<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?><rss version="2.0"
	xmlns:content="http://purl.org/rss/1.0/modules/content/"
	xmlns:wfw="http://wellformedweb.org/CommentAPI/"
	xmlns:dc="http://purl.org/dc/elements/1.1/"
	xmlns:atom="http://www.w3.org/2005/Atom"
	xmlns:sy="http://purl.org/rss/1.0/modules/syndication/"
	xmlns:slash="http://purl.org/rss/1.0/modules/slash/"
	>

<channel>
	<title>ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ &#8212; Отраслевая сеть инноваций в АПК</title>
	<atom:link href="https://apknet.ru/tag/%D1%84%D0%B3%D0%B1%D0%BE%D1%83-%D0%B2%D0%BE-%D0%BA%D1%83%D0%B1%D0%B0%D0%BD%D1%81%D0%BA%D0%B8%D0%B9-%D0%B3%D0%B0%D1%83/feed/" rel="self" type="application/rss+xml" />
	<link>https://apknet.ru</link>
	<description>Отраслевая сеть инноваций в АПК</description>
	<lastBuildDate>Mon, 04 Oct 2021 11:25:14 +0000</lastBuildDate>
	<language>ru-RU</language>
	<sy:updatePeriod>
	hourly	</sy:updatePeriod>
	<sy:updateFrequency>
	1	</sy:updateFrequency>
	<generator>https://wordpress.org/?v=5.8.10</generator>

<image>
	<url>https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/09/cropped-apknet-logo-32x32.png</url>
	<title>ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ &#8212; Отраслевая сеть инноваций в АПК</title>
	<link>https://apknet.ru</link>
	<width>32</width>
	<height>32</height>
</image> 
	<item>
		<title>Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию</title>
		<link>https://apknet.ru/texnologii-tochnogo-selskogo-xozyajstva/</link>
					<comments>https://apknet.ru/texnologii-tochnogo-selskogo-xozyajstva/#respond</comments>
		
		<dc:creator><![CDATA[Leonid]]></dc:creator>
		<pubDate>Sun, 25 Jul 2021 21:28:56 +0000</pubDate>
				<category><![CDATA[Агрохимия]]></category>
		<category><![CDATA[Механизация и электрификация сельского хозяйства]]></category>
		<category><![CDATA[ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ]]></category>
		<guid isPermaLink="false">https://apknet.ru/?p=15835</guid>

