг/мл	Сроки после посева и результаты в ОЕФ (сутки)
		1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	Примечание
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14
Изониазид 7	50 5 1 0,5 0,1 0,05	0 0 0 0 0 0	0 0 0 0 0 10	18 15 16 20 25 20	45 75* 20 40 50* 24	51 20 46 37*	51 20 54	51 20 65*	51 30	51 45	51 48	51 48	Нет роста
1	50 25 10 5 1	0 0 0 0 0	0 0 0 0 0	0 0 0 0 0	0 0 0 0 0	75* 82* 81* 215* 276*
2	50 25 10 5 1	0 0 0 0 0	0 0 0 0 0	0 0 0 0 0	0 0 0 0 0	76* 127* 144* 149* 376*
3	50 25 10 5 1 1 0,5	0 0 0 0 0 0 0	0 0 0 0 0 0 0	33 31 21 0 25 10 30	55 79* 48 44 52 22 47*	57 53 81* 54 50	57 53 54 50	57 53 54 50	57 53 54 50	57 53 54 50	57 53 54 50	57 53 54 50	Нет роста Нет роста Нет роста Нет роста
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14
4	50 25 10 5 1 1	0 0 0 0 0 0	0 0 0 0 0 0	13 18 1 4 3 5	53 20 52 4 75* 18	67 20 85* 4 18	67 20 23 18	68 20 45 18	68 20 51 18	68 20 60 18	68 20 60 78*	68 20 69	Нет роста Нет роста
5	50 25 10 5 1	0 0 0 0 0	0 0 0 0 0	26 15 31 23 10	34 17 48 81* 30	34 17 48 37	34 17 48 44	34 17 48 44	34 27 48 49	34 40 48 50	34 40 48 50	34 40 117* 50	Нет роста Нет роста
6	50 25 10 5 1	0 0 0 0 0	0 0 0 0 0	5 4 25 3 7	57 55 48 23 41	97* 99* 88* 96* 108*
8	50 25 1	0 0 0	0 0 0	5 5 14	8 7 30	38 70* 35	38 37	38 39	38 68*	38	38	78*
9	50 25 1	0 0 0	0 0 0	10 10 20	16 19 29	23 25 33	29 34 39	34 40 39	34 40 39	34 40 39	34 40 39	34 40 39	Нет роста Нет роста Нет роста
10	50 25 10 1	0 0 0 0	0 0 0 0	0 0 10 20	18 15 22 35	26 38 42 35	32 54 57 54	35 62 61 54	35 62 61 54	65 62 61 54	65 62 61 54	65 65* 61 54	Нет роста Рост на 11 сутки
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14
11	50 25 1	0 0 0	0 0 0	0 4 15	30 39 20	30 39 23	30 39 23	30 39 23	30 39 23	30 39 23	30 39 23	30 39 23	Нет роста
12	50 25	0 0	0 0	0 5	44 23	48 23	50 23	54* 23	55*
13	25 10 5 1 0,5 0,1	0 0 0 0 0 0	5 4 0 0 0 0	5 5 10 16 25 35	8 7 16 39 41 43	8 7 23 39 46 43	8 7 37 41 52 47	8 7 44 41 52 47	8 7 44 41 52 47	8 7 44 41 52 47	10 7 44 41 52 47	18 7 44 41 52 47	Нет роста Рост на 17 сутки
14	50 25 10 5 1 1 0,5	0 0 0 0 0 0 0	0 0 0 0 0 0 0	20 25 14 20 20 18 25	48 55 30 39 44 24 40	53 55 30 39 44 24 40	59 60 30 39 54 33 40	65 62 30 39 54 33 40	65 62 30 39 54 33 45	65 62 30 39 54 33 51	65 62 30 39 54 33 53	65 62 30 59* 54 33 55*	Нет роста Рост на 17 сутки
15	50 25 10 5 1	0 0 0 0 0	0 0 0 0 0	15 20 21 20 18	23 35 41 43 34	23 43 41 43 52	23 68 42 47 63	23 93* 42 47 73	23 42 47 73	23 42 47 73	23 42 47 73	23 42 52* 75*	Рост на 17 сутки
16	50 25 5 1	0 0 0 0	0 0 0 0	21 14 12 12	40 35 33 33	40 47 50 52	41 62 71 75	41 76* 83* 85*	41	41	43	49*