					<description><![CDATA[Практическая значимость заключается в содействии подготовки информационных, аналитических и прогнозных материалов для целей научно-технологического развития АПК Российской Федерации.]]></description>
										<content:encoded><![CDATA[<h2><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-Титульник-и-исплн-Тема-3.docx">Титульный лист и исполнители</a></h2>
<p><strong>РЕФЕРАТ</strong></p>
<p>Отчет 139 с., рис. 50, табл. 26, источников 133.</p>
<p>МОНИТОРИНГ, ПРОГНОЗИРОВАНИЕ, ТОЧНОЕ СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО, АВТОМАТИЗАЦИЯ, РОБОТИЗАЦИЯ</p>
<p><strong><em>Научная новизна</em></strong> заключается в создании системы мониторинга и прогнозирования научно-технологического развития АПК и инновационной деятельности в соответствующей профилю Центра тематической области.</p>
<p><strong><em>Практическая значимость</em></strong> заключается в содействии подготовки информационных, аналитических и прогнозных материалов для целей научно-технологического развития АПК Российской Федерации.</p>
<p><strong><em>Цель</em></strong> – мониторинг и актуализация научно-технологического прогноза развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию в 2020 году.</p>
<p>Для достижения указанной цели в 2020 г. выполнено следующее:</p>
<p>– актуализация фактического состояния нормативно-правовой документации в области цифрового сельского хозяйства;</p>
<p>– изучение и анализ состояния современного рынка технологического оборудования и тенденций развития в области цифрового сельского хозяйства;</p>
<p>– изучение кадрового, интеллектуального, методического обеспечения научных и образовательных учреждений по цифровизации АПК и оценка научно-технологических тенденций и их индикаторов развития в РФ;</p>
<p>– актуализация прогноза о перспективных направлениях технологического развития АПК РФ в области цифровизации сельского хозяйства;</p>
<p>– реализация сервисов личного кабинета эксперта (автоматическое назначение анкет, оповещения и др.) сайта центра; реализация элементов автоматической обработки данных анкет для составления аналитических отчетов; проведение редизайна сайта;</p>
<p>– подготовка учебно-методических материалов по направлению «Цифровое сельское хозяйство»;</p>
<p>– подготовка по результатам работы Центра отчета, аналитических<br />
и прогнозных материалов.</p>
<h2><strong>1 НОРМАТИВНО-ПРАВОВАЯ БАЗА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ<br />
БЕСПИЛОТНЫХ АВИАЦИОННЫХ СИСТЕМ</strong></h2>
<p>Рассмотрим существующие законодательные документы по использованию беспилотных авиационных систем в различных странах мира.</p>
<p>Стоит отметить особенности регулирования применения беспилотных летательных аппаратов на территории Европейского союза (ЕС). С июля<br />
2020 г. национальные правила дополнились общими правилами ЕС. Это значит, что после того, как оператор БПЛА получил разрешение от государства в регистрации, ему будет разрешено свободно перемещаться по Европейскому союзу и использовать БПЛА. Предполагается, что нормативно-правовая база ЕС будет охватывать все типы существующих БПЛА и все типы операций, производимых с беспилотными летательными аппаратами, способствуя разработке инновационных приложений и созданию европейского рынка услуг.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301887"></a><strong><em>Российская Федерация</em></strong></p>
<p>Основное конкурентное преимущество России связано с исторической традицией развития авиационной науки и техники (а также авиамоделизма)<br />
и наличием кадрового потенциала в этой отрасли. В короткий период с 2008 по 2013 г. в стране инициативно образовался ряд компаний, профессионально развивающих БАС-технологии. Аналогичное преимущество эффективно используют лидеры рынка – США и Израиль.</p>
<p>Постановлением Правительства Российской Федерации от 25 мая 2019 г. № 658 утверждены Правила учета беспилотных гражданских воздушных судов с максимальной взлетной массой от 0,25 до 30 кг, ввезенных или произведенных в Российской Федерации.</p>
<p>Информация для постановки на учет:</p>
<p>– фотография беспилотника;</p>
<p>– заявление о постановке на учет со сведениями (информация о беспилотном воздушном судне и его технических характеристиках; тип беспилотного воздушного судна, присвоенный производителем; серийный идентификационный номер, количество установленных двигателей и их вид, информация об изготовителе беспилотного воздушного судна).</p>
<p>Информация о владельце беспилотника:</p>
<p>– юридические лица: полное наименование, основной государственный регистрационный номер, ИНН, адрес;</p>
<p>– ИП: ФИО, ОГРНИП, ИНН, адрес места жительства;</p>
<p>– физические лица: ФИО, дата и место рождения, страховой номер индивидуального лицевого счета, номер, серия и дата выдачи документа, удостоверяющего личность, адрес места жительства.</p>
<p>Разрешение на съемку с квадрокоптера в особых зонах является обязательным. Без документа пилот не имеет права осуществлять съемку.</p>
<p>Для оформления документов, разрешающих полет квадрокоптера, определена процедура:</p>
<p>– оформление заявки в Росавиации; после ее рассмотрения, владелец БПЛА получит разрешение на съемку или заявление будет отклонено;</p>
<p>– перед использованием не позже чем за сутки государственным органам должен быть предоставлен маршрут будущего полета;</p>
<p>– за несколько часов до полета, владелец БПЛА обязан оповестить диспетчера о предстоящем полете;</p>
<p>– в процессе взлета и посадки все действия следует оговаривать с диспетчером.</p>
<p>Информация хранится в базе учета в течение всего срока нахождения беспилотного воздушного судна на учете и в течение 10 лет после снятия с учета.</p>
<p>Административный кодекс РФ предусматривает ответственность за нарушение правил использования воздушного пространства. Для обычных граждан это штраф от 20 до 50 тыс. руб., для должностных – от 100 до 150, для юридических лиц – от 250 до 300.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301888"></a><strong><em>США</em></strong></p>
<p>По данным Федерального авиационного управления США (FAA), полеты на БПЛА в США разрешены.</p>
<p>В 2012 г. был изменен основной документ, регулирующий авиасообщение в стране – Федеральный авиационный акт (Federal Aviation Act), внесены основные концепции функционирования БАС в рамках ее воздушного пространства и разработан план дальнейшей деятельности. Разработана «дорожная карта» развития рынка БАС до 2028 г.</p>
<p>Регистрировать беспилотный самолет в США имеет право:</p>
<p>– гражданин США;</p>
<p>– гражданин иностранного государства с правом проживания на территории США;</p>
<p>– юридическое лицо, организованное в соответствии с законодательством США или любого государства, если оно основано и функционирует на территории США.</p>
<p>Регистрации подлежат беспилотные летательные аппараты массой<br />
от 0,25 до 25 кг.</p>
<p>Требования к оператору БПЛА:</p>
<p>– умение читать, говорить, писать и понимать по-английски (возможны исключения, если человек не может выполнить одно из этих требований по медицинским причинам, например, с нарушением слуха);</p>
<p>– быть здоровым физически и психически;</p>
<p>– возрастной ценз – не менее 16 лет;</p>
<p>– сдать аэронавигационный тест в утвержденном FAA центре тестирования знаний;</p>
<p>– пройти проверку безопасности Администрации транспортной безопасности (TSA).</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301889"></a><strong><em>Израиль</em></strong></p>
<p>По данным Агентства гражданской авиации Израиля (CAAI) полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Управление гражданской авиацией Израиля курирует вопросы содействия законодательству, регулированию и процедурам во всех вопросах, касающихся проектирования, производства, эксплуатации и обслуживания БПЛА. Осуществляет лицензирование, контроль и обеспечение соблюдения законодательства в этой сфере.</p>
<p>Требуется получить два разрешения от CAAI и Министерства связи. Так же для получения права управления БПЛА необходимо вступить в Израильский аэроклуб, получить лицензию и страховку. Это позволяет управлять беспилотником на расстоянии до 50 м. Для полетов дальностью до 250 м необходима лицензия оператора, выдаваемая Министерством транспорта после прохождения соответствующего курса обучения. Полеты далее 250 м запрещены без предварительного одобрения.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301890"></a><strong><em>Канада</em></strong></p>
<p>Согласно Управлению транспортной гражданской авиации Канады (TCCA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Все БПЛА массой от 250 г до 25 кг должны быть зарегистрированы в TCCA. Пилоты обязаны маркировать дрон регистрационным номером.</p>
<p>Требования по пилотированию:</p>
<p>– БПЛА должен находиться в зоне прямой видимости во время полета;</p>
<p>– высота полета не более 122 м;</p>
<p>– минимальное расстояние во время полета до объектов инфраструктуры 30 м;</p>
<p>– запрещено летать на расстоянии менее 5,6 км от аэропортов и 1,9 км<br />
от вертодромов.</p>
<p>В случаях применения БПЛА в коммерческих целях (сельское хозяйство, проведение исследований, аэрофото- и видеосъемка) требуется получение специального сертификата полетов.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301891"></a><strong><em>Германия</em></strong></p>
<p>По данным Федерального авиационного управления Германии (FAO), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты на высоте более 100 м без разрешения. В контролируемом воздушном пространстве максимально допустимая высота составляет 50 м.</p>
<p>БПЛА должен находиться в зоне прямой видимости во время полета.</p>
<p>Использование дронов массой более 5 кг в ночное время без разрешения запрещено.</p>
<p>Пилотирование беспилотников массой до 5 кг допустимо без разрешения, но для полета БПЛА массой более 2 кг требуется лицензия оператора.<br />
В соответствии с новыми положениями правил воздушного движения, операторам БПЛА массой более 2 кг необходимо получить сертификат с подтверждением достаточности знаний и навыков. Сертификат действителен в течение пяти лет. Возрастной ценз пилота – 16 лет.</p>
<p>Страхование дронов требуется для всех операций.</p>
<p>БПЛА не могут летать в пределах 1,5 км от аэропорта.</p>
<p>Все беспилотники массой 250 г или более должны быть помечены огнестойким значком, содержащим имя и адрес владельца.</p>
<p>Беспилотные самолеты нельзя применять над скоплением людей, промышленными и жилыми районами, тюрьмами, районами бедствий, определенными маршрутами движения и некоторыми другими районами, обозначенными как специальные. Запрещены полеты на расстоянии менее<br />
100 м от федеральных автомагистралей и водных путей, железнодорожных сооружений.</p>
<p>Запрещены полеты над природоохранными территориями, охраняемыми Федеральным законом об охране природы.</p>
<p>БПЛА, способные записывать (передавать) оптические, акустические или радиосигналы, запрещены к использованию в частных жилых районах без согласия владельцев.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301892"></a><strong><em>Франция</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Франции, полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Все беспилотники массой от 800 г должны быть зарегистрированы на портале AlphaTango. Так же необходимо получить регистрационный номер, который должен быть постоянно виден на БПЛА и читаться на расстоянии<br />
30 см невооруженным глазом. Пилот обязан предоставить подтверждение регистрации в случае проверки.</p>
<p>БПЛА должен находиться в зоне прямой видимости во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты ночью (кроме случаев, когда есть специальное разрешение местного префекта).</p>
<p>Запрещены полеты над людьми, аэропортами или аэродромами, частной собственностью (только с разрешения владельца), военными объектами, тюрьмами, атомными электростанциями, историческими памятниками или национальными парками.</p>
<p>Запрещены полеты над продолжающимися пожарами, аварийными зонами или вокруг аварийных служб.</p>
<p>Запрещены полеты выше 150 м или выше 50 м над любым объектом или зданием, высота которого составляет 100 м или более.</p>
<p>Постановление Министерства экологии, устойчивого развития, транспорта и жилищного строительства Франции регламентирует правила полета БПЛА, ограничивая высоту полета до 150 м для моделей массой менее 2 кг. Полеты в населенной местности подлежат предварительному согласованию<br />
с территориальными органами власти.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301893"></a><strong><em>Великобритания</em></strong></p>
<p>В соответствии с Управлением гражданской авиации Великобритании (CAA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Коммерческие беспилотники в Великобритании требуют разрешения от CAA.</p>
<p>Страхование требуется для всех коммерческих операций беспилотных летательных аппаратов.</p>
<p>Пилот несет ответственность за безопасное управление своим беспилотником.</p>
<p>БПЛА должен находиться в зоне прямой видимости во время полета.</p>
<p>Все беспилотники, независимо от их массы, не должны летать выше<br />
120 м над поверхностью земли.</p>
<p>Если дрон оснащен камерой, существует также ряд дополнительных ограничений, касающихся того, где можно совершать полет, и насколько можно приближаться к другим людям или объектам инфраструктуры. Чтобы иметь возможность летать в пределах этих зон или ближе, чем минимальные расстояния, указанные в правилах, следует получить предварительное разрешение от CAA.</p>
<p>Чтобы получить стандартное разрешение на коммерческий полет (PfCO), необходимо заполнить онлайн-заявку CAA и представить документы.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301894"></a><strong><em>Нидерланды</em></strong></p>
<p>Согласно сведениям Генерального директората гражданской авиации Нидерландов (DGCA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты на высоте более 120 м над землей или водой.</p>
<p>БПЛА должны летать на безопасном расстоянии от людей и зданий.</p>
<p>Пилоты должны поддерживать визуальную линию видимости с БПЛА во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты ночью.</p>
<p>В Нидерландах различают частное, рекреационное и профессиональное применение беспилотников.</p>
<p>Для использования в коммерческих целях необходимо получение сертификата оператора БПЛА независимо от массы. При частном применении можно управлять аппаратом массой до 4 кг без сертификата оператора.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301895"></a><strong><em>Швеция</em></strong></p>
<p>Проектирование, изготовление, модификация, техническое обслуживание и эксплуатация гражданских БПЛА в Швеции регулируется положением о беспилотных летательных аппаратах (UAS) – TSFS 2009:88. Управление БПЛА допускается на высоту не более 120 м и при дальности полета от оператора не более 500 м.</p>
<p>Для полетов в зоне контроля аэропорта требуется разрешение от Управления воздушным движением. Разрешение также требуется, если полет совершается за зону визуальной видимости и цель полета испытания, исследования или коммерческие полеты. Для аэрофотосъемки требуется разрешение от Министерства землеустройства.</p>
<p>Проектирование, изготовление, обслуживание и эксплуатация гражданских БПЛА, имеющих рабочую массу более 150 кг, контролируется Европейским парламентом. Необходимо также одобрение со стороны Европейского агентства по авиационной безопасности (EASA).</p>
<p>В Швеции приняты следующие виды разрешения для управления беспилотниками:</p>
<p>– категория 1A UAS – максимальная взлетная масса самолета меньше или равна 1,5 кг, лицензия выдается на 2 года;</p>
<p>– категория 1B UAS – максимальная взлетная масса самолета больше<br />
1,5 кг, но меньше или равна 7 кг, лицензия выдается на 2 года;</p>
<p>– категория 2 UAS – максимальная взлетная масса самолета составляет более 7 кг, лицензия выдается на 1 год;</p>
<p>– категория 3 UAS – для аппаратов с посадкой вне поля зрения пилота.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301896"></a><strong><em>Швейцария</em></strong></p>
<p>Согласно данных Федерального управления гражданской авиации Швейцарии (FOCA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Автоматический полет (автономное управление беспилотником) в поле зрения пилота разрешается при условии, что пилот может в любое время вмешаться в управление беспилотником.</p>
<p>В пределах охотничьих или охраняемых территорий для водных<br />
и перелетных птиц применение беспилотников запрещено без исключения.</p>
<p>Аэрофотосъемка разрешена при условии соблюдения правил защиты военных объектов. Внимание должно быть уделено защите конфиденциальности и положениям Закона о защите данных.</p>
<p>Беспилотники не должны эксплуатироваться над людьми на расстоянии менее чем 100 м.</p>
<p>Запрещены полеты в пределах 5 км от аэропорта.</p>
<p>Для общественных воздушных событий, в которых используются только модельные самолеты или беспилотники, FOCA не требует одобрения.</p>
<p>БПЛА массой до 30 кг могут быть использованы без лицензии при условии, что оператор всегда имеет визуальный контакт с летательным аппаратом.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301897"></a><strong><em>Австрия</em></strong></p>
<p>Согласно австрийскому национальному авиационному органу – Austro Control, полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Возраст пилота от 16 лет.</p>
<p>Страхование ответственности является обязательным условием для всех операторов беспилотных летательных аппаратов.</p>
<p>Запрещено пролетать над группой людей без специального разрешения.</p>
<p>Нельзя летать в непосредственной близости от аэропортов без специального разрешения.</p>
<p>Только Austro Control может предоставить пилоту авиационное разрешение.</p>
<p>Даже после предоставления лицензии на эксплуатацию для определенных районов могут потребоваться специальные разрешения, связанные<br />
с авиацией, в соответствии с Правилами воздушного движения от 2014 г.</p>
<p>В стране с 2014 г. внедрены очень строгие правила эксплуатации БПЛА. Потенциальные местоположения для полетов делятся на четыре категории:</p>
<p>– неразвитая область;</p>
<p>– нежилые районы;</p>
<p>– населенный пункт;</p>
<p>– плотно заселенная территория.</p>
<p>Для каждой категории существуют особые условия и разрешения. Квадрокоптеры одобрены только для первых двух категорий. Для населенных (густонаселенных) районов требуются гекса- или октокоптеры.</p>
<p>Получение лицензии необходимо, если:</p>
<p>– рейсы коммерческие, без сохранения снимков с камеры;</p>
<p>– максимальная масса 25 кг;</p>
<p>– полет вне зон безопасности;</p>
<p>– максимальный радиус полета 500 м.</p>
<p>Беспилотниками массой до 0,25 кг и максимальной высотой полета 30 м можно управлять без лицензии, даже если они оснащены камерой.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301898"></a><strong><em>Венгрия</em></strong></p>
<p>Согласно положениям Главного управления воздушного транспорта Венгрии, полеты на БПЛА разрешены. Разрешение и страхование требуются для всех полетов на любом типе БПЛА.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301899"></a><strong><em>Бельгия</em></strong></p>
<p>В соответствии с данными Федеральной службы по мобильности<br />
и транспорту (FPS) и Управления гражданской авиации Бельгии (BCAA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Полеты могут выполняться только в дневное время.</p>
<p>Масса БПЛА должна быть не более 150 кг.</p>
<p>Пилот должен постоянно поддерживать визуальную линию обзора<br />
с БПЛА.</p>
<p>Для коммерческих полетов необходимо получение медицинской страховки, пройти теоретический тест и зарегистрировать БПЛА.</p>
<p>Исключением из нормативных требований Королевского указа от 10 апреля 2016 г. являются:</p>
<p>– беспилотники, используемые только для полетов внутри зданий;</p>
<p>– БПЛА, применяемые военными, таможенными органами, полицией, береговой охраной и т. д.;</p>
<p>– некоторые типы модельных самолетов, которые используются исключительно для личных целей, при условии, что они соответствуют строгим требованиям, изложенным в Королевском указе.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301900"></a><strong><em>Ирландия</em></strong></p>
<p>Регистрация для некоторых типов БПЛА обязательна с 21 декабря<br />
2015 г.</p>
<p>Регистрации подлежат беспилотники:</p>
<p>– более 1 кг;</p>
<p>– летающие выше 15 м над землей или водой независимо от массы;</p>
<p>– с установленным оборудованием.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301901"></a><strong><em>Норвегия</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Норвегии (CAAN), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Пилоты должны поддерживать визуальную линию видимости с БПЛА на протяжении всего полета.</p>
<p>Запрещены полеты в пределах 5 км от аэропорта или аэродрома без специального разрешения; выше 120 м над землей; над местами массовых скоплений людей, военными объектами или спортивными мероприятиями; в пределах 150 м от людей, зданий и транспортных средств.</p>
<p>С 2016 г. в стране действуют новые правила – пилоты БПЛА квалифицируются как моделисты и не нуждаются в специальном разрешении.</p>
<p>В коммерческих целях беспилотники делятся на три категории:</p>
<p>– взлетная масса менее 2,5 кг. Перед каждым полетом необходимо сообщить о нем, имя пилота должно быть прикреплено с номером телефона на аппарате, также необходимо вести журнал регистрации;</p>
<p>– масса до 25 кг – требует специального лицензирования пилотов;</p>
<p>– все модели, не относящиеся к описанным выше.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301902"></a><strong><em>Хорватия</em></strong></p>
<p>По данным Агентства гражданской авиации Хорватии, полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты выше 120 м над поверхностью земли или 50 м над препятствием, в зависимости от того, что больше.</p>
<p>При полете в контролируемом воздушном пространстве запрещены полеты менее 5 км от аэродрома.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны поддерживать прямой визуальный контроль БПЛА во время полета.</p>
<p>БПЛА должны находиться на расстоянии не менее 30 м от людей, если только не включен режим низкой скорости и максимальная скорость не превышает 3 м/с. В этом случае дрон должен находиться на расстоянии не менее 5 м от людей.</p>
<p>Минимально допустимое расстояние от БПЛА в полете до группы людей составляет 50 м.</p>
<p>Все беспилотники массой более 5 кг должны быть помечены невоспламеняющейся идентификационной табличкой или идентификационной этикеткой. Негорючая табличка должна содержать идентификационную метку беспилотного летательного аппарата и контактную информацию владельца (имя, фамилию, адрес, телефон / адрес электронной почты).</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301903"></a><strong><em>Кипр</em></strong></p>
<p>Согласно положения Департамента гражданской авиации Кипра (DCA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Максимальная высота полета для беспилотников составляет 50 м над уровнем земли или моря для открытой категории, до 120 м над уровнем земли или моря для специальной категории. Департамент гражданской авиации может предоставить исключения операторам беспилотных самолетов особой категории.</p>
<p>Прямой визуальный контакт с БПЛА является обязательным и расстояние между оператором и БПЛА не должно превышать 500 м.</p>
<p>Безопасное расстояние 1 км от жилых районов.</p>
<p>Безопасное расстояние 500 м от зданий, людей, транспортных средств, животных, сооружений и т. д., кроме случая, когда получено согласие владельца.</p>
<p>Безопасное расстояние не менее 8 км от аэропортов и не менее<br />
3 км от вертодромов.</p>
<p>Ночью летать на БПЛА запрещено.</p>
<p>Запрещается летать над, внутри или вблизи объектов военных, общественного пользования, археологических и общественных или частных.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301904"></a><strong><em>Греция</em></strong></p>
<p>В соответствии с положением Управления гражданской авиации Греции (HCAA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>При полете на высоте 50 м и более, необходимо иметь разрешение.</p>
<p>Запрещены полеты ночью.</p>
<p>Операторы беспилотных летательных аппаратов, которые летают в коммерческих целях или в категории «Особые», «Сертифицированные», должны иметь страховку аппаратов.</p>
<p>Операторам беспилотников, которые летают только для хобби или отдыха, не нужна страховка, если только их масса более 4 кг и попадают в категорию «Open-A2».</p>
<p>Запрещены полеты над людьми, тюрьмами, больницами, правительственными и военными объектами и другими уязвимыми районами.</p>
<p>Запрещены полеты над частной собственностью без разрешения владельца.</p>
<p>С января 2017 г. вступил в силу новый закон, согласно которому модели делятся на две категории:</p>
<p>– с общей взлетной массой до 7 кг, для них не требуется специальных разрешений;</p>
<p>– с массой более 7 и менее 25 кг, для них необходимо получить разрешение. Такие БПЛА не должны быть оснащены металлическими пропеллерами. Необходимо также страхование от несанкционированного использования, получения телесных повреждений и материального ущерба. Пилоты должны поддерживать расстояние не менее 50 м от скопления людей, животных и транспортных средств.</p>
<p>Полет через археологические объекты разрешается только со специальным разрешением.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301905"></a><strong><em>Болгария</em></strong></p>
<p>Согласно данных Управления воздушного движения Болгарии (BULATSA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Пилоты должны запросить разрешение на полет, отправив письмо<br />
в Главное управление администрации гражданской авиации (DG CAA) за восемь дней до полета. В письме должны быть указаны зоны полета, дата проведения полетов, время начала и окончания, ответственное лицо и номер мобильного телефона для связи с ним.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301906"></a><strong><em>Италия</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Италии (ENAC), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>БПЛА должны быть оснащены табличкой, показывающей идентификацию системы и оператора. Аналогичная табличка должна быть установлена также на удаленной наземной пилотной станции. Начиная с 1 июля 2016 г.,<br />
в дополнение к табличкам, все беспилотники, которые позволяют передавать данные в режиме реального времени, должны быть оснащены устройством электронной идентификации.</p>
<p>Пилоты должны поддерживать прямую видимость с БПЛА во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты ночью, над людьми, включая спортивные мероприятия, концерты и другие крупные мероприятия.</p>
<p>Беспилотные самолеты, которые осуществляют полет в рекреационных целях, не могут подниматься выше 70 м над землей, а беспилотные самолеты, которые летают в коммерческих целях – выше 150 м.</p>
<p>Запрещены полеты в пределах 5 км от аэропорта.</p>
<p>Пилоты коммерческих беспилотников, выполняющие операции с низким уровнем риска, должны представить заявление о соответствии определенным требованиям ENAC. Для выполнения операций с повышенным риском коммерческие пилоты должны получить сертификат об обучении<br />
и эксплуатации, а также справку о состоянии здоровья.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301907"></a><strong><em>Чешская Республика</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Чешской Республики, полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Для коммерческих беспилотных полетов лицензия пилота необходима.</p>
<p>Эксплуатация беспилотников, как правило, разрешена в воздушном пространстве класса G в Чешской Республике. Это воздушное пространство<br />
до 300 м над землей.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны поддерживать прямой визуальный обзор БПЛА во время полета.</p>
<p>Полеты должны выполняться на безопасном расстоянии от людей, сооружений и густонаселенных районов.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301908"></a><strong><em>Эстония</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Эстонии (ECAA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Разрешение не требуется для полетов ниже 150 м.</p>
<p>Для полетов ниже 150 м пилоты должны запросить разрешение не менее чем за три рабочих дня, выше 150 м – пилоты должны одновременно иметь разрешение и запрашивать разрешение не менее чем за семь рабочих дней.</p>
<p>Для личного использования можно снимать в любом месте с помощью БПЛА, но запрещено намеренно снимать кого-либо без его разрешения.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301909"></a><strong><em>Польша</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации (CAA), полеты на БПЛА<br />
в Польше разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты выше 150 м.</p>
<p>Пилоты должны поддерживать визуальную линию видимости с БПЛА во время полета.</p>
<p>Страхование ответственности требуется для коммерческих беспилотных полетов.</p>
<p>Запрещены полеты дронов массой более 25 кг.</p>
<p>Операции с беспилотниками должны проводиться на расстоянии не менее 5 км от аэропортов.</p>
<p>Запрещены полеты на расстоянии не менее 100 м от населенных пунктов и 30 м от людей, транспортных средств и животных.</p>
<p>Запрещены полеты над скоплением людей, городами, улицами<br />
и зданиями.</p>
<p>Для полетов в Варшаве требуется дополнительное разрешение от Бюро государственной защиты (BOR).</p>
<p>Пилоты должны получить медицинскую справку; справку, подтверждающую прохождение теоретического и практического теста.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301910"></a><strong><em>Португалия</em></strong></p>
<p>Согласно Национальному управлению гражданской авиации (ANAC), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Страхование беспилотников не является обязательным, но ANAC рекомендует заключить договор страхования гражданской ответственности для покрытия любого ущерба, который может возникнуть в результате использования самолета с дистанционным управлением.</p>
<p>БПЛА не могут использоваться для фото или видео без разрешения Национального авиационного управления.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны постоянно поддерживать визуальную линию видимости БПЛА во время полета.</p>
<p>Мини беспилотники (массой менее 0,25 кг) не должны летать над людьми и не превышать высоту 30 м.</p>
<p>Для полета беспилотника массой более 25 кг ночью или за пределами прямой видимости (BVLOS) необходимо получить специальное разрешение от ANAC.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301911"></a><strong><em>Испания</em></strong></p>
<p>Согласно Государственному агентству воздушной безопасности (AESA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Региональные власти имеют возможность издавать свои собственные правила о беспилотных летательных аппаратах.</p>
<p>Для коммерческих полетов дронов требуется разрешение.</p>
<p>Страхование ответственности требуется для коммерческих полетов.</p>
<p>БПЛА могут летать на высоте до 120 м над землей.</p>
<p>Запрещены полеты ночью. Для беспилотных летательных аппаратов с взлетной массой менее 2 кг полеты также могут выполняться ночью, если не превышена высота полета 50 м над землей.</p>
<p>БПЛА должны летать в пределах прямой видимости.</p>
<p>Пилоты должны выдерживать расстояние не менее 8 км от аэропортов<br />
в неконтролируемом воздушном пространстве или 15 км на утвержденных рейсах BVLOS.</p>
<p>Пилоты должны находиться на расстоянии 150 м от зданий и на расстоянии 50 м или более от людей, не участвующих в полете.</p>
<p>Для полетов в национальных парках необходимо разрешение AESA. Использование беспилотных летательных аппаратов в бесполетных зонах должно быть одобрено Министерством обороны Испании.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301912"></a><strong><em>Дания</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Дании (CAA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Владелец БПЛА должен быть зарегистрирован в Управлении транспорта, строительства и жилищного строительства Дании.</p>
<p>Беспилотник должен быть помечен именем владельца, номером телефона и регистрационным номером, присвоенным Департаментом транспорта, строительства и жилищного строительства.</p>
<p>БПЛА массой 250 г или менее с максимальной скоростью полета 50 км/ч регистрировать не требуется.</p>
<p>Пилот должен иметь аккредитацию для работы с беспилотником массой более 7 кг.</p>
<p>Пилоту должно быть не менее 16 лет.</p>
<p>Запрещены БПЛА массой более 25 кг.</p>
<p>Беспилотники не должны летать выше 100 м.</p>
<p>БПЛА не должны эксплуатироваться на расстоянии менее 50 м по горизонтали от других лиц, если только эти лица не участвуют или не являются зрителями полета.</p>
<p>БПЛА должны уступать место пилотируемым самолетам.</p>
<p>При полете на БПЛА расстояние до взлетно-посадочной полосы / аэродромов общественного аэродрома должно быть не менее 5 км.</p>
<p>При полете беспилотника расстояние до взлетно-посадочной полосы / военной авиабазы должно быть не менее 8 км.</p>
<p>При полете беспилотника расстояние до населенных пунктов и основных дорог общего пользования должно быть не менее 150 м.</p>
<p>При полете на БПЛА расстояние до пилотируемых кораблей, лодок<br />
и морских установок должно быть не менее 50 м.</p>
<p>Беспилотные самолеты нельзя использовать над плотно застроенными территориями, включая районы с коттеджами на выходные и жилые места для кемпинга, а также районы с большими скоплениями людей под открытым небом.</p>
<p>Запрещены полеты близко к другим БПЛА.</p>
<p>Для полетов за пределами зоны видимости, над людьми, внутри помещений, на открытых или объявленных публично мероприятиях, на высоте более 100 м, с более чем одним БПЛА, требуется автономное разрешение от Управления транспорта, строительства и жилищного строительства.</p>
<p>Для полетов в ночное время беспилотник должен быть снабжен светом, позволяющим оператору видеть его во время полета, в том числе его ориентацию в воздухе. Стартовые и посадочные площадки также должны быть освещены. Специальная лицензия необходима для полетов беспилотников<br />
в ночное время в населенных пунктах.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301913"></a><strong><em>Финляндия</em></strong></p>
<p>По данным Агентства по безопасности на транспорте (TRAFI), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты на высоте более 150 м над землей.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны поддерживать прямой визуальный обзор БПЛА во время полета.</p>
<p>БПЛА не могут летать в пределах 1 км от любой взлетно-посадочной полосы аэропорта без разрешения диспетчерской вышки.</p>
<p>Пролет на расстоянии от 1 до 3 км от взлетно-посадочной полосы аэропорта разрешается до высоты окружающих препятствий. В непосредственной близости от препятствия можно пролететь 15 м над высотой препятствия<br />
с разрешения владельца препятствия.</p>
<p>Пролетая в контрольной зоне аэропорта, но еще дальше, чем в 3 км от взлетно-посадочных полос аэропорта, максимально допустимая высота полета составляет 50 м.</p>
<p>БПЛА не могут летать над людьми. Коммерческие пилоты могут совершать полеты только при наличии специального разрешения TRAFI.</p>
<p>Ограничение массы БПЛА – 25 кг.</p>
<p>Пилоты, летающие в коммерческих целях, обязаны иметь страховку.</p>
<p>Для коммерческих полетов пилоту должно быть не менее 18 лет. Для прогулочных полетов возрастных ограничений нет.</p>
<p>Пилоты, используемые в коммерческих целях дрон, должны иметь наклейку на борту с указанием имени владельца и контактной информации,<br />
а также документировать свои действия в бортовом журнале.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301914"></a><strong><em>Китай</em></strong></p>
<p>По данным Администрации гражданской авиации Китая (CAAC), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Любые беспилотники массой 250 г и более должны быть зарегистрированы в CAAC.</p>
<p>Лицензирование требуется для коммерческих операций.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны поддерживать прямой визуальный контакт с БПЛА во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты на высоте более 120 м над землей, в густонаселенных районах, в пределах любого аэропорта или аэродрома.</p>
<p>Любой беспилотник массой более 250 г должен быть зарегистрирован<br />
в CAAC, от 7 до 116 кг – требуется лицензия CAAC.</p>
<p>Все беспилотные летательные аппараты, предназначенные для коммерческого использования, требуют лицензии CAAC.</p>
<p>Для управления беспилотником массой более 116 кг требуется лицензия пилота и сертификация БПЛА для работы.</p>
<p>Деятельность гражданской авиации в основном регулируется «Законом о гражданской авиации КНР», «Общими правилами полетов КНР» и «Положением об общем авиационном управлении полетом».</p>
<p>Регулирующее агентство по гражданским полетам – Управление гражданской авиации Китая выпустило консультативные положения, в которых устанавливаются руководящие принципы для полета беспилотников. Ожидается, что эти промежуточные меры будут обновлены по мере развития промышленности и нормативной базы БПЛА.</p>
<p>Положением о контроле над полетом средств общей авиации является административное регулирование, которое применяется ко всем коммерческим и рекреационным операциям воздушных судов, за исключением тех, которые участвуют в общественном воздушном транспорте. Общая авиация<br />
в соответствии с законодательством Китая относится к авиационным операциям, отличным от военных полетов, полицейских воздушных действий, таможенных антиконтрабандных полетов и общественных воздушных перевозок. Положение включает в себя требования к полетам с целью проведения исследований в области промышленности, сельского хозяйства, лесного хозяйства, рыболовства, добычи полезных ископаемых и строительства, полетам с медицинскими целями, аварийного спасения и ликвидации последствий стихийных бедствий, метеорологического наблюдения, мониторинга океана, научных экспериментов, дистанционного зондирования и картирования,<br />
а также получения информации для образования и обучения, культуры и спорта, туризма и экскурсий и т. д.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301915"></a><strong><em>Южная Корея</em></strong></p>
<p>Israel Aerospace Industries (IAI) и южнокорейский производитель композиционных материалов Hankuk Carbon (HC) подписали меморандум о создании совместного предприятия по разработке и производству новых вертикальных взлетно-посадочных полос для беспилотников. Компании заявили, что они начнут сотрудничество по разработке БПЛА с массой 200–300 кг, производство которых будет сосредоточено в Южной Корее (90 %).</p>
<p>Согласно местному законодательству, полеты дронов запрещены во многих местах страны, особенно в северных районах Сеула, где находятся ключевые государственные учреждения. Районы вокруг военных объектов<br />
и атомных электростанций также закрыты для полетов.</p>
<p>В связи с развитием БПЛА правительство решило пересмотреть регулирование отрасли, заявив, что будет принято решение по расширению зоны полетов, упрощению требований к пилотам.</p>
<p>До 2017 г. полеты беспилотных летательных аппаратов регулировались в соответствии с Законом об авиации. По состоянию на 30 марта 2017 г. Закон об авиации отменен и заменен двумя законами – «Об авиационной безопасности» и «Об авиационном бизнесе».</p>
<p>Для использования БПЛА в коммерческих целях необходимо разрешение Министерства земельной инфраструктуры и транспорта. Разрешение для полета не требуется для беспилотников массой до 12 кг или менее, если они используются не в коммерческих целях.</p>
<p>При использовании БПЛА массой 25 кг и более необходимо получение сертификата безопасности от Управления безопасности транспорта Кореи.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301916"></a><strong><em>Индия</em></strong></p>
<p>По данным Министерства гражданской авиации, полеты на БПЛА в Индии разрешены.</p>
<p>Все БПЛА, за исключением тех, что в категории Nano, должны быть зарегистрированы и иметь уникальный идентификационный номер.</p>
<p>Пилоты должны всегда поддерживать прямую визуальную линию видимости во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты более 150 м над землей.</p>
<p>Беспилотные самолеты не могут летать в районах, обозначенных как «запретные для полетов зоны», которые включают районы вблизи аэропортов, международные границы, комплекс государственного секретариата<br />
в столицах штатов, стратегические местоположения и военные объекты.</p>
<p>Разрешение на полет в контролируемом воздушном пространстве можно получить, заполнив план полета и получив уникальный номер Центра информации о полете (FIC).</p>
<p>Генеральное управление гражданской авиации DGCA планирует регистрировать гражданские БПЛА и выдавать разрешения на их работу.</p>
<p>Генеральное управление гражданской авиации находится в процессе разработки и согласования правил с аэронавигационной службой, службой безопасности, Министерством внутренних дел для сертификации и эксплуатации БПЛА в гражданском воздушном пространстве Индии. До момента выхода регламентирующих документов запрещается использование беспилотников в гражданском воздушном пространстве для любых целей.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301917"></a><strong><em>Япония</em></strong></p>
<p>По данным Японского бюро гражданской авиации (JCAB), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Перед полетом необходимо запросить разрешение, подав заявку на получение разрешения в Министерство наземной инфраструктуры.</p>
<p>БПЛА не могут летать без специального разрешения Министерства земли, инфраструктуры, транспорта и туризма:</p>
<p>– более 150 м над уровнем земли;</p>
<p>– возле аэропортов;</p>
<p>– над густонаселенными районами, определенными Министерством внутренних дел и связи.</p>
<p>БПЛА могут летать только днем.</p>
<p>Пилоты должны поддерживать визуальную линию видимости с БПЛА во время операций.</p>
<p>БПЛА не должны летать в пределах 30 м от людей или частной собственности.</p>
<p>Аппараты нельзя использовать для перевозки опасных грузов.</p>
<p>БПЛА не могут сбрасывать предметы во время полета, умышленно или случайно.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301918"></a><strong><em>Австралия</em></strong></p>
<p>Согласно Управлению безопасности гражданской авиации Австралии (CASA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Разрешены полеты только днем с соблюдением визуальной видимости.</p>
<p>Высота полета не выше 120 м над землей.</p>
<p>Расстояние минимум 30 м от других людей.</p>
<p>Полеты запрещены над или вблизи зоны, затрагивающей общественную безопасность или где проводятся аварийные операции (без предварительного разрешения). Это может включать такие ситуации, как автомобильная авария, полицейские операции, пожар и связанные с этим противопожарные мероприятия, а также поиск и спасение людей.</p>
<p>Запрещены полеты в местах массового скопления людей: пляжи, парки, стадионы.</p>
<p>При массе БПЛА более 100 г, запрещено летать на расстоянии менее<br />
5,5 км от контролируемых аэродромов.</p>
<p>Фото и видео людей без их согласия запрещено.</p>
<p>Управление гражданской авиацией CASA утвердило сертификаты оператора БПЛА в категориях с несколькими роторами, с фиксированным крылом и вертолетом для четырех масс – до 2, 7, 20 и 150 кг.</p>
<p>Для управления БПЛА массой менее 2 кг не требуется сертификат оператора или лицензия удаленного пилота. Для остальных категорий необходимо разрешение в виде лицензии удаленного пилота, которым, в свою очередь, необходимо иметь сертификат оператора RPA.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301919"></a><strong><em>Аргентина</em></strong></p>
<p>Согласно Национальному управлению гражданской авиации Аргентины (ANAC), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Все беспилотники должны быть зарегистрированы в Национальном реестре воздушных судов (ANAC).</p>
<p>Минимальный возраст пилота для эксплуатации БПЛА – 18 лет. Лица<br />
16 и 17 лет могут пилотировать беспилотный летательный аппарат, если он сопровождается взрослым во время операции.</p>
<p>БПЛА запрещено использовать в пределах 5 км от аэропортов, аэродромов и вертодромов.</p>
<p>БПЛА запрещены в густонаселенных районах или над местами массового скопления людей.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301920"></a><strong><em>Азербайджан</em></strong></p>
<p>По данным Государственного управления гражданской авиации Азербайджана (CAA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Запрещено работать в любой зоне движения аэродрома / аэропорта, кроме как с разрешения соответствующего органа УВД или лица, ответственного за аэродром / аэропорт.</p>
<p>БПЛА не могут летать на высоте более 120 м над уровнем земли.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны поддерживать прямую визуальную линию обзора с беспилотником во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты в пределах 150 м от любой перегруженной территории города, поселка или поселения.</p>
<p>Запрещены полеты в пределах 50 м от любого человека, судна, транспортного средства или сооружения.</p>
<p>Во время взлета или посадки БПЛА не должен летать в пределах 30 м от любого человека, если только этот человек не участвует в операции управления БПЛА.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301921"></a><strong><em>Бразилия</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Бразилии (ANAC), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Возраст пилота – не моложе 18 лет.</p>
<p>Пилоты не могут управлять более чем одним БПЛА одновременно.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны всегда поддерживать визуальную линию видимости своего беспилотника.</p>
<p>Пилоты, управляющие беспилотниками массой более 250 г, должны иметь страховку, покрывающую ущерб третьим лицам.</p>
<p>Любой дрон массой более 250 г должен быть зарегистрирован в системе беспилотных летательных аппаратов ANAC (SISANT), а регистрационный идентификатор должен быть нанесен на БПЛА.</p>
<p>Беспилотники массой более 250 г могут летать только на участках длиной 30 м или более от людей, не участвующих в полете, под полную ответственность пилота-оператора и в соответствии с правилами использования.</p>
<p>Полеты над тюрьмами, военными объектами или другой важной инфраструктурой запрещены.</p>
<p>Полеты не разрешаются на расстоянии менее 30 м от зданий.</p>
<p>Полеты над людьми запрещены.</p>
<p>Автономная работа дронов запрещена. Автономные операции отличаются от автоматических беспилотных операций тем, что пилот может вмешаться в управление в любой момент.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301922"></a><strong><em>Камерун</em></strong></p>
<p>Согласно данным Управления гражданской авиации Камеруна (CCAA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты на высоте более 120 м над землей.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны поддерживать прямой визуальный обзор БПЛА во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты в пределах 5,5 км от любого аэропорта или аэродрома; на расстоянии менее 15 м от любых сооружений, включая здания, транспортные средства, корабли, животных и людей; полеты ночью.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301923"></a><strong><em>Египет</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Египта, полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>В соответствии с Законом № 28 от 1981 г., в который были внесены поправки, включающие в себя закон о беспилотниках и в соответствии с законом № 92 от 2003 г., прежде чем эксплуатировать беспилотник в Египте, необходимо получить разрешение Управления гражданской авиации.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301924"></a><strong><em>Индонезия</em></strong></p>
<p>Согласно данным Генерального директората гражданской авиации, полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты выше 150 м без разрешения, БПЛА массой более<br />
7 кг, в пределах 15 км от любого аэропорта, полеты ночью.</p>
<p>БПЛА не могут летать с любого движущегося транспортного средства.</p>
<p>Пилоты должны поддерживать прямую линию визуального обзора во время полета.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301925"></a><strong><em>Иран</em></strong></p>
<p>По данным национального авиационного управления – Организации гражданской авиации Ирана (CAOI), беспилотники в Иране запрещены.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301926"></a><strong><em>Мексика</em></strong></p>
<p>Согласно Национальному авиационному органу – Генеральному директорату гражданской авиации Мексики (DGCA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>Все беспилотники массой более 250 г должны быть зарегистрированы в DGCA. Для регистрации требуется официальное удостоверение личности, подтверждающее гражданство Мексики, поэтому запрещается регистрация иностранных лиц.</p>
<p>Запрещены полеты в ночное время, на расстоянии более 500 м от оператора, выше 100 м над уровнем земли, над людьми или животными, на исторических местах, на расстоянии менее 9,2 км от любого аэродрома, сброс любого рода предметов с БПЛА.</p>
<p>На данный момент для получения лицензии на дрон в Мексике пилот должен быть:</p>
<p>– не моложе 18 лет;</p>
<p>– мексиканцем по рождению;</p>
<p>– предоставить свою военную карту;</p>
<p>– иметь диплом средней школы;</p>
<p>– иметь справку о состоянии здоровья.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301927"></a><strong><em>Турция</em></strong></p>
<p>По данным Администрации аэропортов штатов Турции (SAMA), полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>БПЛА массой более 500 г должны регистрироваться в правительстве Турции перед полетом.</p>
<p>Разрешение требуется до всех коммерческих полетов.</p>
<p>Запрещены полеты выше 120 м и БПЛА массой более 4 кг для частных<br />
и личных рейсов.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301928"></a><strong><em>Венесуэла</em></strong></p>
<p>Согласно Национальному институту гражданской авиации (INAC), полеты на беспилотниках разрешены.</p>
<p>Венесуэла имеет несколько категорий лицензий на беспилотные полеты.</p>
<p>Заявители должны быть венесуэльцами или гражданами страны, которая предоставляет взаимный режим при выдаче лицензий венесуэльцам.</p>
<p>Пилоты должны говорить, читать и писать на испанском языке, иметь действующий авиационный медицинский сертификат, соответствующий типу лицензии.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301929"></a><strong><em>Украина</em></strong></p>
<p>По данным Государственного авиационного управления Украины, полеты на БПЛА разрешены.</p>
<p>БПЛА массой более 2 кг должны быть зарегистрированы и иметь разрешение в UkrAirCenter (подать заявку как минимум за 10 дней).</p>
<p>БПЛА массой менее 2 кг не требуют разрешения.</p>
<p>Пилот должен быть не далее 500 м от БПЛА.</p>
<p>Пилот не должен контролировать более одного БПЛА одновременно.</p>
<p>Запрещены полеты выше 50 м без разрешения, в пределах 5 км от внешних границ аэропорта, в пределах 30 м от отдельного человека, 50 м от группы людей в возрасте до 12 человек,150 м от группы более 12 человек, полеты ночью.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301930"></a><strong><em>Республика Беларусь</em></strong></p>
<p>БПЛА, приобретенные физическими лицами для личного пользования, могут относиться к беспилотным летательным аппаратам, включенным в перечень товаров и технологий двойного назначения, и подлежат экспортному контролю. Перемещение таких аппаратов в данном случае осуществляется на основании разрешений Государственного военного промышленного комитета Республики Беларусь, которые предъявляются таможенному органу.</p>
<p>БПЛА относится к радиоэлектронным средствам и (или) высокочастотным устройствам, и при его перемещении физическими лицами в качестве товара для личного пользования необходимо представить таможенному органу членский билет Белорусской Федерации Беспилотной Авиации (согласно Решению Государственной комиссией по радиочастотам при Совете Безопасности Республики Беларусь от 28 августа 2012 г. № 12К/12 «О выделении радиочастотного спектра для радиоэлектронных средств малого радиуса действия»).</p>
<p>Таким образом, для перемещения авиамоделей через таможенную границу Республики Беларусь, необходимо:</p>
<p>– быть членом Белорусской Федерации Беспилотной Авиации;</p>
<p>– получить заключение об идентификации продукции в Государственном военно-промышленном комитете Республики Беларусь.</p>
<p>Авиамодели массой более 0,5 кг подлежат маркировке (специальная наклейка, устойчивая к атмосферным воздействиям) с указанием фамилии, имени и отчества владельца, его адрес и контакты для связи, либо наименование юридического лица, адрес организации, которой принадлежит устройство.</p>
<p>Для осуществления фото-видеосъемки, владелец авиамодели должен получить разрешение Генерального штаба Вооруженных сил, а после предоставить весь отснятый материал.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301931"></a><strong><em>Чили</em></strong></p>
<p>Согласно чилийскому национальному авиационному управлению, Генеральному управлению гражданской авиации Чили (DGAC), использование БПЛА является законным, но необходимо соблюдать правила регистрации и использования:</p>
<p>– произвести регистрацию БПЛА в DGAC;</p>
<p>– одному пилоту разрешается управлять только одним БПЛА;</p>
<p>– запрещены полеты в ночное время и при плохих погодных условиях;</p>
<p>– управление БПЛА должно производиться только в режиме визуальной видимости и на расстоянии не более 500 м от оператора; ограничение по высоте полета – не более 130 м;</p>
<p>– полеты над местами скопления людей производятся не менее 30 м;</p>
<p>– минимальное приближение к аэропортам – 2 км; запрещены полеты над правительственными и военными объектами.</p>
<p>Пилот БПЛА в Чили, должен получить регистрационную карту и разрешение на эксплуатацию от DGAC, а также получить удостоверение пилота. Регистрация действительна в течение 12 месяцев с последующим продлением.</p>
<p>Для регистрации предоставляется следующая информация:</p>
<p>– производитель БПЛА;</p>
<p>– марка, модель и серийный номер;</p>
<p>– тип конструкции;</p>
<p>– максимальная взлетная масса;</p>
<p>Требования к пилоту:</p>
<p>– возраст старше 18 лет;</p>
<p>– сдать экзамен по метеорологии и аэродинамике.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301932"></a><strong><em>Эквадор</em></strong></p>
<p>Согласно данным Главного управления гражданской авиации Эквадора (GDCAE), использование БПЛА является законным, но необходимо соблюдать правила регистрации и использования.</p>
<p>Беспошлинный ввоз БПЛА разрешается рыночной стоимостью до<br />
500 долл. США, при большей стоимости БПЛА облагается налогом до 35 % от оценочной стоимости, но налог возвращается при выезде из страны. Не облагаются налогом БПЛА ввозимые для решения профессиональных задач.</p>
<p>Основные правила применения:</p>
<p>– запрещены полеты в ночное время и при плохих погодных условиях;</p>
<p>– минимальное приближение к аэропортам – 9 км; запрещены полеты над правительственными и военными объектами;</p>
<p>– полеты над местами скопления людей производятся не менее 30 м;</p>
<p>– управление БПЛА должно производиться только в режиме визуальной видимости и на расстоянии не более 500 м от оператора; ограничение по высоте полета – не более 130 м.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301933"></a><strong><em>Перу</em></strong></p>
<p>Согласно Генеральному управлению гражданской аэронавтики (DGAC), управление БПЛА в Перу является законным, но необходимо соблюдать правила регистрации и использования.</p>
<p>При въезде в Перу беспилотник декларируется на таможне с оплатой налога в зависимости от его стоимости (около 18 %). При выезде налог возвращается. Штраф за ввоз без декларации – 250 долл. США.</p>
<p>Регистрация БПЛА осуществляется в Управлении сертификации и авторизации DGAC лично или в центрах обслуживания граждан. Процедура занимает – 48 ч.</p>
<p>Основные правила применения:</p>
<p>– запрещены полеты в ночное время и при плохих погодных условиях;</p>
<p>– минимальное приближение к аэропортам – 4 км; запрещены полеты над правительственными и военными объектами;</p>
<p>– полеты над местами скопления людей производятся не менее 30 м;</p>
<p>– скорость полета не более 160 км/ч;</p>
<p>– управление БПЛА должно производиться только в режиме визуальной видимости и на расстоянии не более 500 м от оператора; ограничение по высоте полета – не более 130 м.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301934"></a><strong><em>Сингапур</em></strong></p>
<p>Согласно данным Управления гражданской авиации Сингапура (CAAS), управление БПЛА в Сингапуре разрешено, но необходимо соблюдать правила регистрации и использования:</p>
<p>– не требуется получать специальное разрешение для БПЛА массой до<br />
7 кг при высоте полета до 60 м, в ином случае разращение обязательно;</p>
<p>– запрещены полеты над местами массового скопления людей;</p>
<p>– запрещается использовать БПЛА ближе 5 км от аэропорта;</p>
<p>– полеты совершаются только в условии прямой видимости БПЛА.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301935"></a><strong><em>Исландия</em></strong></p>
<p>По данным Исландского транспортного управления (ITA), использование БПЛА в Исландии разрешено.</p>
<p>Общие правила для не профессиональных полетов:</p>
<p>– обязательная маркировка БПЛА (имя, адрес и номер телефона пилота);</p>
<p>– разращенная масса БПЛА до 3 кг в городской местности и до 25 кг для полетов в сельской местности;</p>
<p>– БПЛА массой 20 кг и более должны подлежать страхованию;</p>
<p>– ограничение по высоте полета не более 120 м над землей или морем;</p>
<p>– запрещены полеты над местами массового скопления людей;</p>
<p>– запрещены полеты ближе 2 км от международных аэропортов и 1,5 км от других аэропортов;</p>
<p>– расстояние от зданий не менее 50 м в городской местности и не менее 150 м в сельской местности;</p>
<p>– полеты совершаются только в условии прямой видимости БПЛА;</p>
<p>– запрещены полеты над транспортными средствами и кораблями;</p>
<p>– в случае причинения ущерба пилот несет полную ответственность.</p>
<p>Эти же правила распространяются на коммерческие полеты за исключением того, что БПЛА подлежат регистрации в ITA и должны иметь специальный идентификатор.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301936"></a><strong><em>Новая Зеландия</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Новой Зеландии (CAANZ), использование БПЛА в Новой Зеландии разрешено.</p>
<p>Общие правила для не профессиональных полетов:</p>
<p>– разрешенная масса БПЛА до 25 кг; пилот перед полетом должен убедиться в том, что аппарат исправен и безопасен в эксплуатации;</p>
<p>– полеты разрешены только в дневное время;</p>
<p>– БПЛА уступают в приоритете полета всем воздушным судам, находящимся в воздухе;</p>
<p>– полеты совершаются только в условии прямой видимости БПЛА;</p>
<p>– ограничение по высоте полета – 120 м над уровнем земли;</p>
<p>– запрещены полеты ближе 4 км от аэропортов;</p>
<p>– для полетов в контролируемом воздушном пространстве пилоты должны получить разрешение на полет;</p>
<p>– запрещены полеты в воздушном пространстве специального назначения без разрешения администрации района (например, в зонах военных операций или зонах ограниченного доступа);</p>
<p>– перед полетом оператор БПЛА обязан получить согласие владельца территории, над которой планируется полет.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301937"></a><strong><em>Кения</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Кении (KCAA), использование БПЛА разрешено.</p>
<p>Общие правила полета:</p>
<p>– возрастной ценз оператора – 18 лет;</p>
<p>– импорт или экспорт БПЛА разрешен только с разрешения KCAA;</p>
<p>– запрещено передавать право собственности на БПЛА без одобрения KCAA;</p>
<p>– БПЛА подлежат регистрации в KCAA;</p>
<p>– для совершения коммерческих полетов требуется получения сертификата дистанционного управления воздушным судном (ROC) от полномочного органа;</p>
<p>– запрещены полеты над местами массового скопления людей;</p>
<p>– запрещается использовать беспилотный летательный аппарат над дорогой общего пользования или вдоль нее на расстоянии менее 50 м; дорога общего пользования не может использоваться в качестве места посадки или взлета БПЛА;</p>
<p>– запрещено использование БПЛА в пределах 10 км от аэропорта.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301938"></a><strong><em>Шри-Ланка</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Шри-Ланки (CAASL), использование БПЛА разрешено.</p>
<p>Категории БПЛА:</p>
<p>– А – 25 кг или более;</p>
<p>– B – от 1 до 25 кг;</p>
<p>– C – от 0,2 до 1 кг</p>
<p>– D – до 0,2 кг.</p>
<p>Полет БПЛА (независимо от его категории), оснащенного камерами, подлежит согласованию с местной полицией;</p>
<p>Предварительное разрешение от местной полиции не требуется, если оператор получил письменное разрешение аэропорта в этом регионе или БПЛА эксплуатируется под наблюдением уполномоченного лица из CAASL;</p>
<p>БПЛА категорий A и B, оснащенные камерами, должны быть зарегистрированы в CAASL;</p>
<p>Дрон категории C, не оборудованный камерами, должен быть зарегистрирован поставщиком;</p>
<p>Дрон категории D, не оснащенный камерами, не требует регистрации;</p>
<p>Оператор должен поддерживать визуальную прямую видимость БПЛА во время полета;</p>
<p>Запрещается использовать дрон в при плохих погодных условиях.</p>
<p>Оператор может одновременно управлять только одним БПЛА.</p>
<p>Запрещается управлять БПЛА с движущегося транспортного средства, лодки или любой другой движущейся платформы.</p>
<p>Операторы должны отдавать приоритет пилотируемым самолетам и любым другим пилотируемым транспортным средствам.</p>
<p>Запрещены полеты над местами массового скопления людей.</p>
<p>Разрешаются полеты только в дневное время;</p>
<p>Требуется страхование для БПЛА, которые попадают в категорию A,<br />
B или C.</p>
<p>Работа в территориальных водах Шри-Ланки без предварительного разрешения запрещена.</p>
<p>Запрещены полеты вблизи аэропортов.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301939"></a><strong><em>Катар</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Катара (CAA), использование БПЛА разрешено, но только гражданам Катара. БПЛА ввозимые из других стран подлежат конфискации. Чтобы управлять БПЛА в Катаре, граждане должны запрашивать разрешение в CAA.</p>
<p><a id="post-15835-_Toc57301940"></a><strong>Выводы</strong></p>
<p>Проанализирована нормативно-правовая документация использования беспилотных авиационных систем в 54 странах – Россия, США, Израиль, Канада, Германия, Франция, Великобритания, Нидерланды, Швеция, Швейцария, Австрия, Венгрия, Бельгия, Ирландия, Норвегия, Хорватия, Кипр, Греция, Болгария, Италия, Чешская Республика, Эстония, Польша, Португалия, Испания, Дания, Финляндия, Китай, Южная Корея, Индия, Япония, Австралия, Аргентина, Азербайджан, Бразилия, Камерун, Египет, Индонезия, Иран, Мексика, Шри-Ланка, Турция, Венесуэла, Украина, Республика Беларусь, Чили, Эквадор, Перу, Сингапур, Исландия, Новая Зеландия, Кения, Шри-Ланка, Катар.</p>
<p>Использование дронов в большинстве стран разрешены при различных условиях в зависимости от законодательства.</p>
<p>Запрещено использование БПЛА в Ираке, Иране и Сирии. В ряде стран, таких как Северная Корея, Судан, Ливия, Ливан, Уганда и др. не обнаружены какие-либо упоминания о правилах применения беспилотной авиации.</p>
<h2><strong>2 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЭЛЕМЕНТОВ ТОЧНОГО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА В РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ</strong></h2>
<p>Центром прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ совместно<br />
с Департаментом научно-технологической политики и образования Мин­сельхоза РФ организован через региональные органы управления АПК сбор статистической информации по использованию элементов точного сельского хозяйства в 2019–2020 гг.</p>
<p>Рейтинги составлены на основе данных, полученных из 64 регионов по точному земледелию и 68 регионов по точному животноводству. Достоверность полученных результатов обусловлена, прежде всего, достоверностью представления информации региональными органами управления АПК.</p>
<p>Рейтинг представлен по направлениям:</p>
<p>– количеству хозяйств, использующих элементы точного земледелия;</p>
<p>– площади, на которой используются элементы точного земледелия;</p>
<p>– количеству хозяйств, использующих элементы точного животноводства;</p>
<p>– поголовью КРС в хозяйствах, использующих элементы точного животноводства;</p>
<p>– количеству хозяйств, сотрудники которых прошли обучение в области точного сельского хозяйства;</p>
<p>– количеству сотрудников, повысивших квалификацию в области точного сельского хозяйства.</p>
<p>При анализе также учитывались действующие в регионе программы по развитию, поддержке и внедрению элементов точного сельского хозяйства.</p>
<h3><strong>2.1 Методика составления рейтинга</strong></h3>
<p>Руководителям органов управления АПК субъектов Российской Федерации Департаментом научно-технологической политики и образования Минсельхоза России были разосланы письма с просьбой организации сбора статистической информации по использованию элементов точного сельского хозяйства.</p>
<p>В приложении письма были указаны следующие показатели.</p>
<p>1. Количество хозяйств в регионе (по районам) с указанием названия хозяйства, площади и используемых элементов точного сельского хозяйства – точного земледелия и точного животноводства (таблица 2.1).</p>
<p><strong>Таблица 2.1</strong> – Использование элементов точного сельского хозяйства</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Наименование<br />
хозяйства</th>
<th>Район</th>
<th>Площадь, га</th>
<th>Используемые элементы<br />
(с указанием названия и количества)</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td colspan="4"><strong>Точное земледелие</strong></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>1. Оцифровка полей</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>2. Локальный отбор проб почвы в системе координат</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>3. Параллельное вождение</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>4. Спутниковый мониторинг транспортных средств</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>5. Дифференцированное опрыскивание сорняков</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>6. Дифференцированное внесение удобрений</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>7. Дифференцированный посев</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>8. Дифференцированное орошение</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>9. Дифференцированная обработка почвы по почвенным картам</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>10. Мониторинг состояния посевов с использованием дистанционного зондирования (аэро- или спутниковая фотосъемки)</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>11. Составление цифровых карт урожайности</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>12. Составление карт электропроводности почв</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4"><strong>Точное животноводство</strong></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>1. Мониторинг качества продукции животноводства</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>2. Электронная база данных производственного процесса</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>3. Идентификация и мониторинг отдельных особей животных с использованием современных информационных технологий (рацион кормления, удой, привес, температура тела, активность), удовлетворение их индивидуальных потребностей</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>4. Мониторинг состояния здоровья стада</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>5. Роботизация процесса доения</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>6. Автоматическое регулирование микроклимата и контроль за вредными газами в животноводческих помещениях</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>2. Количество сотрудников (по районам), прошедших повышение квалификации по направлению «Точное сельское хозяйство» (точное земледелие или точное животноводство), с указанием названия программы обучения (таблица 2.2).</p>
<p><strong>Таблица 2.2</strong> – Повышение квалификации</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Наименование хозяйства</td>
<td>Район</td>
<td>Количество человек</td>
<td>Название программы</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>3. Количество и наименование действующих программ по развитию, поддержке и внедрению элементов точного сельского хозяйства (таблица 2.3).</p>
<p><strong>Таблица 2.3</strong> – Программы по развитию, поддержке и внедрению элементов<br />
точного сельского хозяйства</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Название программы</td>
<td>Период действия</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Рейтинги составлены на основе данных, полученных из <strong>64</strong> регионов по точному земледелию и <strong>68</strong> регионов по точному животноводству. Достоверность полученных результатов обусловлена, прежде всего, достоверностью представления информации региональными органами управления АПК.</p>
<p>Если в хозяйстве используется хотя бы один элемент точного земледелия из двенадцати или один элемент точного животноводства из шести, то данное хозяйство учитывалось при подсчете.</p>
<h3><strong>2.2 Рейтинг регионов по точному земледелию</strong></h3>
<p>В результате было проанализировано <strong>64</strong> региона, элементы точного земледелия используются в <strong>55</strong> регионах, <strong>2834</strong> хозяйствах на площади <strong>15,5</strong> млн га (2019–2020 гг.).</p>
<p>Точное земледелие используется в <strong>10</strong> % хозяйств из проанализированных регионов.</p>
<p>В 2018 г. проанализировано – <strong>52</strong> региона, элементы точного земледелия использовались в <strong>40</strong> регионах, <strong>1930</strong> хозяйствах на площади <strong>12,5</strong> млн га.</p>
<p>Повысилось количество регионов, использующих новые технологии<br />
в растениеводстве, на <strong>38</strong> %; хозяйств – на <strong>47</strong> %; общая площадь, на которой применяются элементы точного земледелия – на <strong>24</strong> % (таблица 2.4).</p>
<p><strong>Таблица 2.4</strong> – Сравнение использования элементов точного земледелия<br />
в 2018 и 2019–2020 гг.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Год</td>
<td colspan="2">Количество регионов</td>
<td colspan="2">Хозяйства, использующие<br />
элементы точного земледелия</td>
</tr>
<tr>
<td>всего</td>
<td>использующих элементы точного земледелия</td>
<td>всего</td>
<td>общая<br />
площадь, млн га</td>
</tr>
<tr>
<td>2018</td>
<td>52</td>
<td>40</td>
<td>1930</td>
<td>12,5</td>
</tr>
<tr>
<td>2019–2020</td>
<td>64</td>
<td>55</td>
<td>2834</td>
<td>15,5</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Разница, ед. / %</strong></td>
<td><strong>12 / 23</strong></td>
<td><strong>15 / 38</strong></td>
<td><strong>904 / 47</strong></td>
<td><strong>3 / 24</strong></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>По результатам анализа использования элементов точного земледелия (таблица 2.5) в лидерах находятся Волгоградская область (257 хозяйств), Краснодарский край (250 хозяйств), Воронежская область (211 хозяйств). Конкурируют по показателю общей площади, на которой используются элементы точного земледелия (таблица 2.6) – Воронежская область (1,33 млн га), Краснодарский край (1,22 млн га), Волгоградская область (1,2 млн га).</p>
<p><strong>Таблица 2.5 </strong>– Количество хозяйств, использующих элементы точного<br />
земледелия в регионах России</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Регион</th>
<th>Количество хозяйств</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td><strong>Волгоградская область</strong></td>
<td><strong>257</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Краснодарский край</strong></td>
<td><strong>250</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Воронежская область</strong></td>
<td><strong>211</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Башкортостан</td>
<td>144</td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская область</td>
<td>125</td>
</tr>
<tr>
<td>Алтайский край</td>
<td>114</td>
</tr>
<tr>
<td>Орловская область</td>
<td>112</td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>110</td>
</tr>
<tr>
<td>Амурская область</td>
<td>102</td>
</tr>
<tr>
<td>Курганская область</td>
<td>90</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>88</td>
</tr>
<tr>
<td>Удмуртская Республика</td>
<td>87</td>
</tr>
<tr>
<td>Омская область</td>
<td>85</td>
</tr>
<tr>
<td>Тюменская область</td>
<td>81</td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>79</td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородская область</td>
<td>75</td>
</tr>
<tr>
<td>Кировская область</td>
<td>67</td>
</tr>
<tr>
<td>Красноярский край</td>
<td>62</td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенская область</td>
<td>53</td>
</tr>
<tr>
<td>Свердловская область</td>
<td>50</td>
</tr>
<tr>
<td>Ульяновская область</td>
<td>50</td>
</tr>
<tr>
<td>Тульская область</td>
<td>46</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>45</td>
</tr>
<tr>
<td>Брянская область</td>
<td>44</td>
</tr>
<tr>
<td>Рязанская область</td>
<td>35</td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарская Республика</td>
<td>33</td>
</tr>
<tr>
<td>Оренбургская область</td>
<td>31</td>
</tr>
<tr>
<td>Калужская область</td>
<td>28</td>
</tr>
<tr>
<td>Ярославская область</td>
<td>22</td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский край</td>
<td>21</td>
</tr>
<tr>
<td>Тверская область</td>
<td>19</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская область</td>
<td>18</td>
</tr>
<tr>
<td>Иркутская область</td>
<td>17</td>
</tr>
<tr>
<td>Псковская область</td>
<td>17</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>17</td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>16</td>
</tr>
<tr>
<td>Курская область</td>
<td>15</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Марий Эл</td>
<td>15</td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская область</td>
<td>14</td>
</tr>
<tr>
<td>Томская область</td>
<td>14</td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Адыгея</td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>11</td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская республика</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td>Хабаровский край</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Коми</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Карелия</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Еврейский автономный округ</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Карачаево-Черкесская Республика</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Московская область</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Бурятия</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Забайкальский край</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Алтай</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Хакасия</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Севастополь</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Астраханская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Мурманская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Ненецкий автономный округ</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Новгородская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Дагестан</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Тыва</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Сахалинская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Чеченская Республика</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Чукотский автономный округ</td>
<td>–</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 2.6 </strong>– Площадь, на которой используются элементы точного<br />
земледелия, по регионам России</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Регион</th>
<th>Общая площадь, га</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td><strong>Воронежская область</strong></td>
<td><strong>1329511</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Краснодарский край</strong></td>
<td><strong>1220224</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Волгоградская область</strong></td>
<td><strong>1204749</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Омская область</td>
<td>921293</td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородская область</td>
<td>911455</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Башкортостан</td>
<td>876521</td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская область</td>
<td>797359</td>
</tr>
<tr>
<td>Алтайский край</td>
<td>653920</td>
</tr>
<tr>
<td>Амурская область</td>
<td>641448</td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>628359</td>
</tr>
<tr>
<td>Тюменская область</td>
<td>521253</td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенская область</td>
<td>511519</td>
</tr>
<tr>
<td>Орловская область</td>
<td>478188</td>
</tr>
<tr>
<td>Курганская область</td>
<td>449696</td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>449399</td>
</tr>
<tr>
<td>Красноярский край</td>
<td>372053</td>
</tr>
<tr>
<td>Кировская область</td>
<td>330063</td>
</tr>
<tr>
<td>Удмуртская Республика</td>
<td>282942</td>
</tr>
<tr>
<td>Рязанская область</td>
<td>259632</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>252239</td>
</tr>
<tr>
<td>Тульская область</td>
<td>230445</td>
</tr>
<tr>
<td>Свердловская область</td>
<td>226621</td>
</tr>
<tr>
<td>Оренбургская область</td>
<td>216356</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>161651</td>
</tr>
<tr>
<td>Ульяновская область</td>
<td>153920</td>
</tr>
<tr>
<td>Калужская область</td>
<td>138031</td>
</tr>
<tr>
<td>Томская область</td>
<td>120870</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Марий Эл</td>
<td>105515</td>
</tr>
<tr>
<td>Курская область</td>
<td>103673</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская область</td>
<td>95480</td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>90681</td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский край</td>
<td>88972</td>
</tr>
<tr>
<td>Брянская область</td>
<td>84407</td>
</tr>
<tr>
<td>Ярославская область</td>
<td>84282</td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарская Республика</td>
<td>64450</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>61244</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Адыгея</td>
<td>53381</td>
</tr>
<tr>
<td>Псковская область</td>
<td>50079</td>
</tr>
<tr>
<td>Тверская область</td>
<td>33955</td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская Республика</td>
<td>33510</td>
</tr>
<tr>
<td>Забайкальский край</td>
<td>32000</td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>27958</td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская область</td>
<td>23767</td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>23593</td>
</tr>
<tr>
<td>Иркутская область</td>
<td>20508</td>
</tr>
<tr>
<td>Хабаровский край</td>
<td>16350</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Карелия</td>
<td>15867</td>
</tr>
<tr>
<td>Карачаево-Черкесская Республика</td>
<td>15530</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Коми</td>
<td>7553</td>
</tr>
<tr>
<td>Московская область</td>
<td>7160</td>
</tr>
<tr>
<td>Еврейский автономный округ</td>
<td>4249</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Хакасия</td>
<td>3682</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Бурятия</td>
<td>3137</td>
</tr>
<tr>
<td>Севастополь</td>
<td>1500</td>
</tr>
<tr>
<td>Астраханская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Мурманская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Ненецкий автономный округ</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Новгородская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Тыва</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Сахалинская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Чеченская Республика</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Алтай</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Дагестан</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Чукотский автономный округ</td>
<td>–</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Сравнительный рейтинг лидирующих регионов в 2018–2020 гг. показан в таблице 2.7.</p>
<p><strong>Таблица 2.7 </strong>– Рейтинг регионов по использованию элементов точного<br />
земледелия в 2018 и 2019–2020 гг.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td colspan="2">По количеству хозяйств</td>
<td colspan="2">По площади, млн га</td>
</tr>
<tr>
<td>2018 г.</td>
<td>2019–2020 гг.</td>
<td>2018 г.</td>
<td>2019–2020 гг.</td>
</tr>
<tr>
<td>Краснодарский<br />
край (<strong>189</strong>)</td>
<td>Волгоградская<br />
область (<strong>257</strong>)</td>
<td>Воронежская<br />
область (<strong>1,13</strong>)</td>
<td>Воронежская<br />
область (<strong>1,33</strong>)</td>
</tr>
<tr>
<td>Воронежская<br />
область (<strong>182</strong>)</td>
<td>Краснодарский<br />
край (<strong>250</strong>)</td>
<td>Краснодарский<br />
край (<strong>0,96</strong>)</td>
<td>Краснодарский<br />
край (<strong>1,22</strong>)</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская<br />
область (<strong>144</strong>)</td>
<td>Воронежская<br />
область (<strong>211</strong>)</td>
<td>Омская<br />
область (<strong>0,92</strong>)</td>
<td>Волгоградская<br />
область (<strong>1,2</strong>)</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В Краснодарском крае количество хозяйство увеличилось на <strong>32</strong> %, Воронежской области – на <strong>16</strong> %.</p>
<p>Площадь, на которой используются элементы точного земледелия в Воронежской области, увеличилась на <strong>18</strong> %, Краснодарском крае – на <strong>27</strong> %.</p>
<p>Далее выполним анализ регионов по элементам точного земледелия.</p>
<p>В таблице 2.8 представлено количество хозяйств в регионах, в которых использовались рассматриваемые элементы точного земледелия.</p>
<p><strong>Таблица 2.8 </strong>– Количество хозяйств в регионах, использовавшие элементы<br />
точного земледелия в 2019–2020 гг.</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Регион</p>
<p>&nbsp;</p>
<p>Элементы</p>
<p>точного</p>
<p>земледелия</th>
<th>1. Оцифровка полей</th>
<th>2. Локальный отбор проб почвы в системе<br />
координат</th>
<th>3. Параллельное вождение</th>
<th>4. Спутниковый мониторинг транспортных средств</th>
<th>5. Дифференцированное опрыскивание<br />
сорняков</th>
<th>6. Дифференцированное внесение<br />
удобрений</th>
<th>7. Дифференцированный посев</th>
<th>8. Дифференцированное орошение</th>
<th>9. Дифференцированная обработка почвы<br />
по почвенным картам</th>
<th>10. Мониторинг состояния посевов<br />
с использованием дистанционного<br />
зондирования</th>
<th>11. Составление цифровых карт<br />
урожайности</th>
<th>12. Составление карт электропроводности почв</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td>Алтайский край</td>
<td>82</td>
<td>3</td>
<td>68</td>
<td>74</td>
<td>18</td>
<td>12</td>
<td>19</td>
<td></td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td>3</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Амурская область</td>
<td>22</td>
<td>1</td>
<td>70</td>
<td>89</td>
<td>21</td>
<td>12</td>
<td>12</td>
<td></td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>17</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td>5</td>
<td>3</td>
<td>5</td>
<td>8</td>
<td>1</td>
<td>5</td>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородская область</td>
<td>36</td>
<td>5</td>
<td>68</td>
<td>57</td>
<td>24</td>
<td>15</td>
<td>12</td>
<td>1</td>
<td>6</td>
<td>9</td>
<td>2</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Брянская область</td>
<td>34</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>17</td>
<td>8</td>
<td>9</td>
<td>8</td>
<td>1</td>
<td>5</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградская область</td>
<td>112</td>
<td>10</td>
<td>131</td>
<td>83</td>
<td>58</td>
<td>49</td>
<td>20</td>
<td>6</td>
<td>2</td>
<td>7</td>
<td>5</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>5</td>
<td></td>
<td>11</td>
<td>40</td>
<td>13</td>
<td>7</td>
<td>8</td>
<td></td>
<td>5</td>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Воронежская область</td>
<td>100</td>
<td>8</td>
<td>129</td>
<td>107</td>
<td>44</td>
<td>54</td>
<td>23</td>
<td>9</td>
<td></td>
<td>14</td>
<td>8</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Забайкальский край</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Иркутская область</td>
<td>12</td>
<td>15</td>
<td>5</td>
<td>4</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>2</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарская Республика</td>
<td>33</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Калужская область</td>
<td>14</td>
<td></td>
<td>13</td>
<td>16</td>
<td>4</td>
<td>3</td>
<td>2</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Кировская область</td>
<td>22</td>
<td></td>
<td>35</td>
<td>50</td>
<td>13</td>
<td>10</td>
<td>17</td>
<td></td>
<td>3</td>
<td></td>
<td>2</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская область</td>
<td>3</td>
<td></td>
<td>3</td>
<td>13</td>
<td>6</td>
<td>4</td>
<td>4</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Краснодарский край</td>
<td>113</td>
<td>16</td>
<td>166</td>
<td>149</td>
<td>37</td>
<td>59</td>
<td>44</td>
<td>10</td>
<td>16</td>
<td>22</td>
<td>20</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Красноярский край</td>
<td>8</td>
<td></td>
<td>51</td>
<td>31</td>
<td>11</td>
<td>3</td>
<td>10</td>
<td></td>
<td></td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Курганская область</td>
<td>3</td>
<td></td>
<td>56</td>
<td>27</td>
<td>71</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Курская область</td>
<td>14</td>
<td>14</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>5</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>5</td>
<td>1</td>
<td>6</td>
<td>8</td>
<td>6</td>
<td>4</td>
<td>3</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Московская область</td>
<td>3</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>23</td>
<td></td>
<td>58</td>
<td>48</td>
<td>4</td>
<td>10</td>
<td>4</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>9</td>
<td>3</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская область</td>
<td>78</td>
<td>11</td>
<td>57</td>
<td>51</td>
<td>29</td>
<td>8</td>
<td>11</td>
<td></td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>3</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Орловская область</td>
<td>26</td>
<td>1</td>
<td>69</td>
<td>50</td>
<td>18</td>
<td>5</td>
<td>5</td>
<td></td>
<td>1</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенская область</td>
<td>40</td>
<td>8</td>
<td>46</td>
<td>42</td>
<td>17</td>
<td>17</td>
<td>7</td>
<td>2</td>
<td>5</td>
<td>14</td>
<td>6</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский край</td>
<td>7</td>
<td>1</td>
<td>4</td>
<td>14</td>
<td>6</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>7</td>
<td>1</td>
<td>11</td>
<td>8</td>
<td>9</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td>2</td>
<td>7</td>
<td>7</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Псковская область</td>
<td>2</td>
<td></td>
<td>1</td>
<td>11</td>
<td>6</td>
<td>6</td>
<td>6</td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Адыгея</td>
<td>3</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика<br />
Башкортостан</td>
<td>51</td>
<td>2</td>
<td>101</td>
<td>54</td>
<td>14</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>5</td>
<td>1</td>
<td>10</td>
<td>4</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Марий Эл</td>
<td>3</td>
<td></td>
<td>13</td>
<td>12</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Ростовская область</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Рязанская область</td>
<td>16</td>
<td></td>
<td>14</td>
<td>25</td>
<td>11</td>
<td>10</td>
<td>9</td>
<td></td>
<td>2</td>
<td>6</td>
<td>2</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Свердловская область</td>
<td>14</td>
<td></td>
<td>38</td>
<td>31</td>
<td></td>
<td></td>
<td>2</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская область</td>
<td>10</td>
<td></td>
<td>3</td>
<td>15</td>
<td>3</td>
<td></td>
<td>3</td>
<td></td>
<td></td>
<td>5</td>
<td>3</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>17</td>
<td>4</td>
<td>98</td>
<td>57</td>
<td>22</td>
<td>9</td>
<td>18</td>
<td></td>
<td>3</td>
<td>12</td>
<td>6</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Тверская область</td>
<td>4</td>
<td></td>
<td>8</td>
<td>11</td>
<td>5</td>
<td>4</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td>1</td>
<td>3</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Томская область</td>
<td>6</td>
<td>1</td>
<td>5</td>
<td>13</td>
<td>5</td>
<td>5</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Тульская область</td>
<td>6</td>
<td>1</td>
<td>34</td>
<td>27</td>
<td></td>
<td>3</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>3</td>
<td>1</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Тюменская область</td>
<td>21</td>
<td>2</td>
<td>36</td>
<td>53</td>
<td>26</td>
<td>4</td>
<td>12</td>
<td></td>
<td>3</td>
<td>3</td>
<td></td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Удмуртская<br />
Республика</td>
<td>18</td>
<td></td>
<td>13</td>
<td>81</td>
<td>4</td>
<td>1</td>
<td>5</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Ульяновская область</td>
<td>27</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>18</td>
<td>27</td>
<td>28</td>
<td>26</td>
<td>5</td>
<td>26</td>
<td>27</td>
<td>4</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>59</td>
<td>6</td>
<td>25</td>
<td>30</td>
<td>17</td>
<td>7</td>
<td>14</td>
<td></td>
<td>8</td>
<td>6</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская Республика</td>
<td>3</td>
<td></td>
<td>8</td>
<td>4</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>2</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Ярославская область</td>
<td>3</td>
<td>2</td>
<td>4</td>
<td>19</td>
<td>3</td>
<td>5</td>
<td>3</td>
<td>1</td>
<td>3</td>
<td>2</td>
<td>1</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Еврейский автономный округ</td>
<td></td>
<td></td>
<td>2</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Карачаево-Черкесская Республика</td>
<td></td>
<td></td>
<td>3</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td></td>
<td>2</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Омская область</td>
<td></td>
<td></td>
<td>79</td>
<td>43</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Оренбургская область</td>
<td></td>
<td></td>
<td>19</td>
<td></td>
<td>16</td>
<td>3</td>
<td>20</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Хакасия</td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Ставропольский край</td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Хабаровский край</td>
<td></td>
<td></td>
<td>6</td>
<td>5</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Алтай</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Бурятия</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>3</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Карелия</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>4</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Коми</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>3</td>
<td></td>
<td>3</td>
<td>3</td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Севастополь</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Повысилось количество хозяйств, оцифровавших поля в Краснодарском крае на 36 %, который вышел на лидирующие показатели в данном направлении (рисунок 2.1). В тройку лидеров так же вошли Волгоградская (повысилось на 48 %) и Воронежская (повысилось на 46 %) области.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="611" height="294" class="wp-image-15836" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-914.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-914.png 611w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-914-300x144.png 300w" sizes="(max-width: 611px) 100vw, 611px" alt="word image 914 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="569" height="302" class="wp-image-15837" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-915.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-915.png 569w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-915-300x159.png 300w" sizes="(max-width: 569px) 100vw, 569px" alt="word image 915 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.1</strong> – Регионы-лидеры по оцифровке полей:</p>
<p><em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>По использованию локального отбора проб в системе координат количество хозяйств уменьшилось (рисунок 2.2).</p>
<p>Использование систем параллельного вождения повысилось в Краснодарском крае на 6 %, в Волгоградской области – на 11 %, в Воронежской области – на 102 % (рисунок 2.3).</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="583" height="198" class="wp-image-15838" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-916.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-916.png 583w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-916-300x102.png 300w" sizes="(max-width: 583px) 100vw, 583px" alt="word image 916 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="534" height="184" class="wp-image-15839" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-917.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-917.png 534w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-917-300x103.png 300w" sizes="(max-width: 534px) 100vw, 534px" alt="word image 917 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.2</strong> – Регионы-лидеры по использованию локального отбора проб<br />
в системе координат:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="568" height="192" class="wp-image-15840" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-918.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-918.png 568w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-918-300x101.png 300w" sizes="(max-width: 568px) 100vw, 568px" alt="word image 918 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="586" height="203" class="wp-image-15841" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-919.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-919.png 586w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-919-300x104.png 300w" sizes="(max-width: 586px) 100vw, 586px" alt="word image 919 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.3</strong> – Регионы-лидеры по использованию параллельного вождения:</p>
<p><em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Применение спутникового мониторинга транспортных средств показывает динамику у Краснодарского края на 59 %, Воронежской области – на 102 % (рисунок 2.4).</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="689" height="229" class="wp-image-15842" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-920.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-920.png 689w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-920-300x100.png 300w" sizes="(max-width: 689px) 100vw, 689px" alt="word image 920 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="597" height="176" class="wp-image-15843" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-921.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-921.png 597w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-921-300x88.png 300w" sizes="(max-width: 597px) 100vw, 597px" alt="word image 921 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.4</strong> – Регионы-лидеры по использованию спутникового<br />
мониторинга транспортных средств:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Рейтинги регионов-лидеров по дифференцированным технологиям представлены на рисунках 2.5–2.9. В целом хорошая динамика сохраняется у Краснодарского края; Воронежской, Волгоградской и Ульяновской областей.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="578" height="152" class="wp-image-15844" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-922.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-922.png 578w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-922-300x79.png 300w" sizes="(max-width: 578px) 100vw, 578px" alt="word image 922 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="490" height="161" class="wp-image-15845" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-923.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-923.png 490w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-923-300x99.png 300w" sizes="(max-width: 490px) 100vw, 490px" alt="word image 923 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>А</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.5</strong> – Регионы-лидеры по использованию дифференцированного внесения удобрений:</p>
<p><em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="562" height="155" class="wp-image-15846" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-924.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-924.png 562w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-924-300x83.png 300w" sizes="(max-width: 562px) 100vw, 562px" alt="word image 924 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="598" height="191" class="wp-image-15847" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-925.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-925.png 598w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-925-300x96.png 300w" sizes="(max-width: 598px) 100vw, 598px" alt="word image 925 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.6</strong> – Регионы-лидеры по использованию<br />
дифференцированного посева:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="574" height="164" class="wp-image-15848" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-926.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-926.png 574w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-926-300x86.png 300w" sizes="(max-width: 574px) 100vw, 574px" alt="word image 926 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="544" height="164" class="wp-image-15849" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-927.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-927.png 544w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-927-300x90.png 300w" sizes="(max-width: 544px) 100vw, 544px" alt="word image 927 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.7</strong> – Регионы-лидеры по использованию<br />
дифференцированного опрыскивания:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="457" height="177" class="wp-image-15850" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-928.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-928.png 457w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-928-300x116.png 300w" sizes="(max-width: 457px) 100vw, 457px" alt="word image 928 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="487" height="161" class="wp-image-15851" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-929.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-929.png 487w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-929-300x99.png 300w" sizes="(max-width: 487px) 100vw, 487px" alt="word image 929 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.8</strong> – Регионы-лидеры по использованию<br />
дифференцированного орошения:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
<tr>
<td><img width="678" height="188" class="wp-image-15852" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-930.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-930.png 678w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-930-300x83.png 300w" sizes="(max-width: 678px) 100vw, 678px" alt="word image 930 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="690" height="211" class="wp-image-15853" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-931.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-931.png 690w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-931-300x92.png 300w" sizes="(max-width: 690px) 100vw, 690px" alt="word image 931 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.9 </strong>– Регионы-лидеры по использованию дифференцированной<br />
обработки почвы по почвенным картам:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Использование ДЗЗ для мониторинга посевов повысилось в Краснодарском крае и Воронежской области в 2 раза (рисунок 2.10).</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="671" height="197" class="wp-image-15854" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-932.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-932.png 671w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-932-300x88.png 300w" sizes="(max-width: 671px) 100vw, 671px" alt="word image 932 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="660" height="182" class="wp-image-15855" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-933.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-933.png 660w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-933-300x83.png 300w" sizes="(max-width: 660px) 100vw, 660px" alt="word image 933 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.10</strong> – Регионы-лидеры по использованию технологий<br />
дистанционного зондирования земли:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Динамика роста по использованию картирования урожайности в Краснодарском крае на 67 %, Воронежской области на 14 % (рисунок 2.11).</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="788" height="238" class="wp-image-15856" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-934.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-934.png 788w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-934-300x91.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-934-768x232.png 768w" sizes="(max-width: 788px) 100vw, 788px" alt="word image 934 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="789" height="283" class="wp-image-15857" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-935.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-935.png 789w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-935-300x108.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-935-768x275.png 768w" sizes="(max-width: 789px) 100vw, 789px" alt="word image 935 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.11</strong> – Регионы-лидеры по применению технологий<br />
картирования урожайности:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Повысилось количество хозяйств, использующие составление карт электропроводности почв (рисунок 2.12).</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="668" height="222" class="wp-image-15858" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-936.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-936.png 668w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-936-300x100.png 300w" sizes="(max-width: 668px) 100vw, 668px" alt="word image 936 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="601" height="206" class="wp-image-15859" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-937.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-937.png 601w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-937-300x103.png 300w" sizes="(max-width: 601px) 100vw, 601px" alt="word image 937 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.12 </strong>– Регионы-лидеры по применению технологий<br />
составления карт электропроводности почв:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Рассмотрим рейтинг элементов точного земледелия. В тройке наиболее используемых элементов находятся – оцифровка полей, параллельное вождение, спутниковый мониторинг транспортных средств (рисунок 2.13).</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-15860" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-938.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-938.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-938-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-938-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-938-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-938-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 938 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 2.13</strong> – Рейтинг элементов точного земледелия</p>
<h3><strong>2.3 Рейтинг регионов по точному животноводству</strong></h3>
<p>В результате было проанализировано <strong>68</strong> регионов, элементы точного животноводства используются в <strong>58</strong> регионах, <strong>1707</strong> с общим поголовьем<br />
<strong>3</strong> млн (2019–2020 гг.).</p>
<p>Точное животноводство используется в <strong>13</strong> % хозяйств из проанализированных регионов.</p>
<p>В 2018 г. проанализировано – <strong>46</strong> регионов, элементы точного животноводства использовались в <strong>35</strong> регионах, <strong>789</strong> хозяйствах с общим поголовьем <strong>1,7</strong> млн.</p>
<p>Повысилось количество регионов, использующих новые технологии<br />
в животноводстве, в <strong>1,7 </strong>раза; хозяйств – в <strong>2,2</strong> раза; поголовье КРС в хозяйствах, использующих элементы точного животноводства по регионам –<br />
в <strong>1,8</strong> раза (таблица 2.9).</p>
<p><strong>Таблица 2.9</strong> – Сравнение использования элементов точного животноводства<br />
в 2018 и 2019–2020 гг.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Год</td>
<td colspan="2">Количество регионов</td>
<td colspan="2">Хозяйства, использующие<br />
элементы точного животноводства</td>
</tr>
<tr>
<td>всего</td>
<td>использующих<br />
элементы точного земледелия</td>
<td>всего</td>
<td>поголовье<br />
КРС, млн</td>
</tr>
<tr>
<td>2018</td>
<td>46</td>
<td>35</td>
<td>789</td>
<td>1,7</td>
</tr>
<tr>
<td>2019–2020</td>
<td>68</td>
<td>58</td>
<td>1707</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Разница, ед. / раз</strong></td>
<td><strong>22 / 1,5</strong></td>
<td><strong>23 / 1,7</strong></td>
<td><strong>918 / 2,2</strong></td>
<td><strong>1,3 / 1,8</strong></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>По количеству хозяйств, использовавших элементы точного животноводства (таблица 2.10), доминируют Удмуртская Республика (123 хозяйства), Кировская область (92 хозяйства), Алтайский край (88 хозяйств); по поголовью КРС (таблица 2.11) – Краснодарский край (212 тыс.), Свердловская область (188 тыс.), Удмуртская Республика (166 тыс.).</p>
<p><strong>Таблица 2.10</strong> – Количество хозяйств, использующих элементы точного<br />
животноводства по регионам России</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Регион</th>
<th>Количество хозяйств</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td><strong>Удмуртская Республика</strong></td>
<td><strong>123 </strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Кировская область</strong></td>
<td><strong>92</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Алтайский край</strong></td>
<td><strong>88 </strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Московская область</td>
<td>86</td>
</tr>
<tr>
<td>Свердловская область</td>
<td>86</td>
</tr>
<tr>
<td>Краснодарский край</td>
<td>81</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Башкортостан</td>
<td>70</td>
</tr>
<tr>
<td>Тюменская область</td>
<td>67</td>
</tr>
<tr>
<td>Брянская область</td>
<td>63</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>62</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>60</td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский край</td>
<td>50</td>
</tr>
<tr>
<td>Красноярский край</td>
<td>48</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская область</td>
<td>43</td>
</tr>
<tr>
<td>Калужская область</td>
<td>41</td>
</tr>
<tr>
<td>Курганская область</td>
<td>37</td>
</tr>
<tr>
<td>Владимирская область</td>
<td>31</td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>31</td>
</tr>
<tr>
<td>Воронежская область</td>
<td>30</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Коми</td>
<td>28</td>
</tr>
<tr>
<td>Рязанская область</td>
<td>28</td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская область</td>
<td>27</td>
</tr>
<tr>
<td>Ярославская область</td>
<td>26</td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская Республика</td>
<td>25</td>
</tr>
<tr>
<td>Курская область</td>
<td>24</td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>23</td>
</tr>
<tr>
<td>Ростовская область</td>
<td>23</td>
</tr>
<tr>
<td>Томская область</td>
<td>22</td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская область</td>
<td>20</td>
</tr>
<tr>
<td>Псковская область</td>
<td>19</td>
</tr>
<tr>
<td>Ставропольский край</td>
<td>19</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Алтай</td>
<td>15</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Бурятия</td>
<td>15</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Карелия</td>
<td>15</td>
</tr>
<tr>
<td>Ульяновская область</td>
<td>14</td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>14</td>
</tr>
<tr>
<td>Амурская область</td>
<td>13</td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>13</td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородская область</td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Ивановская область</td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Иркутская область</td>
<td>11</td>
</tr>
<tr>
<td>Камчатский край</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Орловская область</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Тверская область</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенская область</td>
<td>9</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Саха (Якутия)</td>
<td>9</td>
</tr>
<tr>
<td>Тульская область</td>
<td>9</td>
</tr>
<tr>
<td>Оренбургская область</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Хабаровский край</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Калининградская область</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Карачаево-Черкесская Республика</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградская область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Еврейская автономная область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Сахалинская область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Магаданская область</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Астраханская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарская Республика</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Новгородская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Дагестан</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Тыва</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Хакасия</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Мурманская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Ненецкий автономный округ</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Чеченская Республика</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Чукотский автономный округ</td>
<td>–</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 2.11</strong> – Поголовье КРС в хозяйствах, использующих элементы<br />
точного животноводства по регионам</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Регион</th>
<th>Поголовье</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td><strong>Краснодарский край</strong></td>
<td><strong>212305</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Свердловская область</strong></td>
<td><strong>187944</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Удмуртская Республика</strong></td>
<td><strong>165653</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Воронежская область</td>
<td>161758</td>
</tr>
<tr>
<td>Алтайский край</td>
<td>159906</td>
</tr>
<tr>
<td>Брянская область</td>
<td>149860</td>
</tr>
<tr>
<td>Кировская область</td>
<td>142345</td>
</tr>
<tr>
<td>Тюменская область</td>
<td>134648</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>118895</td>
</tr>
<tr>
<td>Красноярский край</td>
<td>110458</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Башкортостан</td>
<td>99916</td>
</tr>
<tr>
<td>Московская область</td>
<td>97088</td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская область</td>
<td>92833</td>
</tr>
<tr>
<td>Калининградская область</td>
<td>74906</td>
</tr>
<tr>
<td>Владимирская область</td>
<td>69578</td>
</tr>
<tr>
<td>Рязанская область</td>
<td>65924</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>65675</td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>62587</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Алтай</td>
<td>54822</td>
</tr>
<tr>
<td>Ярославская область</td>
<td>45809</td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>40744</td>
</tr>
<tr>
<td>Ростовская область</td>
<td>40324</td>
</tr>
<tr>
<td>Калужская область</td>
<td>40163</td>
</tr>
<tr>
<td>Ставропольский край</td>
<td>39005</td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородская область</td>
<td>33107</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская область</td>
<td>31395</td>
</tr>
<tr>
<td>Томская область</td>
<td>30587</td>
</tr>
<tr>
<td>Курская область</td>
<td>30519</td>
</tr>
<tr>
<td>Псковская область</td>
<td>29421</td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенская область</td>
<td>29308</td>
</tr>
<tr>
<td>Курганская область</td>
<td>25280</td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>24851</td>
</tr>
<tr>
<td>Тверская область</td>
<td>22409</td>
</tr>
<tr>
<td>Ульяновская область</td>
<td>21617</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Бурятия</td>
<td>21298</td>
</tr>
<tr>
<td>Оренбургская область</td>
<td>21164</td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>20242</td>
</tr>
<tr>
<td>Тульская область</td>
<td>18885</td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская область</td>
<td>18602</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Карелия</td>
<td>17231</td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский край</td>
<td>16066</td>
</tr>
<tr>
<td>Амурская область</td>
<td>14563</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Коми</td>
<td>13827</td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская Республика</td>
<td>12350</td>
</tr>
<tr>
<td>Орловская область</td>
<td>11128</td>
</tr>
<tr>
<td>Ивановская область</td>
<td>10845</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>9550</td>
</tr>
<tr>
<td>Иркутская область</td>
<td>6510</td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградская область</td>
<td>6149</td>
</tr>
<tr>
<td>Камчатский край</td>
<td>5710</td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>5312</td>
</tr>
<tr>
<td>Хабаровский край</td>
<td>5214</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Саха (Якутия)</td>
<td>5051</td>
</tr>
<tr>
<td>Сахалинская область</td>
<td>4167</td>
</tr>
<tr>
<td>Карачаево-Черкесская Республика</td>
<td>3463</td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>1569</td>
</tr>
<tr>
<td>Еврейская автономная область</td>
<td>255</td>
</tr>
<tr>
<td>Астраханская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарская Республика</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Новгородская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Дагестан</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Тыва</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Хакасия</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Магаданская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Мурманская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Ненецкий автономный округ</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Чеченская Республика</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Чукотский автономный округ</td>
<td>–</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Сравнительный рейтинг лидирующих регионов в 2018–2020 гг. показан в таблице 2.12.</p>
<p><strong>Таблица 2.12 </strong>– Рейтинг регионов по использованию элементов точного<br />
животноводства в 2018 и 2019–2020 гг.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td colspan="2">По количеству хозяйств</td>
<td colspan="2">По поголовью КРС, тыс.</td>
</tr>
<tr>
<td>2018 г.</td>
<td>2019–2020 г.</td>
<td>2018 г.</td>
<td>2019–202 г.</td>
</tr>
<tr>
<td>Свердловская<br />
область (<strong>83</strong>)</td>
<td>Удмуртская<br />
Республика (<strong>123</strong>)</td>
<td>Омская<br />
область (<strong>218</strong>)</td>
<td>Краснодарский<br />
край (<strong>212</strong>)</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика<br />
Башкортостан (<strong>68</strong>)</td>
<td>Кировская<br />
область (<strong>92</strong>)</td>
<td>Свердловская<br />
область (<strong>151</strong>)</td>
<td>Свердловская<br />
область (<strong>188</strong>)</td>
</tr>
<tr>
<td>Удмуртская<br />
Республика (<strong>67</strong>)</td>
<td>Алтайский<br />
край (<strong>88</strong>)</td>
<td>Воронежская<br />
область (<strong>119</strong>)</td>
<td>Удмуртская<br />
Республика (<strong>166</strong>)</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В Удмуртской Республике количество хозяйство увеличилось в <strong>1,7</strong> раз. По поголовью КРС увеличилось в Краснодарском крае в <strong>2,7</strong> раза, Свердловской области – в <strong>1,2</strong> раза, Удмуртской Республике – в <strong>1,9</strong> раза.</p>
<p>Далее выполним анализ регионов по элементам точного животноводства. В таблице 2.13 представлено количество хозяйств в регионах, в которых использовались рассматриваемые элементы точного животноводства.</p>
<p><strong>Таблица 2.13 </strong>– Количество хозяйств в регионах, использовавшие элементы<br />
точного животноводства в 2019–2020 гг.</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Регион</p>
<p>Элементы<br />
точного животноводства</th>
<th>1. Мониторинг качества<br />
продукции<br />
животноводства</th>
<th>2. Электронная база<br />
данных производственного процесса</th>
<th>3. Идентификация<br />
и мониторинг отдельных особей животных</th>
<th>4. Мониторинг состояния здоровья стада</th>
<th>5. Роботизация процесса доения</th>
<th>6. Автоматическое<br />
регулирование<br />
микроклимата</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td>Алтайский край</td>
<td>54</td>
<td>39</td>
<td>40</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Амурская область</td>
<td>9</td>
<td>10</td>
<td>5</td>
<td>5</td>
<td></td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>17</td>
<td>19</td>
<td>3</td>
<td>5</td>
<td>4</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородская область</td>
<td>12</td>
<td>12</td>
<td>12</td>
<td>12</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Брянская область</td>
<td>56</td>
<td>39</td>
<td>30</td>
<td>23</td>
<td></td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Владимирская область</td>
<td>16</td>
<td>28</td>
<td>19</td>
<td>11</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградская область</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>38</td>
<td>51</td>
<td>16</td>
<td>15</td>
<td>6</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Воронежская область</td>
<td>10</td>
<td>15</td>
<td>19</td>
<td>7</td>
<td>2</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Еврейская автономная область</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Ивановская область</td>
<td>9</td>
<td>11</td>
<td>5</td>
<td></td>
<td>1</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Иркутская область</td>
<td>9</td>
<td>4</td>
<td>3</td>
<td>8</td>
<td></td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Калининградская область</td>
<td>2</td>
<td></td>
<td>4</td>
<td>2</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Калужская область</td>
<td>23</td>
<td>24</td>
<td>21</td>
<td>15</td>
<td>25</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Камчатский край</td>
<td>9</td>
<td>8</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Карачаево-Черкесская Республика</td>
<td>4</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td>3</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Кировская область</td>
<td>46</td>
<td>89</td>
<td>39</td>
<td>19</td>
<td>7</td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская область</td>
<td>18</td>
<td>10</td>
<td>8</td>
<td>6</td>
<td></td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Краснодарский край</td>
<td>62</td>
<td>61</td>
<td>44</td>
<td>30</td>
<td>9</td>
<td>13</td>
</tr>
<tr>
<td>Красноярский край</td>
<td>44</td>
<td>34</td>
<td>10</td>
<td>7</td>
<td>4</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Курская область</td>
<td>23</td>
<td>13</td>
<td>5</td>
<td>5</td>
<td>4</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>24</td>
<td>26</td>
<td>18</td>
<td>16</td>
<td>3</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Московская область</td>
<td>69</td>
<td>77</td>
<td>24</td>
<td>11</td>
<td>5</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>53</td>
<td>41</td>
<td>30</td>
<td>15</td>
<td>2</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская область</td>
<td>20</td>
<td>25</td>
<td>24</td>
<td>23</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Оренбургская область</td>
<td>6</td>
<td>6</td>
<td>6</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Орловская область</td>
<td>10</td>
<td>5</td>
<td>2</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенская область</td>
<td>9</td>
<td>9</td>
<td>3</td>
<td>2</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский край</td>
<td>39</td>
<td>12</td>
<td>7</td>
<td>10</td>
<td>6</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>5</td>
<td>7</td>
<td>4</td>
<td>4</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Псковская область</td>
<td>14</td>
<td>8</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Башкортостан</td>
<td>5</td>
<td>67</td>
<td>65</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Коми</td>
<td>21</td>
<td>14</td>
<td>6</td>
<td>2</td>
<td>6</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>3</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Саха (Якутия)</td>
<td>1</td>
<td>9</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Ростовская область</td>
<td>3</td>
<td>6</td>
<td>5</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Рязанская область</td>
<td>23</td>
<td>18</td>
<td>8</td>
<td>10</td>
<td>3</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Сахалинская область</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>2</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Свердловская область</td>
<td>16</td>
<td>38</td>
<td>75</td>
<td>8</td>
<td>13</td>
<td>13</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская область</td>
<td>41</td>
<td>17</td>
<td>8</td>
<td>4</td>
<td>3</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Ставропольский край</td>
<td>12</td>
<td>17</td>
<td>7</td>
<td>5</td>
<td>1</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>12</td>
<td>11</td>
<td>5</td>
<td>4</td>
<td>2</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Тверская область</td>
<td>6</td>
<td>6</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td></td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Томская область</td>
<td>16</td>
<td>16</td>
<td>10</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Тульская область</td>
<td>6</td>
<td>5</td>
<td>7</td>
<td>4</td>
<td>3</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Тюменская область</td>
<td>59</td>
<td>42</td>
<td>17</td>
<td>11</td>
<td>3</td>
<td>13</td>
</tr>
<tr>
<td>Удмуртская Республика</td>
<td>89</td>
<td>97</td>
<td>14</td>
<td>4</td>
<td>4</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Ульяновская область</td>
<td>11</td>
<td>9</td>
<td>7</td>
<td>6</td>
<td></td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Хабаровский край</td>
<td>4</td>
<td>3</td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>10</td>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td></td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская Республика</td>
<td>24</td>
<td>24</td>
<td>10</td>
<td>10</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>1</td>
<td>3</td>
<td>1</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Ярославская область</td>
<td>21</td>
<td>18</td>
<td>9</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Курганская область</td>
<td></td>
<td>26</td>
<td></td>
<td>12</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Алтай</td>
<td></td>
<td>15</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Бурятия</td>
<td></td>
<td>15</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Карелия</td>
<td></td>
<td>2</td>
<td>15</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Магаданская область</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>1</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Использование технологии мониторинга качества продукции животноводства в Удмуртской Республике повысилось на 82 % (рисунок 2.14).</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="665" height="179" class="wp-image-15861" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-939.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-939.png 665w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-939-300x81.png 300w" sizes="(max-width: 665px) 100vw, 665px" alt="word image 939 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="674" height="200" class="wp-image-15862" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-940.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-940.png 674w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-940-300x89.png 300w" sizes="(max-width: 674px) 100vw, 674px" alt="word image 940 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.14</strong> – Регионы-лидеры по использованию мониторинга качества<br />
продукции животноводства:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Динамика применения электронной базы производственного процесса наблюдается в Удмуртской Республике (повышение на 98 %) – рисунок 2.15.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="959" height="249" class="wp-image-15863" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-941.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-941.png 959w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-941-300x78.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-941-768x199.png 768w" sizes="(max-width: 959px) 100vw, 959px" alt="word image 941 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="805" height="229" class="wp-image-15864" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-942.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-942.png 805w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-942-300x85.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-942-768x218.png 768w" sizes="(max-width: 805px) 100vw, 805px" alt="word image 942 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.15</strong> – Регионы-лидеры по использованию электронной базы<br />
производственного процесса в животноводстве:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В Свердловской области использование идентификации и мониторинга отдельных животных повысилось на 88 %, в Краснодарском крае – на 52 % (рисунок 2.16).</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="851" height="233" class="wp-image-15865" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-943.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-943.png 851w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-943-300x82.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-943-768x210.png 768w" sizes="(max-width: 851px) 100vw, 851px" alt="word image 943 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="797" height="211" class="wp-image-15866" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-944.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-944.png 797w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-944-300x79.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-944-768x203.png 768w" sizes="(max-width: 797px) 100vw, 797px" alt="word image 944 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.16</strong> – Регионы-лидеры по использованию идентификации<br />
и мониторингу отдельных животных:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Анализируя лидеров по использованию мониторинга здоровья стада можно заметить, что в Краснодарском крае повышение на 43 % (рисунок 2.17).</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="852" height="227" class="wp-image-15867" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-945.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-945.png 852w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-945-300x80.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-945-768x205.png 768w" sizes="(max-width: 852px) 100vw, 852px" alt="word image 945 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="867" height="218" class="wp-image-15868" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-946.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-946.png 867w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-946-300x75.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-946-768x193.png 768w" sizes="(max-width: 867px) 100vw, 867px" alt="word image 946 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.17</strong> – Регионы-лидеры по использованию мониторинга<br />
здоровья стада:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Произошло снижение использования роботизации в процессе доения (рисунок 2.18).</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="915" height="240" class="wp-image-15869" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-947.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-947.png 915w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-947-300x79.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-947-768x201.png 768w" sizes="(max-width: 915px) 100vw, 915px" alt="word image 947 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="697" height="233" class="wp-image-15870" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-948.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-948.png 697w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-948-300x100.png 300w" sizes="(max-width: 697px) 100vw, 697px" alt="word image 948 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.18</strong> – Регионы-лидеры по использованию роботизации<br />
процесса доения:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Регионы-лидеры по использованию автоматического регулирования микроклимата и контроля за вредными газами представлены на рисунке 2.19.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="804" height="259" class="wp-image-15871" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-949.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-949.png 804w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-949-300x97.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-949-768x247.png 768w" sizes="(max-width: 804px) 100vw, 804px" alt="word image 949 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="973" height="225" class="wp-image-15872" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-950.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-950.png 973w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-950-300x69.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-950-768x178.png 768w" sizes="(max-width: 973px) 100vw, 973px" alt="word image 950 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рисунок 2.19</strong> – Регионы-лидеры по использованию автоматического<br />
регулирования микроклимата и контроля за вредными газами:<em>а</em> – 2018 г.; <em>б</em> – 2019–2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Рассмотрим рейтинг элементов точного животноводства. В тройке наиболее используемых элементов находятся мониторинг качества продукции животноводства, электронная база производственного процесса, идентификация и мониторинг отдельных особей животных (рисунок 2.20).</p>
<p><strong>Рисунок 2.20</strong> – Рейтинг элементов точного земледелия</p>
<h3><strong>2.4 Рейтинг регионов по повышению квалификации</strong></h3>
<p>Проводился сбор материала по количеству сотрудников (по районам), прошедших повышение квалификации по направлению «Точное сельское хозяйство» («Точное земледелие» или «Точное животноводство»).</p>
<p>По повышению квалификации работников лидируют Ленинградская область (67 хозяйств), Московская область (47 хозяйств), Краснодарский край (46 хозяйств); Белгородская область (258 человек), Калужская область<br />
(238 человек), Краснодарский край (234 человека) – таблицы 2.14 и 2.15.</p>
<p><strong>Таблица 2.14</strong> – Количество хозяйств, сотрудники которых прошли<br />
обучение в области точного сельского хозяйства</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Регион</th>
<th>Количество хозяйств</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td><strong>Ленинградская область</strong></td>
<td><strong>67</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Московская область</strong></td>
<td><strong>47</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Краснодарский край</strong></td>
<td><strong>46</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Алтайский край</td>
<td>39</td>
</tr>
<tr>
<td>Удмуртская Республика</td>
<td>31</td>
</tr>
<tr>
<td>Тюменская область</td>
<td>24</td>
</tr>
<tr>
<td>Кировская область</td>
<td>23</td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>22</td>
</tr>
<tr>
<td>Воронежская область</td>
<td>21</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>19</td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородская область</td>
<td>17</td>
</tr>
<tr>
<td>Красноярский край</td>
<td>16</td>
</tr>
<tr>
<td>Курская область</td>
<td>13</td>
</tr>
<tr>
<td>Оренбургская область</td>
<td>13</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Коми</td>
<td>13</td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенская область</td>
<td>11</td>
</tr>
<tr>
<td>Рязанская область</td>
<td>11</td>
</tr>
<tr>
<td>Амурская область</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Ставропольский край</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>9</td>
</tr>
<tr>
<td>Ярославская область</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская область</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская область</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Тверская область</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Псковская область</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Ростовская область</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Тульская область</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Ульяновская область</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Башкортостан</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Алтай</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградская область</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарская Республика</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Карачаево-Черкесская Республика</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Орловская область</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Саха (Якутия)</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Хабаровский край</td>
<td>1</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 2.15</strong> – Количество сотрудников, повысивших квалификацию<br />
в области точного сельского хозяйства</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Регион</th>
<th>Количество человек</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td><strong>Белгородская область</strong></td>
<td><strong>258</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Калужская область</strong></td>
<td><strong>238</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Краснодарский край</strong></td>
<td><strong>234</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Воронежская область</td>
<td>206</td>
</tr>
<tr>
<td>Амурская область</td>
<td>145</td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>100</td>
</tr>
<tr>
<td>Московская область</td>
<td>80</td>
</tr>
<tr>
<td>Кировская область</td>
<td>78</td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>68</td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенская область</td>
<td>59</td>
</tr>
<tr>
<td>Алтайский край</td>
<td>46</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>44</td>
</tr>
<tr>
<td>Удмуртская Республика</td>
<td>44</td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>41</td>
</tr>
<tr>
<td>Красноярский край</td>
<td>40</td>
</tr>
<tr>
<td>Рязанская область</td>
<td>37</td>
</tr>
<tr>
<td>Курская область</td>
<td>34</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>32</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Коми</td>
<td>30</td>
</tr>
<tr>
<td>Тюменская область</td>
<td>30</td>
</tr>
<tr>
<td>Ульяновская область</td>
<td>30</td>
</tr>
<tr>
<td>Тульская область</td>
<td>27</td>
</tr>
<tr>
<td>Орловская область</td>
<td>26</td>
</tr>
<tr>
<td>Ставропольский край</td>
<td>23</td>
</tr>
<tr>
<td>Ярославская область</td>
<td>22</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>16</td>
</tr>
<tr>
<td>Оренбургская область</td>
<td>14</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская область</td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Псковская область</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Ростовская область</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская область</td>
<td>9</td>
</tr>
<tr>
<td>Тверская область</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Башкортостан</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Саха (Якутия)</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградская область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Карачаево-Черкесская Республика</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Алтай</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Хабаровский край</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарская Республика</td>
<td>1</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Сравнительный рейтинг лидирующих регионов в 2018–2020 гг. показан в таблице 2.16.</p>
<p><strong>Таблица 2.16</strong> – Рейтинг регионов по повышению квалификации в области<br />
точного сельского хозяйства в 2018 и 2019–2020 гг.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td colspan="2">По количеству хозяйств</td>
<td colspan="2">По количеству сотрудников</td>
</tr>
<tr>
<td>2018 г.</td>
<td>2019–2020 г.</td>
<td>2018 г.</td>
<td>2019–2020 г.</td>
</tr>
<tr>
<td>Забайкальский<br />
край (<strong>35</strong>)</td>
<td>Ленинградская<br />
область (<strong>67</strong>)</td>
<td>Республика<br />
Башкортостан (<strong>500</strong>)</td>
<td>Белгородская<br />
область (<strong>258</strong>)</td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская<br />
область (<strong>29</strong>)</td>
<td>Московская<br />
область (<strong>47</strong>)</td>
<td>Забайкальский<br />
край (<strong>479</strong>)</td>
<td>Калужская<br />
область (<strong>238</strong>)</td>
</tr>
<tr>
<td>Краснодарский<br />
край (<strong>20</strong>)</td>
<td>Краснодарский<br />
край (<strong>46</strong>)</td>
<td>Тамбовская<br />
область (<strong>209</strong>)</td>
<td>Краснодарский<br />
край (<strong>234</strong>)</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<h3><strong>2.5 Программы по внедрению точного сельского хозяйства</strong></h3>
<p>При анализе также учитывались действующие в регионе программы по развитию, поддержке и внедрению элементов точного сельского хозяйства (таблица 2.17).</p>
<p><strong>Таблица 2.17 </strong>– Программы по развитию, поддержке и внедрению элементов<br />
точного сельского хозяйства в регионах России</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Название программы</th>
<th>Период<br />
действия</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Архангельская область</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Правительством Архангельской области разработан Проект паспорта «Цифровое сельское хозяйство Архангельской области»</td>
<td>С 2020 г.</td>
</tr>
<tr>
<td>Постановление правительства Архангельской области от 09.10.2012<br />
№ 436-пп «Об утверждении государственной программы развития сельского хозяйства и регулирования рынков сельскохозяйственной продукции, сырья и продовольствия Архангельской области».Субсидия на закупку сельскохозяйственной техники из средств областного бюджета в размере до 40 % от стоимости без учета НДС, в том числе которая может использоваться при дифференцированном посеве, обработке почв, внесении удобрений, опрыскивании сорняков</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Белгородская область</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Ведомственная целевая программа «О развитии сельскохозяйственной кооперации в Белгородской области на 2015–2020 гг.»</td>
<td>С 2015 г.</td>
</tr>
<tr>
<td>Государственная программа Белгородской области «Развитие сельского хозяйства рыболовства в Белгородской области 2015–2020 гг.», утвержденная постановлением Правительства Белгородской области от 28.10.2013 № 439-пп</td>
<td>С 2015 г.</td>
</tr>
<tr>
<td>Долгосрочная целевая программа «Оздоровление хозяйств всех форм собственности от заболевания лейкозом КРС в Белгородской области на 2016–2020 гг.»</td>
<td>С 2016 г.</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Костромская область</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>В рамках мероприятия «Приобретение сельскохозяйственной техники и оборудования, в том числе по договорам финансовой аренды (лизинга)» подпрограммы «Техническая и технологическая модернизация, инновационное развитие агропромышленного комплекса» государственной программы Костромской области «Развитие сельского хозяйства и регулирование рынков сельскохозяйственной продукции, сырья и продовольствия<br />
в Костромской области», утвержденной постановлением администрации Костромской области от 27 августа № 354-а, предоставляются субсидии<br />
в размере от 10 до 40 %</td>
<td>Без срока действия</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Московская область</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Постановление Правительства Московской области от 09.10.2018<br />
№ 727/36. Государственная программа Московской области «Сельское хозяйство Подмосковья». Возмещение части затрат (50 % стоимости) на приобретение: климатического оборудования, автоматических систем управления стадом, включая программное обеспечение; роботизированных доильных систем</td>
<td>С 2017 г.</p>
<p>ежегодно</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Нижегородская область</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Постановление Правительства Нижегородской области от 15.12.2015<br />
№ 834 «Об утверждении положения о порядке предоставления субсидий на возмещение части затрат на приобретение оборудования и техники». Возмещение от 20 до 50 % стоимости техники</td>
<td>С 2018 г. ежегодно</td>
</tr>
<tr>
<td>Постановление Правительства Нижегородской области от 10.11.2015<br />
№ 729 «О порядке предоставления субсидий на возмещение части затрат на приобретение оборудования и техники для производства продукции льноводства». Возмещение от 10 до 75 % стоимости техники</td>
<td>С 2015 г. ежегодно</td>
</tr>
<tr>
<td>Постановление Правительства Нижегородской области от 02.11.2012<br />
№ 781 «Об утверждении положений по финансовой поддержке агропромышленного комплекса нижегородской области». Возмещение части процентной ставки при приобретении техники в кредитных организациях.<br />
В рамках вышеуказанных мер государственной поддержки сельхозтоваропроизводители области могут приобретать современную сельскохозяйственную технику, в том числе и оснащенную оборудованием точного земледелия</td>
<td>С 2012 г. ежегодно</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Новосибирская область</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Государственная программа Новосибирской области «Развитие сельского хозяйства и регулирование рынков сельскохозяйственной продукции, сырья и продовольствия в Новосибирской области» (утверждена постановлением правительства Новосибирской области от 02.02.2015 № 37-п):</p>
<p>– Возмещение части затрат на приобретение и технический сервис технических средств и оборудования для сельскохозяйственного производства: от 20 до 50 %, от 5 до 10 млн на единицу техники (тракторы с мощностью двигателя свыше 59 кВт (80 л. с.); сеялки, посевные комплексы; зерноуборочные, кормоуборочные, картофелеуборочные, льноуборочные комбайны; машины и оборудование для послеуборочной обработки зерна, зерносушилки; самоходные косилки; техника для кормопроизводства; машины для обработки почвы; машины и установки для внесения удобрений и средств защиты растений; машины для внесения органических удобрений; системы параллельного вождения с функциями автоматического управления технологическим процессом в растениеводстве; мобильные кормораздатчики измельчители-смесители, оборудование для приготовления экстрадированных кормов; жатки; комплекты молокопроводов; доильные установки; охладители молока; машины для сбора плодов и ягод; модульные мини-цеха, комплекты оборудования для мини-цехов по убою скота мощностью до 7 гол. в смену; погрузчики самоходные)</td>
<td>С 2015 г. ежегодно</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Рязанская область</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Постановление Правительства № 367-П «О Порядке предоставления в 2017–2020 гг. сельскохозяйственным товаропроизводителям субсидий на возмещение части затрат на приобретение сельскохозяйственной техники».</p>
<p>Возмещение части затрат (20 % стоимости) на приобретение: оборудование системы точного земледелия (спутниковые станции навигации, бортовые компьютеры (мониторы), элементы системы параллельного вождения и автопилотирования (курсоуказатели, подруливающие устройства, автопилоты), бортовые датчики точного внесения удобрений, мониторинга урожая, измерения свойств почвы</td>
<td>С 2017 г.</p>
<p>ежегодно</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Смоленская область</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Областная государственная программа «Развитие сельского хозяйства и регулирование рынков сельскохозяйственной продукции, сырья и продовольствия в Смоленской области» на 2014–2020 гг., утвержденная постановлением Администрации Смоленской области от 20.11.2013 № 928.</p>
<p>Возмещение части затрат на приобретение: систем управления стадом –<br />
до 140 тыс. руб., автоматических доильных систем – до 1750 тыс. руб.</td>
<td>С 2017 г.</p>
<p>ежегодно</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Тамбовская область</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Постановление Правительства № 367-П «О Порядке предоставления в 2017–2020 годах сельскохозяйственным товаропроизводителям субсидий на возмещение части затрат на приобретение сельскохозяйственной техники».</p>
<p>Возмещение части затрат (20 % стоимости) на приобретение: оборудование системы точного земледелия (спутниковые станции навигации, бортовые компьютеры (мониторы), элементы системы параллельного вождения и автопилотирования (курсоуказатели, подруливающие устройства, автопилоты), бортовые датчики точного внесения удобрений, мониторинга урожая, измерения свойств почвы</td>
<td>С 2017 г. ежегодно</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Тверская область</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Постановление Правительства Тверской области от 06.06.2017 № 171-пп «Возмещение части затрат за приобретенную машиностроительную продукцию». Ставка 10 % от стоимости приобретенной в текущем году машиностроительной продукции (без учета НДС)</td>
<td>2017–<br />
2019 гг.</td>
</tr>
<tr>
<td>Постановление Правительства Тверской области от 25.04.2017 № 112-пп «Возмещение части затрат на приобретение технологического оборудования для объектов молочного скотоводства». Ставка 20 % от фактических затрат (без НДС) за приобретенное в отчетном и (или) текущем году<br />
(в том числе по лизингу) новое (не бывшее в эксплуатации) оборудование для объектов молочного скотоводства</td>
<td>2017–<br />
2019 гг.</td>
</tr>
<tr>
<td>Постановление Правительства Тверской области от 25.10.2017 № 355-пп «Возмещение части затрат на приобретение специализированного оборудования для глубокой переработки молока» ставка 50 % от фактических затрат (без НДС) за приобретенное в отчетном и (или) текущем году<br />
(в том числе по лизингу) новое (не бывшее в эксплуатации) специализированное оборудование для глубокой переработки молока</td>
<td>2017–<br />
2019 гг.</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Тюменская область</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Порядок предоставления субсидий из средств областного бюджета на техническое и технологическое оснащение и перевооружение в агропромышленном комплексе Тюменской области, утвержденный Постановление правительства Тюменской области от 21.02.2017 № 70-п «Об утверждении Положений о порядках предоставления средств областного бюджета на государственную поддержку сельскохозяйственного производства и о внесении изменений в постановление от 14.05.2012 № 180-п»</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Хабаровский край</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Постановление правительства Хабаровского края от 26.10.2016 № 382-пр «Об утверждении Порядка и условий предоставления субсидий сельскохозяйственным товаропроизводителям Хабаровского края на возмещение части прямых понесенных затрат на приобретение сельскохозяйственной техники»</p>
<p>Возмещение части затрат (до 50 % стоимости) на приобретение: оборудование системы точного земледелия (спутниковые станции навигации, бортовые компьютеры (мониторы), элементы системы параллельного вождения и автопилотирования (курсоуказатели, подруливающие устройства, автопилоты), бортовые датчики точного внесения удобрений, мониторинга урожая, измерения свойств почвы</td>
<td>С 2016 г. ежегодно</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Ярославская область</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>ОЦП Развитие агропромышленного комплекса Ярославской области на 2014–2020 гг., постановление Правительства ЯО от 17.03.2014 № 221-п «Об утверждении областной целевой программы &#171;Развитие агропромышленного комплекса ЯО&#187; на 2014–2020 годы»; постановлением правительства области от 31.01.2011 № 32-п «О Порядке предоставления из областного и федерального бюджетов субсидий на возмещение части прямых понесенных затрат на создание и модернизацию объектов агропромышленного комплекса, а также на приобретение техники и оборудования». Возмещение части затрат (20 % стоимости) на приобретение: посевные комплексы</td>
<td>2014–<br />
2020 гг.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Выводы</strong></p>
<p>Рейтинги составлены на основе данных, полученных из 64 регионов по точному земледелию, 68 регионов по точному животноводству.</p>
<p>1. Элементы точного земледелия используются в 55 регионах, 2834 хозяйствах на площади 15,5 млн га (2019–2020 гг.). Точное земледелие используется в 10 % хозяйств из проанализированных регионов.</p>
<p>В 2018 г. проанализировано – 52 региона, элементы точного земледелия использовались в 40 регионах, 1930 хозяйствах на площади 12,5 млн га.</p>
<p>Повысилось количество регионов, использующих новые технологии<br />
в растениеводстве, – на 38 %; хозяйств – на 47 %; общая площадь, на которой применяются элементы точного земледелия – на 24 %.</p>
<p>По результатам анализа использования элементов точного земледелия<br />
в лидерах находятся Волгоградская область (257 хозяйств), Краснодарский край (250 хозяйств), Воронежская область (211 хозяйств). Конкурируют по показателю общей площади, на которой используются элементы точного земледелия – Воронежская область (1,33 млн га), Краснодарский край<br />
(1,22 млн га), Волгоградская область (1,2 млн га).</p>
<p>В Краснодарском крае количество хозяйство увеличилось на 32 %, Воронежской области – на 16 %.</p>
<p>Площадь, на которой используются элементы точного земледелия, в Воронежской области увеличилась на 18 %, в Краснодарском крае – на 27 %.</p>
<p>2. Элементы точного животноводства используются в 58 регионах,<br />
1707 с общим поголовьем 3 млн (2019–2020 гг.). Точное животноводство используется в 13 % хозяйств из проанализированных регионов.</p>
<p>В 2018 г. проанализировано – 46 регионов, элементы точного животноводства использовались в 35 регионах, 789 хозяйствах с общим поголовьем 1,7 млн.</p>
<p>Повысилось количество регионов, использующих новые технологии<br />
в животноводстве в 1,7 раза; хозяйств – в 2,2 раза; поголовье КРС в хозяйствах, использующих элементы точного животноводства по регионам – в 1,8 раза.</p>
<p>По количеству хозяйств, использовавших элементы точного животноводства доминируют Удмуртская республика (123 хозяйства), Кировская область (92 хозяйства), Алтайский край (88 хозяйств); по поголовью КРС– Краснодарский край (212 тыс.), Свердловская область (188 тыс.), Удмуртская Республика (166 тыс.).</p>
<p>В Удмуртской Республике количество хозяйство увеличилось<br />
в 1,7 раз.</p>
<p>По поголовью КРС увеличилось в Краснодарском крае в 2,7 раза, Свердловской области в 1,2 раза, Удмуртской Республике – 1,9 раза.</p>
<p>3. По повышению квалификации работников лидируют Ленинградская область (67 хозяйств), Московская область (47 хозяйств), Краснодарский край (46 хозяйств); Белгородская область (258 человек), Калужская область (238 человек), Краснодарский край (234 человека).</p>
<p>4. Программы по развитию, поддержке и внедрению элементов точного сельского хозяйства используются в 12 регионах: Архангельской, Белгородской, Костромской, Московской, Нижегородской, Новосибирской, Рязанской, Смоленской, Тамбовской, Тверской, Ярославской областях и Хабаровском крае.</p>
<h2><strong>3 РЕЗУЛЬТАТЫ АНКЕТИРОВАНИЯ В ОБЛАСТИ<br />
ЦИФРОВОГО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА</strong></h2>
<p>Центром прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ в сентябре–октябре 2020 г. проведено анкетирование по направлению, связанным с цифровым сельским хозяйством.</p>
<p>В анкетировании приняли участие 81 эксперт (56 % категории «наука<br />
и образование», 26 % – бизнес, 11 % – административные органы; 7 % – другие) из Германии; Анголы; Москвы и Московской области; Санкт-Петербурга; Краснодара и Краснодарского края; Ростова-на-Дону и Рос­товской области; Твери; Чебоксар; Ставрополя; Саратова; Нальчика; Воронежа; Волгограда; Казани; Биробиджана; Новосибирска; Оренбурга; Орла; Рязани; Екатеринбурга; Ярославля; Кемерова; Улан-Удэ; Курска; Алтайского края; Брянской, Самарской, Псковской, Ульяновской, Челя­бинской областей.</p>
<p>Среди участвующих в опросе были президент некоммерческого партнерства; председатель совета директоров; глава сельского поселения; директора – 10 человек (12 %); советник; проректора / заместители директо­ров – 5 (6 %); руководители управлений / групп / направлений / проектов – 5<br />
(6 %); деканы – 4 (5 %); заведующие кафедрой / лабораторией – 9 (11 %); профессора – 4 (5 %); доценты – 10 (12 %); начальники отделов – 5 (6 %); агрономы – 2 (2 %); главный / ведущий специалист, научный сотрудник – 4<br />
(5 %); 26 % – консультанты, менеджеры, торговые представители, член партии.</p>
<p>В первом блоке основных вопросов представлены анкеты по цифровизации сельскохозяйственных предприятий и ее связи с повышением уровня жизни, концентрацией специалистов в российских и иностранных компаниях. Второй блок вопросов связан с эффективностью использования беспилотных летательных аппаратов, спутниковых снимков NDVI, приобретения агрохимической лаборатории для хозяйства, использования азотных сканеров при внесении удобрений в режиме on-line и системы картирования урожайности. Третий блок – с актуальностью применения новинок, которые появляются на выставках и рынке.</p>
<p>Вопросы по реализации технологических трендов в 2021–2030 гг. состоят из блока анкет по технологиям точного земледелия и животноводства.</p>
<p>Анкетирование состояло из 23 основных вопросов, 17 вопросов по реализации технологических трендов в 2021–2030 гг. (11 вопросов, связанных<br />
с точным земледелием; 6 – точным животноводством) и проводилось в формате онлайн-тестирования на сайте foresight.kubsau.ru (рисунок 3.1).</p>
<p><img width="1424" height="801" class="wp-image-15873" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-952.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-952.png 1424w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-952-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-952-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-952-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1424px) 100vw, 1424px" alt="word image 952 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><img width="1428" height="803" class="wp-image-15874" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-154.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-154.jpeg 1428w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-154-300x169.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-154-1024x576.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-154-768x432.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1428px) 100vw, 1428px" alt="word image 154 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 3.1</strong> – Анкета экспертного опроса</p>
<p>Предложенные вопросы анкеты показаны в таблице 3.1.</p>
<p><strong>Таблица 3.1 </strong>– Вопросы анкеты</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th><strong>№</strong></th>
<th><strong>Вопрос</strong></th>
<th><strong>Ответ</strong></th>
<th><strong>Вариант ответа</strong></th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Как Вы считаете будут ли сельхозпредприятия, не применяющие технологии цифровой трансформации, сильно проигрывать в конкуренции более современным компаниям?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Приводит ли рост высокотехнологичных компетенций в стране к увеличению валового внутреннего продукта?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Приводит ли рост высокотехнологичных компетенций в стране к повышению уровня жизни?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Возможна ли реализация программы цифрового сельского хозяйства без субсидирования государства?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Приводит ли деиндустриализация страны<br />
к падению производительности в сельском хозяйстве?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Как Вы считаете, является ли потребностью современного сельхозмашиностроения рост роли сервисного обслуживания (техническое обслуживание, обновление и настройка программного обеспечения и т. п.)?</td>
<td rowspan="3"></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Как Вы считаете, актуален ли тренд аренды сельскохозяйственной техники на основе «времени реального использования»?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">По Вашему мнению, будет ли в рамках реализации цифрового сельского хозяйства происходить концентрация профессиональных специалистов в крупных агрохолдингах?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">По Вашему мнению, будет ли в рамках реализации цифрового сельского хозяйства происходить концентрация профессиональных специалистов в иностранных компаниях?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">По Вашему мнению, будет ли в рамках реализации цифрового сельского хозяйства происходить концентрация профессиональных специалистов в российских компаниях?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Как Вы считаете, получится ли у Минсельхоза России к 2024 г. создать цифровой сервис предоставления господдержки АПК?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Как Вы считаете, получится ли у Минсельхоза России перевести во всех регионах России до конца 2024 г. управление гидромелиоративными сооружениями с использованием государственной цифровой платформы?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Считаете ли Вы, что при внедрении технологий точного земледелия не эффективным является использование беспилотных летательных аппаратов?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Считаете ли Вы, что при внедрении технологий точного земледелия не эффективным является использование спутниковых снимков NDVI?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Считаете ли Вы, что при внедрении технологий точного земледелия не эффективным является приобретение агрохимической лаборатории для хозяйства?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Считаете ли Вы, что при внедрении технологий точного земледелия не эффективным является использование азотных сканеров при внесении удобрений в режиме on-line?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Считаете ли Вы, что при внедрении технологий точного земледелия не эффективным является начинать с системы картирования урожайности?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Является ли актуальным использование одновременного дифференцированного посева семян и дифференцированного внесения двух различных видов удобрений с индивидуальной нормой по картам-заданиям?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Является ли актуальным использование дифференцированного внесения гранулированных удобрений штанговым разбрасывателем по картам-заданиям?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Как Вы считаете новые системы земледелия (например, городские фермы вертикального типа) повышают ли эффективность производства за счет создания, не зависящих от агроклиматических факторов условий?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Актуально ли смешивание по адресному принципу «каждому полю индивидуальный подход» одно- двухкомпонентных стандартных удобрений (AN, МАР, KCl и т. п.) для внесения такого смешанного удобрения (бленда) с заданным (точным) содержанием N, P, K и в должное время?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Видите ли Вы рост потребности аграриев в использовании смешанных удобрений в течение 2–3 лет, как способа снижения себестоимости продукции растениеводства?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Видите ли Вы потребность аграриев в использовании смесей с равномерным распределением в них микроэлементов, штаммов бактерий, ингибиторов азота и т. п., добавляемых как в сухом, так и в жидком виде?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Вопросы, связанные с реализацией перспективных направлений представлены в таблице 3.2.</p>
<p>Эксперты, которые участвуют в работе центра прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ представлены в разделе <a href="http://foresight.kubsau.ru/experts/" target="_blank" rel="noopener">http://foresight.kubsau.ru/experts/</a> (рисунок 3.3).</p>
<p>Анализируя полученные результаты можно констатировать, что сельхозпредприятия, не применяющие технологии цифровой трансформации, будут сильно проигрывать в конкуренции более современным компаниям –считают 91 % экспертов (рисунок 3.4). Такой же процент опрошенных считают, что рост высокотехнологичных компетенций в стране приводит к увеличению валового внутреннего продукта, а к повышению уровня жизни – 78 %.</p>
<p><strong>Таблица 3.2</strong> – Вопросы по реализации перспективных направлений</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Наименование перспективного направления</td>
<td colspan="4">Важность</p>
<p>для РФ</td>
<td colspan="4">Ожидаемые сроки<br />
выполнения</td>
</tr>
<tr>
<td>высокая</td>
<td>средняя</td>
<td>низкая</td>
<td>не актуально</td>
<td>2021–2025</td>
<td>2026–2030</td>
<td>после 2030</td>
<td>не выполнится</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="9"><strong>Точное земледелие</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>1. Оцифровка полей</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>2. Параллельное вождение</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>3. Спутниковый мониторинг транспортных средств</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>4. Дифференцированное опрыскивание сорняков</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>5. Дифференцированное внесение удобрений</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>6. Дифференцированный посев</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>7. Дифференцированное орошение</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>8. Дифференцированная обработка почвы по почвенным картам</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>9. Мониторинг состояния посевов с использованием дистанционного зондирования (аэро- или спутниковая фотосъемки)</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>10. Составление цифровых карт урожайности</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>11. Составление карт электропроводности почв</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="9"><strong>Точное животноводство</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>1. Мониторинг качества продукции животноводства</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>2. Электронная база данных производственного процесса</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>3. Идентификация и мониторинг отдельных особей животных с использованием современных информационных технологий (рацион кормления, удой, привес, температура тела, активность), удовлетворение их индивидуальных потребностей</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>4. Мониторинг состояния здоровья стада</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>5. Роботизация процесса доения</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>6. Автоматическое регулирование микроклимата и контроль за вредными газами в животноводческих помещениях</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-15875" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-953.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-953.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-953-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-953-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-953-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-953-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 953 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 3.3</strong> – Эксперты центра прогнозирования и мониторинга</p>
<p>63 % опрошенных полагают, что не возможна реализация программы цифрового сельского хозяйства без субсидирования государства, а 29 % – наоборот.</p>
<p>На вопрос «Приводит ли деиндустриализация страны к падению производительности в сельском хозяйстве» эксперты ответили: 67 % – да, 11 % – нет, 22 % – затрудняются.</p>
<p>Потребностью современного сельхозмашиностроения является рост роли сервисного обслуживания (техническое обслуживание, обновление<br />
и настройка программного обеспечения и т. п.) полагают 90 % экспертов.</p>
<p>В настоящее время на разных уровнях обсуждается тренд аренды сельскохозяйственной техники на основе «времени реального использования». Опрос специалистов, следующий: 62 % – согласны, 12 % – не согласны,<br />
26 % – затрудняются.</p>
<p>Кадровый вопрос остается одним из самых болезненных для большинства сельхозпредприятий. В рамках реализации цифрового сельского хозяйства будет происходить концентрация профессиональных специалистов<br />
в крупных агрохолдингах считают 79 % респондентов, в иностранных компаниях – 46 %, в российских компаниях – 66 %.</p>
<p>В рамках Дня российского поля 2020 в Брянской области Минсельхозом России заявлено о создании информационной системы цифровых сервисов, которая позволит перевести полностью в электронный вид предоставление господдержки АПК, исключить из него человеческий фактор (mcx.gov.ru).<br />
В следующем году этот проект стартует в девяти пилотных регионах. Ожидается, что к концу 2024 г. все входящие в сферу полномочий Минсельхоза госуслуги будут оказываться в электронном виде.</p>
<p>В будущем году также во всех регионах станет доступна система мониторинга мелиоративного комплекса, а к 2024 г. запланировано, что все гидромелиоративные сооружения будут управляться на базе государственной цифровой платформы.</p>
<p>Результаты опроса по данным вопросам:</p>
<p>– получится к 2024 г. создать цифровой сервис предоставления господдержки АПК: да – 36 %, нет – 23 %, 41 % – затрудняются;</p>
<p>– получится перевести во всех регионах России до конца 2024 г. управление гидромелиоративными сооружениями с использованием государственной цифровой платформы: да – 16 %, нет – 37 %, затрудняюсь – 47 %.</p>
<p>Следующие вопросы связаны с эффективностью использования элементов точного земледелия:</p>
<p>– беспилотных летательных аппаратов: 70 % – да; 19 % – нет;</p>
<p>– спутниковых снимков NDVI: 64 % – да; 21 % – нет, 15 % – затрудняются;</p>
<p>– приобретением агрохимической лаборатории: 66 % – да, 25 % – нет,<br />
9 % – затрудняются;</p>
<p>– использованием азотных сканеров при внесении удобрений в режиме on-line: 65 % – да, 17 % – нет, 18 % – затрудняются;</p>
<p>– начинать с системы картирования урожайности: да – 65 %, нет – 24 %, 11 % – затрудняются.</p>
<p>Далее ряд вопросов связаны с использования новинок, которые появляются на выставках и рынке актуальными считают:</p>
<p>– одновременного дифференцированного посева семян и дифференцированного внесения двух различных видов удобрений с индивидуальной нормой по картам-заданиям – 76 % экспертов;</p>
<p>– дифференцированного внесения гранулированных удобрений штанговым разбрасывателем по картам-заданиям – 63 %;</p>
<p>– использования новых систем земледелия (например, городских ферм вертикального типа), которые повышают эффективность производства за счет создания, не зависящих от агроклиматических факторов условий – 65 %;</p>
<p>– смешивания по адресному принципу «каждому полю индивидуальный подход» одно-двухкомпонентных стандартных удобрений (AN, МАР, KCl) для внесения такого смешанного удобрения (бленда) с заданным содержанием N, P, K и в должное время – 68 %;</p>
<p>– ростом потребности аграриев в использовании смешанных удобрений в течение 2–3 лет, как способа снижения себестоимости продукции растениеводства – 56 %;</p>
<p>– потребности аграриев в использовании смесей с равномерным распределением в них микроэлементов, штаммов бактерий, ингибиторов азота<br />
и т. п., добавляемых как в сухом, так и в жидком виде – 51 %.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><em>Как Вы считаете, будут<br />
ли сельхозпредприятия,<br />
не применяющие технологии цифровой трансформации, сильно проигрывать<br />
в конкуренции более<br />
современным компаниям?</em></td>
<td><em>Приводит ли рост<br />
высокотехнологичных<br />
компетенций в стране<br />
к увеличению валового<br />
внутреннего продукта?</em></td>
<td><em>Приводит ли рост<br />
высокотехнологичных<br />
компетенций в стране<br />
к повышению уровня жизни?</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><img width="616" height="390" class="wp-image-15876" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-954.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-954.png 616w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-954-300x190.png 300w" sizes="(max-width: 616px) 100vw, 616px" alt="word image 954 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>5 %</strong></p>
<p><strong>4 %</strong></p>
<p><strong>91 %</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Да</strong></td>
<td><img width="616" height="390" class="wp-image-15877" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-955.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-955.png 616w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-955-300x190.png 300w" sizes="(max-width: 616px) 100vw, 616px" alt="word image 955 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>5 %</strong></p>
<p><strong>4 %</strong></p>
<p><strong>91 %</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Да</strong></td>
<td><img width="616" height="391" class="wp-image-15878" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-956.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-956.png 616w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-956-300x190.png 300w" sizes="(max-width: 616px) 100vw, 616px" alt="word image 956 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>16 %</strong></p>
<p><strong>6 %</strong></p>
<p><strong>78 %</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Да</strong></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><em>Возможна ли реализация программы цифрового<br />
сельского хозяйства<br />
без субсидирования<br />
государства?</em></td>
<td><em>Приводит ли<br />
деиндустриализация<br />
страны к падению<br />
производительности<br />
в сельском хозяйстве?</em></td>
<td><em>Как Вы считаете,<br />
является ли потребностью современного сельхозмашиностроения рост роли<br />
сервисного обслуживания (техническое обслуживание, обновление и настройка программного обеспечения<br />
и т. п.)?</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><img width="617" height="390" class="wp-image-15879" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-957.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-957.png 617w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-957-300x190.png 300w" sizes="(max-width: 617px) 100vw, 617px" alt="word image 957 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Да</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>8 %</strong></p>
<p><strong>63 %</strong></p>
<p><strong>29 %</strong></td>
<td><img width="619" height="395" class="wp-image-15880" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-958.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-958.png 619w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-958-300x191.png 300w" sizes="(max-width: 619px) 100vw, 619px" alt="word image 958 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>67 %</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Да</strong></p>
<p><strong>22 %</strong></p>
<p><strong>11 %</strong></td>
<td><img width="615" height="389" class="wp-image-15881" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-959.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-959.png 615w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-959-300x190.png 300w" sizes="(max-width: 615px) 100vw, 615px" alt="word image 959 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>6 %</strong></p>
<p><strong>4 %</strong></p>
<p><strong>90 %</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Да</strong></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><em>Как Вы считаете, актуален ли тренд аренды сельскохозяйственной техники на<br />
основе «времени реального использования»?</em></td>
<td><em>По Вашему мнению, будет ли в рамках реализации<br />
цифрового сельского<br />
хозяйства происходить концентрация<br />
профессиональных<br />
специалистов в крупных<br />
агрохолдингах?</em></td>
<td><em>По Вашему мнению, будет ли в рамках реализации цифрового сельского<br />
хозяйства происходить концентрация профессиональных специалистов<br />
в иностранных компаниях?</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><img width="617" height="391" class="wp-image-15882" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-960.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-960.png 617w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-960-300x190.png 300w" sizes="(max-width: 617px) 100vw, 617px" alt="word image 960 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>62 %</strong></p>
<p><strong>26 %</strong></p>
<p><strong>12 %</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Да</strong></td>
<td><img width="618" height="390" class="wp-image-15883" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-961.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-961.png 618w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-961-300x189.png 300w" sizes="(max-width: 618px) 100vw, 618px" alt="word image 961 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>11 %</strong></p>
<p><strong>10 %</strong></p>
<p><strong>79 %</strong></p>
<p><strong>Да</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></td>
<td><img width="540" height="344" class="wp-image-15884" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-962.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-962.png 540w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-962-300x191.png 300w" sizes="(max-width: 540px) 100vw, 540px" alt="word image 962 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>26 %</strong></p>
<p><strong>28 %</strong></p>
<p><strong>46 %</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Да</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><em>По Вашему мнению, будет ли в рамках реализации цифрового сельского<br />
хозяйства происходить концентрация профессиональных специалистов<br />
в российских компаниях?</em></td>
<td><em>Как Вы считаете,<br />
получится ли у Минсельхоза России к 2024 г. создать цифровой сервис<br />
предоставления<br />
господдержки АПК?</em></td>
<td><em>Как Вы считаете,<br />
получится ли у Минсельхоза России перевести во всех регионах России до конца 2024 г. управление гидромелиоративными сооружениями с использованием<br />
государственной цифровой платформы?</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><img width="538" height="344" class="wp-image-15885" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-963.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-963.png 538w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-963-300x192.png 300w" sizes="(max-width: 538px) 100vw, 538px" alt="word image 963 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>23 %</strong></p>
<p><strong>11 %</strong></p>
<p><strong>66 %</strong></p>
<p><strong>Да</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></td>
<td><img width="541" height="344" class="wp-image-15886" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-964.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-964.png 541w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-964-300x191.png 300w" sizes="(max-width: 541px) 100vw, 541px" alt="word image 964 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>41 %</strong></p>
<p><strong>23 %</strong></p>
<p><strong>36 %</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Да</strong></td>
<td><img width="542" height="346" class="wp-image-15887" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-965.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-965.png 542w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-965-300x192.png 300w" sizes="(max-width: 542px) 100vw, 542px" alt="word image 965 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>47 %</strong></p>
<p><strong>37 %</strong></p>
<p><strong>16 %</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Да</strong></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><em>Считаете ли Вы, что при внедрении технологий точного земледелия не эффективным является использование беспилотных летательных аппаратов?</em></td>
<td><em>Считаете ли Вы, что при внедрении технологий точного земледелия не эффективным является использование спутниковых снимков NDVI?</em></td>
<td><em>Считаете ли Вы, что при внедрении технологий точного земледелия не эффективным является приобретение агрохимической лаборатории для хозяйства?</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><img width="541" height="341" class="wp-image-15888" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-966.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-966.png 541w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-966-300x189.png 300w" sizes="(max-width: 541px) 100vw, 541px" alt="word image 966 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>70 %</strong></p>
<p><strong>11 %</strong></p>
<p><strong>19 %</strong></p>
<p><strong>Да</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></td>
<td><img width="543" height="343" class="wp-image-15889" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-967.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-967.png 543w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-967-300x190.png 300w" sizes="(max-width: 543px) 100vw, 543px" alt="word image 967 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>64 %</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>15 %</strong></p>
<p><strong>21 %</strong></p>
<p><strong>Да</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></td>
<td><img width="540" height="341" class="wp-image-15890" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-968.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-968.png 540w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-968-300x189.png 300w" sizes="(max-width: 540px) 100vw, 540px" alt="word image 968 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>66 %</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>9 %</strong></p>
<p><strong>25 %</strong></p>
<p><strong>Да</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><em>Считаете ли Вы, что при внедрении технологий<br />
точного земледелия не<br />
эффективным является<br />
использование азотных<br />
сканеров при внесении<br />
удобрений в режиме on-line?</em></td>
<td><em>Считаете ли Вы, что при внедрении технологий<br />
точного земледелия не<br />
эффективным является начинать с системы картирования урожайности?</em></td>
<td><em>Является ли актуальным использование одновременного дифференцированного посева семян и дифференцированного внесения двух различных видов удобрений<br />
с индивидуальной нормой<br />
по картам-заданиям?</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><img width="539" height="342" class="wp-image-15891" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-969.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-969.png 539w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-969-300x190.png 300w" sizes="(max-width: 539px) 100vw, 539px" alt="word image 969 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>65 %</strong></p>
<p><strong>18 %</strong></p>
<p><strong>17 %</strong></p>
<p><strong>Да</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></td>
<td><img width="540" height="341" class="wp-image-15892" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-970.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-970.png 540w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-970-300x189.png 300w" sizes="(max-width: 540px) 100vw, 540px" alt="word image 970 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>11 %</strong></p>
<p><strong>65 %</strong></p>
<p><strong>24 %</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Да</strong></td>
<td><img width="541" height="342" class="wp-image-15893" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-971.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-971.png 541w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-971-300x190.png 300w" sizes="(max-width: 541px) 100vw, 541px" alt="word image 971 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>19 %</strong></p>
<p><strong>5 %</strong></p>
<p><strong>76 %</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>Да</strong></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><em>Является ли актуальным использование дифференцированного внесения гранулированных удобрений штанговым разбрасывателем<br />
по картам-заданиям?</em></td>
<td><em>Как Вы считаете новые<br />
системы земледелия (например, городские фермы вертикального типа)<br />
повышают ли эффективность производства за счет создания, не зависящих от агроклиматических<br />
факторов условий?</em></td>
<td><em>Актуально ли смешивание по адресному принципу «каждому полю индивидуальный подход» одно-двухкомпонентных стандартных удобрений (AN, МАР, KCl) для внесения такого смешанного удобрения (бленда) с заданным содержанием N, P, K и в должное время?</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><img width="543" height="348" class="wp-image-15894" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-972.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-972.png 543w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-972-300x192.png 300w" sizes="(max-width: 543px) 100vw, 543px" alt="word image 972 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>63 %</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>29 %</strong></p>
<p><strong>8 %</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Да</strong></td>
<td><img width="542" height="343" class="wp-image-15895" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-973.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-973.png 542w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-973-300x190.png 300w" sizes="(max-width: 542px) 100vw, 542px" alt="word image 973 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>25 %</strong></p>
<p><strong>10 %</strong></p>
<p><strong>65 %</strong></p>
<p><strong>Да</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></td>
<td><img width="542" height="344" class="wp-image-15896" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-974.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-974.png 542w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-974-300x190.png 300w" sizes="(max-width: 542px) 100vw, 542px" alt="word image 974 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>23 %</strong></p>
<p><strong>9 %</strong></p>
<p><strong>68 %</strong></p>
<p><strong>Да</strong></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><em>Видите ли Вы рост потребности аграриев в использовании смешанных удобрений в течение 2–3 лет, как способа снижения себестоимости продукции растениеводства?</em></td>
<td><em>Видите ли Вы потребность аграриев в использовании смесей с равномерным распределением в них микроэлементов, штаммов бактерий, ингибиторов азота и т. п., добавляемых как в сухом, так и в жидком виде?</em></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><img width="541" height="345" class="wp-image-15897" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-975.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-975.png 541w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-975-300x191.png 300w" sizes="(max-width: 541px) 100vw, 541px" alt="word image 975 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>33 %</strong></p>
<p><strong>11 %</strong></p>
<p><strong>56 %</strong></p>
<p><strong>Да</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></td>
<td><img width="540" height="345" class="wp-image-15898" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-976.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-976.png 540w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-976-300x192.png 300w" sizes="(max-width: 540px) 100vw, 540px" alt="word image 976 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Нет</strong></p>
<p><strong>44 %</strong></p>
<p><strong>Затрудняюсь</strong></p>
<p><strong>5 %</strong></p>
<p><strong>51 %</strong></p>
<p><strong>Да</strong></td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Рисунок 3.4</strong> – Результаты экспертного опроса</p>
<p>Перспективы реализации технологических трендов по важности<br />
и ожидаемым срокам выполнения представлены в таблице 3.3.</p>
<p>Представленные элементы точного земледелия эксперты относят к высокой важности для реализации в 2021–2030 гг. (по убыванию в процентном соотношении):</p>
<p>– оцифровка полей и дифференцированное внесение удобрений (считают важным 83 % экспертов);</p>
<p>– мониторинг состояния посевов с использованием дистанционного зондирования (аэро- или спутниковая фотосъемки) – 77 %;</p>
<p>– дифференцированное опрыскивание сорняков (76 %);</p>
<p>– составление цифровых карт урожайности (74 %);</p>
<p>– спутниковый мониторинг транспортных средств (73 %);</p>
<p>– параллельное вождение (70 %);</p>
<p>– дифференцированный посев (67 %);</p>
<p>– дифференцированное орошение (62 %);</p>
<p>– дифференцированная обработка почвы по почвенным картам (61 %);</p>
<p>– составление карт электропроводности почв (47 %).</p>
<p><strong>Таблица 3.3</strong> – Реализации перспективных направлений (в процентах)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Наименование перспективного направления</td>
<td colspan="4">Важность<br />
для РФ</td>
<td colspan="4">Ожидаемые сроки выполнения</td>
</tr>
<tr>
<td>высокая</td>
<td>средняя</td>
<td>низкая</td>
<td>не актуально</td>
<td>2021–2025</td>
<td>2026–2030</td>
<td>после 2030</td>
<td>не выполнится</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="9"><strong>Точное земледелие</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>1. Оцифровка полей</td>
<td><strong>83</strong></td>
<td>14</td>
<td>3</td>
<td>–</td>
<td>38</td>
<td><strong>47</strong></td>
<td>12</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>2. Параллельное вождение</td>
<td><strong>70</strong></td>
<td>28</td>
<td>2</td>
<td>–</td>
<td><strong>45</strong></td>
<td>37</td>
<td>15</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>3. Спутниковый мониторинг транспортных средств</td>
<td><strong>73</strong></td>
<td>23</td>
<td>3</td>
<td>1</td>
<td><strong>56</strong></td>
<td>30</td>
<td>13</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>4. Дифференцированное опрыскивание сорняков</td>
<td><strong>76</strong></td>
<td>17</td>
<td>6</td>
<td>1</td>
<td>31</td>
<td><strong>45</strong></td>
<td>19</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>5. Дифференцированное внесение удобрений</td>
<td><strong>83</strong></td>
<td>17</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>41</td>
<td><strong>45</strong></td>
<td>10</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>6. Дифференцированный посев</td>
<td><strong>67</strong></td>
<td>25</td>
<td>5</td>
<td>3</td>
<td>36</td>
<td><strong>39</strong></td>
<td>17</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td>7. Дифференцированное орошение</td>
<td><strong>62</strong></td>
<td>35</td>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>25</td>
<td><strong>46</strong></td>
<td>23</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>8. Дифференцированная обработка почвы по почвенным картам</td>
<td><strong>61</strong></td>
<td>28</td>
<td>8</td>
<td>3</td>
<td>25</td>
<td><strong>42</strong></td>
<td>25</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td>9. Мониторинг состояния посевов с использованием<br />
дистанционного зондирования (аэро- или спутниковая<br />
фотосъемки)</td>
<td><strong>77</strong></td>
<td>21</td>
<td>2</td>
<td>–</td>
<td><strong>72</strong></td>
<td>23</td>
<td>3</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>10. Составление цифровых карт урожайности</td>
<td><strong>74</strong></td>
<td>23</td>
<td>3</td>
<td>–</td>
<td>30</td>
<td><strong>49</strong></td>
<td>18</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>11. Составление карт электропроводности почв</td>
<td><strong>47</strong></td>
<td>31</td>
<td>17</td>
<td>5</td>
<td>21</td>
<td><strong>38</strong></td>
<td>25</td>
<td>16</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="9"><strong>Точное животноводство</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>1. Мониторинг качества продукции животноводства</td>
<td><strong>83</strong></td>
<td>15</td>
<td>2</td>
<td>–</td>
<td><strong>44</strong></td>
<td>33</td>
<td>17</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>2. Электронная база данных производственного процесса</td>
<td><strong>73</strong></td>
<td>21</td>
<td>1</td>
<td>5</td>
<td>30</td>
<td><strong>46</strong></td>
<td>18</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>3. Идентификация и мониторинг отдельных особей животных<br />
с использованием современных информационных технологий (рацион кормления, удой, привес, температура тела,<br />
активность), удовлетворение их индивидуальных потребностей</td>
<td><strong>76</strong></td>
<td>21</td>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>32</td>
<td><strong>44</strong></td>
<td>21</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>4. Мониторинг состояния здоровья стада</td>
<td><strong>85</strong></td>
<td>12</td>
<td>2</td>
<td>1</td>
<td><strong>41</strong></td>
<td>34</td>
<td>22</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>5. Роботизация процесса доения</td>
<td><strong>65</strong></td>
<td>29</td>
<td>4</td>
<td>2</td>
<td><strong>40</strong></td>
<td>31</td>
<td>19</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>6. Автоматическое регулирование микроклимата и контроль за вредными газами в животноводческих помещениях</td>
<td><strong>71</strong></td>
<td>25</td>
<td>3</td>
<td>1</td>
<td>36</td>
<td><strong>43</strong></td>
<td>13</td>
<td>8</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Представленные элементы точного животноводства эксперты также относят к высокой важности для реализации в 2021–2030 гг. (по убыванию<br />
в процентном соотношении):</p>
<p>– мониторинг состояния здоровья стада (85 %);</p>
<p>– мониторинг качества продукции животноводства (83 %);</p>
<p>– идентификация и мониторинг отдельных особей животных с использованием современных информационных технологий (рацион кормления, удой, привес, температура тела, активность), удовлетворение их индивидуальных потребностей (76 %);</p>
<p>– электронная база данных производственного процесса (73 %);</p>
<p>– автоматическое регулирование микроклимата и контроль за вредными газами в животноводческих помещениях (71 %);</p>
<p>– роботизация процесса доения (65 %).</p>
<p>Обобщая результаты по предполагаемым срокам использования элементов точного земледелия в 2021–2025 гг. на основании экспертного опроса получили (по убыванию в процентном соотношении):</p>
<p>– мониторинг состояния посевов с использованием дистанционного зондирования (аэро- или спутниковая фотосъемки) – считают 72 % экспертов;</p>
<p>– спутниковый мониторинг транспортных средств (56 %);</p>
<p>– параллельное вождение (45 %).</p>
<p>Предполагаемые сроки использования элементов точного земледелия<br />
в 2026–2030 гг. на основании экспертного опроса получили (по убыванию<br />
в процентном соотношении):</p>
<p>– составление цифровых карт урожайности (49 %);</p>
<p>– оцифровка полей (47 %);</p>
<p>– дифференцированное орошение (46 %);</p>
<p>– дифференцированное внесение удобрений (45 %);</p>
<p>– дифференцированное опрыскивание сорняков (45 %);</p>
<p>– дифференцированная обработка почвы по почвенным картам (42 %);</p>
<p>– дифференцированный посев (39 %);</p>
<p>– составление карт электропроводности почв (38 %).</p>
<p>Обобщая результаты по предполагаемым срокам использования элементов точного животноводства в 2021–2025 гг. на основании экспертного опроса получили (по убыванию в процентном соотношении):</p>
<p>– мониторинг качества продукции животноводства (44 %);</p>
<p>– мониторинг состояния здоровья стада (41 %);</p>
<p>– роботизация процесса доения (40 %).</p>
<p>Предполагаемые сроки использования элементов точного животноводства в 2026–2030 гг. на основании экспертного опроса получили (по убыванию в процентном соотношении):</p>
<p>– электронная база данных производственного процесса (46 %);</p>
<p>– идентификация и мониторинг отдельных особей животных с использованием современных информационных технологий (рацион кормления, удой, привес, температура тела, активность), удовлетворение их индивидуальных потребностей (44 %);</p>
<p>– автоматическое регулирование микроклимата и контроль за вредными газами в животноводческих помещениях (43 %).</p>
<p><strong>Выводы</strong></p>
<p>На основании проведенного анкетирования, связанного с вопросами цифровой трансформации сельского хозяйства, можно констатировать, что сельхозпредприятия, не применяющие технологии цифровой трансформации, будут проигрывать в конкуренции более современным компаниям.</p>
<p>При этом рост высокотехнологичных компетенций в стране способствует повышению уровня жизни.</p>
<p>Без субсидирования государства реализация программы цифрового сельского хозяйства будет затруднительна.</p>
<p>Деиндустриализация страны приводит к падению производительности<br />
в сельском хозяйстве.</p>
<p>Потребностью современного сельхозмашиностроения является рост роли сервисного обслуживания (техническое обслуживание, обновление<br />
и настройка программного обеспечения и т. п.).</p>
<p>Актуальным является тренд аренды сельскохозяйственной техники на основе «времени реального использования».</p>
<p>В рамках реализации цифрового сельского хозяйства будет происходить концентрация профессиональных специалистов в преимущественно крупных как отечественных, так и иностранных компаниях.</p>
<p>Представленные элементы точного земледелия и животноводства эксперты относят к высокой важности, большая часть которых будет реализована до 2030 г.</p>
<h2><strong>4 СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ЭКСПЕРИМЕНТ ПО<br />
ДИФФЕРЕНЦИРОВАННОМУ ВНЕСЕНИЮ УДОБРЕНИЙ </strong></h2>
<p>В учебно-опытном хозяйстве Кубанского ГАУ «Краснодарское» с 19 февраля по 6 июля 2020 г. проводился эксперимент по сравнительному анализу дифференцированного внесения удобрений в режимах on-line и off-line.</p>
<p>Цель эксперимента – сравнение режимов дифференцированного внесения азотных удобрений (первая и вторая подкормки) под озимую пшеницу<br />
с использованием карт-заданий и сенсоров GreenSeeker.</p>
<p><strong>Условия проведения эксперимента</strong></p>
<p><em>Место проведения</em>: учхоз Кубанского ГАУ «Краснодарское»</p>
<p><em>Даты проведения</em>:</p>
<p>– первая подкормка – 19.02.2020 (период возобновления весенней вегетации, фаза кущения);</p>
<p>– вторая подкормка – 23.03.2020 (начало выхода в трубку)</p>
<p><em>Марка трактора:</em> Claas Axion 850</p>
<p><em>Скорость движения</em>: 19 км/ч</p>
<p><em>Марка разбрасывателя удобрений: </em>Amazone ZA TS 4200</p>
<p><em>Рабочая ширина захвата разбрасывателя</em>: 28 м</p>
<p><em>Терминал (бортовой компьютер): </em>Amatron 3</p>
<p><em>Сенсоры</em>: GreenSeeker + терминал Panasonic CF-U1 (ПО Farm Works Mobile)</p>
<p><em>Расстояние между сенсорами</em>: 565 см</p>
<p><em>Высота размещения сенсоров над землей</em>: 130 см</p>
<p><em>Удобрение</em>: аммиачная селитра</p>
<p>На первом этапе производился выбор полей под проведение эксперимента. Были выбраны поля 2.2 (off-line / карта-задание) и 2.3 (режим on-line / сенсор), площадью 74,73 и 82,78 га соответственно, на которых была посеяна 16 октября 2019 г. пшеница озимая сорта Безостая 100. Предшественником<br />
в обоих случаях была кукуруза на силос (рисунок 4.1).</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-15899" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-977.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-977.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-977-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-977-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-977-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-977-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 977 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"> <img width="1920" height="1080" class="wp-image-15900" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-978.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-978.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-978-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-978-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-978-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-978-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 978 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 4.1</strong> – Экспериментальные поля (2.2 – слева, 2.3 – справа)</p>
<p>Для определения изменения динамики роста растений перед первой подкормкой производились измерения количества растений на 1 п. м и высоты растений (рисунки 4.2, 4.3).</p>
<p><img width="1428" height="387" class="wp-image-15901" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-155.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-155.jpeg 1428w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-155-300x81.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-155-1024x278.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-155-768x208.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1428px) 100vw, 1428px" alt="word image 155 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 4.2</strong> – Определение количества растений на 1 п. м:</p>
<p>нижний ряд – поле 2.2; верхний ряд – поле 2.3</p>
<p>На поле, где использован режим on-line (сенсор), перед первой подкормкой высота растений была на 26 % больше, чем на поле, где использован режим off-line (карта-задание), перед второй подкормкой на 2 %.</p>
<p><img width="1429" height="953" class="wp-image-15902" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-156.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-156.jpeg 1429w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-156-300x200.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-156-1024x683.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-156-768x512.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1429px) 100vw, 1429px" alt="word image 156 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 4.3</strong> – Определение количества растений на 1 п. м</p>
<p><strong>Таблица 4.1</strong> – Результаты обработки статистических показателей растений по полю 2.2</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Показатели статистики</td>
</tr>
<tr>
<td>среднее значение</td>
<td>стандартное отклонение</td>
<td>коэффициент вариации, %</td>
<td>ошибка<br />
выборочной средней</td>
<td>относительная ошибка<br />
выборочной средней, %</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Первая подкормка – 19.02.2020</td>
</tr>
<tr>
<td>Высота растений, см</td>
<td><strong>11,3</strong></td>
<td>1,9</td>
<td>16,5</td>
<td>0,2</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Количество растений на 1 м</td>
<td><strong>67,7</strong></td>
<td>21,8</td>
<td>32,2</td>
<td>7</td>
<td>10,4</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Вторая подкормка – 23.03.2020</td>
</tr>
<tr>
<td>Высота растений, см</td>
<td><strong>31,8</strong></td>
<td>2,9</td>
<td>9,1</td>
<td>0,3</td>
<td>0,9</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 4.2</strong> – Результаты обработки статистических показателей растений по полю 2.3</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th rowspan="2">Показатель</th>
<th colspan="5">Показатели статистики</th>
</tr>
<tr>
<th>среднее значение</th>
<th>стандартное отклонение</th>
<th>коэффициент вариации, %</th>
<th>ошибка<br />
выборочной средней</th>
<th>относительная ошибка<br />
выборочной средней, %</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td colspan="6">Первая подкормка – 19.02.2020</td>
</tr>
<tr>
<td>Высота растений, см</td>
<td><strong>14,2</strong></td>
<td>1,7</td>
<td>11,9</td>
<td>0,2</td>
<td>1,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Количество растений на 1 м</td>
<td><strong>68,5</strong></td>
<td>8,8</td>
<td>12,8</td>
<td>2,8</td>
<td>4,1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Вторая подкормка – 23.03.2020</td>
</tr>
<tr>
<td>Высота растений, см</td>
<td><strong>32,5</strong></td>
<td>2,9</td>
<td>8,9</td>
<td>0,3</td>
<td>0,9</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Для анализа за вегетацией растений использовалась система КосмосАгро (рисунок 4.4).</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-15903" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-979.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-979.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-979-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-979-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-979-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-979-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 979 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>2.2</strong></p>
<p><strong>2.3</strong></p>
<p><strong>Рисунок 4.4 </strong>– Карта полей в системе КосмосАгро</p>
<p>Для дистанционного мониторинга полей использовался беспилотный летательный аппарат DJI Phantom 4 Pro (рисунки 4.5, 4.6).</p>
<p><img width="1254" height="835" class="wp-image-15904" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-157.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-157.jpeg 1254w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-157-300x200.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-157-1024x682.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-157-768x511.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1254px) 100vw, 1254px" alt="word image 157 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 4.5</strong> – Фото полей перед первой подкормкой:</p>
<p>слева – 2.3, справа – 2.2</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-15905" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-980.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-980.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-980-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-980-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-980-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-980-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 980 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"> <img width="1920" height="1080" class="wp-image-15906" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-981.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-981.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-981-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-981-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-981-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-981-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 981 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 4.6</strong> – Выделенные фото полей перед первой подкормкой:</p>
<p>слева – 2.3, справа – 2.2</p>
<p>Определялись дозы внесения удобрений для зон с разной вегетацией (режим <strong>on-line</strong>):</p>
<p><strong>– первая подкормка </strong>– 19.02.2020: низкая (NDVI – 0…0,59) – 125 кг/га, средняя (NDVI – 0,59…0,74) – 75…125 кг/га, высокая (NDVI – 0,74…1,00) – 75 кг/га; общая масса вносимого удобрения на поле – 8676 кг; средняя доза внесения удобрений – 105 кг/га;</p>
<p><strong>– вторая подкормка </strong>– 23.03.2020: низкая (NDVI – 0…0,63) – 180 кг/га, средняя (NDVI – 0,65) – 140 кг/га, высокая (NDVI – 0,66…1,00) – 100 кг/га; общая масса вносимого удобрения на поле – 9670 кг; средняя доза внесения удобрений – 117 кг/га.</p>
<p>Определяли дозы внесения удобрений для зон с разной вегетацией (режиме <strong>off-line</strong>):</p>
<p><strong>– первая подкормка </strong>– 19.02.2020: низкая (NDVI – 0…0,65) – 125 кг/га, средняя (NDVI – 0,65…0,76) – 100 кг/га, высокая (NDVI – 0,76…1,00) –<br />
75 кг/га; общая масса вносимого удобрения на поле – 7250 кг; средняя доза внесения удобрений – 97 кг/га;</p>
<p><strong>– вторая подкормка </strong>– 23.03.2020: низкая – 180 кг/га, средняя –<br />
140 кг/га, высокая – 100 кг/га; общая масса вносимого удобрения на поле – 10500 кг; средняя доза внесения удобрений – 141 кг/га.</p>
<p>Создавались карты-задания в программе NEXT Farming AG OFFICE<br />
(рисунок 4.7).</p>
<p>После определения стратегии производили дифференцированное внесение в режимах on-line (рисунок 4.8) и off-line (рисунок 4.9).</p>
<p>Вид поля после внесения удобрений показан на рисунке 4.10.</p>
<p>Контроль движения техники осуществлялся в системе ГЛОНАССОФТ (рисунки 4.11–4.12).</p>
<p>Анализ развития растений выполняем с использованием космоснимков в системе КосмосАгро по вегетации растений (индекс NDVI) на основе базовой, аналитической и шкалы распределения NDVI.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="304" height="780" class="wp-image-15907" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-982.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-982.png 304w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-982-117x300.png 117w" sizes="(max-width: 304px) 100vw, 304px" alt="word image 982 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"> <img width="304" height="780" class="wp-image-15908" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-983.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-983.png 304w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-983-117x300.png 117w" sizes="(max-width: 304px) 100vw, 304px" alt="word image 983 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><strong><img width="484" height="779" class="wp-image-15909" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-984.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-984.png 484w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-984-186x300.png 186w" sizes="(max-width: 484px) 100vw, 484px" alt="word image 984 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"> <img width="484" height="779" class="wp-image-15910" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-985.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-985.png 484w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-985-186x300.png 186w" sizes="(max-width: 484px) 100vw, 484px" alt="word image 985 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></strong></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Рисунок 4.7</strong> – Карты-задания для поля 2.2 подкормки:</p>
<p><em>а </em>– первой; <em>б</em> – второй</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="901" height="506" class="wp-image-15911" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-986.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-986.png 901w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-986-300x168.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-986-768x431.png 768w" sizes="(max-width: 901px) 100vw, 901px" alt="word image 986 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="571" height="426" class="wp-image-15912" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/img_1246.jpeg" alt="IMG_1246" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/img_1246.jpeg 571w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/img_1246-300x224.jpeg 300w" sizes="(max-width: 571px) 100vw, 571px" /></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Рисунок 4.8 </strong>– Техника для дифференцированного внесения удобрений<br />
в режиме off-line:</p>
<p><em>а </em>– Claas Axion 850 + Amazone ZA TS 4200; <em>б</em> – Amatron 3</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="683" height="453" class="wp-image-15913" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-158.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-158.jpeg 683w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-158-300x199.jpeg 300w" sizes="(max-width: 683px) 100vw, 683px" alt="word image 158 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="588" height="443" class="wp-image-15914" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-159.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-159.jpeg 588w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-159-300x226.jpeg 300w" sizes="(max-width: 588px) 100vw, 588px" alt="word image 159 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Рисунок 4.9</strong> – Техника для дифференцированного внесения удобрений<br />
в режиме on-line:</p>
<p><em>а </em>– Claas Axion 850 + Amazone ZA TS 4200 + GreenSeeker; <em>б</em> – Panasonic CF-U1</p>
<p><img width="847" height="565" class="wp-image-15915" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-160.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-160.jpeg 847w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-160-300x200.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-160-768x512.jpeg 768w" sizes="(max-width: 847px) 100vw, 847px" alt="word image 160 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 4.10</strong> – Состояние поля после дифференцированного<br />
внесения удобрений</p>
<p><img width="1352" height="760" class="wp-image-15916" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-987.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-987.png 1352w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-987-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-987-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-987-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1352px) 100vw, 1352px" alt="word image 987 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 4.11</strong> – Треки движения агрегата при дифференцированном<br />
внесении удобрений</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-15917" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-988.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-988.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-988-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-988-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-988-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-988-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 988 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-15918" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-989.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-989.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-989-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-989-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-989-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-989-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 989 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 4.12</strong> – Расход топлива при дифференцированном<br />
внесении удобрений</p>
<p>На основании анализа динамики развития растений заметно выравнивание (по цвету) их развития после подкормки (рисунки 4.13–4.14).</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="266" height="700" class="wp-image-15919" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-990.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-990.png 266w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-990-114x300.png 114w" sizes="(max-width: 266px) 100vw, 266px" alt="word image 990 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td rowspan="2">19.02.2020 – первая подкормка</td>
<td><img width="266" height="700" class="wp-image-15920" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-991.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-991.png 266w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-991-114x300.png 114w" sizes="(max-width: 266px) 100vw, 266px" alt="word image 991 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="266" height="700" class="wp-image-15921" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-992.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-992.png 266w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-992-114x300.png 114w" sizes="(max-width: 266px) 100vw, 266px" alt="word image 992 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td rowspan="2">23.03.2020 – вторая подкормка</td>
<td><img width="266" height="700" class="wp-image-15922" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-993.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-993.png 266w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-993-114x300.png 114w" sizes="(max-width: 266px) 100vw, 266px" alt="word image 993 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="270" height="708" class="wp-image-15923" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-994.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-994.png 270w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-994-114x300.png 114w" sizes="(max-width: 270px) 100vw, 270px" alt="word image 994 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td>20.01.2020</td>
<td>08.03.2020</td>
<td>17.03.2020</td>
<td>26.03.2020</td>
<td>10.04.2020</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Рисунок 4.13</strong> – Анализ развития растений по космоснимкам (базовая шкала):</p>
<p>слева – поле 2.2 (карта), справа – поле 2.3 (сенсор)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="266" height="700" class="wp-image-15924" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-995.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-995.png 266w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-995-114x300.png 114w" sizes="(max-width: 266px) 100vw, 266px" alt="word image 995 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td rowspan="2">19.02.2020 – первая подкормка</td>
<td><img width="266" height="700" class="wp-image-15925" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-996.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-996.png 266w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-996-114x300.png 114w" sizes="(max-width: 266px) 100vw, 266px" alt="word image 996 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="266" height="700" class="wp-image-15926" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-997.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-997.png 266w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-997-114x300.png 114w" sizes="(max-width: 266px) 100vw, 266px" alt="word image 997 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td rowspan="2">23.03.2020 – вторая подкормка</td>
<td><img width="266" height="700" class="wp-image-15927" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-998.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-998.png 266w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-998-114x300.png 114w" sizes="(max-width: 266px) 100vw, 266px" alt="word image 998 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="270" height="708" class="wp-image-15928" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-999.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-999.png 270w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-999-114x300.png 114w" sizes="(max-width: 270px) 100vw, 270px" alt="word image 999 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td>20.01.2020</td>
<td>08.03.2020</td>
<td>17.03.2020</td>
<td>26.03.2020</td>
<td>10.04.2020</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Рисунок 4.14</strong> – Анализ развития растений по космоснимкам<br />
(аналитическая шкала):</p>
<p>слева – поле 2.2 (карта), справа – поле 2.3 (сенсор)</p>
<p>Сравнивая поля, можно заметить, что после 17.03.2020 идет лучшее развитие растений поля 2.3 (сенсор) – рисунки 4.15–4.17.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="259" height="435" class="wp-image-15929" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1000.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1000.png 259w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1000-179x300.png 179w" sizes="(max-width: 259px) 100vw, 259px" alt="word image 1000 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td rowspan="2">109.02.2020 – первая подкормка</td>
<td><img width="264" height="445" class="wp-image-15930" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1001.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1001.png 264w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1001-178x300.png 178w" sizes="(max-width: 264px) 100vw, 264px" alt="word image 1001 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="263" height="442" class="wp-image-15931" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1002.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1002.png 263w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1002-179x300.png 179w" sizes="(max-width: 263px) 100vw, 263px" alt="word image 1002 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td rowspan="2">23.03.2020 – вторая подкормка</td>
<td><img width="253" height="424" class="wp-image-15932" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1003.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1003.png 253w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1003-179x300.png 179w" sizes="(max-width: 253px) 100vw, 253px" alt="word image 1003 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="243" height="424" class="wp-image-15933" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1004.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1004.png 243w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1004-172x300.png 172w" sizes="(max-width: 243px) 100vw, 243px" alt="word image 1004 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td>20.01.2020</td>
<td>08.03.2020</td>
<td>17.03.2020</td>
<td>26.03.2020</td>
<td>10.04.2020</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><img width="313" height="420" class="wp-image-15934" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1005.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1005.png 313w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1005-224x300.png 224w" sizes="(max-width: 313px) 100vw, 313px" alt="word image 1005 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td></td>
<td><img width="314" height="424" class="wp-image-15935" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1006.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1006.png 314w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1006-222x300.png 222w" sizes="(max-width: 314px) 100vw, 314px" alt="word image 1006 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="564" height="756" class="wp-image-15936" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1007.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1007.png 564w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1007-224x300.png 224w" sizes="(max-width: 564px) 100vw, 564px" alt="word image 1007 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td></td>
<td><img width="317" height="424" class="wp-image-15937" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1008.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1008.png 317w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1008-224x300.png 224w" sizes="(max-width: 317px) 100vw, 317px" alt="word image 1008 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>18.04.2020</td>
<td></td>
<td>25.04.2020</td>
<td>30.04.2020</td>
<td></td>
<td>11.05.2020</td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Рисунок 4.15</strong> – Анализ развития растений по космоснимкам<br />
(распределение NDVI):</p>
<p>слева – поле 2.2 (карта), справа – поле 2.3 (сенсор)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="249" height="424" class="wp-image-15938" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1009.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1009.png 249w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1009-176x300.png 176w" sizes="(max-width: 249px) 100vw, 249px" alt="word image 1009 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td rowspan="2">19.02.2020 – первая подкормка</td>
<td><img width="246" height="424" class="wp-image-15939" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1010.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1010.png 246w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1010-174x300.png 174w" sizes="(max-width: 246px) 100vw, 246px" alt="word image 1010 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="246" height="424" class="wp-image-15940" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1011.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1011.png 246w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1011-174x300.png 174w" sizes="(max-width: 246px) 100vw, 246px" alt="word image 1011 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td rowspan="2">23.03.2020 – вторая подкормка</td>
<td><img width="246" height="424" class="wp-image-15941" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1012.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1012.png 246w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1012-174x300.png 174w" sizes="(max-width: 246px) 100vw, 246px" alt="word image 1012 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="246" height="424" class="wp-image-15942" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1013.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1013.png 246w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1013-174x300.png 174w" sizes="(max-width: 246px) 100vw, 246px" alt="word image 1013 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td>20.01.2020</td>
<td>08.03.2020</td>
<td>17.03.2020</td>
<td>26.03.2020</td>
<td>10.04.2020</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><img width="289" height="438" class="wp-image-15943" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1014.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1014.png 289w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1014-198x300.png 198w" sizes="(max-width: 289px) 100vw, 289px" alt="word image 1014 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td></td>
<td><img width="280" height="427" class="wp-image-15944" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1015.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1015.png 280w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1015-197x300.png 197w" sizes="(max-width: 280px) 100vw, 280px" alt="word image 1015 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="284" height="427" class="wp-image-15945" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1016.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1016.png 284w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1016-200x300.png 200w" sizes="(max-width: 284px) 100vw, 284px" alt="word image 1016 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td></td>
<td><img width="301" height="457" class="wp-image-15946" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1017.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1017.png 301w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1017-198x300.png 198w" sizes="(max-width: 301px) 100vw, 301px" alt="word image 1017 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>18.04.2020</td>
<td></td>
<td>25.04.2020</td>
<td>30.04.2020</td>
<td></td>
<td>11.05.2020</td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Рисунок 4.16</strong> – Анализ развития растений по космоснимкам<br />
(распределение NDVI) поле 2.2 (карта)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="243" height="424" class="wp-image-15947" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1018.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1018.png 243w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1018-172x300.png 172w" sizes="(max-width: 243px) 100vw, 243px" alt="word image 1018 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td rowspan="2">19.02.2020 г. – первая подкормка</td>
<td><img width="432" height="752" class="wp-image-15948" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1019.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1019.png 432w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1019-172x300.png 172w" sizes="(max-width: 432px) 100vw, 432px" alt="word image 1019 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="243" height="424" class="wp-image-15949" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1020.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1020.png 243w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1020-172x300.png 172w" sizes="(max-width: 243px) 100vw, 243px" alt="word image 1020 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td rowspan="2">23.03.2020 – вторая подкормка</td>
<td><img width="432" height="752" class="wp-image-15950" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1021.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1021.png 432w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1021-172x300.png 172w" sizes="(max-width: 432px) 100vw, 432px" alt="word image 1021 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="256" height="424" class="wp-image-15951" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1022.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1022.png 256w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1022-181x300.png 181w" sizes="(max-width: 256px) 100vw, 256px" alt="word image 1022 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td>20.01.2020</td>
<td>08.03.2020</td>
<td>17.03.2020</td>
<td>26.03.2020</td>
<td>10.04.2020</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td><img width="522" height="797" class="wp-image-15952" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1023.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1023.png 522w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1023-196x300.png 196w" sizes="(max-width: 522px) 100vw, 522px" alt="word image 1023 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td></td>
<td><img width="522" height="797" class="wp-image-15953" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1024.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1024.png 522w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1024-196x300.png 196w" sizes="(max-width: 522px) 100vw, 522px" alt="word image 1024 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="522" height="797" class="wp-image-15954" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1025.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1025.png 522w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1025-196x300.png 196w" sizes="(max-width: 522px) 100vw, 522px" alt="word image 1025 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td></td>
<td><img width="522" height="797" class="wp-image-15955" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1026.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1026.png 522w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1026-196x300.png 196w" sizes="(max-width: 522px) 100vw, 522px" alt="word image 1026 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>18.04.2020</td>
<td></td>
<td>25.04.2020</td>
<td>30.04.2020</td>
<td></td>
<td>11.05.2020</td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Рисунок 4.17</strong> – Анализ развития растений по космоснимкам<br />
(распределение NDVI) поле 2.3 (сенсор)</p>
<p>Проанализируем полученные данные (таблица 4.3). Перед первой подкормкой на поле 2.2 количество растений с индексом NDVI = 0,53 составляло 37 %, на поле 2.3 с индексом NDVI = 0,52 – 32 %.</p>
<p><strong>Таблица 4.3</strong> – Сравнительный анализ полей по наибольшему значению<br />
индекса NDVI</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Номер поля</td>
<td colspan="2">20.01.2020</td>
<td colspan="2">8.03.2020</td>
<td colspan="2">17.03.2020</td>
<td colspan="2">26.03.2020</td>
<td colspan="2">10.04.2020</td>
<td colspan="2">18.04.2020</td>
<td colspan="2">25.04.2020</td>
<td colspan="2">30.04.2020</td>
<td colspan="2">11.05.2020</td>
</tr>
<tr>
<td>NDVI</td>
<td>%</td>
<td>NDVI</td>
<td>%</td>
<td>NDVI</td>
<td>%</td>
<td>NDVI</td>
<td>%</td>
<td>NDVI</td>
<td>%</td>
<td>NDVI</td>
<td>%</td>
<td>NDVI</td>
<td>%</td>
<td>NDVI</td>
<td>%</td>
<td>NDVI</td>
<td>%</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>2.2 (карта)</strong></td>
<td><strong>0,53</strong></td>
<td>37</td>
<td><strong>0,72</strong></td>
<td>30</td>
<td>0,76</td>
<td>27</td>
<td>0,60</td>
<td>33</td>
<td>0,79</td>
<td>32</td>
<td>0,7</td>
<td>24</td>
<td>0,81</td>
<td>36</td>
<td>0,81</td>
<td>31</td>
<td>0,79</td>
<td>43</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>2.3 (сенсор)</strong></td>
<td>0,52</td>
<td>32</td>
<td>0,70</td>
<td>23</td>
<td><strong>0,77</strong></td>
<td>34</td>
<td><strong>0,61</strong></td>
<td>33</td>
<td><strong>0,80</strong></td>
<td>46</td>
<td><strong>0,74</strong></td>
<td>30</td>
<td><strong>0,82</strong></td>
<td>43</td>
<td><strong>0,82</strong></td>
<td>42</td>
<td><strong>0,81</strong></td>
<td>41</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Через 18 дней после первой подкормки ситуация не изменилась – наибольший процент выше на поле 2.2. Через 27 дней – ситуация меняется<br />
и в лидирующее положение вступает поле 2.3 (на 7 % выше).</p>
<p>Данная тенденция сохраняется и после второй подкормки через<br />
3 (26.03.2020) и 15 (10.04.2020) дней.</p>
<p>Уборка пшеницы осуществлялась 5–6 июля 2020 г., использовались комбайны Tucano 580, Tucano 480, Tucano 450 с подключением к системе Teltmatics.</p>
<p>Перед проведением эксперимента определяли высоту растения в естественном и выпрямленном состоянии (рисунок 4.18, <em>а</em>), предварительную урожайность (рисунок 4.18, <em>б</em>), потери от самоосыпания (рисунок 4.18, <em>в</em>).</p>
<p>Сравнивая результаты статистической обработки данных, можно заметить, практически одинаковую предварительную урожайность по сравниваемым полям (таблица 4.4).</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="900" height="530" class="wp-image-15956" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/20200705_175502.jpeg" alt="20200705_175502" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/20200705_175502.jpeg 900w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/20200705_175502-300x177.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/20200705_175502-768x452.jpeg 768w" sizes="(max-width: 900px) 100vw, 900px" /></td>
<td><img width="942" height="520" class="wp-image-15957" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/20200705_181621.jpeg" alt="20200705_181621" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/20200705_181621.jpeg 942w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/20200705_181621-300x166.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/20200705_181621-768x424.jpeg 768w" sizes="(max-width: 942px) 100vw, 942px" /></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><em><img width="987" height="546" class="wp-image-15958" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/20200705_181024.jpeg" alt="20200705_181024" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/20200705_181024.jpeg 987w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/20200705_181024-300x166.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/20200705_181024-768x425.jpeg 768w" sizes="(max-width: 987px) 100vw, 987px" /></em></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><em>в</em></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Рисунок 4.18</strong> – Измерения:</p>
<p><em>а </em>– высоты растения в естественном и выпрямленном состоянии; <em>б</em> – предварительной урожайности; <em>в</em> – потерь от самоосыпания</p>
<p><strong>Таблица 4.4</strong> – Обобщенные данные обработки статистических показателей</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Статистические показатели</td>
</tr>
<tr>
<td>среднее<br />
значение</td>
<td>стандартное отклонение</td>
<td>коэффициент вариации, %</td>
<td>ошибка<br />
выборочной средней</td>
<td>относительная ошибка<br />
выборочной средней, %</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><strong>Поля 2.2 / 2.3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Высота растения<br />
(в естественном<br />
состоянии), см</td>
<td><strong>78 / 84</strong></td>
<td>5 / 7</td>
<td>7 / 8</td>
<td>2 / 2</td>
<td>2 / 3</td>
</tr>
<tr>
<td>Высота растения<br />
(в выпрямленном<br />
состоянии), см</td>
<td><strong>85 / 92</strong></td>
<td>6 / 6</td>
<td>7 / 7</td>
<td>2 / 2</td>
<td>2 / 2</td>
</tr>
<tr>
<td>Потери зерна от<br />
самоосыпания<br />
(естественные<br />
потери), кг/га</td>
<td><strong>1,7 / 3,78</strong></td>
<td>1,5 / 2,19</td>
<td>92 / 58</td>
<td>0,5 / 0,71</td>
<td>30 / 19</td>
</tr>
<tr>
<td>Предварительная<br />
урожайность<br />
зерна, т/га</td>
<td><strong>7,58 / 7,61</strong></td>
<td>1,6 / 0,93</td>
<td>21 / 12,2</td>
<td>0,5 / 0,3</td>
<td>7 / 3,9</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Средние значения урожайности, полученные в системе Telematics по полю 2.2 составляют 7,03 т/га (фактическая – 6,44 т/га), по полю 2.3 – 6.81 т/га (фактическая – 6,59 т/га) – рисунок 4.19. Усредняя значения по предварительной, фактической и картированию урожайности получим одинаковые значения по сравниваемым полям 7 т/га.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="73" height="344" class="wp-image-15959" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1027.png" alt="word image 1027 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"> <img width="193" height="239" class="wp-image-15960" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1028.png" alt="word image 1028 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"> <img width="136" height="692" class="wp-image-15961" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1029.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1029.png 136w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1029-59x300.png 59w" sizes="(max-width: 136px) 100vw, 136px" alt="word image 1029 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"> <img width="192" height="255" class="wp-image-15962" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1030.png" alt="word image 1030 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
<td><img width="74" height="333" class="wp-image-15963" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1031.png" alt="word image 1031 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"> <img width="193" height="239" class="wp-image-15964" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1032.png" alt="word image 1032 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"> <img width="1920" height="1080" class="wp-image-15965" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1033.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1033.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1033-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1033-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1033-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1033-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 1033 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"> <img width="192" height="255" class="wp-image-15966" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1034.png" alt="word image 1034 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></td>
</tr>
<tr>
<td><em>а</em></td>
<td><em>б</em></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Рисунок 4.19</strong> – Карты урожайности поля:</p>
<p><em>а </em>– 2.2; <em>б</em> – 2.3</p>
<p>Выполнен расчет экономической эффективности с учетом действительной площади полей, участвующих в эксперименте не масштабируя на общую площадь для внесения удобрений в хозяйстве.</p>
<p>Расчет экономической эффективности показал, что при использовании режима on-line происходит экономия удобрений в среднем 16 кг/га, по сравнению с режимом off-line без потери урожайности и качества зерна (содержание клейковины повысилось на 2,3 %; протеина – 0,6 %) – таблица 4.5.</p>
<p><strong>Таблица 4.5</strong> – Сравнение затрат на дифференцированное внесение удобрений</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Режим</td>
<td rowspan="2">Площадь, га</td>
<td colspan="2">Общая масса вносимого удобрения на поле, кг</td>
<td colspan="2">Средняя доза внесения удобрений, кг/га</td>
</tr>
<tr>
<td>первая<br />
подкормка</td>
<td>вторая<br />
подкормка</td>
<td>первая<br />
подкормка</td>
<td>вторая<br />
подкормка</td>
</tr>
<tr>
<td>off-line<br />
(карта-задание)</td>
<td>74,73</td>
<td>7250</td>
<td>10500</td>
<td>97</td>
<td>141</td>
</tr>
<tr>
<td>on-line<br />
(сенсор)</td>
<td>82,78</td>
<td>8676</td>
<td>9670</td>
<td>105</td>
<td>117</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Затраты труда на операции (трудоемкость операции):</p>
<p><img width="155" height="71" class="wp-image-15967" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1035.png" alt="word image 1035 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>где <em>L<sub>i</sub></em>– количество механизаторов; 1;</p>
<p><em>W<sub>ч.i</sub></em> – часовая производительность агрегата (машины), га/ч; производительность разбрасывателя Amazone ZA TS 4200 – 30 га/ч.</p>
<p><img width="206" height="104" class="wp-image-15968" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1036.png" alt="word image 1036 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Производительность труда на операции:</p>
<p><img width="128" height="65" class="wp-image-15969" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1037.png" alt="word image 1037 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>где <em>P<sub>m.i</sub></em> – производительность, га/чел.ч;</p>
<p><img width="198" height="98" class="wp-image-15970" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1038.png" alt="word image 1038 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Удельные капиталовложения на выполнение операции:</p>
<p><img width="249" height="74" class="wp-image-15971" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1039.png" alt="word image 1039 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>где – балансовая стоимость трактора, сельхозмашины, руб.; стоимость: трактор Claas Axion 850 – 6603512 руб., разбрасыватель Amazone ZA TS 4200 с терминалом Amatron 3 – 1470000 руб. (данные учхоза «Краснодарское»), сенсоры GreenSeeker –1400000 руб. (данные ООО «Агро-Софт»), ПО Космосагро + NEXT Farming AG OFFICE – 99000 руб. (данные учхоза «Краснодарское»); руб., руб., руб.;</p>
<p>– нормативная загрузка, ч./год; ч, ч.</p>
<p><img width="381" height="113" class="wp-image-15972" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1040.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1040.png 381w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1040-300x89.png 300w" sizes="(max-width: 381px) 100vw, 381px" alt="word image 1040 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Оплата труда с отчислениями на социальные нужды:</p>
<p><img width="141" height="67" class="wp-image-15973" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1041.png" alt="word image 1041 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Амортизационные отчисления:</p>
<p><img width="241" height="50" class="wp-image-15974" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1042.png" alt="word image 1042 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>где – годовая норма амортизационных отчислений, %; % (данные учхоза «Краснодарское»).</p>
<p><img width="350" height="112" class="wp-image-15975" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1043.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1043.png 350w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1043-300x96.png 300w" sizes="(max-width: 350px) 100vw, 350px" alt="word image 1043 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Затраты на ремонты и техобслуживание:</p>
<p><img width="259" height="62" class="wp-image-15976" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1044.png" alt="word image 1044 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>где – годовая норма отчислений на ремонты и ТО, %; 11,5 %, 10 %.</p>
<p><img width="369" height="106" class="wp-image-15977" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1045.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1045.png 369w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1045-300x86.png 300w" sizes="(max-width: 369px) 100vw, 369px" alt="word image 1045 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Затраты на топливо и смазочные материалы:</p>
<p><img width="177" height="70" class="wp-image-15978" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1046.png" alt="word image 1046 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Прочие прямые затраты:</p>
<p><img width="227" height="117" class="wp-image-15979" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1047.png" alt="word image 1047 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Удельная материалоемкость (металлоемкость) на операции:</p>
<p>где – масса трактора и сельхозмашины, кг; 7900 кг, 685 кг;</p>
<p>– количество сельхозмашин в составе агрегата.</p>
<p><img width="293" height="108" class="wp-image-15980" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1049.png" alt="word image 1049 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Удельная энергоемкость:</p>
<p><img width="133" height="58" class="wp-image-15981" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1050.png" alt="word image 1050 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>где – энергоемкость, кВт-ч/га;</p>
<p>– эффективная мощность двигателя, кВт; 171 кВт</p>
<p><img width="223" height="104" class="wp-image-15982" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1051.png" alt="word image 1051 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Эксплуатационные затраты:</p>
<p><img width="386" height="49" class="wp-image-15983" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1052.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1052.png 386w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1052-300x38.png 300w" sizes="(max-width: 386px) 100vw, 386px" alt="word image 1052 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>где – затраты на оплату труда, руб./га;</p>
<p>– амортизационные отчисления, руб./га;</p>
<p>– отчисления на ремонты и ТО, руб./га;</p>
<p>– затраты на топливо и смазочные материалы, руб./га;</p>
<p>– прочие прямые затраты, руб./га</p>
<p><img width="316" height="72" class="wp-image-15984" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1053.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1053.png 316w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1053-300x68.png 300w" sizes="(max-width: 316px) 100vw, 316px" alt="word image 1053 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Приведенные затраты:</p>
<p><img width="213" height="45" class="wp-image-15985" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1054.png" alt="word image 1054 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>где – прямые эксплуатационные затраты, руб./га;</p>
<p>– нормативный коэффициент эффективности капитальных вложений;</p>
<p>– капиталовложения на операции, руб./га</p>
<p><img width="282" height="79" class="wp-image-15986" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1055.png" alt="word image 1055 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Дополнительные приведенные затраты:</p>
<p><img width="261" height="49" class="wp-image-15987" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1056.png" alt="word image 1056 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>где – приведенные затраты, руб.;</p>
<p>– годовая выработка</p>
<p><img width="280" height="49" class="wp-image-15988" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1057.png" alt="word image 1057 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Дополнительный эффект:</p>
<p><img width="224" height="70" class="wp-image-15989" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1058.png" alt="word image 1058 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>где – экономия удобрений, кг/га; 16 кг/га;</p>
<p>– цена приобретения удобрения, руб./кг; 12,5 руб/кг;</p>
<p>– площадь, га; 83 га.</p>
<p><img width="247" height="42" class="wp-image-15990" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1059.png" alt="word image 1059 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Ожидаемый годовой экономический эффект:</p>
<p><img width="242" height="58" class="wp-image-15991" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1060.png" alt="word image 1060 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>где – общий годовой экономический эффект, руб.;</p>
<p>– годовая экономия от сокращения приведенных затрат, руб.;</p>
<p>– дополнительный эффект, руб.</p>
<p>Учитываем снижение затрат на удобрения.</p>
<p><img width="256" height="44" class="wp-image-15992" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1061.png" alt="word image 1061 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Срок окупаемости:</p>
<p><img width="129" height="64" class="wp-image-15993" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1062.png" alt="word image 1062 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>где – размер дополнительных капиталовложений, руб.</p>
<p><img width="167" height="58" class="wp-image-15994" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1063.png" alt="word image 1063 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Дополнительные капиталовложения составляют 1,4 млн. руб., эффект от экономии удобрений – 110 руб./га (таблица 4.6).</p>
<p><strong>Таблица 4.6</strong> – Показатели экономической эффективности</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="2">Значение показателя</td>
<td colspan="2">Эффект</td>
</tr>
<tr>
<td>on-line</td>
<td>off-line</td>
<td>абсолют.</td>
<td>относит.,%</td>
</tr>
<tr>
<td>Производительность труда, га/чел.ч</td>
<td>30</td>
<td>30</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Затраты труда, чел.ч/га</td>
<td>0,03</td>
<td>0,03</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Эксплуатационные<br />
затраты, руб./га</td>
<td>280</td>
<td>338</td>
<td>58</td>
<td>21</td>
</tr>
<tr>
<td>в том числе:<br />
оплата труда</td>
<td>40</td>
<td>40</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>амортизация</td>
<td>46</td>
<td>75</td>
<td>29</td>
<td>63</td>
</tr>
<tr>
<td>ремонты и ТО</td>
<td>48</td>
<td>77</td>
<td>29</td>
<td>60</td>
</tr>
<tr>
<td>топливно-смазочные материалы</td>
<td>144</td>
<td>144</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>прочие прямые затраты</td>
<td>1,6</td>
<td>1,6</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Капиталовложения, руб./га</td>
<td>459</td>
<td>748</td>
<td>289</td>
<td>63</td>
</tr>
<tr>
<td>Металлоемкость, кг/га</td>
<td>0,28</td>
<td>0,3</td>
<td>0,02</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>Энергоемкость, кВт.ч/га</td>
<td>5,7</td>
<td>5,7</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Дополнительные<br />
капиталовложения, руб.</td>
<td colspan="2">1400000</td>
<td colspan="2" rowspan="2">×</td>
</tr>
<tr>
<td>Эффект от экономии удобрений, руб.</td>
<td colspan="2">9025</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Вывод</strong></p>
<p>В учебно-опытном хозяйстве Кубанского ГАУ «Краснодарское» с 19 февраля по 6 июля 2020 г. проводился эксперимент по сравнительному анализу дифференцированного внесения удобрений в режимах on-line и off-line.</p>
<p>Цель эксперимента – сравнение режимов дифференцированного внесения азотных удобрений (первая и вторая подкормки) под озимую пшеницу<br />
с использованием карт-заданий и сенсоров GreenSeeker.</p>
<p>Результаты эксперимента показали, что при использовании режима<br />
on-line происходит экономия удобрений в среднем 16 кг/га, по сравнению<br />
с режимом off-line без потери урожайности и качества зерна (содержание клейковины повысилось на 2,3 %; протеина – 0,6 %).</p>
<p>Дополнительные капиталовложения составляют 1,4 млн. руб., эффект от экономии удобрений – 110 руб./га.</p>
<h2><strong>5 РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ ЦЕНТРА ПО ПОПУЛЯРИЗАЦИИ ТЕХНОЛОГИЙ ТОЧНОГО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА</strong></h2>
<p>По итогам работы в 2020 г. подготовлены:</p>
<p><strong><em>Учебник</em></strong>:</p>
<p>Точное сельское хозяйство : учебник для ВО / под ред. Е. В. Труфляка. – СПб. : Лань, 2020. – 512 с.</p>
<p><strong><em>Учебные пособия</em></strong>:</p>
<p>1. Труфляк, Е. В. Современные зерноуборочные комбайны : учеб. пособие / Е. В. Труфляк, Е. И. Трубилин. – 3-е изд., стер. – СПб. : Лань, 2020. – 320 с. – ISBN 978-5-8114-2448-1. – Текст : электронный // Лань : электронно-библиотечная система. – URL : https://e.lanbook.com/book/130497 (дата обращения: 24.01.2020). – Режим доступа : для авториз. пользователей.</p>
<p>2. Точное земледелие : учеб. пособие / Е. В. Труфляк. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – 164 с.</p>
<p>3. Труфляк, Е. В. Современные зерноуборочные комбайны : учеб. пособие для СПО / Е. В. Труфляк, Е. И. Трубилин. – СПб. : Лань, 2020. – 320 с.</p>
<p><strong><em>Монография</em></strong>:</p>
<p>Мониторинг и прогнозирование научно-технологического развития АПК России на период до 2030 года : монография / под общ. ред. И. Л. Воротникова; ФГБОУ ВО Саратовский ГАУ. – Саратов : Амирит, 2020. – 328 с.</p>
<p><strong><em>Аналитические материалы:</em></strong></p>
<p>1. Труфляк, Е. В. Результаты анкетирования по направлению «Цифровая трансформация сельского хозяйства» / Е. В. Труфляк, А. С. Креймер,<br />
Н. Ю. Курченко. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – 21 с.</p>
<p>2. Труфляк, Е. В. Рейтинг регионов по использованию элементов точного сельского хозяйства / Е. В. Труфляк. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – 26 с.</p>
<p>3. Курченко, Н. Ю. Нормативно-правовая база использования беспилотных авиационных систем / Н. Ю. Курченко, Е. В. Труфляк. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – 45 с.</p>
<p><strong><em>Статья в базе данных Web of Science:</em></strong></p>
<p>Truflyak, E. V. Questionnaire results department of the departmental project «Digital agriculture» / E. V. Truflyak, N. Y. Kurchenko // Global Challenges and Prospects of the Modern Economic Development : II International Scientific Conference GCPMED. – European Proceedings of Soial &amp; Behavioural Sciences (EpSBS), 2019. – e-ISSN 2357-1330. – 2020. – LXXIX – GCPMED. – P. 1565–1569. – DOI : 10.15405/epsbs.2020.03.224.</p>
<p><strong><em>Статьи:</em></strong></p>
<ol>
<li>Труфляк, Е. В. Сравнительный анализ дифференцированного внесения удобрений в режимах on-line и off-line / Е. В. Труфляк, Даду Монес // Научное обеспечение агропромышленного комплекса : сб. ст. по материалам 75-й науч.-практ. конф. студентов по итогам НИР за 2019 год / отв. за вып.<br />
А. Г. Кощаев. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – С. 342–345.</li>
<li>Труфляк, Е. В. Экономическая эффективность дифференцированного внесения удобрений в режимах on-line и off-line / Е. В. Труфляк, Е. А. Лазарев // Научное обеспечение агропромышленного комплекса : сб. ст. по материалам 75-й науч.-практ. конф. студентов по итогам НИР за 2019 год / отв. за вып. А. Г. Кощаев. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – С. 357–360.</li>
<li>Сравнительный эксперимент по дифференцированному внесению удобрений в режимах on-line и off-line // Ресурсосберегающее земледелие (специализированный сельскохозяйственный журнал). – 2020. – № 48 (04). – С. 19–26.</li>
</ol>
<p>Создан ютуб-канал «Центр прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ», на котором размещено 90 видео (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/channel/UCrPRhGM7-WpIM2Z3MmfRjsQ/videos" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/<br />
channel/UCrPRhGM7-WpIM2Z3MmfRjsQ/videos</a>) – рисунок 5.1.</p>
<p>Подготовлены и размещены на ютуб-канале:</p>
<p>– 14 презентаций на русском языке:</p>
<p>Презентация 1. Цифровая трансформация сельского хозяйства;</p>
<p>Презентация 2. Применение беспилотных летательных аппаратов в сельском хозяйстве;</p>
<p>Презентация 3. Технологии дифференцированного внесения удобрений и средств защиты растений;</p>
<p>Презентация 4. Практический опыт внедрения технологий точного земледелия в Ленинградской области;</p>
<p>Презентация 5. Анализ полей по космоснимкам;</p>
<p>Презентация 6. Практическое использование беспилотных летательных аппаратов;</p>
<p>Презентация 7. Космомониторинг – инструмент контроля и достижения высоких урожаев;</p>
<p>Презентация 8. Создание карт-заданий для дифференцированного внесения удобрений;</p>
<p>Презентация 9. Цифровая трансформация сельского хозяйства / Семинар 1 / Instagram / Казахстан;</p>
<p>Презентация 10. Дифференцированные технологии в точном земледелии / Семинар 2 / Instagram / Казахстан;</p>
<p>Презентация 11. Практическое применение точного земледелия / Семинар 3 / Instagram / Казахстан;</p>
<p>Презентация 12. Методология комплексного учета топлива на предприятии;</p>
<p>Презентация 13. Цифровая трансформация сельского хозяйства / Открытый урок / Золотая Осень 2020;</p>
<p>Презентация 14. Результаты исследования трендов цифрового сельского хозяйства в России (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZLmm6TxT2VI_rUFEUJXm_uy" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=<br />
PLAqcZxzZTUZLmm6TxT2VI_rUFEUJXm_uy</a>) – рисунок 5.2;</p>
<p>– 6 презентаций на арабском языке (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZJtqznvNLrhCx7LBdHc1QZN" target="_blank" rel="noopener">https://www.you­tube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZJtqznvNLrhCx7LBdHc1QZN</a>);</p>
<p>– 6 лекций на русском языке:</p>
<p>Лекция 1. Точное сельское хозяйство: состояние и перспективы;</p>
<p>Лекция 2. Оцифровка полей и локальный отбор проб в системе координат;</p>
<p>Лекция 3. Системы параллельного вождения;</p>
<p>Лекция 4. Дистанционное зондирование земли;</p>
<p>Лекция 5. Дифференцированные технологии;</p>
<p>Лекция 6. Роботизированные системы в растениеводстве (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZLyxsodbfBoTeYEHLRk6wpd" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZLyxsodbfBoTe<br />
YEHLRk6wpd</a>) – рисунок 5.3;</p>
<p>– 2 лекции на английском языке:</p>
<p>Lecture 1. Precision agriculture today and the development trends;</p>
<p>Lecture 2. GIS and GPS agricultural mapping and soil sampling (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZI2bFBpG0JpAHh_Dh7_-_9v" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZI2bFBpG0Jp<br />
AHh_Dh7_-_9v</a>) – рисунок 5.4;</p>
<p>– 1 Лекция на португальском языке: Palestra 1. Transformação digital da agricultura (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/watch?v=aIbpmUB2uJU&amp;list=PLAqcZxzZTUZLIc3ADxK9wXBTB5diK4VkR&amp;index=1&amp;t=524s" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/watch?v=aIbpmUB2uJU&amp;<br />
list=PLAqcZxzZTUZLIc3ADxK9wXBTB5diK4VkR&amp;index=1&amp;t=524s</a>);</p>
<p>– 15 Лабораторных работ:</p>
<p>Лабораторная работа 1. Система мониторинга и контроля для сельскохозяйственной техники;</p>
<p>Лабораторная работа 2. Система контроля высева№</p>
<p>Лабораторная работа 3. Симулятор работы разбрасывателя удобрений;</p>
<p>Лабораторная работа 4. Симулятор работы опрыскивателя;</p>
<p>Лабораторная работа 5. Система навигации;</p>
<p>Лабораторная работа 6. Система спутникового мониторинга;</p>
<p>Лабораторная работа 7. Система мониторинга состояния и использования сельхозугодий;</p>
<p>Лабораторная работа 8. Подготовка БПЛА к полету;</p>
<p>Лабораторная работа 9. Подготовка полетного задания для БПЛА;</p>
<p>Лабораторная 10. Стенд для управления сервоприводами разбрасывателя удобрений;</p>
<p>Лабораторная работа 11. Стенд автопилота;</p>
<p>Лабораторная работа 12. Стенд для управления секциями опрыскивателя;</p>
<p>Лабораторная работа 13. Система Telematics;</p>
<p>Лабораторная работа 14. Система контроля топлива;</p>
<p>Лабораторная работа 15. Метеодатчик OneSoil (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZI4d_OV4dP5EGvF51toYEPD" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZI4d_OV4dP5EGvF51toYEPD</a>) – рисунок 5.5;</p>
<p>– 25 видео: «Центр точного земледелия», «Центр прогнозирования и мониторинга», «Модель беспилотной технологии уборки урожая», «Факультет механизации Кубанского ГАУ», «Стенд автопилота», «Стенд для управления секциями опрыскивателя», «Стенд высевающего аппарата сеялки КЛЕН», «Учебно-опытное хозяйство «Краснодарское», «Сельское хозяйство: из прошлого в будущее», «Перспективные технологии будущего», «Студенты из Германии в Кубанском ГАУ», «Учебно-опытное хозяйство &#171;Кубань&#187;», «Визит делегации Минсельхоза России», «Центр прогнозирования и мониторинга» в программах «Жить в южной столице», «Тема дня», Евгений Труфляк<br />
в программе «Тема дня», «Сотрудник центра прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ в Индии», «Цифровизация АПК / Тема дня / Кубань 24», «Встреча Председателя Правительства с молодыми учеными и предпринимателями Краснодарского края», «Центр прогнозирования и мониторинга / Золотая Осень 2020 / СтудLife», «Онлайн лекция / Золотая Осень 2020 / СтудLife» (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZIZRaOh6cvghv1wLN1_Um0q" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxz<br />
ZTUZIZRaOh6cvghv1wLN1_Um0q</a>) – рисунок 5.6;</p>
<p>– 16 видео раздела «Научная работа»: «Аэродинамическая решетная зерноочистительная машина», «Демонстрация работы аэродинамической решетной зерноочистительной машины», «Сравнительные испытания сеялок при посеве риса с использованием дрона», «Сравнительные испытания дифвнесения удобрений в режимах on-line и off-line / подкормка 1», «Дифференцированное внесение удобрений в режиме on-line», «Сравнительные испытания дифвнесения удобрений в режимах on-line и off-line / подкормка 2», «Дифференцированный посев кукурузы на зерно», «Сравнительные испытания дифвнесения удобрений в режимах on-line и off-line / 10.04.2020», «Зональное внесение удобрений на рисовых чеках», «Сравнительные испытания дифвнесения удобрений в режимах on-line и off-line / GreenSeeker и N-тестер», «Сравнительные испытания дифвнесения удобрений в режимах on-line и off-line / экономика», «Испытания беспилотного летательного аппарата с мультиспектральной системой обработки изображений», «Прогнозирование урожайности с использованием беспилотного летательного аппарата», «Прогнозирование урожайности с использованием беспилотного летательного аппарата», «Локальный отбор проб почвы в системе координат», «Очистка зерна пшеницы / Grain Wheat Seed Cleaning / Limpeza do grau de trigo / تنظيف الحبوب» (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZLGqLBCS5-UXa9x5qW_pLRi" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=<br />
PLAqcZxzZTUZLGqLBCS5-UXa9x5qW_pLRi</a>) – рисунок 5.7.</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-15995" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1064.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1064.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1064-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1064-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1064-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1064-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 1064 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 5.1</strong> – Главная страница ютуб-канала<br />
«Центр прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ»</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-15996" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1065.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1065.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1065-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1065-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1065-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1065-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 1065 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 5.2</strong> – Плейлист «Презентации»</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-15997" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1066.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1066.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1066-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1066-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1066-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1066-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 1066 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 5.3</strong> – Плейлист «Лекции»</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-15998" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1067.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1067.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1067-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1067-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1067-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1067-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 1067 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 5.4</strong> – Плейлист «Lectures»</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-15999" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1068.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1068.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1068-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1068-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1068-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1068-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 1068 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 5.5</strong> – Плейлист «Лабораторные работы»</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-16000" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1069.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1069.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1069-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1069-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1069-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1069-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 1069 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 5.6</strong> – Плейлист «Видео»</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-16001" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1070.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1070.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1070-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1070-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1070-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1070-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 1070 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 5.7 </strong>– Плейлист «Научная работа»</p>
<p>На сайте цента <a href="https://foresight.kubsau.ru" target="_blank" rel="noopener">https://foresight.kubsau.ru</a> в разделе «Новости» подробно освещены все мероприятия (19) с участием сотрудников (рисунок 5.8):</p>
<p>– «Чтения академика В. Н. Болтинского», 22.01.2020.</p>
<p>22 января в центре прогнозирования и мониторинга состоялся семинар «Чтения академика В. Н. Болтинского» в режиме вебинара, организованный РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева.</p>
<p>– «Делегация из Ирака», 22.01.2020.</p>
<p>22 января Кубанский ГАУ посетила делегация Бюро культуры Посольства Республики Ирак в России. В составе делегации доктор Абуд Хабиб Мташар – атташе по вопросам культуры и образования Посольства Республики Ирак в России и господин Аль-Хайдери – пресс-атташе, сотрудник Посольства Республики Ирак в России.</p>
<p>– «Делегация компании КЛААС», 30.01.2020.</p>
<p>30 января центр прогнозирования и мониторинга посетили гости из Германии – Ян-Хендрик Мор, член правления концерна КЛААС, главный исполнительный директор по производству зерноуборочной техники; доктор Ральф Бендиш – генеральный директор завода ООО «КЛААС».</p>
<p>– «Семинар компании AMAZONE», 31.01.2020.</p>
<p>31 января компания AMAZONE в центре прогнозирования и мониторинга провела семинар «Технологии дифференцированного внесения удобрений и средств защиты растений» для 40 специалистов 12 ведущих сельхозпредприятий Краснодарского края.</p>
<p>– «Презентация для иностранных студентов», 04.02.2020.</p>
<p>На подготовительном отделении для иностранных граждан нашего университета проводится обучение по четырем профилям предвузовской подготовки, в том числе инженерно-техническому. Наряду с аудиторными занятиями применяются инновационные формы и методы работы. 4 февраля по инициативе подготовительного отделения на факультете механизации с презентацией «Цифровая трансформация сельского хозяйства» на арабском языке выступил магистрант первого года обучения Аммар Мохаммед из Республики Судан.</p>
<p>– «Делегация Белгородского ГАУ», 13.02.2020.</p>
<p>13 февраля центр прогнозирования и мониторинга посетила делегация Белгородского ГАУ, в составе которой были ректор Станислав Алейник, первый проректор Александр Простенко и проректор по учебной работе Павел Бреславец.</p>
<p>– «On-line или Off-line», 19.02.2020.</p>
<p>19 февраля в учхозе «Краснодарское» стартовал интересный эксперимент по анализу дифференцированного внесения азотных удобрений под озимую пшеницу с использованием оптических сенсоров GreenSeeker и карт-заданий, построенных на основе космоснимков.</p>
<p>– «Комплексное обучение специалистов АПК».</p>
<p>В центре прогнозирования и мониторинга с 4 по 6 марта прошли повышение квалификации по программе «Точное земледелие» главные агрономы, управляющие отделениями, агрономы АО «Рассвет». Комплексное обучение включало как теоретические, так лабораторные и практические занятия.</p>
<p>– «Дистанционный круглый стол», 20.03.2020.</p>
<p>20 марта по инициативе ФГБНУ «ФНЦ риса» был проведен в центре прогнозирования и мониторинга дистанционный круглый стол «Точное земледелие в аграрном производстве: проблемы, решения, эффективность»,<br />
в котором приняли участие ведущие ученые, специалисты и эксперты в области точного земледелия. Обсуждались вопросы использования цифровых технологий в АПК, позволяющих повысить рентабельность сельскохозяйственного производства.</p>
<p>– «КубГАУ принял участие во Всероссийском дне поля», 09.07.2020.</p>
<p>9 июля состоялась онлайн-выставка «Всероссийский день поля 2020». Участники ежегодного события – представители агропромышленной отрасли, стоящие у руля аграрного производства и сбыта, поддерживающие непрерывный научно-технический прогресс, обеспечивающие регулирование на государственном уровне.</p>
<p>– «Международное сотрудничество с Казахстаном», 09.07.2020.</p>
<p>9 июля в рамках научно-технической программы «Трансферт и адаптация технологий по точному земледелию при производстве продукции растениеводства по принципу «демонстрационных хозяйств (полигонов)» в Костанайской области» руководителем центра прогнозирования и мониторинга Евгением Труфляк проведен семинар с сельскохозяйственной опытной станцией «Заречное», а также хозяйствами Костанайской области Казахстана.</p>
<p>– «Развитие металлургии, металлообработки и машиностроения в Краснодарском крае», 29.07.2020.</p>
<p>29 июля в режиме видеоконференции состоялось заседание рабочей группы по развитию металлургии, металлообработки и машиностроения<br />
в Краснодарском крае, в котором приняли участие более 65 человек из 50 организаций региона.</p>
<p>– «Трансферт и адаптация технологий точного земледелия».</p>
<p>9, 23 и 30 июля в рамках научно-технической программы «Трансферт<br />
и адаптация технологий по точному земледелию при производстве продукции растениеводства по принципу «демонстрационных хозяйств (полигонов)» в Костанайской области» в центре прогнозирования и мониторинга проведены семинары, организованные сельскохозяйственной опытной станцией «Заречное».</p>
<p>– «Встреча с Председателем Правительства», 01.09.2020.</p>
<p>1 сентября Председатель Правительства России Михаил Мишустин<br />
в сопровождении губернатора Краснодарского края Вениамина Кондратьева, Министра финансов Антона Силуанова, главы Минобрнауки Валерия Фалькова и Министра цифрового развития, связи и массовых коммуникаций Максута Шадаева посетили Кубанский государственный университет.</p>
<p>– «Книга «Точное сельское хозяйство», 11.09.2020.</p>
<p>Издан новый учебник «Точное сельское хозяйство» : учебник для ВО / под ред. Е. В. Труфляка. – СПб. : Лань, 2020. – 512 с.» коллектива авторов из Кубанского ГАУ (г. Краснодар), Агрофизического НИИ (г. Санкт-Петербург), ВИМ (г. Москва), Самарского ГАУ (г. Самара), Волгоградского ГАУ (г. Волгоград), ООО Агро-Софт (г. Краснодар, г. Ставрополь). В учебнике точное земледелие и точное животноводство рассматриваются как структурные подсистемы, определяющие инновационное развитие аграрной отрасли, изложена история возникновения точного сельского хозяйства, отражены его состояние в России и в мире, перспективы на будущее.</p>
<p>– «Кадровое обеспечение развития промышленных предприятий Краснодарского края», 24.09.2020.</p>
<p>24 сентября в инновационном центре «Аквариум» в преддверии Дня машиностроителя состоялось заседание рабочей группы по развитию металлургии, металлообработки и машиностроения Департамента промышленной политики Краснодарского края.</p>
<p>– «Онлайн-урок в рамках Золотой Осени 2020», 07.10.2020.</p>
<p>7 октября Евгений Труфляк провел онлайн-урок в рамках XXII Агропромышленной выставки АПК «Золотая Осень».</p>
<p>– «Цифровизация и инновации в сфере АПК».</p>
<p>27–30 октября Общероссийская молодежная общественная организация «Российский союз сельской молодежи» совместно с АО «Корпорация «МСП» при поддержке Минсельхоза России провели обучающие семинары для сотрудников Центров компетенций в сфере сельскохозяйственной кооперации и поддержки фермеров субъектов российской Федерации. Мероприятие соответствует федеральному проекту «Создание системы поддержки фермеров и развития сельской кооперации».</p>
<p>– «Финал онлайн-марафона «АгроПрофи», 01.12.2020.</p>
<p>1 декабря состоялся финал онлайн-марафона «АгроПрофи» проводимый Российским союзом сельской молодежи для студентов высших и средне-специальных учебных заведений аграрного направления подготовки.</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-16002" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1071.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1071.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1071-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1071-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1071-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-1071-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 1071 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><strong>Рисунок 5.8</strong> – Раздел «Новости»</p>
<h2><strong>ОБЩИЕ ВЫВОДЫ</strong></h2>
<p>Согласно техническому заданию в 2020 г. выполнено следующее:</p>
<p>1. Актуализация фактического состояния нормативно-правовой документации по беспилотным авиационным системам.</p>
<p>Проанализирована нормативно-правовая документация использования беспилотных авиационных систем в 54 странах – Россия, США, Израиль, Канада, Германия, Франция, Великобритания, Нидерланды, Швеция, Швейцария, Австрия, Венгрия, Бельгия, Ирландия, Норвегия, Хорватия, Кипр, Греция, Болгария, Италия, Чешская Республика, Эстония, Польша, Португалия, Испания, Дания, Финляндия, Китай, Южная Корея, Индия, Япония, Австралия, Аргентина, Азербайджан, Бразилия, Камерун, Египет, Индонезия, Иран, Мексика, Шри-Ланка, Турция, Венесуэла, Украина, Республика Беларусь, Чили, Эквадор, Перу, Сингапур, Исландия, Новая Зеландия, Кения, Шри-Ланка, Катар.</p>
<p>Использование дронов в большинстве стран разрешены при различных условиях в зависимости от законодательства.</p>
<p>Запрещено использование БПЛА в Ираке, Иране и Сирии. В ряде стран, таких как Северная Корея, Судан, Ливия, Ливан, Уганда и др. не обнаружены какие-либо упоминания о правилах применения беспилотной авиации.</p>
<p>2. Выполнено изучение и анализ состояния современного рынка технологического оборудования и тенденций развития в области цифрового сельского хозяйства.</p>
<p>На основе полученного материала подготовлен учебник (Точное сельское хозяйство : учебник для ВО / под ред. Е. В. Труфляка. – СПб. : Лань, 2020. – 512 с.) коллективом авторов из Кубанского ГАУ (г. Краснодар), Агрофизического НИИ (г. Санкт-Петербург), ВИМ (г. Москва), Самарского ГАУ (г. Самара), Волгоградского ГАУ (г. Волгоград), ООО Агро-Софт<br />
(г. Краснодар, г. Ставрополь).</p>
<p>В учебнике точное земледелие и точное животноводство рассматриваются как структурные подсистемы, определяющие инновационное развитие аграрной отрасли, изложена история возникновения точного сельского хозяйства, отражены его состояние в России и в мире, перспективы на будущее.</p>
<p>3. Выполнено изучение кадрового, интеллектуального, методического обеспечения научных и образовательных учреждений по цифровизации АПК и оценка научно-технологических тенденций и их индикаторов развития<br />
в РФ, которое отражено в изданном учебнике.</p>
<p>Точное сельское хозяйство» : учебник для ВО / под ред. Е. В. Труфляка. – СПб. : Лань, 2020. – 512 с.</p>
<p>4. Выполнена актуализация прогноза о перспективных направлениях технологического развития АПК РФ в области цифровизации сельского хозяйства.</p>
<p>Центром прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ в сентябре–октябре 2020 г. проведено анкетирование по направлению, свзанным<br />
с цифровым сельским хозяйством.</p>
<p>В анкетировании приняли участие 81 эксперт (56 % категории «наука<br />
и образование», 26 % – бизнес, 11 % – административные органы; 7 % – другие) из Германии; Анголы; Москвы и Московской области; Санкт-Петербурга; Краснодара и Краснодарского края; Ростова-на-Дону и Рос­товской области; Твери; Чебоксар; Ставрополя; Саратова; Нальчика; Воронежа; Волгограда; Казани; Биробиджана; Новосибирска; Оренбурга; Орла; Рязани; Екатеринбурга; Ярославля; Кемерова; Улан-Удэ; Курска; Алтайского края; Брянской, Самарской, Псковской, Ульяновской, Челябинской областей.</p>
<p>Среди участвующих в опросе были президент некоммерческого партнерства; председатель совета директоров; глава сельского поселения; директора – 10 человек (12 %); советник; проректора / заместители директоров – 5 (6 %); руководители управлений / групп / направлений / проектов – 5 (6 %); деканы – 4 (5 %); заведующие кафедрой / лабораторией – 9 (11 %); профессора – 4 (5 %); доценты – 10 (12 %); начальники отделов –<br />
5 (6 %); агрономы – 2 (2 %); главный / ведущий специалист, научный сотрудник – 4 (5 %); 26 % – консультанты, менеджеры, торговые представители, член партии.</p>
<p>В первом блоке основных вопросов представлены анкеты по цифровизации с.-х. предприятий и ее связи с повышением уровня жизни, концентрацией специалистов в российских и иностранных компаниях. Второй блок вопросов связан с эффективностью использования беспилотных летательных аппаратов, спутниковых снимков NDVI, приобретения агрохимической лаборатории для хозяйства, использования азотных сканеров при внесении удобрений в режиме on-line и системы картирования урожайности. Третий блок – с актуальностью применения новинок, которые появляются на выставках и рынке.</p>
<p>Вопросы по реализации технологических трендов в 2021–2030 гг. состоят из блока анкет по технологиям точного земледелия и живот­новодства.</p>
<p>Анкетирование состояло из 23 основных вопросов, 17 вопросов по реализации технологических трендов в 2021–2030 гг. (11 вопросов, связанных<br />
с точным земледелием; 6 – точным животноводством) и проводилось в формате онлайн-тестирования на сайте foresight.kubsau.ru.</p>
<p>На основании проведенного анкетирования, связанного с вопросами цифровой трансформации сельского хозяйства, можно констатировать, что сельхозпредприятия, не применяющие технологии цифровой трансформации, будут проигрывать в конкуренции более современным компаниям.</p>
<p>При этом рост высокотехнологичных компетенций в стране способствует повышению уровня жизни.</p>
<p>Без субсидирования государства реализация программы цифрового сельского хозяйства будет затруднительна.</p>
<p>Деиндустриализация страны приводит к падению производительности<br />
в сельском хозяйстве.</p>
<p>Потребностью современного сельхозмашиностроения является рост роли сервисного обслуживания (техническое обслуживание, обновление<br />
и настройка программного обеспечения и т. п.).</p>
<p>Актуальным является тренд аренды сельскохозяйственной техники на основе «времени реального использования».</p>
<p>В рамках реализации цифрового сельского хозяйства будет происходить концентрация профессиональных специалистов в преимущественно крупных как отечественных, так и иностранных компаниях.</p>
<p>Представленные элементы точного земледелия и животноводства эксперты относят к высокой важности, большая часть которых будет реализована до 2030 г.</p>
<p>6. Центром прогнозирования и мониторинга в 2019–2020 гг. организован через региональные органы управления сбор статистической информации по использованию элементов точного сельского хозяйства.</p>
<p>Рейтинги составлены на основе данных, полученных из 64 регионов по точному земледелию, 68 регионов по точному животноводству.</p>
<p>Элементы точного земледелия используются в 55 регионах, 2834 хозяйствах на площади 15,5 млн га (2019–2020 гг.). Точное земледелие используется в 10 % хозяйств из проанализированных регионов.</p>
<p>В 2018 г. проанализировано – 52 региона, элементы точного земледелия использовались в 40 регионах, 1930 хозяйствах на площади 12,5 млн га.</p>
<p>Повысилось количество регионов, использующих новые технологии<br />
в растениеводстве на 38 %; хозяйств – на 47 %; общая площадь, на которой применяются элементы точного земледелия – на 24 %.</p>
<p>По результатам анализа использования элементов точного земледелия<br />
в лидерах находятся Волгоградская область (257 хозяйств), Краснодарский край (250 хозяйств), Воронежская область (211 хозяйств). Конкурируют по показателю общей площади, на которой используются элементы точного земледелия – Воронежская область (1,33 млн га), Краснодарский край<br />
(1,22 млн га), Волгоградская область (1,2 млн га).</p>
<p>В Краснодарском крае количество хозяйство увеличилось на 32 %, в Воронежской области – на 16 %.</p>
<p>Площадь, на которой используются элементы точного земледелия, в Воронежской области увеличилась на 18 %, в Краснодарском крае – на 27 %.</p>
<p>Элементы точного животноводства используются в 58 регионах, 1707 хозяйствах с общим поголовьем 3 млн (2019–2020 гг.). Точное животноводство используется в 13 % хозяйств из проанализированных регионов.</p>
<p>В 2018 г. проанализировано – 46 регионов, элементы точного животноводства использовались в 35 регионах, 789 хозяйствах с общим поголовьем 1,7 млн.</p>
<p>Повысилось количество регионов, использующих новые технологии<br />
в животноводстве в 1,7 раза; хозяйств – в 2,2 раза; поголовье КРС в хозяйствах, использующих элементы точного животноводства по регионам –<br />
в 1,8 раза.</p>
<p>По количеству хозяйств, использовавших элементы точного животноводства, доминируют Удмуртская Республика (123 хозяйства), Кировская область (92 хозяйства), Алтайский край (88 хозяйств); по поголовью КРС – Краснодарский край (212 тыс.), Свердловская область (188 тыс.), Удмуртская Республика (166 тыс.).</p>
<p>В Удмуртской Республике количество хозяйство увеличилось в 1,7 раз.</p>
<p>По поголовью КРС увеличилось в Краснодарском крае в 2,7 раза, Свердловской области – в 1,2 раза, Удмуртской Республике – 1,9 раза.</p>
<p>По повышению квалификации работников лидируют Ленинградская область (67 хозяйств), Московская область (47 хозяйств), Краснодарский край (46 хозяйств); Белгородская область (258 человек), Калужская область<br />
(238 человек), Краснодарский край (234 человека).</p>
<p>Программы по развитию, поддержке и внедрению элементов точного сельского хозяйства используются в 12 регионах: Архангельской, Белгородской, Костромской, Московской, Нижегородской, Новосибирской, Рязанской, Смоленской, Тамбовской, Тверской, Ярославской областях и Хабаровском крае.</p>
<p>7. Подготовлены учебно-методические, научные и аналитические материалы по направлению «Цифровое сельское хозяйство» (см. приложение):</p>
<p><em>Учебник</em>:</p>
<p>Точное сельское хозяйство : учебник для ВО / под ред. Е. В. Труфляка. – СПб. : Лань, 2020. – 512 с.</p>
<p><em>Учебные пособия</em>:</p>
<p>Труфляк, Е. В. Современные зерноуборочные комбайны : учеб. пособие / Е. В. Труфляк, Е. И. Трубилин. – 3-е изд., стер. – СПб. : Лань, 2020. – 320 с. – ISBN 978-5-8114-2448-1. – Текст : электронный // Лань : электронно-библиотечная система. – URL : https://e.lanbook.com/book/130497 (дата обращения: 24.01.2020). – Режим доступа : для авториз. пользователей.</p>
<p>Точное земледелие : учеб. пособие / Е. В. Труфляк. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – 164 с.</p>
<p>Труфляк, Е. В. Современные зерноуборочные комбайны : учеб. пособие для СПО / Е. В. Труфляк, Е. И. Трубилин. – СПб. : Лань, 2020. – 320 с.</p>
<p><em>Монография</em>:</p>
<p>Мониторинг и прогнозирование научно-технологического развития АПК России на период до 2030 года : монография / под общ. ред. И. Л. Воротникова; ФГБОУ ВО Саратовский ГАУ. – Саратов: Амирит, 2020. – 328 с.</p>
<p><em>Аналитические материалы:</em></p>
<p>Труфляк, Е. В. Результаты анкетирования по направлению «Цифровая трансформация сельского хозяйства» / Е. В. Труфляк, А. С. Креймер,<br />
Н. Ю. Курченко. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – 21 с.</p>
<p>Труфляк, Е. В. Рейтинг регионов по использованию элементов точного сельского хозяйства / Е. В. Труфляк. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – 26 с.</p>
<p>Курченко, Н. Ю. Нормативно-правовая база использования беспилотных авиационных систем / Н. Ю. Курченко, Е. В. Труфляк. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – 45 с.</p>
<p><em>Статья в базе данных Web of Science:</em></p>
<p>Truflyak, E. V. Questionnaire results department of the departmental project «Digital agriculture» / E. V. Truflyak, N. Y. Kurchenko // Global Challenges and Prospects of the Modern Economic Development 6 II International Scientific Conference GCPMED 2019. – European Proceedings of Soial &amp; Behavioural Sciences (EpSBS), 2020. – e-ISSN: 2357-1330. – LXXIX – GCPMED. – P. 1565–1569. – DOI : 10.15405/epsbs.2020.03.224.</p>
<p><em>Статьи:</em></p>
<p>Труфляк, Е. В. Сравнительный анализ дифференцированного внесения удобрений в режимах on-line и off-line / Е. В. Труфляк, Даду Монес // Научное обеспечение агропромышленного комплекса : сб. ст. по материалам<br />
75-й науч.-практ. конф. студентов по итогам НИР за 2019 год / отв. за вып.<br />
А. Г. Кощаев. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – С. 342–345.</p>
<p>Труфляк, Е. В. Экономическая эффективность дифференцированного внесения удобрений в режимах on-line и off-line / Е. В. Труфляк, Е. А. Лазарев // Научное обеспечение агропромышленного комплекса : сб. ст. по материалам 75-й науч.-практ. конф. студентов по итогам НИР за 2019 год / отв. за вып. А. Г. Кощаев. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – С. 357–360.</p>
<p>Сравнительный эксперимент по дифференцированному внесению удобрений в режимах on-line и off-line // Ресурсосберегающее земледелие (специализированный сельскохозяйственный журнал). – 2020. – № 48 (04). – С. 19–26.</p>
<p>Создан ютуб-канал «Центр прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ», на котором размещено 90 видео (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/channel/UCrPRhGM7-WpIM2Z3MmfRjsQ/videos" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/channel/UCrPRhGM7-WpIM2Z3MmfRjsQ/videos</a>). Подготовлены и размещены на ютуб-канале:</p>
<p>– 14 презентаций (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZLmm6TxT2VI_rUFEUJXm_uy" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=<br />
PLAqcZxzZTUZLmm6TxT2VI_rUFEUJXm_uy</a>);</p>
<p>– 6 презентаций на арабском языке (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZJtqznvNLrhCx7LBdHc1QZN" target="_blank" rel="noopener">https://www.you­tube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZJtqznvNLrhCx7LBdHc1QZN</a>);</p>
<p>– 6 лекций (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZLyxsodbfBoTeYEHLRk6wpd" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqc<br />
ZxzZTUZLyxsodbfBoTeYEHLRk6wpd</a>);</p>
<p>– 2 лекции на английском языке (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZI2bFBpG0JpAHh_Dh7_-_9v" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/<br />
playlist?list=PLAqcZxzZTUZI2bFBpG0JpAHh_Dh7_-_9v</a>);</p>
<p>– 1 лекция на португальском языке (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/watch?v=aIbpmUB2uJU&amp;list=PLAqcZxzZTUZLIc3ADxK9wXBTB5diK4VkR&amp;index=1&amp;t=524s" target="_blank" rel="noopener">https://www.you­tube.com/watch?v=aIbpmUB2uJU&amp;list=PLAqcZxzZTUZLIc3ADxK9wXBTB5diK4VkR&amp;index=1&amp;t=524s</a>);</p>
<p>– 15 лабораторных работ (<a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZI4d_OV4dP5EGvF51toYEPD" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZx<br />
zZTUZI4d_OV4dP5EGvF51toYEPD</a>);</p>
<p>– 25 видео (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZIZRaOh6cvghv1wLN1_Um0q" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZ<br />
xzZTUZIZRaOh6cvghv1wLN1_Um0q</a>);</p>
<p>– 16 видео раздела «Научная работа»: (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZLGqLBCS5-UXa9x5qW_pLRi" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZLGqLBCS5-UXa9x5qW_pLRi</a>).</p>
<p>8. Подготовлено по результатам работы Центра:</p>
<p>– 12 публикаций;</p>
<p>– 2 аналитических справки;</p>
<p>– 1 прогнозный материал;</p>
<p>– проведено и принято 20 научных и учебных мероприятия.</p>
<p>9. В учебно-опытном хозяйстве Кубанского ГАУ «Краснодарское»<br />
с 19 февраля по 6 июля 2020 г. проводился эксперимент по сравнительному анализу дифференцированного внесения удобрений в режимах on-line и off-line.</p>
<p>Цель эксперимента – сравнение режимов дифференцированного внесения азотных удобрений (первая и вторая подкормки) под озимую пшеницу с использованием карт-заданий и сенсоров GreenSeeker.</p>
<p>Результаты эксперимента показали, что при использовании режима on-line происходит экономия удобрений в среднем 16 кг/га, по сравнению с режимом off-line без потери урожайности и качества зерна (содержание клейковины повысилось на 2,3 %; протеина – 0,6 %).</p>
<p>Дополнительные капиталовложения составляют 1,4 млн руб., эффект от экономии удобрений – 110 руб./га.</p>
<h2><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-Источники-и-литр-Тема-3.docx">Используемая литература и источники</a></h2>
<p>&nbsp;</p>
]]></content:encoded>
					