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14
17	50 25 10 5 1 1 0,5	0 0 0 0 0 0 0	0 0 0 0 0 0 0	26 23 28 35 32 14 12	47 27 51 65 50 35 33	47 45 43 76 87 69 86	54 70 82 93 94 95 127	60 177* 158* 158* 150 185* 193*	60	60	60	60	Нет роста
18	50 25 10 5 1 1 0,5 0,1	0 0 0 0 0 0 0 0	0 0 0 0 0 0 0 0	30 19 4 26 28 12 26 23	60 36 38 56 40 30 37 27	68 42 47 64 40 30 37 27	77 65 71 71 40 40 50 27	86* 65 78* 82* 70* 80* 60* 87*	65	65	65	70*
19	25 12,5 5 1 1 0,5 0,1	0 0 0 0 0 0 0	0 0 0 0 0 0 0	28 30 31 0 35 32 30	31 55 52 19 35 50 30	31 55 64 19 35 50 30	31 75 86 22 35 50 30	31 75* 94* 22 85* 50 36*	68* 22 50	22 50	22 50	22 50
20	50 25 10 5 1	0 0 0 0 0	0 0 0 0 0	0 11 15 15 25	20 26 32 31 45	20 48 42 44 54	20 62 60 66 54	24 79* 60 66 54	24 60 66 54	24 60 66 56	24 60 66 85*	24 60 66	Рост на 17 сутки
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14
21	50 25 10 5 1	0 0 0 0 0	0 0 0 0 0	0 30 11 10 15	14 63 20 17 48	14 92 84 84 65	55 138 124 112 87	55 197* 158* 124* 98*	55	55	55	55	Рост на 17 сутки
22	10 1	0 0	0 0	19 0	36 5	42 5	57 5	65 5	68 55	69 55	69 55	69 55	Нет роста
23	10 1	0 0	0 0	0 0	16 10	16 10	16 10	16 20	16 40	16 40	16 40	16 40	Нет роста
24	10 1	0 0	0 0	10 10	10 15	10 15	20 15	30 45*	30	30	30	30	Нет роста
25	10 1	0 0	0 0	30 0	32 20	32 20	32 22	34* 22	22	22	22	22	Нет роста
26	0,1 0,1	0 0	0 0	0 0	0 0	4 14	30* 33	40*
27	0,1 0,1	0 0	0 0	0 0	0 0	0 3	21 17	42* 38*
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14
28	0,1 0,1	0 0	0 0	0 0	0 0	18 3	32 15	39* 35*
29	0,1 0,1	0 0	0 0	0 0	0 0	0 0	4 20	4 22	4 22	4 23	4 23	4 23	Нет роста Нет роста
30	0,1 0,1	0 0	0 0	0 0	0 0	5 0	25 0	38* 31*
31	0,1 0,1	0 0	0 0	0 0	0 0	0 1	0 1	0 4	0 15	0 15	0 15	0 15	Нет роста Нет роста
32	0,1 0,05	0 0	0 0	0 0	0 0	0 1	3 24	5 29*	20	21	21	21	Нет роста
33	0,1	0	0	0	35*
34	0,1	0	0	20	35	37	38	38	40	40	40	40
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14
35	0,1	0	0	1	5	5	5	12	12	12	12	12	Нет роста
36	0,1 0,1	0 0	0 0	0 0	0 0	25 24	30 29*	37*
37	0,1 0,1	0 0	0 0	0 0	0 0	24 20	28 35	31* 35	35	35	35*
38	0,1	0	0	0	0	22	30	30*
39	0,1	1	10	10	35	35	36	37	37*
40	0,1	0	0	0	0	12	27	40	40	40	40	40
41	0,1	0	0	0	13	30*
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14
42	0,1	0	0	0	0	37	39	42	42	43	43	43
43	0,1	0	0	10	15	40	42*
44	0,1	0	0	0	10	25	35*
45	0,1	0	0	1	1	25	26	30	35	35	35	35
46	0,1 0,05	0 1	0 1	0 15	0 27	0 31	0 32	1 41	2 48*	2	2	2	Нет роста
Контроль №1		0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
Контроль №2		0	0	116*
Контроль №3		0	0	216*

Примечание: * — радиометрическая ростовая система BACTEC MGIT 960 сигнализирует о выраженном росте микобактерий туберкулеза, проба оценивается как положительная и мониторинг прекращается.

Химические соединения под номерами 3, 4, 5, 13, 15, 17, 20, 21 и 24 оказывали бактериостатическое действие на микобактерии туберкулеза только при высоких концентрациях испытуемых веществ в питательной среде (50, 25 и 10 мкг/мл). В малых концентрациях (1, 0,5 и 0,1 мкг/мл) отмечался обильный рост микобактерий туберкулеза уже на 4 — 5 сутки исследований.

В свою очередь, химические соединения под номерами 9, 10, 11, 14, 22, 23, 25, 29, 31, 32, 34, 35, 40, 42, 45 и 46 оказали выраженное и продолжительное ингибирующее действие в отношении микобактерий туберкулеза даже в небольших концентрациях – 0,1 мкг/мл среды.

Например, соединение № 46 – 1-5-(карбазоилметилсульфинил)-пентил)-3,5-диметилизоцианурат (названный авторами — Линарол) проявил наиболее выраженное бактериостатическое действие на микобактерии туберкулеза в концентрации 0,1 мкг/мл среды и полностью подавил рост возбудителей туберкулеза в течение 6 суток. На 7 сутки уровень роста микобактерий достиг отметки 1 ОЕФ и к окончанию опыта оставался на уровне 2 ОЕФ. Даже в концентрации 0,05 мкг/мл среды данное соединение оказывало частичное ингибирующее действие на микобактерии туберкулеза. В течение первых 2 суток рост микобактерий составил 1, на 3 сутки — 15, на 6 — 32 и на 8 – 48 ОЕФ.

Изониазид в аналогичной концентрации (0,1 мкг/мл среды) сдерживал рост культуры возбудителя туберкулеза лишь в течение 2 суток. На 3 сутки рост микобактерий штамма H37Rv в этих пробирках достиг отметки 25 ОЕФ и в последующие сроки наблюдения увеличивался, пока на 4 сутки не достиг отметки 50 ОЕФ.

В контрольных пробирках №1 (среды без добавления штамма микобактерий туберкулеза, но с добавлением 0,2 мл физиологического раствора) роста микобактерий туберкулеза не отмечалось. В контрольных пробирках №2 (среды без добавления испытуемых соединений, но с добавлением растворителя (диметилсульфоксида) и штамма микобактерий туберкулеза) рост культуры на 3 сутки исследований достиг 116 ОЕФ. В контрольных пробирках №3 (среды без добавления испытуемых соединений и растворителя (диметилсульфоксида), но с добавлением суспензии микобактерий туберкулеза штамма H37Rv) отмечался обильный рост микобактерий, который на 3 сутки достигал отметки 216 ОЕФ.

Таким образом, большинство исследованных соединений, относящихся к изоциануратам, обладают выраженными бактериостатическими свойствами в отношении микобактерий туберкулеза штамма H37Rv, а некоторые из них, например 1-5-(карбазоилметилсульфинил)-пентил)-3,5-диметилизоцианурат (Линарол) проявляют свою антимикобактериальную активность на уровне туберкулостатика первого ряда – изониазида.

1.2.5 Определение туберкулостатической активности триазинов

Изучение туберкулостатичской активности триазинов в отношении микобактерий туберкулеза штамма H37Rv проводили, используя стандартную радиометрическую ростовую систему BACTEC MGIT 960 (Becton Dickinson).