					<wfw:commentRss>https://apknet.ru/texnologii-tochnogo-selskogo-xozyajstva/feed/</wfw:commentRss>
			<slash:comments>0</slash:comments>
		
		
			</item>
		<item>
		<title>Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов</title>
		<link>https://apknet.ru/genotipirovanie-perspektivnyx-aborigennyx-i-introducirovannyx-sortov-rossijskoj-federacii-s-ispolzovaniem-ipbs-markerov-dlya-selekcii-novyx-otechestvennyx-adaptivnyx-gibridov/</link>
					<comments>https://apknet.ru/genotipirovanie-perspektivnyx-aborigennyx-i-introducirovannyx-sortov-rossijskoj-federacii-s-ispolzovaniem-ipbs-markerov-dlya-selekcii-novyx-otechestvennyx-adaptivnyx-gibridov/#respond</comments>
		
		<dc:creator><![CDATA[Leonid]]></dc:creator>
		<pubDate>Sun, 11 Jul 2021 18:50:38 +0000</pubDate>
				<category><![CDATA[Сельскохозяйственная биология]]></category>
		<category><![CDATA[Растениеводство]]></category>
		<category><![CDATA[ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ]]></category>
		<guid isPermaLink="false">https://apknet.ru/?p=14611</guid>

					<description><![CDATA[Молекулярно-генетический анализ особенностей строения геномов аборигенных и интродуцированных сортов винограда с использованием маркеров, основанных на присутствии ретротранспозонных последовательностей в ядерном геноме.]]></description>
										<content:encoded><![CDATA[<h2><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2020-Тема-1-Титульный-и-исполн.docx">Титульный лист и исполнители</a></h2>
<p><strong>РЕФЕРАТ</strong></p>
<p>Отчет 115 с., 3 ч., 12 табл., 24 рис., 269 источников литературы.</p>
<p>ВИНОГРАД, АБОРИГЕННЫЕ СОРТА, ДНК, ГИБРИДЫ, СЕЛЕКЦИЯ, ДНК-МАРКЕРЫ, ИНТРОДУЦИРОВАННЫЕ СОРТА, АБОРИГЕННЫЕ СОРТА, КЛОНЫ, МОБИЛЬНЫЕ ДНК-ЭЛЕМЕНТЫ.</p>
<p>Объект исследований – перспективные аборигенные и интродуцированные сорта и клоны винограда, отобранных в условиях Юга Российской Федерации и содержащихся в национальной ампелографической коллекции Анапской зональной опытной станции СКЗНИИСиВ.</p>
<p>В работе представлены результаты исследований молекулярно-генетического разнообразия аборигенных и иснтродуцированных сортов и клонов винограда, их филогенетические взаимоотношения, а также особенности распределения аллелей в популяциях и групп сортов виноргада; сделаны выводы о потенциальном родстве между изученными сортами, особенностями их генетических профилей; в результате были построены кластерные древа отображающие филогенетические взаимоотношения между изученными генотипами; в том числе, были построены координатные плоскости на основе генетической дистанции между образцами, которые также отображали их генетическое родство; по итогу, были сделаны предположения о происхождении некоторых сортов и их родстве.</p>
<p>Выявлены родственные взаимоотношения между аборигенными и интродуцированными сортами посредством сравнения их генетических профилей, а также кластеризации и распределении PCoA. Также, было проанализировано генетическое разнообразие внутри и между выбранными популяциями. Данные выводы могут быть использованы как при подборе пар для скрещивания с целью селекции новых высокопродуктивных и адаптивных сортов для выращивания на Юге Российской Федерации.</p>
<h2><strong>ВВЕДЕНИЕ</strong></h2>
<p>Культурный виноград (<em>Vitis vinifera</em> subsp. <em>sativa</em> D. C.) является одной из наиболее ценных плодово-ягодных культур в мире по экономической эффективности и площади выращивания. Литературные, археологические и палео-ботанические источники позволяют понять распространение виноградарства в Европе и, в частности, в Российской Федерации, начиная с территории Кавказа [1, 18].</p>
<p>Сорта винограда, которые возделываются веками в традиционных винодельческих регионах, все чаще заменяются более высокопродуктивными клонами. Генетическое разнообразие, накопившееся за столетия культивирования традиционных сортов, крайне важно для улучшения их генома. Аборигенные сорта, вытесняемые новыми, представляют собой огромный, еще не раскрытый пласт знаний и значительный источник ценных генов для селекционной науки. Поэтому так важна молекулярно-генетическая идентификация коллекции АЗОСВиВ (Анапская зональная опытная станция виноградарства и виноделия), позволяющая не только узнать ее биологическое разнообразие, но также установить сортосоответствие в сравнении с другими известными мировыми коллекциями. Описание аборигенных сортов винограда по широкому спектру генетических признаков позволит не только создать ДНК-паспорта генотипов, но и использовать эти данные для установления родственных связей между ними и при поисках их родителей, что станет неоценимой помощью селекционерам во время подбора родительских пар для скрещиваний.</p>
<p>Обширная исследовательская программа проводится во всех странах развитого виноградарства на распространенных известных сортах для отбора «чистокровных» высокоурожайных и высококачественных генотипов, обладающих различным спектром полезных для сельского хозяйства и востребованных потребителем признаков. И конечной целью проведения этих исследований является обеспечение материальной и теоретической базы для обоснования совершенствования клоновой селекции и повышения ее результативности [113, 229].</p>
<p>Как известно, с развитием молекулярной биологии возникла возможность ускорения селекционного процесса на базе использования молекулярно-генетических методов, в результате чего появилась маркерная селекция.</p>
<p>Сортовой состав популяций Краснодарского края и, в целом, Юга России крайне многообразен. Распространение современной методологии маркер опосредованной селекции выявило перспективность использования молекулярно-генетических методов анализа, что повысило ее эффективность, особенно после открытия наличия генов детерминирующих антоциановую окраску ягод винограда, набор которых не только специфичен для каждого сорта винограда, но и может отличаться по своему строению как от сорта<br />
к сорту, так и от клона к клону.</p>
<p>Первые результаты по идентификации клонов молекулярными маркерами показали, что такие НИР ограничиваются лишь набором использованных локусов, в которые могут входить различные маркерные признаки, такие как, например, микросателлитные маркеры, iPBS-маркеры, IRAP, ISSR и пр. Таким образом, при использовании большого количества маркеров вероятность найти различающиеся аллели повышается [217, 218].</p>
<p><strong>Целью </strong>исследования является молекулярно-генетический анализ особенностей строения геномов аборигенных и интродуцированных сортов винограда с использованием маркеров, основанных на присутствии ретротранспозонных последовательностей в ядерном геноме.</p>
<p>Для выполнения цели исследований были поставлены следующие <strong>задачи</strong>:</p>
<p><strong>Сбор образцов</strong> планируется выполнять в несколько этапов на нескольких коллекциях: Ампелографическая коллекция АЗОС ВиВ и Ампелографическая коллекция Крымской ОСС. Помимо этого, коллекции АЗОС ВиВ<br />
и Крымской ОСС находятся близко к предполагаемому месту проведения исследований, что дает возможность в случае необходимости повторить сбор образцов или заготовить черенки на проращивание. Также, на кафедре имеются Сосуд Дьюара, хладогенты и специальные ящики для транспортировки охлажденных образцов.</p>
<p><strong>Пробоподготовка и выделение ДНК.</strong> Пробоподготовка образцов листьев к выделению ДНК будет проводиться путем высушивания их в лиофильной сушке Martin Christ BETA 2-8 LDplus, имеющейся на кафедре биотехнологии, биохимии и биофизики Кубанского ГАУ. Дробление высушенных листьев будет производиться на вибрационной мельнице GT200, которая также доступна на кафедре. Выделение ДНК из дробленых листьев будет осуществляться при помощи DNeasy Plant Mini Kit, так как для последующего ПЦР-анализа и секвенирования потребуется высокое качество образцов.</p>
<p><strong>ПЦР анализ.</strong> Праймерные пары и параметры амплификации уже разработаны, стандартны для данного метода и доступны в открытых литературных источниках. Поэтому будет требоваться выполнить повторение стандартного набора методик предлагаемых к изучению образцов. При этом важно отметить, что авторы проекта имеют контакты со специалистами из Европейского Союза (ЕС), которые уже выполняли подобные работы и готовы оказать консультационную помощь не только на этом, но и последующих этапах выполнения проекта. Также на кафедре имеется все необходимое оборудование для выполнения госзадания.</p>
<p><strong>Анализ полученных данных</strong> планируется проводить in silico с использованием программ: FAMD 1.14, GenAlEx 6.3, STRUCTURE и пр.</p>
<h2><strong>1 ОБЗОР СОСТОЯНИЯ ИЗУЧЕННОСТИ ВОПРОСА</strong></h2>
<h3><strong>1.1 Основы ДНК-маркирования генотипов винограда</strong></h3>
<p>Внутривидовая гибридизация применяется в течение многих веков. Результатами ее являются многие сорта сельскохозяйственных культур, в том числе винограда. Анализ литературных источников показывает, что полученные результаты в этом направлении, хотя и значительные, но не решают всех проблем виноградарской отрасли.</p>
<p>Основная причина невысокой эффективности селекции винограда – недостаток знаний о биологических особенностях сортов и генетически обусловленных механизмах передачи признаков и свойств потомству. Это, конечно, не означает, что возможности межсортовой гибридизации исчерпаны и что от нее следует отказаться, как от устаревшего и непродуктивного метода. В последнее время получено немало сортов, обладающих комплексом ценных свойств, которые были выделены методами как традиционной гибридизации, так и клоновой селекции, они регистрируются и обогащают промышленный сортимент [15, 24, 79, 91].</p>
<p>Генетическая изменчивость сортов винограда, выраженная в возникновении мутаций и неоднородности исходного материала, выражается в фенотипическом варьировании морфологических признаков, например, темпом роста, формирования органов, физиологических свойствах, изменяющих жизнеспособность организмов [45, 57, 76, 80]. Или фенотипически не выражается, например, в случаях изменения биохимических свойств, регулирующих синтез химических веществ [27, 40, 54]. Поэтому отбор можно вести по всем вышеперечисленным признакам и свойствам, особенно выделяя из них хозяйственно ценные. Однако морфологические, физиологические и биохимические признаки находятся в корреляции с генотипом и изменяются вместе с ним [25, 83, 88, 90]. Эти изменения могут быть вызваны влиянием каких-либо внешних условий, поэтому установить причину варьирования не всегда удается с достаточной точностью [32, 53, 75, 97]. Для этого необходимо использовать новые методы исследования сортов, такие как ДНК-маркирование [34, 56, 71]. В частности, направленных на идентификацию конкретных генов, несущих важное сельскохозяйственное значение.</p>
<p>ДНК-маркеры – характеристика генотипа, не зависящая от фенотипа, что обеспечивает богатство полиморфизмов, позволяющих идентифицировать сорта и строить точные генетические карты во многих высших растениях [22, 26, 48]. Высокое генетическое разнообразие у винограда, распространенного по всему миру, вызывает интерес к оценке генеалогии внутри рода <em>Vitis</em>, а также необходимость улучшения распознающих систем, пригодных для идентификации виноградных сортов [72, 98, 99]. Это поощряет попытки внедрения и использования данных о строении генов и генотипов в целом, из которых можно создавать сортовой резерв для улучшения существующего ампелографического разнообразия [8, 49, 78, 82, 188].</p>
<p>На данный момент, генетический резерв винограда – это смесь стародавних и недавно выведенных сортов [6, 18]. Перед тем как новые сорта полностью заменят старые, важно идентифицировать ценные древние генотипы и редкие формы. В настоящее время сорта идентифицируются различными молекулярными маркерами, такими как микросателлиты. Они представляют собой короткие последовательности ДНК, повторяющиеся несколько раз при каждом локусе. В связи с ошибками прочтения, полимеразы, во время репликации ДНК, создали множество аллелей, которые различны по длине из-за разного количества повторов последовательности. В растениях микросателлиты встречаются часто – один на каждые 1–2,4 тыс. нуклеотидов в таких видах, как арабидопсис, рис, соя, кукуруза и пшеница. Множество SSRs было обнаружено в винограде, а также выявлена высокая гетерозиготность, что повышает полиморфизм микросателлитных маркеров и ведет к решению многих проблем, связанных с клоновой и сортовой идентификацией, а также анализом генеалогии [42, 43, 44, 269].</p>
<p>Молекулярные маркеры имеют огромный потенциал по поиску генетических различий между генотипами и определению разнообразия между клонами. Среди молекулярных маркеров, SSR-маркеры являются наиболее подходящими из-за их кодоминантности, огромного числа повторов и высокой частоты в селективно нейтральной области. Высоко насыщенные карты сцепления на основе одних только микросателлитных маркеров, а также их совместное использование с другими типами маркеров доступных в винограде. Микросателлитные маркеры оказались полезными для установления «личности» генотипов, фингерпринтинга и анализа разнообразия подвоев<br />
и сортов, а также межвидовых гибридов [158, 173].</p>
<p>В последние годы создание ДНК-отпечатков показало себя очень полезным для картирования геномов и изучения биоразнообразия. Достаточно высокий полиморфизм позволяет получать большое разнообразие генетических «отпечатков» при известном наборе генетических маркеров. Они доказали свое преимущество перед биохимическими и фенотипическими маркерами, которые имеют низкую величину полиморфизма. В основном, ДНК методы основаны на обнаружении полиморфных геномных последовательностей для внутренних сайтов рестрикции путем гибридизации клонированных зондов<br />
с ДНК. Например, длина полиморфных рестрикционных фрагментов (AFLP), случайно амплифицированная полиморфная ДНК (RAPD) или амплификация между простыми повторами последовательностей или микросателитов (SSR). Метод амплификации полиморфных фрагментов опирается на полиморфизм в сайтах узнавания для ферментов рестрикции, но с начала использования праймеров есть необходимость в анализе последовательности ДНК для обнаружения полиморфизмов.</p>
<h3><strong>1.2 Методы исследования полиморфизма ДНК</strong></h3>
<p>На сегодняшний день существует огромное количество методов исследования ДНК. Каждый из них предоставляет большое количество возможностей получить ответы на бесконечное количество вопросов. В данном разделе диссертации мы рассмотрим только те, которые использовались в процессе работы по исследованию полиморфизма генетических ресурсов винограда.</p>
<p>Наиболее простой способ выделения ДНК СТАБ-методом был описан еще в 1994 г. в статье Л. Муххамад с соавторами – «Простой и эффективный способ для выделения ДНК из виноградных растений» [194].</p>
<p>Развитие методов потребовало более «чистую» ДНК. Приведенный ниже метод выделения дает достаточно большой «урожай» ДНК, но имеющей примеси-загрязнители [213, 252]. Поэтому при дальнейшей работе этот метод был улучшен применением бета-меркаптоэтанола и поливинилпропиллидона, которые позволяют для очистки ДНК от фенольных соединений и соединений ДНК с сахаридами [108, 159, 160]. Такой метод называют «модифицированным СТАБ-методом». Он позволяет выделять ДНК не только из свежих листьев, но и из гербарных и мумифицированных, т. е. дает возможность изучать очень старые препараты листьев, что крайне важно при изучении происхождения видов и филогенеза [30, 31, 165].</p>
<p>Наличие загрязнителей сильно влияет на использование ДНК в исследованиях из-за ингибирования процесса реакции в целом и снижения активности Taq-полимеразы, а также из-за плохой очистки ДНК может меньше храниться из-за нестабильности. Поэтому так важно не только выделить большое количество ДНК, но и правильно и хорошо ее очистить [129, 181, 228].</p>
<p>В статьях, приведенных выше, описывается метод, дающий высокое количество чистой ДНК, которая долго хранится, но этот способ выделения имеет ряд отрицательных факторов. Во-первых, тратится много времени, во-вторых, используемые вещества, такие как хлороформ, изоамиловый спирт, бета-меркаптоэтанол являются крайне вредными для организма человека.</p>
<p>Такие чувства, как страх за свое здоровье, желание сделать больше за одинаковое количество времени, создали наборы для выделения нуклеиновых кислот различными методами. В настоящее время это направление активно развивается, создаются «наборы», позволяющие делать больше, быстрее и безопаснее, что сказывается не только на здоровье и работоспособности рабочих, но и на финансовом положении лаборатории, так как исключаются затраты на защитное снаряжение лаборантов.</p>
<p>К примеру, выделение ДНК с использованием PeqGOLD PLANT DNA mini KIT – это дорогой, но очень эффективный способ выделения и очистки ДНК. Если при использовании вышеописанных методик медленно, но верно выделялось 12 образцов, то при применении данного набора и двух центрифуг выделялось 24 биотипа сразу [55, 182].</p>
<p>ПЦР – полимеразная цепная реакция. Этот этап был разработан Кэри Мюллисом, за что в 1993 г. он был удостоен Нобелевской премии по химии [215].</p>
<p>Следует упомянуть, что для более эффективной работы разработаны наборы и для ПЦР-реакций, тот же Peqlab-Kit. Результатом этого явилась унификация параметров реакции, так теперь не надо подбирать для каждого праймера свою температуру отжига [207]. Тем не менее, данный набор удобно использовать при мультиплексной ПЦР, когда применяется большое число ДНК-маркеров одновременно. В случае же, когда используются маркеры на конкретные генетические признаки, применяются специализированные под каждый маркер параметры, а они, в свою очередь, применяются отдельно друг от друга.</p>
<p>На сегодня разработано огромное количество праймеров, используемых в работе. Они применяются как для генотипирования различных участков ДНК, как связанных, так и не связанных с кодирующими последовательностями. И, конечно же, разработаны маркеры, помогающие идентифицировать гены устойчивости к вредителям и болезням, которые обычно имеются не только в литературных источниках, но и в базах данных [197, 235].</p>
<p>Как уже было сказано, для большего упрощения и убыстрения работы были разработаны мультиплексы – подборка групп праймеров, гибридизирующихся с цепью исследуемой ДНК одновременно. Их подбирают таким образом, чтобы размер получаемых амплифицированных аллелей не перекрывал друг друга. Это крайне важно при анализе, дабы не возникло путаницы при дифференциации продуктов амплификации. При использовании мультиплексов в гель-электрофорезе используют Touch Down PCR. Это такая разновидность полимеразной цепной реакции, где в первых циклах температура отжига праймера выше необходимой, а в последующих она снижается до оптимальной. Таким образом, убираются неспецифичные элементы отжига, мешающие различать продукты амплификации. Следует заметить, что<br />
в капиллярном электрофорезе аллели могут накладываться друг на друга, но при отображении в программе GeneMapper прекрасно различимы по цветам, поэтому они могут применяться вместе [183].</p>
<p>Существует много видов ПЦР-реакции. На мой взгляд, следует обратить внимание на ПЦР в реальном времени. Это далеко не дешевый метод, но он позволяет определить, где и сколько ПЦР продукта амплифицировалось, что избавляет от проверки наличия результатов на любом электрофорезе.</p>
<p>В данном методе используют флюоресцентно-меченые праймеры или ДНК-зонды. Также используется краситель SybrGreen 1, он обеспечивает достаточно простой и экономичный способ детекции, без необходимости применения зондов или специальных праймеров [183].</p>
<p>Очень важно, что qPCR (количественная ПЦР) можно комбинировать<br />
с ОТ-ПЦР (обратно-транскрипционная ПЦР) для измерения малых количеств мРНК, что позволяет исследовать количественную информацию о содержании мРНК в клетке и, следовательно, позволяет судить о величине экспрессии гена в клетке или ткани.</p>
<p>Все полученные данные выводятся на экран компьютера и обрабатываются в реальном времени.</p>
<p>После амплификации следует визуализировать полученные ПЦР-продукты.</p>
<p><em>Визуализация результатов ПЦР.</em> Как экспериментальный метод электрофорез был разработан отечественными учеными, профессорами Московского университета П. И. Стаховым и Ф. Ф. Рейссом в 1809 г.</p>
<p>На данный момент существует большое количество публикаций, описывающих или конкретно электрофорез в полиакриламидном геле или же статьи, повествующие о работах, в которых гель-электрофорез применялся как основной метод разделения продуктов амплификации или же белков [125, 177, 250].</p>
<p>Самый распространенный в мире метод оценки длины амплифицированных фрагментов – это электрофорез в полиакриламидном геле. Но с этим методом связано большое количество проблем и трудностей в использовании. Например, плохая полимеризация акриламидного геля, когда с виду он без изъянов, а после просвечивания ультрафиолетом оказывается, что образцы уползли в край спейсера. Также возможно, что ДНК просто растеклась по акриламиду во время вымачивания в растворе бромистого этидия. Или же произошло отключение электроэнергии и после четырех часов электрофореза, оказывается, что все образцы выстроились в одну линию, где невозможно что-либо идентифицировать [33, 36].</p>
<p>В 1960-х годах был предложен метод секвенирования биополимеров – установление их нуклеотидной или аминокислотной последовательности.<br />
В результате чего получают строение первичной структуры молекулы. Обычно, размеры секвенируемых участков ДНК 100 пар нуклеотидов (при использовании методов next-generation sequencing) и 1000 пар (при секвенировании по Сенгеру). В итоге получают последовательности участков генов, всю мРНК и даже целые геномы [2].</p>
<p>При секвенировании обычно применяют методы Эдмана, Сэнгера и др. До начала сиквенса производят амплификацию участка ДНК при помощи ПЦР, последовательность которого нужно установить.</p>
<p>Метод определения первичной последовательности пептидов разработан в 1950–1956 гг. Виктором Эдманом. Обрабатывается исследуемый пептид специальным набором реагентов, это приводит к отщеплению одной аминокислоты с N-конца. Циклическое повторение реакции и анализ получаемой информации дают знания об исследуемом пептиде. В настоящее время он практически не применяется из-за неколичественного протекания реакции<br />
и побочных продуктов [62].</p>
<p>Другой метод секвенирования был открыт Фредериком Сенгером в 1977 г., за что он был удостоен Нобелевской премии по химии в 1980 г. Также метод известен как «метод обрыва цепи». Принцип метода заключается в том, что одна из цепочек ДНК является матрицей для синтеза второй [224].</p>
<p><em>Капиллярный электрофорез.</em> Если в вышеописанных методах разделение происходит в полиакриламидной пластине, то здесь уже происходит разделение ионов по заряду, в тонком капилляре, заполненном электролитом.</p>
<p>Детектирование с помощью флуоресценции используют для образцов, имеющих собственную флуоресценцию или же модифицированных химическими метками. Данный способ обеспечивает высокую чувствительность. Также используют детектирование флуоресценции, вызванное лазером, подобные системы могут детектировать в пределах 10<sup>–18</sup>–10<sup>–21</sup> моль [230]. При этом важно сказать, что именно данный метод обычно и используется для таргетного секвенирования выбранных участков геномов, полученных в результате амплификации с ДНК-маркерами, при использовании прямого и обратного праймеров.</p>
<h3><strong>1.3 Ампело-генетический анализ сортов </strong><strong>и клонов винограда</strong></h3>
<p>Комбинированные маркерные системы являются отличными дескрипторами, описывающими сорта винограда. Использование их совместно с фенотипическими характеристиками дает наиболее полную картину о состоянии совокупности внешних и внутренних признаков виноградной лозы.</p>
<p>В настоящее время изучение генофонда и фенотипического разнообразия винограда – приоритетная цель для ученых многих стран мира. Этот процесс происходит по признакам, принятым на вооружение под эгидой Международной организации винограда и вина. По большей части, это фенотипические признаки, такие как окраска и форма ягод, цвет и вкус вина, наличие антоциана, биохимические свойства, но большинство исследователей склоняются к тому, что следует использовать молекулярно-генетические маркеры, которые способны не только выявить отличия, но и показать скрытый потенциал у гетерозиготных особей.</p>
<p>В целом и частности, проблема дифференциации сортов и клонов винограда, отбор протоклонов и выделение из них самостоятельных сортов существует давно.</p>
<p>В практике виноградарства известны случаи изменчивости отдельных свойств и признаков. Древнеримские ученые Палладий и Колумелла, наблюдая такие факты, советовали использовать их в практически полезных для человека целях. Колумелла, например, писал, что следует черенковать и использовать в производстве самые их плодородные части. Использовать клоновую селекцию советовали такие виноградари Швейцарии, Германии<br />
и Франции как Казенава, Гюйо, Каррьер, Сарториус, Мюллер-Тургау.<br />
В нашей стране основоположниками ее были С. А. Мельник, А. С. Мержаниан, М. П. Цебрия и др. Настойчиво рекомендовал применять отбор наиболее продуктивных растений И. В. Мичурин: «Тщательной селекцией (отбором) черенков, повторением отводки лучших частей лозы, сравнительно короткой обрезкой и посадкой на лучшую почву следует способствовать развитию лучших качеств» – писал он [12].</p>
<p>На данный момент, клоновой селекции винограда посвящено множество работ, признанных мировой научной элитой. Если говорить в целом, то работа по дифференциации клонов винограда включает в себя изучение фенотипической и генотипической изменчивости. И, как известно, иногда бывает, что фенотипа недостаточно, чтобы отличить сорта, тогда на помощь приходят молекулярно-генетические маркеры [26, 35, 46, 65].</p>
<p>В нашей стране методология проведения клоновой селекции винограда разработана профессором А. С. Мержанианом. На основании многолетних опытов и литературных данных о сортах Каберне-Совиньон, Рислинг, Алиготе, он пришел к выводу, что отбор клонов надо вести учитывая соотношение хозяйственно-ценных и морфологических признаков [63, 87]. Их он разделил на три группы: мутации, модификации (не передаются вегетативному потомству) и длительные модификации (передаются вегетативному потомству). Далее этот метод был улучшен применением использования многомерного статистического анализа и технологии <em>in vitro</em>, что позволило поднять результативность клоновой селекции [85, 89].</p>
<p>Наиболее традиционным считается метод оценки полиморфизма по морфологическим признакам листьев среднего яруса кроны [19, 20]. В ампелографии полиморфизм – это явление биоразнообразия, одновременное существование нескольких форм растений, отличающихся друг от друга генотипически и фенотипически и, таким образом, наличие клоновой изменчивости [1, 9, 10]. Гетерогенный полиморфизм сортов и клонов имеет большое практическое применение, так как они обеспечивают высокую экономическую отдачу при правильном их использовании. И ранее уже проводились исследования различных групп фенотипов сортов Пино и Рислинг (Л. П. Трошин, Е. В. Луценко, П. П. Подваленко, А. С. Звягин), показано различие фенотипов групп винограда 231 учетного куста по 10 листовым признакам [81]. Помимо этого, также была проведена оценка полиморфизма сортогруппы Мерло (Л. Трошин,<br />
А. Звягин, Д. Сидоренко) на базе учебного хозяйства «Кубань» Кубанского ГАУ. В процессе работы авторами установлено, что суммарно незначительное отличие по каждому признаку, в комплексном анализе дает достаточно большую разницу при отборе клонов [84. Таким образом, это позволило отобрать протоклоны сортов для дальнейшего исследования. В целом, как в нашей, так и в других странах, этому направлению исследований отводятся отдельные темы научно-исследовательских работ [135, 255, 267].</p>
<p>Появление ДНК-маркеров произвело взрыв в клоновой селекции. Возможности ДНК-фингерпринтинга практически безграничны, они позволяют не только отличить друг от друга виноградные растения по каким-либо признакам, будь то гены или микросателлитные последовательности, но и создавать эталоны, с которыми можно сравнивать новые сорта и клоны.</p>
<p>Высокая изменчивость и генов и микросателлитных последовательностей дает возможность дифференцировать клоны внутри популяции [111, 164]. Применение этого метода привело к ускорению селекционного процесса. Вместе с идентификацией фенотипа этот метод дает огромное преимущество [187, 232, 241]. Например, описанным способом шестьдесят два иранских сорта были проанализированы по девяти микросателлитным маркерам. Было обнаружено наличие от 4 до 16 аллелей на локус в группах генотипов. Фенограммы, созданные для поиска различий среди сортов и клонов выделили три группы, в которые были собраны все выбранные образцы. Среди иранских столовых сортов были обнаружены синонимы и омонимы [148].</p>
<p>В северо-западной части Испании, на астурианских виноградниках, выращивается много автохтонных сортов винограда. В связи со старостью виноградников, они характеризуются сортосмесью. С целью различения этих сортов и отбора перспективных протоклонов винограда, были проведены исследования по генотипированию 62 клонов виноградной лозы. По итогам отбора 62 генотипа были введены в селекционный процесс [186].</p>
<p>Достаточно большая работа была проведена Министерством сельского хозяйства США по генотипированию 3600 генотипов 35 видов винограда. Для исследования использовали 550 праймерных комбинаций. Было обнаружено от 16 до 38 различных аллелей на локус. Отсутствие аллелей не было обнаружено. В результате исследования были созданы ДНК-паспорта выбранных клонов, также обнаружены два сорта, показавшие одинаковые аллели, а также выявлена высокая полезность SSR маркирования для винограда [259].</p>
<p>Созданы карты сцепления признаков при помощи SSR и SNP маркеров основных популяций винограда, таких как Сирах, Пино нуар, Гренаш, Каберне-Совиньон и Рислинг. В общей сложности для создания карты было использовано 1134 молекулярных маркера. Данные карты могут служить отличным инструментом в селекции виноградной лозы [229].</p>
<p>В Хорватии проводится постоянная работа по выведению новых сортов и отбору протоклонов из старых образцов. Так, в соответствии с международной программой GrapeGen 06 на факультете агрономии в университете Загреба при помощи совместных методов фенотипического и генотипического анализа уже отобрано 100 сортов. Была запущена не только клоновая селекция по отбору продуктивных клонов, но и фитосанитарная селекция наиболее устойчивых сортов к вредителям и болезням [206].</p>
<p>В Турции ведется активная работа по генотипированию сортов и клонов винограда. Например, 23 гибрида были отобраны для селекции по их сортовым характеристикам. Их исследовали в два этапа: по морфо-физиологи­ческим и генетическим параметрам. Фенотипирование проводили в соответствии со стандартной методикой OIV. В генотипировании использовали<br />
20 микросателлитных маркеров, которые показали размер аллелей от 88 до 294 пар оснований [110].</p>
<p>Также странами-участницами программы GeneRes являются Молдова<br />
и Румыния. В их задачу входит изучение сортов винограда бассейна Черного моря. Данная программа финансируется не только Европейским союзом, но<br />
и персонально правительством Люксембурга, что подчеркивает ее значимость для мирового научного сообщества [184].</p>
<p>В Республике Словения широко выращивают технические сорта винограда. Более 50 редких традиционных сортов используется в производстве. Методика их сохранности как генотипов, а также идентификация их по внешним и внутренним признакам была разработана на факультете биотехнологии Университета Любляна [223].</p>
<p>Наука не стоит на месте и поэтому произошло создание так называемых REMAP и IRAP техник для картирования генома винограда с помощью ретротранспозонных и интро-SSR маркеров. Данные методы показывают еще большую вариабельность признаков не только между клоном и контролем, но и между клонами в популяции. Это позволяет поднять на новый уровень клоновую селекцию. Совместное использование этой техники с ампелографическими данными и SSR-маркерами, позволяет получить наиболее полное представление об изучаемом клоне [114, 172, 225].</p>
<p>Мобильные генетические элементы были найдены почти во всех живых организмах в гетеро- и эухроматиновых областях генома. Последствия движения этих элементов в геноме может спровоцировать расширение повторяющихся некодирующих регионов, нарушение функции гена дикого типа, ведущее к статусу псевдогена, модифицирование гена функционирования, что приводит к искажению выбираемых фенотипов и хромосомным перестройкам, приводящим к видообразованию [124, 173]. В европейском винограде наиболее известны три таких элемента Gret-1, Tvv-1 и Vine-1. Интересно, что Gret-1 и Vine-1 впервые были определены по их вставкам в регуляторные последовательности функциональных генов. В настоящее время только Gret-1 был полностью секвенирован, а также раскрыта его связь с мутациями, в результате чего в темно окрашенных сортах появляются светло окрашенные ягоды из-за его включения в промоутер VvMybA1 транскрипционного фактора, управляющего биосинтезом антоцианов в процессе созревания винограда [112, 118, 191].</p>
<p>Ретротранспозоны – это главные двигатели генетического разнообразия и инструменты для обнаружения изменений в геноме, возникших под их влиянием. После демонстрации того, что они часто встречаются в растительных кариотипах, были созданы различные маркерные системы для детекции полиморфизма, вызванного ими, а также анализа генетического разнообразия<br />
в популяциях [170].</p>
<p>Ретротранспозоны являются основным агентом эволюции генома. Были разработаны различные системы молекулярных маркеров, которые используют метод анализа этих генетических элементов и их стабильную интеграцию в дисперсные хромосомные локусы, которые полиморфны внутри каждого вида. Ключевыми методами SSAP, IRAP, REMAP, RBIP и ISBP обнаруживают сайты, в которых ретротранспозоны ДНК сохраняются между семьями элементов, интегрированых в геном. Маркерные системы, использующие эти методы, могут быть легко разработаны и применимы<br />
в отсутствии обширных данных о последовательностях генома. Они предлагают доступ к динамическим и полиморфным частям генома и дополняют методы, такие как SNPs, которые нацелены, в первую очередь, на разделение генов [227].</p>
<p>Ретротранспозоны могут быть использованы в качестве маркеров, потому что их интеграция создает новые соединения между геномной ДНК и их консервативными концами. Для обнаружения полиморфизмов вставки ретротранспозона маркерные системы обычно полагаются на ПЦР-амплификации между этими концами и некоторые фланговые компоненты геномной ДНК.<br />
В связи с этим были разработаны два метода: анализ ретротранспозона-микросателлит (REMAP) и внутренний полиморфизм ретротранспозона (IRAP), которые не требуют рестрикции ферментами. IRAP продукты, полученные от двух близлежащих ретротранспозонов, используются для амплификации последовательностей, стоящих перед праймерами. В REMAP амплификация между ретротранспозонными последовательностями простых повторов (микросателлитов) производит маркерные полосы [171, 172, 174].</p>
<p>В Испании были исследованы клоны сорта Темпоранилло с совместным использованием микросателлитных и ретротранспозонных маркеров. Всего было описано 28 клонов, из которых только один смог пройти отбор по генетическим маркерам. Учитывая, что в исследовании использовался всего один ретротранспозонный маркер, можно сделать вывод о их высоком полиморфизме [126, 257, 260, 263].</p>
<p>В Японии было проведено исследование по изучению влияния ретротранспозонов на окраску кожицы ягод винограда. По результатам был сделан вывод, что мутации в изменении окраски ягод могут быть вызваны ретротранспозонами, что было подтверждено молекулярно-генетическими исследованиями с применением маркеров на гены VvmybA1 и VlmybA1-1 [179]. Окраска ягоды является одной из самых главных характеристик сортов винограда. Это морфологическое свойство различает сорта друг от друга в момент полной зрелости [127, 254, 256]. Дополнение формы листа, грозди и окраски побега может быть достаточно, чтобы идентифицировать сорт [117, 233]. Сорта с окрашенной ягодой содержат антоцианы в эпидермисе. Количество и концентрация красящего вещества определяет их типичную окраску. VvmybA1 (Myb-связанный транскрипционный фактор) регулирует синтез антоцианов<br />
и экспрессию гена, ответственного за окраску ягоды [243, 245, 246]. Наличие ретротранспозона Gret-1 рядом с кодирующей последовательностью блокирует его экспрессию, вызывая осветление окраски кожицы [221, 239, 242].</p>
<p>В Италии были описаны 62 сорта по 30 SSR и 4 REMAP и 1 IRAP маркерам. В результате выявили 58 маркер-специфичных аллелей, 22 генотип-специфичные аллели и четыре REMAP и IRAP частных аллели [264]. После чего в выборке сортов были найдены синонимы и омонимы. Также был сделан вывод, что совместное использование различных маркеров показывает себя наиболее эффективно и делает идентификацию генотипов наиболее легкой [265, 266, 268].</p>
<h3><strong>1.4 Анализ генетического разнообразия сортов и клонов винограда с использованием ретротранспозонных маркеров</strong></h3>
<p>Аборигенные сорта винограда – это те сорта, которые произошли от диких видов, произрастающих на конкретной местности [37]. Эти сорта отличаются довольно высокой стойкостью к неблагоприятным климатическим явлениям, способны выдерживать тяжелые природные условия. Аборигенные сорта <em>V. vinifera</em> являются одними из самых ценных на передовых винодельческих производствах [39]. Именно они позволяют получить вино высочайшего качества, которое будет востребовано у потребителя [58, 102]. Однако, аборигенный виноград сложен в выращивании, так как не обладает устойчивость к таким обыденным заболеваниям, как, например, оидиум и милдью. Это является отягощающим фактором в процессе возделывания, так как требует постоянной борьбы путем обработки фунгицидами, что влечет за собой дополнительные статьи денежных расходов, а также времени и человеческих ресурсов [61]. Именно поэтому в современном виноградарстве ценятся сорта, обладающие в оптимальном соотношении устойчивостью к грибковым, и не только, заболеваниям и урожайностью. Селекционная работа должна вестись именно по этому направлению. Новые сорта должны обладать не менее качественным урожаем, однако превосходить родителей по устойчивости к заболеваниям. Аборигенные сорта – это основа данного направления селекции, потому что, как было сказано ранее, именно они обладают высококачественным ценным урожаем, и работать необходимо непосредственно с ними.</p>
<p>Начало любой селекционной работы – анализ материала, с которым предстоит работать. Существует множество методов для подобных исследований. К ним относятся отбор по морфологическим и биологическим признакам в селекционном фонде, методы иммунологической оценки гибридного потенциала, физиологические методы, цито-эмбриологическая оценка селекционного материала, химико-технологическая оценка плодов, анатомо-морфологическая оценка адаптивного потенциала сортов [17]. Однако для того, чтобы селекционная работа была рациональная и желаемый результат был достигнут с наименьшими потерями, необходимо внимательно изучать исходные генетические данные. Поэтому, помимо всех перечисленных, существует еще и генетический анализ материала. Изучение ДНК – наиболее современный, и, что самое важное – очень информативный метод исследований. Именно этот метод дает наиболее полное представление обо всех генетических предрасположенностях любого организма, а также о том, каким потенциалом обладают сорта, с которыми предстоит работать, и предоставляет возможность производить отбор родительских пар более корректно.</p>
<p>Сам генетический анализ проводится с использованием молекулярных ДНК-маркеров. Он необходим для того, чтобы иметь возможность установления ассоциативных взаимосвязей, которые, в свою очередь, нужны для осуществления целенаправленной идентификации и локализации генов или локусов хромосом, определяющих хозяйственно ценные признаки у растений [106]. Молекулярные маркеры, чаще всего применяемые в исследованиях, очень сильно варьируют в своем строении и назначении, например, Restriction fragment length polymorphism (RFLP) [137], Variable Number Tandem Repeat (VNTR) [169], Simple Sequence Repeats (SSR) [73], Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) [16, 261], inter PBS amplification (iPBS) [167] и многие другие.</p>
<p>Как известно, виноград – одна из самых популярных по возделыванию культур во всем мире и на Юге России, в частности, так как данный вид поставляет исходное сырье для многих продуктов и напитков, без которых на сегодняшний день невозможно представить жизнь ни одного человека. Плоды винограда культурного потребляются как в свежем, так и в сушеном виде, а также являются исходным продуктом в приготовлении различных алкогольных и безалкогольных напитков. Широкий спектр применения плодов этого вида обусловил и высокое разнообразие сортов, которым сейчас располагают производители. Несмотря на то, что спрос на продукцию с каждым годом только увеличивается, удовлетворять потребности потребителя становится все сложнее. Здесь важнейшую роль начинает играть селекция, способная создать абсолютно новые, ранее не существовавшие сорта, отвечающие необходимым требованиям [93].</p>
<p>И очевидным является то, что для того чтобы создать новый сорт за основу необходимо взять уже существующие, и обладающие нужными свойствами сорта. В свою очередь, для того, чтобы заранее знать, каким потенциалом обладают исходные сорта, их исследуют различными способами, два основных из которых – фенотипирование и генотипирование. Фенотипирование проводится на основе наблюдений различных внешних признаков,<br />
и является важным и перспективным направлением [96], однако оно не способно дать тот объем информации, который ученые получают с помощью генетических анализов [67]. И такие признаки исследуются при помощи молекулярно-генетических маркеров [41].</p>
<p>Таким образом, для дальнейшего применения генетического материала<br />
в селекции очень важным является его изучение с использованием ДНК-маркеров [95]. Это позволит быстрее расширить область знаний о генетическом материале сортов, являющихся перспективными для селекции. Современный этап развития селекции винограда в мире невозможно представить отдельно от использования генетического анализа исходного материала, имеющегося у селекционеров.</p>
<p>Между тем, создание устойчивых сортов винограда, способных производить высококачественный урожай в больших объемах – главнейшая задача современного виноградарства [65, 70]. В результате изучения имеющихся генетических ресурсов, с каждым годом количество информации о биологическом разнообразии увеличивается, что дает широкий простор в процессе создания новых гибридных форм, отличающихся от родителей наличием или более сильным проявлением ценных и редких признаков.</p>
<p>Понимание того, насколько один генотип схож по своей структуре<br />
с другим, сильно упрощает задачу селекционеру, так как дает представление о потенциально перспективных парах для скрещивания. С этой целью<br />
и необходимо пополнять знания о генетическом разнообразии сортов винограда и изучать ресурсы ампелографических коллекций, с привлечением различного рода молекулярных маркеров [3, 68, 50, 51].</p>
<p>Сохранение мирового биологического разнообразия – одна из наиболее важных задач сельскохозяйственной науки сегодняшнего дня [236, 244]. Это касается любой сельскохозяйственной культуры, но особенно остро данная задача стоит для тех культур, селекция и использование которых происходят наиболее активно. К такой культуре относится <em>Vitis vinifera</em> L. – виноград культурный.</p>
<p>В последние годы этот вопрос встает особенно остро, так как ускоренными темпами возрастает потребление природных ресурсов, восстановление которых занимает намного большее время, чем их использование [210]. Биоразнообразие планеты не успевает восстанавливаться, и, если не предпринимать соответствующие меры, велика вероятность того, что большая часть полезных растений, существующих сегодня, будет утрачена в ближайшие годы. Такой исход категорически нельзя допускать, ведь на смену сегодняшнего человечества придет новое поколение людей, также нуждающихся в улучшенных и более продуктивных сельскохозяйственных растениях [66]. А это означает, что необходимо сохранять, изучать и структурировать то, чем мы располагаем сейчас [7, 21].</p>
<p>Как известно, данная проблема является общей вне зависимости от страны и имеющегося биоразнообразия и для того, чтобы ее решить, следует заниматься отдельными региональными вопросами изучения и сохранения биоразнообразия [21, 60]. Таким образом, необходимо предпринимать шаги для ее решения в каждом отдельно взятом регионе, учитывая его особенности [134]. Именно поэтому изучение локального биоразнообразия, например, аборигенных и интродуцированных сортов винограда Юга России – важная составляющая часть в изучении биоразнообразия мира.</p>
<p>Изучение генетического разнообразия любых сельскохозяйственных растений является неотъемлемой частью современной селекционной работы и является важной ее частью [47, 101], в том числе это справедливо и для винограда [240]. Это позволяет селекционерам получать наиболее точные сведения об организмах, работу с которыми предстоит вести, а именно об их наследственных особенностях и наличии ценных генов для сельского хозяйства, и, как следствие, наиболее корректно производить подбор родительских пар при гибридизации, с целью получить максимально качественный результат [59, 64, 94]. В свою очередь, такой подход обеспечивает минимальные затраты времени и средств, что положительно сказывается на производительности и эффективности [38, 92]. Вышесказанное характерно для любой отрасли сельского хозяйства, включая одну из наиболее важных и интересующих производителей и потребителей – виноградарство и виноделие. И, как известно, виноград культурный – одна из самых популярных культур практически в любой стране мира. Его важность для мировой экономики можно легко объяснить широким спектром использования: употребление в пищу в свежем и высушенном виде, приготовление соков и нектаров, и, что является немаловажным – изготовление различных вин. Данная отрасль интересна своей широкой вариабельностью в применении ее продуктов. Например, из получаемого сырья производится большое количество безалкогольной и алкогольной продукции – соки, нектары, вино – которое и является, по большей мере основной целью виноградарства в целом [13, 14].</p>
<p>Однако, помимо технических сортов, используемых для производства, существуют также и столовые сорта, обеспечивающие население свежими ягодами и сухофруктами. Тем не менее, в том и другом случае, важную роль играет исходное растение, с которого получены ягоды. В частности, полученный от растения урожай должен соответствовать высоким требованиям качества и быть конкурентоспособным, что дает возможность получать хорошее сырье [5, 100, 105]. Это, в свою очередь, обеспечивают селекционеры, выводя новые сорта, ориентируясь на требование потребителя. Чтобы успевать за короткий промежуток времени создавать новые сорта, важно изначально, еще до проведения скрещивания, наверняка знать, какой результат может быть достигнут и по средствам подбора каких родительских пар [103]. Эту возможность предоставляет изучение уже имеющихся завезенных и аборигенных генетических ресурсов.</p>
<p>Изучение генетического разнообразия происходит с помощью молекулярно-генетических маркеров. Существует множество разнообразных маркерных систем, однако оптимальными характеристиками для проведения генотипирования как сортов, так и клонов различных видов растений обладают iPBS маркеры, что подтверждают проведенные исследования [193]. Эти маркеры являются универсальными и могут использоваться как для генотипирования винограда [192], так и для изучения других культур, например, абрикоса [248], гуавы [144], турецкого лавра [147] и т. д. Кроме того, iPBS маркеры могут использоваться даже при генотипировании видов, для которых отсутствуют собственные молекулярные маркеры [247]. Помимо всего вышесказанного, молекулярные маркеры iPBS дают возможность не только изучать сорта, но и различать между собой клоны [150, 201].</p>
<p>Как известно, виноградное растение может заражаться множеством болезней и имеет достаточно большое количество поражающих его вредителей. Так, наиболее распространенными грибными заболеваниями у винограда являются такие как милдью (<em>Plasmopara viticola</em> Berl. Et de Toni), серая гниль (<em>Botrytis cinerea</em> Pers.) и оидиум (<em>Uncinula necator</em> Burr.) [121, 138, 141]. В то время как основными вредителями считаются клещи, листовертки, мраморный хрущ и др. [122, 176, 208]. В сумме такие заболевания зачастую приводят к достаточно большим потерям урожая, поражая листья, стебли и корни растений [116, 163, 214]. Но, среди них, конечно же, особое место занимает опаснейший вредитель – филлоксера (<em>Viteus vitifolii</em> Shimer), уничтожающая виноградное растение целиком, в отличие от грибных болезней, которые<br />
в отдельные годы могут уничтожить значительную часть урожая [115, 139].</p>
<p>Тем не менее, известно, что в Северной Америке филлоксера, как вредитель, сожительствовала с местными видами, задолго до ее появления в Европе [216]. Таким образом, американским видам винограда, которые уже очень давно сожительствуют с данным вредителем, свойственно быть толерантными присутствию филлоксеры [200, 209, 258]. В Европе же на виноградниках были достаточно благоприятные условия для ее развития, неся в дальнейшем огромные бедствия виноградарям [29, 220, 253]. Так, ученые путем применения знаний и опыта пришли к некоторым решениям дальнейшего ведения виноградарства и одно из них – это восстановление погибших ценнейших виноградников прививкой на американские подвои [211].</p>
<p>Поэтому, использование устойчивых подвоев стало основной стратегией в борьбе с филлоксерой в виноградарстве. Так, в Краснодарском крае посадка большинства виноградников осуществляется с помощью привитых саженцев [52]. Тем не менее, селекция подвойных сортов винограда также не стоит на месте, равно как и привойных. В настоящее время все сорта подвоев по своему происхождению подразделяются на четыре группы: 1) чистые виды или естественные гибриды (Рипариа Глуар де Монпелье, Рупестрис дю Ло, Рипариа гран глабр, Рупестрис Брюнье, Рупестрис Мартен, Берландиери Рессегье №1 и др.); 2) гибриды межамериканских видов (Рипариа × Рупестрис 101-14, 3306, 3309, Берландиери × Рипариа Кобер 5ББ, СО4, Кречунел-2<br />
и др.); 3) гибриды американских видов с европейскими (Шасла × Берландиери 41-Б, Феркаль, Мурведер × Рупестрис 1202, Арамон × Рупестрис Ганзен №1 и др.); 4) гибриды американских и европейских видов с лабруской (<em>Vitis labrusca</em> L.) [161, 178, 226]. В виноградном питомниководстве России, в основном, используются подвои второй и третьей групп [4, 28]. Однако все они имеют свои особенности выращивания и формирования куста, в связи с чем селекция и пополнение сортового разнообразия должны продолжаться [23, 74]. Поэтому молекулярно-генетическая идентификация является и здесь необходимой частью исследований, равно как и паспортизация подвойных сортов с целью использования этих результатов в дальнейшем селекционном улучшении подвойных сортов.</p>
<p>Благодаря комфортному для культуры климату и подходящему составу почв юг России, и, в частности, Краснодарский край, является одним из лучших мест для выращивания винограда. Около 60 % всего винограда России выращивается на Кубани [69, 77, 104]. Ценность культуры и постоянно растущий и, конечно же, меняющийся спрос у потребителей, требует непрерывной работы над созданием новых сортов более устойчивых к воздействию внешней среды и с улучшенными вкусовыми качествами. Для этого необходимо как использовать в селекции стародавние сорта винограда, так и изучать и разводить те сорта винограда, которые уже зарекомендовали себя как эффективные [1, 85, 86].</p>
<p>Конечно, в современной селекции существуют различные пути улучшения культуры, такие как традиционная селекция и отбор лучших гибридов, так и генетическое модифицирование отдельных особей, а также клоновая селекция. Если же обычная селекция основывается на скрещивании, то основой клоновой селекции является спонтанная мутация. Мутантные особи<br />
в процессе размножения становятся родоначальниками клонов – материалом, с которым потом уже работают селекционеры [11, 85]. Тем не менее, любая селекционная работа начинается именно с изучения имеющегося генетического материала.</p>
<p>В целом, генетические ресурсы растений – это самое ценное, что у нас есть для нужд селекции и питания человека [142]. Очевидно, что кормление населения мира – это глобальная задача, которую необходимо решать каждый год, учитывая не только потребление энергии, но и потребности в витаминах [212]. Широко известно, что существуют различные распространенные культурные растения, которые используются для питания населения мира, такие как пшеница, ячмень, рис, картофель, кукуруза, яблоня и др. [107] Но одним из культурных растений, которые производят широкий спектр пищевых добавок и имеют одну из самых древних историй, издавна возделываемых человеком, является виноградная лоза – <em>Vitis vinifera</em> L. [119, 120, 166]. И в наше время существует несколько способов выращивания этого культурного растения: интенсивное и органическое [130, 202, 238]. По сути, эти два подхода к выращиванию растений различаются использованием удобрений и пестицидов, но все они требуют продуктивных и устойчивых сортов. Более того, если мы примем во внимание устойчивое сельское хозяйство, оно даже еще больше зависит от сортов, которые оно использует для выращивания, потому что снижение использования пестицидов и удобрений зависит от генотипов, устойчивых к биотическим и абиотическим стрессам. И эти совершенно новые генотипы, которые удовлетворяют потребности производителей, в основном, возникают путем традиционного отбора.</p>
<p>Изучение и сохранение редких генотипов играет важную роль в будущем выборе и сохранении редких признаков, которые [133, 143, 180, 185]. Для решения этой проблемы были разработаны разные способы, такие как, например, криоконсервация [132], но общепринятым и наиболее популярным способом сохранения редких генотипов является выращивание их в специальных местах, обычно называемых «коллекциями». Например, коллекции виноградной лозы, также называемые «ампелографическими» коллекциями [234, 237, 249]. И одна из крупнейших ампелографических коллекций в мире – это Российская коллекция, которая содержит более 3300 генотипов, включая разновидности, виды и клоны [231]. Как уже говорилось ранее, изучение генетического разнообразия необходимо для отбора и развития генетических ресурсов растений. В частности, для этих задач важно изучение филогенетических взаимоотношений между выбранными генотипами. Более того, изучение происхождения и родословной редких генотипов может выявить непредсказуемые связи между генетическими пулами разных географических регионов. Например, наиболее изученным районом выращивания и происхождения виноградной лозы является Европа [145, 149]. Но некоторые локации до сих пор не исследованы или, откровенно говоря, плохо исследованы<br />
и имеют много пробелов в генофонде. Таким образом, Кавказ – это край, известный своим высоким генетическим разнообразием, наличием диких виноградных лоз (<em>V. silvestris</em> Gmel.) И большим количеством различных местных сортов [140, 152]. Конечно, эта территория поделена на несколько зон между Арменией, Азербайджаном, Грузией, Россией и Турцией. Впоследствии российская часть Северного Кавказа разделилась на несколько регионов, один из которых назывался Дагестан – эта местность славится своими старыми сортами винограда, расположенными недалеко от старых торговых путей и содержит сорта неизвестной родословной, интересные для селекции. А его биологическое разнообразие ранее изучалось только по микросателлитным (SSR) маркерам [128, 190]. Сравнительно недавно новая система маркеров была разработана Kalendar et al. [171]. Она основана на усиленном полиморфизме ретротранспозона и была недавно протестирована для изучения генетического разнообразия винограда и других видов [150, 153, 168]. Данная система доказала свою эффективность для изучения генетического разнообразия и филогенетических отношений путем создания различного количества полос ДНК для большого числа видов. Кроме того, эти маркеры применялись для изучения внутрисортового и клонального разнообразия [136, 151, 248].</p>
<p>Таким образом, генотипирование сортов – одно из важнейших направлений виноградарства и селекции винограда в целом. Оно позволяет использовать полученные данные для выведения новых, более устойчивых к условиям окружающей среды, и более продуктивных сортов. Поэтому, целью нашего исследования был выбран анализ и сравнение генетических данных сортов винограда с использованием iPBS маркеров. В список данных генотипов вошли аборигенные, интродуцированные, а также подвойные сорта винограда для понимания их филогенетических взаимоотношений в виду того, что данные сорта исследуются впервые с использованием ретротранспозон-основанных маркеров.</p>
<h2><strong>2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ</strong></h2>
<h3><strong>2.1 Растительный материал</strong></h3>
<p>В качестве растительного материала, нами были выбраны генотипы аборигенных, подвойных и интродуцированных сортов, форм и клонов винограда для изучения строения их ядерных геномов (таблица 1). При этом в список вошли: аборигенные сорта, сорта новой селекции и перспективные клоны, отобранные в результате предыдущих работ профессором Л. П. Трошиным.</p>
<p><strong>Таблица 1</strong> – Список генотипов, отобранных для исследования</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>1</td>
<td>Кумшатский</td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>Варюшкин 9 ряд кл.19 (26)</td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>Совиньон Таманский 114-35 куст</td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>Бургундский</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>Португальский синий</td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>Чиляки 1-23 (35-36)</td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>Коринка белая мутация</td>
</tr>
<tr>
<td>8</td>
<td>Гарс Левелю</td>
</tr>
<tr>
<td>9</td>
<td>Серсиаль</td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>Сильванер</td>
</tr>
<tr>
<td>11</td>
<td>Пино черный</td>
</tr>
<tr>
<td>12</td>
<td>Слитной</td>
</tr>
<tr>
<td>13</td>
<td>Мускат белый 7-10-4</td>
</tr>
<tr>
<td>14</td>
<td>Мускат белый 20-11-1а</td>
</tr>
<tr>
<td>15</td>
<td>Достойный</td>
</tr>
<tr>
<td>16</td>
<td>Августин</td>
</tr>
<tr>
<td>17</td>
<td>Яй изюм белый</td>
</tr>
<tr>
<td>18</td>
<td>Кишмиш белый овальный (Султанина)</td>
</tr>
<tr>
<td>19</td>
<td>Яй изюм розовый</td>
</tr>
<tr>
<td>20</td>
<td>Кишмиш красный туркменский (Султанина розовая)</td>
</tr>
<tr>
<td>21</td>
<td>Цимлянский черный</td>
</tr>
<tr>
<td>22</td>
<td>Кобер 5ББ</td>
</tr>
<tr>
<td>23</td>
<td>420А</td>
</tr>
<tr>
<td>24</td>
<td>101 14</td>
</tr>
<tr>
<td>25</td>
<td>Паульсен</td>
</tr>
<tr>
<td>26</td>
<td>Ричтер</td>
</tr>
<tr>
<td>27</td>
<td>Антарис</td>
</tr>
<tr>
<td>28</td>
<td>Жупски Байадисер</td>
</tr>
<tr>
<td>29</td>
<td>Амур</td>
</tr>
<tr>
<td>30</td>
<td>Будаи шули</td>
</tr>
<tr>
<td>31</td>
<td>Гок изюм</td>
</tr>
<tr>
<td>32</td>
<td>Гуляби дагестанскиы</td>
</tr>
<tr>
<td>33</td>
<td>Аг изюм</td>
</tr>
<tr>
<td>34</td>
<td>Агадаи</td>
</tr>
<tr>
<td>35</td>
<td>Гок ала</td>
</tr>
<tr>
<td>36</td>
<td>Яй изюм розовый</td>
</tr>
<tr>
<td>37</td>
<td>Яй изюм белый</td>
</tr>
<tr>
<td>38</td>
<td>Сибирковый</td>
</tr>
<tr>
<td>39</td>
<td>Кулджинскиы</td>
</tr>
<tr>
<td>40</td>
<td>Анюта 5-5</td>
</tr>
<tr>
<td>41</td>
<td>Анюта</td>
</tr>
<tr>
<td>42</td>
<td>Анюта Ф</td>
</tr>
<tr>
<td>43</td>
<td>Ливия 14-6</td>
</tr>
<tr>
<td>44</td>
<td>Ливия 14-5</td>
</tr>
<tr>
<td>45</td>
<td>Ливия</td>
</tr>
<tr>
<td>46</td>
<td>Ливия Ф</td>
</tr>
<tr>
<td>47</td>
<td>Гелиос 50-5</td>
</tr>
<tr>
<td>48</td>
<td>Гелиос 50-6</td>
</tr>
<tr>
<td>49</td>
<td>Академический К</td>
</tr>
<tr>
<td>50</td>
<td>Долгожданный 6-8</td>
</tr>
<tr>
<td>51</td>
<td>Долгожданный 6-9</td>
</tr>
<tr>
<td>52</td>
<td>Долгожданный</td>
</tr>
<tr>
<td>53</td>
<td>Долгожданный Ф</td>
</tr>
<tr>
<td>54</td>
<td>Антоний Великий 30-5</td>
</tr>
<tr>
<td>55</td>
<td>Антоний Великий 30-6</td>
</tr>
<tr>
<td>56</td>
<td>Антоний Великий</td>
</tr>
<tr>
<td>57</td>
<td>Антоний Великий Ф</td>
</tr>
<tr>
<td>58</td>
<td>Аркадия розовая 2-5</td>
</tr>
<tr>
<td>59</td>
<td>Аркадия розовая 2-6</td>
</tr>
<tr>
<td>60</td>
<td>Ляли холдор туркони</td>
</tr>
<tr>
<td>61</td>
<td>Ляли сурх казнаки</td>
</tr>
<tr>
<td>62</td>
<td>Ляли сурх таджикский</td>
</tr>
<tr>
<td>63</td>
<td>Ляли холдор</td>
</tr>
<tr>
<td>64</td>
<td>Ляли хамирак</td>
</tr>
<tr>
<td>65</td>
<td>Хусайне из Калайхумба</td>
</tr>
<tr>
<td>66</td>
<td>Гуломак</td>
</tr>
<tr>
<td>67</td>
<td>Ляли сурх боги хабиб</td>
</tr>
<tr>
<td>68</td>
<td>Хусайне люнда</td>
</tr>
<tr>
<td>69</td>
<td>Хусайни сафед казнаки</td>
</tr>
<tr>
<td>70</td>
<td>Хусайне кальта</td>
</tr>
<tr>
<td>71</td>
<td>Ляли хуша дороз</td>
</tr>
<tr>
<td>72</td>
<td>Ляли сурх боги</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таким образом, с целью изучения генетического разнообразия сортов<br />
и клонов ампелографической коллекции, нами были выбраны сорта и формы различных эколого-географических групп.</p>
<h3><strong>2.2 Выделение ДНК</strong></h3>
<p>Сбор образцов проводился несколькими способами: непосредственно отбором листьев у взрослых растений, а также отбором верхушечных листьев<br />
у пророщенных черенков. При этом проращивание черенков проводилось<br />
в банках с водой, накрытых непрозрачной пленкой, с целью получить верхушечные побеги с наименьшим содержанием хлорофилла. Выделение ДНК проводилось двумя способами: ЦТАБ-методом и при помощи коммерческого набора DNeasy Plant Mini Kit фирмы QIAGEN. Перед выделением ДНК из листьев, отобранные растительные ткани высушивались в лиофильной сушке Martin Christ BETA 2-8 LDplus в течении 24 ч. После этого, производилось их дробление при помощи металлических шариков в пробирках с пробами в вибрационной мельнице GT200. Ниже для каждого метода приводятся протоколы.</p>
<p><strong><em>2.2.1 Выделение ДНК ЦТАБ-методом</em></strong></p>
<p>Протокол выделения ЦТАБ-методом:</p>
<p>К дробленой растительной ткани добавляли 1–2 % поливинилплоипиролидина и 810 мкл ЦТАБ-буфера. Полученный гомогенизат перемещали на инкубацию в термостат на 30 мин при 65 °С. В процессе инкубации перемешивали содержимое пробирки на вортексе каждые 5 мин.</p>
<p>После инкубации охлаждали пробирки до комнатной температуры и добавить в каждую пробу по 810 мкл смеси хлороформа с изоамиловым спиртом, смешанной в соотношении 24 : 1.</p>
<p>Далее перемешивали на вортексе, после чего центрифугировали 15 мин со скоростью 13000 об/мин.</p>
<p>Получившийся супернатант переносили в новую пробирку объемом 1,5 мл.</p>
<p>К нему добавляли 50 мкл 3М ацетата натрия, 150 мкл 4М хлорида натрия и 540 мкл холодного изопропанола.</p>
<p>Далее, перемешивали на вортексе и инкубировали при температуре минус 20 °С в течении 30 мин.</p>
<p>После чего центрифугировали в течении 15 мин со скоростью<br />
13000 об/мин.</p>
<p>Промывание образовавшегося осадка выполняли 70%-м этиловым спиртом объемом 500 мкл. Для этого удаляли из пробирки жидкую фазу, приливали к осадку спирт, перемешивали на вортексе, после чего спирт удаляли пипеткой.</p>
<p>Следующим этапом в термостат помещали пробирки с открытыми крышками и высушивали осадок при температуре 37 °С в течении 20 мин.</p>
<p>После чего добавляли к осадку 300 мкл ТЕ буфера и 1 мкл РНКазы.</p>
<p>Данную смесь перемешивали на вортексе и инкубировали на термостате час при температуре 37 °С.</p>
<p>Потом добавляли 100 мкл 10М ацетата аммония и 1000 мкл холодного этилового спирта.</p>
<p>После перемешали на вортексе и инкубировали при температуре минус 80 °С в течении 5 мин.</p>
<p>После чего центрифугировали 10 мин при 13000 об/мин.</p>
<p>Жидкую фазу удаляли и промывали 70%-м этиловым спиртом объемом 500 мкл.</p>
<p>Потом осадок высушивали в пробирках с открытыми крышками 20 мин в термостате при температуре 37 °С до полного испарения этанола.</p>
<p>В конце к осадку приливали 50 мкл ТЕ. Для лучшего растворения ДНК, пробирки инкубировали при 3 °С в течении 12 ч.</p>
<p><strong><em>2.2.2 Выделение ДНК с использованием набора<br />
DNeasy Plant Mini Kit</em></strong></p>
<p>Протокол выделения ДНК коммерческим набором DNeasy Plant Mini Kit компании QIAGEN:</p>
<p>К раздробленным тканям листьев добавить 400 мкл буфера AP1 и 4 мкл РНКазы А. Перемешать на вортексе и инкубировать в течение 10 мин при<br />
65 °С. Перемешивать содержимое пробирки 2–3 раза во время инкубации.</p>
<p>Прилить 130 мкл буфера P3. Перемешать и инкубировать в течение<br />
5 мин на льду.</p>
<p>После чего нужно центрифугировать лизат в течение 5 мин на скорости 20000 об/мин.</p>
<p>Затем перенести верхнюю фазу в спин-колонку QIAshredder, находящуюся в прозрачной пробирке для сбора без крышки объемом 2 мл. Центрифугировать в течение 2 мин на скорости 20000 об/мин.</p>
<p>Аккуратно перенести жидкость, образовавшуюся под колонкой, в новую пробирку, не допуская встряхивания. К жидкости добавить 1,5 объема буфера AW1 и перемешать на вортексе.</p>
<p>Перенести 650 мкл смеси в спин-колонку DNeasy Mini, помещенную<br />
в пробирку объема 2 мл. Центрифугировать в течении 1 мин на скорости ≥ 6000 об/мин. Повторить этот шаг с оставшимся образцом необходимое количество раз.</p>
<p>Поместить спин-колонку в новую пробирку объемом 2 мл. Добавить<br />
500 мкл буфера AW2, центрифугировать в течение 1 мин на скорости<br />
≥ 6000 об/мин. Удалить жидкость, образовавшуюся под колонкой в прозрачной пробирке.</p>
<p>После добавить еще 500 мкл буфера AW2. Центрифугировать в течение 2 мин на скорости 20000 об/мин.</p>
<p>Перенести спин-колонку в новую пробирку объемом 1,5 мл или 2 мл.</p>
<p>Примечание: извлекать спин-колонку из пробирки следует осторожно, не допуская контакта с жидкостью, находящейся под ней.</p>
<p>Затем добавить 100 мкл буфера AE для элюции и инкубировать в течение 5 мин при комнатной температуре (15–25 °C). После инкубации центрифугировать в течении 1 мин на скорости 6000 об/мин</p>
<p>Еще раз повторить 11 шаг для увеличения количества полученной ДНК.</p>
<p><strong><em>2.2.3 Оценка качества и количества выделенной ДНК</em></strong></p>
<p>Оценку качества и количества ДНК, выделенной из высушенных листьев, проводили двумя методами: 1) при помощи агарозного гель-электро­фореза; 2) при помощи спектрофотометра Implen NanoPhotometer NP80.</p>
<p>После проведения измерений, тотальная ДНК разбавлялась в деионизированной воде до концентрации 20 нг/мкл.</p>
<h3><strong>2.3 Проведение полимеразной цепной реакции</strong></h3>
<p>Полимеразная цепная реакция проводилась в амплификаторах ДТ-322, компании «ДНК-Технология», Applied Biosystems и Bio-Rad. Для проведения ПЦР были выбраны праймеры, созданные с целью идентификации в генотипах аллелей ретротранспозонов и, соответственно, ранее опубликованные в статьях [167, 222, 251]. Последовательности праймеров приведены в таблице 2.</p>
<p><strong>Таблица 2</strong> – Нуклеотидные последовательности использованных<br />
в работе праймеров</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Name</td>
<td>Sequence (5’-3’)</td>
<td>Source</td>
</tr>
<tr>
<td>2374</td>
<td>CCCAGCAAACCA</td>
<td>[167]</td>
</tr>
<tr>
<td>2375</td>
<td>TCGCATCAACCA</td>
<td>[167]</td>
</tr>
<tr>
<td>2376</td>
<td>TAGATGGCACCA</td>
<td>[167]</td>
</tr>
<tr>
<td>2075</td>
<td>CTCATGATGCCA</td>
<td>[167]</td>
</tr>
<tr>
<td>2078</td>
<td>GCGGAGTCGCCA</td>
<td>[167]</td>
</tr>
<tr>
<td>2095</td>
<td>GCTCGGATACCA</td>
<td>[167]</td>
</tr>
<tr>
<td>2230</td>
<td>TCTAGGCGTCTGATACCA</td>
<td>[167]</td>
</tr>
<tr>
<td>2373</td>
<td>GAACTTGCTCCGATGCCA</td>
<td>[167]</td>
</tr>
<tr>
<td>2415</td>
<td>CATCGTAGGTGGGCGCCA</td>
<td>[167]</td>
</tr>
<tr>
<td>2074</td>
<td>GCTCTGATACCA</td>
<td>[167]</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>При проведении ПЦР использовались следующие параметры амплификации:</p>
<p>95 °С – начальная денатурация, 5 мин;</p>
<p>Далее 30 циклов:</p>
<p>95 °С – денатурация, 30 с;</p>
<p>55 °С – отжиг праймеров, 30 с;</p>
<p>72 °С – элонгация, 1 мин;</p>
<p>После чего дополнительный шаг:</p>
<p>72 °С – финальная элонгация, 5 мин.</p>
<h3><strong>2.4 Проверка наличия амплифицированных фрагментов (ДНК-бендов)</strong></h3>
<p>Проверка наличия амплифицированных фрагментов в результате ПЦР проводилась в камере для горизонтального электрофореза компании «Helicon», в 2 % ТАЕ-агарозном геле. Параметры гель-электрофореза были выбраны следующие: 150V, 150А, в течение 20 мин. Далее агарозные пластины фотографировались в ультрафиолетовом свете и неудачные образцы ПЦР отмечались для повторного проведения амплификации.</p>
<h3><strong>2.5 Проведение гель электрофореза в полиакриламидном геле</strong></h3>
<p>С целью разделения продуктов амплификации генотипов с использованными ДНК маркерами, мы использовали ДНК-электрофорез в полиакриламидном геле. Таким образом, как уже было сказано, результаты амплификации проверялись изначально в 2%-м агарозном геле на наличие ДНК-бендов и, в целом, амплификации. После чего, электрофоретическое разделение продуктов амплификации маркеров проводилось в 6 % ПААГ, при силе тока 70А и мощности 70В, 7 ч. После чего, гель-пластины погружались на 10 мин в раствор бромистого этидия для окрашивания ДНК. По итогу, пластины просвечивались в ультрафиолетовом свете и фотографировались для последующего изучения.</p>
<h3><strong>2.6 Анализ полученных данных</strong></h3>
<p><em>Оценка и статистика диапазонов</em> iPBS и IRAP. Программа GenAlEx 6.3 [204] использовалась для проведения анализа AMOVA [146] с 999 пермутациями. Для статистики частотных диапазонов (информационный индекс Шеннона, разнообразие, несмещенное разнообразие, процент полиморфных локусов, количество диапазонов и количество частных диапазонов) использовались GenAlEx 6.3 и таблица Excel. Затем было рассчитано генетическое расстояние (GD) и проведен анализ главных компонентов (PCoA) с использованием метода стандартизированной ковариации.</p>
<p><em>Кластеризация и построение деревьев</em>. Для построения дерева использовались MEGA X [189] и DARWin 6.0. Для MEGA X 0-1 список полос ДНК был перенесен в список A-C (где A – наличие и C – отсутствие полосы), а затем с Maximum Likelihood method [196] было построено дерево кластеров. Для DARWin 6.0 был выбран метод Weighted Neighbor-Joining [123] (по умолчанию из стандартного набора методов программы).</p>
<h2><strong>3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ</strong></h2>
<p>В результате исследований были получены последовательности исследованных генов у 72 генотипов. Данные, полученные в результате амплификации генотипов с выбранными маркерами, были сравнены между собой<br />
и выявлены полиморфные аллели, проведен анализ частот встречаемости<br />
в популяциях, а также проведено филогенетическое сравнение внутри популяций. В итоге, для получения понятия о родстве генотипов были использованы методы кластеризации изученных ДНК-последовательностей. Результаты проведенных за 2020 г. исследований отображены на рисунках, отображающих разделение продуктов амплификации в полиакриламидном геле<br />
и приведенных в приложении 1.</p>
<h3><strong>3.1 Изучение популяций новейших перспективных сортов винограда</strong></h3>
<p>В результате исследования нами были изучены четыре сортотипа винограда: Анюта, Гелиос, Аркадия розовая, Ливия с использованием десяти молекулярных маркеров. Общие результаты приведены в таблице 3.</p>
<p><strong>Таблица 3</strong> – Статистика ДНК бендов столовых сортов винограда<br />
по популяциям</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td></td>
<td>Название</td>
<td>№ популяции</td>
<td>Количество бендов<br />
на генотип</td>
<td>Количество бендов<br />
в популяции</td>
<td>Количество<br />
полиморфных<br />
бендов</td>
<td>Процент<br />
полиморфных<br />
бендов</td>
<td>Индекс Шеннона</td>
<td>Разнообразие</td>
<td>Количество<br />
частных бендов</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
<td>7</td>
<td>8</td>
<td>9</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>Анюта 5-5</td>
<td>1</td>
<td>61</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>Анюта</td>
<td>1</td>
<td>87</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>Анюта Ф</td>
<td>1</td>
<td>74</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>Ливия 14-6</td>
<td>2</td>
<td>82</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="10"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="10"><em>Продолжение таблицы 3</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
<td>7</td>
<td>8</td>
<td>9</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>Ливия 14-5</td>
<td>2</td>
<td>85</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>Ливия</td>
<td>2</td>
<td>76</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>Ливия</td>
<td>2</td>
<td>84</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>8</td>
<td>Гелиос 50-5</td>
<td>1</td>
<td>80</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>9</td>
<td>Гелиос 50-6</td>
<td>1</td>
<td>76</td>
<td>378</td>
<td>249</td>
<td>66,06</td>
<td>0,392</td>
<td>0,27</td>
<td>35</td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>Аркадия<br />
розовая 2-5</td>
<td>2</td>
<td>52</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>11</td>
<td>Аркадия<br />
розовая 2-6</td>
<td>2</td>
<td>69</td>
<td>448</td>
<td>287</td>
<td>64,25</td>
<td>0,365</td>
<td>0,25</td>
<td>27</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td>Всего</td>
<td></td>
<td>826</td>
<td>826</td>
<td>687</td>
<td>83,26</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Так, амплификация выбранных генотипов с маркером 2230 выявила всего 42 бенда, при этом минимальное количество бендов (3 шт.) показали такие клоны как Анюта Ф, Ливия и Аркадия розовая 2-5. Наибольшее их количество показал клон Анюта (5 шт.). Далее амплификация выбранных для исследования генотипов с маркером 2074 выявила всего 125 бендов, при этом минимальное количество бендов (8 шт.) показали клоны Аркадия розовая 2-5 и Аркадия розовая 2-6. Наибольшее же количество бендов выявлено у клона Анюта (15 шт.).</p>
<p>Использование ДНК-маркера 2228 выявило всего 56 бендов, при этом минимальное количество (4 шт.) показали клоны Аркадия розовая 2-5 и Аркадия розовая 2-6. Наибольшее же количество бендов (6 шт.) показали клоны Анюта 5-5, Ливия Ф и Гелиос 50-5. Также, исследование выбранных генотипов с использованием маркера 2373 выявило всего 94 бенда. При этом неожиданным была крайне низкая амплификация у клона Анюта 5-5, которая не выявила ни одного бенда у данного генотипа, что само по себе является неожиданным. В то время как наибольшее количество бендов (12 шт.) показал клон Ливия Ф.</p>
<p>Амплификация же выбранных генотипов с маркером 2237 выявила всего 140 бендов, при этом наименьшее количество бендов (3 шт.) показал клон Аркадия 2-5, а наибольшее количество (19 шт.) – клон Анюта. Дальнейшее изучение выбранных генотипов с маркером 2415 выявила всего 51 бенд. При этом наименьшее количество бендов (3 шт.) показал сортотип Анюта, а также его клоны Анюта 5-5, Анюта, Анюта Ф. Наибольшее же количество бендов (6 шт.) выявил сортотип Ливия и его клоны Ливия 14-5, Ливия 14-6, Ливия и Ливия Ф.</p>
<p>Амплификация выбранных генотипов с маркером 2075 выявил всего<br />
101 бенд. Так, наименьшее количество бендов (6 шт.) показали клоны Анюта 5-5 и Ливия. В то время как наибольшее количество – клон Анюта и Ливия Ф. С маркером Vine-1 выявлено всего 88 бендов, при этом наименьшее их количество показали клоны Гелиос 50-6 и Аркадия розовая 2-5, а наибольшее (11 шт.) – клон Ливия. Также, изучение выбранных генотипов с применением маркера Tvv-1 выявило всего 88 ДНК-бендов. При этом наименьшее количество бендов (5 шт.) показал сортотип Аркадия розовая, его клоны Аркадия розовая 2-5 и Аркадия розовая 2-6.</p>
<p><a id="post-14611-_MON_1650467377"></a> В нашем исследовании все генотипы были разделены на две популяции по происхождению: на столовые сорта, выведенные селекционером В. Н. Край­новым (Популяция 1) и популярные столовые сорта современной селекции (Популяция 2), которые мы выбрали для сравнения.</p>
<p>Как мы можем видеть в таблице 3, минимальное общее количество бендов, сгенерированное генотипом Аркадия розовая 2-5, при амплификации со всеми маркерами было 52 шт., в то время как максимальное количество бендов (87 шт.) при амплификации было выявлено при изучении генома Анюта 5-5. Среднее же количество бендов на генотип было 82 шт. В то время как всего в нашем исследовании было 826 бендов.</p>
<p>При этом наибольшее количество бендов в популяции было выявлено<br />
у Популяции 2 (448 ДНК бендов), а наименьшее (378) у Популяции 1, но, несмотря на это, процент полиморфных бендов был выше в первой популяции – 66,06 %, или 249 полиморфных бендов от общего количества, в то время как во второй популяции их было меньше (64,25 %, или 287 бендов в популяции).</p>
<p>Также, нами было подсчитано общее количество полиморфных бендов во всей выборке исследованных генотипов. Для этого мы представили нашу выборку как единую популяцию столовых сортов в программе GenAlEx<br />
и подсчитали процент полиморфных бендов среди всех выбранных для исследования организмов, который, в итоге, составил 83,26 %, или 687 ДНК бендов.</p>
<p>И, как мы можем видеть из данных таблицы 3, логичным было то, что индекс разнообразия в популяции 1 выше, чем в популяции 2 (0,269 и 0,247, соответственно). Это вполне объяснимо, тем, что процент полиморфных бендов в популяции 1 выше, чем в популяции 2, не смотря на то, что, по факту, количество генотипов в первой популяции меньше, чем во второй популяции.</p>
<p>Помимо этого, были обнаружены и частные бенды, число которых составило 27 – для популяции 1 и 35 – для популяции 2.</p>
<p><strong><img width="693" height="255" class="wp-image-14612" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-458.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-458.png 693w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-458-300x110.png 300w" sizes="(max-width: 693px) 100vw, 693px" alt="word image 458 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></strong></p>
<p><strong>Рисунок 1</strong> – Анализ частот встречаемости аллелей<br />
в двух популяциях столовых сортов</p>
<p>Далее, для изучения генетического родства между выбранными сортотипами и их клонами мы провели кластерный анализ с использованием параметров UPGMA метода (рисунок 2).</p>
<p>Как мы можем видеть из рисунка 2, кластерное древо разделилось на два макрокластера, в один из которых вошел сортотип Анюта, а в другой – все остальные. При этом отдельным подкластером была выделена Аркадия розовая. Вторым субкластером стали сорта Гелиос и Ливия, что в свою очередь, является вполне объяснимым ввиду того, что они имеют общего предка – сорт Аркадия. Рядом с ними расположен сортотип Аркадия розовая. Далее же от этих двух сортотипов расположен сорт Анюта, который обладает наименьшим с ними сходством по происхождению.</p>
<p><img width="710" height="372" class="wp-image-14613" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-acer-lenovo-desktop-statya-3-po-rodstvu-k.jpeg" alt="C:\Users\acer-lenovo\Desktop\статья\3 по родству Крайнов\по родству Крайнов.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-acer-lenovo-desktop-statya-3-po-rodstvu-k.jpeg 710w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-acer-lenovo-desktop-statya-3-po-rodstvu-k-300x157.jpeg 300w" sizes="(max-width: 710px) 100vw, 710px" /></p>
<p><strong>Рисунок 2</strong> – Кластеризация изученных генотипов методом UPGMA</p>
<p>Также, помимо кластерного анализа мы провели PCoA анализ в программе GenAlEx для уточнения полученных результатов и сравнения разных результатов между собой по одним и тем же сортам выполненные с использованием разных методов (рисунок 3). Как мы можем видеть, распределение организмов на координатной плоскости произошло таким же образом, как и в кластерном анализе. В отдельный кластер, отдаленный от всех, был выделен сортотип Анюта, клоны сортов Гелиос и Ливия и отдельным кластером между двумя этими сортотипами был сортотип Аркадия розовая. Отличие же состоит в том, что в PCoA анализе Аркадия розовая расположена ближе к Анюте, нежели чем к Гелиосу и Ливии, хотя она, также как и в кластерном анализе, была выделена отдельно от других сортов, что подтверждает результат кластерного анализа.</p>
<p>Таким образом, нами было проведено исследование одиннадцати клонов столового винограда современной селекции, принадлежащих к четырем сортам с использованием iPBS маркеров. Всего было получено 826 ДНК бендов, из которых полиморфными были 687, что говорит нам о достаточно большом генетическом разнообразии, проявившимся среди сортов и клонов. Также, нами было построено кластерное древо, которое показало, что сорта разделились на два крупных кластера, один из которых, в свою очередь, был разделен еще раз. Помимо этого, в отдельный микрокластер был выделен генотип Аркадии розовой. Такое расположение сортов объясняется тем, что многие из них обладают общими предками. Также, нами был проведен PCoA анализ, в котором были представлены все изученные генотипы таких сортов как Анюта, Ливия, Гелиос, Аркадия розовая и их генотипы. Результаты оказались вполне ожидаемые, так как было известно происхождение некоторых сортов. В частности, у Гелиоса и Ливии есть общий родитель Аркадия, что, очевидно, послужило причиной их расположения рядом. В тоже время,<br />
у Анюты общие родители с Кишмишем Находка, который в свою очередь является одним из родителей Гелиоса. Но, не смотря на это, данные сорта были расположены достаточно далеко друг от друга, что, само по себе является интересным, в частности, и в виду результатов кластерного анализа, где данные сорта также находились в разных частях кластерограммы. Однако такие сорта как Гелиос и Аркадия розовая, которые считаются синонимичными, были распределены в два разных кластера, расположенных по соседству. Это говорит о том, что эти сорта генетически близки, но, тем не менее, судя по всему, имеют отличную друг от друга генетику.</p>
<p><strong><img width="749" height="452" class="wp-image-14614" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-459.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-459.png 749w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-459-300x181.png 300w" sizes="(max-width: 749px) 100vw, 749px" alt="word image 459 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></strong></p>
<p><strong>Рисунок 3</strong> – PCoA анализ двух популяций винограда</p>
<p>Далее с помощью десяти молекулярных маркеров были изучены три сортотипа винограда (таблица 4): Долгожданный, Антоний великий и Академик Трубилин. Амплификация ДНК генотипов выбранных сортов винограда с маркером 2230 выявила всего 42 бенда, при этом минимальное количество бендов (4 шт.) показали такие клоны как Долгожданный 6-9, Долгожданный, Долгожданный Ф, Антоний великий и Антоний великий Ф. В то время как сорта Академик Трубилин и Антоний великий 30-6 показали наибольшее количество бендов – 6 шт. Последующая амплификация выделенной ДНК<br />
с маркером 2074 выявила всего 83 бенда, при этом минимальное количество бендов (7 шт.) показал сорт Долгожданный Ф, а наибольшее количество бендов (14 шт.) выявлено у сорта Академик Трубилин.</p>
<p>Амплификация с маркером 2078 выявила всего 51 бенд, при этом наибольшее количество ДНК бендов (8 шт.) показал сорт Академик Трубилин, наименьшее количество бендов (5 шт.) выявил сорт Долгожданный и его клоны, а также Антоний великий Ф. При амплификации генотипов с маркером 2228 наибольшее количество бендов (5 шт.) было выявлено у клонов Антоний великий 30-6 и Антоний великий Ф. Меньшее количество бендов<br />
(4 шт.) показали остальные сорта: Академик Трубилин, Долгожданный, Антоний великий и их клоны.</p>
<p>Исследование выбранных генотипов с использованием маркера 2373 выявило всего 60 бендов, при этом наименьшее количество бендов (5 шт.) показал сорт Антоний великий 30-5, в то время как наибольшее количество бендов (12 шт.) при амплификации с данным маркером – сорт Академик Трубилин. Использование ДНК-маркера 2237 выявило всего 116 бендов, при этом минимальное количество (7 шт.) показал клон Долгожданный 6-9, а наи­большее их количество (16 шт.) – клон этого же сорта Долгожданный Ф. Изучение выбранных генотипов с использованием маркера 2415 выявило всего 45 бендов, при этом наибольшее количество бендов (6 шт.) показали такие сорта как Академик Трубилин и Долгожданный, а наименьшее (4 шт.) – клоны сорта Долгожданный: Долгожданный 6-9 и Долгожданный Ф.</p>
<p>Амплификация выбранных генотипов с маркером 2075 выявила всего<br />
87 бендов, при этом наибольшее количество бендов показал клон Антоний великий 30-6. В свою очередь, наименьший показатель по количеству бендов (8 шт.) отмечен у клона Антоний великий Ф. Использование ДНК-маркера Vine-1 выявило всего 58 бендов, при этом минимальное количество бендов<br />
(5 шт.) было выявлено у клонов сорта Долгожданный, а именно: Долгожданный 6-9, Долгожданный, Долгожданный Ф. При этом, наибольшее количество бендов (8 шт.) показал сорт Академик Трубилин. Также, изучение выбранных генотипов с применением маркера Tvv-1 выявило всего 48 ДНК бендов. При этом наименьшее количество бендов (4 шт.) было у сорта Долгожданный: Долгожданный 6-8, Долгожданный 6-9, Долгожданный и Долгожданный Ф. Наибольшее же их количество (7 шт.) показали клоны – Антоний великий 30-6, Антоний великий и Антоний великий Ф.</p>
<p><strong>Таблица 4 </strong>– Общая статистика по выявленным ДНК бендам</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td></td>
<td>Название</td>
<td>№ популяции</td>
<td>Количество бендов<br />
на генотип</td>
<td>Количество бендов<br />
в популяции</td>
<td>Количество<br />
полиморфных бендов</td>
<td>Процент<br />
полиморфных бендов</td>
<td>Индекс Шеннона</td>
<td>Разнообразие</td>
<td>Количество<br />
частных бендов</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>Академик Трубилин</td>
<td>0</td>
<td>85</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>Долгожданный 6-8</td>
<td>1</td>
<td>73</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>Долгожданный 6-9</td>
<td>1</td>
<td>58</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>Долгожданный</td>
<td>1</td>
<td>67</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>Долгожданный Ф</td>
<td>1</td>
<td>64</td>
<td>262</td>
<td>75</td>
<td>28.96</td>
<td>0.179</td>
<td>0.124</td>
<td>32</td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>Антоний Великий<br />
30-5</td>
<td>2</td>
<td>68</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>Антоний Великий<br />
30-6</td>
<td>2</td>
<td>73</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>8</td>
<td>Антоний Великий</td>
<td>2</td>
<td>71</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>9</td>
<td>Антоний Великий Ф</td>
<td>2</td>
<td>69</td>
<td>281</td>
<td>78</td>
<td>28.05</td>
<td>0.170</td>
<td>0.117</td>
<td>36</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td>Всего</td>
<td></td>
<td>628</td>
<td>543</td>
<td>389</td>
<td>61.99</td>
<td></td>
<td></td>
<td>68</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Интересно, что в нашем исследовании мы наблюдали неожиданный факт: количество сгенерированных бендов у технического сорта винограда Академик Трубилин при амплификации с большинством молекулярных маркеров было значительно выше, чем в других исследуемых генотипах. К сожалению, на данном этапе исследования мы не можем объяснить данный факт, но, полагаем, что это может быть связано с принадлежностью сортов<br />
к разным направлениям использования, так как селекция столовых сортов шла менее интенсивно, нежели технических. И, соответственно, это предполагает, что данный сорт имеет более сложную родословную в сравнении<br />
с другими сортами, взятыми в этом исследовании. Тем не менее, данное предположение должно быть проверено и подтверждено научными данными по сравнению генетического разнообразия столовых и технических сортов.</p>
<p>Как мы можем видеть из таблицы 4, всего в данном исследовании было выявлено 628 ДНК бендов. Среднее же количество бендов на генотип было 69 шт. Минимальное число бендов (58 шт.) при амплификации со всеми молекулярными маркерами было сгенерировано генотипом клона Долгожданный 6-9, в то время как максимальное количество сгенерированных ДНК бендов (85 шт.) было у генотипа сорта Академик Трубилин, как уже упоминалось ранее.</p>
<p>Как известно, сорта Долгожданный и Антоний великий являются родственниками, так как у них общие родители (Кишмиш лучистый и Талисман), и, соответственно, созданы селекционером-любителем В. Н. Крайновым. Можно сделать вывод, что именно из-за родственных связей и, очевидно, похожих по своему строению генотипов, количество бендов в этих двух популяциях примерно одинаковое. Также, при сравнении этих двух популяций мы можем видеть, что количество полиморфных генов также мало отличается (75 и 78 шт.). Это может быть объяснено тем, что исследуемые сорта выведены недавно. Общее же количество генов обеспечивающих разнообразие признаков равно 153 шт. Полиморфные гены в процентном содержании у сортотипов Долгожданный и Антоний великий были равны 28,96 и 28,05 %, соответственно. Следовательно, как мы можем видеть, что внутриклоновая полиморфность довольно низкая, что было ожидаемым для относительно недавно выведенных сортов. При этом интересно заметить, что общее процентное содержание полиморфных бендов во всех исследуемых генотипах вместе с генотипом Академик Трубилин было равно 61,99 %. Содержание частных бендов в Популяции 1 и Популяции 2 составило 32 и 36 шт., соответственно, всего – 68 шт. В целом, результаты анализа частот встречаемости аллелей<br />
в двух популяциях столовых сортов отображены на рисунке 4.</p>
<p><strong><img width="759" height="258" class="wp-image-14615" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-460.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-460.png 759w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-460-300x102.png 300w" sizes="(max-width: 759px) 100vw, 759px" alt="word image 460 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></strong></p>
<p><strong>Рисунок 4</strong> – Анализ частот встречаемости аллелей<br />
в двух популяциях столовых сортов</p>
<p>Далее, для того чтобы проанализировать генетическое родство изученных сортов и их клонов, мы провели кластерный анализ с использованием параметров UPGMA метода (рисунок 5).</p>
<p><img width="724" height="459" class="wp-image-14616" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants.jpeg" alt="C:\Users\Alexander1991\Documents\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\2. Виноград iPBS\Статьи Юля\2. По сроку созревания\по сроку созревания.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants.jpeg 724w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-300x190.jpeg 300w" sizes="(max-width: 724px) 100vw, 724px" /></p>
<p><strong>Рисунок 5</strong> – Кластеризация изученных генотипов методом UPGMA</p>
<p>Как мы можем видеть, на кластерном древе (см. рисунок 5) в отдельную ветвь, как и предполагалось, выделился сорт Академик Трубилин. Вторая же ветвь, в свою очередь, разделилась на два подкластера, в которые вошли сортотипы наших исследуемых родственных популяций. Данные подкластеры сортотипов программой были разделены на группы отдельных клонов представленных популяций. При этом, не смотря на крайне близкое родство между двумя сортами, не наблюдается смешение между отдельными генотипами и их ложного попадания в соседний кластер.</p>
<p>Также, нами был проведен PCoA анализ (рисунок 6) для того, чтобы получить больше информации разными возможными методами о распределении изученных генотипов между собой.</p>
<p><strong><img width="750" height="375" class="wp-image-14617" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-461.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-461.png 750w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-461-300x150.png 300w" sizes="(max-width: 750px) 100vw, 750px" alt="word image 461 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></strong></p>
<p><strong>Рисунок 6</strong> – PCoA анализ исследуемых популяций винограда</p>
<p>Как мы видим, каждая группа клонов из популяций сконцентрирована в одной части координатной прямой. Как мы предполагаем, из-за небольшого количества сортов клоны двух родственных сортов (Антоний великий и Долгожданный) и сорт с отличительными признаками (Академик Трубилин) расположением напоминает равносторонний треугольник. Это не означает, что предполагаемые нами родственные сорта в равной степени генетически схожи с сортом, выбранным как аут-группа, данное расположение сортов на координатной плоскости объясняется малой выборкой генотипов. Конечно, если бы в исследование были включены другие сорта с неродственными генотипами, то данные сорта оказались бы значительно ближе друг к другу из-за генетической близости. В этом смысле построение кластерного древа дает более ясное нахождение клонов на генетическом уровне.</p>
<p>Таким образом, с использованием iPBS маркеров было изучено восемь клонов столового бело-ягодного винограда селекции В. Н. Крайнова, а также один клон технического винограда с темными ягодами (таблица 5, рисунки 7, 8).</p>
<p><strong>Таблица 5</strong> – Общая статистика по всем сортам</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td></td>
<td>Название</td>
<td>№ популяции</td>
<td>Количество бендов<br />
на генотип</td>
<td>Количество бендов<br />
в популяции</td>
<td>Количество<br />
полиморфных бендов</td>
<td>Процент<br />
полиморфных бендов</td>
<td>Индекс Шеннона</td>
<td>Разнообразие</td>
<td>Количество<br />
частных бендов</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
<td>7</td>
<td>8</td>
<td>9</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>Anyuta 5-5</td>
<td>1</td>
<td>61</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>Anyuta</td>
<td>1</td>
<td>87</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>Anyuta F</td>
<td>1</td>
<td>74</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>Liviya 14-6</td>
<td>2</td>
<td>82</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>Liviya 14-5</td>
<td>2</td>
<td>85</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>Liviya</td>
<td>2</td>
<td>76</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>Liviya F</td>
<td>2</td>
<td>84</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>8</td>
<td>Gelios 50-5</td>
<td>1</td>
<td>80</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>9</td>
<td>Gelios 50-6</td>
<td>1</td>
<td>76</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>Akademicheskij K</td>
<td>2</td>
<td>85</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>11</td>
<td>Dolgozhdannyj 6-8</td>
<td>1</td>
<td>73</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>12</td>
<td>Dolgozhdannyj 6-9</td>
<td>1</td>
<td>58</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>13</td>
<td>Dolgozhdannyj</td>
<td>1</td>
<td>67</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>14</td>
<td>Dolgozhdannyj F</td>
<td>1</td>
<td>64</td>
<td>640</td>
<td>498</td>
<td>77.83</td>
<td>0.421</td>
<td>0.282</td>
<td>53</td>
</tr>
<tr>
<td>15</td>
<td>Antonij Velikij<br />
30-5</td>
<td>2</td>
<td>68</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>16</td>
<td>Antonij Velikij<br />
30-6</td>
<td>2</td>
<td>73</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>17</td>
<td>Antonij Velikij</td>
<td>2</td>
<td>71</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>18</td>
<td>Antonij Velikij F</td>
<td>2</td>
<td>69</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="10"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="10"><em>Продолжение таблицы 5</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
<td>7</td>
<td>8</td>
<td>9</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>19</td>
<td>Arkadiya<br />
rozovaya 2-5</td>
<td>2</td>
<td>52</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>20</td>
<td>Arkadiya<br />
rozovaya 2-6</td>
<td>2</td>
<td>69</td>
<td>814</td>
<td>556</td>
<td>68.33</td>
<td>0.359</td>
<td>0.239</td>
<td>35</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td>Всего</td>
<td></td>
<td>1454</td>
<td>1454</td>
<td>1388</td>
<td>95.48</td>
<td></td>
<td></td>
<td>88</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong><img width="676" height="440" class="wp-image-14618" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-462.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-462.png 676w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-462-300x195.png 300w" sizes="(max-width: 676px) 100vw, 676px" alt="word image 462 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></strong></p>
<p><strong>Рисунок 7</strong> – PCoA анализ всех сортов<br />
(где Akademicheskij K – сорт винограда Академик Трубилин)</p>
<p><img width="697" height="583" class="wp-image-14619" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-1.jpeg" alt="C:\Users\Alexander1991\Documents\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\2. Виноград iPBS\Статьи Юля\1. Все сорта\все сорта.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-1.jpeg 697w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-1-300x251.jpeg 300w" sizes="(max-width: 697px) 100vw, 697px" /></p>
<p><strong>Рисунок 8</strong> – Кластеризация всех генотипов в программе MEGA</p>
<p>Всего было получено 628 ДНК, в частности количество бендов у сортогрупп Антоний великий и Долгожданный их оказалось – 543 шт., из которых 153 шт. были полиморфными. Достаточно низкое содержание полиморфных бендов по сравнению с общим количеством говорит о том, что исследуемые сорта имеют небольшое количество аллелей, которые бы отличали клоны друг от друга, что объясняется тем, что сорта выведены относительно недавно. Также, построение кластерного древа, выделило сорт Академик Трубилин в отдельный макрокластер, что было вполне ожидаемо. В свою очередь, сорта Антоний великий и Долгожданный выделены в отдельную ветвь, которая была поделена еще раз на отдельные клоны. Также, мы провели PCoA анализ, результаты которого также распределили сорта и клоны по родству на координатной плоскости. Таким образом, при построении кластерного древа было выявлено близкое расположение родственных бело-ягодных столовых сортов и отделение сорта, выбранного как аут-группа, в отдельный кластер.</p>
<h3><strong>3.2 Изучение популяций аборигенных, интродуцированных и подвойных сортов винограда</strong></h3>
<p>Данные с фотографий гелей были описаны при помощи программы GelPro 3.1 и переведены в вид бинарной таблицы (0 и 1) для удобства подсчета статистических данных ДНК-бендов, после чего уже проводилась статистическая обработка. В процессе изучения подвоев были рассчитаны общие статистические показатели, приведенные в таблице 6.</p>
<p><strong>Таблица 6</strong> – Основные общие статистические показатели</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Номер<br />
образца</td>
<td colspan="3">1</td>
<td colspan="2">2</td>
<td colspan="4">3</td>
<td colspan="3">4</td>
<td colspan="3">5</td>
</tr>
<tr>
<td>Количество<br />
бендов на генотип</td>
<td colspan="3">104</td>
<td colspan="2">118</td>
<td colspan="4">101</td>
<td colspan="3">130</td>
<td colspan="3">109</td>
</tr>
<tr>
<td>Всего категорий бендов</td>
<td colspan="15">455</td>
</tr>
<tr>
<td>Общее количество бендов</td>
<td colspan="15">562</td>
</tr>
<tr>
<td>Название маркера</td>
<td>2074</td>
<td>2228</td>
<td>2075</td>
<td>2078</td>
<td>2095</td>
<td>2230</td>
<td>2374</td>
<td>2375</td>
<td colspan="2">2376</td>
<td>2373</td>
<td colspan="2">2415</td>
<td>Tvv-1 FaF</td>
<td>Vine-1 RaR</td>
</tr>
<tr>
<td>Минимальное<br />
количество бендов</td>
<td>8</td>
<td>1</td>
<td>1</td>
<td>3</td>
<td>7</td>
<td>1</td>
<td>11</td>
<td>5</td>
<td colspan="2">10</td>
<td>7</td>
<td colspan="2">12</td>
<td>0</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Максимальное<br />
количество бендов</td>
<td>18</td>
<td>12</td>
<td>11</td>
<td>11</td>
<td>10</td>
<td>9</td>
<td>19</td>
<td>13</td>
<td colspan="2">15</td>
<td>21</td>
<td colspan="2">15</td>
<td>6</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td>Общее количество бендов для каждого из маркера</td>
<td>59</td>
<td>23</td>
<td>25</td>
<td>34</td>
<td>41</td>
<td>25</td>
<td>75</td>
<td>45</td>
<td colspan="2">64</td>
<td>56</td>
<td colspan="2">70</td>
<td>14</td>
<td>30</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В нашем исследовании подвойные сорта винограда были разделены на две популяции. При этом, как мы можем видеть из таблицы 6, число категорий ДНК-бендов сгенерированное на генотип варьировало от 101 (101-14) до 130 (Paulsen 1103). Всего было выявлено 455 категорий бендов различной длины амплифицированных фрагментов и их общее количество составило 562.</p>
<p>Далее, при анализе показателей, полученных каждым ДНК-маркером<br />
в отдельности, было выявлено, что наименьшее количество бендов на генотип показал маркер Tvv-1 FaF (от 0 до 6 для каждого), в то время как наибольшее было сгенерировано iPBS2373 (от 7 до 21). Это, также сходится и с общим количеством бендов, сгенерированным при амплификации маркеров с генотипами, так как у Tvv-1 FaF было выявлено наименьшее (14 шт.),<br />
а у iPBS2374 наибольшее (75 шт.) количество ДНК-бендов.</p>
<p>Количество бендов (таблица 7) Популяции 1 – 222 шт. и в Популяции 2 – 340 шт. При этом количество полиморфных бендов составило 43 шт. (19,78 %) и 147 шт. (43,30 %) для первой и второй популяции, соответственно. Далее для подсчета общего количества полиморфных бендов мы представили выборку как единую популяцию. Таким образом, их количество составило 308 шт., или же 54,95 %.</p>
<p>Далее, мы провели обработку полученных данных в программе GelPro 3.1 для представления генетических характеристик выборки генотипов уже как двух популяций. Первая – Kober 5BB и 420-A, вторая – 101-14, Paulsen 1103 и Richter57. Данные популяции были объединены на основе происхождения генотипов, выбранных для исследования. Полученные результаты представлены в таблице 8 и на рисунках 9 и 10.</p>
<p><strong>Таблица 7</strong> – Статистические показатели по популяциям</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td></td>
<td>Название</td>
<td>№ популяции</td>
<td>Количество бендов<br />
на генотип</td>
<td>Количество бендов<br />
в популяции</td>
<td>Количество<br />
полиморфных бендов</td>
<td>Процент<br />
полиморфных бендов</td>
<td>Индекс Шеннона</td>
<td>Разнообразие</td>
<td>Количество<br />
частных бендов</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>Kober 5BB</td>
<td>1</td>
<td>104</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>420A</td>
<td>1</td>
<td>118</td>
<td>222</td>
<td>43</td>
<td>19,78</td>
<td>0,137</td>
<td>0,099</td>
<td>47</td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>101 14</td>
<td>2</td>
<td>101</td>
<td>340</td>
<td>147</td>
<td>43,30</td>
<td>0,276</td>
<td>0,192</td>
<td>115</td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>Paulsen</td>
<td>2</td>
<td>130</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>Richter</td>
<td>2</td>
<td>109</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td>Всего</td>
<td></td>
<td>562</td>
<td>562</td>
<td>308</td>
<td>54,95</td>
<td></td>
<td></td>
<td>162</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 8</strong> – Генетические характеристики популяций</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Показатель</td>
<td colspan="2">Количество</td>
</tr>
<tr>
<td>Номер популяции</td>
<td>1</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Число ДНК-бендов</td>
<td>156</td>
<td>224</td>
</tr>
<tr>
<td>Количество бендов со встречаемостью ≥ 5 %</td>
<td>156</td>
<td>224</td>
</tr>
<tr>
<td>Количество частных бендов</td>
<td>47</td>
<td>115</td>
</tr>
<tr>
<td>Выявленное генетическое разнообразие</td>
<td>0,099</td>
<td>0,192</td>
</tr>
<tr>
<td>Непредвзятое генетическое разнообразие</td>
<td>0,198</td>
<td>0,289</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong><img width="770" height="260" class="wp-image-14620" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-463.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-463.png 770w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-463-300x101.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-463-768x259.png 768w" sizes="(max-width: 770px) 100vw, 770px" alt="word image 463 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></strong></p>
<p><strong>Рисунок 9</strong> – Визуальная структура ДНК-паттернов для изученных популяций</p>
<p>Как мы видим из таблицы 8 и рисунка 8 обе изученные популяции сгенерировали разное количество ДНК-бендов, 156 – для Популяции 1 и 224– для Популяции 2. При этом было выявлено, что все они встречаются с частотой более 50 %, на что нам указывают показатели встречаемости менее 25<br />
и 50 % (0 для обоих популяций). Также в процессе анализа найдено 47 и 115 уникальных ДНК-бендов для первой и второй популяции, соответственно. Это говорит нам о том, что некоторые генотипы не просто отличаются от общей выборки клонов, но и обладают уникальными, присущими только им характеристиками. Как мы видим, у Популяции 1 выявленное генетическое разнообразие почти в два раза меньше, чем у Популяции 2 (0,099 и 0,192), что вполне объясняется меньшим количеством частных бендов, а также тем, что в Популяции 1 было выявлено количество полиморфных генов в два раза меньше (19 и 43 %, соответственно).</p>
<p>При этом обнаружено, что для обоих популяций выявленное генетическое разнообразие не превышает непредвзятое, что говорит нам в общем<br />
о низком генетическом разнообразии, что вполне ожидаемо при изучении клонов. Тем не менее, процент полиморфных локусов внутри популяций, согласно анализу частоты встречаемости аллелей в GenAlEx 3.1, составил<br />
19,78 % (для первой) и 43,30 % (для второй). Таким образом, для дальнейшего изучения генетического разнообразия, нами был построен кластерный анализ в программе MEGA7 (рисунок 9).</p>
<p><img width="498" height="358" class="wp-image-14621" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-464.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-464.png 498w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-464-300x216.png 300w" sizes="(max-width: 498px) 100vw, 498px" alt="word image 464 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></p>
<p><strong>Рисунок 10</strong> – Кластеризация изученных генотипов</p>
<p>Как мы видим из рисунка 9, кластеризация генотипов методом Maximum Likelihood Method в программе MEGA7 создала два супер-кластера и три меньших, входящих в них. При этом кластеризация выявила близкородственные генотипы (1, 2, 5 и 3, 4). Данное положение этих образцов было выявлено при проведении дополнительной кластеризации с использованием «Minimum Evolution method». Тем не менее, как мы видим из результатов кластеризации, не смотря на близкое родство генотипов, у каждого из них имеется уникальный набор локусов и мутаций, отличающий их друг от друга. Полученные нами данные подтверждаются в статье M. O. Costa с соавторами [162].</p>
<p>Также, помимо кластерного анализа, для уточнения положения и взаимоотношений между выбранными для изучения сортами, нами был проведен PCoA анализ (рисунок 11).</p>
<p><strong><img width="743" height="399" class="wp-image-14622" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-465.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-465.png 743w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-465-300x161.png 300w" sizes="(max-width: 743px) 100vw, 743px" alt="word image 465 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></strong></p>
<p><strong>Рисунок 11</strong> – PCoA анализ изученных генотипов</p>
<p>Как мы видим из рисунка 10, распределение изученных генотипов на координатной плоскости произошло следующим образом: сорта 420-А<br />
и Kober 5BB были объединены, так как они имеют общих родителей (<em>Vitis berlandieri</em> и <em>V. riparia</em>). У сорта Richter 57 среди родительских форм также имеется <em>Vitis berlandieri</em>, и очевидным было, что на кластере и на координатном анализе расположение его будет возле родственных сортов. Подвои Paulsen 1103 и 101-14 были сгруппированы также по генетическому происхождению. Общим родителем у них является <em>Vitis rupestris</em>.</p>
<p>Таким образом, в данной работе нами был проведен анализ подвойных сортов винограда с использованием iPBS маркеров, который, в свою очередь, показал их генетическое разнообразие. Как было выявлено, наименьшее количество бендов составило 156 шт. для первой популяции, в то время как вторая популяция показала наибольшее (224 шт.). Процент полиморфных локусов внутри популяций, согласно анализу частоты встречаемости аллелей<br />
в GenAlEx 3.1 составил 19,78 %, или 47 шт. бендов от общего количества для первой популяции, в то время как во второй популяции их было в два раза больше (43,30 %, или 115 шт.). По результатам анализа была выполнена Maximum Likelihood Method кластеризация, которая выявила, что сорта разделились на несколько кластеров. По результатам распределения генотипов подтвердилось их общее происхождение и родственность. Итоги PCoA анализа также были похожи на кластеризацию, что было очевидно, учитывая литературные данные и родственность сортов. Показано, что точки 420-А<br />
и Kober 5BB были ближе друг к другу, так как известно, что они имеют схожие родительские формы от которых и были получены в результате скрещивания, в то время как у других сортов только один общий родитель. Таким образом, полученные данные могут служить не только основой для дальнейшего селекционного отбора, основанного на ДНК маркировании и распределении генотипов в формах PCoA и кластерного анализа, но также и дополнительной основой при изучении распределения аллелей между родительскими и получаемыми гибридами.</p>
<p>Далее, при анализе следующей группы сортов результаты, проведенных анализов, оказались следующими: маркер Vine-1 выявил 78 шт. бендов, из которых минимальное количество оказались у сорта Пино черный – 6 шт.,<br />
а максимальное у сорта Бургундский – 11 шт. Также для всех выбранных клонов маркер iPBS 2415, в целом, выявил 70 бендов. При этом, наибольшее число было у Савиньона Таманского – 14 бендов, в то время как наименьшее у Сильванера – всего 3 ДНК-бенда. Маркер iPBS 2074 показал наличие<br />
92 бендов при амплификации со всеми выбранными генотипами, при этом наименьшее количество оказалось у сорта Португальский синий – 15 ДНК-бендов, а наибольшее у Совиньона Таманского 114-35 – 40. Маркер iPBS 2230 показал наличие 111 бендов у всей выборки организмов, из которых наименьшее количество ДНК-бендов показал сорт Сильванер (3 шт.), а самое большое – сорт Мускат белый 20-11-2а.</p>
<p>Всего же при амплификации всех генотипов со всеми ДНК-маркерами был выявлен 351 ДНК-бенд. При этом наилучшую амплификацию показал сорт Совиньон Таманский – 53 ДНК-бенда, в то время как меньше всех бендов выявилось у сорта Сильванер. В целом, после разделения сортов на две популяции (имеющие окрашенную и неокрашенную ягоду), количество ДНК-бендов на популяцию варьировало от 111 (Популяция 2) до 240 (Популяция 1).</p>
<p>В первую популяцию вошли неокрашенные сорта – Совиньон Таманский 114-35, Гарс Левелю, Серсиаль, Мускат белый 7-10-4, Мускат белый 20-11-1a, Сильванер. Вторую популяцию составили, соответственно, сорта<br />
с окрашенной ягодой – Бургундский, Португальский синий, Пино черный.</p>
<p>Таким образом, в результате исследований, наибольшее количество ДНК-бендов сгенерировала первая популяция, что, скорее всего, может быть объяснено большим количеством генотипов, включенных в нее (рисунок 12). Анализ в программе GenAlEx 6.3 показал, что процент полиморфных бендов в первой популяции составил 62,75 %, что соответствует 33 шт., во второй –<br />
52,94 %, или 58 шт.</p>
<p>Как видно из полученных данных, в обеих популяциях достаточно высокое генетического разнообразие, несмотря на то, что в первой популяции изначально больше исследуемых образцов. При этом, всего в выборке выявлено 36 частных ДНК-бендов: 23 – у первой популяции и 13 – у второй.</p>
<p>Также, по результатам анализа всего было обнаружено 76 категорий бендов у Популяции 1 и 66 – у Популяции 2. При этом все ДНК-бенды встречаются в популяциях с частотой не менее 5 %, как было выявлено при анализе частот встречаемости аллелей по каждой из популяций отдельно в программе GenAlEx.</p>
<p><strong><img width="721" height="336" class="wp-image-14623" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-466.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-466.png 721w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-466-300x140.png 300w" sizes="(max-width: 721px) 100vw, 721px" alt="word image 466 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></strong></p>
<p><strong>Рисунок 12</strong> – Анализ частот встречаемости аллелей в изученных популяциях</p>
<p>Так, для дальнейшего анализа в программе MEGA7 было сгенерировано кластерное древо с целью изучения родственных взаимоотношений между выбранными для исследования сортами (рисунок 13).</p>
<p><img width="815" height="609" class="wp-image-14624" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-467.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-467.png 815w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-467-300x224.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-467-768x574.png 768w" sizes="(max-width: 815px) 100vw, 815px" alt="word image 467 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></p>
<p><strong>Рисунок 13</strong> – Дендрограмма исследуемых сортов</p>
<p>Как видно из дендрограммы, все имеющиеся генотипы были разделены на три макрокластера, в одном из которых отдельно ото всех были выделены сорта Португальский синий и Пино черный, что является интересным в виду центрально-европейского происхождения первого сорта (Словения) и французского происхождения второго сорта. Это можно объяснить обменом генетическим материалом, который происходил между европейскими странами. Другой же макрокластер разделился на отдельные микрокластеры, и, что было ожидаемо, два клона – Мускат белый 7-10-4 и Мускат белый 20-11-1ф, были объединены программой вместе. Другие же макрокластеры образованы остальными западноевропейскими сортами. К сожалению, объяснить их расположение в кластерном древе и, соответственно, родство между собой представляется сложным, в виду того, что наличие их общих предков присутствует только в очень давних поколениях.</p>
<p>Далее, для более детального изучения и сравнения результатов, нами был проведен координатный анализ Principal Coordinates Analysis (PCoA).<br />
В результате чего было выявлено похожее разделение генотипов, что представлено на рисунке 14.</p>
<p><strong><img width="755" height="415" class="wp-image-14625" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-468.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-468.png 755w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-468-300x165.png 300w" sizes="(max-width: 755px) 100vw, 755px" alt="word image 468 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></strong></p>
<p><strong>Рисунок 14</strong> – Principal Coordinates Analysis</p>
<p>Как видно из рисунка 13, клоны Мускат белый 7-10-4 и Мускат белый 20-11-1а расположены рядом на координатной плоскости, что было вполне ожидаемо и очевидно ввиду их крайне близкого родства. Однако на графике они находятся отдельно от всех остальных сортов, в то время как на кластерограмме они обособлены в отдельном кластере. Возможно, это объясняется тем, что сорт был выведен на востоке Азии. Также, на кластерограмме клоны Пино черный и Португальский синий расположены рядом, в то время как на координатном анализе Пино черный оказался рядом с Совиньоном Таманским. Данное расположение также достаточно сложно объяснить, в виду того, что родительские формы до сих пор неизвестны, равно как и другие родственные им сорта. Тем не менее, оба сорта являются французскими, поэтому такое расположение вполне объяснимо со стороны географического происхождения и выделения их из одного генетического бассейна. Интересно также и то, что между ними и Гарс Левелю располагается сорт Бургундский, что подтверждает и кластерограмма. Серсиаль и Сильванер и на кластерограмме, и на координатном анализе находятся рядом, что также может указывать на, отдаленное родство и наличие некоторых схожих между собой аллелей.</p>
<p>Можно заключить, что генетический анализ клонов интродуцентов с использованием iPBS маркеров может выполнятся в процессе создания новых сортов винограда, так как каждый из маркеров показал достаточную степень амплификации. Однако результаты неоднородные, и самые низкие показал маркер iPBS 2415 (70 ДНК-бендов), а самые высокие – iPBS 2230 (111 ДНК-бендов). Несмотря на это, различия могут быть лишь следствием немного отличающихся концентраций ДНК, и все маркеры одинаково эффективны.</p>
<p>Анализ в программе MEGA7 показал четкое разделение всех сортов на три макрокластера. Интересно, что сорта Португальский синий и Пино черный были выделены в отдельный макрокластер. Это явление можно объяснить обменом генетическим материалом между Европейскими странами, который мог происходить раньше. Остальные макрокластеры образованы другими заподноевропейскими сортами. Координатный анализ показал аналогичное анализу в программе MEGA7 расположение всех сортов, включая Португальский синий и Пино черный. Однако здесь рядом с ними также находится Совиньон Таманский, что может подтверждать обмен генетическим материалом между этими странами и, соответственно, отдаленное родство этих сортов. Сорта Серсиаль, Гарс Левелю и Сильванер находятся рядом как на кластерограмме, так и на координатной плоскости PCoA анализа.<br />
В свою очередь, это указывает на их отдаленное родство и распределение схожих аллелей между этими генотипами. Очевидно и то, что оба клона сорта Мускат белый были расположены рядом. Тем не менее, обе точки не находились в одном положении, что говорит о наличии изменений в геноме, вызванными ретротранспозонами, что в принципе не является чем-то необычным, так как этот сорт является старинным и претерпел множество вегетативных генераций. Тем более что данные клоны имеют различное территориальное происхождение и, соответственно, отобраны от разного материнского материала. Интересным же было и то, что такие сорта как Бургундский и Совиньон Таманский (клон сорта Совиньон блан) располагались в разных местах на координатной плоскости и на кластерограмме. В частности, на кластерограмме они были определены программой как наиболее близкие из данной выборки к группе сортов Серсиаль, Гарс Левелю и Сильванер, в то время как PCoA анализ показал их расположение как более близкое к сортам Португальский синий и Пино черный. Тем не менее, можно предположить, что сорт Бургундский был выведен с использованием стародавних французских сортов, как исходного селекционного материала.</p>
<p>По итогам анализирования удалось установить, что маркер Vine-1 выявил 82 ДНК-бенда, при этом их наименьшее количество оказалось у сорта Яй изюм розовый – 4 шт., и такое же количество у сорта Яй изюм белый. Наибольшее же количество сгенерированных бендов (10 шт.) оказалось<br />
у сорта Чиляки 1-23 (35-36). Молекулярный маркер iPBS 2415 выявил<br />
в сумме 107 ДНК-бендов для всех сортов, при наибольшем количестве у сорта Каринка белая мутация – 14 бендов, а наименьшее у Цимлянского черного – всего 2 бенда. Маркер iPBS 2074 выявил 128 бендов в целом. Наименьшее их количество для данного маркера было у сорта Цимлянский черный – 7 шт., а наибольшее у Кумшатского и Чиляки 1-23 (35-36) – по 13 ДНК-бендов у каждого. Маркер iPBS2230 выявил 127 ДНК-бендов в сумме, наибольшее количество наблюдается у сорта Августин – 23 шт., а наименьшее у Слитного – 2 шт.</p>
<p>В целом при амплификации все маркеры в совокупности сгенерировали 444 ДНК-бенда. Наилучший результат показал маркер iPBS 2072 – с его помощью обозначилось 128 ДНК-бенда, а наименьшее количество получилось с молекулярным маркером Vine-1 – 82 ДНК-бенда. Однако это не говорит<br />
о наибольшей эффективности конкретного маркера, и скорее всего связано<br />
с немного варьируемой концентрацией ДНК в анализе. Далее все сорта были разделены на две популяции по принципу наличия окраски (окрашенные<br />
и неокрашенные сорта), при этом, в первую популяцию вошли такие сорта, как Кумшатский, Чиляки 1-23 (35-36), Каринка белая мутация, Августин, Яй изюм белый, Кишмиш белый овальный (Султанина), а во второю популяцию неокрашенных сортов – Варюшкин 9 ряд кл 19, Слитной, Достойный, Яй изюм розовый, Кишмиш красный туркменский, Цимлянский черный. В этом случае количество бендов составило 243 шт. – для популяции неокрашенных сортов и 201 шт. – для популяции окрашенных сортов. Очевидно, что большее количество сгенерированных ДНК-бендов у популяции, в которую входят неокрашенные сорта, однако, это объясняется лишь количественным преимуществом неокрашенных сортов в выборке, так как отбор производился рандомизированным методом. Следующим этапом стало проведение анализа в среде Microsoft Excel, используя макрос GenAlEx 6.3. Было выявлено, что процент полиморфных бендов в первой популяции составил 60,78 %, а во второй – 59,80 %. В общем. процент полиморфности для всех генотипов 84,31 %. При этом количество частных бендов в первой популяции равно<br />
22 шт., а во второй – 14 шт. Также анализ позволил установить, что количество категорий ДНК-бендов у первой популяции равно 78 шт., а у второй – 70 шт., и их частота не превышает 5 %, что было выявлено в результате анализа частот встречаемости (рисунок 15).</p>
<p><strong><img width="748" height="275" class="wp-image-14626" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-469.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-469.png 748w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-469-300x110.png 300w" sizes="(max-width: 748px) 100vw, 748px" alt="word image 469 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></strong></p>
<p><strong>Рисунок 15</strong> – Анализ частот встречаемости аллелей в изученных популяциях</p>
<p>В ходе проведения анализа данных в программе MEGA7 было визуализировано кластерное древо, отражающее родственные связи внутри и между изучаемыми популяциями. Древо представлено на рисунке 16.</p>
<p><img class="wp-image-14627" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-470.png" width="809" height="558" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-470.png 921w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-470-300x207.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-470-768x530.png 768w" sizes="(max-width: 809px) 100vw, 809px" alt="word image 470 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></p>
<p><strong>Рисунок 16</strong> – Дендрограмма исследуемых сортов</p>
<p>Как видно из сложившейся дендрограммы, все исследуемые генотипы аборигенных сортов были разделены на два макрокластера. Можно заметить, что сорта Достойный и Августин при этом обособлены в отдельный макрокластер ото всех остальных. Такое разделение можно объяснить тем, что они являются сортами новой селекции, и именно поэтому вынесены отдельно ото всех. Так, сорт Достойный был получен на Анапской зональной опытной станции виноградарства и виноделия (АЗОСВиВ) в результате скрещивания двух сортов – Филлоксероустойчивый Джемете и Мускат Гамбургский, и зарегистрирован в Госреесте РФ в 2002 г., а сорт Августин продукт скрещивания Плевен и Виллар блан, и принадлежит к числу достижений болгарской селекции, также был зарегистрирован в Госреестре РФ в 2002 г. Скорее всего, если они генетически отличаются от остальных сортов в выборке, то и их родители тоже имеют такие отличия. Тот факт, что сорта Кишмиш красный туркменский (Султатнина розовая) и Кишмиш белый овальный (Султанина), расположены рядом, объясняется их близким родством и происхождением (Ближний Восток). Сорта Яй изюм белый и Яй изюм розовый расположились вполне ожидаемо. Оба сорта являются столовыми дагестанскими сортами, и располагаются в одном макрокластере. Но Яй изюм белый принадлежит группе восточных сортов, а Яй изюм розовый группе сортов бассейна Черного моря, и о происхождении Яй изюм белого в настоящий момент нет сведений, в то время как Яй изюм розовый включен в районированный сортимент винограда.</p>
<p>Для более четкого представления о родственных связях сортов выборки был проведен координатный анализ Principal Coordinates Analysis (PCoA). Результаты представлены на рисунке 17.</p>
<p>Результаты оказались следующими: Кишмиш красный туркменский (Султанина розовая) и Кишмиш белый овальный (Султатнина) расположены в разных частях координатного анализа, в то время как на дендрограмме они находятся рядом. Яй изюм белый и Яй изюм розовый находятся практически аналогично дендрограмме, а между ними Цимлянский черный. При чем, он все же ближе к Яй изюму розовому, что можно объяснить его принадлежностью к эколого-географической группе сортов бассейна Черного моря, так же как и Яй изюм розовый. Аналогично с дендрограммой расположились сорта Августин и Достойный. Так же на кластерограмме Кумшатский и Варюшкин 9 ряд кл 19 обозначены рядом, и это вполне объяснимо ввиду того, что они оба являются донскими аборигенными сортами.</p>
<p><strong><img width="707" height="354" class="wp-image-14628" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-471.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-471.png 707w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-471-300x150.png 300w" sizes="(max-width: 707px) 100vw, 707px" alt="word image 471 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></strong></p>
<p><strong>Рисунок 17</strong> – Координатный анализ Principal Coordinates Analysis</p>
<p>Как показали результаты всех проведенных испытаний, молекулярно-генетические маркеры IPBS, а именно iPBS2074, iPBS2230, iPBS2415, Vine-1, могут успешно использоваться в доселекционных исследованиях культуры<br />
<em>V. vinifera</em>, так как каждый из использовавшихся маркеров показал достаточную степень амплификации. Результаты варьируются следующим образом: наименьшее количество сгенерированных бендов принадлежит маркеру Vine-1 – 82, а наибольшее iPBS 2074 – 128 ДНК-бенда. Получившуюся вариабельность можно объяснить концентрационным превосходством нуклеиновых кислот в некоторых образцах. При обращении к результатам, полученным в ходе работы в программе GenAlEx 6.3, можно заключить, что в процент полиморфности для всех генотипов составил 84,31 %, что подтверждает факт эффективности IPBS маркеров в изучении аборигенных сортов. Координатный анализ Principal Coordinates Analysis также показывает вполне ожидаемые и логичные результаты.</p>
<p>При сравнении данной группы сортов, количество сгенерированных при амплификации ДНК бендов в совокупности для всех маркеров – 795 шт. При этом, количество бендов у маркера Vine-1 – 160 бендов всего, с наименьшим количеством у сорта Цимлянский черный – 4 шт., и с таким же у сортов Яй изюм белый и Яй изюм розовый, наибольше же количество бендов принадлежит сорту Бургундский – 11 шт. Молекулярный маркер IPBS2230 в процессе анализа выявила 238 ДНК-бенда, из которых больше всего их оказалось у сорта Августин – 23, а меньше всего Слитной – 2. Маркер IPBS 2074 сгенерировал всего 220 ДНК бенда, из которых самым высоким результатом обладает сорт Кумшатский – 13, наряду с Чиляки 1-23 (35-36), Серсиаль<br />
и Гарс Левел. Молекулярный маркер IPBS 2415 показал 177 ДНК-бенда, в то время как меньше всего их принадлежит сорту Цимлянский черный – всего 2, а больше Совиньон Таманский 114-35 и Коринка белая мутация – по 14 бендов каждый.</p>
<p>После того, как была проанализирована эффективность выполненного анализа, и получены удовлетворительные результаты, все исследуемые сорта винограда разделили на две большие группы по принципу их окраски ягод,<br />
а именно на сорта, обладающие белой окраской ягод и сорта окрашенные, обладающие черной окраской ягод. В группу неокрашенного (белого) винограда вошли следующие сорта: Мускат белый 7-10-4, Мускат белый 20-11-1а, Серсиаль, Сильванер, Гарс Левелю, Совиньон Таманский 114-35, Кишмиш красный туркменский (Султатнина розовая), Яй изюм розовый, Кишмиш белый овальный (Султанина), Яй изюм белый, Августин, Коринка белая мутация, Чиляки 1-23 (35-36). Вторую же группу составили сорта, обладающие черной окраской ягод (окрашенные), а именно: Кумшатский, Варюшкин 9 ряд кл 19, Слитной, Достойный, Цимлянский черный, Бургундский, Португальский синий, Пино черный. Далее были произведены подсчеты, в ходе которых было выявлено, что количество ДНК-бендов для популяции неокрашенных сортов составило 471 шт., а для популяции, состоящей из окрашенных сортов – 323 шт. В целом, количество сгенерированных бендов не сильно отличается в популяциях, а незначительные расхождения вызваны неодинаковым количеством сортов винограда в каждой группе. Следующим шагом стало проведение анализа с помощью макроса GenAlEx 6.3 для среды Microsoft Excel. Используя его, были получены результаты, отражающие процент полиморфности для всех генотипов – 98,04 %, а также для первой популяции – 85,29 % и для второй – 67,65 %. При этом, количество частных ДНК-бендов в первой популяции равно 25, а во второй – 9. Также было установлено, что количество категорий бендов для первой популяции равно<br />
93 шт., а для второй – 77 шт., а также их частота встречаемости остается не выше 5 %, что было выявлено в ходе анализа частот встречаемости, соответственно (рисунок 18).</p>
<p><strong><img width="771" height="267" class="wp-image-14629" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-472.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-472.png 771w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-472-300x104.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-472-768x266.png 768w" sizes="(max-width: 771px) 100vw, 771px" alt="word image 472 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></strong></p>
<p><strong>Рисунок 18</strong> – Анализ частот встречаемости</p>
<p>После проведенных подсчетов, в программе MEGA 7 было сгенерировано кластерное древо, которое демонстрирует родственные связи исследуемых сортов внутри и между популяциями. Данное древо представлено на рисунке 19.</p>
<p>Как можно увидеть исходя из представленного изображения, все сорта винограда, используемые в исследовании, разделились на два макрокластера. Вполне ожидаемо в одном кластере оказались такие сорта, как Яй изюм белый и Яй изюм розовый – они оба являются дагестанскими сортами винограда. Однако Яй изюм белый – группа восточных сортов, в то время, как Яй изюм розовый включен в районированный сортимент винограда и относится к сортам бассейна Черного моря, а вот о происхождении Яй изюм белого<br />
в настоящий момент ничего неизвестно. Так же, рядом с ними расположились сорта Кишмиш белый овальный (Султанина) и Кишмиш красный туркменский (Султанина розовая), что тоже является вполне логичным, так как оба сорта относятся к эколого-географической группе восточных сортов винограда.</p>
<p><img width="858" height="736" class="wp-image-14630" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-473.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-473.png 858w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-473-300x257.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-473-768x659.png 768w" sizes="(max-width: 858px) 100vw, 858px" alt="word image 473 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></p>
<p><strong>Рисунок 19</strong> – Кластерное древо исследуемых сортов, построенное<br />
с помощью программы MEGA 7</p>
<p>Виноград сорта Цимлянский черный аналогично находится в том же кластере, однако относится по своим морфологическим признакам к эколого-географической группе сортов винограда бассейна Черного моря. Слитной<br />
и Гарс Левелю, расположившиеся в следующим кластере, находятся близко друг к другу. Это можно объяснить тем, что данные исследуемые сорта оба принадлежат к группе сортов винограда бассейна Черного моря. Серсиаль, берущий начало происхождения в Португалии, относится к группе сортов винограда Северной Африки, однако, рядом с ним на кластерном древе расположился Сильванер. Возможно, это объясняется тем, что его родина – Центральная Европа, а относится он к эколого-географической группе западноевропейских сортов винограда, что относительно недалеко от Северной Африки, и в целом можно предположить их далекое родство ввиду этого факта. Сорт винограда Бургундский является словенским сортом. Чиляки, находящийся с ним в одном кластере, – группа восточных сортов винограда. Также, сорта Мускат белый 7-10-4 и Мускат белый 20-11-1а совершенно ожидаемо находятся рядом. Сорта Августин и Достойный были селекционированы относительно недавно, что и объясняет их расположение на дендрограмме, а именно рядом и обособленно.</p>
<p>Для того чтобы сформировать наиболее четкое представление о родственных связях винограда исследуемых сортов, был проведен Principal Coordinates Analysis (PCoA), результаты которого можно видеть на рисунке 20.</p>
<p><strong><img width="775" height="480" class="wp-image-14631" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-474.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-474.png 775w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-474-300x186.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/word-image-474-768x476.png 768w" sizes="(max-width: 775px) 100vw, 775px" alt="word image 474 Генотипирование перспективных аборигенных и интродуцированных сортов Российской Федерации с использованием iPBS маркеров для селекции новых отечественных адаптивных гибридов"></strong></p>
<p><strong>Рисунок 20</strong> – Principal Coordinates Analysis (PCoA)</p>
<p>Результаты оказались следующими: сорт винограда Достойный расположился между сортами Мускат белый 7-10-4 и Мускат белый 20-11-1а, в то время как на дендрограмме между ними нет никаких других сортов, но Августин по-прежнему находится рядом с Достойным, и, в целом, расположение всех четырех сортов соответствует их расположению на кластерном древе. По остальным сортам точно также можно сказать, что существенных отличий кластерного древа и анализа PCoA не обнаружено.</p>
<p>Полученные результаты проделанной работы свидетельствуют о том, что молекулярно-генетические маркеры IPBS, использовавшиеся в исследовании, а именно Vine-1, IPBS2415, IPBS2415, IPBS2074, успешно проявили себя. Степень их амплификации оказалась достаточно высока для того, чтобы вышеназванные маркеры могли служить инструментом в доселекционных<br />
и послеселекционных испытаниях, а именно: маркер Vine-1 в процессе амплификации успешно сгенерировал 160 ДНК-бенда, маркер IPBS 2415 выявил 177 ДНК-бенда, маркер IPBS2074 – 220, и, наконец, IPBS2230 успешно сгенерировал 238 ДНК-бенда. Таким образом, наиболее успешно проявил себя IPBS2230, количество его бендов наибольшее среди всех, а наименьшее,<br />
в свою очередь, имеет маркер Vine-1. Однако полученные результаты нельзя интерпретировать как превосходство того или иного маркера, так как выборка образцов сортов винограда производилась рандомизированным методом<br />
и оказалась неравномерной, а значит, все маркеры имеют одинаковую эффективность. Это суждение доказывает анализ, проведенный в программе GenAlEx 6.3 и показавший процент полиморфности 98,04 % для всех образцов. То же самое относится к Principal Coordinates Analysis, показавшему ожидаемые и логичные результаты.</p>
<p>Далее в наших исследованиях амплификация использованных в работе молекулярных маркеров дала всего 2316 полос ДНК (таблица 9). Размер амплифицированных полос ДНК составлял от 300 до 3000 пар оснований. Для каждого генотипа количество полос варьировалось от минимального 97 (Жупски Баджадисер) до максимального 166 (Кульджинский и Сибирьковый). Все генотипы были разделены на три популяции: сортовые гибриды (Популяция 1), современные сорта (Популяция 2) и аборигенные сорта (Популяция 3). После амплификации у первой популяции было выявлено 548 полос, в то время как 329 и 1439 полос ДНК были идентифицированы для второй и третьей популяции. Эти цифры можно объяснить количеством генотипов, входящих в каждую группу. Таким образом, наибольшее количество генотипов и, следовательно, полос ДНК отмечено в Популяции 3. Как мы видим, такой же способ распределения числа был идентифицирован для другого значения. Так, наибольшее разнообразие было выявлено в Популяции 3 (0,225), но количество разнообразия в Популяции 1 (0,222) было немного ниже, что можно объяснить сложным происхождением и родословной местных генотипов, выбранных для исследования, что также согласуются и с результатами исследования AMOVA (таблица 10): среди популяций – 28<br />
и 72 % внутри популяций. Ожидается, что такая высокая величина вариации между популяциями была выявлена из-за присутствия сортовых гибридов<br />
и ранее уже была продемонстрирована для винограда и других видов, а также для различных типов молекулярных маркеров [131, 157, 219].</p>
<p><strong>Таблица 9</strong> – Результаты наблюдаемого генетического разнообразия<br />
и оценки полос</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>№</td>
<td>Название</td>
<td>PN</td>
<td>NTI</td>
<td>TNB</td>
<td>PB</td>
<td>PPL (%)</td>
<td>NPB</td>
<td>Индекс Шеннона</td>
<td>Разнообразие</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
<td>7</td>
<td>8</td>
<td>9</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>Кобер 5ББ</td>
<td>1</td>
<td>101</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>420A</td>
<td>1</td>
<td>113</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>101 14</td>
<td>1</td>
<td>101</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>Паульсен</td>
<td>1</td>
<td>130</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>Рихтер</td>
<td>1</td>
<td>103</td>
<td>548</td>
<td>304</td>
<td>55.43</td>
<td>49</td>
<td>0.326</td>
<td>0.222</td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>Антарис</td>
<td>2</td>
<td>127</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>Жупски Баядисер</td>
<td>2</td>
<td>97</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>8</td>
<td>Амур</td>
<td>2</td>
<td>105</td>
<td>329</td>
<td>115</td>
<td>35.10</td>
<td>17</td>
<td>0.223</td>
<td>0.156</td>
</tr>
<tr>
<td>9</td>
<td>Будай шули</td>
<td>3</td>
<td>121</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>Гок изюм</td>
<td>3</td>
<td>131</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>11</td>
<td>Гюляби дагестанский</td>
<td>3</td>
<td>163</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>12</td>
<td>Аг изюм</td>
<td>3</td>
<td>127</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>13</td>
<td>Агадаи</td>
<td>3</td>
<td>137</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>14</td>
<td>Гок ала</td>
<td>3</td>
<td>144</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="10"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="10"><em>Продолжение таблицы 9</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
<td>7</td>
<td>8</td>
<td>9</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>15</td>
<td>Яй изюм розовый</td>
<td>3</td>
<td>153</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>16</td>
<td>Яй изюм белый</td>
<td>3</td>
<td>131</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>17</td>
<td>Сибирьковый</td>
<td>3</td>
<td>166</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>18</td>
<td>Кульджинский</td>
<td>3</td>
<td>166</td>
<td>1439</td>
<td>977</td>
<td>67.90</td>
<td>96</td>
<td>0.343</td>
<td>0.225</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td>Всего</td>
<td>–</td>
<td>2316</td>
<td>–</td>
<td>2241</td>
<td>96.77</td>
<td>162</td>
<td>0.460</td>
<td>0.298</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="10"><em>Примечание</em>: PN – численность популяции; NTI – количество амплифицированных полос на генотип; TNB – общее количество полос на популяцию; PB – количество полиморфных полос; PPL – процент полиморфных полос; NPB – количество частных бендов.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 10</strong> – Результаты анализа AMOVA</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Показатель</td>
<td>df</td>
<td>SS</td>
<td>MS</td>
<td>Est. Var.</td>
<td>Процент</td>
<td>P</td>
</tr>
<tr>
<td>Между<br />
популяциями</td>
<td>2</td>
<td>333.189</td>
<td>166.594</td>
<td>21.093</td>
<td>28</td>
<td>&lt;0.001</td>
</tr>
<tr>
<td>Внутри популяций</td>
<td>15</td>
<td>829.033</td>
<td>55.269</td>
<td>55.269</td>
<td>72</td>
<td>&lt;0.001</td>
</tr>
<tr>
<td>Всего</td>
<td>17</td>
<td>1162.222</td>
<td>–</td>
<td>76.362</td>
<td>100</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Примечание</em>: df – степень свободы, SS – сумма квадратов, MS – средний квадрат, Est. Var. – расчетная дисперсия, P – вероятность (данные r и ≥) для сравнения между различными популяциями и генотипами.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Расчетная дисперсия среди популяций составила 21,093, внутри популяций – 55,269, а общее количество – 76,362. Эти результаты также отражают комплексное разнообразие этого исследования и наличие видов и разновидностей. В частности, дисперсия среди популяций была ниже, чем внутри популяций, что согласуется с исследованием AMOVA. Кроме того, изменчивость внутри популяций показывает сложную генетическую структуру выбранных генотипов и наличие смешанных географических групп.</p>
<p>Результаты в таблице 11 представляют попарное генетическое расстояние Нея [199] между исследуемыми популяциями. Интересно, что Популяция 3 (включая местные генотипы) показала самые высокие значения расстояния Нея по сравнению с Популяциями 1 и 2, которые были немного ближе друг к другу. Эти результаты можно объяснить межвидовым происхождением сорта Амур, одним из родителей которого является Датье де Сен-Валье. Но как мы увидим позже (рисунок 21), этот сорт был расположен рядом с европейскими разновидностями <em>V. vinifera</em>, что, в свою очередь, предполагает, наличие большего количества общих аллелей с европейскими разновидностями, чем с американскими видами или изученными местными образцами. В любом случае, более высокая разница в Популяции 3 может указывать на очевидное дальнее родство с европейскими гибридами <em>V. vinifera</em> и, тем более, с американскими видами.</p>
<p><strong>Таблица 11</strong> – Парная популяционная матрица генетического расстояния Неи</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td></td>
<td>Популяция 1</td>
<td>Популяция 2</td>
<td>Популяция 3</td>
</tr>
<tr>
<td>Популяция 1</td>
<td>0.000</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Популяция 1</td>
<td>0.180</td>
<td>0.000</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Популяция 1</td>
<td>0.205</td>
<td>0.212</td>
<td>0.000</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Генетические отношения изученных сортов винограда были оценены<br />
с помощью кластеризации и анализа главных компонентов. В частности, для этой оценки использовались два набора маркеров (на основе ретротранспозонов и SSR). Кроме того, используемые программы имеют различный набор методов и моделей, поэтому мы используем два метода, выставленные в программах по умолчанию (метод максимального правдоподобия для MEGA X<br />
и Weighted Neighbor-Joining для DARWin 6.0). Наконец, генотипы были включены в два кластерных дерева и разделены на отдельные кластеры, после чего они сравнивались. Учитывая тот факт, что не все генотипы представлены в базе данных VIVC, мы исключили некоторые генотипы из дерева SSR.</p>
<p>Дерево, построенное с использованием данных об аллелях ретротранспозонов (рисунок 22), было разделено на три кластера. В первый кластер вошли аборигенные сорта, во второй – современные сорта, полученные скрещиванием западных сортов, а в третий – межвидовые гибриды. Очевидно, это подразумевает способность маркеров определять различия между происхождением образцов, в то время как близкородственные образцы группируются вместе. Затем, как мы видим, некоторые известные разновидности (Яй изюм белый и Яй изюм розовый) были помещены вместе, что предполагает их реальное близкое родство. То же самое мы видим при сравнении межвидовых скрещиваний. Интересно, что Kober 5BB, 420 и Richter были близки друг к другу, что предполагает наличие общих аллелей.</p>
<p><img width="716" height="734" class="wp-image-14632" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-2.jpeg" alt="C:\Users\Alexander1991\Documents\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\2. Виноград iPBS\Статьи Даша\5. Acta Agrobotanica\Picture Maximum Likelihood method MEGA Tree.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-2.jpeg 716w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-2-293x300.jpeg 293w" sizes="(max-width: 716px) 100vw, 716px" /></p>
<p><strong>Рисунок 21</strong> – Древо, построенное с помощью программы MEGA X<br />
методом максимального сходства (все бутстрепы ниже 50 были скрыты)</p>
<p>Построение дерева на основе микросателлитов выявило также родство исследуемых выборок. Например, таким же образом Яй изюм белый и Яй изюм розовый были помещены вместе, и родство сортов Сибирьковый<br />
и Кульджинский было подтверждено также этим типом генетических маркеров. Кроме того, сорт Гок изюм был помещен рядом с этими генотипами, в то время как Будай шули находился близко к Гок ала. Тем не менее, построенное дерево было разделено на две общие группы, имеющие схожую форму<br />
с древом, основанным на данных о ретротранспозонах. Например, Гок ала был помещен в подкластер рядом с подкластером Яй изюм. Таким образом, для дальнейшего сравнения мы провели анализ главных компонентов (рисунок 23 и 24) также для обоих наборов маркеров.</p>
<p><img width="623" height="660" class="wp-image-14633" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-3.jpeg" alt="C:\Users\Alexander1991\Documents\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\2. Виноград iPBS\Статьи Даша\5. Acta Agrobotanica\Picture Weighted Neighbor-Joining DARWin Tree.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-3.jpeg 623w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-3-283x300.jpeg 283w" sizes="(max-width: 623px) 100vw, 623px" /></p>
<p><strong>Рисунок 22</strong> – Дерево, построенное с помощью программы DARWin 6.0<br />
методом Weighted Neighbor-Joining</p>
<p><img width="1510" height="698" class="wp-image-14634" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-4.jpeg" alt="C:\Users\Alexander1991\Documents\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\2. Виноград iPBS\Статьи Даша\5. Acta Agrobotanica\Picture PCoA iPBS.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-4.jpeg 1510w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-4-300x139.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-4-1024x473.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-4-768x355.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1510px) 100vw, 1510px" /></p>
<p><strong>Рисунок 23</strong> – Анализ главных компонент, построенный на основе<br />
набора ретротранспозоных маркеров</p>
<p><img width="806" height="444" class="wp-image-14635" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-5.jpeg" alt="C:\Users\Alexander1991\Documents\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\2. Виноград iPBS\Статьи Даша\5. Acta Agrobotanica\Picture PCoA SSR.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-5.jpeg 806w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-5-300x165.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/c-users-alexander1991-documents-documents-grants-5-768x423.jpeg 768w" sizes="(max-width: 806px) 100vw, 806px" /></p>
<p><strong>Рисунок 24</strong> – Анализ главных компонент, построенный на основе<br />
набора SSR маркеров</p>
<p>Анализ главных компонент, построенный на основе набора ретротранспозонных маркеров, выявил три основных кластера изучаемых генотипов.<br />
В основном, они были разделены также, как и кластерное дерево: слева – аборигенные сорта, вверху – современные сорта, полученные скрещиванием западных сортов, и внизу – межвидовые гибриды, что согласуется с данными кластеризации. Для ветви межвидовых гибридов была сохранена та же основная форма, но на этот раз сорта Рихтер не было в основном кластере. Что касается аборигенных сортов, большинство из них были помещены в одну<br />
и ту же форму, но, например, Аг изюм и Будай шули были близко к расположению Яй изюм белый и Яй изюм розовый.</p>
<p>Для анализа основных компонент по данным SSR маркеров, мы видим, что были идентифицированы три пула генотипов. Очевидно, сначала были поданы подвои, но два других кластера разделили генотипы аналогичным образом в результате PCoA по данным амплификации ретротранспозонов. Как видим, положение генотипа Будай шули было смещено.</p>
<p>Всего амплификация всех трех популяций дала 2316 полос ДНК. Как<br />
и ожидалось, Популяция 3 имела максимальное количество полос ДНК (1439), что можно объяснить наибольшим количеством генотипов, включенных в эту группу. Но разнообразие в третьей популяции было несколько выше (0,225), чем в Популяции 1 (0,222), что объясняется сложной генетической структурой первой группы, поскольку в этот пул вошли генотипы, отобранные в результате межвидовых скрещиваний. С другой стороны, эти результаты интересны, потому что на самом деле Популяция 3, состоящая только из аборигенных сортов, имела более высокий уровень разнообразия, чем межвидовая популяция, и, кроме того, имеет самый высокий процент полиморфных полос на популяцию. Таким образом, это предполагает их смешанное происхождение и, возможно, участие аборигенной дикорастущей виноградной лозы (<em>Vitis silvestris</em> Gmel.) в ее селекции, поскольку один из центров происхождения культивируемой виноградной лозы находится на Кавказе [195, 262]. Более того, это, возможно, объясняется расположением этого региона вблизи торговых путей и миграции людей и, как следствие, предполагает участие разных регионов в селекции сортов винограда этого региона [156]. Кроме того, анализ AMOVA выявил высокий генетический полиморфизм в популяции, что также подтверждает результаты, что они имеют смешанную генетическую структуру, и, также, предполагает высокое фенотипическое разнообразие между выбранными генотипами [154]. Также, мы попытались соотнести уровень разнообразия с количеством полос, генерируемых каждым генотипом. Для этого мы пошагово исключили каждый сорт и пересчитали «Параметры данных частоты аллелей» в GenAlEx. Таким образом, результаты их влияния представлены в таблице 12.</p>
<p>Таким образом, мы обнаружили, что исключение генотипов, имеющих 131 и меньшее количество полос, привело к увеличению уровня разнообразия. Это означает, что у них, прежде всего, имеются с остальными общие аллели, и, в меньшей степени, уникальные. Напротив, исключение генотипов<br />
с большим количеством полос привело к снижению уровня разнообразия. Интересно, что исключение из пула сорта Агадаи привело к значительному снижению разнообразия, что может свидетельствовать о том, что этот генотип имеет большое количество уникальных бендов по сравнению с другими генотипами. Вероятно, это также и привело к его «плавающему» положению при кластеризации и в координатах PCoA.</p>
<p><strong>Таблица 12</strong> – Эффект пошагового исключения генотипа из Популяции 3</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Название исключенного<br />
из выборки образца</td>
<td>Количество<br />
бендов на генотип</td>
<td>Уровень разнообразия<br />
после исключения<br />
из выборки</td>
</tr>
<tr>
<td>Будай шули</td>
<td>121</td>
<td>0.230</td>
</tr>
<tr>
<td>Гок изюм</td>
<td>131</td>
<td>0.227</td>
</tr>
<tr>
<td>Гюляби дагестанский</td>
<td>163</td>
<td>0.218</td>
</tr>
<tr>
<td>Аг изюм</td>
<td>127</td>
<td>0.225</td>
</tr>
<tr>
<td>Агадаи</td>
<td>137</td>
<td>0.214</td>
</tr>
<tr>
<td>Гок ала</td>
<td>144</td>
<td>0.221</td>
</tr>
<tr>
<td>Яй изюм розовый</td>
<td>153</td>
<td>0.223</td>
</tr>
<tr>
<td>Яй изюм белый</td>
<td>131</td>
<td>0.226</td>
</tr>
<tr>
<td>Сибирьковый</td>
<td>166</td>
<td>0.219</td>
</tr>
<tr>
<td>Кульджинский</td>
<td>166</td>
<td>0.217</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Как и ожидалось, оба дерева (на основе ретротранспозонных и на SSR данных) были разделены на два суперкластера, которые включали генотипы Vinifera и не-Vinifera. Дерево на основе ретротранспозонных данных и его ветви были разделены на подкластеры, состоящие из местных и зарубежных разновидностей. Таким образом, один из подкластеров (состоящий из сортов Амур, Антарис и Жупски Баджадисер) был помещен между сортами не-Vinifera и Vinifera, что объясняется их происхождением и, в частности, межвидовым происхождением сорта Амур ((Nimrang × Pamyati Мечурина) × Даттье де Сен-Валлье [175]). Очевидно, что расположение сорта Амур предполагает, что этот генотип имеет больше аллелей, полученных от генотипов, принадлежащих к <em>V. vinifera</em>. Результаты, касающиеся генетики подвоев, отражают их родословную и согласуются с предыдущими исследованиями [162]. Кроме того, неожиданным оказалось то, что 101 14 и Paulsen 1045 были помещены вместе, но это могло быть объяснено родословной Paulsen 1045 (Berlandieri Resseguier 2 × Ganzin 1). Потому что происхождение Ganzin 1 включает Арамон × Рупестрис Ганзина (www.vivc.de/index.php?r=passport/<br />
viewtree&amp;id=4393), а родословная 101 14 – Рипария × Рупестрис. Несмотря на то, что в ходе SSR-анализа мы исключили некоторые генотипы, из-за отсутствия информации об их микросателлитных последовательностях, форма древа на основе микросателлитов была похожей. В частности, Richter 110 и 420A были помещены вместе, а также Kober 5BB был, ожидаемо, расположен рядом<br />
с Paulsen 1045, в виду того, что на древе на основе данных о ретротранспозонных аллелях, этот образец был помещен между двумя суб-ветвями.</p>
<p>При сравнении двух древ не было выявлено четкого местонахождения сортов Агадай и Гок изюм. С одной стороны, это может означать их сложную родословную (что, например, согласуется с результатами изучения изменения уровня разнообразия), но, с другой стороны, не были все данные SSR для всех изученных сортов, которые могут повлиять на результаты. В любом случае, в свете того, что мы не знаем точную родословную изучаемых сортов, мы можем подозревать, что эти два генотипа имеют аллели общие<br />
с двумя группами сортов одновременно, и только включение дополнительных генотипов в исследуемый пул может прояснить понимание его происхождения. Но, к сожалению, даже если по литературным данным родословная известна, все равно, иногда она не может быть правильной [155, 205]. Напротив, мы можем видеть некоторые устойчивые позиции внутри обоих деревьев, например, сорта Яй изюм белый и Яй изюм розовый, а также Сибирьковый и Кульджинский были помещены вместе, и результаты, полученные с помощью двух маркерных систем, подтверждают их тесное родство.<br />
И, по открытым данным, это очень интересно, потому что происхождение якобы из Казахстана [109] (что следует из названия, происходит из села Кульджинка, где впервые был обнаружен этот сорт), а сорт Сибирьковый (согласно Ампелографии СССР [198] был завезен из Венгрии на Дон). Но эта ситуация усложняется, если мы используем ампелографию СССР как основу для понимания происхождения Кульджинского, поскольку предполагается, что эта разновидность была завезена в Казахстан из Китая. В любом случае, результаты подтверждают друг друга, и этим тоже можно объяснить их родство, ведь все эти территории лежат недалеко от старых торговых путей, «Кульджинского тракта» из Китая [203]. Такие генотипы, как Будай шули<br />
и Гок ала, были размещены аналогичным образом и входили в один субкластер с сортами Яй изюм белый и Яй изюм розовый. Что, вероятно, результат их близкого географического происхождения и, возможно, родства.</p>
<p>Использование анализа главных компонент показало аналогичные результаты кластеризации для обеих маркерных систем. Таким образом, PCoA, полученный с использованием системы маркеров на основе ретротранспозонов, сгруппировал все генотипы в три кластера (отмечены синим – для Популяции 1, зеленым – для Популяции 2 и красным – для Популяции 3), очевидно, разделенных по происхождению и родословной исследуемых образцов.<br />
В отличие от предыдущих кластеризаций деревьев, Агадай и Гок изюм имели более строгое расположение. Таким образом, Гок изюм был помещен рядом<br />
с Сибирьковым и Кульджинским, а Агадай был размещен программой вплотную к Яй изюм белый и Яй изюм розовый, что трудно объяснить.<br />
И, наконец, схожие позиции занимали изученные сорта.</p>
<p>Восемнадцать генотипов виноградных лоз, принадлежащих к разным географическим группам и видам, были изучены с использованием маркеров на основе ретротранспозонов. В результате амплификации маркеров на основе ретротранспозонов было получено более двух тысяч полос ДНК, которые были подсчитаны и статистически проанализированы. В результате мы определили разный уровень разнообразия в трех популяциях. Уровень разнообразия в Популяции 1 по сравнению с Популяцией 2 предполагает сложное происхождение и, возможно, участие местных диких виноградных лоз (<em>V. sil­vestris </em>Gmel.) в процессе отбора. Кроме того, результаты теста AMOVA показывают нам высокую молекулярную дисперсию между популяциями, но это можно объяснить включением в исследовательский пул межвидовых гибридов. С другой стороны, интересные результаты были получены при вычислении генетического расстояния Нея, поскольку Популяция 3 показала высокую ценность по сравнению с обеими другими популяциями, что подразумевает уникальное происхождение изученных местных генотипов и, вероятно, отдаленное отношение к генотипам по сравнению с остальной выборкой. Учитывая то, что все отобранные образцы относятся к <em>V. vinifera</em>. Затем анализ данных на основе ретротранспозонов с помощью PCoA и кластеризации подтвердили эти результаты, поскольку Популяция 3 также была разделена как отдельные популяции. Наконец, были обнаружены некоторые ожидаемые и неожиданные отношения. Очевидно, такие генотипы, как Яй изюм белый<br />
и Яй изюм розовый, располагались вместе. Но, как уже ранее упоминалось, было неожиданным, что сорта Сибирьковый и Кульджинский оказались рядом друг с другом по результатам обоих анализов (на основе ретротранспозонов и на основе SSR), что трудно объяснить, но можно предположить древнюю связь между изученными регионами старыми торговыми и миграционными путями.</p>
<h2><strong>ВЫВОДЫ</strong></h2>
<p>Проведенные нами исследования позволили осуществить молекулярно-генетический анализ особенностей строения геномов аборигенных и интродуцированных сортов винограда с использованием маркеров, основанных на присутствии ретротранспозонных последовательностей в ядерном геноме.</p>
<p>Впервые было выполнено изучение аборигенных, интродуцированных<br />
и подвойных сортов винограда, содержащихся в Анапской зональной ампелографической коллекции Российской Федерации с использованием маркеров, основанных на ретротранспозонных последовательностях, мобильных ДНК элементов.</p>
<p>Результаты выполненной работы представлены в виде гелей, отражающих разделение продуктов амплификации ДНК изученных сортов и использованных в работе молекулярных маркеров, а также в виде рисунков, отражающих филогенетические взаимоотношения между изученными генотипами.</p>
<p>Впервые было проведено изучение филогенетических связей между исследуемыми редкими образцами ампелографической коллекции, были проведены анализ главных компонент и кластеризация изученных генотипов внутри сравниваемых популяций.</p>
<p>Для групп изученных сортов были проведены анализы частот встречаемости аллелей в популяциях, анализ молекулярно-генетического разнообразия, рассчитаны генетические расстояния как между генотипами, так и между популяциями, в целом, а также проведен анализ главных компонентов.</p>
<p>Нами было установлено для каждой из групп по отдельности общее количество амплифицированных ДНК бендов, количество и процентное соотношение полиморфных полос, общая и частная статистика по использованным в исследовании праймерам.</p>
<p>В результате работы были подтверждены предполагаемые взаимоотношения между исследованными генотипами. В частности, как и предполагалось, было подтверждено близкое родство таких генотипов как Яй изюм розовый и Яй изюм белый, Агадаи и Гок изюм, Richter 110 и 420A, Kober 5BB<br />
и Paulsen 1045, Будай шули и Гок ала и др., что говорит об их несомненном родстве. Также, было выявлено, что группа аборигенных сортов кластеризовалась вместе, в то время как, например, сорта интродуценты были помещены программой MEGA X в процессе кластеризации отдельно.</p>
<p>В результате работы нами были выявлены также и неожиданные связи между образцами. В частности, нами была выявлена связь между такими сортами как Сибирьковый и Кульджинский, которая подтвердилась как и по результатам анализа с использованием ретротранспозонов, так и с использованием микросателлитных маркеров. Также, интересным было то, что Султанина розовая и Султанина не располагались рядом, хотя и входили в один кластер.</p>
<p>Помимо этого, нами было проанализировано генетическое разнообразие клонов известных сортов, таких как Антоний Великий, Аркадия розовая, Долгожданный, Гелиос, Ливия и Анюта. При этом было выявлено, что у данных сортов имеется полиморфность полос ДНК, полученных с использованием ретротранспозонных маркеров, что, собственно, не является в данном случае необычным, в виду того, что использованные нами маркеры являются высоко полиморфными.</p>
<h2><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/07/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2020-Тема-1-Источники.docx">Список использованных источников</a></h2>
]]></content:encoded>
					