Для определения минимальной ингибирующей концентрации 3 исследуемых химических соединений, относящихся к триазинам, в отношении микобактерий туберкулеза, готовили их исходные растворы в диметилсульфоксиде (ДМСО) и добавляли в пробирки MGIT в количествах, обеспечивающих получение конечных концентраций 0,1 мкг/мл среды, в виду дороговизны проводимых исследований. Культуру микобактерий туберкулеза штамма H37Rv, соответствующую 5-му стандарту мутности добавляли в среду из расчета 0,2 мл на одну пробирку.

Для сравнения проводили аналогичные исследования с туберкулостатиком первого ряда – изониазидом. В качестве контроля использовали:

1. среды без добавления штамма микобактерий туберкулеза, но с добавлением 0,2 мл физиологического раствора – контроль №1;
2. среды без добавления испытуемых соединений, но с добавлением растворителя (диметилсульфоксида) и штамма микобактерий туберкулеза – контроль №2;
3. среды без добавления испытуемых соединений и растворителя (диметилсульфоксида), но с добавлением суспензии микобактерий туберкулеза штамма H37Rv – контроль №3.

Все пробирки инкубировали при 37Сº в приборе. Наличие или отсутствия роста микобактерий прибор регистрировал ежедневно в течение 11 суток. Если в указанный период роста микобактерий не отмечалось, то наблюдения проводили до 21 суток.

Некоторые концентрации химических соединений для большей достоверности исследовали повторно. Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) синтезированных соединений определяли по результатам исследования на Bactec MGIT 960 как наименьшую концентрацию, которая сдерживала рост микобактерий на сутки по сравнению с контрольными пробирками.

Все выросшие культуры были подвергнуты контролю на видовую специфичность, как это было описано в предыдущем разделе работы.

Результаты анализа туберкулостатического действия триазинов в отношении микобактерий туберкулеза на приборе Bactec MGIT 960 приведены в таблице 4.

Из таблицы 4 следует, что все испытанные химические соединения обладают выраженным бактериостатическим действием в отношении микобактерий туберкулеза в достаточно низкой концентрации – 0,1 мкг/мл среды. Однако, соединение под №1 обладает более выраженным бактериостатическим эффектом в отношении микобактерий туберкулеза, по сравнению с соединениями под номерами 2 и 3.

Соединение №1, которое представляет собой 2,4-диамино-6-(карбамоилметилсульфинилметил)-1,3,5-триазин (названный авторами — Аликон) полностью подавлял рост микобактерий туберкулеза в течение 4 суток. На 5 сутки уровень роста микобактерий достигал отметки 35 ОЕФ и к окончанию опыта оставался на уровне37 ОЕФ.

Таблица 4 — Изучение туберкулостатической активности триазинов в относительных единицах флуоресценции (ОЕФ), с использованием стандартной радиометрической ростовой системы Bactec MGIT 960

Исследуемые химические соединения и их №	Конц. мкг/мл	Сроки после посева и результаты в ОЕФ (сутки)
		1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	Примечание
Изониазид	0,1	0	0	25	25	74	89*
1	0.1	0	0	0	0	35	36	36	37	37	37	37*
2	0.1	1	5	12	12	25	26	26	26	27	27*		Рост на 12 сутки
3	0.1	0	0	0	0	2	19	44*
Контроль №1	—	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
Контроль №2	—	0	39	116*
Контроль №3	—	0	41	216*

Примечание: * — радиометрическая ростовая система BACTEC MGIT 960 сигнализирует о выраженном росте микобактерий туберкулеза, проба оценивается как положительная и мониторинг прекращается

Изониазид в аналогичной концентрации (0,1 мкг/мл среды) сдерживал рост культуры возбудителя туберкулеза лишь в течение 2 суток. На 3 сутки рост микобактерий штамма H37Rv в этих пробирках достиг отметки 25 ОЕФ и в последующие сроки наблюдения увеличивался, пока на 6 сутки не достиг отметки 89 ОЕФ.