					<wfw:commentRss>https://apknet.ru/genotipirovanie-perspektivnyx-aborigennyx-i-introducirovannyx-sortov-rossijskoj-federacii-s-ispolzovaniem-ipbs-markerov-dlya-selekcii-novyx-otechestvennyx-adaptivnyx-gibridov/feed/</wfw:commentRss>
			<slash:comments>0</slash:comments>
		
		
			</item>
		<item>
		<title>Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства</title>
		<link>https://apknet.ru/targetnogo-sekvenirovaniya/</link>
					<comments>https://apknet.ru/targetnogo-sekvenirovaniya/#respond</comments>
		
		<dc:creator><![CDATA[Leonid]]></dc:creator>
		<pubDate>Tue, 01 Jun 2021 10:03:25 +0000</pubDate>
				<category><![CDATA[Животноводство]]></category>
		<category><![CDATA[Механизация и электрификация сельского хозяйства]]></category>
		<category><![CDATA[ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ]]></category>
		<guid isPermaLink="false">https://apknet.ru/?p=11716</guid>

					<description><![CDATA[Целью работы было создание рекомендации для внедрения в хозяйствах края разработок по проведению генетического анализа поголовья на современном уровне в соответствии с рекомендациями Международного общества по изучению генетики животных (ISAG)]]></description>
										<content:encoded><![CDATA[<h2><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-Титульник-и-исплн-Тема-1.docx">Титульный лист и исполнители</a></h2>
<p><strong>РЕФЕРАТ</strong></p>
<p>Отчет 143 с., 5 табл., 26 рис., 104 источника литературы.</p>
<p>СКОТОВОДСТВО, СТРУКТУРА ГЕНОФОНДА, МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕ­НЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ, МУТАЦИИ, МАРКЕР, ГЕН, ИДЕНТИФИКАЦИЯ, ГЕНОТИПИРОВАНИЕ, АЛЛЕЛИ, СЕЛЕКЦИЯ, ОДНОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПОЛИМОРФИЗМЫ (SNP), ДОСТОВЕРНОСТЬ ПРОИСХОЖДЕНИЯ, НАСЛЕДУЕМЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ, ПРОДУКТИВНОСТЬ, ЛАКТАЦИЯ, ПЛОДОВИТОСТЬ, ВОСПРОИЗВОДСТВО, ПАНЕЛЬ TRUSEQ BOVINE PARENTAGE SEQUENCING PANEL ILLUMINA (США), БИОИНФОРМАЦИОННЫЙ АНАЛИЗ, ПРОГРАММНЫЙ ПРОДУКТ, ИНТЕРФЕЙС, ПРЕДСТАВЛЕНИЕ,<br />
2D-ДИАГРАММА («КОВЁР»), ИНФОРМАЦИОННЫЕ СИСТЕМЫ</p>
<p>Целью работы было создание рекомендации для внедрения в хозяйствах края разработок по проведению генетического анализа поголовья на современном уровне в соответствии с рекомендациями Международного общества по изучению генетики животных (ISAG), в том числе для создания устойчивого селекционного ядра; проведение анализа статистически достоверной группы животных молочного направления продуктивности суммарным количеством до 300 гол., а также анализа используемых в хозяйстве лидере отросли генотипов спермодоз, используемых для получения потомства; использовать для анализа результаты таргетного секвенирования с использованием панели TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel фирмы Illumina (США);разработка программного продукта, результатом применения которого будет выстраивание ранжированного списка наиболее предпочтительных быков-производителей, относительно индивидуальных генетических характеристик матери;применить данный программный продукт в тестовом режиме в хозяйстве-лидере отросли для максимально эффективного индивидуального подбора отца-производителя.</p>
<p>За отчетный период методом таргетного секвенирования с использованием панели TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel Illumina (США) проведено генотипирование модельных групп КРС (условно низкопродуктивной, высокопродуктивной) и группы телок в возрасте 4,5 мес с неисследованным уровнем продуктивности до начала первой лактации. Исследовано в общей сложности 300 гол. КРС голштинской породы. Для каждого животного определено значение более 250-ти однонуклеотидных замен (SNP), отвечающих за достоверность происхождения и родства, а также за проявление генетическинаследуемых заболеваний и факторов продуктивности.</p>
<p>В соответствии с техническим заданием разработаны две компьютерные программы (продукта). Программные продукты полностью работоспособны<br />
и протестированы на реальных экспериментальных базах данных. Программа «Just Append Cows» предназначена для обработки файлов первичных данных секвенирования на приборе MiSeq (Illumina) и формирования индивидуальных генетических паспортов каждого исследованного животного. Программа «Covers» позволяет на основе первичных данных секвенирования сформировать цветную 2D-диаграмму, позволяющую оперативно оценить генетические характеристики и аллельную структуру модельных групп КРС и стада в целом. Описываемая программа дает возможность также вызвать интерактивные окна с описанием соответствующих болезней или факторов продуктивности.</p>
<p>Кроме того, данный тип графического представления данных секвенирования КРС с использованием панели TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel Illumina (США) предложен нами впервые и не имеет российских и зарубежных аналогов.</p>
<p>За отчетный период все исследованные в рамках проекта животные паспортизированы в полном объеме и построены 2D-диаграммы, графически отражающие аллельные профили всего стада КРС. Использование обеих программных продуктов позволяет произвести индивидуальный подбор спермодоз при искусственном осеменении с учетом более 250-ти SNP и дать рекомендации на основе комплексных генетических исследований поголовья для обоснованного формирования устойчивого племенного ядра хозяйства.</p>
<h2><strong>ВВЕДЕНИЕ</strong></h2>
<p>Таргетное секвенирование, лежащее в основе конкретной технической реализации, примененной нами, дает возможность остановить внимание на конкретных участках (областях) генома или отдельных генов. Этот метод применяется в том случае, когда у изучаемого животного подозревается наличие какого-либо генетического заболевания, для которого известны гены или конкретные мутации, а также с целью генетической паспортизации конкретных животных и установления представленности различных аллелей в определенном стаде или группе животных. Аналогично, путем сложных вычислений и статистического анализа полностью секвенированных геномов, проводится поиск однонуклеотидных полиморфизмов (Single nucleotide polymorphism, SNP), не связанных непосредственно с проявлением в фенотипе, но используемых для доказательства достоверности происхождения/родства.</p>
<p>В случае таргетного секвенирования нет необходимости исследовать все гены, достаточно установить структуру только одного гена или некоторых его участков, так называемых горячих точек, где наличие мутации наиболее вероятно. Как правило, для достижения большинства текущих задач современного товарного животноводства необходимо ответить на ограниченное число вопросов, наиболее честно возникающих у специалистов хозяйств, специализирующихся на производстве молока или мяса. К этим вопросам, прежде всего, относится степень гетерозиготности/гомозиготности стада (близость родства, которая может привести к увеличению представленности генетических отклонений и уродств), наличие генетически наследуемых заболеваний или генов, повышающих предрасположенность к болезням, наличие вариантов генов, отвечающих за экономически значимые признаки.Причем в этом случае исследуемые варианты аллелей, как правило, не связаны с развитием патологического состояния, являются вариантами нормы, просто те или иные замены в кодируемых такими генами белках, являются более предпочтительными у пород мясного направления селекции, а другие варианты генов более предпочтительны для коров молочного направления селекции.</p>
<p>Из имеющихся на рынке коммерчески доступных решений для осуществления таргетного секвенирования КРС в практических целях наиболее применима, по нашему мнению, панель TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel (Illumina, США).</p>
<p>Вместе с тем, выбором платформы для исследования признаков и нахождения конкретных SNP, позволяющих доказать степень родства, достоверность происхождения, наличие или отсутствие генетических заболеваний, а также установить тип аллелей, отвечающих за реализацию экономически значимых признаков не ограничиваются запросы хозяйств. Необходимо также разработать программные продукты, которые с одной стороны позволили бы оперативно получить генетический паспорт животного с перечислением всех установленных SNP, с другой представить полученный массив экспериментальных данных в виде понятном специалисту хозяйства, визуализированном до степени возможности наглядного и интуитивно понятного использования. Такую задачу решает разработанный нами программный продукт, позволяющий генерировать цветовые 2D-диаграммы, визуализирующий распределение гомозигот по алель­ным и доменантным признакам, а также гетерозигот в исследуемом стаде<br />
с произвольным количеством голов. Это позволяет специалисту с первого взгляда оценить степень присутствия нежелательных или, наоборот, желательных генетических вариантов и вести мероприятия по осеменению, опираясь на эти данные. Так, сопоставление графических профилей генотипов животных, отраженных в 2D-диаграмме группы телок с графическим представлением по генотипам отдельных образцов спермодоз, позволяет подобрать оптимальное сочетание аллелей предков и исключить или свести к минимуму вероятность закрепления в ядре стада наследственных заболеваний. Этот подход не является чем-то абсолютно новым, более того, в последние годы подобного рода услуги активно рекламируются для человека. Этичность такого «генетически детерминированного» подбора пар в случае людей спорна, однако в ветеринарии она становится, и станет в ближайшем будущем «золотым стандартом». Наша работа, выполненная в продолжении годичного периода, всего лишь позволяет оптимизировать и автоматизировать анализ первичных данных секвенирорвания<br />
с использованием панели TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel, а разработанные программные продукты предназначены для генерации генетических паспортов животных единого образца (содержащих информацию о 265 отдельных SNP) и визуализации данных при помощи построения цветовых 2D-диа­грамм, которые могут быть использованы, в том числе и для быстрого подбора оптимальной спермодозы при искусственном осемениеии/оплодотвуорении.</p>
<h2><a id="post-11716-__DdeLink__21545_2859748360"></a><strong>1 ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ</strong></h2>
<h3><strong>1.1 Генетические особенности высокопродуктивного крупного рогатого скота</strong></h3>
<p>Главными элементами интенсификации в скотоводстве являются полноценное кормление животных, качественное преобразование стад и пород путем проведения систематической селекционно-племенной работы (Дунин И. М., Амерханов Х. А., 2017; Иванова И. П. [и др.], 2018).</p>
<p>Целенаправленная селекционная работа в молочном скотоводстве повлияла на усиление процессов интенсификации отрасли (Чинаров В. И., 2019).</p>
<p>В связи с продолжающимся сокращением численности коров встал вопрос<br />
о выборе пород для интенсивного разведения, обеспечивающих высокую эффективность производства продукции, при сохранении способности к расширенному воспроизводству (Чинаров В. И., 2019). В условиях интенсивного молочного скотоводства особое значение приобретает получение и племенное использование высокопродуктивных животных, характеризующих потенциальные возможности и качества породы: генетические, хозяйственно-полезные, биологические, племенные (Татаркина Н. И., 2017).</p>
<p>В Российской Федерации, в общей численности крупного рогатого скота, ведущее положение занимают 3 породы: черно-пестрая – 54 %; голштинская –<br />
14 %, айрширская – 3 %. Племенное поголовье коров всех пород составляет<br />
15,1 % в их общем поголовье (Шеметюк С. А. [и др.], 2019).</p>
<p>В Краснодарском крае, в общей численности племенного крупного рогатого скота, ведущее положение занимают 3 породы: голштинская – 74,7 %, айрширская – 13,6 %; красная степная – 5,5 %. Племенное поголовье коров составляет 11,5 % от общего племенного поголовья голштинской породы в стране. При этом в племзаводе АО фирма «Агрокомплекс» им. Н.И. Ткачева – 66,3 %; ПАО «Родина» Каневского района и АОА «Агрокомплекс «Павловский» Павловского района соответственно по 9,2–9,4 %, разводится основная часть высокопродуктивного поголовья. Продуктивность дойного поголовья голштинской породы по краю превышает общероссийский показательна 4,3% и составляет 8944 кг.</p>
<p>Племенные хозяйства служат основой высокопродуктивного животноводства, главная задача которого заключается в производстве наибольшего количества продукции (молока, мяса и др.) высокого качества при наименьших затратах труда и средств (Щербакова Н. А. [и др.], 2020).</p>
<p>Увеличение в структуре поголовья доли высокопродуктивных молочных пород привело, с одной стороны, к резкому наращиванию продуктивности, а с другой – к снижению экономической эффективности ведения отрасли и, как следствие, к ее стагнации. В связи с этим изучение их племенных качеств и хозяйственно-полезных признаков является актуальным (Чинаров В. И., 2019).</p>
<p>За последние десятилетия во многих странах (в том числе Республике Беларусь), при значительно увеличении продуктивности коров, сократился срок продуктивного использования коров до 2,5–2,8 лактации, что недостаточно для полной реализации генетического потенциала животных, который раскрывается только на 5–6-й лактации (Казаровец Н. В. [и др.], 2019).</p>
<p>Высокопродуктивные коровы имеют большое значение в совершенствовании породы, поэтому изучение их молочной продуктивности с дочерями в конкретном стаде позволяет повысить результативность селекционно-племенной работы (Холодова Л. В. [и др.], 2019). Это высказывание поддерживается и другими учеными, считающим, что для эффективного управления селекционным процессом необходима полная, качественная и надежная информация, как об отдельном животном, так и о породе в целом. (Абугалиев С., Шамшидин А., 2012).</p>
<p>О высокой ценности животных, говорит тот факт, что на выставке «Звезды Подмосковья» в 2018 г., телка по кличке Майна-М была продана за 120 тыс. руб. финальная цена в полтора раза превысила стартовую. Это результат целенаправленной селекции в ОАО «Московское» по племенной работе»: отец телки знаменитый бык-производитель «улучшатель удоя», компонентов молока, экстерьера потомства, носителя бета казеина А2А2.</p>
<p>В Московской области по итогам 2018 года лучшей коровой (инвентарный номер 13078577) признано животное с продуктивностью за 305 дней по второй лактации – 16085 кг молока, содержание жира – 3,73 %, белка –<br />
3,28 % (Жаров И. Н. [и др.], 2018).</p>
<p>ВНИИ племенного дела в «Базу данных по национальному генофонду сельскохозяйственных животных – племенного КРС молочного направления продуктивности» за 2019 г. по Краснодарскому краю внесло корову-рекордистку голштинской породы с инвентарным номером 13142, принадлежащую племзаводу «Родина» Каневского района с показателями продуктивности за 305 дней лактации – 16130 кг молока, производства жира молока – 634 кг, производство молочного белка – 490 кг.</p>
<p>После проведения экспертной оценки поголовья, представляемого на ведущей российской выставке племенных животных ученые: И. Н. Янчуков,<br />
А. И. Ермилов, А. А. Ермилов (2018) отмечают, что в условиях Российской Федерации у разводимого скота необходимо на перспективу улучшать все показатели молочной продуктивности и тип телосложения. С таким мнением согласен В. П. Кононов (2013), отмечающий, что особенностью голштинской породы является сформированная, в процессе селекции, ярко выраженная лактационная функция, которая обуславливается изменениями в интенсивности обмена веществ. Как показал опыт изучения голштинизации в Краснодарском крае, процесс поглощение ведущей мировой породой не всегда в лучшую сторону, меняет биологические и хозяйственно-полезные признаки скота относительно материнской породы (Кузнецов А. В., 2019).</p>
<p>При этом основная задача, стоящая при отборе нужных генотипов – это оценка племенной ценности животных, способствующая повышению генетического потенциала продуктивных показателей у последующего поколения (Сатыгул С. Ш. [и др.], 2009; Шамшидин А. С. [и др.], 2017).</p>
<p>Изучение в 2016-2017 г. взаимосвязей между уровнем продуктивности и выживаемости маточного поголовья выявило антагонизм между этими показателями, который возник по двум основным причинам: односторонняя селекция на продуктивность, и нарушения в кормления (отсутствие мульти факториальных систем питания, адекватного функциональным возможностям организма в конкретной технологической среде). Ряд авторов сходятся во мнении, что снижение продолжительности хозяйственного использования животных с высокой долей кровности по голштинской породе связано с несоответствием потребностей животных, с уровнем кормления и недостаточным контролем за состоянием стада. (Новак И. В., 2016).</p>
<p>Сегодня широкомасштабное поглощение местных пород коммерческими,<br />
в том числе голштинской, продолжается. При этом помесные популяции сохраняют местные названия в то время как генетическими они таковыми уже не являются. Зарубежные ученые считают, смесь европейского и восточно-азиатского крупного рогатого скота является уникальной по сравнению с другими североамериканскими породами (Decker J. E., Taylor J. F, Kantanen J., Millbrooke A., 2016).</p>
<p>Теоретический анализ выживаемости с использованием функции Гомпертца данных коров выявил положительную взаимосвязь между средней длительностью хозяйственного использования и величиной, обратной интенсивности выбытия за первую лактацию. Установлено, что динамика надоев за 305-дн. лактации, в ряду последовательных лактаций детерминирована сочетанием значений двух параметров: потенциала продуктивности (тыс. кг) и потенциала жизнеспособности (относительная величина, отражающая темп возрастного снижения степени реализации потенциала продуктивности) (Черепанов Г. Г. [и др.], 2017).</p>
<p>В хозяйствах Уральского региона анализ сокращения сроков хозяйственного использования коров показал, что животные выбывали в основном по причинам заболевания конечностей (27,5 %), вымени (13,6 %) и патологии воспроизводительной системы (17,3 %). Также большое количество коров выбраковывается из-за низкой продуктивности (Лоретц О. Г., 2014).</p>
<p>В связи с этим А. В. Кузнецов (2019) эффективность коровы за оцениваемую лактацию предлагает рассчитывать по формуле 1:</p>
<p>эффективность коровы за 305 дн. лактации = [(выход молочного жира за 305 дн, кг + выход молочного белка за 305 дн, кг) / живая масса, кг] × 1000 ……(1)</p>
<p>Исследованиями коров с продуктивностью более 8000 кг молока за лактацию племзавода «ФГУП ПЗ» Учхоз ГАУСЗ», было доказано, что продуктивность коров-рекордисток по второй лактации более высокая, чем от полновозрастных коров. С экономической точки зрения повышение продуктивности коров до<br />
8,9 тыс. кг увеличивает уровень рентабельности, только при полноценном сбалансированном кормлении высокопродуктивных коров (Татаркина Н. И., 2017).</p>
<p>Отбором, проведенным на высокопродуктивных коров-первотелок уральского типа, в Свердловской области, была выделена группа с продуктивностью 10747 кг молока, с жирномолочностью 3,80 %, содержанием белка 3,25 %. В результате исследований данной группы установлено, что с увеличением молочной продуктивности коров от 10433 до 13356 кг молока, жирномолочность первотелок достоверно снижается от 3,81 до 3,77 %, соответственно белковомолочность повышается от 3,25 до 3,37 %. Анализ конституциональных особенностей коров-первотелок группы доказывает, что с увеличением молочности животных, пропорционально улучшаются значения промеров статей экстерьера исследуемого поголовья (Лешонок О. И., 2018).</p>
<p>При создании семейств в племенном заводе «Орошаемое» Нижневолжского региона было установлено что возможно создать такие группы животных, но они отличаются или высокой молочностью коров потомков от 7,5–<br />
8,5 тыс. кг молока, или высокой массовой долей жира молока 3,6–3,92 % (Коханов М. А., Коханов А. П., 2014).</p>
<p>По убеждению В. С. Матюкова, Я. А. Жарикова, Н.А Зиновьевьевой (2018) голштинскую породу в течение более двух столетий интенсивно и целенаправленно отбирали по молочной продуктивности в условиях стабильного и достаточного сбалансированного кормления. Отсюда ее более крупные размеры, специфический эндокринный статус, бедность мускулатуры, нежность костяка, и др. благодаря которым голштинская корова способна на единицу массы потребить большое количество корма и превратить его в питательные вещества в молоко.</p>
<p>В условиях Западной Сибири, при формировании селекционной группы коров рекомендовано отбирать животных, крепкого телосложения, при отсутствии пороков, с молочной продуктивностью, превышающей среднее по стаду: по удою – на 27 %, массовой доле жира и белка – на 0,08 и 0,03 % соответственно. Наличие достаточного количества маточного поголовья в селекционной группе необходимо для получения и выращивания ценного племенного материала, так как обуславливает увеличение уровня продуктивности в последующих поколениях (ИвановаИ. П., ТроценкоИ. В., БорисенкоС. В., 2018).</p>
<p>Учитывая уникальную высокую продуктивность молочного стада проблема получения высокопродуктивных коров интересует в настоящее время широкий круг специалистов – биологов, генетиков, зоотехников-селекционеров. Общеизвестно, что при современной, особенно крупномасштабной селекции, эффект на 80–90 % зависит от быков-производителей (Стрекозов Н. И. [и др.], 2012).</p>
<p>В работах Уральских ученых отмечается, что интенсивность отбора и скоростью ремонта стада, рост продуктивности у дочерей, напрямую связан с показателем продуктивного долголетия коров. Для этого в селекционной работе желательно использовать быков-производителей, потомство которых отличается более высоким сроком продуктивной жизни и лучшими адаптационными качествами с параметром «продуктивное долголетие» (ЛоретцО. Г., 2014).</p>
<p>Понятие племенной ценности в мире не является универсальным. В разных странах в него вкладывают разный смысл, базирующийся на местных условиях, рынке и традициях. За различными селекционными индексами скрываются различные стратегии и цели разведения. Для повышения уровня продуктивности без потерь плодовитости и здоровья необходимо подходить к выбору производителей осмысленно и ответственно, уделяя серьезное внимание прямым показателям здоровья, воспроизводства и продуктивного долголетия, и в меньшей степени – выставочному экстерьеру. Селекция крупного рогатого скота на современных комплексах с инновационными технологиями доения (Тяпугин Е. А. [и др.], 2014).</p>
<p>Нужно вооружиться пониманием, как правильно пользоваться ключевым инструментом современной селекционно-племенной работы, и тогда рекламные каталоги с колонками «непонятных» цифр действительно окажут помощь в эффективном подборе быка, а красивые фотографии животных в них не станут единственным доводом в пользу приобретения дорого семени от производителя, не являющимся оптимальным выбором для российских условий производства.Достичь улучшения поголовья без потерь в функциональности &#8212; значит увеличить рентабельность производства, ведь производителю важно не «молоко любой ценой», а молоко обеспечивающее максимально возможную прибыль (Стрекозов Н. И. [и др.], 2012).</p>
<p>При подборе быков-производителей необходимо учитывать проявление полового диморфизма, так как наблюдается следующая закономерность, чем выше этот показатель, тем выше воспроизводительная способность спермы выше (6,5–14,2 %); интенсивность роста потомства (2–20 %) (Goncharenko I., Vinnichuk D., 2015).</p>
<p>В хозяйствах Ставропольского края широкое внедрение в систему воспроизводства сексированного семени быков голштинской породы, позволило увеличить количества рождаемых тёлочек от собственного высокопродуктивного маточного поголовья и дополнительно получить 889,9 тыс. руб. (Ковалева Г. П.[и др.], 2018).</p>
<p>Признание ведущей роли отца в генетическом совершенствовании стада не снижает значения отбора, так как его генотип реализуется в потомстве через подбор. Отбор является первоначальной фазой селекции, а подбор пар из числа отобранных маток и производителей с целью получения от них более высокопродуктивного потомства – вторым, завершающим этапом селекции (Лоскутов С. И. [и др.], 2015).</p>
<p>Многие понимают все сложности, связанные с изучением генетической природы, в том числек и за счет инбридинга, так как результаты его использования<br />
в практике животноводства обычно очень противоречивые. Однако И. Ю. Подречнева (2016) отмечает, что из 254 исследованных высокопродуктивных животных 26 % получены с применением инбридинга. В связи с этим, отмечает этот же автор, для получения коров с высокой молочной продуктивностью в повторный подбор необходимо назначать быков с высокой племенной ценностью.</p>
<p>Происхождение быков-производителей, занимающих в рейтинге TPI голштинской ассоциации Америки – лидирующее положение говорит о постоянном использовании кросса линий за рубежом. Использование этих быков ведет к значительному увеличению генетического потенциала, но при этом снижается генетическое разнообразие. Эффект гетерозиса проявляется не только<br />
в увеличении продуктивности, но и в более ярком выражении линейных признаков экстерьера коров первотелок (Крысова Е. В., 2018).</p>
<p>При изучении эффективности подбора родительских пар установлено, влияние отцов на признак белковомолочности в несколько раз превышает влияние матерей, так как 80% производителей увеличили удой, 60% – массовую долю жира и 71 % – долю белка. Дочери быков (100 %) превышают стандарты породы (2010 г.) по удою, массовой доле жира, и только 20 % соответствует требованиям по массовой доле белка (Прищеп Е. А.[и др.], 2019).</p>
<p>Эти же авторы рекомендуют проводить сравнение дочерей с показателями их матерей, при этом вести отбор за первую лактацию, и считают это наиболее эффективным.</p>
<p>В племзаводе «Пушкинское» от коров черно-пестрой породы с использованием быков голштинской канадской и местной селекции получено поголовье, с продуктивностью свыше 7,0 тыс. кг молока за лактацию, позволяющее выделить его как новый тип Нижегородского высокопродуктивного скота (Воробьева Н. В., Комиссарова Т. Н., Шишкин А. В., 2016).</p>
<p>Путем сравнения адаптивных способностей голштинского скота при интродукции в хозяйства предгорной зоны (ООО «Агроконцерн «Золотой колос», ООО «Союз-Агро») Кабардино-Балкарской Республики, было установлено что у коров отечественной и американской селекции, в сравнении с местной породой, наблюдался интенсивный фагоцитоз: у нетелей – 4,9–7,7 %, у первотелок – 2,6–3,8 %. Они превосходили по удою: за первую лактацию на 2227 кг, во вторую – на 2465 кг. Выход молочного жира и белка оказался выше в группах американского происхождения на 47,9–74,8 кг, количество молочного белка – на 41,0–63,3 кг. Все это свидетельствует о достаточно успешной акклиматизации голштинского скота отечественной и американской селекции в условиях республики (Улимбашев М. Б., Алагирова Ж. Т., 2016).</p>
<p>Таким образом, установлено, что проблема повышения эффективности молочного скотоводства приобрела большую актуальность в связи с негативной тенденцией по сокращению поголовья коров и объемов производства молока. Только изучение генотипа высокопродуктивных животных, характеристика их генетических, племенных качеств и нормы реакции на влияние условий среды, позволит формировать высокопродуктивное потомство (Баранова Н. С., Баранов А. В., ПодречневаИ. Ю., 2017).</p>
<p>Для этого все шире разрабатываются внедряются современные методы исследований молекулярно-биологических механизмов проявления генотипической информации, заложенной в животных.</p>
<h3><strong>1.2 Молекулярно-биологические маркеры в животноводстве</strong></h3>
<p>Генофонд крупного рогатого скота в Российской Федерации до 2005 г. исследовался в основном за счет использования ЕАВ-локуса групп крови в качестве генетического маркера. Как показывает динамика, сравнения с 1998 годом, произошло сокращение числа аллелей на 68 видов. При этом наблюдалась увеличение гомозиготности на 1 %, и сходство с голштинской породой до rm = 0,862. Наряду с повышением молочной продуктивности, до 9200 кг молока за стандартную лактацию, улучшением экстерьера и морфофункциональных свойств вымени коров<br />
в племенных заводах удалось сохранить признаки исходной черно-пестрой породы хозяйства, характеризующейся аллелями: B1G2KO4Y2E’3O’; B1G2KO4Y2; D’E’3F’2; B1G2KO4E’1G’J’1K’O’G’’; B2O1Y2O’; B2O1Y2P’2Q’; B1T1E, 3F’2; B2P2T1A; 1D’G’I’O’; B2T2A’1D’’; P1E’4, P1I’’; Q, Y1A’1Y’; B’E’3F’2G’; D’O’ (Попов Н. А., Марзанова Л. К., 2016).</p>
<p>Подобная тенденция, хотя и менее заметная прослеживается при изучении маркерных аллелей родоначальниц высокопродуктивных семейства. Выявлено, что высокая молочная продуктивность отмечена у коров, гомозиготных по аллелю ЕАВ-локуса B1O3Y2A2’E3’G’P’Q’Y’ и низкая – у гомозиготных по аллелю «b». Ряд ценных аллелей: B1I1T1A1’P’; E3’G”; G2О’; G2E3’F2’O’; О1<br />
и В2Р2Т2Р’, не имеет широкого распространения у коров заводских семейств. Для оптимизации системы подбора с использованием ЕАВ-локуса групп крови в качестве генетического маркера, предлагаются варианты АВ/ВВ, АВ/АВ, ВС/АА, АВ/СD и АВ/ВС (Баранова Н. С., Баранов А. В., Подречнева И. Ю., 2017).</p>
<p>Исследованиями установлено, что за три последних поколения у коров активной части популяции холмогорского скота, значительно изменилась генетическая структура ЕАВ-локуса. Стали реже встречаться типичные аллели: А’О’; Е2’G’G’; Q’E2Q и О2. Наиболее сильное влияние на изменение широты генетической изменчивости в маточных стадах оказывают используемые производители (Прожерин В. П., Ялуга В. Л., СельковаИ. В., Степанова Л. И.. 2018).</p>
<p>В. С. Матюков, Я. А. Жариков, Н.А. Зиновьева (2018) считают, что скрещивание с голштинами меняет межлокусные комбинации генов.</p>
<p>Ряд авторов отмечают, что данное обстоятельство весьма важно с позиции рационального использования генофонда. Для сохранения изменчивости крупного рогатого скота требуется построение собственной генетической и генеалогической структуры, обеспечение безопасности разведения отечественной популяции пород из-за распространения наследственных болезней, поддержание уровня индивидуальной и групповой гетерозиготности.</p>
<p>Сужение аллелофонда связано с поглотительным скрещиванием местного маточного поголовья с быками голштинской породы, и импортом быков-производителей, маток.</p>
<p>Широкое использование голштинского скота в Российской Федерации привело к повышению молочной продуктивности и улучшению технологических качеств молочного скота. Однако были выявлены определенные проблемы с состоянием здоровья и адаптацией импортных животных. Высокая молочная продуктивность неизбежно приводит к ослаблению иммунитета, фертильности, уменьшению способности противостоять стрессу. Восприимчивость высокопродуктивных коров ко многим заболеваниям в конечном итоге снижает продуктивность, плодовитость и срок хозяйственного использования.</p>
<p>Генетическое улучшение пород молочного направления продуктивности<br />
в значительной степени осуществляется за счет интенсивного использования глубокозамороженной спермы наиболее ценных быков-производителей.</p>
<p>Основную долю (68 %) в породной структуре стада быков молочного направления, принадлежащей АО «Головного центра по воспроизводству», составляют производители голштинской породы. По результатам генетической экспертизы на быков-производителей выдаются генетические паспорта с указанием аттестации на десятки моногенных заболеваний, летальных гаплотипов<br />
и носительство генов, отвечающих за хозяйственно-полезные признаки (ШеметюкС. А., Турбина И. С., Гуськова И. С., Комбарова Н. А., 2019).</p>
<p>По сообщениям сотрудников отдела молекулярной биологии Испытательного центра ФГБУ «ВГНКИ» в условиях оптимизированного ПЦР, электрофоретической детекции и пиросеквенирования коротких фрагментов генома (в областях значимых мутаций), были изучены образцы животных различных пород. Установлено что в голштинской породе в 6 % случаев обнаружена мутация дефицита холестерина (HCD), 3 % – мутация комплексного порока позвоночника (CVM); в 1 % – мутации дефицита XI фактора свертываемости крови (FXID)<br />
и брахиспинального синдрома (BY); 0,8 % – дефицита адгезии лейкоцитов (BLAD) (Сайфиев А. А., 2018).</p>
<p>Отделом молекулярной биологии разработаны методические рекомендации по молекулярно-генетической идентификации мутаций, в которых предлагается исследовать 18 различных мутаций. Ведется разработка методик для выявления наследственных патологий, в том числе арахномелии (A), тромбопатии (TP), субфертильности быков (BMS) и врожденного дефицита цинка (ZDL) (ВГНКИ, 2019).</p>
<p>Кроме вышеперечисленных показателей предлагается тестирование на носительство мутаций, ассоциированных с субфертильностью быков (BMS), тромбопатией (TP), дефицит-цинка-подобным синдромом (ZDL), арахномелией (A) (DairyNews.ru, 2019).</p>
<p>Эпигенетические исследования становятся все более значимыми для понимания механизмов наследования, так как изучает наследуемые изменения экспрессии (активности) генов, а не модификации самого генетического кода (Magee D.A. [и др.], 2010).</p>
<p>В качестве генетических маркеров нашли применение различные микросателлитные ДНК. Их число у различных видов достигает сотен. Интерес к использованию сателлитной ДНК для маркирования хромосом связан с тем, что ее выделение и идентификация более просты в сравнении с выделением и идентификацией ДНК структурных генов, при этом для отдельных классов сателлитов характерны как их хромосомная специфичность, так и специфичность локализации на хромосоме. В силу высокого полиморфизма они могут быть использованы наряду с группами крови в системах идентификации происхождения животных (МаринченкоТ. Е., КорольковаА. П., ГорячеваА. В., 2019).</p>
<h3><strong>1.3 Генофонд популяции с использованием однонуклеотидного полиморфизма (SNP)</strong></h3>
<p>В Соединенных Штатах Америки и подобным образом в ряде других стран, установили стандартные системы для ДНК-профилирования последовательностей повторов, тем самым скомбинирован с получением единой системы индексации ДНК (CODIS), которая служит в качестве лабораторного стандарта для ДНК-профилирования (Стефенс К. М. [и др.], 2019).</p>
<p>В настоящее время создание собственных наборов SNP (Single Nucleotide Polymorphism), основанных и установленных для отечественной популяции соотношений между фенотипами и генотипом, позволят повысить точность прогнозов по признакам (Федоренко В. Ф. [и др.], 2018).</p>
<p>Высокая достоверность и специфичность ДНК анализа может быть достигнута при использовании любых видов биологического материала: кровь, слюна, волосы, сперма, образцы мягких тканей. Для анализа микросателлитов требуется очень малое количество крови и какой-либо ткани организма, поэтому возможно прижизненное взятие образцов. Микросателлиты одинаковы<br />
у близких видов,что позволяет использовать одни и те же праймеры и сходные протоколы анализа.</p>
<p>В настоящее время микросателлитные ДНК-маркерные системы находят применение при решении различных фундаментальных и прикладных задач сельскохозяйственной биологии и биотехнологии таких как геномное картирование, характеристика генетической структуры популяции и степени инбредности, оценка генетических расстояний между линиями, породами и популяциями, филогенетические исследования, контроль происхождения (ЭрнстЛ. К., ЗиновьеваН. А., 2008; Guichoux E. [и др.], 2011).</p>
<p>Таким образом, технология ДНК-анализа микросателлитов становится незаменимым инструментом для решения задач селекции и целенаправленного повышения продуктивных качеств выращиваемых животных и является «золотым» стандартом современной-молекулярно-генетической идентификации животных, рекомендованным Международным обществом по изучению генетики животных (ISAG) .</p>
<p>Первым шагом геномной селекции является установление взаимосвязей между отдельными SNP (однонуклеотидными заменами) или гаплотипам и фенотипом. Для этого создается референтная популяция животных (и коров и быков). Далее на основании данных референтной популяции рассчитывается относительная племенная ценность по конкретным признакам для любого животного. Теоретически эта методика позволяет среди большого количества молодых животных отобрать лучших и оставить их для получения следующей генерации племенного скота. Точность такого прогноза составляет по большинству признаков 65–67 % (ChenZh.[etal.], 2013; Федоренко В. Ф. [и др.], 2018).</p>
<p>Для ее проведения используются три перспективных, для практической селекции, подхода: GAS-селекция, MAS-селекция, GS-селекция. Когда в качестве маркеров используют SNP, селекция носит название GS (genomic selection) (СмарагдовМ. Г., 2009).</p>
<p>В рамках GS-селекции определяют генотип, считая, что каждый маркер &#8212; это QTL (quantitative trait loci) и вычисляют влияние всех маркеров одновременно по их вкладу в генетическую составляющую.</p>
<p>Широко используемая технология анализа микро- и мини-сателлитов ДНК, позволяет получить данные о генетическом расстоянии между отдельными популяциями крупного рогатого скота, уровне гетерозиготности, определять достоверность происхождения на уровне 100 % надежности и регистрировать истинную кровность (или уровень инбридинга) не по теоретическим расчетам, используя данные о происхождении, а по содержанию генетического материала того или иного предка.</p>
<p>Использование ДНК-технологий позволяет значительно повысить эффективность селекционно-племенной работы по генетически обусловленным качественным характеристикам молока для производства специализированных видов продукции, сокращая расходы и время для достижения целей. Выявление предпочтительных вариантов генов позволяет проводить селекцию по генотипу.</p>
<p>Применяемым сегодня способом диагностики гаплотипов фертильности HH1, HH2, HH3, HH4, HH5 является использование кастомных (смоделированных пользователем) биочипов, используемых для полногеномного сканирования SNP. Проведение ДНК-диагностики данным способом требует наличия дорогостоящего оборудования и, кроме того, сопряжено с высокой стоимостью биочипов. Если для проведения комплексной ДНК-диагностики (геномная оценка + исследование на наличие нескольких генетических аномалий) такой способ является экономически оправданным, то для массового скрининга гаплотипов в популяциях крупного рогатого скота необходима разработка простых, относительно дешевых тест-систем, не требующих использования дорогостоящего оборудования. Их применение позволит определять статус животных на носительство наследственных аномалий, дать характеристику их распространения в российских популяциях голштинского и голштинизированного скота и разработать программы, направленные на элиминацию генетических дефектов в популяциях племенных животных (РоманенковаО. С., 2016).</p>
<p>С расшифровкой последовательности полного генома крупного рогатого скота стало возможным прослеживать историю происхождения пород и оценивать генетические связи между современными породами, основываясь на результатах полногеномного скрининга SNP-маркеров.</p>
<p>Были проведены исследования коммерческих и локальных пород в Европе, Северной Америке, Азии и Африке на полногеномном уровне. Однако генетические различия, связи и популяционно-генетическая структура российских пород скота остаются малоизученными. Исследование генетического разнообразия и популяционной структуры пяти российских пород скота на основании полногеномного полиморфизма единичных нуклеотидов (SNP), полученного<br />
с использованием Illumina Bovine SNP50 BeadChip («Illumina Inc.», США) являются наиболее перспективными (Зиновьева Н. А., Донцев А. В., Сермягин А. А., ВиммерсК., РейдерХ., СолкнерзЙ., ДенисковаТ.Е., БремГ., 2016).</p>
<h3><strong>1.4 Полиморфизм сочетания аллелей в генах и их воздействие на продуктивность</strong></h3>
<p>Генетический полиморфизм – это состояние, при котором наблюдается длительное разнообразие генов, но при этом частота наиболее редко встречающегося гена в популяции больше одного процента. Поддержание его происходит за счет постоянной мутации генов, а также их постоянной рекомбинации. Согласно исследованиям, которые провели ученые, генетический полиморфизм получил широкое распространение, так как комбинаций гена может быть несколько миллионов (Сатыгул С. Ш. [и др.], 2009; Hirano T. [и др.], 2012; Zhang Y.[et al.], 2015; Лихоман А. В. [и др.], 2016).</p>
<p>Исследование полиморфизма, частот распространения отдельных вариантов белков, их сочетаемости в генотипах, в популяциях, влияния разных условий среды содержания животных на разные генотипы по полиморфным белкам, открывает новые перспективы в области понимания целого ряда теоретических и практических проблем генетики сельскохозяйственных животных, и роли экологических условий в формировании генофонда видов (Kataria R.S. [и др.], 2011; КадиевА. К., 2013).</p>
<p>В настоящее время в селекционно работе с высокопродуктивным молочным скотом главное внимание уделяется признакам продуктивности, тогда как вопросы сопротивляемости организма неблагоприятным факторам внешней среды и их влияние на продуктивность остаются малоизученными.</p>
<p>Частым явлением в высокопродуктивных стадах стало увеличение сервис-периода за счет ранней эмбриональной смертности. Одной из причин этого являются генетические нарушения. В настоящее время у разных пород крупного рогатого скота обнаружены мутации и гаплотипы, связанные с гибелью эмбриона. Сбои эмбрионального развития могут возникать на любом сроке гестации, в зависимости от конкретной мутации. На практике это проявляется именно<br />
с увеличением сервис-периода и нерегулярными циклами с большими перерывами между осеменениями у коров. Для уменьшения риска рождения потомства<br />
с генетическими заболеваниями, а также снижения эмбриональной смертности необходимо контролировать наличие быков – носителей в популяции (Ескин Г. В., ТурбинаИ. С., ГуськоваС. В., 2018).</p>
<p>Низкие продолжительность жизни и пожизненная плодовитость голштинской породы не позволяют вести расширенное воспроизводство стада за счет собственного ремонта и массовый отбор по матерям, поскольку для ремонта стада в племенное ядро необходимо выделить все наличное маточное поголовье.</p>
<p>Фактическая работа по выявлению носителей мутаций и их удалению из популяции проводится только в отношении быков-производителей на отечественных предприятиях по искусственному осеменению, исключительно силами самих станций (Федоренко В. Ф. [и др.], 2018).</p>
<p>В настоящее время рост генетического потенциала поголовья крупного рогатого скота, в большинстве хозяйств России, обеспечивается путем разработки индивидуальных планов подборки пар быков к маточному поголовью (Сакса И., 2018).</p>
<p>По данным ленинградских ученых, при совершенствовании стад с удоем 8000-12000 кг молока в год на одну корову, наилучшие результаты, получены от производителей, имеющих высокую геномную оценку.</p>
<p>В исследовании маточного поголовья голштинской породы в Белгородской области установлено, что молоко коров генотипов ВВ и АВ по κ-казеину имело лучшие показатели сыропригодности в сравнении с молоком от гомозиготных носительниц А-аллеля κ-казеина: выход сырного зерна был выше на 13–17 %.<br />
В популяции высокопродуктивного маточного поголовья установлена низкая (8,5 %) доля животных гомозиготных по аллелю В гена κ-казеина при высокой доле гетерозигот (44,7 %) и гомозигот АА (46,9 %). При генотипировании быков (n = 84) выявлено, что гомозиготными по желательным аллелям κ-казеина было 7,1 % животных, по β-казеину – 22,6 %. Дефицит отечественных быков голштинской породы по желательным генотипам на сегодняшний день может быть компенсирован импортом спермы быков из стран, в которых селекция проводится не только по β- и κ-казеинам, но и в целом по сыропригодности. Высокая доля (38,8 %) гомозиготных коров по аллелю А2 при наличии значительного по численности поголовья позволяет сформировать из них специализированное стадо для производства «гипоаллергенного» молока. Значительная доля гетерозиготных генотипов по κ-казеину дает возможность создавать группы коров с аллелем В гена κ-казеина по результатам генотипирования и получать «улучшенное» молоко для сыроделия (ПогребнякВ. А., КолбасА. В., МорковкинаН. А., 2019).</p>
<p>Мониторинг по генам молочных белков в селекционной группе голштинизированной холмогорской породы скота архангельской популяции показал изменения генетической структуры по пяти генам молочных белков и гормонов (CSN3, LGB, PRL, GH, LEP), и лептина (SNP:R25C, Y7F, A80V) напрямую связанных с показателями молочной продуктивности.Отмечается, что выявление предпочтительных с точки зрения селекции вариантов вышеуказанных генов, дополнительно к традиционному отбору животных, может быть направлено на разработку новой системы отбора и подбора животных на генетическом уровне, с планированием получения через заказное спаривание быков следующей генерации с заданными генотипами (Багаль И. Е., 2018; Кононова Л. В., Шарко Г. Н., МачульскаяЕ. В., 2018).</p>
<p>Генетические маркеры, позволяющие животному показывать высокую продуктивность в одних условиях, могут не соответствовать маркерам, работающим в других. В настоящий момент точность прогноза племенной ценности по большинству признаков составляет 72%. Это значит, что дочери конкретного быка превзойдут дочерей других быков с вероятностью 72%. Кроме того, существует определенный риск отбраковки быков с выдающимися генетическими характеристиками как «неперспективных». Подобные случаи нередки<br />
в мировой практике (Маринченко Т. Е., Королькова А. П., Горячева А. В., 2019).</p>
<p>Поиск методов повышения мясной продуктивности в настоящее носит первостепенное значение для разведения крупного рогатого скота. Изучение полиморфизма гена кальпаина – CAPN1, способствует выявлению животных<br />
с желательным генотипом СС, ассоциированного с повышенной нежностью мяса. Плейотропный эффект генов кальпаин-кальпастатиновой системы проявляется в отношении количественных признаков животного и характеристик мышечной ткани. В исследовании анализ связи однонуклеотидных полиморфизмов CAPN316 и CAST282 генов кальпаина и кальпастатина с количественными признаками животных &#8212; динамикой массы тела проведен. В Харьковской области установлено, что частоты аллелей С и G полиморфного варианта CAPN316 составили 0,404 и 0,586, CAST282 – 0,788 и 0,212 и большое влияние генотипа СС по CAPN316 на массу тела в возрасте трех (F = 3,57; h2 = 46%) и четырех лет (F = 3,70; h2 = 47%), и генотипа CG по CAST282 в возрасте 15 мес (F = 3,29; h2 = 43%). Влияние аллелей C гена кальпаина и кальпастатина на прирост живой массы увеличивается после двухлетнего возраста, когда снижается экспрессия генов, регулирующих процессы роста и развития в раннем возрасте. Отбор животных в возрасте до двух лет с целью улучшения качества мяса не приведет к значимому уменьшению их массы тела (Лысенко Н. Г.[и др.], 2016; ШаркоИ. Н., АбрамоваО. И., СилкинаС. Ф., 2018).</p>
<p>Оценка данных литературы по проблеме лейкоза крупного рогатого скота с позиции специалистов по трансграничным вирусным инфекциям и генетического полиморфизма, свидетельствует о существовании четкой взаимосвязи проявления вируса и генофонда скота (МищенкоВ. А., ПетроваО.Н., Караулов А.К., МищенкоА.В., 2018).</p>
<p>Полученные данные могут быть использованы для выявления перспективных животных, позволяют осуществлять более тонкий анализ потенциала животного. На основе полученных данных открыта возможность дальнейшего генетического совершенствования породы в направлении повышения продуктивности и технологических свойств молока (Bonilla C.A. [и др.], 2010).</p>
<p>Таким образом, ДНК-диагностика по определению полиморфизма генов дает возможность корректировать изменение частот встречаемости тех или иных аллелей и генотипов в популяции путём определенного отбора и подбора пар для селекционного процесса (Кононова Л. В., Шарко Г. Н., Мачульская Е. В., 2018).</p>
<h3><strong>1.5 Типы полиморфизма ДНК</strong></h3>
<p>В связи с развитием методов молекулярно-генетического анализа за прошедшие десятилетия было доказано, что до трети локусов эукариотического генома представлены аллельными вариантами со средней гетерозиготностью на особь вплоть до 12 % и более (Brookes, A.J., 1999). В природных популяциях эта изменчивость постоянно поддерживается c помощью известных микроэволюционных факторов – мутациями, миграцией генов, случайным генетическим дрейфом и естественным отбором. Генетический полиморфизм может быть выявлен на фенотипическом, биохимическом, хромосомном, молекулярном уровнях.</p>
<p>В случае молекулярно-генетического полиморфизма речь идет об изменениях в структуре ДНК, обусловленных различными типами мутаций: точечными мутациями, делециями и инсерциями от одного до большего числа нуклеотидов. Схема образования гаплотипов в случае нарушения аллельного равновесия на примере единичных точечных мутаций на локусе одной хромосомы показана на рисунке 1.</p>
<p>После открытия явления полиморфизма ДНК в середине 80-х годов для создания насыщенных генетических карт и маркирования QTL появился новый класс генетических маркеров. Огромную роль в их появлении сыграло развитие методов клонирования и рестрикции генов. Но открытие полимеразной цепной реакции (ПЦР) имело решающее значение. Суть метода состоит в том, что предназначенный для амплификации участок ДНК служит матрицей для синтеза <em>in vitro</em> комплементарной последовательности. Реакция катализируется Taq-полимеразой в присутствии двух олигонуклеотидных праймеров, комплементарных к последовательностям, окружающим анализируемый фрагмент. Число анализируемых фрагментов ДНК в каждом цикле удваивается, и после 30 циклов репликации количество исходной ДНК увеличивается в миллион раз.</p>
<p><img width="1278" height="419" class="wp-image-11717" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image.jpeg 1278w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-300x98.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-1024x336.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-768x252.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1278px) 100vw, 1278px" alt="word image Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 1</strong> – Схема образования гаплотипов:</p>
<p>1 – точечная замена T<img src="https://s.w.org/images/core/emoji/13.1.0/72x72/2194.png" alt="↔" class="wp-smiley" style="height: 1em; max-height: 1em;" />C и образование 2-го возможного гаплотипа; 2 – точечная замена A<img src="https://s.w.org/images/core/emoji/13.1.0/72x72/2194.png" alt="↔" class="wp-smiley" style="height: 1em; max-height: 1em;" />G и образование 3-го возможного гаплотипа; 3 – вариант меойтической<br />
рекомбинации, приводящей к образованию четырех гаплотипов [5]</p>
<p>Поскольку преобладающая часть эукариотического генома не вовлечена<br />
в какие-либо известные и важные функции, соответствующие участки некодирующей ДНК обнаруживают уровни полиморфизма, многократно превосходящие данные, которые известны о полиморфизме генов. В случае структурных генов, которые колируют белки, изменения в структуре ДНК могут обуславливать изменения в аминокислотных последовательностях белков, и как следствие нарушения действия генов. Так, например, точечные мутации могут приводить<br />
к появлению стоп-кодона в кодирующей последовательности, приводя к остановке трансляции и образованию белков с нарушениями их функциональности. Точечные мутации также могут приводить к замене одного аминокислотного остатка на другой, изменяя тем самым структуру молекулы белка, а, следовательно, и его функцию. Как и в случае обрыва белковой цепи, это может приводить к различным генетическим заболеваниям.</p>
<p>Основные типы полиморфизмов ДНК эукариотических геномов представлены в таблице 1 (Алтухов Ю. П., Салменкова Е. А., 2002).</p>
<h4><strong><em>1.5.1 Рестрикционные фрагменты ДНК</em></strong></h4>
<p>Геномная ДНК эукариот имеет существенные размеры, в частности, геном коровы составляет 3,1 млрд пар оснований (Van Eenennaam A. L., Weigel K. A., Young A. E., Cleveland M. A., Dekkers J. C. M., 2014).Сайт-специфические ДНК-эндонуклеазы – это бактериальные ферменты, расщепляющие ДНК по определенным последовательностям, называемым сайтами узнавания. Наиболее известными среди этих ферментов являются эндонуклеазы рестрикции II типа, первая из которых (HindII) была обнаружена 45 лет назад, и которые сыграли большую роль в развитии генной инженерии, поскольку их использование позволило специфично проводить фрагментацию протяженных геномных ДНК.<br />
А затем клонировать участки генома в различные векторные конструкции (цит. по Алтухову Ю. П., Салменковой Е. А., 2002). Эти эндонуклеазы вступают в реакцию лишь со специфическими состоящими из 4–6 пар оснований, деметилированными участками ДНК – сайтами узнавания, которые в гомологичных бактериальных ДНК защищены метильными группами.</p>
<p><strong>Таблица 1</strong> – Типы полиморфизма ДНК</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Характер<br />
изменчивости</td>
<td>Причина возникновения<br />
полиморфизма</td>
<td>Методы выявления</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Полиморфизм длины<br />
рестрикционных<br />
фрагментов (RFLP)</td>
<td>Нуклеотидные различия<br />
в сайтах рестрикции</td>
<td>Разрезание цепи ДНК с помощью рестриктаз, электрофорез продуктов рестрикции, их визуализация</td>
</tr>
<tr>
<td>Минисателлиты,<br />
варьирующее число<br />
тандемных повторов<br />
(VNTR)</td>
<td>Варьирующее число<br />
тандемно повторенных<br />
нуклеотидных последовательностей с размером<br />
повтора 10–100 нуклеотидов</td>
<td>Разрезание цепи ДНК с помощью рестриктаз, электрофорез, Саузерн-блоттинг со специфической пробой к повторяющейся последовательности. Полилокусные пробы комплементарны к часто встречающимся<br />
в геноме повторам, однолокусные – к уникальным повторам</td>
</tr>
<tr>
<td>Микросателлиты,<br />
простые тандемные<br />
повторы (STR),<br />
простые нуклеотидныеповторы (SSR)</td>
<td>Варьирующее число<br />
тандемно повторенных<br />
коротких нуклеотидных<br />
последовательностей<br />
с размером повтора<br />
1–6 нуклеотидов</td>
<td>ПЦР-амплификация с праймерами, комплементарными уникальным последовательностям, фланкирующим семейство повторов, электрофорез продуктов</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Продолжение таблицы 1</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Полиморфизм<br />
фрагментов ДНК,<br />
амплифицированных<br />
с произвольными<br />
праймерами (RAPD)</td>
<td>Нуклеотидные различия<br />
в сайтах связывания<br />
с праймерами</td>
<td>ПЦР-амплификация случайных сегментов ДНК с использованием 10–20 членных нуклеотидных праймеров с произвольной нуклеотидной последовательностью, электрофорез продуктов амплификации</td>
</tr>
<tr>
<td>Полиморфизм длины<br />
амплифицированных<br />
фрагментов (AFLP)</td>
<td>Нуклеотидные различия<br />
в сайтах рестрикции<br />
и фланкирующих их<br />
областях</td>
<td>Рестрикция с помощью двух рестриктаз, действующих на частые и редкие сайты рестрикции, присоединение олигонуклеотидных адаптеров, ПЦР-амплификация, электрофорез</td>
</tr>
<tr>
<td>Однонуклеотидный<br />
полиморфизм (SNP)</td>
<td>Замены отдельных нуклеотидов в последовательности ДНК</td>
<td>Гибридизация меченых ПЦР-продуктов с микропанелями<br />
ДНК-проб для выявления вариантов, ДНК-чипы, Секвенирование ДНК-проб (фрагментов, полногеномное)</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Несмотря на то, что развитие ПЦР-технологий и методов полногеномного секвенирования несколько снизило интерес к использованию ферментов рестрикции, их значимость для научно-практических исследований остается высокой. Они находят широкое применение в полногеномном поиске молекулярных маркеров для исследований в области популяционной и адаптационной генетики. Геномы эукариот могут различаться по нескольким миллионам нуклеотидов, часть из которых входит в сайты узнавания коммерчески доступных ферментов. Как известно, полиморфизм ДНК вызывается несколькими причинами: либо точечными заменами, либо ошибками при репликации ДНК в виде инсерций или делеций протяженностью от одного до тысяч нуклеотидов. Все изменения в первичной структуре ДНК ведут к изменениям в длине фрагментов, образующихся под действием рестриктаз.</p>
<p>Сравнение секвенированных рестрикционных фрагментов из различных популяций организмов позволяет легко выявлять фрагменты, свойственные лишь одной из исследуемых групп и тем самым обнаружить нуклеотидные различия. При этом фрагменты используются в качестве простейших генетических маркеров. Основанный на этом подходе метод анализа получил название RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism).</p>
<p>Смесь фрагментов ДНК разделяют электрофорезом в агарозном или полиакриламидном геле и идентифицируют с помощью метки с последующей авторадиографией. Метод малоэффективен для разделения множества фрагментов. Для избирательного выявления в геле каких-либо определенных фрагментов ДНК используется гибридизация со специфической пробой методом Саузерна. Такая проба представляет нуклеотидную последовательность, комплементарную исследуемой области и снабженную радиоактивной или флуоресцентной меткой. Благодаря метке нужный фрагмент специфично визуализируется.</p>
<p>Первоначально для гибридизации с фрагментами ДНК, полученными<br />
в результате действия рестриктаз, использовались универсальные мультилокусные пробы, которые содержали структуры, часто встречающиеся в геноме<br />
в виде семейств многочисленных повторов. При использовании таких проб<br />
в геле выявляется одновременно много сходных локусов, находящихся в гетерозиготном состоянии из-за большого числа аллелей. Эти сложные картины фрагментов ДНК, специфичные для отдельных особей, получили название «ДНК-фингерпринтов» или «фингерпринтов».</p>
<p>Несмотря на то, что было проведено несколько исследований на растениях с целью выявления QTL посредством сцепления с RFLP-маркерами (Pater­son A. H., Lander E. S., Hewitt J. D., Paterson S., Lincoln S. E., Tanksley S. D., 1988), эти маркеры оказались не очень полиморфными у домашних животных.</p>
<h4><strong><em>1.5.2 Мини- и микросателлиты</em></strong></h4>
<p>С 1969 г. было известно, что ДНК высших организмов содержит много повторяющихся фрагментов. В 1989 г. сразу несколько лабораторий независимо друг от друга обнаружили, что короткие последовательности повторяющихся ДНК были полиморфными в отношении числа повторяющихся ДНК. Наиболее распространенной из этих повторяющихся последовательностей является poly-[TG], которая, как было установлено, очень часто встречаетсяу всех высших видов (цит. по ВеллеруДж. И., 2018).</p>
<p>Геном сельскохозяйственных животных насыщен (до 30 %) такого рода повторами, называемыми короткими тандемными (Shot Tandem Repeats – STR) или простыми структурными повторами (Single Sequence Repeats – SSR). Помимо выше упомянутого [TG]n, повторяющейся единицей может быть, например, мононуклеотид [A]n или динуклеотид [AC]n (Ellegren H., 2004; Mason, A.S., 2015). Но повторяющейся единицей может быть и тринуклеотид, и тетра, и т. д. Очень частов одном и том же локусе на разных хромосомах присутствует разное количество таких повторов. Количество аллелей может быть значительно больше за счет изменения числа повторов «n» (см. таблицу 2). Следует отметить, что хотя каждый из таких локусов отличается в своих аллелях числом повторов, нуклеотидные последовательности по краям этих повторов для одинаковых локусов одинаковы. И если такой повтор попадает между двумя соседними сайтами какой-либо рестриктазы, то длины полученных рестрикционных фрагментов для разных аллелей будут различаться (Zane L., Bargelloni L., Patarnello T., 2002).</p>
<p>Особое внимание исследователей в семействах тандемных повторовв качестве генетических маркеров получили минисателлиты, состоящие из повторяющихся копий («мотива») длиной от 9–10 до сотни нуклеотидов каждая,<br />
и микросателлиты, повторяющиеся копии которых обычно имеют длину от 1 до 4, иногда 6 нуклеотидов. Минисателлитный локус может насчитывать от двух до нескольких сотен повторов, микросателлитный локус – от 10 до 100 повторов. Эти маркеры – кодоминантные, т. е. гетерозиготный генотип всегда отличается от любой гомозиготы. Кроме того, микросателлиты почти всегда полиаллельны, т. е. в популяциях всегда присутствует более двух аллелей. Высокополиморфный характер и менделевский тип наследования делает микросателлиты идеальными ДНК-маркерами сельскохозяйственных животных.</p>
<p>Высокая достоверность и специфичность ДНК анализа может быть достигнута при использовании любых видов биологического материала: кровь, слюна, волосы, сперма, образцы мягких тканей. Для анализа микросателлитов требуется очень малое количество крови и какой-либо ткани организма, поэтому возможно прижизненное взятие образцов. Микросателлиты одинаковы<br />
у близких видов. Что позволяет использовать одни и те же праймерыи сходные протоколы анализа.</p>
<p>В настоящее время микросателлитные ДНК-маркерные системы находят применение при решении различных фундаментальных и прикладных задач сельскохозяйственной биологии и биотехнологии таких как геномное картирование, характеристика генетической структуры популяции и степени инбредности, оценка генетических расстояний между линиями, породами и популяциями, филогенетические исследования, контроль происхождения (Эрнст Л. К., Зиновьева Н. А., 2008; Guichoux E., Lagache L., WagnerS., ChaumellP., LegerP., LepaisO.,LepoittevinC., MalausaT., RevardelE., SalinF., PetitR. J., 2011). Таким образом, технология ДНК-анализа микросателлитов становится незаменимым инструментом для решения задач селекции и целенаправленного повышения продуктивных качеств выращиваемых животных и является «золотым» стандартом современной-молекулярно-генетической идентификации животных, рекомендованным Международным обществом по изучению генетики животных (ISAG).</p>
<p>Наиболее распространенным методом анализа SSR является метод ПЦР,<br />
с использованием праймеров, комплементарных уникальным последовательностям (доменам), которыми фланкирован каждый микросателлитный локус. Использование ПЦР для анализа микросателлитных локусов впервые было предложено в 1989 г. для анализа [CA]n[GT]n, которые являются одним из наиболее встречаемых мотивов повторов в геномной ДНК человека (Weber J. L., May P. E., 1989). Разделение продуктов амплификации проводили электрофорезом в полиакриламидном геле, что позволило резко повысить чувствительность и скорость анализа по сравнению с методами, основанными на гибридизации геномных блотов.</p>
<p>В настоящее время стандартной методикой анализа ДНК-микросателлитов с известными фланкирующими последовательностями является мультиплексный ПЦР с последующим разделением продуктов амплификации методом капиллярного электрофореза и их одновременной лазерной детекцией. Она отвечает современным требованиям молекулярно-генетического анализа: высокая информативность анализа, минимальные сроки исследования, простота проведения и низкая себестоимость исследования.</p>
<p>В практической части настоящей работы будут использоваться готовые отечественные современные решения для всех этапов генетического анализа. Компания «Гордиз» на сегодняшний день является единственным российским производителем продукции для молекулярно-генетической идентификации животных на основе микросателлитных маркеров ДНК (набор «COrDIS Cattle»).</p>
<p>ISAG в качестве стандартных маркеров рекомендовало использовать<br />
11 локусов: ETH3, INRA023, TGLA227, TGLA126, TGLA122, SPS115, ETH225, TGLA53, BM2113, BM1824, ETH10. Кроме того, в набор фирмы Гордиз для определения молекулярно-генетической характеристики крупного рогатого скота с целью анализа родства и ДНК-индивидуализации животных на основе мультиплексного ПЦР-анализа локусов, содержащих STR, входят три дополнительных высокополиморфных микросателлитных локуса: CSSM66, ILSTS006<br />
и CSRM60 (таблица 2).</p>
<p><strong>Таблица 2</strong> – Описание микросателлитных маркеров</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Название<br />
локуса</td>
<td>Хромосомная локализация</td>
<td>Нуклеотидная последовательность<br />
единицы повтора</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3">Основные</td>
</tr>
<tr>
<td>ETH3</td>
<td>D19S2</td>
<td>(GT)nAC(GT)6</td>
</tr>
<tr>
<td>INRA023</td>
<td>D3S10</td>
<td>(AC)n</td>
</tr>
<tr>
<td>TGLA227</td>
<td>D18S1</td>
<td>(TG)n</td>
</tr>
<tr>
<td>TGLA126</td>
<td>D20S1</td>
<td>(TG)n</td>
</tr>
<tr>
<td>TGLA122</td>
<td>D21S6</td>
<td>(AC)n(AT)n</td>
</tr>
<tr>
<td>SPS115</td>
<td>D15</td>
<td>(CA)nTA(CA)6</td>
</tr>
<tr>
<td>ETH225</td>
<td>D9S2</td>
<td>(TG)4CG(TG)(CA)n</td>
</tr>
<tr>
<td>TGLA53</td>
<td>D16S3</td>
<td>(TG)6CG(TG)4(TA)n</td>
</tr>
<tr>
<td>BM2113</td>
<td>D2S26</td>
<td>(CA)n</td>
</tr>
<tr>
<td>BM1824</td>
<td>D1S34</td>
<td>(GT)n</td>
</tr>
<tr>
<td>ETH10</td>
<td>D5S3</td>
<td>(AC)n</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Продолжение таблицы 2</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3">Дополнительные</td>
</tr>
<tr>
<td>CSSM66</td>
<td>D14S31</td>
<td>(AC)n</td>
</tr>
<tr>
<td>ILSTS006</td>
<td>D7S8</td>
<td>(GT)n</td>
</tr>
<tr>
<td>CSRM60</td>
<td>D10S5</td>
<td>(AC)n</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В стандартном наборе праймеры для ПЦР подбираются с учетом проведения амплификации всех 14-ти локусов в одной пробирке. Размер всех амплифицируемых ПЦР продуктов&lt; 320 пар нуклеотидов (с учетом всех известных аллелей). Анализ результатов ПЦР обычно проводится методом капиллярного электрофореза с использованием автоматических генетических анализаторов<br />
с лазериндуцированной флуоресцентной детекцией. В наборе COrDIS Cattle используется пять флуоресцентных красителей, характеризующихся разными длинами волн эмиссии для возможности одновременной детекции в разных каналах флуоресценции. Праймеры мечены четырьмя флуоресцентными красителями, детектируемыми в каналах Blue, Green, Yellow, Red. Стандарт длины S450 мечен пятым, флуоресцентным красителем и детектируетсяв отдельном канале Orange одновременно с продуктами ПЦР. С использованием этих реагентов для получения полного STR-профиля образца достаточно 0,2 нанограмм. Оптимальное количество – 0,5 нанограмм.</p>
<p>RAPD, AFLP. В отличие от микросателлитов или однолокусных минисателлитов, с помощью которых исследуются отдельные локусы генома, маркеры, обозначаемые как RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)и AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism), позволяют исследовать геном в целом, получая соответствующие фингерпринты.</p>
<p>Для анализа RAPD используют 10–20-членные нуклеотидные праймеры<br />
с произвольно выбранными последовательностями. С их помощью амплифицируют анонимные участки ДНК, после чего амплифицированные фрагменты анализируют с помощью гель-электрофореза. Число и размер фрагментов зависят от длины и структуры произвольно выбранных праймеров. Комплементарные сайты связывания праймеров случайно распределены по геному, а полиморфизм в таких сайтах выражается в присутствии или отсутствиив геле соответствующих фрагментов (Алтухов Ю. П., Салменкова Е. А., 2002).</p>
<p>Метод AFLP основан на избирательной амплификации рестрикционных фрагментов геномной ДНК и их анализе. Фрагментацию ДНК обычно проводят двумя рестриктазами. Образующиеся «липкие» концы связывают с олигонуклеотидными адаптерами, которые и служат мишенью для отжига праймеров. Тем самым достигается избирательная амплификация только тех фрагментов, рестрикционные сайты которых фланкированы комплементарными нуклеотидами (Алтухов Ю. П., Салменкова Е. А., 2002; Grover A., Sharma P.C., 2016). Как и в случае метода RAPD полиморфизм фингерпринта проявляется в наличии или отсутствия конкретных полос в геле, но в отличие от RAPD обладает очень хорошей воспроизводимостью.</p>
<h4><strong><em>1.5.3 Полиморфизм единичного нуклеотидного сайта</em></strong></h4>
<p>SNP (Single Nucleotide Polymorphism) как новый тип маркеров стал использоваться в 1995 г. (цит. по BrookesA.J., 1999). SNP обычно определяют как местоположение пары оснований ДНК, в которой частота появления наиболее распространенного основания пары ниже 99 %. В отличие от микросателлитов, которые имеют несколько аллелей, SNP, как правило, являются диаллельными, но гораздо более распространены во всем геноме, с оценочной частотой одного SNP на 300–500 пар оснований. В популяциях человека различия в нуклеотидной последовательности любых двух случайно выбранных особей встречаются с частотой примерно 1 на 1000 кб (BrookesA.J., 1999). Таким образом, SNP могут быть найдены в геномных областях, бедных микросателлитами. Вероятно, большинство полиморфизмов возникло в результате мутаций, закрепившихся в популяции. Наиболее часто встречающийся SNP – вариация оснований одного типа, т. е. пуринов или пиримидинов. SNP с аллелями пурин/пи­римидин встречаются значительно реже. Частота встречаемости разных типов<br />
в геноме человека описывается следующим соотношением: A/G – 63 %, A/C – 17 %, G/C – 8 %, A/T – 4 %. На оставшиеся вставки и делеции приходится 8 % (Miller R. D.,Taillon-MillerP., KwokP.-Y., 2001).</p>
<p>Наибольший практический интерес представляют полиморфизмы, лежащие в пределах кодирующих областей генома. SNP, находящиеся в них, могут быть ассоциированы с определенными фенотипами, в частности, связанные<br />
с индивидуальной предрасположенностью к заболеваниям, с устойчивостью<br />
к воздействию окружающей среды и лекарственных препаратов или с биохимическим профилем. Особенности последовательности четырех нуклеотидов<br />
в нетранскрибируемых регионах ДНК могут отражать различия между отдельными животными, популяциями и породами. SNP более стабильны, чем микросателлиты и имеют более низкую частоту мутации. В 2001 г. были впервые описаны условия генотипирования большого числа особей по любым SNP,<br />
а также методы вычислений, которые в будущем позволили автоматизировать процесс генотипирования (Ranade K., Chang M. S., Ting G. T., Pei D., Hsiao C. F., Olivier M., Pesich R., HebertJ., ChenY.-D., DzauV. J., CurbD., OlshenR., Rish N., CoxD. R., BotsteinD., 2001). Все вышесказанное объясняет появление огромного числа методов детекции SNP.</p>
<h4><strong><em>1.5.4 Методы детекции SNP</em></strong></h4>
<p>В самом простом случае для детекции SNP можно использовать две пары праймеров. В каждой паре один из праймеров общий для двух аллелей, другой – комплементарный только данному аллелю. Вариабельный нуклеотид располагается в 3&#8242;-концевой позиции аллель-специфичных праймеров. ПЦР для каждой пары проводят в отдельных пробирках (Кофиади И. А., Ребриков Д. В., 2006). Основной недостаток подхода в том, что поскольку анализ идет в различных пробирках, необходима четкая стандартизация исходного количества ДНК.</p>
<p>Проведение реакции в одной пробирке исключает ошибки смешивания реактивов и обеспечивает наличие конкуренции на стадии отжига, чтов свою очередь ведет к лучшему разрешению аллелей.</p>
<p>Существует несколько подходов проведения аллель-специфичной ПЦР<br />
в одной пробирке, схемы метода проведения которой изображены на рисунках 2–6 (Кофиади И. А., Ребриков Д. В., 2006).</p>
<p><img width="1091" height="653" class="wp-image-11718" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-1.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-1.jpeg 1091w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-1-300x180.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-1-1024x613.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-1-768x460.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1091px) 100vw, 1091px" alt="word image 1 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 2</strong> – Схема работы праймеров-«скорпионов»:</p>
<p>5&#8242;-концевая адаптерная часть праймера отделена от 3&#8242;-концевой аллель-специфичной части препятствующим синтезу второй цепи ДНКблокатором (обозначен ломаной линией).<br />
При амплификации адаптерсвободного праймера формирует шпилечную структуру со сближеннымфлуорофором и гасителем. Поскольку петлевая часть адаптеракомплементарна внутренней части амплифицируемого фрагмента, после встраивания в ДНК адаптер<br />
гибридизуется с фрагментом, приводяк разобщению флуорофора и гасителя и возрастанию флуоресценции</p>
<p><img width="1091" height="716" class="wp-image-11719" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-2.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-2.jpeg 1091w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-2-300x197.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-2-1024x672.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-2-768x504.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1091px) 100vw, 1091px" alt="word image 2 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 3</strong> – Схема работы «вытесняющей пробы»:</p>
<p>Флуорофор и гаситель флуоресценции расположены на комплементарных нуклеотидах<br />
так, что при образовании дуплекса они оказываются сближенными. В случае образования<br />
специфичного продукта ПЦР часть проб гибридизуется с продуктом реакции,<br />
приводя к увеличению уровня флуоресценции</p>
<p><img width="987" height="674" class="wp-image-11720" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-3.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-3.jpeg 987w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-3-300x205.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-3-768x524.jpeg 768w" sizes="(max-width: 987px) 100vw, 987px" alt="word image 3 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 4</strong> – Схема работы «разрушающей пробы»:</p>
<p>Пробы несут флуорофор и гаситель флуоресценции. Пока проба находится в растворе<br />
за счет близкого расположения гаситель поглощает энергию флуорофора. В случае отжига<br />
на специфический продукт реакции проба разрушается за счет 5&#8242;- экзонуклеазной активности полимеразы, что ведет к разобщению флуорофора и гасителя. Интенсивность сигнала<br />
возрастает с каждым циклом ПЦР, пропорционально накоплению ампликонов</p>
<p><img width="987" height="758" class="wp-image-11721" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-4.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-4.jpeg 987w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-4-300x230.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-4-768x590.jpeg 768w" sizes="(max-width: 987px) 100vw, 987px" alt="word image 4 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 5</strong> – Схема работы «молекулярных маячков»:</p>
<p>Пробы несут короткий инвертированный концевой повтор, по краям которого расположены флуорофор и гаситель флуоресценции. В растворе проба формирует шпилечную структуру,<br />
в которой флуорофор и гаситель сближены. При отжиге на специфический продукт реакции проба «разворачивается», что ведет к разобщению флуорофора и гасителя и повышению уровня флуоресценции</p>
<p><img width="961" height="722" class="wp-image-11722" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-5.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-5.jpeg 961w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-5-300x225.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-5-768x577.jpeg 768w" sizes="(max-width: 961px) 100vw, 961px" alt="word image 5 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 6</strong> – Схема работы «примыкающих проб»:</p>
<p>Система состоит их двух нуклеотидов, гибридизующихся на матрицу рядом. Один из<br />
нуклеотидов несет флуорофор-донор, другой флуорофор-акцептор. Акцептор может<br />
эффективно поглощать энергию, излучаемую донором. При образовании специфичного<br />
продукта реакции олигонуклеотиды гибридизуются рядом, что ведет к эффективному<br />
переносу энергии с донора на акцептор, а накопление продукта реакции амплификации<br />
регистрируют по увеличению флуоресценции акцептора</p>
<p>Использование детектирующих амплификаторов для оценки количества продуктов накопления ПЦР имеет неоспоримые преимущества для разработки систем детекции SNP, позволяя упростить подбор условий реакции и, что самое главное, работать практически с любыми стартовыми количествами ДНК. Практически для любого из вышеупомянутых подходов требуется стандартное оборудование для ПЦР и возможность получения меченых нуклеотидов. Однако они являются относительно низкопропускными и позволяют силами одного сотрудника проводить анализ лишь нескольких сотен полиморфизмов в день, что не позволяет их использовать для широкомасштабного скрининга SNP на уровне целого генома (Кофиади И. А., Ребриков Д. В., 2006).</p>
<p>Платформы для одновременного и высокопроизводительного генотипирования сотен и даже сотен тысяч SNP разработаны несколькими кампаниями.<br />
К 2008 г. затраты на генотипирование были снижены до уровня ниже 0,01 долл. за генотип. Сейчас стоимость такого рода анализа составляет приблизительно 0,0002 долл. за генотип (Веллер Дж. И., 2018). В настоящее время ведущей технологией высокопроизводительного SNP-генотипирования является «Infinium HD assay» (<a href="https://support.illumina.com/downloads/%20infinium_hd_ultra_assay_protocol_guide_11328087_b.html" target="_blank" rel="noopener">https://support.illumina.com/downloads/ infinium_hd_ultra_assay_<br />
protocol_guide_11328087_b.html</a>). По этой технологии были разработаны чипы средней плотности «BeadChips», включающие 50–60 тыс. маркеров для всех основных сельскохозяйственных животных. Был разработан чип «BovineHD BeadChip» (Illumina, Сан-Диего, Калифорния), который включает в себя<br />
777 тыс. SNP, охватывающих весь геном КРС. Теперь доступен и чип для курицы, включающий более 580 тыс. маркеров (Веллер Дж. И., 2018). Для других основных сельскохозяйственных видов разрабатываются маркерные чипы высокой плотности, включающие более 500 тыс. маркеров.</p>
<h3><strong>1.6 Генетическое маркирование экономически важных признаков молочного скота</strong></h3>
<p>Гены-кандидаты маркеров экономически важных признаков, как правило, отбирают для исследования на основании их потенциальной способности влиять на интересующий фенотип. Критерии отбора включают влияние на физиологические процессы, место в метаболических путях и локализацию уже описанных QTLs. За последнее время было опубликовано много исследований по поиску QTLs с фенотипическими проявлениями: удой (М), выход молочного белка (Р), содержание белка в молоке (%Р), выход молочного жира (F), количество соматических клеток в молоке (SCS) и мастита (MST). Например, в работах (Смарагдов М. Г., 2006; Maiorano A., Lourenco D., Tsuruta S., Ospina A., Sta­fuzza N., Masuda Y., Filho A., Cyrillo J., Curi R., Silva J., 2018; Mokhber M., Moradi-Shahrbarak M., Sadeghi M., Moradi-Shahrbarak H., Stella A., Nicolzzi E., Rahmaninia J., Williams J.L., 2018) собраны все доступные сведения о локализации QTLs в аутосомах КРС. По данным 869 публикаций в настоящее время<br />
в различных породах и популяциях КРС выявлено 116067 QTLs (<a href="https://www.animalgenom.org/" target="_blank" rel="noopener">https://www.animalgenom.org</a>; обращение 13.11.2018).</p>
<p>Расчеты свидетельствуют, что каждый показатель молока КРС могут контролироваться вплоть до 100 QTLs (Hayes B., Goddard M.E., 2001). Причем<br />
17 % этих локусов – мажорные, т. е. дающие существенный вклад (0,2–0,6)<br />
в фенотипическую вариансу. Остальные являются умеренными и минорными. Большинство мажорных QTLs уже выявлено. 15 важнейших из них перечислены в таблице 3 (<a href="https://www.animalgenom.org/" target="_blank" rel="noopener">https://www.animalgenom.org</a>).</p>
<p><strong>Таблица 3</strong> – Важнейшие экономически важные признаки КРС и количество определяющих их мажорных генетических локусов</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Признак</td>
<td>Число<br />
идентифицированных QTLs</td>
</tr>
<tr>
<td>Возраст полового созревания</td>
<td>10545</td>
</tr>
<tr>
<td>Окружность вымени</td>
<td>10435</td>
</tr>
<tr>
<td>Процентное содержание жира</td>
<td>6652</td>
</tr>
<tr>
<td>Выход жирного молока</td>
<td>5489</td>
</tr>
<tr>
<td>Процентное содержание каппа-казеина</td>
<td>4784</td>
</tr>
<tr>
<td>Процентное содержание нормальной спермы</td>
<td>3596</td>
</tr>
<tr>
<td>Легкость отела</td>
<td>3540</td>
</tr>
<tr>
<td>Процентное содержание молока</td>
<td>3540</td>
</tr>
<tr>
<td>Процентное содержание гликозилированной формы каппа-казеина</td>
<td>2753</td>
</tr>
<tr>
<td>Процентное содержание негликозилированной формы каппа-казеина</td>
<td>2542</td>
</tr>
<tr>
<td>Non return rate</td>
<td>2419</td>
</tr>
<tr>
<td>Продолжительность использования коров</td>
<td>2233</td>
</tr>
<tr>
<td>Выход молока</td>
<td>2037</td>
</tr>
<tr>
<td>Интервал между первой и последней лактацией</td>
<td>1900</td>
</tr>
<tr>
<td>Эффективность осеменения</td>
<td>1705</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Процедура анализа включает в себя взятие биологического материала (кровь, семя, волосы, выщипы), выделение ДНК, генотипирование на чипах, т. е. идентификация SNP, которые достоверно коррелируют с хозяйственно полезными признаками, и статистический анализ полученных данных (Лукъянов К. И., Солошенко В. А., Клименюк И. И., Юдин Н. С., 2015; Смарагдов М. Г., 2009).</p>
<p>Для оценки на уровень продуктивности того или иного признака необходимо разработать специальную математическую модель влияния каждого полиморфизма. Разрабатывают такую модель на стандартной или референсной популяции. Референсная популяция – это группа животных одной породы, оцененных по качеству потомства и по данным SNP-генотипирования. Эти животные должны иметь достоверные значения индексной оценки по селекционным признакам. Точность геномных оценок возрастает при увеличении объема референсной выборки (Лукъянов К. И., Солошенко В. А., Клименюк И. И., Юдин Н. С., 2015).</p>
<p>Для отбора QTL с использованием GS-моделей можно использовать несколько математических подходов. Очень подробно они изложены в работах (Веллер Дж. И., 2018; Смарагдов М. Г., 2009; Wiggans G. R., Cole J. B., Hub­bard S. M., Sonstegard T. S., 2017). Если коротко, то:</p>
<p>1) каждый маркер – это QTL. Вычисляют одновременно влияние всех маркеров одновременно по их вкладу в генетическую вариансу. Этот подход предполагает, что каждый полиморфизм возникает один раз и существуетв коммерческих популяциях животных в масштабе всей популяции. Варианса каждого маркера зависит от неравновесности по сцеплению «LD» (Linkage Disequi­librium), мерой которой служит r2 – квадрат коэффициента корреляции между локусами. LD измеряется между каждой парой локусов.</p>
<p><img width="584" height="243" class="wp-image-11723" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-6.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-6.jpeg 584w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-6-300x125.jpeg 300w" sizes="(max-width: 584px) 100vw, 584px" alt="word image 6 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 7</strong> – Формула вычисления квадрата корреляции двух аллелей<br />
для расчета LD, где РАВ – частота гаплотипа АВ, РА частота аллеля А,<br />
РВ – аллеля В (Смарагдов М. Г., 2009)</p>
<p>Чем больше расстояние между маркером и QTL, тем меньше r2. При расстоянии между локусами 50 т.п.о. для голштинской породы КРС он составляет 0,35 (Смарагдов М. Г., 2009; McKay S. D., SchnabelR. D., MurdochB. M., Matu­kumalliL., AertsJ., CoppietersW., CrewsD., NetoE., GillC., GaoC., MannenH., StothardP., WangZ., TassellC., WilliamsJ., TaylorJ., MooreS., 2007). Этот подход предполагает, что гаплотипы между парами локусов известны точно. Для особей, гетерозиготных для обоих локусов, гаплотипы можно определить однозначно, только если соответствующая родословная генотипирована для обоих локусов. Существует большое количество литературы для определения гаплотипов более сложных родословных, например (Веллер Дж. И., 2018; Weng Z., Zhang Zh., Zhang Q., He S., Ding X., 2013);</p>
<p>2) SNP конструируется из нескольких гаплотипов. В этом случае увеличивается LD между гаплотипом и QTL и, следовательно, величина вариансы QTL. При этом уменьшается точность определения каждого гаплотипа;</p>
<p>3) вместилищем всех QTL является гамета, эффекты которой в будущем определяют через маркеры. Анализ сцепления аллелей с QTLs прослеживают через родословные животных с помощью расчета вероятностей при условии, что любые два маркера идентичны по происхождению IBD (Identity By Descent) от общего предка в родословной.</p>
<p>Учитывая выгоды, получаемые от популяции внутри страны, программы разведения КРС на основе GS отличаются от большинства других экономических проектов тремя аспектами (Веллер Дж. И., 2018):</p>
<p>1. В связи с биологическими ограничениями, особенно относительно длительным интервалом между поколениями, программу разведения можно оценить только после длительного периода времени.</p>
<p>2. Генетические маркеры, как правило, одновременно определяют множество признаков.</p>
<p>3. В отличие от других агротехнических достижений, генетические тренды являются устойчивыми. Они «не изнашиваются», их техническое обслуживание не требует дополнительных инвестиций.</p>
<p>Основополагающие работы по результатам геномной селекции были осуществлены Мовиссеном с соавторами, в которых были проведены оценки распределения QTLs от эффектов маркеров и показана множественная их зависимость от используемых математических моделей (Meuwissen T. H., Hayes B. J., Goddart M. E., 2001; Meuwissen T. H., KarlsenA., LienS., OlsakerI., GoddardM. E., 2002; MeuwissenT. H., Goddard M. E., 2004).Кроме того, коммерческие популяции КРС находятся между экстремальными состояниями, поскольку снижение генетического разнообразия всегда компенсируется увеличением количества мутаций, т. е. увеличением полиморфизма ДНК.</p>
<p>Все предыдущие разделы касались методов определения фактических полиморфизмов, ответственных за наблюдаемую генетическую вариантность<br />
в количественных экономически важных признаках КРС. Они включеныв программы отбора в качестве фиксированных эффектов. С появлением технологии ZFN, TALEN и CRISPR/Cas9 фактически стало возможным изменять тип эмбрионов. Эти технологии теперь позволяют модифицировать эпигеном целого локуса для изменения регуляторных путей, что, в конечном счете, приведет<br />
к значительным изменениям фенотипа животного. Однаков настоящее время применение этих технологий для сельскохозяйственных животных вызывает большие этические возражения.</p>
<h2><strong>2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ</strong></h2>
<h3><strong>2.1 Выделение геномной ДНК и создание библиотек для секвенирования с использованием панели TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel Illumina</strong></h3>
<p>Выделение тотальной геномной ДНК производилось из образцов цельной крови коров по ранее освоенным методикам. В частности использовались наборы ДНК-ЭКСТРАН-1 («Синтол», Россия) и К-сорб («Синтол», Россия).</p>
<h4><strong><em>2.1.1 Выделение ДНК набором ДНК-ЭКСТРАН-1 («Синтол», Россия)</em></strong></h4>
<p><em>Примечание:</em></p>
<p>– для выделения следует использовать цельную кровь с антикоагулянтами;</p>
<p>– если в лизирующем растворе № 2 есть осадок, раствор следует прогреть при 60 °С в течение 15–30 мин до растворения осадка;</p>
<p>– если после лизиса с лизирующим буфером № 2 не происходит выпадение белого осадка и активного помутнения раствора, следует охладить раствор во льду в течении1–5 мин.</p>
<p><em>Протокол:</em></p>
<p>1. В чистые пробирки объемом 1,5 мл внести по 300 мкл цельной крови.</p>
<p>2. В пробирки с образцами добавить по 900 мкл лизирующего буфера № 1.</p>
<p>3. Содержимое пробирок тщательно перемешать переворачиванием, избегая образования пены.</p>
<p>4. Инкубировать образцы при комнатной температуре в течение 10 мин, периодически перемешивая их переворачиванием.</p>
<p>5. Центрифугировать пробирки 2 мин при 1300 об./мин.</p>
<p>6. Убрать супернатант, оставив в пробирке ~20 мкл надосадочной<br />
жидкости.</p>
<p>7. Ресуспендировать осадок на вортексе.</p>
<p>8. Добавить в пробирки по 300 мкл лизирующего буфера № 2 и 10 мкл протеиназы К.</p>
<p>9. Перемешать содержимое пробирок на вортексе.</p>
<p>10. Инкубировать образцы при температуре 65 °С до полного растворения осадка.</p>
<p>11. Охладить пробирки во льду 3–5 мин.</p>
<p>12. Сбросить пробирки на центрифуге.</p>
<p>13. К лизату добавить 100 мкл осаждающего раствора № 1. Убедиться в образовании белого осадка, если осадок не образуется – дополнительно охладить образец во льду в течение минуты.</p>
<p>14. Перемешать содержимое пробирок на вортексе.</p>
<p>15. Центрифугировать пробирки 2 мин при 13000 об./мин.</p>
<p>16. Супернатант перенести в чистые, объемом 1,5 мл пробирки и подписать.</p>
<p>17. Добавить к супернатанту осаждающий раствор № 2 и перемешать переворачиванием до конденсации видимого осадка ДНК (12–15 раз).</p>
<p>18. Центрифугировать смесь № 2 мин при 13000 об./мин.</p>
<p>19. Очень осторожно удалить супернатант, отслеживая положение осадка.</p>
<p>20. К осадку добавить 400 мкл промывающего раствора.</p>
<p>21. Тщательно перемешать содержимое пробирки, переворачивая ее<br />
(10–15 раз).</p>
<p>22. Центрифугировать содержимое пробирки 2 мин при 13000 об./мин.</p>
<p>23. Тщательно, с максимальной осторожностью удалить супернатант, отслеживая положение осадка.</p>
<p>24. Оставить пробирки открытыми (в штативе) в чистом, работающем ПЦР-боксе для просушки при комнатной температуре до полного испарения жидкости.</p>
<p>25. Внести в пробирки по 50 мкл элюирующего раствора.</p>
<p>26. Тщательно перемешать содержимое пробирок на вортексе.</p>
<p>27. Инкубировать пробирки в термостате 5 мин при температуре 60 °С, после чего остудить их при комнатной температуре и снова перемешать на вортексе.</p>
<p>28. Кратковременно центрифугировать пробирки для удаления раствора ДНК со стенок и крышки пробирки.</p>
<p>29. Полученный раствор ДНК можно использовать немедленно или оставить для кратковременного (до двух недель) хранения при плюс 4–8 °С либо долговременного хранения при минус 20 °С.</p>
<h4><strong><em>2.1.2 Выделение ДНК набором К-сорб («Синтол», Россия)</em></strong></h4>
<p>1. Перед началом работы сделать аликвоту элюирующего буфера требуемого объема (от 50 до 120 мкл на образец).</p>
<p>2. Внести во все пробирки для исследуемых образцов и тщательно перемешать:</p>
<p>– 400–500 мкл физиологического раствора;</p>
<p>– 200 мкл лизирующего буфера (раствор №2);</p>
<p>– 10 мкл протеиназы К (хранение при минус 20°С);</p>
<p>– 10 мкл 1M раствора DTT.</p>
<p>3. Приготовить и внести в пробирки образцы, которые готовятся путем иссечения фрагмента марли с предварительно нанесенной на нее и высушенной кровью, площадь фрагмента – от 0,3 до 1 см<sup>2</sup>.</p>
<p>4. Тщательно перемешать содержимое пробирок.</p>
<p>5. Термостатировать пробирки при 65°С в течение 1–2 ч.</p>
<p>6. По окончании термостатирования извлечь пробирки с образцами из термостата, перевести его на 70°С, поставить в него пробирки с аликвотами элюирующего буфера (до окончания выделения).</p>
<p>7. Выполнить краткосрочное центрифугирование пробирки с образцами для удаления испарений и капель со дна крышки и стенок, минимальная длительность центрифугирования при максимальном числе оборотов в минуту.</p>
<p>8. В каждую пробирку внести по 200 мкл осаждающего раствора. Тщательно перемешать. Выполнить краткосрочное центрифугирование.</p>
<p>9. Жидкость из пробирок перенести в колонки К-сорб. Центрифугировать колонки минуту при 8.000 rpm. По окончанию центрифугирования проконтролировать полное прохождение элюента через колонку. В случае неполного прохождения увеличить время центрифугирования и/или число оборотов.</p>
<p>10. Элюат удалить из пробирок-коллекторов в контейнер для жидких медицинских отходов. Колонки вернуть в пробирки-коллекторы.</p>
<p>11. Внести в колонки по 400 мкл промывочного раствора № 1. Центрифугировать минуту при 8.000 rpm, удалить элюат, колонки вернуть в пробирки-коллекторы.</p>
<p>12. Внести в колонки по 400 мкл промывочного раствора № 2. Центрифугировать минуту при 8.000 rpm, удалить элюат, колонки вернуть в пробирки-коллекторы.</p>
<p>13. Внести в колонки по 200 мкл промывочного раствора № 2. Центрифугировать 2 мин при 13.000 rpm (или при максимальном числе оборотов центрифуги).</p>
<p>14. Перенести колонки в чистые пробирки. Центрифугировать 3 мин при 13.000 rpm (или при максимальном числе оборотов центрифуги).</p>
<p>15. Перенести колонки в чистые пробирки.</p>
<p>16. Внести в каждую колонку требуемую аликвоту элюирующего буфера, прогретого до 70ºС. Пробирки брать из термостата по мере расходования предыдущих.</p>
<p>17. Инкубировать колонки под элюирующим буфером 3–5 мин при комнатной температуре в горизонтальном положении.</p>
<p>18. Центрифугировать минуту при 8.000 rpm.</p>
<p>19. По окончании центрифугирования проконтролировать полноту прохождения элюирующего буфера во всех пробирках. Колонки поместить в пакет для твердых медицинских отходов. Пробирки маркировать с указанием данных образца и даты выделения.</p>
<p>20. Полученные образцы ДНК хранить при 4–8°С (до одной недели). При более длительном сроке хранениятемпература должна быть минус 20°С.</p>
<h4><strong><em>2.1.3 Протокол для фрагментации дцДНК и приготовления NSG-библиотек из 5–500 нг очищенной дцДНК</em></strong></h4>
<p>Исходный материал: 5–500 нг очищенной дцДНК (например, бактериальной геномной ДНК или геномной ДНК человека).</p>
<p>1. <em>Фрагментация дцДНК</em>.</p>
<p>В ПЦР-пробирку, установленную на лед, внести следующие компоненты:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Компонент</td>
<td>Объем, мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>10x SD-буфер</td>
<td>2,5</td>
</tr>
<tr>
<td>MgCl<sub>2</sub> (50 мМ)</td>
<td>1,75</td>
</tr>
<tr>
<td>дцДНК (50–500 нг)</td>
<td>1–5</td>
</tr>
<tr>
<td>Смесь ферментов для фрагментации (SDpol+ДНКаза I)</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>ddH<sub>2</sub>O</td>
<td>До 25</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Инкубировать в ПЦР-амплификаторе в следующем режиме:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Температура, <sup>о</sup>С</td>
<td>Время</td>
</tr>
<tr>
<td>30</td>
<td>10–60*мин</td>
</tr>
<tr>
<td>70</td>
<td>20 мин</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>2. <em>Лигирование индексированных вилочковых адаптеров с фрагментированной ДНК</em>.</p>
<p>В пробирку с фрагментированной ДНК добавляют следующие компоненты, и перемешивают их встряхиванием:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Компонент</td>
<td>Объем, мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>Фрагментированная дцДНК</td>
<td>25</td>
</tr>
<tr>
<td>10x T4 лигазный буфер</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Индексированные вилочковые адаптеры* (12,5 мкM)</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>ddH<sub>2</sub>O</td>
<td>16</td>
</tr>
<tr>
<td>T4 ДНК-лигаза (5 Ед/мкл)</td>
<td>2</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Инкубировать лигазную смесь (50 мкл) в течение 20 мин при комнатной температуре. После инкубации развести лигазную смесь 0,1х ТЕ-буфером до конечного объема 100 мкл. Образцы на этом этапе можно заморозить для хранения приминус 20°C.</p>
<p>*В наборе используются индексированные адаптеры Illumina. Набор содержит следующие адаптеры:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>№</td>
<td>Индекс<br />
Illumina</td>
<td>Структура</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>Universal</td>
<td>5’AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T</td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>Index 2</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACCGATGTATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>Index 3</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACTTAGGCATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>Index 4</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACTGACCAATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>Index 5</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACACAGTGATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>Index 6</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACGCCAATATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>Index 9</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACGATCAGATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>8</td>
<td>Index 10</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACTAGCTTATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>9</td>
<td>Index 11</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACGGCTACATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>Index 12</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACCTTGTAATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>11</td>
<td>Index 14</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACAGTTCCGTATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>12</td>
<td>Index 15</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACATGTCAGAATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>13</td>
<td>Index 16</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACCCGTCCCGATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>3. <em>Очистка ДНК, лигированной с адаптерами</em>.</p>
<p>Необходимо дать шарикам AMPureXP прогреться до комнатной температуры не менее 30 мин перед использованием. Для ресуспендирования встряхнуть шарики AMPureXP на вортексе.</p>
<p>Добавить 80 мкл (0,8X) ресуспендированных шариков к реакции лигирования адаптеров. Хорошо перемешать пипетированием по меньшей мере 10 раз. Манипуляции следует проводить осторожно, чтобы исключить всю жидкость из наконечника во время последнего смешивания. Также можно воспользоваться смешивание на вортексе в течение 3–5 с. Если после центрифугирования<br />
образцы центрифугируются, необходимо остановить центрифугирование до того, как шарики начнут оседать.</p>
<p>Инкубировать образцы на столе не менее 5 мин при комнатной температуре.</p>
<p>Чтобы отделить шарики от супернатанта, планшет/пробирки помещают на соответствующую магнитную подставку. При необходимости образец центрифугируют, чтобы собрать жидкость со стенок лунки пробирки или планшета перед постановкой на магнитную подставку.Через 5 мин (или когда раствор станет прозрачным) удаляют супернатант. Это действие надо проводить осторожно, чтобы не потревожить шарики, содержащие целевую ДНК.</p>
<p>Добавить 200 мкл 80%-го свежеприготовленного этанола в пробирку/план­шет, находящиеся в магнитной подставке. Инкубировать при комнатной температуре в течение 30 с, а затем осторожно удалить и отбросить супернатант.</p>
<p>Повторяют эту стадию промывки один раз, чтобы получить в итоге две стадии промывки. Обязательно удаляют всю видимую жидкость после второй промывки. При необходимости, кратковременно центрифугируйте пробирку/планшет, поместите обратно на магнит и удалите следы этанола с помощью автоматического дозатора на 20 мкл. Это действие надо проводить осторожно, чтобы не потревожить шарики, содержащие целевую ДНК.</p>
<p>Высушить шарики на воздухе до 5 мин, пока пробирка/планшет находятся на магнитной подставке с открытой крышкой.</p>
<p>Внимание: важно не пересушивать шарики! Это может привести к снижению выделения ДНК-мишени. Образцы следует элюировать, когда шарики остаются темно-коричневого цвета и выглядят блестящими, но при этом вся видимая жидкость испарилась. Когда шарики становятся светло-коричневыми,<br />
и их поверхность начинает покрываться трещинами, они являются уже пересушенными.</p>
<p>Снимите пробирку/планшет с магнитной подставки. Элюируйте ДНК-мишень с шариков, добавляя 22–23 мкл 10 мМ Трис-HCl или 0,1XTE. Хорошо перемешайте суспензию пипетированием 10 раз или встряхиванием на вортексе. Инкубируйте суспензию не менее 2 мин при комнатной температуре. При необходимости шарики можно центрифугировать в течение короткого времени, чтобы собрать жидкость со стенок пробирки или лунок планшета, прежде чем поставить их обратно на магнитную подставку.</p>
<p>Поместите пробирку/планшет на магнитную подставку. Через 5 мин (или когда раствор станет прозрачным) перенести 20 мкл образца в новую ПЦР-пробирку для амплификации.</p>
<p>Примечание: образцы можно хранить приминус 20 °C.</p>
<p>4. <em>ПЦР-амплификация лигированной ДНК адаптера</em>.</p>
<p>Вновую ПЦР-пробирку обавить следующие компоненты:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Компонент</td>
<td>Объем, мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>ДНК, лигированная с адаптерами</td>
<td>20</td>
</tr>
<tr>
<td>Смесь праймеров для ПЦР*<br />
(20 мкM– по 10 мкМ каждого праймера)</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>10xSD-буфер</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>MgCl<sub>2 </sub> (50 мM)</td>
<td>3,5</td>
</tr>
<tr>
<td>Смесь ферментов для амплификации (20 Ед/мкл)</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>ddH<sub>2</sub>O</td>
<td>16,5</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Примечание: * – ПЦР-праймеры:P5.2_PCR 5’ AATGATACGGCGACCACCGA 3’; P7.1_PCR 5’ CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT 3’</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Смешать компоненты быстрым встряхиванием на вортексе и сбросить капли центрифугированием. Поместить пробирку в термоциклер и провести ПЦР-амплификации с использованием следующих условий циклов:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Температура, <sup>о</sup>С</td>
<td>Время, с</td>
<td>Циклы</td>
</tr>
<tr>
<td>94</td>
<td>120</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>95</td>
<td>20</td>
<td rowspan="3">5–12**</td>
</tr>
<tr>
<td>62</td>
<td>20</td>
</tr>
<tr>
<td>68</td>
<td>45</td>
</tr>
<tr>
<td>68</td>
<td>45</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>∞</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3">Примечание: ** – количество циклов ПЦР следует выбирать, исходя из количества введенной ДНК. Число циклов должно быть достаточно большим, чтобы обеспечить достаточное количество фрагментов библиотеки для успешного секвенирования, но также должно быть достаточно низким, чтобы избежать появления артефактов вследствие ПЦР<br />
и избыточной амплификации (появления высокомолекулярных фрагментов на Биоаналайзере).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Рекомендованное количество циклов ПЦР приведено ниже. Его можно использовать в качестве отправной точки для определения числа циклов ПЦР, наилучшего для приготовления образцов библиотек ДНК.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Количество исходной ДНК, нг</td>
<td>Число циклов ПЦР, требуемое для выхода<br />
библиотеки примерно 250–500 нг</td>
</tr>
<tr>
<td>≥ 250</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>200</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>100</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>40–50</td>
<td>8–9</td>
</tr>
<tr>
<td>20</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>11</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>12</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>5. <em>Очистка ПЦР-реакции</em>.</p>
<p>Необходимо дать шарикам AMPureXP прогреться до комнатной температуры не менее 30 мин перед использованием. Для ресуспендирования встряхнуть шарики AMPureXP на вортексе.</p>
<p>Добавить 45 мкл (0,9X) ресуспендированных шариков к ПЦР-реакции. Хорошо перемешать с пипетированием по меньшей мере 10 раз. Манипуляции следует проводить осторожно, чтобы исключить всю жидкость из наконечника во время последнего смешивания. Также можно использоваться смешивание на вортексе в течение 3–5 с. Если после центрифугирования образцы центрифугируются, необходимо остановить центрифугирование до того, как шарики начнут оседать.</p>
<p>Инкубировать образцы на столе не менее 5 мин при комнатной температуре.</p>
<p>Чтобы отделить шарики от супернатанта, планшет/пробирки помещают на соответствующую магнитную подставку. При необходимости образец центрифугируют, чтобы собрать жидкость со стенок лунки пробирки или планшета перед постановкой на магнитную подставку.Через 5 мин (или когда раствор станет прозрачным) удаляют супернатант. Это действие надо проводить осторожно, чтобы не потревожить шарики, содержащие целевую ДНК.</p>
<p>Добавить 200 мкл 80%-го свежеприготовленного этанола в пробирку/планшет, находящиеся в магнитной подставке. Инкубируют при комнатной температуре в течение 30 с, а затем осторожно удаляют и отбрасывают супернатант.</p>
<p>Повторяют эту стадию промывки один раз, чтобы получить в итоге две стадии промывки. Обязательно удаляют всю видимую жидкость после второй промывки. При необходимости, кратковременно центрифугируют пробирку/планшет, помещая обратно на магнит и удаляя следы этанола с помощью автоматического дозатора на 20 мкл. Это действие надо проводить осторожно, чтобы не потревожить шарики, содержащие целевую ДНК.</p>
<p>Высушить шарики на воздухе до 5 мин, пока пробирка/планшет находятся на магнитной подставке с открытой крышкой.</p>
<p>Внимание: важно не пересушивать шарики! Это может привести к снижению выделения ДНК-мишени. Образцы следует элюировать, когда шарики остаются темно-коричневого цвета и выглядят блестящими, но при этом видно, что вся видимая жидкость испарилась. Когда шарики становятся светло-коричневыми, и их поверхность начинает покрываться трещинами, они являются уже пересушенными.</p>
<p>Снимите пробирку/планшет с магнитной подставки. Элюируйте ДНК-мишень с шариков, добавляя 32–33 мкл 0,1XTE. Хорошо перемешайте суспензию пипетированием 10 раз или встряхиванием на вортексе. Инкубируйте суспензию не менее 2 мин при комнатной температуре. При необходимости шарики можно центрифугировать в течение короткого времени, чтобы собрать жидкость со стенок пробирки или лунок планшета, прежде чем поставить их обратно на магнитную подставку.</p>
<p>Поместите пробирку/планшет на магнитную подставку. Через 5 мин (или когда раствор станет прозрачным) перенести 30 мкл в новую ПЦР-пробирку для хранения при минус 20°C.</p>
<p>Далее необходимо проверить распределение фрагментов библиотеки (например, с использованием Agilent Bioanalyzer High Sensitivity DNA chip).</p>
<h4><strong><em>2.1.4 Измерение концентрации ДНК с помощью PicoGreen dsDNA Assay Kit</em></strong></h4>
<p>В ходе работы не следует использовать для раствора стеклянную посуду.</p>
<p><em>Подготовка красителя:</em></p>
<p>Перед началом работы следует дать реагенту Quant-iT<img src="https://s.w.org/images/core/emoji/13.1.0/72x72/2122.png" alt="™" class="wp-smiley" style="height: 1em; max-height: 1em;" /> PicoGreen® нагреться до комнатной температуры, прежде чем открывать пробирку с ним. Для наилучшего результата раствор необходимо использовать в течение нескольких часов после приготовления. Приготовленный раствор с красителем следует защищать от света (поместив его в темное место или накрыв фольгой).</p>
<ol>
<li>Проверить корректность установки даты и времени в приборе («Set­tings» → «Instrument settings» →«Date/Time»). При необходимости установить верные значения.</li>
<li>В чистую, объемом 15 мл пробирку внести 1005 мкл 20х TE буфера.</li>
<li>Добавить в пробирку 19095 мкл Н<sub>2</sub>О, а также 101 мкл красителя.</li>
<li>Тщательно перемешать.</li>
<li>Приготовить контрольную ДНК для построения кривой (0 и 100 нг в 5 мкл):
<ol>
<li>внести в пробирку на 0,2 мл 8 мкл 1хТЕ буфера;</li>
<li>добавить 2 мкл контрольной ДНК из набора (100нг/мкл). Хорошо перемешать пипетированием;</li>
<li>подготовить две оптически прозрачные пробирки объемом 0,5 мл;</li>
<li>одну подписать как К1, другую – К2;</li>
<li>в К1 внести 200 мкл раствора для измерения концентрации;</li>
<li>в К2 внести 195 мкл раствора для измерения и 5 мкл разведенной контрольной ДНК (из шага b).</li>
</ol>
</li>
<li>Внести по 195 мкл в оптически прозрачные пробирки объемом 0,5 мл.</li>
<li>Добавить в каждую пробирку по 5 мкл соответствующей коровьей ДНК.</li>
<li>В пробирку К1внести 5 мкл раствора ДНК второго разведения<br />
(38 + 2 мкл).</li>
<li>В пробирку К2 внести 5 мкл раствора ДНК первого разведения (8 + 2 мкл).</li>
<li>Включить прибор, подключить его к компьютеру.</li>
<li>Выбрать на первом экране программу PicoGreen.</li>
<li>Произвести измерения.</li>
</ol>
<h4><strong><em>2.1.5 Подготовка библиотеки к нанесению в картридже</em></strong></h4>
<p>После объединения образцов измерить концентрацию ДНК.</p>
<p>Произвести пересчет массовой концентрации в молярность:http://molbiol.ru/scripts/01_07.html (программа выдает данные в пикомолях, необходимо пересчитать в наномоли).</p>
<p>Далеенеобходимоследоватьинструкциям Protocol A из«MiSeq System Denature and Dilute Libraries Guide».</p>
<h4><strong><em>2.1.6 Разведение щелочи (NaOH)</em></strong></h4>
<p>К 100 мкл стокового раствора (10М) добавить 900 мкл Н<sub>2</sub>О.</p>
<p>К отобранным 200 мкл полученного раствора (1N NaOH) добавить<br />
800 мкл Н<sub>2</sub>О.</p>
<p>В результате получится 1 мл 0,2N NaOH.</p>
<h4><strong><em>2.1.7 Денатурация библиотеки</em></strong></h4>
<p>1. В микроцентрифужной пробирке смешать следующие объемы.</p>
<ul>
<li>4 нM библиотека (5 мкл);</li>
<li>0,2N NaOH (5 мкл).</li>
</ul>
<p>2. Перемешать кратким встряхиванием на вортексе и центрифугировать при 280×g в течение минуты.</p>
<p>3. Инкубировать при комнатной температуре в течение 5 мин.</p>
<p>4. В пробирку, содержащую денатурированную библиотеку, добавить<br />
990 мкл холодного НТ1-буфера.</p>
<p>5. В результате получается 1 мл денатурированной библиотеки с концентрацией 20 пМ.</p>
<p>6. Нанести в картридж 600 мкл.</p>
<h3><strong>2.2 Перечень однонуклеотидных полиморфизмов (SNP), входящих в использованную панель TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel</strong></h3>
<p>Все исследуемые SNP можно разделить на Блок 1 и Блок 2.</p>
<p><strong>Блок 1. Родство и достоверность происхождения (200 SNP)</strong></p>
<p>Исходя из рекомендаций Международного общества по изучению генетики животных (ISAG), по каждому животному определяются важные индивидуальные мутации. Достоверность происхождения контролируется по 200 SNP.</p>
<p><strong>Блок 2. Генетически наследуемые заболевания (53 SNP)</strong></p>
<p>В таблице 4 приведен подробный перечень SNP, которые были использованы нами для характеристики исследуемых экспериментальных стад.</p>
<p><strong>Таблица 4</strong> – Исследованные мутации</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">№ п/п</td>
<td rowspan="2">Идентификатор SNP</td>
<td rowspan="2">Значение замены</td>
<td colspan="3">Сочетание аллелей</td>
</tr>
<tr>
<td>позитивно</td>
<td>нейтрально<br />
(носительство)</td>
<td>негативно</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>201</td>
<td>_SNPchr19_27956790</td>
<td>Мутация в белке, продукте гена SHBG, связывающем и транспортирующем стероидные половые гормоны. Ассоциирована с потерей плодовитости, связаннымс гаплотипом MH1 и эмбриональной смертностью</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>202</td>
<td>_SNPchr26_36951321</td>
<td>Мышечная аномалия переднего пояса у КРС – аутосомно-рецессивное расстройство</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>203</td>
<td>_SNPchr6_89169686</td>
<td>Синдром легочной гипоплазии и анасарка (РНА) – редкая врожденная аномалия у крупного рогатого скота, которая характеризуется водянкой плода, включая сильный подкожный отек (anasarca) и неразвитые или слабо сформированные легкие (легочная гипоплазия)</td>
<td>A/A</td>
<td>A/G</td>
<td>G/G</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 4</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>204</td>
<td>FBN1_SNPchr10_62054844</td>
<td>Синдром Марфана (MFS) – наследственное аутосомно-доминантное заболевание крупного рогатого скота, связанное с мутацией в гене FBN1 10 хромосомы <em>Вos taurus</em></td>
<td>G/G</td>
<td></td>
<td>A/G</p>