В контрольных пробирках №1 (среды без добавления штамма микобактерий туберкулеза, но с добавлением 0,2 мл физиологического раствора) роста микобактерий туберкулеза не отмечалось.

В контрольных пробирках №2 (среды без добавления испытуемых соединений, но с добавлением растворителя (диметилсульфоксида) и штамма микобактерий туберкулеза) рост культуры на 3 сутки исследований достиг 116 ОЕФ.

В контрольных пробирках №3 (среды без добавления испытуемых соединений и растворителя (диметилсульфоксида), но с добавлением суспензии микобактерий туберкулеза штамма H37Rv) отмечался обильный рост микобактерий, который на 3 сутки достигал отметки 216 ОЕФ.

Таким образом, установлено, что 3 исследованных химических соединения, относящиеся к триазинам, обладают выраженными бактериостатическими свойствами в отношении микобактерий туберкулеза штамма H37Rv.

1.2.6 Определение туберкулостатической активности α, ω – бис(амидо- и гидразидометилсульфинил- и сульфонил) алканов

Изучение туберкулостатической активности 34 синтезированных α, ω – бис (амидо- и гидразидометилсульфинил- и сульфонил)алканов в отношении микобактерий туберкулеза штамма H37Rv проводили, используя метод вертикальной диффузии на плотной питательной среде «Новая».

Питательную среду разливали в пробирки по 5 мл, свертывая в наклонном положении таким образом, чтобы ½ часть дна пробирки оставалась свободной. Свернутую среду засевали по 0,2 мл взвеси микобактерий туберкулеза (МБТ) штамма H37Rv, разведенного по 5-му стандарту мутности, и в наклонном положении помещали в термостат на 24 часа для выращивания МБТ.

Через сутки пробирки ставили в вертикальное положение и по свободному краю закапывали по 0,3 мл субстанции соединений в исследуемых концентрациях: 12,5; 6,2; 3,1; 1,5; 0,6; 0,3, 0,1 мкг/мл. Затем пробирки помещали в термостат при температуре 37⁰С и инкубировали в течение 10 суток.

Оценку роста МБТ проводили по стандартной методике, где появление зон задержки роста МБТ (более 10 мм) свидетельствовало о наличии туберкулостатических свойств в исследуемой концентрации соединений. Величина зоны задержки роста МБТ (в мм) пропорциональна степени туберкулостатической активности соединений. Задержка роста 100 мм и более расценивается как полная задержка роста МБТ.

В качестве контроля проводили аналогичные исследования с туберкулостатиком первого ряда – изониазидом.

Все выросшие культуры были подвергнуты контролю на видовую специфичность, как это было описано в предыдущих разделах.

Результаты изучения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) в отношении микобактерий туберкулеза 34 химических соединений, относящихся к α, ω – бис(амидо- и гидразидометилсульфинил- и сульфонил) алканам, приведены в таблице 5.

По данным таблицы 5, самую высокую бактериостатическую активность в отношении штамма H37Rv проявило соединение (1.3) – названное авторами Линарол Ф-1, минимальная ингибирующая концентрация (МИК) которого составила 0,3 мкг/мл.

В контрольных пробирках, содержащих изониазид, во всех исследуемых концентрациях отмечалось наличие зон задержки роста МБТ, поэтому МИК данного препарата составила 0,1 мкг/мл среды.

Высокую бактериостатическую активность с МИК 0,6 мкг/мл проявили соединения 1.9, 1.11, 1.13, 1.15, 1.31, 1.33 и 1.34. Соединение 1.22 проявило достаточно хорошую активность с МИК 1,5 мкг/мл. Остальные соединения этого ряда задерживали рост микобактерий туберкулеза в минимальной ингибирующей концентрации 12,5 мкг/мл.