<p>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>205</td>
<td>FBN1_SNPchr10_62141461</td>
<td>Синдром Марфана (MFS) – наследственное аутосомно-доминантное заболевание. Патологические процессы развиваются в сердечно-сосудистой и костно-мышечной системах, глазах, коже и кожных покровах</td>
<td>G/G</td>
<td></td>
<td>A/G</p>
<p>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>206</td>
<td>_SNPchr7_17645428</td>
<td>Мутация, вызывающая нейропатическую гидроцефалию (NH). Большинство случаев NH приводят к ранним абортам. NH телят, которые рождаются намного меньшим весом для регистрационного возраста</td>
<td>A/A</td>
<td>A/G</td>
<td>G/G</td>
</tr>
<tr>
<td>207</td>
<td>_SNPchr8_108833985</td>
<td>Кератоконъюктивит – быстрораспространяющаяся, доброкачественно протекающая болезнь животных различных видов, вызываемая риккетсиоподобными микроорганизмами. С каждым аллелем &#8216;G&#8217; животное уменьшает свой риск заражения на 8–13 %. Таким образом, животное, которое является гомозиготным G/G аллелей, имеет риск инфицирования меньше на 16–<br />
26 % по сравнению с гомозиготой A/A</td>
<td>G/G</td>
<td>A/G</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>209</td>
<td>ASS1_SNPchr11_100802781</td>
<td>Цитруллинемия – это аутосомно-рецес­сивное расстройство, которое для животных является летальным в раннем постнатальном периоде</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>210</td>
<td>CWC15_SNPchr15_15707169</td>
<td>Гаплотип джерсейского скота (JH1). Аутосомно-рецессивная смертельная мутация гомолога CWC15 (гомолог сплайсосома-ассоциированного белка CWC15) на хромосоме 15</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>211</td>
<td>LRP4_SNPchr15_77667135</td>
<td>Синдактилия (мулья нога). Во многих странах у многих пород крупного рогатого скота сообщалось о синдактилии. Однако большая часть документации связана с ее появлением у голштинской породы, разводимой в Америке</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 4</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>212</td>
<td>LRP4_SNPchr15_77675440+LRP4_SNPchr15_77675516+LRP4_SNPchr15_77675517</td>
<td>Множественные мутации в гене белка 4, связанным с рецептором LDL. Син­дактилия (мулья нога). Пораженный крупный рогатый скот может иметь 1–4 объединенных копыта, проявляет разную степень хромоты, имеет высокую ступенчатую походку и медленно ходит</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>213</td>
<td>LRP4_SNPchr15_77682052</td>
<td>Мутация обнаружена в гене белка 4, связанным с рецептором LDL. Сопровождается синдактилией (нога мула)</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>214</td>
<td>LRP4_SNPchr15_77686731</td>
<td>Мутация обнаружена в гене белка 4, связанным с рецептором LDL. Сопровождается синдактилией (нога мула)</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>217</td>
<td>GART_SNPchr1_1277227</td>
<td>Гаплотип голштинского скота (HH4). Повышенная вероятность эмбриональ­ной и постэмбриональной смертности</td>
<td>A/A</td>
<td>A/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>218</td>
<td>ITGB2_SNPchr1_145114963</td>
<td>Синдром врожденного иммунодефицита (Bovine Leukocyte Adgesion Defiency, BLAD)</td>
<td>T/T</td>
<td>T/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>219</td>
<td>CLCN7_SNPchr25_1137017+CLCN7_SNPchr25_1137019</td>
<td>Остеопетроз (OS) – заболевание костей, приводящее к тяжелым нарушениям в организме животного. Дефект активности остеокластов приводит к образованию чрезмерно хрупких костей. Больные телята рождаются, как правило, раньше срока мертвыми. Заболевание имеет аутосомно-рецессив­ный тип наследования</td>
<td>G/G</td>
<td>G/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>220</td>
<td>COL7A1_SNPchr22_51873390</td>
<td>Буллезный эпидермолиз (БЭ) – нас­ледственное буллезное заболевание животных, характеризующееся крайней хрупкостью кожии слизистых оболочек при механическом воздействии</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>221</td>
<td>FECH_SNPchr24_57298883</td>
<td>Врожденная эритропоэтическая протопорфирия – генетическое заболевание, приводящее к тяжелой форме фотосенсибилизации (повышенной чувствительности организма, чаще кожи к свету). Кроме боязни света у животных наблюдается повреждение кожи<br />
и слизистых оболочек, иногда случаются припадки и судороги</td>
<td>G/G</td>
<td>G/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 4</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>223</td>
<td>FANCI_SNPchr21_21184873</td>
<td>Синдром брахиспина (BS) – редкий рецессивный генетический дефект молочного голштинского крупного рогатого скота. Риск эмбриональной смертности</td>
<td>T/T</td>
<td>T/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>225</td>
<td>ATP2A1_SNPchr25_26197204</td>
<td>Врожденная мышечная дистония 1-го и 2-го типов – наследственное заболевание с аутосомно-рецес­сивным типом наследования, широко распространенное в бельгийской голубой породе. У всех телят с CMD наблюдаются генерализованные мышечные контрактуры (непроизвольное обширное напряжение мышц), нарушение глотания, высокая степень утомляемости, длительные мышечные спазмы</td>
<td>C/C</td>
<td>C/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>226</td>
<td>ATP2A1_SNPchr25_26197429</td>
<td>Врожденная мышечная дистония 1-го и 2-го типов</td>
<td>C/C</td>
<td>C/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>227</td>
<td>ATP2A1_SNPchr25_26198573</td>
<td>Врожденная мышечная дистония 1-го и 2-го типов</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>229</td>
<td>SLC6A5_SNPchr29_24610561</td>
<td>Врожденная мышечная дистония 1-го и 2-го типов</td>
<td>A/A</td>
<td>A/G</td>
<td>G/G</td>
</tr>
<tr>
<td>230</td>
<td>SLC37A2_SNPchr29_28879810</td>
<td>Аборт из-за гаплотипа MH2<br />
у <em>Bos taurus</em></td>
<td>T/T</td>
<td>T/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>231</td>
<td>PYGM_SNPchr29_43611783</td>
<td>Гликогенное заболевание (V). Наследственное заболеваниес аутосомно-рецессивным типом наследования</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>235</td>
<td>KRT5_SNPchr5_27545478</td>
<td>Врожденный буллезный эпидермолиз – наследственное заболевание,<br />
которое характеризуется преимущественно хрупкостью и другими дефектами кожи и слизистых оболочек. Может наблюдаться деформация и отслоение копыт. Пораженные телята чаще всего погибают в возрасте 1–4 нед. Буллезный эпидермолиз распространенв голштинской породе КРС</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>236</td>
<td>APAF1_SNPchr5_63150400</td>
<td>Гаплотип (HH1), связанный с эмбриональной смертностью. Гаплотип HH1, связанный с эмбриональной смертностью на разных сроках стельности, картирован на 5-й хромосоме</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 4</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>237</td>
<td>HEPHL1_SNPchr29_695072</td>
<td>Гипотрихоз. У крупного рогатого скота с мутацией в гене HEPHL1 отсутствуют волосяной покров при рождении частично или по всему телу: часто грудь, шеяи ноги. Пострадавшие животные более чувствительны к окружающей среде, кожным инфекциям, вредителям, солнечным ожогам, холодовому стрессу</td>
<td>T/T</td>
<td>T/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>238</td>
<td>IFNGR2_SNPchr1_1390292</td>
<td>Мутация в гене IFNGR2 ассоциирована с туберкулезом. Дефектыв IFNGR2 являются причиной менделевской восприимчивостик микобактериальному заболеванию (MSMD), также известному как семейная диссеминированная атипичная микобактериальная инфекция. MSMD представляет собой генетически гетерогенное заболевание с аутосомно-рецессивным, аутосомно-доминантным или X-связанным наследованием</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>239</td>
<td>KDM2B_SNPchr17_56010031</td>
<td>ДисплазияPaunch Calf Syndrome. Телята обычно мертворожденны, имеют аномальное развитие нескольких органов, лицевые деформации и расширенный желудок, наполненный жидкости. У некоторых пораженных телят также есть выступающий языки расщепленное нёбо</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>240</td>
<td>KDSR_SNPchr24_62138835</td>
<td>Спинальная мышечная атрофия (SMA). Относится к нейродегенеративным заболеваниям. Причиной болезни является мутация в гене KDSR, кодирующем 3-кетодигидросфингозинредуктазу, которая катализирует важнейшие процессы в метаболизме гликосфинголипидов</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>241</td>
<td>KRT74_SNPchr5_27490704</td>
<td>Мутация в гене кератин 74. Аутосомно-доминантная патология волосяного покрова животного (ADWH), также связана с мутацией гена KRT74 – это редкое заболевание, характеризующееся плотно скрученными волосами</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 4</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>245</td>
<td>LYST_SNPchr28_8508619</td>
<td>Синдром Чедиак-Хигаси (CHS) представляет собой аутосомно-рецессив­ное расстройство, которое поражает несколько видов, включая мышей, людей и крупный рогатый скот.Вызывает нарушение работы белка регулятора транспорта лизосом, что приводит к изменениям в размере, структуре и функции лизосом</td>
<td>T/T</td>
<td>T/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>246</td>
<td>MFN2_SNPchr16_42562057</td>
<td>Aксонопатия. Телята часто имеют широкую постановку ног и начинают терять контроль над задними лапами<br />
в возрасте 1 мес, в дальнейшем они<br />
не могут стоять. Хотя болезнь не смертельна, пораженные телята, как правило, подвергаются эвтаназии<br />
в возрасте 10 мес</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>247</td>
<td>MITF_SNPchr22_31746502</td>
<td>Синдром белого симментала (GWFS) – аутосомально-доминантное генетическое заболевание, которое характеризуется гипопигментацией, гетерохромией радужки, дефектами оболочки глаз и двусторонней потерей слуха</td>
<td>C/C</td>
<td></td>
<td>C/A</p>
<p>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>248</td>
<td>MAN2B1_SNPchr7_13956640</td>
<td>Маннозидоз – это рецессивное генетическое заболевание, связанное с нарушением работы лизосомальной альфа-маннозидазы – низкоспецифичной экзогликозидазы, основная функция которой – деградация гликопротеинов</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>249</td>
<td>MAN2B1_SNPchr7_13957949</td>
<td>Маннозидоз. AM_961 (обнаружена<br />
в линиях Angus и Murray Grey):</td>
<td>T/T</td>
<td>T/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>250</td>
<td>MITF_SNPchr22_31769189</td>
<td>Синдром белого симментала (GWFS) – аутосомально-доминантное генетическое заболевание, которое характеризуется гипопигментацией, гетерохромией радужки, дефектами оболочки глаз и двусторонней потерей слуха</td>
<td>T/T</td>
<td></td>
<td>T/A</p>
<p>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>251</td>
<td>OPA3_SNPchr18_53546443</td>
<td>Кардиомиопатии – тяжелые дегенеративные заболевания миокарда, которые приводят к сердечной недостаточности. В течение последних трех десятилетий дилатационная кардиомиопатия быков (BDCMP) получила широкое распространение в голштинской и симментальской породах крупного рогатого скота</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 4</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>252</td>
<td>GLRA1_SNPchr7_65080197</td>
<td>Врожденный миоклонус – это наследственное аутосомно-рецес­сивное заболевание, которое ранее было известно, как нейроаксиальный отек. У животных с ICM наблюдается аномальная реакция на различные тактильные, зрительные и слуховые раздражители в виде гиперестезии и миоклонических судорог скелетных мышц</td>
<td>G/G</td>
<td>G/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>253</td>
<td>PLD4_SNPchr21_71001232</td>
<td>Врожденный дефицит цинка (ZDL).Это заболевание характеризуется нарушением функции иммунной системы, замедлением роста и кожными изменениями, вследствие нарушения абсорбции цинка в кишечнике</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>254</td>
<td>RASGRP2_SNPchr29_43599204</td>
<td>Тромбопатия – генетическое заболевание, связанное с нарушением свертываемости крови, происходящим в результате блокировки высвобождения АДФ из тромбоцитов. У больных животных количество тромбоцитов находится в норме, но их функция нарушена, что приводит к нарушению свертываемости крoви</td>
<td>A/A</td>
<td>A/G</td>
<td>G/G</td>
</tr>
<tr>
<td>255</td>
<td>RNF11_SNPchr3_95601697</td>
<td>Карликовость. Мутация в гене RNF11 (ассоциирована с нарушением регуляции белкового комплекса А20, что приводит к различным патологиям роста и развития)</td>
<td>A/A</td>
<td>A/G</td>
<td>G/G</td>
</tr>
<tr>
<td>256</td>
<td>SLC35A3_SNPchr3_43412427</td>
<td>Комплексный порок позвоночника (CVM) – сложный тератологический синдром телят голштинской породы, заключающийся, прежде всего, в выкидышах, преждевременных родах, мертворождении или смерти телят в первые дни жизни, а значит увеличивающий смертность молодняка и воспроизводительные способности скота. Самым ярким проявлением этой аномалии, о чем говорит уже само ее название, являются многочисленные уродства скелета. Cмертность на стадии эмбриона</td>
<td>G/G</td>
<td>G/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 4</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>257</td>
<td>SLC39A4_SNPchr14_1723331</td>
<td>Акродерматит энтеропатический. Заболевание, обусловленное нарушением всасываемости в кишечнике за счет дефицита цинка и отсутствия фермента олигопептидазы. Мутации в гене SLC39A4 приводят к дефициту протеина, ответственного за всасывание цинка, что ведет к грубому изменению метаболизма цинка</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>258</td>
<td>IARS_SNPchr8_85341291</td>
<td>Перинатальный синдром слабого теленка. Соответствует понятию «физиологическая незрелость» новорожденных (иногда называют «синдром слабых телят»). У таких животных снижен мышечный тонус, тормозится реализация позы стояния (они не могут подняться на ноги в течение первых двух часов после рождения), сосательный рефлекс появляется с запозданием и слабо выражен, отмечают безучастное отношение к окружающему, сгорбленную позу</td>
<td>C/C</td>
<td>C/G</td>
<td>G/G</td>
</tr>
<tr>
<td>259</td>
<td>SMC2_SNPchr8_95410507</td>
<td>Голштинский гаплотип НН3. Оказывает влияние на процент успешных осеменений (с наступлением стельности) и ассоциирован с эмбриональной и ранней постэмбриональной смертностью</td>
<td>T/T</td>
<td>T/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>260</td>
<td>SPAST_SNPchr11_14760164</td>
<td>Спинальная демиелинизация (SDM). Нейродегенаритивное заболевание характеризуется патологическими изменениями миелиновой оболочки спинного мозга. Болезнь связана с нарушением работы белка спастина, которое приводит к потере АТФазной активности этого белка</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>261</td>
<td>TG_SNPchr14_9487659</td>
<td>Врожденный зоб щитовидной железы (CG) – это аутосомно-рецессивное на­следственное заболевание, вызванное мутацией в гене TG, который кодирует белок тиреоглобулин. CG является первым генетическим заболеванием среди всех доместицированных видов животных, для которых была описана молекулярно-генетическая природа</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 4</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>262</td>
<td>TYRP1_SNPchr8_31711945</td>
<td>Глазокожный альбинизм</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>263</td>
<td>UBE3B_SNPchr17_65921497</td>
<td>Мутация в гене UBE3B – убиквитин-белковой лигазы E3B</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>264</td>
<td>UMPS_SNPchr1_69756880</td>
<td>Дефицитуридинмонофосфатсинтетазы (Deficiency of Uridine-5-Monophos­phate Synthase, DUMPS).</p>
<p>DUMPS – это наследственное летальное аутосомно-рецессивное заболевание в голштинской популяции, приводящее к ранней эмбриональной смерт­ности на стадии имплантации эмбриона в матку. Это связано с нарушением синтеза уридин-монофосфата в организме, который является одним из ключевых элементов при синтезе de novo пиримидиновых нуклеотидных оснований. Смертность эмбриона наступает примерно на 40 день после оплодотворения</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>265</td>
<td>F8_SNPchrX_38971744</td>
<td>Гемофилия А (FVIIID; OMIA 000437-9913) представляет собой нарушение свертываемости крови, описанное как у человека, так и у многих видов домашних животных (лошадей, овец),<br />
в том числе у крупного рогатого скота. Заболевание связано с дефицитом фактора VIII свертывания крови – плазменного гликопротеина, ген которого расположен на Х хромосоме</td>
<td>A/A</td>
<td>A/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В первом столбце указан порядковый номер SNP на панели. Во втором столбце приведено наименование <a id="post-11716-__DdeLink__27549_2048640829"></a>однонуклеотидного полиморфизма (SNP) (например, для SNP с порядковым номером 2 – это «ARS-BFGL-BAC-19454» (один из 100 дополнительно введенных в целях более точного определения родства полиморфизм), а для SNP с порядковым номером 265 – это «F8_SNPchrX_38971744» (мутация, приводящая к развитию гемофилии А, дефицит фактора VIII свертываемости крови). В столбце 3 описано влияние замены на физиологическое состояние индивида, т. е. дана информация о генетически наследуемом признаке или заболевании, с которым ассоциирован данный однонуклеотидный полиморфизм (так для SNP с порядковым номером 265 – «F8_SNPchrX_38971744», в таблице это гемофилия А).</p>
<p>В четвертом столбце указан конкретный нуклеотид аллеля, представленный в качестве референсного (наиболее представленного) для соответствующего SNP в базах данных (так, для SNP № 2 «ARS-BFGL-BAC-19454» – это цитозин – С), а в пятом столбце указаны альтернативные аллели в соответствующей популяции (или возможные, помимо референсного), в случае «ARS-BFGL-BAC-19454» – это тимин.</p>
<h2><strong>3 НОВЫЙ МЕТОД ДНК-ДИАГНОСТИКИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА НА ОСНОВЕ БИОЧИПОВ «TRUSEQ BOVINE PARENTAGE SEQUENCING PANEL»</strong></h2>
<p>Современное животноводство, используя самые последние достижения фундаментальных биологических наук, в том числе и генетики, позволяет добиваться увеличения эффективности разведения животных. Идентификация генов, которые определяют то или иное развитие количественных признаков, а также их мутаций, поиск молекулярно-генетических маркеров, тесно сцепленных с ними, является<br />
в настоящее время предметом интенсивных исследований.</p>
<p>В настоящее время, разработан уникальный метод анализа, отвечающий мировым стандартам – ДНК-диагностики крупного рогатого скота на основе панели (биочипа) «TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel». Метод дает возможность одновременного анализа 263 аллельных вариантов генов-маркеров патологий, признаков продуктивности и устойчивости к заболеваниям. Его отличительной особенностью является высокая точность генотипирования и надежность.</p>
<p>Исходя из рекомендаций Международного общества по изучению генетики животных (ISAG), по каждому животному определяются важные индивидуальные мутации (SNP/варианты – singlenucleotidepolymorphism – однонуклеотидных полиморфизмов). Достоверность происхождения контролируется по 200 SNP. Ассоциированных с заболеваниями и продуктивностью замен будет определено 48, в том числе гаплотипы фертильности – 12; летальные наследуемые заболевания (цитруллинемия, врожденная мышечная дистония, кардиомиопатия и т. д.) – 17; нелетальные неблагоприятные состояния (синдром Марфана, протопорфирия, гемофилия А и т. д.) – 19; признаки продуктивности – 15 (фертильность быков – 1; рост и развитие животного – 4; качество мяса – 4;<br />
качество молока – 6).</p>
<h3><strong>3.1 Мутация в половом стероидсвязывающем<br />
глобулин гене (Sex Hormone-Binding Globulin, SHBG)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 202. SNPchr19_27956790. Мутация в половом стероидсвязывающем глобулин гене (Sex hormone-binding globulin, SHBG), расположенном на 19 хромосоме быков.</p>
<p>SHBG является транспортером андрогена, который регулирует скорость метаболизма в плазме стероидных гормонов, контролируя их концентрацию (Fritz S. [et al.], 2013). Существует много примеров эмбриональной летальности, связаннойс дефицитом ферментов, участвующих в синтезе половых стероидов или их рецепторов, что указывает на то, что эти гормоны играют существенную роль в процессе развития (Khatib H. [et al.], 2009). Кроме того, отсутствие белка S – одного из двух известных паралогов SHBG – вызывает эмбриональную летальную коагулопатию и сосудистый дисгенез (Khatib H. [et al.], 2009). В совокупности эти наблюдения подтверждают возможную связь между дефицитом SHBG и потерей плодовитости, связанным с гаплотипом MH1. Данная мутация (g.27956790C &gt; T) вводит преждевременный стоп-кодон в половом стероидсвязывающем глобулине, что приводит к потере приблизительно 90 % этого белка (SHBG p.Q52X). Ниже представлены последовательности праймеров, используемые для генотипирования SHBG: g.27956790C &gt; T мутации на бычьей хромосоме 19 и валидации путем секвенирования ампликона с мутацией SHBG: g.27956790C &gt; T. Этот единичный нуклеотидный вариант был генотипирован с использованиемполиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) – PCRRestrictionsFragmentLengthPolymorphism. Даны праймерные пары, размер ампликона 137 пар оснований (bp) и температуре отжига 63 °C (AT). Нуклеотид T заменяется на G (жирным шрифтом и скобками) в ходе ПЦР несоответствия, чтобы создать сайт рестрикции BsmFI:</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Forward primer (5’–3’)</th>
</tr>
<tr>
<th>CCTGCTCTGCACCTCAGCAGTGGTCC<strong>[G]</strong>GGA</th>
</tr>
<tr>
<th>Reverse primer (5’–3’)</th>
</tr>
<tr>
<th>AGCTGATGGAGAGAGGGTGA</th>
</tr>
</thead>
</table>
<p>Ниже представлена хроматограмма для SHBG: g.27956790C &gt; T мутации гомозиготной мутированной коровы и ее гетерозиготного родителя:</p>
<p><img width="1453" height="643" class="wp-image-11724" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-7.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-7.jpeg 1453w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-7-300x133.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-7-1024x453.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-7-768x340.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1453px) 100vw, 1453px" alt="word image 7 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<h3><strong>3.2 Мышечная аномалия передних конечностей у КРС</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 203. SNPchr26_36951321. Мышечная аномалия передних конечностей у КРС (Forelimb-girdlemuscularanomaly).</p>
<p>Мышечная аномалия передних конечностей – это аутосомно-рецессивное расстройство Японской черной породы коров, характеризующееся тремором, астазией и аномальной формой плеч. Патологическое исследование пораженных животных выявляет гипоплазию мышц передних конечностей с уменьшенным диаметром мышечных волокон. За эту аномалию ответственна мутация g.36951321C &gt; T на 26 хромосоме. Анализ гаплотипов с использованием дополнительных маркеров в этом регионе уточнил критический участок локуса интервалом 3,5 Мб на хромосоме 26 между BM4505и MOK2602. Путем сравнительного картографирования выявлены несколько потенциальных генов-кандидатов для мутаций, включая NRAP, PDZD8и HSPA12A, которые связаны с мышечной функцией (Masoudi A.A., Uchida K., Yokouchi K., Miyadera K., OgawaH., SugimotoY., KuniedaT., 2007).</p>
<h3><strong>3.3 Синдром легочной гипоплазии и анасарка (РНА)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 204. SNPchr6_89169686. Синдром легочной гипоплазии и анасарка (РНА).</p>
<p>Синдром легочной гипоплазии и анасарка (PHA, OMIA 001562–9913, Online Mendelian Inheritance in Animals) – редкая врожденная аномалия<br />
у крупного рогатого скота, которая характеризуется водянкой плода, включая сильный подкожный отек (anasarca) и неразвитые или слабо сформированные легкие (легочная гипоплазия) (Whitlock B. K., Coffman E. A., 2015).</p>
<p>Эмбриональная водянка определяется как чрезмерное скопление жидкости внутри внесосудистых отделений плода и полостей тела. Ранее случаи (РНА) отмечались у пород крупного рогатого скота, таких как австралийских Декстер, Галловейская, Мейн-Анжу и Шоргорн.</p>
<p>Гипоплазия легкого и его долей – порок, при котором имеется одновременное недоразвитие бронхов и легочной паренхимы. Выделяют <em>простую<br />
и кистозную формы гипоплазии</em>. При простой гипоплазии имеется равномерное недоразвитие легкого, отдельных его долей или сегментов. При кистозной гипоплазии недоразвитие легкого или его долей сопровождается кистозным перерождением респираторного отдела легкого.</p>
<h3><strong>3.4 Мутация, ассоциированная с синдромом Марфана (MFS)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 205. FBN1_SNPchr10_62054844;<br />
206. FBN1_SNPchr10_62141461. Мутация, ассоциированная с синдромом<br />
Марфана (MFS).</p>
<p>Синдром Марфана (MFS) – наследственное аутосомно-доминантное заболевание крупного рогатого скота, связанное с мутацией в гене <em>FBN1 </em>10хромосомы <em>Вostaurus</em>. Одной из причин СМ – аутосомно-доминантного заболевания соединительной ткани – являются мутации в гене фибриллина-1 (cтарт 61876888, стоп 62142761), аномалия которого способствует избыточной активации трансформирующего ростового фактора-β (TGF–β). Увеличенная активность TGF–β может способствовать мультисистемному проявлению патологического процесса, включая развитие миксоматозных изменений атриовентрикулярных клапанов, аневризмы и расслоения аорты, гипермобильности суставов.</p>
<p>Синдром Марфана у КРС обладает всеми клиническими и патологическими признаками аналогичного заболевания человека. Патологические процессы развиваются в сердечно-сосудистой и костно-мышечной системах, глазах, коже и кожных покровах – аневризма аорты, пролапс митрального клапана, суставная гипермобильность, деформация передней грудной клетки, деформация позвоночного столба и многие другие (Hirano T., Matsuhashi T., Kobayashi N., Watanabe T., Sugimoto Y., 2012).</p>
<p><em>Картирование</em>.кДНК-последовательность гена FBN1 крупного рогатого скота была охарактеризована, а гибрид соматической клетки – к синтаксической группе U5, что соответствует хромосоме BTA10 (Potter K. A., Besser T. E., 1994). Этот результат подтвержден путем сопоставления связей SNP в гене FBN1 с хромосомой BTA10, «10 см от BM888 (LOD = 4,88) и 14 см от INRA096 (LOD = 3,77)».</p>
<p>Молекулярная основа: путем секвенирования кДНК почти определенного сравнительного гена-кандидата (на основе гомологичной человеческой мутации), а именно FBN1, у пораженных телят породы Лимузин (SingletonC., MitchellA.L., ByersP. H., PotterK. A., Pace J. M., 2005) обнаружил причинную мутацию в этой породе как переход 3598G &gt; A в экзоне 29, что привело к возможной замене глутаминовой кислоты лизином в положении 1200 в качестве причины этого синдрома.</p>
<p>Известно о мутации «G &gt; A на сайте интрон-крекинга intron64 (c.8227-1G &gt; A)» как причинной для болезни Марфана на японском черном скоте. «Мутация вызывает 1-базовое смещение сайта accepter-сплайсинга интрона 64 в направлении 3&#8242; и делецию 1-бета в обработанной мРНК. Эта делеция с 1 базой создает преждевременный терминальный кодон и более короткий фибриллин на<br />
125 аминокислот – 1 из мутантной мРНК».</p>
<h3><strong>3.5 Мутация, вызывающая нейропатическую гидроцефалию (NH)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 207. SNPchr7_17645428. Мутация, вызывающая нейропатическую гидроцефалию (NH).</p>
<p>Нейропатическая гидроцефалия (NH) является генетическим заболеванием крупного рогатого скота во всем мире. В последние годы заболевание чаще всего выявлялось в абердин-ангуской породе. Одна мутация, вызывающая NH у абердин-ангусского крупного рогатого скота, была широко распространена во всем мире за последнее десятилетие у потомков GAR Precision 1680, популярного AI производителя во многих мраморных линиях абердин-ангуссов. Предполагается, что NH-мутация произошла как спонтанная мутация в GAR Precision 1680. Большинство случаев NH приводят к ранним абортам. NH телят, которые рождаются намного меньшим весом для регистрационного возраста (вес при рождении &lt; 15 кг). Череп значительно увеличен. Кости черепа неправильны и выглядят как свободно организованные костные пластины, которые разваливаются при открытии полости. Полость черепа заполнена жидкостью,<br />
и никакая узнаваемая ткань головного мозга не проявляется. Спинной канал также расширен и не наблюдается спинной ткани.</p>
<p>Этиология болезни, которая встречается преимущественно у крупного рогатого скота абердин-ангусской породы, не полностью понята. В пораженных стадах абердин-ангуссов одновременный артрогрирозный мультиплекс (AM) распространен просто потому, что GAR Precision 1680 также был носителем отдельной мутации, ответственной за AM, унаследовав мутацию AM от его отца. Внутриматочные вирусные инфекции у плода также были инкриминированы<br />
в АМ, включая вирус Акабана, вирусную диарею крупного рогатого скота, вирус Шмалленберга, вирус кэш-долины и синий язык (Herder V. [et al.], 2012). Телята, пораженные мутацией абердин-ангусса, как правило, мертворожденные. Большинство из них умирают на ранней стадии беременности и резорбируются, но пропорция может сохраниться до поздней беременности, что приводит к мертворождению теленка с небольшим размером тела и небольшими часто артрогрипозными конечностями, но с увеличенной головкой (так называемая «водная голова»). Некоторые пораженные телята могут родиться живыми<br />
и проявлять неврологические признаки торможения головного мозга, включая депрессию, слабость, плохой рефлекс сосания, опущенные уши и голову, слепоту, спазм конечностей, дрожь головы, опоясывание и судороги (Buck B.C.<br />
[et al.], 2009). Напротив, телята абердин-ангуссов с генетической формой АМ обычно являются мертворожденными.</p>
<h3><strong>3.6 </strong><b>Кератоконъюнктивит</b></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 208. SNPchr8_108833985. <b>Кератоконъюнктивит. </b></p>
<p><strong>Кератоконъюнктивит</strong> – быстро распространяющаяся, доброкачественно протекающая болезнь животных различных видов, вызываемая риккетсиподобными микроорганизмами – <em>Chlamydo-zoon cojunctivae</em>. Инфекционный бычий кератоконъюнктивит, также называемый <em>синдромом красных глаз</em>, вызван прежде всего бактерией <em>Moraxella bovis</em>. Мухи, высокие сорняки и травы могут воздействовать на раздражение глаз и распространять болезнь от одного животного к другому. С каждым аллелем &#8216;G&#8217; животное уменьшает свой риск заражения pinkeye на 8–13 %. Таким образом, животное, которое является гомозиготным для аллелей, имеет риск инфицирования розоватым белком на 16–26 % (Kataria R. S., Tait R. G., Kumar D., Ortega M. A., Rodiguez J., Reecy J. M., 2011). Это заболевание может привести к снижению веса. Если оба глаза заражены<br />
и нелечены, то животное может стать слепым. Породы, которые не имеют пигмента на их веках, таких как герефордская и шаролезская, более восприимчивы к инфекции розового глаза. Заболевание вызывает воспаление роговицы (прозрачный наружный слой) и onjunctiva (розовая мембрана, выстилающая веки) глаза. Если его не лечить, это вызовет изъязвление, которое выглядит как отверстие в роговице. После лечения они могут казаться облачным синим или иметь белый шрам.</p>
<p>За заболевание ответствененTLR4 (Toll-LikeReceptor 4). Он расположен на 8 хромосоме: g.108833985A&gt;G, с.94-24A&gt;G, rs8193046.</p>
<p>Фланкирующая последовательность(Whittier W. D., Currin J. F., Cur­rin N., 2009):</p>
<p>GGTTGACTGGTCTCTTTGCTCGTCCCAGTAGCCTCCAAGGCTGTAGTCTAGGAGAGGAGAGTTGCTTGGAAGTCTGCTAAGGTGCATGCAGGAAGACACC[A/G]CATCTAATATCTAATCATTTCAGGTTGTTCCTAACATTAGTTACCAGTGCATGGAGCTGAATCTCTACAAAATCCCCGACAACATCCCCATATCAACCAA.</p>
<h3><strong>3.7 Мутация в гене АТФ-связывающего кассетный член 2 подсемейства G (ATP Binding Cassette Subfamily G Member 2)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 209. ABCG2_SNPchr6_38027010. Мутация<br />
в гене АТФ-связывающего кассетный член 2 подсемейства G (ATP Binding Cassette Subfamily G Member 2).</p>
<p>Связанный с мембраной белок, кодируемый этим геном, включен в суперсемейство АТФ-связывающих кассетных (АВС) транспортеров. Белки ABC переносят различные молекулы через экстра- и внутриклеточные мембраны. Гены ABC делятся на семь различных подсемейств (ABC1, MDR / TAP, MRP, ALD, OABP, GCN20, White). Этот белок является членом подсемейства White. В качестве альтернативы, называемой белком устойчивостик раку молочной железы, этот белок функционирует как транспортер ксенобиотиков, который может играть роль в устойчивости к множественным лекарственным средствам, к химиотерапевтическим агентам, включая аналоги митоксантрона и камптотецина. Ранние наблюдения за значительной опосредованной ABCG2 резистентностью к антрациклинам впоследствии были связаны с мутациями, встречающимися<br />
<em>in vitro</em>, но не в природе или в клинике.</p>
<p>Значительная экспрессия этого белка наблюдалась в плаценте (<a href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene?Db=gene&amp;Cmd=ShowDetailView&amp;TermToSearch=9429" target="_blank" rel="noopener">https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene?Db=gene&amp;Cmd=ShowDetailView&amp;TermToSearch=9429</a>),и было показано, что она играет роль в защите плода от ксенобиотиков в материнском кровообращении (Vlaming M. L., Lagas J. S., Schinkel A. H., 2009).Так, транспортер играет защитную роль в блокировании абсорбции на апикальной мембране кишечника, а также на бартере крови-яичка, гематоэнцефалический барьер (Vlaming M. L., Lagas J. S., Schinkel A. H., 2009)и мембраны гемопоэтического предшественника и других стеблей клетки. На апикальных мембранах печени и почек он усиливает экскрецию ксенобиотиков. В лактирующей молочной железе он играет роль в выделении витаминов, таких как рибофлавин и биотин, в молоко (Vlaming M. L., Lagas J. S., Schinkel A. H., 2009). В почках и желудочно-кишечном тракте он играет роль в экскреции урата.</p>
<h3><strong>3.8 Цетруллинемия (Citrullinaemia, СТ)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 210. ASS1_SNPchr11_100802781. Цетруллинемия (Citrullinaemia, СТ).</p>
<p>Цитруллинемия – это аутосомно-рецессивное расстройство, которое для животных является летальным в раннем постнатальном периоде. Больные ВС телята рождаются нормальными, но через несколько дней (до 7) умирают. Это заболевание вызвано дефицитом аргининосукцинатсинтетазы (ASS) – фермента цикла мочевинообразования. Пониженный уровень экспрессии белка ASS ведет к повышению уровня цитруллина в крови, в тканях и накоплению аммиака в мозге больных телят. Впервые ВС была обнаружена в Австралии, где один из 250 рожденных телят был предположительно болен и более 10 % животных фризской породы были носителями данного заболевания (Hagemo­ser W. A., Roth J. A., Lofstedt J., Fagerland J., 1983).</p>
<p>Родоначальником BC считается канадский бык-производитель Linmack Kriss King (Grupe S., Diet G., Schwerin M., 1996).</p>
<p>Молекулярные причины заболевания телят ВС были выяснены в 1989 г.<br />
(у человека цитруллинемия стала известна гораздо раньше) (Gerbens F., Rettenberger G.,LenstraJ.A., VeerkampJ. H., Те PasM. F., 1997). Для определения полной нуклеотидной последовательности гена ASS, тотальная мРНК была выделена из печени больных телят, синтез кДНК осуществлялся с помощью обратной транскриптазы. Было проанализировано несколько клонов и показано, что по сравнению со здоровыми заболевшие животные в исследуемом гене несут две мутации С → Т в 86 и 175 кодонах. Первая замена превращает кодирующий триплет аргинина (CGA/Arg) в стоп-кодон (TGA/STOP). В нуклеотидной последовательности укороченной формы гена исчезает сайт узнавания рестриктазой AvaII и синтезируется укороченная форма фермента, не имеющая физиологической активности. Вторая мутация является молчащей, но в нуклеотидной последовательности гена ASS заболевших животных исчезает сайт узнавания рестриктазой DdeI.</p>
<p>Поскольку все идентифицированные мутации находились в области экзонов, для идентификации локусов, содержащих вышеупомянутые замены, были разработаны две системы праймеров (I, II соответственно), позволяющие амплифицировать исследуемые фрагменты по матрице геномной ДНК (Gerbens F., Rettenberger G.,LenstraJ.A., VeerkampJ. H., Те PasM. F., 1997):</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>forASS 5’-GTGTTCATTGAGGACATC-3’;</p>
<p>revASS 5’-CCGTGAGACACATACTTG-3’ (I).</td>
</tr>
<tr>
<td>forASS 5’-CAACATGGAATCCCCGTC-3’;</p>
<p>revASS 5’-CTGATATGCATCAGGTTC-3’ (II).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Сравнительный рестрикционный анализ полученных фрагментов позволяет однозначно установить носителей ВС.</p>
<p>До настоящего времени многие протоколы генотипирования крупного рогатого скота по ASS-гену ведутся с использованием системы (I) (Gerbens F., Rettenberger G.,LenstraJ.A., VeerkampJ. H., Те PasM. F., 1997; McClure M., Kim E., Bickhart D., Null D., Cooper T., Cole J., Wig-gans G., Ajmone-Marsan P., Colli L., Santus E., Liu G. E., Schroeder S., MatukumalliL., VanTassellC., SonstegardT., 2013).</p>
<p>В некоторых случаях, как например для увеличения специфичности связывания с геномной ДНК, в используемых праймерах наращивают количество нуклеотидных фрагментов (Sonstegard T. S., Cole J. B., VanRadenP. M., VanTassellC. P., NullD. J., SchroederS. G., BickhartD., McClure M. C., 2013):</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>forASS 5’-GGCCAGGGACCGTGTTCATTGAGGACATC-3’;</p>
<p>revASS 5’-TTCCTGGGACCCCGTGAGACACATACTTG-3’.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<h3><strong>3.9 Гаплотип джерсейского скота (JH1)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 211. CWC15_SNPchr15_15707169. Гаплотип джерсейского скота (JH1).</p>
<p>Аутосомно-рецессивная смертельная мутация гомолога CWC15 (гомолог сплайсосома-ассоциированного белка CWC15) на хромосоме 15: g.15707169C&gt;T, c.163C&gt;T, p.Arg55X. Используя данные генотипа от десятков тысяч североамериканских голштейнов и крупного рогатого скота Брауна, каждый из которых генотипирован приблизительно 50 тыс. SNP на BovineSNP50 BeadChip<br />
(VanRaden P. M., Olson K. M., Null D. J., Hutchison J. L., 2011) выявил пять новых рецессивных смертельных гаплотипов путем поиска общих гаплотипов, которые никогда не гомозиготы у живых животных. Один из этих гаплотипов встречается только в Трициклах и (по соглашению, предложенному коллективом по разведению) P. M. VanRaden с соавторами(2011) назвал его JH1, где<br />
J обозначает Джерси и H – для гаплотипа. Он отображает хромосому BTA15 на 13–18 Мб (сборка генома UMD 3.0).</p>
<p>T. S. Sonstegardссоавторами(SonstegardT. S., ColeJ. B., VanRadenP. M., VanTassellC. P., NullD. J., SchroederS. G., BickhartD., McClure M. C., 2013) исследовал смертельный гаплотип Джерси,а именно гаплотип JH1 на хромосоме BTA15. Они сначала уточнили гаплотип «в 15-маркерное окно (15,162,470 до 15,949,175)», а затем получили целую геномную последовательность от<br />
11 быков, несущих этот гаплотип. Анализ последовательности этих носителей<br />
в области кандидата выявил «SNP с высоким коэффициентом усиления при останове», расположенный в позиции 15707,169 на БТА 15. Этот SNP-переход С-Т-T приводит к тому, что аргинин превращается в стоп-кодон в экзоне 3 CWC15, гомолог белка CWC15 бычьего белка с ассоциированным с spliceosome белком. Эта бессмысличная мутация уменьшила бы размер белка CWC15 из 231 аминокислоты длиной до 54 аминокислот. Сохраненный домен NCBI для поиска на белковом продукте CWC15 крупного рогатого скота показывает, что этот усеченный белок не будет иметь сохраненный домен Cwf_Cwc_15 (pfam04889), присутствующий в дикой природе».</p>
<p>Фланкирующая последовательность мутации:</p>
<p>AATTGTCTTCCATTACTACAGCTGTGTGTTTTTTAGAAGTGACTTTGCCTTGTCTTGTTTCTACTTTAGACAGACCACTCAGGATGCCCCTGAAGAGGTT[C/T]GAAACCGTGACTTCAGGAGAGAGTTGGAGGAGAGAGAGAGAGCTGCTGCAAGAGAAAAAAACAGAGATCGGCCAACCCGAGGTACCAATACTATCTTAGA.</p>
<h3><strong>3.10 Синдактилия (мулья нога)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 212. LRP4_SNPchr15_77667135. Синдактилия (мулья нога).</p>
<p>Во многих странах у многих пород крупного рогатого скота сообщалось о синдактилии. Однако большая часть документации связана с ее появлением у голштинской породы, разводимой в Америке. Так, обнаружен бык-производитель более 600000 телят, который впоследствии был признан носителем заболевания. Возможность того, что искусственный отбор в пользу гетерозигот способствовал неприемлемо высокой частоте заболевания. Тесты на потомство мужчин были основным средством идентификации носителей до тех пор, пока С. Charlier с соавторами использовал геномный набор ДНК-маркеров<br />
в исследовании, чтобы показать, что рассматриваемый ген расположен на хромосоме 15. Мутация возникает в гене белка 4, связанным с рецептором LDL. Подобная мутация также называется синдактилией, что означает «соединенный палец», сплетенное копыто сливается. Пораженный крупный рогатый скот может иметь 1–4 объединенных копыта, проявляет разную степень хромоты, имеет высокую ступенчатую походку и медленно ходит.</p>
<p>С. Charlier с соавторами провел сканирование генома с 213 микросателлитными маркерами, генотипированными только на 12 синдактильных (ноги мула) животных и на пуле ДНК из 10 несвязанных незараженных животных из той же породы. Сопоставление идентичности по происхождению («поиск общих гомозиготных гаплотипов среди животных с патологией») определило один регион на каждых трех хромосомах как значительный. Генотипирование еще 29 животных из той же родословной, за которой следует обычный анализ сцепления, отображает беспорядок на теломерный конец хромосомы BTA15.</p>
<p>В ходе широкомасштабного изучения гаплотипов BovineSNP50 BeadChip, которые являются общими, но не гомозиготными, P. M. VanRaden (VanRa­den P. M., Olson K. M., Null D. J., Hutchison J. L., 2011) сопоставил это расстройство с BTA15 при 76–82 Мб (сборка генома UMD 3.0), что согласуется с результатами С. Charlier с соавторами.</p>
<p>А. Duchesne (Duchesne А., Gautier M., Chadi S., Grohs C., Floriot S., Gal­lard Y., Caste G., Ducos A., Eggen A., 2006) определили неконсервативную замену CpG / ApT в экзоне 33 (C4863A, G4864T) гена LRP4 крупного рогатого скота, который отлично отделен от беспорядка в голштинской родословной.</p>
<p>E. B. Johnson (Johnson E. B., Steffen D. J., Lynch K. W., Herz J., 2006) сообщили о другой мутации в одном и том же генеу крупного рогатого скота Ангусской породы: «переход от G к A на первом нуклеотиде в сайте донора сплайса интрона 37 полностью отключает этот сайт сплайсинга. Аномальное сращивание, вызванное этой мутацией, предсказывает генерация дисфункционального мембранно-закрепленного рецептора, лишенного нормального цитоплазматического домена.</p>
<h3><strong>3.11 Множественные мутации в гене белка 4, связанном с рецептором LDL</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 213. LRP4_SNPchr15_77675440 + LRP4_SNPchr15_77675516 + LRP4_SNPchr15_77675517. Множественные мутации в гене белка 4, связанным с рецептором LDL.</p>
<p>Множественные мутации в гене белка 4, связанным с рецептором LDL на хромосоме 15, также называются Синдактилией, или «соединенный палец», сплетенное копыто сливается. Пораженный крупный рогатый скот может иметь 1–4 объединенных копыта, проявляет разную степень хромоты, имеет высокую ступенчатую походку и медленно ходит.</p>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 214. LRP4_SNPchr15_77682052. Мутация обнаружена в гене белка 4, связанным с рецептором LDL.</p>
<p>Мутация обнаружена в гене белка 4, связанным с рецептором LDL на хромосоме 15 и найдена в родословной скрещивания (Simmental × Charolais × Holstein) – 15: g.77682052G&gt;A, c.3571G&gt;C, p.Gly1199Ser. Сопровождается синдактилией (нога мула) (Johnson E. B., Steffen D. J., Lynch K. W., Herz J., 2006).</p>
<p>Фланкирующая последовательность мутации:</p>
<p>AGGAACTGTGGGAGGAACCAGCTATTACCGTCTCTTGCCCAGGTTCATGTACTGGACGGACTGGGGGGAGCATGCCAAGTTGGAGCGGTCTGGGATGGAC[G/A]GCTCCGACCGCGCCGTGCTCATCAACAGCAACCTCGGGTGGCCCAACGGACTGACTGTGGACAAGGCCAGCTCCCAGCTGCTCTGGGCTGACGCCCACAC.</p>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 215. LRP4_SNPchr15_77686731. Мутация обнаружена в гене белка 4, связанным с рецептором LDL.</p>
<p>Мутация обнаружена в гене белка 4, связанным с рецептором LDL на хромосоме 15: g.77686731G&gt;A, c.2719G&gt;A, p.Gly907Arg. Она обнаружена в линии Simmental. Сопровождается синдактилией (мулья нога).</p>
<p>Фланкирующая последовательность мутации:</p>
<p>GCCTGCCTGAGTAAGTGCCCCAGACTGACCCCTGTTCCCCTCCCGTTCCCGGGGCTCAGAGTTGCCCACCTGCTCCCCTCTCGACTTTCACTGTGACAAC[G/A]GCAAATGTATCCGCCGCTCCTGGGTGTGCGACGGGGACAACGACTGTGAGGATGACTCGGACGAGCAGGACTGTCGTGAGTGCTGGGCGGGGCTGGGCGG.</p>
<h3><strong>3.12 Коричневый цвет шерсти</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 216. MC1R_SNPchr18_14757910 + MC1R_SNPchr18_14757912 + MC1R_InDelchr18_14757924.Коричневый цвет шерсти.</p>
<p>Четыре аллеля гена MC1R являются доминирующими черными (MC1R_Ed), черным / красным (MC1R_Ebr), красным диким типом (MC1R_E +) и рецессивным красным (MC1R_e). Доминантный черный (Ed) главенствует над тремя другими аллелями, а животные с Ed – черно-белые. Черный / красный, также известный как Telstar (Ebr), приводит к красному цвету при рождении, который меняется на черный в молодом возрасте. При E + животное может быть почти любого цвета, поскольку другие гены диктуют цвет окраски.</p>
<p>Две копии рецессивной красной (e) аллели приводят к красному цвету. Порядок доминирования – Ed &gt; Ebr &gt; E + &gt; e.</p>
<p>Ген MC1R контролирует производство черного и красного пигментов<br />
у крупного рогатого скота. Гольштинский крупный рогатый скот имеет еще один аллель, доминантный красный, в гене COPA, который перекрывает MC1R и производит доминирующий красный пигмент. Если животное гомозиготно как для Ed, так и для е аллелей, он считается гомозиготным по его фенотипу. Это связано с тем, что аллель e вызывает потерю функции гена посредством делеции. Именно она вызывает сдвиг рамки и преждевременный стоп-кодон при аминокислоте 15.</p>
<p>T. G. Berryere (Berryere T. G., Schmutz S. M., Schimpf R. J., Cowan C. M., Potter J., 2003) использовали восемь микросателлитов BTA8 для сопоставления гена TYRP1 крупного рогатого скота с BTA8. Затем они проверили связь между геном TRYP1 крупного рогатого скота и локусом dun в разных породах. Единственной породой, в которой была совместная сегрегация – Декстер. Зная, что ген TYRP1 у крупного рогатого скота Dexter является сильным позиционным геном-кандидатом для фенотипа dun, T. G. Berryere показал, что коричневый цвет у крупного рогатого скота Декстер обусловлен гомозиготностью (замена аминокислоты H434Y в TYRP1 из-за «изменения C-T в нуклеотиде 1300 в экзоне 7» гена TYRP1).</p>
<h3><strong>3.13 Субфертильность быков (BMS)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 217. TMEM95_SNPchr19_27689622. Субфертильность быков (BMS).</p>
<p>В настоящее время, искусственное осеменение получило повсеместное распространение. С целью увеличения репродуктивного успеха, только проверенные в лаборатории образцы спермы могут быть использованы для осеменения. Тем не менее, было установлено, что дефицит трансмембранного белка 95 (TMEM95) у КРС серьезно снижает эффективность осеменения, но при этом не влияет на качество спермы. Дефицит обусловлен мутацией в гене TMEM95, приводящей к потере функции в трансмембранной области белка, и, как следствие,<br />
к снижению процента успешного осеменения до 1,7 %.</p>
<p>Из исследования (Pausch H., Kölle S., Wurmser C., Schwarzenbacher H., Emmerling R., Jansen S., Trottmann M., Fuerst C., Götz K.U., Fries R., 2014) известно, что «данные повторного секвенирования цельного генома у 43 животных выявили потенциальную мутацию (rs378652941, c.483C &gt; A, p.Cys161X)<br />
в трансмембранном белке 95, кодирующем ген TMEM95, который впоследствии был подтвержден. Иммуногистохимические исследования показали, что TMEM95 находится на поверхности сперматозоидов фертильных животных, тогда как отсутствует в сперматозоидах субфертильных животных. Только «1,7 % из 35671 осеменения» были успешными у быков, гомозиготных по мутации.</p>
<h3><strong>3.14 Гаплотип голштинского скота (HH4)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 218. GART_SNPchr1_1277227. Гаплотип голштинского скота (HH4).</p>
<p>Гаплотип HH4 встречается с частотой 3,6 % у взрослого крупного рогатого скота 47878 особей породы Гольштейн, отобранного для исследования (Fritz S. [et al.], 2013), но никогда не встречается у гомозигот. Для восьми из девяти гаплотипов, которые оказывают значительное влияние на скорость отела S. Fritz с соавторами (2013) искал мутации через анализ полногеномной последовательности от 25 Holstein, 11 Montbéliarde и девяти нормандских быков, которые внесли большой вклад в их породу. В частности, они отфильтровывались «для мутаций, которые были (а) расположены на «плюс» или «минус» 6 Мб от обнаруженного гаплотипа (б), переносимого в гетерозиготном состоянии быками-носителями, и (с) отсутствовали у не-несущих быков из трех пород», а затем исследовали выявленные полиморфизмы для их вероятного влияния на структуру и функцию белка. Для HH4 S. Fritz с соавторами (2013) убедительно доказал причинную мутацию кандидата, а именно мутацию (g.1277227A.C, сборку генома UMD 3.1) в гене GART (который кодирует глицинамид рибонуклеотидтранзилазу), что приводит к p.N290T.</p>
<h3><strong>3.15 Синдром врожденного иммунодефицита (Bovine Leukocyte Adgesion Defiency, BLAD)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 219. SNPchr1_145114963. Синдром врожденного иммунодефицита (BovineLeukocyteAdgesionDefiency, BLAD).</p>
<p>Одну из важнейших групп лейкоцитов составляют фагоцитирующие клетки. Они способны связывать микроорганизмы на своей поверхности, а затем поглощать и уничтожать их. Эта функция основана на неспецифичных механизмах распознавания и связывания микробных продуктов с поверхностными рецепторами адгезии, и является основой организации первой линии защиты организма против инфекции – врожденного иммунитета (Кощаев А. Г., Гугушвили В. М., 2014).</p>
<p>На своей поверхности лейкоциты имеют ряд структурно и функционально подобных гликопротеинов, объединенных в семейство β2-интегринов (синоним CD18), причем их экспрессия определяет клеточную специфичность лейкоцитов.</p>
<p>Впервые дефицит адгезии лейкоцитов был обнаружен в США в 1983 г.<br />
у телят голштинской породы. Гены, кодирующие CD18 здорового и абнормального быков, были отсеквенированы. Молекулярной основой возникновения BLAD является миссенс-мутация (аденина на гуанин) в кодирующей части гена<br />
в положении 383, приводящая к появлению белка, у которогов положении 128 экстраклеточной области рецептора вместо аспарагиновой кислоты появляется глицин (D128G). Другая обнаруженная мутация (цитозина на тимин) в положении 775 в случае BLAD является молчащей (Komisarek J., 2010). Поскольку при замене аденина изменяются сайты узнавания рестриктазами TagI или HaeIII, сравнительный рестрикционный анализ амплифицированных продуктов ПЦР участков гена CD18 у больных (BL) и здоровых (TL) животных позволяет однозначно определить носителей этой мутации. Несколько вариантов ДНК-диагностики разработано для этих целей, но все они включают амплифицирование участка (100–400 п. о.), включающего в себя положение 383 структурной части гена CD18, расположенного на одной хромосоме, с помощью различных вариантов праймеров, например (Koshchaev A. G., Shchukina I. V., Koshchaeva O. V., 2016):</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>forCD18 5’ – GTTGCGTTCAACGTGACCTT-3’;</p>
<p>revCD18 5’ – GAGTAGGAGAGGTCCATCAGGTA-3’.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Синдром BLAD – наследственное заболевание, распространенное у скота голштинской породы (в среднем до 15 %). Организм животных, несущих<br />
в своем генотипе мутантный аллель, в гомозиготном состоянии не способен противостоять вирусным и бактериальным инфекциям, что приводит к снижению иммунитета животных и заканчивается летальным исходом в первые месяцы постнатального развития.</p>
<p>У гетерозиготных (CD18TLBL) клинических проявлений не выявлено. При скрещивании скрытых носителей только 25 % стельностей заканчивается рождением потомства, свободного от мутации. Анализ данных показывает, что если на первом этапе поток мутантных генов в популяции идет, в основном, через быков-производителей, глубокозамороженную сперму и трансплантацию эмбрионов, то дальнейшее его распространение связано с использованием гетерозиготных быкопроизводящих коров. Наибольшее распространение синдром BLAD получил в Дании. Носители этой мутации выявлены в ряде других стран.</p>
<p>В связи с этим были разработаны национальные программы по выявлению быков гетерозиготных носителей BLAD-синдрома. Задача селекционно-генетического мониторинга – не допустить к разведению гетерозиготных носителей мутации. Международными племенными службами введены обязательные проверки производителей на данный генетический дефект и записьв родословные племенных каталогов носителей данной мутации (Komisarek J., 2010).</p>
<h3><strong>3.16 Остеопетроз (OS), или Мраморная болезнь кости</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 220. CLCN7_SNPchr25_1137017 + CLCN7_SNPchr25_1137019.Остеопетроз (OS), мраморная болезнь кости.</p>
<p>Остеопетроз – заболевание костей, приводящее к тяжелым нарушениям в организме животного. Дефект активности остеокластов приводит к образованию чрезмерно хрупких костей. Больные телята рождаются, как правило, раньше срока мертвыми. Часто наблюдается уменьшенный размер тела, плоский череп, короткая нижняя челюсть. Заболевание имеет аутосомно-рецессивный тип наследования, мутация была описана в 2010 г. у крупного рогатого скота абердин-ангусской породы и представляет собой делецию в гене SLC4A2 (25 хромосомы), кодирующем мембранный транспортный белок (Meyers S. N., Mcdaneld T. G., Swist S. L., Marron B. M., Steffen D. J., O&#8217;Toole D., O&#8217;Connell J. R., Beever J. E., Sonstegard T. S., Smith T. P., 2010).</p>
<p>Фланкирующие последовательности мутации:</p>
<p>CGTCAGCCCGGCCGCTCAGATTTTCCTGGCCGCGGGTTTGGGGAAGGGAAGCACTAAGACTGCCCCCAGGGCAGAACCTCGGGGTTTCTGTGCCCCCTCCT[CCCCGGGCGTCACGTGCCCCTCCCCCAG&#8230;2784bp&#8230;.GGAGGATGAACTCCACCGCA/]CCCTGGGCGTGGAGCGGTTTGAGGAGATCCTTCAGGAGGCGGGGTCCCGAGGAGGGGAGGAGCTCGGCCGCAGCTACGGGGAGGAAGACTTTGAATGTGA.</p>
<h3><strong>3.17 Дистрофический эпидермолиз (Dystrophic Epidermolysis Bullosa, DEB)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 221. COL7A1_SNPchr22_51873390. Дистрофический эпидермолиз (Dystrophic Epidermolysis Bullosa, DEB).</p>
<p>Буллезный эпидермолиз (БЭ) – наследственное буллезное заболевание животных, характеризующееся крайней хрупкостью кожи и слизистых оболочек при механическом воздействии. Основной особенностью БЭ у людейи животных является формирование пузырей и язв после незначительной механической травмы. Буллезный эпидермолиз обусловлен мутациями в гене COL7A1<br />
(22: g.51873390C &gt; T, c.4756C &gt; T, p.Arg1586X), кодирующем структурные белки цитоскелета кератиноцитов базального слоя или зоны базальной мембраны. В зависимости от ультраструктурного уровня расщепления тканей БЭ подразделяют на три обширные категории: простой буллезный эпидермолиз (epidermolysis bullosa simplex), соединительный буллезный эпидермолиз и дистрофический буллезный эпидермолиз. У всех видов животных, кроме буйволов с простым БЭ, образуются множественные язвы на деснах, твердом и мягком нёбе, слизистой оболочке губ, щек и спинке языка. Дистрофия или отсутствие ногтей соответствует деформации и отслоению копыт у копытных животных.</p>
<p>Кожные и слизистые оболочки пораженных животных очень хрупкие, что позволяет легко их разрывать, особенно вокруг морды, рта, фетлокови копыт. Некоторые демонстрируют большую потерю кожи или волдырей вокруг фетлоков и морды. Хотя они не смертельны, пораженные животные обычно гуманно подвергаются эвтаназии из-за степени поражения кожи (Menoud А., Welle M., Tetens J., Lichtner P., Drogemuller C., 2012).</p>
<p>Фланкирующие последовательности мутации:</p>
<p>GGTGACAGTTGTGTCCCCTGACTTCTGATCCTTCCTTCCACAGGGCTCACCTGGCTTGGCTCTTCCTGGAGACCCTGGCCCCAAGGGAGACCCTGGAGGC[C/T]GAGTGCGTAAATGTGGGGAAGGGGAATGTGACAGAAAGAGATGGGATGGTGCCTGGGAGCCCCAACTAAGTCCTGTCCCTCCTCCCCATGCCCTGCAGGG.</p>
<h3><strong>3.18 Врожденная эритропоэтическая протопорфирия (PT)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 222. FECH_SNPchr24_57298883. Врожденная эритропоэтическая протопорфирия (PT).</p>
<p>Врожденная эритропоэтическая протопорфирия – генетическое заболевание, приводящее к тяжелой форме фотосенсибилизации (повышенной чувствительности организма, чаще кожи к свету). Кроме боязни света у животных наблюдается повреждение кожи и слизистых оболочек, иногда случаются припадки и судороги. Протопорфирия вызвана дефицитом активности феррохелатазы, которая катализирует заключительный этап в пути биосинтеза гема. Нарушение работы фермента приводит к накоплению предшественника гема – протопорфирина – в крови и тканях животного. Протопорфирин обладает фотореактивными свойствами, что и приводит к фоточувствитель ности (Jen­kins M. M., Leboeuf R. D., Ruth G. R., Bloomer J. R., 1998). Накопление протопрфирина может также приводить к прогрессирующему повреждению печени. Впервые врожденная эритропоэтическая протопорфирия была описана в 1977 г. в США. Наибольшее распространение заболевание получило в популяции лимузинской породы. Исследования показали, что заболевание передается по аутосомно-рецессивному типу наследования. В 1998 г. была выявлена казуальная мутация, в гене фермента феррохелатазы FECH. Точечная мутация в гене FECH приводит к замене стоп кодона на лейцин (TGA → TTA), в результате чего синтезируется дефектный белок на 27 аминокислот длиннее нормального (Mcaloon C. G., Doherty M. L., O&#8217;Neill H., Badminton M., Ryan E. G., 2015).</p>
<p>Фланкирующие последовательности мутации</p>
<p>TCCAAGGAGCGCTGCTCCACACAGCTGACTCTGAGCTGTCCGCTCTGCGTGAACCCCACCTGCAGGGAGACCAAATCCTTCTTCACCAGCCAGCAGCTGT[G/T]ACCCTGGCGGCACGCCGCTGGGAGGTGCGCGTGCCCGCCTCCCGACACCTCCGAGGAGGAGGAGGGCGCATCCGGCCGTTAGGGAGGAGGTTACATCCGT.</p>
<h3><strong>3.19 Ген диацилглицерол-ацилтрансферазы-1 (DGAT1)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 223. DGAT1_SNPchr14_1802265. Ген диацилглицерол-ацилтрансферазы-1 (DGAT1).</p>
<p>Ген DGAT1 – микросомальный энзим, катализирующий последний этап синтеза триглицеридов. Ген DGAT1 участвует в обмене жирных кислот, его А-аллель ассоциирован с более низким содержанием стеариновой кислоты и предпочтительнее для получения высококачественного мяса. Известно, что неконсервативная замена К232А (лизина на аланин) в последовательности гена DGAT1, снижает содержание жира в молоке коров. При этом K-аллель, содержащий лизин в 232 положении, является наиболее желательным, поскольку несущие его коровы производят более жирное молоко, по сравнению с коровами несущими A-аллель,<br />
в 232 положении которого располагается аланин (ZhangY., FanX., SunD., Wang Y., YuY., XieY., ZhangS., ZhangY., 2012).</p>
<p>DGAT1-1: 5/-ccgcttgctcgtagctttcgaaggtaacgc-3/</p>
<p>и DGAT1-2: 5/-ccgcttgctcgtagctttggcaggtaacaa-3/.</p>
<p>Для определения аллельного полиморфизма гена DGAT1 по вариантам А<br />
и К применяют эндонуклеазу рестрикции TaqI.</p>
<h3><strong>3.20 Синдром брахиспина (Brachyspina Syndromе, BS)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 224. FANCI_SNPchr21_21184873. Синдром брахиспина (Brachyspina Syndromе, BS).</p>
<p>Синдром брахиспина (BS) – редкий рецессивный генетический дефект молочного голштинского крупного рогатого скота. Впервые был обнаружен<br />
в Дании (Charlier C., Agerholm J.S., Coppieters W., Karlskov-MortensenP., LiW., JongG., FasquelleC., KarimL., CireraS., CambisanoN., AharizN., MullaartE., GeorgesM., FredholmM., 2012).Основной экономический урон от мутации BS проявляется через влияние на частоту эмбриональной смертности потомства (плодовитость) – один из наиболее важных экономических показателей в животноводстве (Charlier C., Agerholm J.S., Coppieters W., Karlskov-MortensenP., LiW., JongG., FasquelleC., KarimL., CireraS., CambisanoN., AharizN., Mulla­art E., GeorgesM., FredholmM., 2012). Заболевание наследуется по аутосомно-рецессивному типу. Пораженные животные характеризуются малой массой тела, пороками позвоночника, проявляющимися заметным укорочением позвоночного столба, и длинными и тонкими конечностями. Кроме того, у заболевших животных отмечается брахигнатия, сопровождающаяся пороками внутренних органов (сердце, почки, половые органы).</p>
<p>С введением высокопроизводительных методов секвенирования нового поколения (NGS) стало возможным одновременное определение геномов нескольких представителей домашних животных. В 2012 г. с использованием методов NGS стало возможным определить нуклеотидную последовательность участка ДНК (ген FANCI, анемия Фанкони, группа комплеменции I), делеция которого (3329 п. о.) аннотирована как причина возникновения мутантного аллеля у крупного рогатого скота голштин-фризской породы (Gill J.L. [at al.], 2012).</p>
<p>Частота встречаемости болезни достигает 7,2 %. Было показано, что делеция нескольких экзонов (25, 26 и 27) приводит к экспрессии укороченной формы белка, не имеющего функциональной активности (Bonilla C. A., Rubio M. S., Sifuentes A. M., Parra-Bracamonte G. M., Arellano V. W., Mendez M. R. D., Ber­ruecos J. M., Ortiz R., 2010).</p>
<p>При определении BS для амплификации фрагмента, содержащего мутацию, используются праймеры:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>5’-GCTCAAGTAGTTAGTTGCTCCACTG-3’;</td>
</tr>
<tr>
<td>5’-ATAAATAAATAAAGCAGGATGCTGAAA-3’.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В этих условиях только один фрагмент гена размером 3738 п. о. амплифицируется у здоровых животных. Появление дополнительного фрагмента размером в 409 п. о. свидетельствует о носительстве BS.</p>
<h3><strong>3.21 Синдромом рыбного запаха</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 225. FMO3_SNPchr16_39523051. Синдромом рыбного запаха.</p>
<p>Мутация в гене FMO3, ассоциированная с рыбным запахом молока (Fishy Off-Flavor). Рыбный запах молока, или триметиламинурия, – моногенное заболевание, которое связано с нарушением органолептических качеств молока<br />
и появлением рыбного послевкусия при употреблении молока от коров, больных этим заболеванием. Впервые это заболевание было описанов 1999 г. для человека. Для больного был характерен специфический рыбный запах кожи. Такой запах возникал в результате чрезмерного накопления диметиламина<br />
в крови и лимфе больных. Молеклярно-генетическая причина такого заболевания заключалась в мутации гена FMO3, который кодирует флавин содержащуюмонооксигеназу 3, основная фнукция которого исление диметиламина.<br />
В 2002 г. аналогичная мутация была обнаружена в шведском красном скоте, который образовался в результате скрещивания шведского красно-белого скота<br />
с животными айрширской породы. В популяции шведского красного скота частота встречаемости мутантного аллеля гена FMO3 достигает 14 %.</p>
<p>Родоначальника этой мутации обнаружить не удалось, но известно, что корнями он уходит в айрширскую пород.</p>
<p>Рыбный запах коровьего молока характеризуется отчетливым, неприятным вкусом и запахом, напоминающим гнилую рыбу. В 2003 г. исследования показали, что врожденная ошибка метаболизма вызывает этот эффект. Было показано, что мутация, вызывающая Fishy Off-Flavor в молоке, на удивление распространена у одной породы крупного рогатого скота. Шведский университет сельскохозяйственных наук разработал тест на синдром Fishodorу крупного рогатого скота.</p>
<h3><strong>3.22 Врожденная мышечная дистония 1-го и 2-го типов<br />
(Congenital Muscular Dystonia, CMD1 и CMD2)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 226; 227; 228; 230. SLC6A5_SNPchr29_24610561. ATP2A1_SNPchr25_26198573,ATP2A1_SNPchr25_26197204, ATP2A1_SNPchr25_<br />
26197429.Врожденная мышечная дистония 1-го и 2-го типов (CongenitalMuscularDystonia, CMD1 и CMD2).</p>
<p>Врожденная мышечная дистония – наследственное заболевание с аутосомно-рецессивным типом наследования, широко распространенное в бельгийской голубой породе. У всех телят с CMD наблюдаются генерализованные мышечные контрактуры (непроизвольное обширное напряжение мышц), нарушение глотания, высокая степень утомляемости, длительные мышечные спазмы. Больные животные, как правило, умирают в течение нескольких часов или нескольких недель после рождения. В 2008 г. были выявлены ключевые мутации, связанные с CMD в генах ATP2A1 и SLC6A5 [84]. Белок гена ATP2A1 участвует в транспорте кальция. Мутация приводит к замене аминокислоты в 14 экзоне гена. Причиной CMD2 является мутация, приводящаяк замене аминокислоты<br />
в третьем трансмембранном домене гена SLC6A5, кодирующего транспортер глицина 2 – GlyT2 (Gill J.L. [at al.], 2012).</p>
<p>Фланкирующие последовательности мутации:</p>
<p>GCGAGTGGGCACCACCCGGGTGCCCATGACAGGGCCGGTGAAGGAGAAGATTCTGTCGGTGATCAAAGAGTGGGGTACTGGCCGGGACACCCTG[C/T]GCTGCCTGGCGCTGGCCACTCGGGACACCCCCCCCAAGCGAGAGGAGATGGTCCTGGATGACTCTACCAAGTTCATGGAGTACGAG.</p>
<p><strong>3.23 Мутации в гене гормона роста</strong></p>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 229. GH1_SNPchr19_48768774 + SNPchr19_48768834. Мутации в гене гормона роста.</p>
<p>Мутации в гене гормона роста на 19 хромосоме. Два аллеля гена гормона роста влияют на молочные свойства.</p>
<p>GH_2141: «G&#8217;- аллель ассоциируется с пониженным выходом молочного белка и выходом жира.</p>
<p>GH_2291: «C&#8217; -аллель связан с увеличением урожайности молока, жировым процентом и процентом белка [62].</p>
<p>GH_2141 19: g.48768916C &gt; G, c.457C &gt; G, p.Leu153Val, rs41923484.</p>
<p>Фланкирующиепоследовательностимутации:</p>
<p>CCGTAGTTCTTGAGCAGCGCGTCGTCACTGCGCATGTTTGTGTCAAATTTGTCATAGGTCTGCTTGAGGATCTGCCCAGCCCGGGGGGTGCCATCTTCCA[C/G]CTCCTGCCAAGGGAGGGAGAGACAGAGAGGCCGAAGGGCCCTCAGGAGCAGCTCCCTCCTGCCCGCTCCATTTTCCACCCTCCCCTACAGGCTTGGAGAA.</p>
<p>GH_2291 19: g.48768766A &gt; C, c.607A &gt; C, rs109 191047.</p>
<p>Фланкирующиепоследовательностимутации:</p>
<p>CAAATTTGACACAAACATGCGCAGTGACGACGCGCTGCTCAAGAACTACGGTCTGCTCTCCTGCTTCCGGAAGGACCTGCATAAGACGGAGACGTACTG[A/C]GGGTCATGAAGTGCCGCCGCTTCGGGGAGGCCAGCTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAG.</p>
<h3><strong>3.24 Аборт из-за монбельярдского гаплотипа 2 (MH2) у Bos Taurus</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 231. SLC37A2_SNPchr29_28879810. Аборт из-за гаплотипа MH2 у <em>BosTaurus</em>.</p>
<p>Монбельярдский гаплотип 2 (МН2) был идентифицирован на 29 хромосоме. Более детальное изучение этого гаплотипа показало, что молекулярно-генетические причины смертности эмбрионов, гомозиготных по этому гаплотипу, заключаются в появлении мутации в гене SLC37A2 (solute carrier family 37 (glucose-6-phosphate transporter), member 2), который кодирует одноименный белок транспортер (Fritz S. [et al.], 2013). Причина смертности эмбриона заключается в фундаментальных нарушениях функций клеточных мембран. Частота встречаемости этой мутации в популяции породы монбельярд достигает 7 %.</p>
<p>29: g.24610495T&gt;C, c.809T&gt;C, p.Leu270Pro.</p>
<p>Фланкирующие последовательности мутации:</p>
<p>ATGCTGGCTCTGGCAGGGTTGCCCATCTTCTTCCTAGAGGTGTCCCTGGGCCAGTTTGCCAGCCAGGGGCCGGTGTCTGTGTGGAAGGCCATCCCAGCCC[T/C]GCAAGGTGAGTGCTTCCTGCTTCCCAGCTGCCTCAGCCCTTCCCTGCCCTCTCTGGCACCAAAGGGCCCCAGGGAGTGAGACCTGCTTCTGTGATTGGGA.</p>
<h3><strong>3.25 Гликогенное заболевание (V)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 232. PYGM_SNPchr29_43611783. Гликогенное заболевание (V).</p>
<p>Как сообщается в исследовании (Angelos S., Valberg S. J., Smith B. P., Mcquarrie P. S., Shanske S., Tsujino S., Dimauro S., Cardinet G. H., 1995), у шести телят из одного стада Шароле было диагностировано данное заболевание после того, как один из них был представлен в Ветеринарный медицинский учебный госпиталь Школы ветеринарной медицины при Калифорнийском университете в Дэвисе.У отца и дамбы каждого из шести телят был общий предок. Данные согласуются с аутосомно-рецессивным наследованием. Клонированием и секвенированием очень вероятного сравнительного кандидата-гена (на основе гомологичного человеческого расстройства). Было показано, что заболевание<br />
у этого шаролевого скота связано с миссенсовой мутацией в кодоне 489 гена для миофосфорилазы PYGM phosphorylase, glycogen, muscle (Cítek J., Rehout V., Vecerek L., Hájková J., 2007).</p>
<h3><strong>3.26 Увеличенная мускулатура</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 233. MSTN_SNPchr2_6213980; 234.MSTN_SNPchr2_6215942 и 235. MSTN_SNPchr2_6218499. Увеличенная мускулатура.</p>
<p>Увеличенная мускулатура – это признак, вызванный мутациями в гене миостатина (MSTN), ранее называемом GDF8. Миостатин – ингибитор мышечного роста. Любые мутации в этом гене приводят к ухудшению его регуляторной функции и, соответственно, к увеличению развития мышцы. В породе Бельгийская голубая мутация в этом гене приводит к чрезвычайной мышечной гипертрофии, в других европейских породах (Пьедмонтезская, Каролас и Мен-Анджой – Maine-Anjou) также показано наличие мутаций, повреждающих, но не выключающих работу гена и приводящих к умеренной гипертрофии мышц (Kambadur R., Sharma M., Smith T. P. L., Bass J. J., 1997). Существует множество аллелей миостатина.</p>
<p>Q204X, E226X, E291X, C313Y, nt419, 821del11 – приводят к двойной мускулатуре (гиперплазии), увеличению веса при рождении, увеличению нежности мяса.</p>
<p>F94L, S105C, and D182N – ответственны за увеличение мышечной массы и уменьшение внутримышечного жира, без изменений веса рождаемого теленка (Dierks C., Eder J., Glatzer S., Lehner S., Distl O., 2014).</p>
<p><strong>Мутация MYO_F94L (Found in Angus and Limousin lineages)</strong></p>
<p>2: g.6213980A &gt; C, c.282C &gt; A, p.Phe94Leu, rs110065568.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>TCAGTAAACTTCGCCTGGAAACAGCTCCTAACATCAGCAAAGATGCTATCAGACAACTTTTGCCCAAGGCTCCTCCACTCCTGGAACTGATTGATCAGTT[C/A]GATGTCCAGAGAGATGCCAGCAGTGACGGCTCCTTGGAAGACGATGACTACCACGCCAGGACGGAAACGGTCATTACCATGCCCACGGAGTGTGAGTAGT.</p>
<p><strong>Мутация MYO_C313Y (Found in Gasconne, Piedmontese and Parthenise lineages)</strong></p>
<p>2: g.6218499G &gt; A, c.938G &gt; A, p.Cyc313Tyr.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>CGATGCTGTCGTTACCCTCTAACTGTGGATTTTGAAGCTTTTGGATGGGATTGGATTATTGCACCTAAAAGATATAAGGCCAATTACTGCTCTGGAGAAT[A/G]TGAATTTGTATTTTTGCAAAAGTATCCTCATACCCATCTTGTGCACCAAGCAAACCCCAGAGGTTCAGCCGGCCCCTGCTGTACTCCTACAAAGATGTCT.</p>
<p><strong>Мутация MYO_Q204X (Found in Blonde d’Aquitaine, Charolaise, Charolais and Limousin lineages)</strong></p>
<p>2: g.6216138C &gt; T, c.610C &gt; T, p.Gln204X, rs110344317.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>TGTGCAAATCCTGAGACTCATCAAACCCATGAAAGACGGTACAAGGTATACTGGAATCCGATCTCTGAAACTTGACATGAACCCAGGCACTGGTATTTGG[C/T]AGAGCATTGATGTGAAGACAGTGTTGCAGAACTGGCTCAAACAACCTGAATCCAACTTAGGCATTGAAATCAAAGCTTTAGATGAGAATGGCCATGATCT.</p>
<p><strong>Мутация MYO_S105C (Found in Parthenaise lineages)</strong></p>
<p>2: g.6214012C &gt; G, c.314C &gt; G, p.Ser105Cys.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>ATCAGCAAAGATGCTATCAGACAACTTTTGCCCAAGGCTCCTCCACTCCTGGAACTGATTGATCAGTTCGATGTCCAGAGAGATGCCAGCAGTGACGGCT[C/G]CTTGGAAGACGATGACTACCACGCCAGGACGGAAACGGTCATTACCATGCCCACGGAGTGTGAGTAGTCCTGCTGGTGCAGAGCAACGACTCTGCTGACT.</p>
<h3><strong>3.27 Врожденный буллезный эпидермолиз (EB)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 236. KRT5_SNPchr5_27545478. Врожденный буллезный эпидермолиз (EB).</p>
<p>Врожденный буллезный эпидермолиз – наследственное заболевание, которое характеризуется преимущественно хрупкостью и другими дефектами кожи и слизистых оболочек. Может наблюдаться деформация и отслоение копыт. Пораженные телята чаще всего погибают в возрасте 1–4 нед. В 2005 г. была выявлена мутация, связанная с EB в гене KRT5 (Foster A. P., Skuse A. M., Hig­gins R. J., Barrett D. C., Philbey A. W., Thomson J. R., ThompsonH., FraserM. A., BowdenP. E., DayM. J., 2010; Medeiros G. X., Riet-Correa F., 2015). Данный ген отвечает за синтез кератина 5, образующего нити цитоскелета базальных эпителиальных клеток. Одного мутантного аллеля достаточно, чтобы вызвать заболевание, что говорит об аутосомно-доминантном типе наследования. Буллезный эпидермолиз распространен в голштинской породе КРС.</p>
<h3><strong>3.28 Гаплотип (HH1), связанный с эмбриональной смертностью</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 237. APAF1_SNPchr5_63150400. Гаплотип (HH1), связанный с эмбриональной смертностью.</p>
<p>Гаплотип HH1, связанный с эмбриональной смертностью на разных сроках стельности, картирован на 5-й хромосоме в области 58–66 Mb. Установлено, что причиной снижения фертильности, ассоциированной с HH1, служит нонсенс-мутация C → T в гене фактора 1, активирующего апоптотические протеазы (ApoptoticPeptidase-ActivatingFactor 1 – APAF1), приводящая к замене GlnStop в позиции 579 аминокислотной последовательности (Adams H.A., 2012). Функциональный пептид APAF1 инициирует апоптоз и необходим для нормального эмбрионального развития.</p>
<p>Ген APAF1 (ApoptoticPeptidaseActivatingFactor 1) расположен на 5 хромосоме 5: g.6315040C&gt;T, c.1741C&gt;T, p.Gln579X, rs448942533.</p>
<p>Фланкирующая последовательность мутации:</p>
<p>GGAGTTTTTATCTTTAAATGGACATCTTCTTGGACGACAGCCATTTCCTAATATTGTGCAACTGGGCCTCTGTGAACTGGAAACTTCAGAGGTTTATCGG[C/T]AAGCTAAGCTGCAGGCCAAGCAGGAGGTCGATAACGGAATGCTTTACCTGGAGTGGGTGTAAGTAGGTTAGGAGAGAAACCAGAGGGAGCAGAGCGCTGA.</p>
<p>P. M. VanRaden (VanRaden P. M., Olson K. M., Null D. J., Hutchison J. L., 2011) выявил пять новых рецессивных смертельных гаплотипов путем поиска общих гаплотипов, которые никогда не гомозиготы у живых животных. Три из этих гаплотипов встречаются только у голштейнов, и они были названы HH1, HH2 и HH3, где первый H обозначает Гольштейн, а второй – для гаплотипа. HH1сопоставляется с хромосомой BTA5, на уровне 58–66Mb (сборка генома UMD 3.0).</p>
<h3><strong>3.29 Гипотрихоз</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 238. HEPHL1_SNPchr29_695072. Гипотрихоз.</p>
<p>У крупного рогатого скота с мутацией в гене HEPHL1 отсутствуют волосяной покров при рождении частично или по всему телу: часто грудь, шея и ноги. Пострадавшие животные более чувствительны к окружающей среде, кожным инфекциям, вредителям, солнечным ожогам, холодовому стрессу (Marron B., Bever J.E., 2012).</p>
<h3><strong>3.30 Мутация в гене IFNGR2 ассоциирована с туберкулезом</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 239. IFNGR2_SNPchr1_1390292. Мутация<br />
в гене IFNGR2 ассоциирована с туберкулезом.</p>
<p>Ген FNGR2 кодирует фрагмент клеточного рецептора к гамма-интерфе­рону, нелигандсвязывающую бета-цепь рецептора гамма-интерферона. Интерферон-гамма-рецептор является гетеродимером IFNGR1 и IFNGR2. Дефекты<br />
в IFNGR2 являются причиной менделевской восприимчивости к микобактериальному заболеванию (MSMD), также известному как семейная диссеминированная атипичная микобактериальная инфекция.</p>
<p>MSMD представляет собой генетически гетерогенное заболевание с аутосомно-рецессивным, аутосомно-доминантным или X-связанным наследованием.</p>
<h3><strong>3.31 Paunch Calf Syndrome</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 240. KDM2B_SNPchr17_56010031. PaunchCalfSyndrome.</p>
<p>Такая патология связана с мутацией гена KDM2B (Lysine (K)- Specific Demethylase 2B), расположенном на 17 хромосоме (Singleton A. C., Mitchell A. L., Byers P. H., Potter K. A., Pace J. M., 2005).</p>
<p>17: g.56010031, c.2503G &gt; A, p.Asp835Asn.</p>
<p>Фланкирующая последовательность мутации:</p>
<p>TTCTTGGTGGGGCTGGGTGTGGAGGGGACCAAATCCCGCGACCCCTGGGAGCAAGCTTTGCATCTTTTCTTTCCCATGACAGCTAAAACCTGGCAAAGAA[G/A]ATAAGCTTTTCAGGAAAAAGGTACCATCTCCCACCCACCCCCTGCCCCTGTCCCAGAACCTCTCTTGGGGCAGTAGTCTTAGGCTGGAGGGTAGGAGGCC.</p>
<p>Телята обычно мертворожденные, имеют аномальное развитие нескольких органов, лицевые деформации и расширенный желудок, наполненный жидкости. У некоторых пораженных телят также есть выступающий языки расщепленное нёбо. У телят с такой патологией сильное растяжение брюшной полости, подкожный отек, асцит, лобулированная твердая печеньс двумя небольшими (5 и 10 мм) заполненными кровью кистами, небольшим (1 см) дефектом предсердной перегородки, небольшим сокращением лицаи двусторонним экзофтальмом (To­olan D. P., McelroyM. C., FlynnP., WeldR., McclureM., SheehanM., 2014).</p>
<h3><strong>3.32 Спинальная мышечная атрофия (SMA)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 241. KDSR_SNPchr24_62138835. Спинальная мышечная атрофия (SMA).</p>
<p>Относится к нейродегенеративным заболеваниям. Причиной болезни является мутация в гене KDSR, кодирующем 3-кетодигидросфингозинредуктазу, которая катализирует важнейшие процессы в метаболизме гликосфинголипидов.</p>
<p>KDSR (3-KetodihydrosphingosineReductase) (Производственные отчеты по движению скота и птицы «Агро-объединения ”Кубань”» за 2014 год).</p>
<p>24: g.62138835C &gt; T, g.490C &gt; T, p.Ala164Thr.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>GAAGACGCTCTTACCTCCATCTGCAAAGCCTCCGCAAGTCCCCTGAGGGCGAACTTGGATGAAGAGTATGCTGTGTAACCAAACAGGCCCAGCTGCCCGG[T/C]CTGGGAAGACACGAAGACGACCCTGCCCATGCGGCGTTCCTTCATGGTGGCGATCACCGCCCGGCTGGGGTACACGCTGCCCAGGTAGTTGATGCTCATC.</p>
<p>Телятачастоумираютотпневмонииввозрастеотшестидовосьминедель. Рождаются они нормальными, но начинают проявлять симптомы SMA в возрасте от трех до шести недель, что характеризуется потерей силыи равновесия в задних ногах. По мере прогрессирования болезни они становятся слабее, теряют вес. Как только у них появляются признаки тяжелого дыхания, смерть обычно происходит через пару дней. Причиной смерти является пневмония<br />
в возрасте от шести до восьми недель.</p>
<p>Это нейродегенеративное заболевание вызывает потерю моторных нейронов, прогрессирующую слабость, снижение спинальных рефлексови потерю баланса в ногах. Терминальные стадии характеризуются тяжелой мускульной атрофией, квадрипарезом и корневой ретенцией. Бронхопневмония является часто осложняющим фактором заболевания (http://www.brownswissusa.com/<br />
Portals/0/Documents/Abnormality%20Pamphlet.pdf [Accessed 6/12/2011 2011]).</p>
<h3><strong>3.33 Мутация в гене кератин 74</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 242. KRT74_SNPchr5_27490704. Мутация<br />
в гене кератин 74.</p>
<p>KRT74 представляет собой ген, кодирующий белок Кератин 74. Ген располагается на пятой хромосоме Chromosome 5 – AC_000162.1. Такое заболевание, как гипотрихоз, связано с мутацией гена KRT74 (Zimin A.V. [et al.], 2009).</p>
<p>Аутосомно-доминантная патология волосяного покрова животного (ADWH), также связана с мутацией гена KRT74 – это редкое заболевание, характеризующееся плотно скрученными волосами. Была обнаружена гетерозиготная мутация p.Asn148Lys в мотиве инициации спирали гена кератина<br />
74 (KRT74) у животного с ADWH. KRT74 кодирует специфический эпителиальный (мягкий) кератин 74 с внутренней корневой оболочкой (IRS). Показано, что мутантный белок K74 приводит к нарушению образования кератинового промежуточного волокна в культивируемых клетках, скорее всего, с доминантно-негативным образом. Идентифицирована гетерозиготная мутация p.Glu440Lys, в соседнем гене Krt71.</p>
<h3><strong>3.34 Гены признаков молочной продуктивности</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа </em>– 243. CSN1S1_SNPchr6_87157909. Белок Alpha-S1-casein гена CSN1S1; 244. CSN1S2_SNPchr6_87266177. Белок Alpha-S2-casein гена CSN1S2; 245. LALBA_SNPchr5_31348380. Белок Alpha-lactalbumin гена LALBA. Гены признаков молочной продуктивности.</p>
<p>Казеины относятся к семейству фосфопротеинов и составляют примерно 80 % белков молока КРС и формируют в молоке агрегаты известные как «казеиновые мицеллы», в которых молекулы каппа-казеина играют роль стабилизации структуры мицелл. Каппа-казеин кодируется геном CSN3. Всего было идентифицировано 13 аллелей этого гена, из которых наибольшее практическое применение имеют аллели A и В.</p>
<p>Ген CSN3 – один из немногих известных генов, однозначно связанных<br />
с признаками белковомолочности и технологическими свойствами молока.<br />
В-аллель гена каппа-казеина ассоциирован с более высоким выходом творога<br />
и сыра, а также с лучшими коагуляционными свойствами молока. Практика показывает, что высококачественные твердые сыры могут быть изготовлены только из молока, полученного от коров, имеющих генотип ВВ каппа-казеина. Бета-казеин второй по частоте встречаемости в молоке. Ген бета-казеина имеет 12 вариантов, среди которых вариант А1 и А2 наиболее часто встречается. Отличаются варианты А1 и А2 бета-казеина заменой в гене, благодаря которой А1 содержит аминокислоту гистидин в 67-й позиции, тогда как А2 содержит пролин (Szyda J. [et al.], 2011).</p>
<p>Многочисленные исследования в разных странах показали, что белок, образующийся при расщеплении А1 бета-казеина в ЖКТ, может быть одним из факторов развития детского аутизма, приводить к задержке психомоторного развития и нарушениям мышечного тонуса.</p>
<p>С точки зрения производства продуктов питания накопленных данных уже достаточно для того, чтобы задуматься об изменении требования к молоку-сырью или по крайней мере, предоставить потребителю выбор – приобретать молочные продукты, произведенные из молока с бета-казеином только А2 или из смеси молока с бета-казеином А1 и А2.</p>
<p>Лактоглобулин аллельный вариант гена белка лактоглобулина А ассоциирован с более высокими удоями и более высоким уровнем белка в молоке.<br />
В то время как аллельный вариант В ассоциирован с более высоким содержанием белка в молоке и улучшением способности к сычужному свертыванию. Именно аллельный вариант гена В предпочтителен для сыроварения.</p>
<p>Ген бета-лактоглобулина – второй по значимости генетический маркер молочной продуктивности и технологических свойств молока: аллель BLGB связана с высоким содержанием казеиновых белков, большим процентом жира<br />
и лучшими параметрами казеинового коагулянта. Наличие в генотипе животного аллеля BLGА ассоциировано с высоким содержанием сывороточных белков и более высоким общим удоем. Лактоглобулин Бета имеет 8 аллелей: A, B, C, D, H, I, J и W. Генотипы BLGBB и BLGAB оказывают положительное влияние на химический состав и технологические свойства молока. Ген альфа-лактоальбумин играет функциональную роль в изменении объема синтезируемого молока.</p>
<p>Анализ результатов исследований, проведенных российскими и зарубежными учеными, показал, что животные с генотипом LALBAAA превосходят по уровню удоя животных с генотипом LALBABB (Braunschweig M.H., Leeb T., 2006). Идентификацию аллельного полиморфизма BLG по точечной замене<br />
в нуклеотидной последовательности в экзоне 4 предложил J. F. Medrano в 1990 г.</p>
<p>LGB (Beta-Lactoglobulin) also referred to as PAEP (Progestagen -Associated Endometrial Protein). 11: g.103301489C &gt; A.c.-215C &gt; A.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>TTCCTGGCGCTGGCAGCCAGCCTGGACCCAGAGCCTGGACACCCCCTGCGCCCCCACTTCTGGGGCGTACCAGGAACCGTCCAGGCCCAGAGGGGGCCTT[C/A]CTGCTTGGCCTCGAATGGAAGAAGGCCTCCTATTGTCCTCGTAGAGGAAGCAACCCCAGGGCCCAAGGATAGGCCAGGGGGGATTCGGGGAACCGCGTGG.</p>
<p>11: g.103302553G &gt; C, c.181G &gt; C, p.Glu61Gln, rs211077340.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>CCCTCCCCAGGTGGCGGGGACTTGGTACTCCTTGGCCATGGCGGCCAGCGACATCTCCCTGCTGGACGCCCAGAGTGCCCCCCTGAGAGTGTATGTGGAG[G/C]AGCTGAAGCCCACCCCTGAGGGCGACCTGGAGATCCTGCTGCAGAAATGGTGGGCGTCCCCCCCAAAAAAAGCATGGAACCCCCACTCCCCAGGGATATG.</p>
<p>11: g.103302586, c.214A &gt; C, p.Ile72Leu, rs209252315.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>GGCCATGGCGGCCAGCGACATCTCCCTGCTGGACGCCCAGAGTGCCCCCCTGAGAGTGTATGTGGAGGAGCTGAAGCCCACCCCTGAGGGCGACCTGGAG[A/C]TCCTGCTGCAGAAATGGTGGGCGTCCCCCCCAAAAAAAGCATGGAACCCCCACTCCCCAGGGATATGGACCCCCCCGGGGTGGGGTGCAGGAGGGACCAG.</p>
<p>11: g.103302597G &gt; T, c.225G &gt; T, p.Gln75His, rs210096472.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>CCAGCGACATCTCCCTGCTGGACGCCCAGAGTGCCCCCCTGAGAGTGTATGTGGAGGAGCTGAAGCCCACCCCTGAGGGCGACCTGGAGATCCTGCTGCA[G/T]AAATGGTGGGCGTCCCCCCCAAAAAAAGCATGGAACCCCCACTCCCCAGGGATATGGACCCCCCCGGGGTGGGGTGCAGGAGGGACCAGGGCCCCAGGGC.</p>
<p>11: g.103303473C &gt; T, c.237C &gt; T, p.Asn79Asn, rs110180463.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>CAGCCCCTCCTGGGGCCGCCTTCTGCCCCTGGCCCTCAGTTCATCCTGATGAAAATGGTCCATGCCCGTGGCTCAGAAAGCAGCTGTCTTTCAGGGAGAA[C/T]GGTGAGTGTGCTCAGAAGAAGATCATTGCAGAAAAAACCAAGATCCCTGCGGTGTTCAAGATCGATGGTGAGTGCTGGGTCCCCAGGGGACGCCCACCAC.</p>
<p>11: g.103303475G &gt; A, c.239G &gt; A, p.Gly80Asp, rs110180463.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>GCCCCTCCTGGGGCCGCCTTCTGCCCCTGGCCCTCAGTTCATCCTGATGAAAATGGTCCATGCCCGTGGCTCAGAAAGCAGCTGTCTTTCAGGGAGAACG[G/A]TGAGTGTGCTCAGAAGAAGATCATTGCAGAAAAAACCAAGATCCCTGCGGTGTTCAAGATCGATGGTGAGTGCTGGGTCCCCAGGGGACGCCCACCACCC.</p>
<p>11: g.103303494G &gt; C, c.258G &gt; C, p.Lys86Asn.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>TCTGCCCCTGGCCCTCAGTTCATCCTGATGAAAATGGTCCATGCCCGTGGCTCAGAAAGCAGCTGTCTTTCAGGGAGAACGGTGAGTGTGCTCAGAAGAA[G/C]ATCATTGCAGAAAAAACCAAGATCCCTGCGGTGTTCAAGATCGATGGTGAGTGCTGGGTCCCCAGGGGACGCCCACCACCCCCCAGGGACTGTGGGCAGG.</p>
<p>11: g.103304727A &gt; G, c.371A &gt; G, p.Glu124Gly.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>GAACTCACTTTCCTCCTGTCTTGATCTCTACCAGCCTTGAACGAGAACAAAGTCCTTGTGCTGGACACCGACTACAAAAAGTACCTGCTCTTCTGCATGG[A/G]GAACAGTGCTGAGCCCGAGCAAAGCCTGGTCTGCCAGTGCCTGGGTGGGTGCCAACCCTGGCTGCCCAGGGAGACCAGCTGTGTGGTCCTCGCTGCAACG.</p>
<p>11: g.103304757T &gt; C, c.401T &gt; C, p.Val134Ala, rs109625649.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>CCAGCCTTGAACGAGAACAAAGTCCTTGTGCTGGACACCGACTACAAAAAGTACCTGCTCTTCTGCATGGAGAACAGTGCTGAGCCCGAGCAAAGCCTGG[T/C]CTGCCAGTGCCTGGGTGGGTGCCAACCCTGGCTGCCCAGGGAGACCAGCTGTGTGGTCCTCGCTGCAACGGGGCCGGGGGGGACGGTGGGAGCAGGGAGC.</p>
<p>11: g.103305456C &gt; T, c.425C &gt; T, p.Pro142Leu.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>GGCCAAGGGGGAAGGGCAGGTGTGCTGGAGGCCAAGGCAGACCTGCACACCACCCTGGAGAGCAGGGGTTGACCCCGTCCCGGCCCCACAGTCAGGACCC[C/T]GGAGGTGGACGACGAGGCCCTGGAGAAATTCGACAAAGCCCTCAAGGCCCTGCCCATGCACATCCGGCTGTCCTTCAACCCAACCCAGCTGGAGGGTGAG.</p>
<h3><strong>3.35 Синдром Чедиака-Хигаши (Chediak Higashi Syndrome)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 246. LYST_SNPchr28_8508619. Синдром Чедиака-Хигаши (ChediakHigashiSyndrome).</p>
<p>Считается, что мутация в гене LYST на 28 хромосоме 28: g.8508619A &gt; G, c.6044A &gt; G, p.His2015Arg вызывает нарушение работы белка регулятора транспорта лизосом, что приводит к изменениям в размере, структуре и функции лизосом.</p>
<p>Синдром Чедиак-Хигаси (CHS) представляет собой аутосомно-рецессив­ное расстройство, которое поражает несколько видов, включая мышей, людей<br />
и крупный рогатый скот. Доказательства, основанные на клинических характеристиках и генетике соматических клеток, показывают, что мутации в общем гене вызывают CHS у трех видов. Локус CHS на хромосоме человека 1 и хромосоме мыши 13 кодирует регулятор лизосомальной торговли, ранее известный как LYST, теперь известный как CHS1, и дефектен у пациентов с CHS и бежевыми мышами соответственно. Мы сопоставили локус CHS с проксимальной областью бычьей хромосомы 28 с помощью анализа сцепления с использованием микросателлитных маркеров, ранее отображенных на эту хромосому. Кроме того, мы идентифицировали мутантную мутацию A:T → G:C, которая приводит к замене гистидина остатком аргинина на кодоне 2015 гена CHS1. Эта мутация является наиболее вероятной причиной CHS у крупного рогатого скота Вагью (Abdeen A., Sonoda H., Kobayashi I., Kitahara G., Ikeda M., 2013).</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>CACAAAGAGGGGCAGCTTATATCCATGCCCCAAGAGGTTTGTAGATCCTTTGTGAAAAATACAGCAGAACTCCTTGGATCTCCTCCGGATTTGGAATTATTGACGATTATCTTCAATTTCCTTTTAGCAGTTC[A/G]TCCTCCTACTAATACTTATGTTTGTCACAACCCCACAAACTTCTATTTTTCTTTGCACATAGATGGCAAGATCTTTCAGGAAAAAGTACAATCAATCATGTACTTG.</p>
<h3><strong>3.36 Aксонопатия</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 247. MFN2_SNPchr16_42562057. Aксонопатия.</p>
<p>Этот ген MFN2 (Mitofusin 2) находится на 16 хромосоме, кодирует белок митохондриальной мембраны, который участвует в митохондриальном слиянии и способствует поддержанию и функционированию сети митохондрий. Этот белок участвует в регуляции пролиферации клеток гладких мышц сосудов, и он может играть роль в патофизиологии ожирения. Мутации в этом гене вызывают болезнь Шарко-Мари-Зуба типа 2А2 и наследственную моторную и сенсорную невропатию VI, которые являются одновременно нарушениями периферической нервной системы. Дефекты этого гена также были связаны с ранним началом инсульта.</p>
<p>Телята часто имеют широкую постановку ног и начинают терять контроль над задними лапами в возрасте 1 мес, в дальнейшем они не могут стоять. Хотя болезнь не смертельна, пораженные телята, как правило, подвергаются эвтаназии в возрасте 10 мес.</p>
<p>Замена C → T в экзоне 20 вызывает дефект сплайсинга, который приводит к частичному удерживанию интрона 19 и вводит преждевременный стоп-кодон. У животных есть спинальная атаксия, парапарез с атаксией тазовой конечности. Рассеянные вырожденные аксоны наблюдаются в остальных участках белого вещества спинного мозга, в белом веществе головного мозга и в бедренном нерве (Drogemuller C. [et al.], 2011; Shen T., Zheng M., Cao C., Chen C., Tang J., Zhang W., Cheng H., Chen K. H., Xiao R. P., 2007).</p>
<p>16: g.42562057C&gt;T, c.2229C&gt;T.</p>
<p>Фланкирующая последовательность мутации:</p>
<p>CCGGTAGAACGCTTGGCAGGTTACGCCACGGCTAGTTATCAGCTCTTGCCACTACAAGGTAACCTTTTCTCTGCAGGAATAAAGCCGGCTGGTTGGACAG[C/T]GAACTCAACATGTTCACCCACCAGTACCTGCAGCCCAGCAGATAGTGGGCACCCGGAGCCGGACCCCCTGTGGGGAGGACAGTGCTGCGAGCGCGGGGGG.</p>
<h3><strong>3.37 Синдром белого симментала (GWFS)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа </em>– 248. MITF_SNPchr22_31746502; 251. MITF_SNPchr22_31769189. Синдром белого симментала (GWFS).</p>
<p>Цвет шерсти у млекопитающих определяется большим количеством генов. По оценкам, ~ 300 локусов влияют на фенотипы цвета шерсти с участием более 150 генов. Синдром белого симментала (GWFS) – аутосомально-доминантное генетическое заболевание, которое характеризуется гипопигментацией, гетерохромией радужки, дефектами оболочки глаз и двусторонней потерей слуха.<br />
В основе этого заболевания лежит мутация в гене <em>MITF</em>, расположенном на 22 хромосоме (melanogenesisassociatedtranscriptionfactor.Chromosome 22, AC_000179.1 (31733024..31961855, complement) (http://omia.angis.org.au).</p>
<p>Продукт гена MITF вовлечен в миграции меланобластов образующихся<br />
в нервном гребне зародышей на всей поверхности тела. Нарушение хода миграции приводит к ряду наследственных заболеваний, таким как синдром Ваарденбурга и частичный альбинизм у человека, и синдром белого симментала<br />
у крупного рогатого скота (Markakis M. N., Soedring V. E., Dantzer V., Christensen K., Anistoroaei R., 2014).</p>
<p>Генетические основы синдрома белого симментала были описаны в 2011 г.(Philipp U., Lupp B., Mömke S., SteinV., TipoldA., EuleJ.C., RehageJ., Distl O. A., 2011). Клиническими проявлениями у животных являются чисто-белый цвет шерсти, розовая кожа без каких-либо темных пятен или призрачных узоров, желто-белые копыта, белые рога, беспигментные веки, ресницы<br />
и конъюнктивальные мембраны. Также описаны случаи гетерохромии радужки, характеризующиеся цветом бледно-голубым в центральной части радужки<br />
и белым по направлению к периферии. Важным клиническим проявлением<br />
у животных является двусторонняя потеря слуха.</p>
<p>Мутация гена MITF R210I была идентифицирована внутри связанного<br />
с микрофтальмой транскрипционного фактора (MITF) как ответственного за этот синдром. Белок, кодируемый этим геном, представляет собой фактор транскрипции, который содержит как основные структурные особенности спиральной спирали, так и спиральную структуру. Закодированный белок регулирует развитие меланоцитов и отвечает за специфическую для пигментных клеток транскрипцию генов фермента меланогенеза. Гетерозиготные мутации в этом гене вызывают слухо-пигментные синдромы. Мутация расположена в высококонсервативной основной области белка и вызывает негативно-доминирующий эффект.</p>
<h3><strong>3.38 Маннозидоз</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 249. MAN2B1_SNPchr7_13956640. Маннозидоз.</p>
<p>Маннозидоз – это рецессивное генетическое заболевание, связанное<br />
с нарушением работы лизосомальной альфа-маннозидазы – низкоспецифичной экзогликозидазы, основная функция которой – деградация гликопротеинов. Этот фермент кодируется геном MAN2B1. Нарушение работы этого фермента приводит к глобальным патологиям метаболизма у КРС. Среди животных галловейской породы распространена альфа-форма этого заболевания. Молекулярно-генетические причины а-маннозидоза связаны с мутацией в этом гене, что приводит к нарушению правильной работы кодируемого им белка. Для животных, гомозиготных по этой мутации, характерна ранняя неонатальная смертность, у родившихся животных наблюдается атоксия, тремор головы, повышенная агрессия и нарушения роста и развития. Большая часть таких животных умирает в первый год жизни (Tollersrud O.K., Berg T., Healy P., Evjen G., Ramachandran U., Nilssen O., 1997).</p>
<p>ГенMAN2B1 (MannosidaseAlphaClass 2bMember 1). Существует две мутации гена MAN2B1 AM_662 (обнаружена в линиях Galloway):</p>
<p>7: g.13956640G &gt; A, c.662G &gt; A, p.Arg221His.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>CCGGTCCCTTATGCATCCTGCCCTCTCTTGTTCTCCCATCCCACTCGTCATCCCTCCCCATCTCCAGATGGGTTTTGACGGCTTCTTCTTTGGAC[G/A]CCTGGATTATCAAGACAAGAAGGTGCGGAAAAAGACGCTGCAGATGGAGCAGGTGTGGCGGGCCAGCACCAGCCTGAAACCTCCCACTGCCGACC.</p>
<p><em>Номернапанелибиочипа</em> – 250. MAN2B1_SNPchr7_13957949. Маннозидоз.</p>
<p>AM_961 (обнаруженавлиниях Angus and Murray Grey):</p>
<p>7: g.13957949, c.961T &gt; C, p.Phe321Leu.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>ACAGGGGTGGGCCAGGACACCCTAGCCTTAGGATACCCCCATCTTGCCTGCAGGGTAAGCTCTACCGCACCAAACACACTGTGATGACCATGGGCTCAGAC[T/C]TCCAGTACGAGAATGCCAACACGTGGTTCAAAAATCTTGACAAGCTCATCCAGTTGGTCAATGCCCAGGTGAGTGTGCCTGCCCCGTGGGCACTT.</p>
<h3><strong>3.39 Мутация в гене OPA3 (внешний регулятор метаболизма липидов митохондриальной мембраны)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 252. OPA3_SNPchr18_53546443. Мутация<br />
в гене OPA3 (внешний регулятор метаболизма липидов митохондриальной мембраны).</p>
<p>Кардиомиопатии – тяжелые <strong>дегенеративные заболевания миокарда</strong>, которые приводят к сердечной недостаточности. В течение последних трех десятилетий дилатационная кардиомиопатия быков (BDCMP) получила широкое распространение в <strong>голштинскойи симментальской породах</strong> крупного рогатого скота.</p>
<p>Дилатационная кардиомиопатия начинает прогрессировать обычнов возрасте от 2 до 4 лет. Сердце больных животных увеличивается, нарушается механизм сокращения сердечной мышцы и животное <strong>умирает в результате тяжелой сердечной недостаточности</strong>. Клиническими признаками заболевания являются заторы яремной вены, отек грудной клетки и абдукция (отведение в сторону) передних конечностей. BDCMP – генетическое заболевание, которое наследуется по аутосомно-рецессивному типу. В 2011 г. группа ученых из Бернского университета нашла казуальную мутацию в гене <strong>ОРА3</strong>, ассоциированную с этим заболеванием. Ген OPA3 расположен на 18 хромосоме и кодирует белок внутренней мембраны митохондрий. Есть сведения, что этот белок вовлечен в регуляцию морфологии митохондрий (Owczarek-Lipska M. [et al.], 2011; Zimin A.V. [et al.], 2009; Horiuchi N. [et al.], 2015).</p>
<h3><strong>3.40 Врожденный миоклонус</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 253. GLRA1_SNPchr7_65080197. Врожденный миоклонус.</p>
<p>Врожденный миоклонус – это наследственное аутосомно-рецессивное заболевание, которое ранее было известно, как нейроаксиальный отек. У животных с ICM наблюдается аномальная реакция на различные тактильные, зрительные и слуховые раздражители в виде гиперестезии и миоклонических судорог скелетных мышц. Врожденный миоклонус вызван несинонимичной мутацией во 2 экзоне гена GLRA, который кодирует a1-субъединицу глицинового рецептора (Windsor P., Kessell A., Finnie J., 2011). Мутация приводит к нарушению стрихнин-связыва­ющего сайта глицинового рецептора, что приводит к потере иммунореактивности клеток. Впервые это заболевание было описано<br />
в 2001 г. учеными из Австралии на поголовье животных породы герефорд.<br />
В рамках дальнейших исследований носители этого заболевания были обнаружены в поголовье КРС голштинской породы. Пострадавшие животные часто кажутся нормальными, но имеют спонтанные мышечные спазмы и жесткость всего тела в ответ на стимуляцию. Хотя подобные патологии и не смертельны, пораженные телята обычно подвергаются эвтаназии.</p>
<p>Ген GLRA1 (GlycineReceptor, Alpha 1) находится на 7 хромосоме:</p>
<p>7: g.65080197C &gt; A, c.156C &gt; A, p.Tyr52X.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>AGTCTTGCTGCTTCCAAGGAGGCTGAAGCTGCTCGGTCTGCTTCCAAGCCCATGTCACCGTCCGATTTCCTGGATAAACTCATGGGGAGGACTTCTGGATA[C/A]GACGCCAGGATCAGGCCCAATTTCAAAGGTAGATAATCTTGCCTTTCAGAGCCCCAGGGATCTGCTTTCCCAGATTGTGGCAGCAAGCCCACTGAATTGT.</p>
<h3><strong>3.41 Врожденный дефицит цинка (ZDL)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 254. PLD4_SNPchr21_71001232. Врожденный дефицит цинка (ZDL).</p>
<p>Это заболевание характеризуется нарушением функции иммунной системы, замедлением роста и кожными изменениями, вследствие нарушения абсорбции цинка в кишечнике. Больные животные рождаются без видимых клинических симптомов, первые поражения кожи возникают в возрасте от четырех до восьми недель. Нарушение иммунной системы делает животных более восприимчивыми к инфекциям и приводит к увеличению числа случаев заражения такими распространенными заболеваниями как энтерит и пневмония. Дополнительное введение цинка улучшает клинические симптомы животных, однако, при отсутствии лечения, ZDL летален. Причиной врожденного дефицита цинка в симментальской породе является мутация в гене фосфолипазы PLD4.</p>
<h3><strong>3.42 Тромбопатия (TP)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 255. RASGRP2_SNPchr29_43599204. Тромбопатия (TP).</p>
<p>Тромбопатия – генетическое заболевание, связанное с нарушением свертываемости крови, происходящим в результате блокировки высвобождения АДФ из тромбоцитов. У больных животных количество тромбоцитов находится в норме, но их функция нарушена, что приводит к нарушению свертываемости крoви. Хотя общее состояние гомозиготных животных может быть без патологий, мелкие травмы могут вызвать кровотечения и смерть в результате потери крови.Частота мутации внутри симментальской породыв гене RASGRP2, приводящей к развитию тромбопатии, составляет 7–8 % (Boudreaux M. K., Schmutz S. M., French P. S., 2007).</p>
<p>У пострадавшего крупного рогатого скота наблюдаются легкие и сильные кровотечения, включая носовое кровотечение, десневое кровотечениеи гематурию. Тяжелые случаи, когда животное может истекать кровью от рутинных процедур: отторжение, выпадение хвоста и прививки. Несмотря на то, что количество тромбоцитов в норме, реакция агрегации тромбоцитов на аденозиндифосфат (АДФ) или фактор активации тромбоцитов (PAF16) сильно снижается.</p>
<p>Ген RASGRP2 (RASGuanylReleasingProtein 2) располагается на 29 хромосоме [69]: 29 :g.43599204A&gt;G,c.701A&gt;G,p.Leu234Pro, rs385444696.</p>
<p>Фланкирующая последовательность мутации:</p>
<p>TCTCCTTGAGGCGGGAGATGGAGCTGTGGCTCAGGCCCCCAACCACTGCCATCAGCGTGTTGAAATTCTGCAGGTGCAGG[A/G]GTTCCTGGGGGACAAATGGGGAGAGAGGAGGCAGTGAGTCACTGAGTGGGCCCAGAATTTGGCCCAGCTTTTCTGGGAA.</p>
<h3><strong>3.43 Карликовость. Мутация в гене RNF11</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 256. RNF11_SNPchr3_95601697. Карликовость. Мутация в гене RNF11 (ассоциирована с нарушением регуляции белкового комплекса А20, что приводит к различным патологиям роста и развития).</p>
<p>Эта мутация была идентифицирована на 3 хромосоме у животных бельгийской голубой породы КРС. Исследователями было установлено, что данная мутация встречается примерно у 26 % животных этой породы. Животные, гомозиготные по этой мутации, погибают в раннем возрасте в связис множественными аномалиями роста и развития организма.</p>
<p>Животные с этой патологией внешне кажутся нормальными при рождении, но страдают от сильного замедления роста через 6 мес, у них узкий череп<br />
и очень волосатая голова. Примерно одна треть пораженных животных умирает от инфекций до 6-месячного возраста из-за скомпрометированной резистентности к патогенам. Мутацияприводиткпотереэкзона 2 (Sartelet A., Druet T., Michaux C., Fasquelle C., Geron S., Tamma N., Zhang Z., Coppieters W., Geor­ges M., Charlier C., 2012).</p>
<p>Ген RNF11 (RingFingerProtein 11) расположен на 3 хромосоме</p>
<p>3: g.95601696A&gt;G, c.124-2A&gt;G.</p>
<p>Фланкирующая последовательность мутации:</p>
<p>AGGTCCCCTCCTCAGCCCAAAAAGGAAGAAACAAAAGGAAAACATTACCTAGAAAACAGATTTTTTAAAAAATAATTAATTTCTCCATTTTAAAAAATTT[A/G]GGAACAAGTTCCAGTTCCGGTCTATCATCCAACACCTAGCCAGACTCGCCTAGCAACTCAGCTGACTGAAGAGGAACAAATTAGGATAGCTCAAAGAATA.</p>
<h3><strong>3.44 Комплексный порок позвоночника (CVM)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 257. SLC35A3_SNPchr3_43412427. Комплексный порок позвоночника (CVM).</p>
<p>Комплексный порок позвоночника – сложный тератологический синдром телят голштинской породы, заключающийся, прежде всего, в выкидышах, преждевременных родах, мертворождении или смерти телят в первые дни жизни, а значит увеличивающий смертность молодняка и воспроизводительные способности скота. Самым ярким проявлением этой аномалии, о чем говорит уже само ее название, являются многочисленные уродства скелета. Cмертность на стадии эмбриона.Носители данной мутации также распространены в популяциях голштинской и черно-пестрой породы всего мира (Thomsen B., Horn P., Panitz F., Bendixen E., Petersen A. H., Holm L. E., Nielsen V. H., Agerholm J. S., Arnbjerg J., Bendixen C., 2006). Мутация содержится в гене SLC35A3 [SOLUTECARRIERFAMILY 35 (UDP-N-ACETYLGLUCOSAMINETRANSPORTER), MEMBER 3], расположенном на 3 хромосоме</p>
<p>3: g.43412427, c.559G &gt; T, p.Val180Phe, rs438228855.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>TAAACTTGTGTTGTTTCTTTTTGTTCAGTGGCCCTCAGATTCTCAAGAGCTTAATTCTAAGGAACTTTCAGCTGGCTCACAATTTGTAGGTCTCATGGCA[G/T]TTCTCACAGCATGTTTTTCCAGTGGCTTTGCTGGGGTTTACTTTGAGAAAATCTTAAAAGAAACCAAACAATCAGTGTGGATAAGAAACATTCAACTTGG.</p>
<p>Для мутации G&gt;T в гене SLC35A3, которая вызывает болезнь комплексной перестройки позвонков (CVM), «G» является аллелем, который имеет большинство животных, а «T» является аллелем, вызывающим заболевание. Животные, имеющие CVM, будут гомозиготными (имеют две копии) для аллеля &#8216;T&#8217;.</p>
<h3><strong>3.45 Акродерматит энтеропатический</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 258. SLC39A4_SNPchr14_1723331. Акродерматитэнтеропатический.</p>
<p>Мутацииявгене SLC39A4(SOLUTE CARRIER FAMILY 39 (ZINC TRANSPORTER, MEMBER 4).Расположен на хромосоме 8 в регионе 8q24.3, состоит из 12 экзонов.</p>
<p>Заболевание, обусловленное нарушением всасываемости в кишечнике за счет дефицита цинка и отсутствия фермента олигопептидазы. Мутации в гене SLC39A4 приводят к дефициту протеина, ответственного за всасывание цинка, что ведет к грубому изменению метаболизма цинка (Tammen I., Cook R. W., Gitschier J., Nicholas F. W., Raadsma H. W., 2002; Yuzbasiyan-Gurkan V., Bartlett E., 2006).</p>
<p>Первые признаки заболевания возникают у телят при рождении. Характерны изменения кожных покровов. Сыпь симметричная, вокруг глаз, в аногенитальной области, в области ягодиц, разгибательных поверхностей коленных<br />
и локтевых суставов. Она полиморфная, вначале эритематозная, везикуло-пустулезная или буллезная, постепенно сливающаяся в крупные мокнущие, эрозированные очаги, покрывающиеся корками серозного или серозно-гнойного характера. Почти у всех больных в зонах поражения обнаруживаются признаки вторичной гноеродной инфекции (Tammen I., Cavanagh J. A. L., Cook R. W., Harper P. A. W., Raadsma H. W., Nicholas F. W., 1999). Около 97 % больных имеют паронихии. Почти постоянным признаком является алопеция разной степени выраженности, нередко тотальная. В результате развивающегося иммунодефицита на коже, слизистых и в кишечнике появляются кокки, грибы рода <em>Candida</em>, простейшие.</p>
<p>Одновременно с кожными проявлениями (иногда раньше) у 91 % больных появляется диарея разной степени выраженности. Стул обильный, пенистый, желто-серого цвета (стеаторея).</p>
<h3><strong>3.46 Перинатальный синдром слабого теленка</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 259. IARS_SNPchr8_85341291. Перинатальный синдром слабого теленка.</p>
<p>Соответствует понятию «физиологическая незрелость» новорожденных (иногда называют «синдром слабых телят»). У таких животных снижен мышечный тонус, тормозится реализация позы стояния (они не могут подняться на ноги в течение первых двух часов после рождения), сосательный рефлекс появляется с запозданием и слабо выражен, отмечают безучастное отношение<br />
к окружающему, сгорбленную позу. Масса тела новорожденного молодняка на 10–30 % меньше нормы, температура снижена на 0,5–1 °С, дистальные участки конечностей холодные. Дыхание поверхностное, неравномерное. Сердечный толчок пальпируется с обеих сторон грудной клетки, тоны сердца ослаблены. При анализе крови выявляют низкие показатели обмена веществ, ацидоз, снижение уровня иммуноглобулинов, гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов.</p>
<p>Мутация в гене IARS (isoleucyl-tRNA synthetase) расположена на 8 хромосоме: AC_000165.1 (85350141..85268884) (Hirano T., Matsuhashi T., Takeda K., Hara H., Kobayashi N., Kita K., Sugimoto Y., HanzawaK., 2016; HiranoT., NishimuraS., HaraH., SugimotoY., HanzawaK., 2017).</p>
<h3><strong>3.47 Голштинский гаплотип НН3</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 260. SMC2_SNPchr8_95410507. Голштинский гаплотип НН3.</p>
<p>Гаплотип – это последовательность нуклеотидов, расположенная в одной хромосоме и передаваемая от родителей к детям без изменений. Если внутри гаплотипа происходит мутация (замена нуклеотидов, выпадение фрагмента или встраивание нового участка), то образуется новый гаплотип. Потомок может получить от предка только одну копию гаплотипа.</p>
<p>Для проявления отрицательного влияния гаплотипа потомок должен получить две одинаковые копии участка ДНК: одну – от отца, другую – от матери. По принятой номенклатуре наименование гаплотипа состоит из двух латинских букв и порядкового номера. Первая буква обозначает породу, вторая – Н<br />
от haplotype.</p>
<p>В голштинской породе в настоящее время регистрируется 10 гаплотипов фертильности (HCD, HH0, HH1, HH2, HH3, HH4, HH5, HHB, HHC, HHD), оказывающих влияние на процент успешных осеменений (с наступлением стельности) и/или ассоциированных с эмбриональной и ранней постэмбриональной смертностью на различных стадиях и встречающихся с частотой от 0,01 до 2,95 %.</p>
<p>Гаплотип HH3, с которым связана эмбриональная смертность до 60-х суток стельности, картирован на 8-й хромосоме на участке 90–95 Mb. По уточненным данным, область локализации HH3 – 94–96 Mb, установлена его ассоциация<br />
с мутацией в гене структурной поддержки хромосом 2 (StructuralMaintenanceOfChromosomes 2 – SMC2). Причина HH3 – несинонимичная замена Т → С<br />
в позиции 24-го экзона в гене SMC2, приводящая к аминокислотной замене<br />
Phe → Ser в положении 1135 в НТФазном домене кодируемого белка (Zhang Y.<br />
[et al.], 2015; Bruford M. W., Bradley D. G., 2003).</p>
<p>Ген SMC2 (Structural Maintenance of Chromosomes 2)</p>
<p>8: g.95410507, c.3404T &gt; C, p.Phe1135Ser, rs456206907.</p>
<p>Фланкирующаяпоследовательностьмутации:</p>
<p>CTCCTTTTCAAACCTGCCCCAATCTACATCCTGGATGAGGTCGATGCAGCCCTGGATCTTTCTCATACTCAGAATATTGGACATATGCTACGTACTCATT[T/C]CACACATTCTCAGGTAAGAACCAAAAAGAGCCTCAGAATAGTTCTAGGATTTGTTTTTCTAAAACTATTCTTTAGTAATGGTCAGTATATATAAGGAATT.</p>
<h3><strong>3.48 Спинальная демиелинизация (SDM)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 261. SPAST_SNPchr11_14760164. Спинальная демиелинизация (SDM).</p>
<p>Нейродегенаритивное заболевание характеризуется патологическими изменениями миелиновой оболочки спинного мозга. Болезнь связана с нарушением работы белка спастина, которое приводит к потере АТФазной активности этого белка.</p>
<h3><strong>3.49 Врожденный зоб щитовидной железы (CG)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 262. TG_SNPchr14_9487659. Врожденный зоб щитовидной железы (CG).</p>
<p>Врожденный зоб щитовидной железы (CG) – это аутосомно-рецессивное наследственное заболевание, вызванное мутацией в гене TG, который кодирует белок тиреоглобулин. CG является первым генетическим заболеванием среди всех доместицированных видов животных, для которых была описана молекулярно-генетическая природа.Казуальная мутация была идентифицирована<br />
у животных породы африкандер бельгийскими и южноафриканскими учеными в 1987 г. (RickettsM.H. [et al.], 1987).</p>
<p>Симптомами данного заболевания является увеличение щитовидной железы, приводящее к сильному отеку в передней части шеи. В связи с нарушением работы щитовидной железы, у животных наблюдаются аномалии развития внутренних органов, что приводит к смерти животного в первые годы жизни (http://omia.angis.org.au).</p>
<p>Наследственный зоб щитовидной железы был обнаружен не только<br />
у КРС, но и у многих других видов домашних животных (собак, домашних котов, овец, коз, куриц и др.). Кроме того, исследование CG у КРС помогло открытию и изучению первой мутации гена TG у человека. Одним из самых ярких симптомов врожденного зоба щитовидной железы у КРС является сильный отек в передней части шеи (Nicholas F.W., Hobbs M., 2014).</p>
<h3><strong>3.50 Глазокожный альбинизм</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 263. TYRP1_SNPchr8_31711945. Глазокожный альбинизм.</p>
<p>Ген TYRP1 кодирует тирозиназа-связанный белок 1, меланосомальный фермент, который принадлежит к тирозиназному семейству и играет важную роль в пути биосинтеза меланина – вещества, которое придает коже, волосам<br />
и глазам свой цвет. Он также обнаруживается в светочувствительной ткани<br />
в задней части глаза (сетчатке), где он играет роль в нормальном зрении. Дефекты в этом гене являются причиной рыжего глазокожного альбинизмаи глазокожного альбинизма типа III (Berryere T. G., Schmutz S. M., Schimpf R. J., Cowan C. M., Potter J., 2003). Исследования показывают, что этот фермент может помочь стабилизировать тирозиназу, которая ответственна за первую стадию производства меланина. Связанный с тирозиназой белок 1 также может помочь определить форму меланосом, которые являются структурами в меланоцитах.</p>
<h3><strong>3.51 Мутация в гене UBE3B – убиквитин-белковой лигазы E3B</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 264. UBE3B_SNPchr17_65921497. Мутация<br />
в гене UBE3B – убиквитин-белковой лигазы E3B.</p>
<p>Модификация белков убиквитином является важным клеточным механизмом для нацеливания на аномальные или короткоживущие белки для деградации. Убиквитинилирование включает по меньшей мере три класса ферментов: E1 убиквитин-активирующие ферменты, E2-убиквитин-конъюгирующие ферменты и E3-убиквитин-белковые лигазы. Этот ген кодирует член семейства E3 убиквитин-конъюгирующих ферментов, который забирает убиквитин из E2-убиквитин-конъюгирующего фермента и переносит убиквитин на целевые субстраты. Термин HECT (гомология к E6-AP C-концу) в С-конце более длинной изоформы этого белка является каталитическим сайтом переноса убиквитина и образует комплекс с конъюгатами E2. Поэтому более короткие изоформы этого белка, которые не имеют С-концевого домена HECT, вряд ли связывают ферменты Е2. В качестве альтернативы для этого гена были идентифицированы варианты сращивания транскриптов, кодирующие различные изоформы.</p>