Таким образом, все 34 исследованных химических соединения, относящиеся к α, ω – бис(амидо- и гидразидометилсульфинил- и сульфонил) алканам, обладают выраженными бактериостатическими свойствами в отношении микобактерий туберкулеза штамма H37 Rv, а соединение 1.3 (Линарол Ф-1), которое представляет собой 1,4-Бис(амидометилсульфинил)бутан, по своим туберкулостатическим свойствам оказалось близким к туберкулостатику первого ряда – изониазиду, с минимальной ингибирующей концентрацией – 0,3 мкг/мл среды.

Таблица 5 — Изучение МИК в отношении МБТ α, ω – бис (амидо- и гидразидометилсульфинил- и сульфонил) алканов

Примечание: «++» — колонии МБТ без зон задержки роста;

«+» — наличие зон задержки роста МБТ более 10 мм;

«-» — полная задержка роста МБТ (100 мм и более).

1.2.7 Определение лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза к Тубофену, Линаролу, Аликону и Линаролу Ф-1

Эффективность любого противотуберкулезного препарата оценивают не только по наличию бактерицидной и бактериостатической активности, но и по способности предотвращать развитие лекарственной устойчивости. Поэтому целью наших исследований было выяснение влияния синтезированных препаратов на лекарственную чувствительность различных штаммов микобактерий.

Чувствительность микроорганизмов к исследуемым препаратам проводили в сравнительном аспекте по отношению к уже известным и используемым в медицинской практике противотуберкулезным препаратам: изониазид, рифампицин, офлоксацин, стрептомицин, этамбутол, этионамид и разные их сочетания.

Лекарственную устойчивость микобактерий к вышеперечисленным препаратам определяли методом абсолютных концентраций на среде Левенштейна – Йенсена без содержания в ней крахмала согласно приказа МЗ РФ №109 от 21.03.2003. Тубофен, Аликон, Линарол и Линарол-Ф1 разводили согласно прописи изониазида. В питательную среду непосредственно перед свертыванием добавляли рабочие разведения данного вещества. Расчеты производили с учетом процента активности препарата.

Для определения эффективности действия препаратов использовали бактериальные суспензии:

• культуры микобактерий туберкулеза штамма Н37Rv;
• культуры микобактерий туберкулеза штамма M. bovis 14;
• культуры клинического штамма микобактерий туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ);
• культуры микобактерий туберкулеза М. terrae;
• культуры микобактерий туберкулеза М. avium;
• культуры микобактерий выделенного от инфицированного крупного рогатого скота (M. bovis).

Выросшие на плотной питательной среде культуры микобактерий снимали лопаточкой и помещали в толстостенную стеклянную пробирку. Тщательно растирали стеклянной палочкой и постепенно добавляли стерильный физиологический раствор. Полученную суспензию переносили в стерильную пробирку. Культуры стандартизировали по оптическому стандарту мутности №5. Затем брали по 1 мл приготовленных суспензий, разводили их в 10 раз стерильным физиологическим раствором. Посев на среды производился из этих суспензий, которые вносили по 0,2 мл в пробирку с питательной средой. Все пробирки культивировали при 37⁰С, в течение 4 недель при обязательном еженедельном просмотре. Результаты определения лекарственной устойчивости учитывали на 21 день после посева. При скудном росте в контрольной пробирке все посевы с добавлением препаратов оставляли еще на 3-4 недели в термостате до получения выраженного роста в контроле.

Культуру считали чувствительной к данной концентрации препарата, если в пробирке со средой, содержащей препарат, выросло менее 20 колоний, при обильном ее росте в контроле. Культуру считали устойчивой к той концентрации препарата, которая содержится в данной пробирке, если в пробирке со средой выросло более 20 колоний, при обильном ее росте в контроле.

Результаты определения лекарственной устойчивости микобактерий к испытуемым препаратам отражены в таблице 6.

В результате проведенных исследований установлено, что изучаемые противотуберкулезные препараты – Линарол, Аликон и Линарол Ф-1 проявили выраженное бактериостатическое действие на микобактерии туберкулеза штаммов Н37Rv, M. bovis 14, культуру клинического штамма микобактерий туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью и культуру микобактерий, выделенную от инфицированного крупного рогатого скота в концентрациях 10 мкг/мл среды.

Таблица 6 — Определение лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза к исследуемым соединениям

Примечание: «-» — отсутствие роста (менее 20 колоний);

«+» — наличие роста микобактерий (более 20 колоний).

Тубофен в концентрации 10 мг/мл среды проявил свое бактериостатическое действие лишь в отношении референтных штаммов (Н37Rv, M. bovis 14) и культуру микобактерий, выделенную от крупного рогатого скота. Культура клинического штамма с множественной лекарственной устойчивостью оказалась резистентной к данному препарату в исследованной дозе, так как в опытных пробирках со средой отмечали наличие роста более 35 колоний.

Концентрации изониазида, рифампицина, офлоксацина, стрептомицина, этамбутола, этионамида и их различные сочетания вели себя согласно литературным данным — штамм Н37Rv и M. bovis 14 был чувствителен ко всем концентрациям этих препаратов при положительном контроле.

Штамм микобактерий туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью проявил свою резистентность ко всем исследуемым препаратам, кроме Аликона, Линарола и Линарола Ф-1 в концентрациях 10 мкг/мл среды, а также изониазида в сочетании с рифампицином (изониазид в концентрации 10 мкг/мл и рифампицин в концентрации 40 мкг/мл среды).

Штаммы M. avium и М. terrae оказались не чувствительными к синтезированным соединениям в концентрациях 10 мкг/мл среды.

Штамм, выделенный от инфицированного крупного рогатого скота, оказался чувствительным ко всем исследуемым в опыте препаратам в различных их концентрациях.

В контроле, к 21 дню исследования, отмечался обильный рост микобактерий туберкулеза всех исследуемых штаммов, кроме микобактерий, выделенных от крупного рогатого скота, рост которых проявился только на 40 – 50 сутки.

Таким образом, проведенное исследование показало, что новые туберкулостатики Линарол, Аликон и Линарол Ф-1 обладают выраженным бактериостатическим действием на референтные и лекарственно — устойчивый штаммы микобактерий.

1.2.8 Определение противомикробной и фунгистатической активности Тубофена, Аликона, Линарола и Линарола Ф-1

Оценку спектра действия и степени антибактериальной и фунгистатической активности синтезированных противотуберкулезных препаратов Тубофена, Аликона, Линарола и Линарола Ф-1 проводили согласно «Руководству по экспериментальному изучению новых фармакологических веществ» под редакцией Хабриева Р.У. (2005), в отношение 3-х бактериальных штаммов (Staphylococcus aureus 209p, Escherichia colli F-50, Bacillus cereus 8035) и 3-х грибов (Candida albicans 855-653, Trichophyton mentagrophytes — 1773, Aspergillus niger BKMF-1119).

Определение спектра антибактериального действия туберкулостатиков проводили методом двукратных серийных разведений на жидкой питательной среде – МПБ (мясо-пептонный бульон). Для этого в чашках Петри, подлежащих посеву, готовили двукратные разведения препаратов, предварительно растворяя их в стерильной дистиллированной воде, из расчета 10 мг препарата в 10 мл воды (разведение 1:1000).

Растворы с испытуемыми соединениями в количестве 0,1 мл вносили в 9,9 мл МПБ и получали первое разведение 1:100000, являющееся исходным. Путем последовательного переноса 5 мл жидкости из предыдущей пробирки в последующую, содержащую 5 мл МПБ, готовили разведения препаратов в концентрациях: 5,0; 2,5; 1,25 и 0,6 мкг/мл среды.

Контролем служил МПБ без добавления испытуемых соединений.

Для посева использовали взвесь суточной бульонной культуры тест-штаммов Staphylococcus aureus 209p, Escherichia colli F₅₀ и Bacillus cereus 8035, которые из расчета 10⁵ КОЕ/мл в объеме 0,2 мл добавляли в каждую пробирку с разведения испытуемых препаратов.