<p>Заболеванием, связанным с мутацией в гене UBE3B, является синдром Кауфмана.</p>
<h3><strong>3.52 Дефицитуридинмонофосфатсинтетазы (Deficiency of Uridine-5-Monophosphate Synthase, DUMPS)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 265. UMPS_SNPchr1_69756880. Дефицитуридинмонофосфатсинтетазы (Deficiency of Uridine-5-Monophosphate Synthase, DUMPS).</p>
<p>DUMPS – это наследственное летальное аутосомно-рецессивное заболевание в голштинской популяции, приводящее к ранней эмбриональной смертности на стадии имплантации эмбриона в матку. Это связано с нарушением синтеза уридин-монофосфата в организме, который является одним из ключевых элементов при синтезе <em>de novo</em> пиримидиновых нуклеотидных оснований. Смертность эмбриона наступает примерно на 40 день после оплодотворения.</p>
<p>Методика ДНК-диагностики носительства DUMPS была разработана<br />
и введена Б. Швенгером в 1993 г. (Nasreen F. [et al.], 2012; Dennis J.A. [et al.], 1989) и до сих пор используется практически без изменений. Дифференциация аллелей осуществляется с помощью ПЦР с использованием праймеров:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>forUMPS 5’-GCAAATGGCTGAAGAACATTCTG-3’</td>
</tr>
<tr>
<td>revUMPS 5’-GCTTCTAACTGAACTCCTCGAGT-3’</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Поскольку при замене цитозина исчезает сайт узнавания рестриктазой AvaI, идентификация нерасщепленного амплифицированного ПЦР-продукта локуса гена UMPS позволяет однозначно определить носителей этой мутации.</p>
<p>Учитывая низкую племенную ценность гетерозиготных быков с этой аномалией, своевременная диагностика и выбраковка животных племенного материала могут позволить элиминировать DUMPS и направленно формировать группы для воспроизводства животных.</p>
<p>Мутация в гене UMPS (UridineMonophosphateSynthetase), расположенном на 1 хромосоме</p>
<p>1: g.69756880C &gt; T, c.1213C &gt; T, p.Arg405X.</p>
<p>Фланкирующая последовательность мутации:</p>
<p>TGTGGTTAACTGCTGTCTTGTCATCTGTTGATTACATTCCATTCAGGTGCAAATGGCTGAAGAACATTCTGAATTTGTGATTGGTTTTATTTCTGGCTCC[C/T]GAGTAAGCATGAAACCAGAATTTCTTCACTTGACTCCAGGAGTTCAGTTAGAAGCAGGAGGTAAGCCTATTGATTGGTAATGATTCCTCTAAAATGCTGC.</p>
<h3><strong>3.53 Гемофилия А (FVIIID)</strong></h3>
<p><em>Номер на панели биочипа</em> – 266. F8_SNPchrX_38971744. Гемофилия А (FVIIID).</p>
<p><strong>Гемофилия А</strong> (FVIIID; OMIA 000437-9913) представляет собой нарушение свертываемости крови, описанное как у человека, так и у многих видов домашних животных (лошадей, овец), в том числе у крупного рогатого скота (Moritomo Y., Shimojo K., Miyadera K., Khalaj M., Asano Y., Kunieda T., Ogawa H., 2008).</p>
<p>Заболевание связано с<strong>дефицитом фактора VIII свертывания крови</strong> – плазменного гликопротеина, ген которого расположен на Х хромосоме (Khalaj M., Abbasi A.R., Shimojo K., Moritomo Y., Yoneda K., Kunieda T., 2009). Таким образом, дефицит фактора VIII – Х-сцепленное рецессивное наследственное заболевание, в то время как большинство наследственных заболеваний, связанных<br />
с факторами свертываемости, являются аутосомно-рецессивными заболеваниями (Moritomo Y., Shimojo K., Miyadera K., Khalaj M., Asano Y., Kunieda T., Ogawa H., 2008).</p>
<p>У животных, страдающих дефицитом фактора VIII, наблюдаются внезапные подкожные и внутримышечные кровоизлияния, кровотечения, обширные гематомы(Moritomo Y., Shimojo K., Miyadera K., Khalaj M., Asano Y., Kuni­eda T., Ogawa H., 2008). В 2009 г. учеными из Японии была найдена казуальная мутация, ассоциированная с этим заболеванием. Казуальная мутация представляет собой однонуклеотидную замену А/Т в гене F8 (http://omia.angis.org.au). Мутация AC_000187.1 (38838455..38982287) в конечном итоге приводит к замене аминокислоты лейцин на гистидин в домене C1 фактора VIII свертывания крови, что приводит к изменению структуры и функции белка (Moritomo Y., Shimojo K., MiyaderaK., Khalaj M., Asano Y., Kunieda T., Ogawa H., 2008).</p>
<h2><strong>4 ВЫБОР ПЛАТФОРМЫ ДЛЯ РЕАЛИЗАЦИИ ИССЛЕДОВАНИЯ. ОПИСАНИЕ ПАНЕЛИT ruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel (Illumina, США)</strong></h2>
<p>Идентификация животных играет ключевую роль в государственной сельскохозяйственной политике, позволяя управлять выплатами субсидий, перемещением скота, составлением графиков испытаний и борьбы с болезнями. Достижения в области геномики крупного рогатого скота позволили использовать врожденную генетическую изменчивость для уникальной идентификации отдельных животных с помощью профилирования ДНК, во многом благодаря тому, что было получено в области генотипирования человека за последние<br />
20 лет. Тест на ДНК-профилирование, основанный на маркерах биаллельных однонуклеотидных полиморфизмах (SNP), обеспечивает значительные преимущества по сравнению с текущими отраслевыми тестами на основе стандартных коротких тандемных повторов (STR), его легче анализировать и интерпретировать.</p>
<p>Выявление и регистрация скота и контроль его перемещения является важной частью сельскохозяйственной политики национальных правительств. Такие схемы лежат в основе борьбы с болезнями, управления грантами и субсидиями, обеспечения гигиены пищевых продуктов и безопасности, все это облегчает отзыв продукции при необходимости.</p>
<p>В результате этих преимуществ, а также в ответ на основные проблемы со здоровьем животных, такие как BSE (губчатая энцефалопатия) и ящур, которые влияют на домашний скот, производителей и потребителей, во многих странах развитого мира приняли национальные базы данных, основанные на пронумерованных ушных бирках, для регистрации личности и перемещений крупного рогатого скота (Buick W., 2004;Houston R., 2001).</p>
<p>Глобализация торговли также усилила аргументы в пользу улучшения отслеживания животных. Современные потребители, сталкивающиеся с расширением выбора из нескольких источников, могут также столкнуться с повышенными рисками в результате повышенной вероятности химического (атогенного) загрязнения пищевых продуктов (Caporale V., Giovannini A., Di Francesco C., Calistri P., 2001;McKean J.D., 2001). Такие кризисы могут поставить под угрозу экономическое благополучие агропродовольственных отраслей, а также повлиять на здоровье и доверие потребителей. Кризис БФБ 1990-х гг. наглядно продемонстрировал это, и показал, что действия одного государства могут негативно повлиять на общественное здоровье других (McGrann J., Wiseman H., 2001).</p>
<p>В свете потенциальных опасностей, о которых говорилось выше, Европейский союз (ЕС) принял Директиву Совета 92/102/EEC, в которой говорится, что все коровы в государствах-членах должны быть идентифицированы с помощью ушной бирки с уникальным идентификационным кодом (Ammendrup S., Fus­sel A.E., 2001).Более расширенные правила Совета 1760/2000 (Regulation (EC) № 1760/2000, 2000) и ст. 18 правила 178/2002 (Council Regulation (EC) № 178/2002, 2002) устанавливают необходимость для государств-членов контролировать регистрацию и отслеживание крупного рогатого скота через компьютеризированную базу данных, основанную на системе с двумя ушными бирками. Эти расширенные правила отслеживаемости также распространяются на продукты, полученные от животного после убоя, гарантируя возможность отследить партию мяса вплоть до происхождения животного с помощью маркировки на тушах, отрубах и упаковке. Эти правила были разработаны для обеспечения того, чтобы полная прослеживаемость животных и мяса была «установлена на всех этапах производства, обработки и распределения».</p>
<p>Дальнейшая разработка схем меток может включать использование электронных идентификационных устройств, таких как метки радиочастотной идентификации (RFID), рубцовые болюсы и инъекционные транспондеры, которые автоматизируют считывание идентификационных данных животных, тем самым уменьшая ошибки перевода (Ribo O., Korn C., Meloni U., Cropper M., De Winne P., Cuypers M., 2001).</p>
<p>Недавний отчет ЕС об использовании электронной идентификации в агропродовольственной промышленности (проект IDEA – IDentification Electronique des Animaux; http://idea.jrc.it/), хотя и приветствовал способность таких систем улучшать управление сельским хозяйством, тем не менее подтвердил, что предпочтительный вариант – ушные бирки RFID – все еще страдает от той же случайной потери меток и проблем с мошеннической перестановкой, которыми страдают традиционные схемы (Report From The Commission To The Council And The European Parliament, 2005).</p>
<p>Неправильная идентификация животных в результате потери метки имеет серьезные эпидемиологические последствия и проблемы с трекингом, которые могут привести к дорогостоящим последствиям для производителей. Степень потерь метки и отрицательное влияние этого на способность восстановить правильный идентификатор были определены в недавнем исследовании на активно размножаемых буйволах, которое показало, что среднее время сохранения ушной метки составляет 272 дня (Fosgate G.T., Adesiyun A.A., Hird D.W., 2006). Аналогичным образом, недостатки в маркировке мяса на скотобойнях и в торговых точках приводят к потере коррекции между номерами партий и образцов. В недавнем исследовании с использованием типирования ДНК было показано, что 2% случайно выбранных образцов из меченых тушек в скотобойне не соответствовали профилям животных, от которых они якобы исходили. Этот показатель увеличивался до 3%, когда отбор проб проводился в торговой точке (Capoferri R., Bongioni G., Galli A., Aleandri R., 2006).</p>
<p>Корень этих проблем в обычных и электронных системах мечения/мар­кировки возникает из-за их зависимости от методов, с помощью которых отслеживают устройства, прикрепленные к животным и их продуктам, но не самих животных или продуктов. Тем не менее, профилирование ДНК, которое использует неизменные биологические свойства отдельных животных для получения уникального идентификатора, предлагает потенциальное решение для научной проверки идентичности животных (Pettitt R.G., 2001). В настоящее время не существует технологии, позволяющей считывать профили ДНК в режиме реального времени, в отличие от меток и ярлыков. Это ограничивает использование профилирования по ДНК в качестве основного идентификатора животных и производных пищевых продуктов. Тем не менее, несмотря на эти ограничения, профилирование по ДНК можно эффективно использовать в ретроспективных аудитах для проверки идентичности и качества меток для обеспечения существующих технологий отслеживания мяса (Cunningham E.P., Meghen C.M. , 2001; Pettitt R.G., 2001; Raspor P., 2004). Дополнительное преимущество проверки происхождения на основе ДНК делает ее мощным методом проверки информации из базы данных по национальным стадам.</p>
<h3><strong>4.1 ДНК-маркеры и ДНК-профилирование</strong></h3>
<p>Уровень полиморфной изменчивости, наблюдаемый для бычьих коротких тандемных повторов (STR), позволяет использовать относительно немного локусов для идентификации крупного рогатого скота и определения его происхождения (Glowatzki-Mullis M. L., Gaillard C., Wigger G., Fries R., 1995; Heyen D. W., Beever J. E., Da Y., Evert R. E., Green C., Bates S. R., Ziegle J. S., Lewin H. A., 1997).</p>
<p>Несколько хорошо определенных панелей STR для крупного рогатого скота имеются в продаже. Одна такая 11-маркерная панель была одобрена Международным обществом генетики животных (ISAG) для использования племенными сообществами для регистрации племенных быков, телок и их потомства.</p>
<p>Одиночные нуклеотидные полиморфизмы (SNP) представляют собой гораздо более простую форму вариации ДНК, чем микросателлиты, включая изменение одного нуклеотида в одной позиции генетического кода. Это отсутствие разнообразия делает маркеры SNP менее информативными, чем микросателлиты.<br />
В результате, одиночные SNP нельзя использовать для профилирования индивидуумов.Тем не менее, генотипирование нескольких SNP может решить эту проблему (Werner F. A. O., Durstewitz G., Habermann F. A., Thaller G., Kramer W., Kollers S., Buitkamp J., Georges M., Brem G., Mosner J., Fries R., 2004).</p>
<p>Генотипирование с использованием SNP также имеет явные преимущества перед генотипированием с помощью STR. Из-за своего меньшего размера они менее подвержены мутациям в гаметах,и поэтому не имеют проблемы потери идентичности при смене поколений, которые могут влиять на анализ с использованием STR, поскольку они мутируют между поколениями (Werner F. A. O., Durstewitz G., Habermann F.A., Thaller G., Kramer W., Kollers S., Buitkamp J., Georges M., Brem G., Mosner J., Fries R., 2004). SNP также являются более надежными при их интерпретации/анализе по сравнению с STR (Krawczak M., 1999), и они могут быть генотипированы с помощью различных методов с высокой пропускной способностью на различных платформах, многие из которых могут быть автоматизированы с экономией при масштабировании (Kruglyak L., 1997). С появлением постоянно улучшающихся технологий генотипирования (Kim S., Misra A., 2007) в последнее время стало привлекательным создание системы профилирования ДНК на основе SNP для идентификации крупного рогатого скота. Для этой цели недавно были собраны две панели SNP (Heaton M. P., Harhay G. P., Bennett G. L., Stone R. T., Grosse W. M., Casas E., Keele J. W., Smith T. P. L., Chitkon-McKown C. G., Laeg­reid W. W., 2002; Werner F. A. O., Durstewitz G., Habermann F.A., Thaller G., Kra­mer W., Kollers S., Buitkamp J., Georges M., Brem G., Mosner J., Fries R., 2004).</p>
<p>TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel – это ценное решение для тестирования родства для нескольких пород мясного и молочного скота. В данном анализе предлагается больше информации в одном анализе, чем в одном только тесте родства, благодаря чему сервисные лаборатории могут использовать панель секвенирования TruSeq Bovine для получения более информированных рекомендаций по управлению стадом.</p>
<h3><strong>4.2 Преимущества</strong></h3>
<p>Расширенное содержание повышает ценность –панель включает в себя все рекомендуемые материалы от Международного общества генетики животных (ISAG), а также связанные с заболеваниями и экономически важные признаки.</p>
<p>Надежный анализ лимитирует затраты – интеллектуальный дизайн контента, высокая точность и надежность исключают необходимость в дорогостоящем многократном или повторном тестировании.</p>
<p>Интуитивно понятное программное обеспечение упрощает анализ интерпретации данных – программное обеспечение автоматически преобразует результаты секвенирования в генетический профиль без необходимости экспертизы в области биоинформатики.</p>
<p>Хотя микросателлиты или короткие тандемные повторы (STR) являлись предпочтительными генетическими маркерами для контроля происхождения<br />
у крупного рогатого скота, мировая индустрия переходит к методам на основе однонуклеотидных полиморфизмов – SNP (ISAG cattle core and additional SNP panel 2013). SNP обладают рядом преимуществ (Allen A. R. [et al.], 2010; Fernández M.E. [et al.], 2013; Schütz E., Brenig B., 2015):</p>
<ul>
<li>низкая частота мутаций между поколениями;</li>
<li>надежная интерпретация данных;</li>
<li>совместимость с автоматизированным, высокопроизводительным<br />
анализом;</li>
<li>подходит для стандартизированного представления результатов генотипирования.</li>
</ul>
<p>В панели TruSeq Bovine Parentage используется проверенная технология секвенирования следующего поколения Illumina (NGS), обеспечивающая точные результаты генотипирования для определения происхождения на основе SNP. Оптимизированный рабочий процесс, включая подготовку библиотеки посредством анализа данных, повышает эффективность. Высокая точностьи надежность уменьшают необходимость повторного тестирования, помогая лимитировать расходы. В панели TruSeq Bovine объединены SNP для определения происхождения и добавлено генотипирование биологически значимых признаков в едином тесте.</p>
<p>Разработанная учеными Illumina в соответствии с рекомендациями ISAG, панель секвенирования коров TruSeq Bovine содержит 263 гена. Они охватывают весь рекомендуемый ISAG контент и дополнительные экономически ценные и связанные с заболеванием маркеры (таблица 4).</p>
<h3><strong>4.3 Панель SNP, используемая для оценки происхождения</strong></h3>
<p>Международное общество генетики животных (ISAG) создало набор однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) для тестирования происхождения (родства) крупного рогатого скота – <em>Bos taurus</em>, который следует использовать на международном уровне, чтобы сделать результаты сопоставимыми между лабораториями. Панель состоит из 100 основных SNP и дополнительного набора из 100 маркеров (CMMPT 2012). SNP в основной панели были отобраны преимущественно на основе данных по европейским тауринным породам и, таким образом, могут не быть идеальными для установления родства в родословно родственных породах (Lachance J., Tishkoff S. A. , 2013; Strucken E., Gudex B., Ferdosi M., Lee H., Song K., Gibson J, Kelly M., Piper E., Porto-Neto L., Lee S. H., Gondro C., 2014). Для решения этой проблемы<br />
в ISAG была предложена дополнительная маркерная панель для увеличения мощности исключения в индиковых и синтетических породах, и эти породы были добавлены в сравнительные тесты общества (<a href="http://www.isag.us/comptest.asp?autotry=true&amp;ULnotkn=true" target="_blank" rel="noopener">http://www.isag.us/<br />
comptest.asp?autotry=true&amp;ULnotkn=true</a>).</p>
<p><strong>Таблица 5</strong> – Содержимое панели секвенирования TruSeq Bovine</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Описание</td>
<td>Число SNP</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>SNP, используемые для оценки происхождения</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Основная панель SNP для оценки происхождения<br />
согласно ISAG (ISAGCoreSNPTargets)</td>
<td>100</td>
</tr>
<tr>
<td>Дополнительная панель SNP для оценки происхождения согласно ISAG (ISAG Additional SNP Targets)</td>
<td>100</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Вариантные мишени, ассоциированные с генетическими<br />
нарушениями/заболеваниями</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Пренатальные/перинатальные смертельные заболевания (HH1, HH3, HH4, MH1 и т. д.)</td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Постнатальные смертельные заболевания<br />
(цитруллинемия, врожденная мышечная дистония,<br />
кардиомиопатия, миоклонус и т. д.)</td>
<td>17</td>
</tr>
<tr>
<td>Нелетальные патологии, ухудшающие состояние<br />
(синдром Марфана, сращение пальцев, протопорфирия, гемофилия A и т. д.)</td>
<td>19</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Вариантные мишени, ассоциированные с экономически<br />
ценными признаками</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Мужская фертильность</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Высота в холке и внешний вид</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Качество мяса</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Качество молока</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Общее количество SNP/вариантных мишеней</td>
<td>263</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<h3><strong>4.4 SNP, ассоциированные с генетическими нарушениями/заболеваниями</strong></h3>
<p><strong>Пренатальная/перинатальная смертность</strong></p>
<p>Аборты, происходящие во время поздней беременности, приводят к значительным экономическим потерям. Оценка стоимости аборта для производителя варьировалась от 90 до 1900 долл. США (De Vries A., 2006; Hovingh E., 2009; Peter A.T., 2000) в зависимости от времени аборта, различий в прогнозируемой производительности коров, а также решениях о разведении и замене. Для голштинской породы известно несколько рецессивных патологических аномалий, связанных с гибелью и абортом плода, и отдельных локусов, которые снижают жизнеспособность эмбрионов или раннее развитие плода у крупного рогатого скота. Одной из распространенных генетических аномалий, вызывающих аборт у коров голштинской породы, является сложный порок позвоночника – CVM (Agerholm J.S., Bendixen C., Andersen O., Arnbjerg J., 2001). CVM вызывает пороки развития во время средней и поздней беременности, хотя некоторые беременности достигают срока и приводят к мертворождению.</p>
<p>Недавно генотипирование сотен тысяч животных в популярных молочных породах США с использованием панелей однонуклеотидного полиморфизма (SNP) по всему геному дало возможность найти области генома с несбалансированным H-W равновесием. Отсутствие ожидаемых гомозиготных гаплотипов в геномной области может быть связано с пагубными последствиями для развития плода и может вызвать аборт и мертворождение у голштинского крупного рогатого скота (Glusman G., Cox H.C., Roach J.C., 2014; VanRaden P.M., Olson K.M., Null D.J., Hutchison J.L., 2011)].В 2011 г. три летальных гаплотипа, влияющих на развитие плода у крупного рогатого скота голштинской породы, были идентифицированы и локализованы на бычьих хромосомах 5 (HH1),<br />
1 (HH2) и 8 (HH3) (VanRaden P.M., Olson K.M., Null D.J., Hutchison J.L., 2011). Два года спустя во всем мире было зарегистрировано 14 дополнительных летальных гаплотипов (HH4–HH17) у крупного рогатого скота голштинской породы, и тем временем некоторые из них были разрешены на молекулярном уровне, то есть HH1 (APAF1) и HH3 (SMC2), HH4 (GART) и HH5 (TFB1M).</p>
<p>Большинство рецессивных генов, связанных со снижением фертильности<br />
и потерями беременности у крупного рогатого скота, весьма трудно обнаружить, и они передаются без обнаружения, поэтому они не включены в список факторов, ведущих к абортам. HH1 приводит к абортам в течение всего периода беременности, но HH3 приводит к потере эмбриона вскоре после зачатия (VanRaden P.M., O’Connell J.R., Wiggans G.R., Weigel K.A., 2011). В случае<br />
с HH1,потеря фертильности на 34, 51 и 63 % связана с этим гаплотипом и происходит через 60, 100 и 140 дней после оплодотворения, соответственно. Для HH2 – 56% связаны с этим гаплотипом и происходят через 60 дней после оплодотворения и 94% – через 100 дней. Для HH3 потерей фертильности на<br />
93% связана с этим гаплотипом и происходят через 60 дней после оплодотворения (Norman H. D., Miller R. H., Wright J. R., Hutchison J. L., Olson K. M., 2012).</p>
<p><strong><em>HH1</em></strong> был картирован в бычьей хромосоме 5 (BTA5), на 58–66Mb (сборка генома UMD 3.0). Используя секвенирование всего генома быка Arlinda Chief из фермы Pawnee Farm (родился в 1962 г. и был одним из самых плодовитых быков в истории разведения голштинов) и трех его сыновей, Адамс с соавторами в 2016 г. идентифицировали причинную нонсенс-мутацию (p.Q579X) в факторе 1, активирующем апоптотическую протеазу (APAF1) в HH1 (Adams H.A., Sonstegard T.S., VanRaden P.M., Null D.J., Van Tassell C.P., Larkin D.M., Lewin H.A., 2016). Предполагается, что эта мутация отрезает 670 аминокислот (53,7%) в белке APAF1, которые включают домен WD40 – критический для межбелковых взаимодействий. Белок, кодируемый APAF1, является центральным элементом апоптотического каскада, опосредованного цитохромом С (Apweiler R., Bairoch A., Wu C.H., Barker W.C., Boeckmann B., Ferro S., Gasteiger E., Huang H., Lopez R., Magrane M., Martin M.J., Natale D.A., O’Donovan C., Redaschi N., Yeh L.S., 2004), и напрямую связан с нарушениями развития и нейродегенеративными заболеваниями (Blake J.A., Bult C.J., Ka­din J. A., Richardson J. E., Eppig J. T., 2011; Honarpour N., Gilbert S. L., Lahn B. T.,Wang X., Herz J., 2001). Экспрессия APAF1 во время мышиного развития начинается на ранних стадиях в различных эмбриональных тканях и имеет важное значение для развития центральной нервной системы. Гомозиготный по нокаутному аллелю гена APAF1 у мышей приводит к эмбриональной летальности<br />
к 16,5-му дню, а у APAF1-дефицитных мышей обнаруживается чрезмерный рост головного мозга и черепно-лицевые пороки развития (Honarpour N., Gil­bert S.L., Lahn B.., Wang X., Herz J., 2001; Müller M., Berger J., Gersdorff N., Cecconi F., Herken R., Quondamatteo F., 2005).</p>
<p>Гомозиготность по этому аллелю приводит к самопроизвольному аборту<br />
и, следовательно, к снижению фертильности у быков-носителей, если они спариваются с коровами-носителями, потому что функциональный пептид APAF1 необходим для развития эмбрионов. По оценкам, спонтанные аборты, вызванные этой мутацией во всем мире, за последние 35 лет составили 525000, что составляет около 420 млн долл. убытков. После генотипирования 246773 голштинов было обнаружено, что 5299 коров являлись гетерозиготами по APAF1, и не было обнаружено гомозиготных коров по этой мутации, поэтому частота носителей мутации APAF1 составила 2,1% (Adams H.A., Sonstegard T.S., VanRa­den P.M., Null D.J., Van Tassell C.P., Larkin D.M., Lewin H.A., 2016).</p>
<p><strong><em>HH2</em>. </strong>В 2014 г. МакКлюр с соавторами уточнили картирование гаплотипа HH2 на BTA1 с 94860836 до 96553339 (UMD3.1) (McClure M.C., Bickhart D., Null D., Vanraden P., Xu L., Wiggans G., Liu G., Schroeder S., Glasscock J., Armstrong J., Cole J.B., Van Tassell C.P., Sonstegard T.S., 2014). В обширном исследовании, включающем захват экзома и секвенирование следующего поколения, МакКлюр с соавторами не смогли обнаружить какой-либо потенциально причинный вариант для гаплотипа HH2. Эффекты фертильности для HH2 были в значительной степени подтверждены путем сравнения нормальных показателей зачатия для голштинов (31%) с частотой спаривания гетерозиготных быков с дочерями гетерозиготных быков (VanRaden P.M., Olson K.M., Null D.J., Hutchison J.L., 2011). Показатели зачатия носителей HH2 были ниже среднего. Большинство потерь эмбрионов для HH2 происходило до 100-го дня беременности (VanRaden P.M., Olson K.M., Null D.J., Hutchison J.L., 2011).Частота мертворождения для HH2 была невысока, но все-таки незначительно выше обычной.Бык-основатель гаплотипа HH2 был прослежен по происхождению до отца по имени Willowholme Mark Anthony (McClure M.C., Bickhart D., Null D., Vanraden P., Xu L., Wiggans G., Liu G., Schroeder S., Glasscock J., Armstrong J., Cole J.B., Van Tassell C.P., Sonstegard T.S., 2014).</p>
<p><strong><em>HH3</em>.</strong>В своей статье от 2014 г. МакКлюр с соавторами также уточнили картирование гаплотипа HH3 на BTA8 с 95,057,877 до 95,468,310 (UMD3.1) (McClure M. C., Bickhart D., Null D., Vanraden P., Xu L., Wiggans G., Liu G., Schroeder S., Glasscock J., Armstrong J., Cole J. B., Van Tassell C. P., Sonstegard T. S., 2014).Кроме того, в своей статье Детуайлер с совторами заявили, что в проекте, включающем 1000 бычьих геномов, в качестве носителя гаплотипа HH3 был идентифицирован один бык (Daetwyler H. D., Capitan A., Pausch H., Stothard P., van Binsbergen R., Brøndum R. F., Liao X., Djari A., Rodriguez S. C., Grohs C., Esquerré D., Bouchez O., Rossignol M. N., Klopp C., Rocha D., Fritz S., Eggen A., Bowman P. J., Coote D., Chamberlain A. J., Anderson C., Van Tassell C. P., Hulseg­ge I., Goddard M. E., Guldbrandtsen B., Lund M. S., Veerkamp R. F., Boichard D. A., Fries R., Hayes B. J., 2014). С использованием методик экзомного захвата и секвенирования следующего поколения, МакКлюр с соавторами установили, что данная мутация представляла SNP-замену (T/C) в 24 экзоне гена структурной сохранности хромосом 2 (SMC2). Для подтверждения этого, мутация была генотипирована путем секвенирования панели геномов 10 известных носителей HH3; все они были гетерозиготными по мутации, подтверждая связь между областью HH3 и аллелем g.95410507C. Из-за жизненно важной роли SMC2 в репарации ДНК и конденсации хромосом во время клеточного деления, эта мутация вызывает ненейтральную и непереносимую заменув НТФ-азном домене кодируемого белка из-за смены аминокислоты с фенилаланина на серин.</p>
<p>Кроме того, 5606 голштинских особей были генотипированы по мутации T&gt;C с использованием стандартизированного метода Illumina BeadChip, и не было выявлено ни одного индивида с генотипом CC, что подтверждает гипотезу, что эта мутация вызывает эмбриональную летальность. Более того, частота зачатия была ниже, чем частота зачатия у здоровых голштинов (31%), при спаривании гетерозиготных быков HH3 с дочерями гетерозиготных быков. Большинство потерь зачатия для HH3 происходило до 60 дней (VanRaden P.M., Olson K.M., Null D.J., Hutchison J.L., 2011).Бык-основатель для HH3 был прослежен до производителей по имени Glendell Arlinda Chief и Gray View Skyliner (McClure M.C., Bickhart D., Null D., Vanraden P., Xu L., Wiggans G., Liu G., Schroeder S., Glasscock J., Armstrong J., Cole J.B., Van Tassell C.P., Sonste­gard T.S., 2014).</p>
<p><strong><em>HH4</em>.</strong>Фритц с соавторами в 2013 г. локализовали HH4 на BTA1 в области 1,9–3,3 Мб (сборка генома UMD 3.1) и предоставили значительные доказательства возможной причинной мутации в гене GART, который кодирует глицинамид рибонуклеотидтрансформазу, что привело к p.N290T (Fritz S., Capitan A., Djari A., Rodriguez S.C., Barbat A., Baur A., Grohs C., Weiss B., Boussaha M., Esquerré D., Klopp C., Rocha D., Boichard D., 2013). Было предсказано, что две мутации, связанные с HH4, приводят к патологии: трансверсия А-С в положении g.1277227A.C и переход G-A в положении g.2490314G.A на BTA1. Первая из них приводит к замене аспарагина в предполагаемом сайте связывания марганца треонином (p.N290T) в белке GART. Аспарагин-290 полностью консервативен среди эукариот, что доказывает ключевую роль этой аминокислоты<br />
в функционировании GART. Кроме того, GART жизненно важен для биосинтеза пуринов <em>de novo</em>, которые являются важными элементами ДНК и РНК. Поэтому, ожидается, что потеря функции GART приведет к гибели эмбриона на ранних стадиях эмбриональной жизни. Эти данные убедительно подтверждают потенциальную роль мутации в GART (p.N290T) в снижении фертильности, наблюдаемой при спаривании между носителями HH4 и дочерями носителей HH4 (Fritz S., Capitan A., Djari A., Rodriguez S.C., Barbat A., Baur A., Grohs C., Weiss B., Boussaha M., Esquerré D., Klopp C., Rocha D., Boichard D., 2013).Вторая мутация – g.2490314G.A – приводит к замене цистеина на тирозин в остатке 13 гомолога A белка кинетохоры MIS18 (S. pombe) (MIS18A p.C13Y) (Fritz S., Capitan A., Djari A., Rodriguez S.C., Barbat A., Baur A., Grohs C., Weiss B., Boussaha M., Esquerré D., Klopp C., Rocha D., Boichard D., 2013).Хотя гомозиготный по нокаутному аллелю MIS18A является летальным на стадии эмбриона у мышей (Kim I.S., Lee M., Park K.C., Jeon Y., Park J.H., Hwang E.J., Jeon T.I., Ko S., Lee H., Baek S.H., Kim K.I., 2012), и хотя эта мутация, как было предсказано, является вредной в соответствии с SIFT и Polyphen для функции белка человека, менее вероятно, что эта мутация отвечает за данный фенотип, поскольку остаток 13 и соседняя аминокислотная последовательность имеют слабую консервативность у плацентарных млекопитающих (Fritz S., Capitan A., Dja­ri A., Rodriguez S.C., Barbat A., Baur A., Grohs C., Weiss B., Boussaha M., Esquerré D., Klopp C., Rocha D., Boichard D., 2013).</p>
<p>Генотипирование 72 производителей-быков, представляющих все гаплотипы с частотой выше 1%, выявило, что мутация g.1277227A.C была связана только с гаплотипом HH4, тогда как мутация g.2490314G.A могла быть связана с другими гаплотипами. Последующее генотипирование четырех животных, которые были составными гетерозиготами по гаплотипам, связанным<br />
с g.2490314G.A, подтвердило их гомозиготность и определенно исключило эту кандидатурную мутацию.</p>
<p><strong><em>HH5</em>.</strong>С использованием стратегии, аналогичной стратегии ванРадена<br />
и его соавторов(VanRaden P.M., O’Connell J.R., Wiggans G.R., Weigel K.A., 2011), Купером с соавторами был выделен гаплотип HH5, связанный со сниженной рождаемостью, который находится на 92350052–93910957 п.н. на BTA9 (Cole J. B., VanRaden P. M., Null D. J., Hutchison J. L., Cooper T. A., Hubbard S. M., 2015; Cooper T.A., Wiggans G.R., Null D.J., Hutchison J.L., 2013).Шульц с соавторами определили вероятную причину этого гаплотипа – мутацию в виде делеции 138kb, охватывающей от 93233 до 93371 kb на BTA9, содержащую только диметиладенозинтрансферазу 1 (TFB1M) (Schütz E., Wehrhahn C., Wanjek M., Bortfeld R., Wemheuer W.E., Beck J., Brenig B., 2016). Края делеции фланкированы бычьими длинными вкрапленными ядерными элементами Bov-B (вышеделеции) и L1ME3 (ниже делеции), что позволяет предположить, что гомологичная рекомбинация ответственна за это событие. TFB1M необходима для синтеза и функционирования малой рибосомальной субъединицы митохондрий. Связь этой делеции с данным гаплотипом подтверждается тем фактом, что гомозиготные мыши, нокаутированные по TFB1M, нежизнеспособны<br />
и гибнут на стадии эмбриона. Летальность мышей HH5 – TFB1M-/- демонстрирует эмбриональную гибель на 8,5 день (Metodiev M.D., Lesko N., Park C.B., Camara Y., Shi Y., Wibom R., Hultenby K., Gustafsson C.M., Larsson N.G., 2009).</p>
<p>Кроме того, клеточный нокаут подтвердил серьезное летальное воздействие на клетки млекопитающих вследствие полной потери трансляции белка<br />
в митохондриях (Metodiev M.D., Lesko N., Park C.B., Camara Y., Shi Y., Wi­bom R., Hultenby K., Gustafsson C.M., Larsson N.G., 2009). Шульц с соавторамипроверили имеет ли делеция TFB1M ко-доминантный эффект у крупного рогатого скота-носителя <em>in vivo</em>, для этого соотношение митохондриальной ДНК<br />
к ядерной ДНК было определено с помощью ddPCR в ДНК, выделенной из лейкоцитов у случайным образом выбранных представителей крупного рогатого скота. По данному параметру не наблюдалось существенной разницы между носителями и диким типом, что предполагает рецессивный эффект, который согласуется с фенотипом животных-носителей, у которых не наблюдается каких-либо заметных отклонений. Учитывая тот факт, что никакой другой ген не находится в делетированном участке, вместе с вышеупомянутыми данными<br />
и высокой сегрегацией по данным HH5, эти результаты могут служить доказательством того, что эта делеция является причиной HH5 (Schütz E., Wehr­hahn C., Wanjek M., Bortfeld R., Wemheuer W.E., Beck J., Brenig B., 2016).Бык-основатель HH5 восходит к Thornlea Texal Supreme, родившемуся в 1957 г. Частота гетерозиготных носителей составляет примерно 4–5% в европейской<br />
и североамериканской фризской популяции голштинов, и приводит к преждевременному прерыванию беременности до 60-го дня беременности (Schütz E., Wehrhahn C., Wanjek M., Bortfeld R., Wemheuer W.E., Beck J., Brenig B., 2016).</p>
<p>Частое использование определенных производителей и их потомков в современном скотоводстве несет риск появления генетических нарушений в популяции в течение короткого периода времени. Было показано, что после выявления причинной мутации генотипирование очень эффективно устраняет патологических носителей в популяции. За последнее время с использованием большого массива данных по SNP у коров голштинской породы были обнаружены несколько гаплотипов, связанных с летальными фенотипами, и для некоторых из них были определены гены, вызывающие данные гаплотипы. Одной из эффективных стратегий в случае определенных рецессивных мутаций является обнаружение носителей с целью их исключения из размножающейся популяции или применении различных стратегий спаривания для контроля распространения нежелательных аллелей внутри популяции или сохранения их частот на низких уровнях.</p>
<h2><strong>5 РАЗРАБОТКА ПРОГРАММНЫХ ПРОДУКТОВ</strong></h2>
<h3><b>5.1 Информационная система «Анализ аллельной </b><b>структуры поголовья и генетической идентификации</b><br />
<b>сельскохозяйственных животных»</b></h3>
<p>Разработанная нами информационная система (ИС) предназначена для анализа аллельной структуры поголовья и генетической идентификации сельскохозяйственных животных, и реализована в виде веб-приложения с базой данных.</p>
<p>Основным модулем ИС является конструктор генов, который позволяет определить категории и возможные значения для генов, предоставляя универсальный инструмент для создания любого исследуемого набора. Для гена реализован следующий набор полей: наименование, код, описание, тип значения, номер хромосомы, позиция, плюс/минус цепь, признак, OMIA, значение – A, C, G, T, T|A, none (рисунок 8).</p>
<p><img width="995" height="938" class="wp-image-11725" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/opisanie-c-dropbox-alt-dnk-dnk2-gene-png.png" alt="Описание: C:\dropbox\alt\dnk\dnk2\gene.PNG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/opisanie-c-dropbox-alt-dnk-dnk2-gene-png.png 995w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/opisanie-c-dropbox-alt-dnk-dnk2-gene-png-300x283.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/opisanie-c-dropbox-alt-dnk-dnk2-gene-png-768x724.png 768w" sizes="(max-width: 995px) 100vw, 995px" /></p>
<p><strong>Рисунок 8</strong> – Редактор справочника генов</p>
<p>Категории генов могут быть определены произвольно, в зависимости от задачи. Формирование справочника категорий производится с помощью редактора категорий (рисунок 9).</p>
<p><img width="1015" height="1003" class="wp-image-11726" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image.png 1015w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-300x296.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-768x759.png 768w" sizes="(max-width: 1015px) 100vw, 1015px" alt="word image Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 9</strong> – Справочник категорий</p>
<p>Для каждого животного предусмотрено ведение карточки, содержащей основные идентификационные сведения, данные о происхождении и принадлежности. Конструктор позволяет определить категории и возможные значения для генов, предоставляя универсальный инструмент для создания любого исследуемого набора.</p>
<p>Для идентификации животного и определения его принадлежности используется справочник организаций, позволяющий задать различные характеристики: наименование, страна, регион и др. (рисунок 10).</p>
<p>Для всех полей (если применимо) используется валидация данных и автодополнение при вводе.</p>
<p>В информационной системе используется управление пользователями на основе ролей. Основной функционал модуля позволяет выполнять активацию/деактивацию администратором, смену пароля, назначения роли администратором. Предусмотрены две основные роли: «Оператор» – ввод данных животных для своей организации (выбрана по умолчанию в поле «Принадлежность») и «Администратор» – ввод/редактирование справочников, ввод данных животных для любой организации, ввод генетической информации, управление пользователями, печать генетического паспорта.</p>
<p><img width="1024" height="805" class="wp-image-11727" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-1.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-1.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-1-300x236.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-1-768x604.png 768w" sizes="(max-width: 1024px) 100vw, 1024px" alt="word image 1 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 10</strong> – Формирование карточки организации</p>
<p>Простой и дружественный интерфейс обеспечивает возможность ввода данных исследований в карточку животного (рисунок 11). Предусмотрено формирование генетического паспорта на основе выбранных данных в формате pdf.</p>
<p><img width="1002" height="1003" class="wp-image-11728" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-2.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-2.png 1002w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-2-300x300.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-2-150x150.png 150w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-2-768x769.png 768w" sizes="(max-width: 1002px) 100vw, 1002px" alt="word image 2 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"><strong>Рисунок 11</strong>– Карточка животного</p>
<p>Паспорт формируется в формате pdf и содержит следующие блоки.</p>
<p>1. Блок организации (наименование организации, в которой проводится анализ, адрес, телефон).</p>
<p>2. Блок заголовка (Генетический паспорт животного / DNA GENO­TYPE CERTIFICATE).</p>
<p>3. Блок лаборатории (наименование лаборатории, выдавшей паспорт).</p>
<p>4. Блок организации принадлежности (название и адрес организации, которой принадлежит животное).</p>
<p>5. Блок исследуемого животного (порода, возраст, пол, инвентарный номер/кличка, дата рождения).</p>
<p>6. Таблица достоверности происхождения (маркер, аллель 1, аллель 2).</p>
<p>7. Таблица генетических аномалий (код гена, значение).</p>
<p>8. Таблица генов маркеров признаков продуктивности (код гена, значение).</p>
<p>9. Блок описания оборудования, на котором проводился анализ.</p>
<p>10. Блок подписи (дата проведения анализа, ответственный исполнитель, Ф. И. О. исполнителя, его данные – ученая степень, звание, если применимо).</p>
<p>Информационная система реализована на языке программирования<br />
PHP 7.1, использует систему управления базой данных MySQL 5.5.</p>
<h3><strong>5.2 Программные продукты: Covers(«Ковер») и JustAppendCows</strong></h3>
<p>Прибор для высокопроизводительного секвенирования MiSeq (Illumina, США) за один цикл работы (запуск) с использованием панели TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel Illumina способен обработать до 96 образцов ДНК-материала. В итоге, на выходе прибор генерирует CSV-файл объемом примерно 1,03 Мб, который включает себя 25440 строк данных, в случае обработки<br />
96 образцов генетического материала– библиотеки полногеномной ДНК КРС. Соответственно, время обработки такого объема информации вручную будет нерационально велико, особенно, если необходимо получить на выходе сразу несколько документов, к примеру, и индивидуальные паспорта, и 2D-диаграм­му (ковер) для всего стада.</p>
<p>Данная работа занимает слишком много человеко-часов и является экономически невыгодной, так как для того, чтобы обрабатывать предложенный объем данных в сутки (время берется с учетом максимальной суточной производительности работы прибора в размере 96 образцов), потребуется около 30 специально обученных работников.</p>
<p>Таким образом, в целях рационализации экономических затрат и человеческих ресурсов, возникает необходимость в разработке комплекса программного обеспечения, которое сможет выполнять необходимые аналитические задачи<br />
и автоматизировать документооборот компании.</p>
<p>Что касается основных целей, которые предъявляются будущему программному продукту, то их можно выделить в следующий список:</p>
<ul>
<li>мультисистемность;</li>
<li>высокая скорость работы;</li>
<li>гибкость настройки;</li>
<li>удобство для пользователя.</li>
</ul>
<p>Требование <em>мультисистемности</em> выражается в том, что программный комплекс должен запускаться на электронно-вычислительных машинах с любой современной операционной системой и при условии того, что ЭВМ может не обладать большой вычислительной мощностью. Для этого на перспективу поставлены задачи по переносу пакета ПО в web-интерфейс с целью обеспечить вышеперечисленные требования. Выбор такого подхода обусловлен тем, что для работы с wed-интерфейсом нет необходимости установки на вычислительную машину каких-либо дополнительных программ, пакетов или сред визуализации, так как браузер присутствует в списке базового оборудования в любой современной операционной системе, будь то системы семейства Windows или же ОС, в основе которых лежит Linux-подобная система, к примеру,MacOS.</p>
<p><em>Высокая скорость работы</em> необходима для того, чтобы не возникало очереди при обработке данных, которая может повлечь простои в работе всей фирмы, и соответственно, негативно отразиться на ее экономической картине.</p>
<p><em>Гибкость настройки</em> необходима для того, чтобы пользователям не было необходимости изучать структуру программы и саму среду программирования. То есть пользователи, у которых есть доступ к файлам, могут изменять, к примеру, структуру паспорта или ковра, просто меняя исходный Excel файл, при учете согласования этих изменений с программистом, таким образом, им нет необходимости разбираться в структуре программы и каким-либо образом изменять исходный код, что также поможет избежать ненужных задержек при ежедневной эксплуатации программного пакета.</p>
<p>Ну,и наконец, продукт должен быть <em>удобен для рядового пользователя</em>,<br />
с таким условием, чтобы человеку не пришлось специально переобучаться для работы с ним. Это достигается, опять же, за счет введения в будущем web-интерфейса с выверенным UI дизайном, который позволит выполнять необходимые цели уже после получаса инструктажа.</p>
<p>Теперь остановимся на задачах с точки зрения программиста.</p>
<p>Для начала, при разработке программы необходимо учитывать то, что ей необходимо взаимодействовать с пакетами MSOffice, а именно с MicrosoftExcel, так как шаблоны как для паспорта, так и для ковра создавались именно<br />
в MSExcel и имеют соответствующий формат «.xlsx».</p>
<p>Также, одним из требований было то, что результирующие файлы, получаемые в итоге, также должны быть «.xlsx»и «.pdf», что также означает, что программный код должен быть написан с учетом поддержки MSExcel.</p>
<p>Еще одним требованием является то, что программа не должна слишком перегружать ресурсы вычислительной машины промежуточными данными, так как предполагается ее дальнейшее использование в Web-интерфейсе, где перегрузка хостинга данными будет вести к неминуемому снижению скорости работы программы или даже непредвиденным ошибкам переполнения выделенной памяти. Для этого было принято решение сохранять промежуточные данные также в формате «.xlsx» c последующим удалением их после целевой отработки.</p>
<p>В качестве следующего требования выделялось то, что программному обеспечению предстоит работать с «.csv»форматом, для которого необходимы специфические библиотеки, таким образом, был выбран язык программирования Python 3.6 с библиотекой Pandas, так как данная библиотека оптимально подходит как для работы с «.csv»форматом, так и для обработки данных, получаемых из таких файлов посредством встроенной в нее структуры DataFrame. Данная структура представляет собой особый вид массивов, отличительной чертой которого является его автоматическая нумерация по строкам и озаглавливание по столбцам.</p>
<p>Данные особенности также крайне необходимы, когда дело доходит до занесения результирующихDataFrame-массивов на лист рабочей книги Excel.</p>
<p>Для обеспечения гибкости настройки файлы-шаблоны всегда доступны<br />
к редактированию пользователям, у которых есть на это доступ, так как программа при каждом своем запуске заново инициализирует шаблон, что позволяет изменять результирующие файлы согласно требованиям практически мгновенно при необходимости и без прямого участия программиста.</p>
<p>Для обеспечения удобства использования уже на данном этапе применен вывод некоторой информации о ходе работы программы в консоль, что позволяет пользователю отслеживать прогресс обработки данных, а также пользователь в консоли сам может вводить определенные данные, такие как порода коровы, ее возраст и т. д., что позволяет ему лишний раз не редактировать результирующий файл, и соответственно, экономить время.</p>
<p>Нами был проведен анализ рынка программного обеспечения, распространяемого открыто по свободной лицензии, ограниченной лицензии и иным формам приобретения. Производился поиск программы или программного пакета, которые удовлетворяли бы цели и задачи, выдвигаемые к ним, такие как мультисистемность, высокая скорость работы, гибкость настройки. Также немаловажным являлось то, что софт предполагалось использовать в узкоспециализированной предметной области и, поэтому он должен быть разработан с учетом требований данной отрасли.</p>
<p>В результате анализа рынка было принято решение создать оригинальный (самостоятельно разработанный) комплекс программ, так как адекватные альтернативы попросту отсутствуют в свободном доступе или же не подходят под требования, предъявляемые программам.</p>
<p>Также немаловажным фактором является то, что в команде работают вместе специалисты в области генной инженерии и программирования, что позволяет обеспечить диалог, в результате которого программный продукт пишется<br />
в соответствии с учетом всех требований генной инженерии. Также тесный диалог между программистом и специалистами в области генотипирования обеспечивает более глубокое понимание целей и задач, выдвигаемых программному продукту. Так как программист находится непосредственно внутри группы разработчиков, он может изменять и добавлять функциональность программ в соответствии с требованиями, избегая взаимодействия между предприятием-заказчиком и предприятием-исполнителем, тем самым сокращая время исполнения поставленных задач.</p>
<p>На данный момент в лаборатории имеются две программы.</p>
<p>Первая программа имеет рабочее название «JustAppendCows» и находится в полностью рабочем состоянии, ее актуальная версия 2.0. Данный программный продукт отвечает за автоматизированное создание паспортов на каждое конкретное животное в стаде.</p>
<p>Вторая программа имеет рабочее название «Covers» и также находится<br />
в полностью рабочем состоянии, ее актуальная версия 1.1. Данный программный продукт отвечает за анализ генетических показателей каждой отдельной особи в стаде и сведения полученной информации в общую наглядную таблицу, цветную 2D-диаграмму, так называемый «ковер».</p>
<p>Для разработки комплекта программного обеспечения была выбрана среда Python актуальной версии 3.6.</p>
<p>Python – современный язык программирования, имеющий возможность работать на всех актуальных операционных системах для персональных компьютеров. Язык программирования Python находится в стадии разработки чуть более 20 лет. На сегодняшний день параллельно активно используется две версии языка – более старая версия 2 и современная версия (третья). Версия 2 более не развивается, но до сих пор еще используется, поскольку очень много программного обеспечения и библиотек разработано именно для этой версии.</p>
<p>Между версиями есть существенная несовместимость, в том числе в синтаксисе команд ввода-вывода (программа на языке Python 2-й версии может не работать в 3-й версии и наоборот), но в целом они очень похожи. В случае<br />
с разработкой описанных выше продуктов было принято решение использовать именно третью версию, она является актуальной, и соответственно, будет обновляться и поддерживаться разработчиком, а также только с ней работают актуальные версии необходимых в разработке библиотек.</p>
<p>Python – современный универсальный интерпретируемый язык программирования. Особенностями его являются кроссплатформенность, современность, наличие обширной встроенной библиотеки и множества сторонних библиотек.</p>
<p>Одной из ключевых особенностей выбора данного языка являлась его гибкость. С одной стороны, Python является объектно-ориентированным языком. Вся мощь объектно-ориентированного подхода доступна при разработке на Python.С другой стороны, язык Python не вынуждает программиста всегда использовать ООП.</p>
<p>Ключевой особенностью, из-за которой был выбран именно этот язык, является то, что код выполняется (интерпретируется) из исходного текста, без предварительного перевода в машинный код. Код, написанный на компилируемых языках, типа C++, сначала переводятся в машинный код.</p>
<p>Принято считать, что интерпретируемые языки программирования работают медленнее, чем компилируемые – из-за того, что трансляция осуществляется не сразу. Но отладка и написание кода происходит быстрее, потому что не нужно ожидать, пока компилятор закончит работать.</p>
<p>Python работает как интерпретируемый, его код перед выполнением компилируется. Многие его компоненты работают на полной скорости компьютера, поскольку написаны они на языке С.</p>
<p>Данная особенность крайне важна, так как планируется дальнейший перевод программного комплекса на web-платформу, где интерпретируемость является необходимым условием.</p>
<p>В качестве дистрибутива было принято решение об использовании пакета Anaconda.</p>
<p>Anaconda – дистрибутив языка программирования Python, в который входит набор популярных свободных библиотек, позволяющих, в том числе, производит работу с данными. Основная особенность Anaconda– поставка единым согласованным комплектом наиболее необходимых библиотек и модулей (таких как NumPy, SciPy, Pandas и др.) с разрешением возникающих зависимостей и конфликтов, которые могут возникать при одиночной установке. По состоянию на 2019 г. Anacondaсодержит более 1,5 тыс. модулей.</p>
<p>Основной особенностью дистрибутива является оригинальный менеджер разрешения зависимостей conda с графическим интерфейсом Anaconda Navigator, которые позволяет отказаться от стандартных менеджеров пакетов для Python, таких, как pip, к примеру. Дистрибутив скачивается единожды,<br />
и вся последующая конфигурация, в том числе установка дополнительных модулей, возможна без подключения к сети Интернет. Кроме того, обеспечивается возможность ведения нескольких изолированных сред с раздельным разрешением версионных зависимостей в каждой.</p>
<p>В качестве среды разработки была выбрана IDESpyder, так как она имеет ряд преимуществ и удобна для проектирования и написания программного кода.</p>
<p>Spyder (ранее Pydee) – свободная среда разработки для Python. Она входит в стандартный пакет Anaconda, является кроссплатформенной и доступна для Windows, Linux и MacOS. Название Spyder расшифровывается как Scientific PYthon Development EnviRonment, что в переводе означает «научная среда разработки для Python». Данная среда разработки создавалась для научных расчетов, и в этой сфере она действительно удобна.</p>
<p>Spyder является высокопроизводительной и дружелюбной по отношению<br />
к разработчику интерактивной средой разработки для языка программирования Python с продвинутыми возможностями редактирования, интерактивного тестирования, отладки и интроспекции.</p>
<p>Также Spyderпредставляет из себя часть модуля spyderlib для Python, являющегося совокупностью мощных виджетов на PyQt4, таких как редактор кода, консоль Python (при необходимости доступная для встраивания в приложения), редактор списков/кортежей и массивов Pandas.</p>
<p>При разработке пакета программного обеспечения, используются следующие библиотеки: Pandas, Openpyxl, os, Datetame.</p>
<p>Выбор данного перечня библиотек обусловлен задачами, которые предъявляются к программам. Перечисленные библиотеки, с точки зрения разработчика, наиболее оптимально подходят для их выполнения. Ниже приведена краткая характеристика каждой из них и указаны особенности, которые послужили причиной их выбора.</p>
<p>Библиотека os включает в себя множество функций для работы с операционной системой, причем их поведение, как правило, не зависит от ОС, что позволяет сделать программу универсальной и переносимой. В данном случае библиотека os отвечает за работу с директориями, а конкретно за удаление при необходимости временных файлов, в которых хранятся неупорядоченные данные по каждому конкретному образцу.</p>
<p>Библиотека DateTime представляет собой классы для обработки времени<br />
и даты различными способами. Эта библиотека выполняет задачу получения актуальной даты, которая в дальнейшем интегрируется в документ с целью уменьшить ручную работу, выполняемую пользователем.</p>
<p>Pandas является программной библиотекой на языке <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/Python" target="Python" rel="noopener">Python</a> для обработки и анализа данных. Работа Pandas с данными строится поверх библиотеки <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/NumPy" target="NumPy" rel="noopener">NumPy</a>, являющейся инструментом более низкого уровня. Предоставляет специальные структуры данных, такие как DataFrame, и операции для манипулирования ими. Корректное использование библиотеки Pandas вкупе с другими использованными библиотеками обеспечивается пакетом Anaconda.</p>
<p>Основной областью применения данной библиотеки является обеспечение работы в рамках языка программирования Python в целях сбора (очистки), анализа и моделирования данных, без необходимости перехода на более ориентированные для данных целей языки, такие как R и Octave.</p>
<p>В данной библиотеке одной из ключевых особенностей является использование объектов DataFrame, необходимых для манипулирования индексированными массивами двумерных данных. В концепции рассматриваемой программы объекты DataFrame играют ведущую роль, в связи с этим использование библиотеки Pandas является необходимым.</p>
<p>Также данная библиотека позволяет реализовать удобную и мало затратную с точки зрения ресурсов обработку и редактирование DataFrame-объектов, что позволяет быстро и качественно интегрировать данные объекты на Excel-листы.</p>
<p>Не стоит забывать, что данная библиотека также помогает преобразовывать CSV-данные в DataFrame массивы, и обеспечивает дальнейшую корректную работу с ними.</p>
<p>Библиотека Openpyxl предназначена для того, чтобы обеспечивать возможность чтения и редактирования файлов Excel-форматов, таких как «.xlsx», «.xlsm», «.xltx»и др.</p>
<p>Целью обеих программ является создание результирующих документов<br />
в формате «.xlsx»по заранее созданному шаблону, таким образом, для выполнения этих целей была выбрана именно библиотека Openpyxl, так как она наиболее точно подходила для реализации поставленной задачи.</p>
<p>Данная библиотека отвечает за загрузку в память программы файла-шаблона и последующее заполнение шаблона необходимыми данными, чтобы на выходе получать необходимые результирующие документы, будь то генетический паспорт или ковер (2D-диаграмма) для всего стада.</p>
<p><strong><em>Блок-схемы программы Just Append Cows </em></strong></p>
<p>На рисунках 12–14 представлена полная блок-схема программы, которая реализует обработку данных для создания паспортов для каждого определенного животного. Данная блок схема включает в себя описание вспомогательных<br />
и главной функций.</p>
<p>Рассмотрим <em>первую вспомогательную функцию report</em>. Данная функция необходима для корректного заполнения результирующего документа для каждой конкретной особи. На вход функции поступают три DataFrame (на схеме df1, df2, df3), которые являются массивами данных блоков SNP для каждой конкретной особи. Так, df1 отвечает за блок 200 SNP«Родство и достоверность происхождения», df2 – за блок 53 SNP«Генетически наследуемые заболевания», df3 – за блок 12 SNP«Экономически значимые признаки». Данные DataFrame уже являются упорядоченными и отсортированными согласно спецификации, так как формирование паспорта происходит на финальной стадии работы программы. Также на вход в функцию поступает переменная idat, которая является идентификатором очередного образца, для которого формируется документ.</p>
<p>При вызове функции report происходит инициализация функции, далее<br />
в переменную shablrep заносится путь, по которому программа определяет директорию, в которой хранится шаблон паспорта, после этого в переменной filenamer описывается соответствующая папка, в которой хранятся все паспорта для стада и формируется имя файла для каждой конкретной особи. После этого происходит инициализация переменной wb с помощью библиотеки openpyxl. Данная переменная является интерпретированной для работы в PythonExcel-книгой, а в переменной ws указывается на каком именно листе будет производится работа с этой самой книгой. Далее идут три цикла занесения данных на лист. Они подобны друг другу, опишем первый, в остальных меняются лишь некоторые переменные и их значения.</p>
<p>Для начала переменной d1 присваиваются значения df1-массива с указанием того, что эти значения будут занесены на лист. Далее следует цикл, суть которого заключается в том, что мы берем все строки со стартовой (в данном случае это двадцать девятая строка, согласно шаблона), далее мы заносим в эту строку в каждый столбец со стартового (в данном случае это второй столбец, согласно шаблона) и заносим поочередно в каждую ячейку строки значения, где номер прохода соответствует номеру строки в переменной d1. Так, к примеру, в двадцать девятую строку заносится первая строка массива, в тридцатую вторая и так до окончания массива.</p>
<p>Как уже говорилось выше, два следующих цикла идентичны, меняются только значения (d2 присваиваются значения df2, стартовая строка у второго блока 234-ая, d3 присваиваются значения df3, стартовая строка у третьего блока 292-ая).</p>
<p><img width="753" height="1077" class="wp-image-11729" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-3.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-3.png 753w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-3-210x300.png 210w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-3-716x1024.png 716w" sizes="(max-width: 753px) 100vw, 753px" alt="word image 3 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 12</strong> – Блок-схема реализации первой вспомогательной функции report</p>
<p>Далее следует блок, который отвечает за запрашивание у пользователя через консоль необходимых для окончательного формирования паспорта данных, таких как порода, возраст, половозрастная группа, идентификационный номер и занесения их в паспорт. Для начала в консоли пишется номер очередного образца, для которого происходит создание паспорта, а потом последовательно запрашиваются при помощи консоли необходимые данные. Также<br />
в данном блоке определяется дата формирования паспорта, она автоматически получается из системного времени с помощью библиотеки datetime. Полученные данные заносятся в соответствующие переменные: cowtype, sex, age, number, nowdate.</p>
<p>После этого следует блок записи этих данных на Excel-лист в тех местах, где это необходимо согласно требованиям.</p>
<p>На этом функция report завершает свою работу.</p>
<p>Рассмотрим работу <em>вспомогательной функции sort</em>, которая отвечает за сортировку данных каждого конкретного образца по блокам, при этом в каждом блоке происходит распределение по порядку, который необходим для занесения этих данных в результирующий документ.</p>
<p>Функция получает на вход идентификатор очередного образца (inpdata). Далее происходит инициализация переменных shabl1, shabl2, shabl3, в которые заносятся пути расположения шаблонов, согласно которым происходит сортировка данных. Далее происходит чтение временного файла, в котором находятся данные для очередного образца, представляющие собой массив из 265 строк в произвольном порядке, так как прибор для секвенирования заранее не упорядочивает их. Данные из временного файла заносятся в переменную dfdata. После этого происходит чтение файлов шаблонов – dfshabl1, dfshabl2, dfshabl3 для первого, второго и третьего блоков соответственно.</p>
<p>После получения всех необходимых данных, в переменные a, b, d заносятся размеры блоков (200, 53 и 12 строк соответственно), а в переменную b заносится размер всего массива данных (265 строк). После этого можно приступать к циклам сортировки.</p>
<p>Все три алгоритма сортировки работают аналогичным способом, поэтому будет описан принцип работы алгоритма для сортировки и заполнения массива первого шаблона, в остальных циклах меняются лишь некоторые переменные.</p>
<p>Внешний цикл алгоритма отвечает за последовательный построчный перебор DataFrame-массива первого шаблона. Перебирается i от 0 до 264, при этом на каждом проходе переменной ind присваивается значение, соответствующее i-ому наименованию маркера первого шаблона. Внутри этого цикла происходит построчный перебор исходного массива данных, притом при каждом проходе переменной prov присваивается значение, соответствующее j-ому наименованию маркера исходного набора данных. Далее проверяется, равна ли переменная ind переменной prov, и если да, то в массив шаблона с очередным наименованием маркера вносятся значения соответствующего маркера из исходного массива данных. Цикл устроен таким образом, что на каждом очередном проходе для строки шаблона подыскивается соответствующая строка в исходном массиве, таким образом, на выходе получается DF-массив dfshabl1, который уже упорядочен, так как за основу его взят массив из шаблона, и заполнен соответствующими данными из исходного массива.</p>
<p>Для остальных двух циклов меняются лишь величина внешних проходов согласно размерности шаблонных массивов (вместо а подставляется c и d)<br />
и сами шаблонные массивы (вместо dfshabl1 подставляется dfshabl2 и dfshabl3).</p>
<p>Далее происходит вызов функции report, суть и цели которой описаны выше, в которую отправляются полученные заполненные массивы dfshabl1, dfshabl2, dfshabl3 и идентификатор очередного образца inpdata.</p>
<p>Далее рассмотрим главную функцию программы. Блок-схема этой функции представлена на рисунках 13а и 13б. При запуске программы происходит инициализация данной функции, другими словами, данная функция срабатывает при запуске программы, и в ней уже происходит вызов вспомогательных функций, рассмотренных выше. В программе, отвечающей за генерацию паспортов, используются следующие библиотеки: Pandas, Openpyxl, os, Datetame.</p>
<p><img width="826" height="375" class="wp-image-11730" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-4.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-4.png 826w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-4-300x136.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-4-768x349.png 768w" sizes="(max-width: 826px) 100vw, 826px" alt="word image 4 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"> <img width="827" height="683" class="wp-image-11731" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-5.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-5.png 827w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-5-300x248.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-5-768x634.png 768w" sizes="(max-width: 827px) 100vw, 827px" alt="word image 5 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 13а </strong>– Блок-схема главной функции программы Just Append Cows</p>
<p><img width="826" height="490" class="wp-image-11732" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-6.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-6.png 826w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-6-300x178.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-6-768x456.png 768w" sizes="(max-width: 826px) 100vw, 826px" alt="word image 6 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 13б (продолжение 13а) </strong>– Блок-схема главной функции программы<br />
Just Append Cows</p>
<p>Pandas – программная библиотека на языке <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/Python" target="Python" rel="noopener">Python</a>для обработки и анализа данных. Работа Pandas с данными строится поверх библиотеки <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/NumPy" target="NumPy" rel="noopener">NumPy</a>, являющейся инструментом более низкого уровня. Предоставляет специальные структуры данных, такие как DataFrame, и операции для манипулирования ими.</p>
<p>Основная область применения – обеспечение работы в рамках языка программирования Python в целях сбора (очистки), анализа и моделирования данных, без необходимости перехода на более ориентированные для данных целей языки, такие, как R и Octave.</p>
<p>В данной библиотеке одной из ключевых особенностей является использование объектов DataFrame, необходимых для манипулирования индексированными массивами двумерных данных. В концепции рассматриваемой программы объекты DataFrame играют ведущую роль, соответственно, по этой причине использование библиотеки Pandas является необходимым.</p>
<p>Также данная библиотека позволяет реализовать удобную и мало затратную с точки зрения ресурсов работу с DataFrame объектами, что позволяет быстро и качественно интегрировать данные объекты на Excel-листы.</p>
<p>Не стоит забывать, что данная библиотека также помогает преобразовывать CSV-данные в DataFrame массивы и обеспечивает дальнейшую корректную работу с ними.</p>
<p>Библиотека Openpyxl необходима для того, чтобы читать и редактировать файлы Excel-форматов, таких как «.xlsx», «.xlsm»,«.xltx» и др.</p>
<p>Целью программы является создание результирующих документов в формате «.xlsx», причем по определенному шаблону, таким образом, для выполнения этих целей была выбрана именно библиотека Openpyxl, так как она наиболее точно подходила под выдвигаемые требования.</p>
<p>Данная библиотека отвечает за загрузку в память программы файла-шаблона и последующее его заполнение необходимыми данными, чтобы на выходе получить заполненный паспорт для каждого образца в соответствии с требованиями.</p>
<p>Библиотека os включает в себя множество функций для работы с операционной системой, причем их поведение, как правило, не зависит от ОС, что позволяет сделать программу универсальной и переносимой. В данной программе библиотека os отвечает за работу с директориями, а конкретно за удаление при необходимости временных файлов, в которых хранятся неупорядоченные данные по каждому конкретному образцу.</p>
<p>Библиотека DateTime представляет собой классы для обработки времени<br />
и даты различными способами. Нас в данной библиотеке интересует именно дата, а точнее получение актуальной даты для занесения ее в определенную ячейку результирующего документа.</p>
<p>После инициализации главной функции и подключения необходимых библиотек, пользователю предлагается в консоли ввести имя «.csv» файла, который он получил в результате работы прибора для секвенирования. Важно заметить, что для обеспечения корректности работы программы имя файла вводится без расширения и сам файл должен находится в корневой папке с исполняемым «.py» файлом.</p>
<p>Далее в переменной on происходит преобразование введенного пользователем имени файла в необходимы для дальнейшей работы формат, а после этого происходит открытие файла и запись данных из него в переменную df. После этого мы имеем DataFrame массив, хранимый в переменной df, с которым уже<br />
и будет производится дальнейшая обработка.</p>
<p>В переменной filename инициализируется имя первого временного файла,<br />
в который будут занесены данные о первом образце. Далее инициализируется список filenames, который включает в себя информацию обо всех временных файлах, сгенерированных программой. В данный список заносится имя первого файла, хранимое в переменной filename.</p>
<p>В переменной last хранится индекс последней строки, или, другими словами, строковая размерность массива df. Далее инициализируется переменная listzn, в которую заносится пустой объект DataFrame. Данный объект будет использоваться для накопления данных о каждом очередном образце, с целью последующего занесения этих данных в соответствующий временный файл. Вначале в listzn заносится значение первой строки из переменной df. Этот шаг необходим для корректной работы цикла в дальнейшем. Далее создается переменная t, которая также необходима для корректной работы цикла.</p>
<p>После этого в цикле, который поочередно отрабатывает все строки массива df, происходит сортировка данных по образцам и сохранение их во временных файлах. Алгоритм сортировки в цикле построен по принципу сравнения с пре­дыдущим (именно поэтому были манипуляции с listzn и создание переменной t). Если очередная строка массива df равна предыдущей, то эта строка заносится в массив listzn в строку с номером t, где t является счетчиком. Если же очередная строка не совпадает с предыдущей, это означает, что получена вся информация по данному образцу. При этом массив listzn сохраняется во временный файл с необходимым именем, после чего массив обнуляется и на место его первой строки заносится не совпавшая строка, таким образом, происходит формирование массива, содержащего информацию о следующем образце. Также происходит присвоение нового значения переменной filename, так как это уже будет новый временный файл с данными о следующем образце. Новое значение filename добавляется в список filenames. После завершения работы цикла записывается последний временный файл с соответствующим именем.</p>
<p>Далее происходит преобразование каждого временного файла с помощью функции sort, в которую поочередно передаются все файлы, которые сгенерировала программа. Имена данных файлов располагаются в списке filenames.</p>
<p>В конце пользователю предлагается выбрать, необходимо ли удалять временные файлы. В случае, если нет необходимости, программа завершает работу, а ином случае, программа удаляет все временные файлы из списка filenames с помощью функции remove из библиотеки os (рисунок 10).</p>
<p><img width="829" height="807" class="wp-image-11733" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-7.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-7.png 829w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-7-300x292.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-7-768x748.png 768w" sizes="(max-width: 829px) 100vw, 829px" alt="word image 7 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"> <img width="828" height="355" class="wp-image-11734" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-8.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-8.png 828w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-8-300x129.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-8-768x329.png 768w" sizes="(max-width: 828px) 100vw, 828px" alt="word image 8 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 14</strong>– Блок-схема функций завершающих генерацию генетического<br />
паспорта программой Just Append Cows</p>
<p><em>Блок-схемы программы Covers для генерации<br />
цветной 2D-диаграммы («ковра»)</em></p>
<p>На рисунках 11–13 представлена полная блок-схема программы, которая реализует анализ данных для генерации 2D-диаграммы («ковра») для экспериментальных групп животных. Данная блок схема включает в себя описание вспомогательных и главной функций.</p>
<p><img width="786" height="387" class="wp-image-11735" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-9.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-9.png 786w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-9-300x148.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-9-768x378.png 768w" sizes="(max-width: 786px) 100vw, 786px" alt="word image 9 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 11 </strong>– Блок-схема реализации вспомогательной функции vspom1</p>
<p>Рассмотрим вспомогательную функцию vspom. Данная функция предназначения для анализа пары аллелей определенного признака, присвоения им условного коэффициента (веса) и сохранения информации о результате в список. При вызове функции в нее передается информация о номере строки, в которой располагается необходимый для анализа признак. Номер строки обозначен в функции vspom в качестве переменной idnum. Также в функцию передаются сочетания аллелей для анализа, где p1 – это оптимальное сочетание, p2 – серединное сочетание, p3 – негативное сочетание. Стоит отметить, что данная функция предназначена только для работы со вторым блоком «Генетически наследуемые заболевания», данные о котором после сортировки попадают<br />
в DataFrame массив df2.</p>
<p>После инициализации функции и передачи в нее необходимых атрибутов, начинается ее работа. В начале в переменную prizn заносится значение сочетания аллелей Allele1 и Allele2 для рассматриваемого признака. Далее прописывается несколько условий. Если сочетание аллелей равно переменной p1, т. е. совпадает с оптимальным сочетанием, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен единице.</p>
<p>Если сочетание аллелей не равно значению переменной p1, то проверяется, равен ли оно значению p2, т. е. совпадает ли с серединным сочетанием. Если обнаружено равенство, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен 0,5.</p>
<p>Если сочетание аллелей не равно значению переменной p1 и переменной p2, то проверяется, равен ли оно значению p3, т. е. совпадает ли с негативным сочетанием. Если обнаружено равенство, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен нулю.</p>
<p>В противном случае, если сочетание аллелей не равно ни одному из сочетаний, переменной bo присваивается значение «-1000», что означает, что для данного образца (или для всего стада) отсутствует условие для поиска конкретной болезни по данному признаку.</p>
<p>После анализа сочетания аллелей переменная bo заносится в список check_list1, в котором сохраняются все значения переменных bo для очередного образца. Список check_list1 используется для хранения аналитических коэффициентов для второго блока «Генетически наследуемые заболевания».</p>
<p>Рассмотрим вспомогательную функцию vspom2 (рисунок 12). Данная функция предназначена для анализа пары аллелей определенного признака, присвоения им условного коэффициента (веса) и сохранения информации о результате в список. При вызове функции в нее передается информация о номере строки, в которой располагается необходимый для анализа признак. Номер строки обозначен в функции vspom2 в качестве переменной idnum. Также<br />
в функцию передаются сочетания аллелей для анализа, где p1 – это оптимальное сочетание, p2 – серединное сочетание, p3 – негативное сочетание. Стоит отметить, что данная функция предназначена только для работы с третьим блоком «Экономически значимые признаки», данные о котором после сортировки попадают в DataFrame массив df3.</p>
<p><img width="792" height="377" class="wp-image-11736" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-10.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-10.png 792w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-10-300x143.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-10-768x366.png 768w" sizes="(max-width: 792px) 100vw, 792px" alt="word image 10 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 12 </strong>– Блок-схема реализации вспомогательной функции vspom2</p>
<p>После инициализации функции и передачи в нее необходимых атрибутов начинается ее работа. В начале в переменную prizn заносится значение сочетание аллелей Allele1 и Allele2 для рассматриваемого признака. Далее прописывается несколько условий. Если сочетание аллелей равно переменной p1, т. е. совпадает с оптимальным сочетанием, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен единице.</p>
<p>Если сочетание аллелей не равно значению переменной p1, то проверяется, равен ли оно значению p2, т. е. совпадает ли с серединным сочетанием. Если обнаружено равенство, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен 0,5.</p>
<p>Если сочетание аллелей не равно значению переменной p1 и переменной p2, то проверяется, равен ли оно значению p3, т. е. совпадает ли с негативным сочетанием. Если обнаружено равенство, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен нулю.</p>
<p>В противном случае, если сочетание аллелей не равно ни одному из сочетаний, переменной bo присваивается значение «-1000», что означает, что для данного образца (или для всего стада) отсутствует условие для поиска конкретной болезни по данному признаку.</p>
<p>После анализа сочетания аллелей переменная bo заносится в список check_list2, в котором сохраняются все значения переменных bo для очередного образца. Список check_list2 используется для хранения аналитических коэффициентов для второго блока «Экономически значимые признаки».</p>
<p>Рассмотрим вспомогательную функцию vspom3 (рисунок 13). Данная функция предназначения для анализа пары аллелей определенного признака, присвоения им условного коэффициента (веса) и сохранения информации о результате в список. При вызове функции, в нее передается информация о номере строки, в которой располагается необходимый для анализа признак. Номер строки обозначен в функции vspom3 в качестве переменной idnum. Также<br />
в функцию передаются сочетания аллелей для анализа, где p1 – это оптимальное сочетание, p2 и p3 – серединное сочетание. Стоит отметить, что данная функция предназначена только для работы с третьим блоком «Экономически значимые признаки», данные о котором после сортировки попадают в DataFrame массив df3.</p>
<p><img width="789" height="388" class="wp-image-11737" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-11.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-11.png 789w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-11-300x148.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-11-768x378.png 768w" sizes="(max-width: 789px) 100vw, 789px" alt="word image 11 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 13 </strong>– Блок-схема реализации функции vspom3</p>
<p>После инициализации функции и передачи в нее необходимых атрибутов начинается ее работа. В начале в переменную prizn заносится значение сочетание аллелей Allele1 и Allele2 для рассматриваемого признака. Далее прописывается несколько условий. Если сочетание аллелей равно переменной p1, т. е. совпадает с оптимальным сочетанием, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен единице.</p>
<p>Если сочетание аллелей не равно значению переменной p1, то проверяется, равен ли оно значению p2 или p3, т. е. совпадает ли с серединным сочетанием. Если обнаружено равенство, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен 0,5.</p>
<p>В противном случае, если сочетание аллелей не равно ни одному из сочетаний, переменной bo присваивается значение «-1000», что означает, что для данного образца (или для всего стада) сочетания для анализа по данному признаку.</p>
<p>После анализа сочетания аллелей переменная bo заносится в список check_list2, в котором сохраняются все значения переменных bo для очередного образца. Список check_list2 используется для хранения аналитических коэффициентов для третьего блока «Экономически значимые признаки».</p>
<p>Рассмотрим функцию bol (рисунок 14). Функция предназначена для проведения анализа данных по каждому образцу и занесения полученной информации в массивы dff1 и dff2 для последующей генерации ковра для всего стада.</p>
<p><img width="829" height="346" class="wp-image-11738" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-12.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-12.png 829w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-12-300x125.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-12-768x321.png 768w" sizes="(max-width: 829px) 100vw, 829px" alt="word image 12 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 14 </strong>– Блок-схема реализации завершения функции bol</p>
<p>Функция получает на вход массивы df2 и df3, в которых содержатся данные о признаках, отсортированные в соответствии с установленным шаблоном, также в функцию передаются массивы dff1 и dff2, которые содержат в себе результаты аналитики в виде коэффициентов для всего стада, причем массив dff1 содержит информацию об анализе блока 53SNP, а dff2 – информацию об анализе блока 12SNP.</p>
<p>Стоит заметить, что признаки находятся в определенной последовательности, так как массив df2 и df3 уже отсортирован в соответствии с установленным шаблоном, поэтому допустимо использовать индексы строк, так как они привязаны к признакам, т. е. вне зависимости от исходного массива, содержащего информацию о стаде, в каждой строке всегда будет один и тот же заранее известный признак.</p>
<p>После инициализации функции и передачи в нее необходимых атрибутов она начинает свою работу. Вначале происходит очистка списка check_list1,<br />
в который будет сохранятся результат анализа для каждой особи. Далее идет блок с вызовами функций vspom и vspom1, которые отвечают за обработку данных второго блока 53SNP. В каждую функцию vspom или vspom1 передается индекс строки, в которой находятся данные о признаке, анализ которого проводится и сочетания аллелей согласно интерпретатору. Всего происходит 49 вызовов функции vspom и четыре вызова функции vspom1, в итоге все 53 признака в блоке анализируются. После анализа список check_list1 добавляется<br />
в итоговый массив dff1 в строку под индексом t, где t – это номер прохода (очередного образца).</p>
<p>Далее происходит очистка списка check_list2, в который будет сохранятся результат анализа для каждой особи. Далее идет блок с вызовами функций vspom2 и vspom3, которые отвечают за обработку данных второго блока 12SNP. В каждую функцию vspom2 или vspom3 передается индекс строки, в которой находятся данные о признаке, анализ которого проводится и сочетания аллелей согласно интерпретатору. Всего происходит три вызова функции vspom2<br />
и девять вызовов функции vspom3, в итоге все 12 признаков в блоке анализируются. После анализа список check_list2 добавляется в итоговый массив dff2<br />
в строку под индексом t, где t – это номер прохода (очередного образца).</p>
<p>После этого функция завершает свою работу.</p>
<p>Рассмотрим работу вспомогательной функции sort (рисунок 15), которая отвечает за сортировку данных каждого конкретного образца по блокам, при этом в каждом блоке происходит распределение по порядку, который необходим для занесения этих данных в результирующий документ.</p>
<p>Функция получает на вход идентификатор очередного образца (inpdata),<br />
а также DataFrame массивы dff1, dff2, dff3, которые содержат информацию<br />
о результатах анализа для всего стада и переменную t, содержащую информацию о номере итерации, происходящей в главной функции. Далее происходит инициализация переменных shabl2, shabl3, в которые заносятся пути расположения шаблонов, согласно которым происходит сортировка данных. Далее совершается чтение временного файла, в котором находятся данные для очередного образца, представляющие собой массив из 265 строк в произвольном порядке, так как прибор для секвенирования заранее не упорядочивает их. Данные из временного файла заносятся в переменную dfdata. После этого происходит чтение файлов шаблонов dfshabl2, dfshabl3 для второго и третьего блоков соответственно.</p>
<p>Далее происходит служебное дублирование переменных dff1, dff2 и t, необходимое для дальнейшей корректной работы программы на этапе вызова функции.</p>
<p>После получения всех необходимых данных, в переменные b, d заносятся размеры блоков (53 и 12 строк соответственно), а в переменную b заносится размер всего массива данных (265 строк). После этого можно приступать<br />
к циклам сортировки.</p>
<p>Оба алгоритма сортировки работают аналогичным способом, поэтому будет описан принцип работы алгоритма для сортировки и заполнения массива второго шаблона, в остальных циклах меняются лишь некоторые переменные.</p>
<p>Внешний цикл алгоритма отвечает за последовательный построчный перебор DataFrame-массива первого шаблона. Перебирается i от 0 до 264, при этом на каждом проходе переменной ind присваивается значение, соответствующее i-ому наименованию маркера первого шаблона.</p>
<p><img width="815" height="682" class="wp-image-11739" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-13.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-13.png 815w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-13-300x251.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-13-768x643.png 768w" sizes="(max-width: 815px) 100vw, 815px" alt="word image 13 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"> <img width="816" height="443" class="wp-image-11740" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-14.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-14.png 816w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-14-300x163.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-14-768x417.png 768w" sizes="(max-width: 816px) 100vw, 816px" alt="word image 14 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 15 </strong>– Блок-схема реализации функции sort</p>
<p>Внутри этого цикла происходит построчный перебор исходного массива данных, притом при каждом проходе переменной prov присваивается значение, соответствующее j-ому наименованию маркера исходного набора данных. Далее проверяется, равна ли переменная ind переменной prov, и если да, то в массив шаблона с очередным наименованием маркера вносятся значения соответствующего маркера из исходного массива данных. Цикл устроен таким образом, что на каждом очередном проходе для строки шаблона подыскивается соответствующая строка в исходном массиве, таким образом, на выходе получается<br />
DF-массив dfshabl2, который уже упорядочен, так как за основу его взят массив из шаблона, и заполнен соответствующими данными из исходного массива.</p>
<p>Для второго цикла меняются лишь величина внешних проходов согласно размерности шаблонных массивов (d вместо c) и сам шаблонный массив (вместо dfshabl2 подставляется dfshabl3).</p>
<p>Далее происходит вызов функции bol, суть и цели которой описаны выше,<br />
в которую передаются полученные заполненные массивы dfshabl2, dfshabl3, результирующие массивы dff1 и dff2 и переменную t, содержащую номер итерации.</p>
<p>В массив dff3 заносится имя очередного образца, данный массив далее будет необходим при переносе данных ковра на Excel-лист.</p>
<p>Далее рассмотрим главную функцию программы. Блок-схема этой функции представлена на рисунках 16а–16в. При запуске программы происходит инициализация данной функции, другими словами, данная функция срабатывает при запуске программы, и в ней уже происходит вызов вспомогательных функций, рассмотренных выше. В программе, отвечающей за генерацию паспортов, используются следующие библиотеки: Pandas, Openpyxl, os, Datetame.</p>
<p>Pandas – программная библиотека на языке Python для обработки и анализа данных. Работа Pandas с данными строится поверх библиотеки NumPy, являющейся инструментом более низкого уровня. Предоставляет специальные структуры данных, такие как DataFrame, и операции для манипулирования ими. Основной областью применения библиотеки является обеспечение работы в рамках языка программирования Python в целях сбора (очистки), анализа и моделирования данных, без необходимости перехода на более ориентированные для данных целей языки, такие, как R и Octave.</p>
<p>В данной библиотеке одной из ключевых особенностей является использование объектов DataFrame, необходимых для манипулирования индексированными массивами двумерных данных. В концепции рассматриваемой программы объекты DataFrame играют ведущую роль, соответственно, по этой причине использование библиотеки Pandas является необходимым.</p>
<p>Также данная библиотека позволяет реализовать удобную и малозатратную с точки зрения ресурсов работу с DataFrame-объектами, что позволяет быстро и качественно интегрировать данные объекты на Excel-листы.</p>
<p>Не стоит забывать, что данная библиотека также помогает преобразовывать CSV-данные в DataFrame-массивы и обеспечивает дальнейшую корректную работу с ними.</p>
<p>Библиотека Openpyxl необходима для того, чтобы читать и редактировать файлы Excel-форматов, таких как «.xlsx», «.xlsm», «.xltx»и др.</p>
<p>Целью программы является создание результирующих документов в формате «.xlsx», причем по определенному шаблону, таким образом, для выполнения этих целей была выбрана именно библиотека Openpyxl, так как она наиболее точно подходила под выдвигаемые требования.</p>
<p>Данная библиотека отвечает за загрузку в память программы файла-шаблона и последующее заполнение шаблона необходимыми данными, чтобы на выходе получить заполненный паспорт для каждого образца в соответствии с требованиями.</p>
<p>Библиотека os включает в себя множество функций для работы с операционной системой, причем их поведение, как правило, не зависит от ОС, что позволяет сделать программу универсальной и переносимой. В данной программе библиотека os отвечает за работу с директориями, а конкретно за удаление при необходимости временных файлов, в которых хранятся неупорядоченные данные по каждому конкретному образцу.</p>
<p>После инициализации главной функции и подключения необходимых библиотек, создаются три пустых DataFrame-массива, которые впоследствии будут нести в себе информацию об анализе для стада в целом и использоваться для построения ковра.</p>
<p>После этого пользователю предлагается в консоли ввести имя «.csv»файла, который он получил в результате работы прибора для секвенирования. Важно заметить, что для обеспечения корректности работы программы имя файла вводится без расширения и сам файл должен находится в корневой папке с исполняемым «.py» файлом.</p>
<p>Далее в переменной on происходит преобразование введенного пользователем имени файла в необходимы для дальнейшей работы формат, а после этого происходит открытие файла и запись данных из него в переменную df.<br />
Вследствии чего мы имеем DataFrame массив, хранимый в переменной df, с которым уже и будет производиться дальнейшая обработка.</p>
<p>В переменной filename инициализируется имя первого временного файла,<br />
в который будут занесены данные о первом образце. Далее инициализируется список filenames, который включает в себя информацию обо всех временных файлах, сгенерированных программой. В данный список заносится имя первого файла, хранимое в переменной filename.</p>
<p>В переменной last хранится индекс последней строки, или, другими словами, строковая размерность массива df. Далее инициализируется переменная listzn, в которую заносится пустой объект DataFrame. Данный объект будет использоваться для накопления данных о каждом очередном образце, с целью последующего занесения этих данных в соответствующий временный файл. Вначале в listzn заносится значение первой строки из переменной df. Этот шаг необходим для корректной работы цикла в дальнейшем. Далее создается переменная t, которая также необходима для корректной работы цикла.</p>
<p>После этого в цикле, который поочередно отрабатывает все строки массива df, происходит сортировка данных по образцам и сохранение их во временных файлах. Алгоритм сортировки в цикле построен по принципу сравнения<br />
с предыдущим (именно поэтому были манипуляции с listzn и создание переменной t). Если очередная строка массива df равна предыдущей, то эта строка заносится в массив listzn в строку с номером t_1, где t_1 является счетчиком. Если же очередная строка не совпадает с предыдущей, это означает, что получена вся информация по данному образцу. При этом массив listzn сохраняется во временный файл с необходимым именем, после чего массив обнуляется и на место его первой строки заносится не совпавшая строка, таким образом, происходит формирование массива, содержащего информацию о следующем образце. Также происходит присвоение нового значения переменной filename, так как это уже будет новый временный файл с данными о следующем образце. Новое значение filename добавляется в список filenames. После завершения работы цикла записывается последний временный файл с соответствующим именем.</p>
<p>Далее происходит преобразование каждого временного файла с помощью функции sort, в которую поочередно передаются все файлы, которые сгенерировала программа. Имена данных файлов располагаются в списке filenames.</p>
<p>После разбиения исходного массива df на временные файлы можно приступать к анализу данных. Для обеспечения вывода информации о прогрессе работы программы объявляются переменные prog и rg. В качестве счетчика объявляется переменная nmb.</p>
<p>Далее следует цикл, который обрабатывает поштучно каждый временный файл, вызывает функцию, анализирующую полученную информацию из этого файла, и графически выводит прогресс выполнения.</p>
<p>Работа алгоритма заключается в том, что он извлекает имя очередного временного файла, передает это имя, а также массивы df1, df2, df3 и значение счетчика в функцию sort, принцип работы которой описан выше. После этого<br />
к счетчику прибавляется единица, выводится в консоль состояние прогресса анализа и удаляется очередной, уже отработанный, временный файл.</p>
<p>Следующим шагом работы программы является открытие шаблона ковра посредством функции openpyxl и указание листа, на который будут заносиьтся данные.</p>
<p>После выполнения цикла анализа в программе имеется три итоговых массива df1, df2 и df3, которые далее следует перенести на лист результирующего документа.</p>
<p><img width="1035" height="674" class="wp-image-11741" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-15.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-15.png 1035w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-15-300x195.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-15-1024x667.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-15-768x500.png 768w" sizes="(max-width: 1035px) 100vw, 1035px" alt="word image 15 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"> <img width="1036" height="638" class="wp-image-11742" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-16.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-16.png 1036w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-16-300x185.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-16-1024x631.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-16-768x473.png 768w" sizes="(max-width: 1036px) 100vw, 1036px" alt="word image 16 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 16а </strong>– Блок-схема реализации главной функции программы Covers<br />
для генерации цветной 2D-диаграммы («ковра»)</p>
<p><img width="1035" height="608" class="wp-image-11743" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-17.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-17.png 1035w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-17-300x176.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-17-1024x602.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-17-768x451.png 768w" sizes="(max-width: 1035px) 100vw, 1035px" alt="word image 17 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"> <img width="1035" height="832" class="wp-image-11744" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-18.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-18.png 1035w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-18-300x241.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-18-1024x823.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-18-768x617.png 768w" sizes="(max-width: 1035px) 100vw, 1035px" alt="word image 18 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 16б (продолжение) </strong>– Блок-схема реализации главной функции<br />
программы Covers для генерации цветной 2D-диаграммы («ковра»)</p>
<p><img width="1036" height="859" class="wp-image-11745" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-19.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-19.png 1036w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-19-300x249.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-19-1024x849.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-19-768x637.png 768w" sizes="(max-width: 1036px) 100vw, 1036px" alt="word image 19 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 16в (продолжение) </strong>– Блок-схема реализации главной функции<br />
программы Covers для генерации цветной 2D-диаграммы («ковра»)</p>
<p>Для этого используются три идентичных цикла, в которых изменяются лишь имена и значения некоторых переменных, опишем первый цикл.</p>
<p>Для начала переменной d1 присваиваются значения df1-масиива с указанием того, что эти значения будут занесены на лист. Далее из переменной d1 построчно извлекается информация, затем строки делятся на ячейки (по четыре ячейки в каждой строке) и значения этих ячеек заносятся на Excel-лист в строку, начиная со стартовой (в данном случае с третьей) и в столбец, начиная со стартового (в данном случае третий).</p>
<p>В остальных циклах меняется соответственно исходные массивы и переменные, в которые они загружаются для занесения (d2 для df2, d3 для df3),<br />
а также стартовая строка для массива d2.</p>
<p>Далее в результирующем документе необходимо выделить строки с соответствующим значением требуемыми цветами согласно техническому заданию. Для этого в библиотеке openpyxl предусмотрены модули, позволяющие внутри программы указать стили и условия для условного форматирования.</p>
<p>Для этого необходимо создать стили заливки и текста, которые будут далее применяться при условном форматировании, за что и отвечают два блока создания стилей для заливки (четыре функции PatternFill) и цвета текста (четыре функции Font), в которых указываются необходимые атрибуты.</p>
<p>Далее указывается область, к которой будет применяться условное форматирование, причем область может быть с любым размером строк согласно исходному количеству образов, что сделано для более гибкой работы программы с разными размерами стада.</p>
<p>После этого применяется условное форматирование для указанной области согласно указанных стилей.</p>
<p>Для ячеек, где сочетание аллелей положительно, т. е. их значение равно единице, используется зеленый цвет заливки (код цвета 32F000).</p>
<p>Для ячеек, где сочетание аллелей отрицательно, т. е. их значение равно нулю, используется красный цвет заливки (код цвета FF0000).</p>
<p>Для ячеек, где сочетание аллелей нейтрально, т. е. их значение равно 0,5, используется желтый цвет заливки (код цвета FFEE11).</p>
<p>Для ячеек, где сочетание аллелей не определенно, используется серый цвет заливки (код цвета 787878).</p>
<p>После выполнения условного форматирования результирующий документ сохраняется, и программа завершает свою работу.</p>
<p><strong><em>4.2.3 Обеспечение диалога программ Just Append Cows<br />
и Covers с пользователем</em></strong></p>
<p><em>4.2.3.1 Обеспечение диалога программы Just Append Cows<br />
(генерация генетических паспортов)</em></p>
<p>Для обеспечения диалога с пользователем в программе предусмотрен вывод графической информации. Для начала программа запрашивает у пользователя имя файла, в котором содержится исходные результаты секвенирования для стада. Имя файла должно вводиться без расширения. В данном случае исходным будет файл с именем «group1.csv» (также предусмотрен вариант программы для работы с «.xlsx» файлами). Пример запроса имени файла представлен на рисунке 17.</p>
<p><img width="250" height="60" class="wp-image-11746" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-20.png" alt="word image 20 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 17 </strong>– Пример запроса имени файла</p>
<p>Далее программа с помощью консольного интерфейса будет уведомлять пользователя о состоянии выполнения обработки данных и создания временных файлов для каждого конкретного образца (рисунок 18).</p>
<p><img width="372" height="231" class="wp-image-11747" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-21.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-21.png 372w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-21-300x186.png 300w" sizes="(max-width: 372px) 100vw, 372px" alt="word image 21 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 18</strong>– Пример уведомления пользователя о состоянии выполнения<br />
обработки данных и создания временных файлов для каждого<br />
конкретного образца</p>
<p>После разбиения исходного файла по образцам и создания временных файлов программа приступает к сортировке данных и созданию паспортов. Так как для заполнения паспорта необходимы помимо результатов секвенирования такие данные, как порода, возраст, половозрастная группа и идентификационный номер, то пользователю будет предложено ввести требуемые данные последовательно для каждого указанного образца (рисунок 19).</p>
<p><img width="256" height="194" class="wp-image-11748" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-22.png" alt="word image 22 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 19 </strong>– Окно заполнения сопутствующих данных по животному</p>
<p>После генерации результирующих документов по каждому образцу пользователю будет предложено удалить временные файлы. Допустимые варианты ответа: Да, Нет (без учета регистра) (рисунок 20).</p>
<p><img width="276" height="45" class="wp-image-11749" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-23.png" alt="word image 23 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 20 </strong>– Диалоговое окно выбора решения о удалении<br />
или сохранении временных файлов</p>
<p>В конце работы программа уведомить пользователя о своем состоянии,<br />
а также о месте расположении результирующих документов (рисунок 21).</p>
<p><img width="346" height="25" class="wp-image-11750" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-24.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-24.png 346w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-24-300x22.png 300w" sizes="(max-width: 346px) 100vw, 346px" alt="word image 24 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 21 </strong>– Финальное диалоговое окно программы Just Append Cows</p>
<p><em>4.2.3.2 Обеспечение диалога программы Covers («Ковра»)<br />
(генерация цветной 2D-диаграммы)</em></p>
<p>Для обеспечения диалога с пользователем в программе предусмотрен вывод графической информации. Для начала программа запрашивает у пользователя имя файла, в котором содержится исходные результаты секвенирования для стада. Имя файла должно вводится без расширения. В данном случае исходным будет файл с именем group1.csv (также предусмотрен вариант программы для работы с .xlsx файлами). Пример запроса имени файла представлен на рисунке 22.</p>
<p><img width="250" height="60" class="wp-image-11751" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-25.png" alt="word image 25 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 22 </strong>– Начальное диалоговое окно программы Covers</p>
<p>Далее программа с помощью консольного интерфейса будет уведомлять пользователя о состоянии выполнения обработки данных и создания временных файлов для каждого конкретного образца (рисунок 23).</p>
<p><img width="372" height="231" class="wp-image-11752" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-26.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-26.png 372w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-26-300x186.png 300w" sizes="(max-width: 372px) 100vw, 372px" alt="word image 26 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 23 </strong>– Диалоговое окно уведомления о состоянии выполнения<br />
обработки данных и создания временных файлов для каждого<br />
конкретного образца</p>
<p>После этого программа приступает к анализу полученных данных и занесению его результатов в конечный массив. Для удобства использования также предусмотрено уведомление пользователя о ходе выполнения анализа (рисунок 24).</p>
<p><img width="347" height="232" class="wp-image-11753" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-27.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-27.png 347w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-27-300x201.png 300w" sizes="(max-width: 347px) 100vw, 347px" alt="word image 27 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 24 </strong>– Диалоговое окно уведомления о ходе выполнения анализа</p>
<p>После заполнения результирующих массивов, происходит запись их в результирующий файл, и применяется к нему условное форматирование. После выполнения этих действий программа уведомляет пользователя о завершении своей работы, а также указывает расположение конечного файла (рисунок 25).</p>
<p><img width="494" height="30" class="wp-image-11754" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-28.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-28.png 494w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-28-300x18.png 300w" sizes="(max-width: 494px) 100vw, 494px" alt="word image 28 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 25 </strong>– Диалоговое окно уведомления о завершении своей работы,<br />
а также указывает расположение конечного файла</p>
<p><a id="post-11716-__DdeLink__8158_51898843"></a><em>4.2.3.3 Описание исходного Excel-файла для программы Covers</em></p>
<p>С целью унификации результирующих документов было принято решение разработать общий шаблон для генерации 2D-диаграмм («генетического ковра»), в котором бы содержалась информация о результатах анализа всего стада, а также некоторая справочная информация для обеспечения более удобной дальнейшей работы с документом.</p>
<p>В итоге был реализован шаблонный документ в формате Excel-книги, который включает в себя два листа, на одном из которых отображаются визуализированные цветами данные, а на втором содержится таблица с интерпретацией и кратким описанием каждого признака.</p>
<p>Информация на первом листе представлена в виде таблицы. Все признаки были сгруппированы по блокам и упорядочены. В шапке таблицы присутствуют подписи блоков. Для каждого признака выделен свой столбец, для удобства реализованы ссылки на лист со справочной информацией, т. е. при клике на любой из признаков, пользователю будет предоставлена справочная информация по конкретному признаку, которая включает в себя его порядковый номер, идентификатор SNP, краткое описание, а также сочетания пар аллелей и их расшифровка (является ли сочетание позитивным, нейтральным или негативным).</p>
<p>Каждому образцу соответствует отдельная строка, в которой указывается его номер, а также результаты его анализа.</p>
<p>С целью более удобного и наглядного представления данных к таблице внутри программы применяется условное форматирование, согласно которому ячейки с позитивным прогностическим сочетанием аллелей выделяются зеленым цветом, ячейки с нейтральным прогностическим сочетанием аллелей – желтым цветом, ячейки с негативным прогностическим сочетанием аллелей – красным цветом, ячейки с неопределенным прогностическим сочетанием аллелей – серым цветом.</p>
<p>Пример ковра для 15 образцов можно увидеть на рисунке ниже (рисунок 26).</p>
<p><img width="1171" height="330" class="wp-image-11755" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-29.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-29.png 1171w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-29-300x85.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-29-1024x289.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/word-image-29-768x216.png 768w" sizes="(max-width: 1171px) 100vw, 1171px" alt="word image 29 Разработка и внедрение методов генетических исследований высокопродуктивного молочного поголовья крупного рогатоко скота с применением таргетного секвенирования для повышения эффективности животноводства"></p>
<p><strong>Рисунок 26 </strong>– Пример 2D-диаграммы («ковра») для 15 образцов (животных)</p>
<h2><strong>ВЫВОДЫ</strong></h2>
<p>1. Методом таргетного секвенирования на приборе MiSeq проведено исследование более 300 образцов (цельная кровь и спермодозы) биоптантов КРС с целью определения конкретных значений SNP из списка входящих в коммерчески доступную панель TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel Illumina (США).</p>
<p>2. Создана и проверена на материале первичных экспериментальных данных секвенирования работоспособная программа (программный продукт)<br />
Just Append Cows – для генерации генетического паспорта животного.</p>
<p>3. Создана и проверена на материале первичных экспериментальных данных секвенирования работоспособная программа (программный продукт) <a id="post-11716-__DdeLink__11665_51898843"></a>Covers («Ковер») – для генерации цветной 2D-диаграммы, описывающей распределение гомозигот и гетерозигот в аллельном спектре произвольной экспериментальной группы животных. Данная программа может быть использована для сопоставления данных представленности аллелей у родительской пары<br />
и подбора оптимального донора для искуственного осеменения.</p>
<p>4. С применением программы Just Append Cows проведена паспортизация экспериментальныхгруппы животных общей численностью более 300.</p>
<p>5. На полученном оригинальном экспериментальном материале продемонстрирована применимость программы Covers для генерации цветной 2D-диа­граммы и контроля аллельного спектра групп, а также оптимизации сравнительного подбора спермодоз быка определенного генотипа для конкретной коровы при искусственном осеменении.</p>
<h2><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2021/06/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-Источники-и-литр-Тема-1.docx">Список использованной литературы</a></h2>
]]></content:encoded>
					