Пробирки инкубировали в термостате при температуре 37°С, в течение 18-24 часов. Результаты оценивали визуально, определяя наличие или отсутствие роста в среде, содержащей различные концентрации испытуемых соединений. Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) препаратов, определяли по последней пробирке ряда с задержкой роста (прозрачный бульон) того или иного штамма бактерий.

Изучение противогрибковой (фунгистатической) активности испытуемых фармакологических веществ проводили аналогично определению спектра антибактериального действия – методом двукратных серийных разведений в жидкой среде Сабуро.

Инокулят для засева готовили путем смыва культур 3-х микроскопических грибов Candida albicans 855-653, Trichophyton mentagrophytes — 1773, Aspergillus niger BKMF-1119, которые брали в жидкой среде Сабуро, значительной мутности. Оттитрованной пипеткой, содержащей 25 капель в 1 мл, вносили по одной капле взвеси культур в каждую пробирку с разведенными препаратами, включая контрольную. После засева штатив встряхивали и помещали в термостат на 14 суток, при температуре 27°С.

Результаты изучения противомикробной и фунгистатической активности испытуемых соединений отражены в таблице 7.

Таблица 7 — Результаты изучения противомикробной и фунгистатической активности Тубофена, Аликона, Линарола и Линарола-Ф1

Примечание: «+» — рост культуры; «—» — засеянная культура не дает роста.

По результатам исследований, отраженных в таблице 7, выяснилось, что ни одно из четырех соединений, ни в одной из использованных концентраций (5,0; 2,5; 1,25 и 0,6 мг/мл среды) не проявило выраженного антибактериального и фунгистатического действия в отношении тестируемых культур и рост их в опытных пробирках не отличался от таковых в контрольных. На основании проведенного исследования установили, что синтезируемые препараты: Тубофен, Аликон, Линарол и Линарол Ф-1 обладают избирательным антибактериальным действием, только в отношении микобактерий туберкулеза.

1.2.9 Изучение фармако-токсикологических свойств Тубофена.

1.2.9.1 Определение параметров острой токсичности Тубофена на белых мышах.

Опыты были проведены на 24 белых мышах массой 20-25 г. Препарат вводили в желудок с помощью металлического зонда с оливой, надетого на шприц, по схеме приведённой в таблице 8.

Таблица 8 — Результаты исследования острой токсичности Тубофена на белых мышах

При пероральном введении препарата в дозе 400 мг/кг массы тела видимых изменений в поведении и общем состоянии белых мышей не наблюдалось. В дальнейшем, по мере увеличения дозы вводимого препарата на 200 мг/кг живой массы, в каждой последующей группе происходило угнетение животных. При дозе 600 мг/кг погибли две мыши, при дозе 800 мг/кг – 5, при дозе 1000 мг/кг – все мыши.

Параметры острой токсичности Тубофена при внутрижелудочном введении белым мышам составили: максимально переносимая доза (МПД) – 400 мг/кг; среднесмертельная доза (ЛД₅₀) — 668±63 мг/кг; доверительный интервал генеральной (ДИГ) средней ЛД₅₀ — 668 (538÷798) мг/кг; ЛД₁₀₀ — 1000 мг/кг. График определения токсичности препарата представлен на рисунке 4.

Рисунок 4 — Характеристическая кривая токсичности Тубофена для белых мышей при пероральном введении

Установлено, что в соответствии с «Гигиенической классификацией пестицидов по основным параметрам вредности» (Медведь Л.И., Каган Ю.С., Спыну Е.И., 1968), Тубофен, является веществом обладающим средней токсичностью. По степени опасности III класс, опасные химические вещества (ГОСТ 12.1.007.76).

1.2.9.2 Определение параметров острой токсичности Тубофена на белых крысах

Опыты были проведены на 36 белых крысах массой 190-260 г. Препарат вводили в желудок с помощью металлического зонда с оливой, надетого на шприц, по схеме, приведённой в таблице 9.

Таблица 9 — Результаты исследования острой токсичности Тубофена на белых крысах