					<wfw:commentRss>https://apknet.ru/targetnogo-sekvenirovaniya/feed/</wfw:commentRss>
			<slash:comments>0</slash:comments>
		
		
			</item>
		<item>
		<title>Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию</title>
		<link>https://apknet.ru/prognozirovanie-i-monitoring-nauchno-2/</link>
					<comments>https://apknet.ru/prognozirovanie-i-monitoring-nauchno-2/#respond</comments>
		
		<dc:creator><![CDATA[redactor]]></dc:creator>
		<pubDate>Fri, 30 Oct 2020 23:00:35 +0000</pubDate>
				<category><![CDATA[Агрохимия]]></category>
		<category><![CDATA[Животноводство]]></category>
		<category><![CDATA[Защита сельскохозяйственных растений]]></category>
		<category><![CDATA[Механизация и электрификация сельского хозяйства]]></category>
		<category><![CDATA[ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ]]></category>
		<guid isPermaLink="false">https://apknet.ru/?p=5280</guid>

					<description><![CDATA[– актуализация фактического состояния нормативно-правовой документации в области цифрового сельского хозяйства;
– изучение и анализ состояния современного рынка технологического оборудования и тенденций развития в области цифрового сельского хозяйства;
– изучение кадрового, интеллектуального, методического обеспечения научных и образовательных учреждений по цифровизации АПК и оценка научно-технологических тенденций и их индикаторов развития в РФ;]]></description>
										<content:encoded><![CDATA[<h2><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2019-тема-4-Титульный-и-исполнители.docx">Титульный лист и исполнители</a></h2>
<h2><strong>РЕФЕРАТ</strong></h2>
<p>Отчет 140 с., рис. 23, табл. 19, источников 133, приложение 17 с.</p>
<p>МОНИТОРИНГ, ПРОГНОЗИРОВАНИЕ, ТОЧНОЕ СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО, АВТОМАТИЗАЦИЯ, РОБОТИЗАЦИЯ</p>
<p><strong><em>Научная новизна</em></strong> заключается в создании системы мониторинга и прогнозирования научно-технологического развития АПК и инновационной деятельности в соответствующей профилю Центра тематической области.</p>
<p><strong><em>Практическая значимость</em></strong> заключается в содействии подготовки информационных, аналитических и прогнозных материалов для целей научно-технологического развития АПК Российской Федерации.</p>
<p><strong><em>Цель</em></strong> – мониторинг и актуализация научно-технологического прогноза развития АПК в области цифрового сельского хозяйства в 2019 году.</p>
<p>Для достижения указанной цели в 2019 г. выполнено следующее:</p>
<p>– актуализация фактического состояния нормативно-правовой документации в области цифрового сельского хозяйства;</p>
<p>– изучение и анализ состояния современного рынка технологического оборудования и тенденций развития в области цифрового сельского хозяйства;</p>
<p>– изучение кадрового, интеллектуального, методического обеспечения научных и образовательных учреждений по цифровизации АПК и оценка научно-технологических тенденций и их индикаторов развития в РФ;</p>
<p>– актуализация прогноза о перспективных направлениях технологического развития АПК РФ в области цифровизации сельского хозяйства;</p>
<p>– реализация сервисов личного кабинета эксперта (автоматическое назначение анкет, оповещения и др.) сайта центра; реализация элементов автоматической обработки данных анкет для составления аналитических отчетов; проведение редизайна сайта;</p>
<p>– подготовка учебно-методических материалов по направлению «Цифровое сельское хозяйство»;</p>
<p>– подготовка по результатам работы Центра отчета, аналитических<br />
и прогнозных материалов.</p>
<h2><strong>1 НОРМАТИВНО-ПРАВОВАЯ БАЗА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ<br />
БЕСПИЛОТНЫХ АВИАЦИОННЫХ СИСТЕМ</strong></h2>
<p>Рассмотрим существующие законодательные документы по использованию беспилотных авиационных систем в различных странах мира.</p>
<p><strong><em>Российская Федерация</em></strong></p>
<p>Основное конкурентное преимущество России связано с исторической традицией развития авиационной науки и техники (а также авиамоделизма)<br />
и наличием кадрового потенциала в этой отрасли. В короткий период с 2008 по 2013 гг. в стране инициативно образовался ряд компаний, профессионально развивающих БАС-технологии. Аналогичное преимущество эффективно используют лидеры рынка – США и Израиль.</p>
<p>Постановлением Правительства Российской Федерации от 25 мая 2019 г. № 658 утверждены Правила учета беспилотных гражданских воздушных судов с максимальной взлетной массой от 0,25 до 30 кг, ввезенных или произведенных в Российской Федерации.</p>
<p>Информация для постановки на учет:</p>
<p>– фотография беспилотника;</p>
<p>– заявление о постановке на учет со сведениями (информация о беспилотном воздушном судне и его технических характеристиках; тип беспилотного воздушного судна, присвоенный производителем; серийный идентификационный номер, количество установленных двигателей и их вид, информация об изготовителе беспилотного воздушного судна).</p>
<p>Информация о владельце беспилотника:</p>
<p>– юридические лица: полное наименование, основной государственный регистрационный номер, ИНН, адрес;</p>
<p>– ИП: ФИО, ОГРНИП, ИНН, адрес места жительства;</p>
<p>– физические лица: ФИО, дата и место рождения, страховой номер индивидуального лицевого счета, номер, серия и дата выдачи документа, удостоверяющего личность, адрес места жительства.</p>
<p>Разрешение на съемку с квадрокоптера в особых зонах является обязательным. Без документа пилот не имеет права осуществлять съемку.</p>
<p>Для оформления документов, разрешающих полет квадрокоптера, определена процедура:</p>
<p>– оформление заявки в Росавиации – после ее рассмотрения, владелец дрона получит разрешение на съемку или же заявление будет отклонено;</p>
<p>– перед использованием не позже чем за сутки государственным органам должен быть предоставлен маршрут будущего полета;</p>
<p>– за несколько часов до полета, владелец БПЛА обязан оповестить диспетчера о предстоящем полете;</p>
<p>– в процессе взлета и посадки все действия следует оговаривать с диспетчером.</p>
<p>Информация хранится в базе учета в течение всего срока нахождения беспилотного воздушного судна на учете и в течение 10 лет после снятия<br />
с учета.</p>
<p>Административный кодекс РФ предусматривает ответственность за нарушение правил использования воздушного пространства. Для обычных граждан это штраф от 20 до 50 тысяч рублей, для должностных – от 100 до 150, для юридических лиц – от 250 до 300.</p>
<p><strong><em>США</em></strong></p>
<p>По данным Федерального авиационного управления США (FAA), полеты на дроне в США разрешены.</p>
<p>В 2012 г. был изменен основной документ, регулирующий авиасообщение в стране – Федеральный авиационный акт (Federal Aviation Act), внесены основные концепции функционирования БАС в рамках ее воздушного пространства и разработан план дальнейшей деятельности. Разработана «дорожная карта» развития рынка БАС до 2028 г.</p>
<p>Регистрировать беспилотный самолет в США имеет право:</p>
<p>– гражданин США;</p>
<p>– гражданин иностранного государства с правом проживания на территории США;</p>
<p>– юридическое лицо, организованное в соответствии с законодательством США или любого государства, если оно основано и функционирует на территории США.</p>
<p>Регистрации подлежат беспилотные летательные аппараты массой от 0,25 до 25 кг.</p>
<p>Нормативные акты, регламентирующие правила и порядок регистрации:</p>
<p>Федеральный закон 112-95 ст. 336 (Public Law 112-95, Section 336) для судов некоммерческого предназначения;</p>
<p>Воздушный кодекс, ч. 107 (Federal Regulations (14 CFR) part 107) для судов весом менее 55 фунтов (25 кг) коммерческого назначения.</p>
<p><strong><em>Израиль</em></strong></p>
<p>По данным Агентства гражданской авиации Израиля (CAAI), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Управление гражданской авиацией Израиля курирует вопросы содействия законодательству, регулированию и процедурам во всех вопросах, касающихся проектирования, производства, эксплуатации и обслуживания БПЛА. Осуществляет лицензирование, контроль и обеспечение соблюдения законодательства в этой сфере.</p>
<p>Требуется получить два разрешения от CAAI и Министерства связи. Так же для получения права управления БПЛА необходимо вступить в Израильский аэроклуб, получить лицензию и страховку. Это позволяет управлять беспилотником на расстоянии до 50 м. Для полетов дальностью до 250 м необходима лицензия оператора, выдаваемая Министерством транспорта после прохождения соответствующего курса обучения. Полеты далее 250 м запрещены без предварительного одобрения.</p>
<p><strong><em>Канада</em></strong></p>
<p>Согласно Управлению транспортной гражданской авиации Канады (TCCA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Все беспилотники массой от 250 г до 25 кг должны быть зарегистрированы в TCCA. Пилоты обязаны маркировать дрон регистрационным номером.</p>
<p>Требования по пилотированию:</p>
<p>– БПЛА должен находиться в зоне прямой видимости во время полета;</p>
<p>– высота полета не более 122 м;</p>
<p>– минимальное расстояние во время полета до объектов инфраструктуры 30 м;</p>
<p>– запрещено летать на расстоянии менее 5,6 км от аэропортов и 1,9 км от вертодромов.</p>
<p>В случаях применения БПЛА в коммерческих целях (сельское хозяйство, проведение исследований, аэрофото- и видеосъемка) требуется получение специального сертификата полетов.</p>
<p>Нормативный акт, регламентирующий правила и порядок регистрации – Канадский авиационный кодекс, ст. 602.41 (Canadian Aviation Regulations SOR/96-433, Section 602.41).</p>
<p><strong><em>Германия</em></strong></p>
<p>По данным Федерального авиационного управления Германии (FAO), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты на высоте более 100 м без разрешения. В контролируемом воздушном пространстве максимально допустимая высота составляет 50 м.</p>
<p>БПЛА должен находиться в зоне прямой видимости во время полета.</p>
<p>Использование дронов массой более 5 кг в ночное время без разрешения запрещено.</p>
<p>Пилотирование беспилотников массой до 5 кг допустимо без разрешения, но для полета дроном массой более 2 кг требуется лицензия оператора. В соответствии с новыми положениями правил воздушного движения, операторам БПЛА массой более 2 кг необходимо получить сертификат с подтверждением достаточности знаний и навыков. Сертификат действителен в течение пяти лет. Возрастной ценз пилота – 16 лет.</p>
<p>Страхование дронов требуется для всех операций.</p>
<p>Дроны не могут летать в пределах 1,5 км от аэропорта.</p>
<p>Все беспилотники массой 250 г или более должны быть помечены огнестойким значком, содержащим имя и адрес владельца.</p>
<p>Беспилотные самолеты нельзя применять над скоплением людей, промышленными и жилыми районами, тюрьмами, районами бедствий, определенными маршрутами движения и некоторыми другими районами, обозначенными как специальные. Запрещены полеты на расстоянии менее 100 м от федеральных автомагистралей и водных путей, железнодорожных сооружений.</p>
<p>Запрещены полеты над природоохранными территориями, охраняемыми Федеральным законом об охране природы.</p>
<p>Дроны, способные записывать (передавать) оптические, акустические или радиосигналы, запрещены к использованию в частных жилых районах без согласия владельцев.</p>
<p><strong><em>Франция</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Франции, полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Все беспилотники массой от 800 г должны быть зарегистрированы на портале AlphaTango. Так же необходимо получить регистрационный номер, который должен быть постоянно виден на дроне и читаться на расстоянии<br />
30 см невооруженным глазом. Пилот обязан предоставить подтверждение регистрации в случае проверки.</p>
<p>БПЛА должен находиться в зоне прямой видимости во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты ночью (кроме случаев, когда есть специальное разрешение местного префекта).</p>
<p>Запрещены полеты над людьми, аэропортами или аэродромами, частной собственностью (только с разрешения владельца), военными объектами, тюрьмами, атомными электростанциями, историческими памятниками или национальными парками.</p>
<p>Запрещены полеты над продолжающимися пожарами, аварийными зонами или вокруг аварийных служб.</p>
<p>Запрещены полеты выше 150 м или выше 50 м над любым объектом или зданием, высота которого составляет 100 м или более.</p>
<p>Постановление Министерства экологии, устойчивого развития, транспорта и жилищного строительства Франции регламентирует правила полета БПЛА, ограничивая высоту полета до 150 м для моделей массой менее 2 кг. Полеты в населенной местности подлежат предварительному согласованию<br />
с территориальными органами власти.</p>
<p>Нормативные акты, регламентирующие правила и порядок регистрации:</p>
<p>Постановление Министерства экологии, устойчивого развития, транспорта и жилищного строительства Франции от 27 января 2017 г., определяющее список зон закрытой для аэрофотосъемки;</p>
<p>Постановление Министерства экологии, устойчивого развития, транспорта и жилищного строительства Франции от 17 декабря 2015 г. по использованию воздушного пространства беспилотной летательной техникой.</p>
<p><strong><em>Великобритания</em></strong></p>
<p>В соответствии с Управлением гражданской авиации Великобритании (CAA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Коммерческие беспилотники в Великобритании требуют разрешения<br />
от CAA.</p>
<p>Страхование требуется для всех коммерческих операций беспилотных летательных аппаратов.</p>
<p>Пилот несет ответственность за безопасное управление своим беспилотником.</p>
<p>БПЛА должен находиться в зоне прямой видимости во время полета.</p>
<p>Все беспилотники, независимо от их массы, не должны летать выше<br />
120 м над поверхностью земли.</p>
<p>Если дрон оснащен камерой, существует также ряд дополнительных ограничений, касающихся того, где можно совершать полет, и насколько можно приближаться к другим людям или объектам инфраструктуры. Чтобы иметь возможность летать в пределах этих зон или ближе, чем минимальные расстояния, указанные в правилах, следует получить предварительное разрешение от CAA.</p>
<p>Чтобы получить стандартное разрешение на коммерческий полет (PfCO), необходимо заполнить онлайн-заявку CAA и представить документы.</p>
<p>Нормативные акты, регламентирующие правила и порядок регистрации:</p>
<p>Постановление Управления гражданской авиации CAP 722 «Операции беспилотной авиационной системы в воздушном пространстве Великобритании»;</p>
<p>Статьи 94, 95, 241 Аэронавигационного ордера 2016 (ANO 2016).</p>
<p><strong><em>Нидерланды</em></strong></p>
<p>Согласно сведениям Генерального директората гражданской авиации Нидерландов (DGCA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты на высоте более 120 м над землей или водой.</p>
<p>Дроны должны летать на безопасном расстоянии от людей и зданий.</p>
<p>Пилоты должны поддерживать визуальную линию видимости с дроном во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты ночью.</p>
<p>В Нидерландах различают частное, рекреационное и профессиональное применение беспилотников.</p>
<p>Для использования в коммерческих целях необходимо получение сертификата оператора БПЛА независимо от массы. При частном применении можно управлять аппаратом массой до 4 кг без сертификата оператора.</p>
<p>Нормативные акты, регламентирующие правила и порядок регистрации:</p>
<p>Закон об авиации от 18 июня 1992 г.;</p>
<p>Распоряжение Министерства транспорта от 2 декабря 2005 г. об утверждении правовых вопросов для БПЛА.</p>
<p><strong><em>Швеция</em></strong></p>
<p>Проектирование, изготовление, модификация, техническое обслуживание и эксплуатация гражданских БПЛА в Швеции регулируется положением о беспилотных летательных аппаратах (UAS) – TSFS 2009:88. Управление БПЛА допускается на высоту не более 120 м и при дальности полета от оператора не более 500 м.</p>
<p>Для полетов в зоне контроля аэропорта требуется разрешение от Управления воздушным движением. Разрешение также требуется, если полет совершается за зону визуальной видимости и цель полета испытания, исследования или коммерческие полеты. Для аэрофотосъемки требуется разрешение от Министерства землеустройства.</p>
<p>Проектирование, изготовление, обслуживание и эксплуатация гражданских БПЛА, имеющих рабочую массу более 150 кг, контролируется Европейским парламентом. Необходимо также одобрение со стороны Европейского агентства по авиационной безопасности (EASA).</p>
<p>В Швеции приняты следующие виды разрешения для управления беспилотниками:</p>
<p>– категория 1A UAS – максимальная взлетная масса самолета меньше или равна 1,5 кг, лицензия выдается на 2 года;</p>
<p>– категория 1B UAS – максимальная взлетная масса самолета больше<br />
1,5 кг, но меньше или равна 7 кг, лицензия выдается на 2 года;</p>
<p>– категория 2 UAS – максимальная взлетная масса самолета составляет более 7 кг, лицензия выдается на 1 год;</p>
<p>– категория 3 UAS – для аппаратов с посадкой вне поля зрения пилота.</p>
<p>Нормативный акт, регламентирующий правила и порядок регистрации:</p>
<p>Правила Транспортного агентства TSFS 2009: 88, с поправками от 2013 г.</p>
<p><strong><em>Швейцария</em></strong></p>
<p>Согласно данных Федерального управления гражданской авиации Швейцарии (FOCA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Автоматический полет (автономное управление беспилотником) в поле зрения пилота разрешается при условии, что пилот может в любое время вмешаться в управление беспилотником.</p>
<p>В пределах охотничьих или охраняемых территорий для водных и перелетных птиц применение беспилотников запрещено без исключения.</p>
<p>Аэрофотосъемка разрешена при условии соблюдения правил защиты военных объектов. Внимание должно быть уделено защите конфиденциальности и положениям Закона о защите данных.</p>
<p>Беспилотники не должны эксплуатироваться над людьми на расстоянии менее чем 100 м.</p>
<p>Запрещены полеты в пределах 5 км от аэропорта.</p>
<p>Для общественных воздушных событий, в которых используются только модельные самолеты или беспилотники, FOCA не требует одобрения.</p>
<p>БПЛА массой до 30 кг могут быть использованы без лицензии при условии, что оператор всегда имеет визуальный контакт с летательным аппаратом.</p>
<p><strong><em>Австрия</em></strong></p>
<p>Согласно австрийскому национальному авиационному органу – Austro Control, полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Возраст пилота от 16 лет.</p>
<p>Страхование ответственности является обязательным условием для всех операторов беспилотных летательных аппаратов.</p>
<p>Запрещено пролетать над группой людей без специального разре-шения.</p>
<p>Нельзя летать в непосредственной близости от аэропортов без специального разрешения.</p>
<p>Только Austro Control может предоставить пилоту авиационное разрешение.</p>
<p>Даже после предоставления лицензии на эксплуатацию для определенных районов могут потребоваться специальные разрешения, связанные<br />
с авиацией, в соответствии с Правилами воздушного движения от 2014 г.</p>
<p>В стране с 2014 г. внедрены очень строгие правила эксплуатации БПЛА. Потенциальные местоположения для полетов делятся на четыре категории:</p>
<p>– неразвитая область;</p>
<p>– нежилые районы;</p>
<p>– населенный пункт;</p>
<p>– плотно заселенная территория.</p>
<p>Для каждой категории существуют особые условия и разрешения. Квадрокоптеры одобрены только для первых двух категорий. Для населенных (густонаселенных) районов требуются гекса- или октокоптеры.</p>
<p>Получение лицензии необходимо, если:</p>
<p>– рейсы коммерческие, без сохранения снимков с камеры;</p>
<p>– максимальная масса 25 кг;</p>
<p>– полет вне зон безопасности;</p>
<p>– максимальный радиус полета 500 м.</p>
<p>Мини-дронами массой до 0,25 кг и максимальной высотой полета 30 м можно управлять без лицензии, даже если они оснащены камерой.</p>
<p><strong><em>Венгрия</em></strong></p>
<p>Согласно положениям Главного управления воздушного транспорта Венгрии, полеты на дроне разрешены. Разрешение и страхование требуются для всех полетов для любом типе БПЛА.</p>
<p><strong><em>Бельгия</em></strong></p>
<p>В соответствии с данными Федеральной службы по мобильности и транспорту (FPS) и Управления гражданской авиации Бельгии (BCAA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Полеты могут выполняться только в дневное время.</p>
<p>Масса БПЛА должна быть не более 150 кг.</p>
<p>Пилот должен постоянно поддерживать визуальную линию обзора<br />
с дроном.</p>
<p>Для коммерческих полетов необходимо получение медицинской страховки, пройти теоретический тест и зарегистрировать БПЛА.</p>
<p>Исключением из нормативных требований Королевского указа от 10 апреля 2016 г. являются:</p>
<p>– беспилотники, используемые только для полетов внутри зданий;</p>
<p>– БПЛА, применяемые военными, таможенными органами, полицией, береговой охраной и т. д.;</p>
<p>– некоторые типы модельных самолетов, которые используются исключительно для личных целей, при условии, что они соответствуют строгим требованиям, изложенным в Королевском указе.</p>
<p>Нормативный акт, регламентирующий правила и порядок регистрации:</p>
<p>Королевский указ от 10 апреля 2016 г. «Об использовании самолетов<br />
с дистанционным управлением в воздушном пространстве Бельгии».</p>
<p><strong><em>Ирландия</em></strong></p>
<p>Регистрация для некоторых типов БПЛА обязательна с 21 декабря<br />
2015 г.</p>
<p>Регистрации подлежат беспилотники:</p>
<p>– более 1 кг;</p>
<p>– летающие выше 15 м над землей или водой независимо от массы;</p>
<p>– с установленным оборудованием.</p>
<p>Нормативные акты, регламентирующие правила и порядок регистрации:</p>
<p>Порядок регистрации БПЛА (Small Unmanned Aircraft (Drones);</p>
<p>Ракетный закон 563 от 2015 г. (Rockets Order S.I. 563 of 2015).</p>
<p><strong><em>Норвегия</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Норвегии (CAAN), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Пилоты должны поддерживать визуальную линию видимости с дроном на протяжении всего полета.</p>
<p>Запрещены полеты в пределах 5 км от аэропорта или аэродрома без специального разрешения; выше 120 м над землей; над местами массовых скоплений людей, военными объектами или спортивными мероприятиями; в пределах 150 м от людей, зданий и транспортных средств.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны учитывать конфиденциальность других людей и принимать к сведению правила, касающиеся фотографирования и видеосъемки частной собственности.</p>
<p>С 2016 г. в стране действуют новые правила – пилоты БПЛА квалифицируются как моделисты и не нуждаются в специальном разрешении.</p>
<p>В коммерческих целях беспилотники делятся на три категории:</p>
<p>– взлетная масса менее 2,5 кг. Перед каждым полетом необходимо сообщить о нем, имя пилота должно быть прикреплено с номером телефона на аппарате, также необходимо вести журнал регистрации;</p>
<p>– масса до 25 кг – требует специального лицензирования пилотов.</p>
<p>– все модели, не относящиеся к описанным выше.</p>
<p>Нормативный акт, регламентирующий правила и порядок регистрации:</p>
<p>Закон № 101 «Об авиации» от 11 июня 1993 г.</p>
<p><strong><em>Хорватия</em></strong></p>
<p>По данным Агентства гражданской авиации Хорватии, полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты выше 120 м над поверхностью земли или 50 м над препятствием, в зависимости от того, что больше.</p>
<p>При полете в контролируемом воздушном пространстве запрещены полеты менее 5 км от аэродрома.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны поддерживать прямой визуальный контроль дрона во время полета.</p>
<p>Дроны должны находиться на расстоянии не менее 30 м от людей, если только не включен режим низкой скорости и максимальная скорость не превышает 3 м/с. В этом случае дрон должен находиться на расстоянии не менее 5 м от людей.</p>
<p>Минимально допустимое расстояние от БПЛА в полете до группы людей составляет 50 м.</p>
<p>Все беспилотники массой более 5 кг должны быть помечены невоспламеняющейся идентификационной табличкой или идентификационной этикеткой. Негорючая табличка должна содержать идентификационную метку беспилотного летательного аппарата и контактную информацию владельца (имя, фамилию, адрес, телефон / адрес электронной почты).</p>
<p><strong><em>Кипр</em></strong></p>
<p>Согласно положения Департамента гражданской авиации Кипра (DCA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Максимальная высота полета для беспилотников составляет 50 м над уровнем земли или моря для открытой категории, до 120 м над уровнем земли или моря для специальной категории. Департамент гражданской авиации может предоставить исключения операторам беспилотных самолетов особой категории.</p>
<p>Прямой визуальный контакт с дроном является обязательным и расстояние между оператором и дроном не должно превышать 500 м.</p>
<p>Безопасное расстояние 1 км от жилых районов.</p>
<p>Безопасное расстояние 500 м от зданий, людей, транспортных средств, животных, сооружений и т. д., кроме случая, когда получено согласие владельца.</p>
<p>Безопасное расстояние не менее 8 км от аэропортов и не менее 3 км от вертодромов.</p>
<p>Ночью летать на дроне запрещено.</p>
<p>Запрещается летать над, внутри или вблизи объектов военных, общественного пользования, археологических и общественных или частных.</p>
<p><strong><em>Греция</em></strong></p>
<p>В соответствии с положением Управления гражданской авиации Греции (HCAA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>При полете на высоте 50 м и более, необходимо иметь разрешение.</p>
<p>Запрещены полеты ночью.</p>
<p>Операторы беспилотных летательных аппаратов, которые летают в коммерческих целях или в категории «Особые», «Сертифицированные», должны иметь страховку аппаратов.</p>
<p>Операторам беспилотников, которые летают только для хобби или отдыха, не нужна страховка, если только их масса более 4 кг и попадают в категорию «Open-A2».</p>
<p>Запрещены полеты над людьми, тюрьмами, больницами, правительственными и военными объектами и другими уязвимыми районами.</p>
<p>Запрещены полеты над частной собственностью без разрешения владельца.</p>
<p>С января 2017 г. вступил в силу новый закон, согласно которому модели делятся на две категории:</p>
<p>– с общей взлетной массой до 7 кг, для них не требуется специальных разрешений;</p>
<p>– с массой более 7 и менее 25 кг, для них необходимо получить разрешение. Такие БПЛА не должны быть оснащены металлическими пропеллерами. Необходимо также страхование от несанкционированного использования, получения телесных повреждений и материального ущерба. Пилоты должны поддерживать расстояние не менее 50 м от скопления людей, животных и транспортных средств.</p>
<p>Полет через археологические объекты разрешается только со специальным разрешением.</p>
<p><strong><em>Болгария</em></strong></p>
<p>Согласно данных Управления воздушного движения Болгарии (BULATSA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Пилоты должны запросить разрешение на полет, отправив письмо<br />
в Главное управление администрации гражданской авиации (DG CAA) за восемь дней до полета. В письме должны быть указаны зоны полета, дата проведения полетов, время начала и окончания, ответственное лицо и номер мобильного телефона для связи с ним.</p>
<p><strong><em>Италия</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Италии (ENAC), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Дроны должны быть оснащены табличкой, показывающей идентификацию системы и оператора. Аналогичная табличка должна быть установлена также на удаленной наземной пилотной станции. Начиная с 1 июля 2016 г.,<br />
в дополнение к табличкам, требуемым в соответствии со статьей 8.1, все беспилотники, которые позволяют передавать данные в режиме реального времени, должны быть оснащены устройством электронной идентификации.</p>
<p>Пилоты должны поддерживать прямую видимость с дроном во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты ночью, над людьми, включая спортивные мероприятия, концерты и другие крупные мероприятия.</p>
<p>Беспилотные самолеты, которые осуществляют полет в рекреационных целях, не могут подниматься выше 70 м над землей, а беспилотные самолеты, которые летают в коммерческих целях – выше 150 м.</p>
<p>Запрещены полеты в пределах 5 км от аэропорта.</p>
<p>Пилоты коммерческих беспилотников, выполняющие операции с низким уровнем риска, должны представить заявление о соответствии определенным требованиям ENAC. Для выполнения операций с повышенным риском коммерческие пилоты должны получить сертификат об обучении<br />
и эксплуатации, а также справку о состоянии здоровья.</p>
<p><strong><em>Чешская Республика</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Чешской Республики, полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Для коммерческих беспилотных полетов лицензия пилота необходима.</p>
<p>Эксплуатация беспилотников, как правило, разрешена в воздушном пространстве класса G в Чешской Республике. Это воздушное пространство до 300 м над землей.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны поддерживать прямой визуальный обзор дрона во время полета.</p>
<p>Полеты должны выполняться на безопасном расстоянии от людей, сооружений и густонаселенных районов.</p>
<p><strong><em>Эстония</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Эстонии (ECAA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Разрешение не требуется для полетов ниже 150 м.</p>
<p>Для полетов ниже 150 м пилоты должны запросить разрешение не менее чем за три рабочих дня, выше 150 м – пилоты должны одновременно иметь разрешение и запрашивать разрешение не менее чем за семь рабочих дней.</p>
<p>Для личного использования можно снимать в любом месте с помощью дрона, но запрещено намеренно снимать кого-либо без его разрешения.</p>
<p><strong><em>Польша</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации (CAA), полеты на дроне<br />
в Польше разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты выше 150 м.</p>
<p>Пилоты должны поддерживать визуальную линию видимости с дроном во время полета.</p>
<p>Страхование ответственности требуется для коммерческих беспилотных полетов.</p>
<p>Запрещены полеты дронов массой более 25 кг.</p>
<p>Операции с беспилотниками должны проводиться на расстоянии не менее 5 км от аэропортов.</p>
<p>Запрещены полеты на расстоянии не менее 100 м от населенных пунктов и 30 м от людей, транспортных средств и животных.</p>
<p>Запрещены полеты над скоплением людей, городами, улицами и зданиями.</p>
<p>Для полетов в Варшаве требуется дополнительное разрешение от Бюро государственной защиты (BOR).</p>
<p>Пилоты должны получить медицинскую справку; справку, подтверждающую прохождение теоретического и практического теста.</p>
<p><strong><em>Португалия</em></strong></p>
<p>Согласно Национальному управлению гражданской авиации (ANAC), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Страхование беспилотников не является обязательным, но ANAC рекомендует заключить договор страхования гражданской ответственности для покрытия любого ущерба, который может возникнуть в результате использования самолета с дистанционным управлением.</p>
<p>Дроны не могут использоваться для фото или видео без разрешения Национального авиационного управления.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны постоянно поддерживать визуальную линию видимости дрона во время полета.</p>
<p>Игрушечные беспилотники (т. е. беспилотники массой менее 0,25 кг) не должны летать над людьми и не превышать высоту 30 м.</p>
<p>Для полета беспилотника массой более 25 кг ночью или за пределами прямой видимости (BVLOS) необходимо получить специальное разрешение от ANAC.</p>
<p><strong><em>Испания</em></strong></p>
<p>Согласно Государственному агентству воздушной безопасности (AESA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Региональные власти имеют возможность издавать свои собственные правила о беспилотных летательных аппаратах.</p>
<p>Для коммерческих полетов дронов требуется разрешение.</p>
<p>Страхование ответственности требуется для коммерческих полетов.</p>
<p>Дроны могут летать на высоте до 120 м над землей.</p>
<p>Запрещены полеты ночью. Для беспилотных летательных аппаратов<br />
с взлетной массой менее 2 кг полеты также могут выполняться ночью, если не превышена высота полета 50 м над землей.</p>
<p>Дроны должны летать в пределах прямой видимости.</p>
<p>Пилоты должны выдерживать расстояние не менее 8 км от аэропортов<br />
в неконтролируемом воздушном пространстве или 15 км на утвержденных рейсах BVLOS.</p>
<p>Пилоты должны находиться на расстоянии 150 м от зданий и на расстоянии 50 м или более от людей, не участвующих в полете.</p>
<p>Для полетов в национальных парках необходимо разрешение AESA. Использование беспилотных летательных аппаратов в бесполетных зонах должно быть одобрено Министерством обороны Испании.</p>
<p><strong><em>Дания</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Дании (CAA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Владелец дрона должен быть зарегистрирован в Управлении транспорта, строительства и жилищного строительства Дании.</p>
<p>Беспилотник должен быть помечен именем владельца, номером телефона и регистрационным номером, присвоенным Департаментом транспорта, строительства и жилищного строительства.</p>
<p>Микродроны массой 250 г или менее с максимальной скоростью полета 50 км/ч регистрировать не требуется.</p>
<p>Пилот должен иметь аккредитацию для работы с беспилотником массой более 7 кг.</p>
<p>Пилоту должно быть не менее 16 лет.</p>
<p>Дроны, которые не являются микродронами, должны быть застрахованы страховкой ответственности.</p>
<p>Запрещены дроны массой более 25 кг.</p>
<p>Беспилотники не должны летать выше 100 м.</p>
<p>Дроны не должны эксплуатироваться на расстоянии менее 50 м по горизонтали от других лиц, если только эти лица не участвуют или не являются зрителями полета.</p>
<p>Дроны должны уступать место пилотируемым самолетам.</p>
<p>При полете на БПЛА расстояние до взлетно-посадочной полосы / аэродромов общественного аэродрома должно быть не менее 5 км.</p>
<p>При полете беспилотника расстояние до взлетно-посадочной полосы / военной авиабазы должно быть не менее 8 км.</p>
<p>При полете беспилотника расстояние до населенных пунктов и основных дорог общего пользования должно быть не менее 150 м.</p>
<p>При полете на дроне расстояние до пилотируемых кораблей, лодок<br />
и морских установок должно быть не менее 50 м.</p>
<p>Беспилотные самолеты нельзя использовать над плотно застроенными территориями, включая районы с коттеджами на выходные и жилые места для кемпинга, а также районы с большими скоплениями людей под открытым небом.</p>
<p>Запрещены полеты близко к другим дронам, что может привести<br />
к столкновению.</p>
<p>Для полетов за пределами зоны видимости, над людьми, внутри помещений, на открытых или объявленных публично мероприятиях, на высоте более 100 м, с более чем одним дроном, требуется автономное разрешение от Управления транспорта, строительства и жилищного строительства.</p>
<p>Для полетов в ночное время беспилотник должен быть снабжен светом, позволяющим оператору видеть беспилотник во время полета, в том числе его ориентацию в воздухе. Стартовые и посадочные площадки также должны быть освещены. Специальная лицензия необходима для полетов беспилотников в ночное время в городских и населенных пунктах.</p>
<p><strong><em>Финляндия</em></strong></p>
<p>По данным Агентства по безопасности на транспорте (TRAFI), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты на высоте более 150 м над землей.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны поддерживать прямой визуальный обзор дрона во время полета.</p>
<p>Дроны не могут летать в пределах 1 км от любой взлетно-посадочной полосы аэропорта без разрешения диспетчерской вышки.</p>
<p>Пролет на расстоянии от 1 до 3 км от взлетно-посадочной полосы аэропорта разрешается до высоты окружающих препятствий. В непосредственной близости от препятствия можно пролететь 15 м над высотой препятствия<br />
с разрешения владельца препятствия.</p>
<p>Пролетая в контрольной зоне аэропорта, но еще дальше, чем в 3 км от взлетно-посадочных полос аэропорта, максимально допустимая высота полета составляет 50 м.</p>
<p>Дроны не могут летать над людьми. Коммерческие пилоты могут совершать полеты только при наличии специального разрешения TRAFI.</p>
<p>Ограничение массы БПЛА – 25 кг.</p>
<p>Пилоты, летающие в коммерческих целях, обязаны иметь страховку.</p>
<p>Для коммерческих полетов пилоту должно быть не менее 18 лет. Для прогулочных полетов возрастных ограничений нет.</p>
<p>Пилоты, используемые в коммерческих целях дрон, должны иметь наклейку на борту с указанием имени владельца и контактной информации,<br />
а также документировать свои действия в бортовом журнале.</p>
<p><strong><em>Китай</em></strong></p>
<p>По данным Администрации гражданской авиации Китая (CAAC), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Любые беспилотники массой 250 г и более должны быть зарегистрированы в CAAC.</p>
<p>Лицензирование требуется для коммерческих операций.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны поддерживать прямой визуальный контакт с дроном во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты на высоте более 120 м над землей, в густонаселенных районах, в пределах любого аэропорта или аэродрома.</p>
<p>Любой беспилотник массой более 250 г должен быть зарегистрирован<br />
в CAAC, от 7 до 116 кг – требуется лицензия CAAC.</p>
<p>Все беспилотные летательные аппараты, предназначенные для коммерческого использования, требуют лицензии CAAC.</p>
<p>Для управления беспилотником массой более 116 кг требуется лицензия пилота и сертификация БПЛА для работы.</p>
<p>Деятельность гражданской авиации в основном регулируется «Законом о гражданской авиации КНР», «Общими правилами полетов КНР» и «Положением об общем авиационном управлении полетом».</p>
<p>Регулирующее агентство по гражданским полетам – Управление гражданской авиации Китая выпустило консультативные положения, в которых устанавливаются руководящие принципы для полета беспи-лотников. Ожидается, что эти промежуточные меры будут обновлены по мере развития промышленности и нормативной базы БПЛА.</p>
<p>Положением о контроле над полетом средств общей авиации яв-ляется административное регулирование, которое применяется ко всем коммерческим и рекреационным операциям воздушных судов, за исключением тех, которые участвуют в общественном воздушном транспорте. Общая авиация<br />
в соответствии с законодательством Китая относится к авиационным операциям, отличным от военных полетов, полицейских воздушных действий, таможенных антиконтрабандных полетов и общественных воздушных перевозок. Положение включает в себя требования к полетам с целью проведения исследований в области промышленности, сельского хозяйства, лесного хозяйства, рыболовства, добычи полезных ископаемых и строительства, полетам с медицинскими целями, аварийного спасения и ликвидации последствий стихийных бедствий, метеорологического наблюдения, мониторинга океана, научных экспериментов, дистанционного зондирования и картирования,<br />
а также получения информации для образования и обучения, культуры и спорта, туризма и экскурсий и т. д.</p>
<p>Нормативные акты, регламентирующие правила и порядок регистрации:</p>
<p>Закон о гражданской авиации КНР;</p>
<p>Общие правила полетов КНР;</p>
<p>Положение об общем авиационном управлении полетом.</p>
<p><strong><em>Южная Корея</em></strong></p>
<p>Israel Aerospace Industries (IAI) и южнокорейский производитель композиционных материалов Hankuk Carbon (HC) подписали меморандум о создании совместного предприятия по разработке и производству новых вертикальных взлетно-посадочных полос для беспилотников. Компании заявили, что они начнут сотрудничество по разработке БПЛА с массой 200–300 кг, производство которых будет сосредоточено в Южной Корее (90 %).</p>
<p>Согласно местному законодательству, полеты дронов запрещены во многих местах страны, особенно в северных районах Сеула, где находятся ключевые государственные учреждения. Районы вокруг военных объектов<br />
и атомных электростанций также закрыты для поле-тов.</p>
<p>В связи с развитием БПЛА правительство решило пересмотреть регулирование отрасли, заявив, что будет принято решение по расширению зоны полетов, упрощению требований к пилотам.</p>
<p>До 2017 г. полеты беспилотных летательных аппаратов регулировались в соответствии с Законом об авиации. По состоянию на 30 марта 2017 г. Закон об авиации отменен и заменен двумя законами – «Об авиационной безопасности» и «Об авиационном бизнесе».</p>
<p>Для использования БПЛА в коммерческих целях необходимо разрешение Министерства земельной инфраструктуры и транспорта. Разрешение для полета не требуется для беспилотников массой до 12 кг или менее, если они используются не в коммерческих целях.</p>
<p>При использовании БПЛА массой 25 кг и более необходимо получение сертификата безопасности от Управления безопасности транспорта Кореи.</p>
<p>Акты, регламентирующие правила и порядок регистрации:</p>
<p>Статья 48 Закона об авиационном бизнесе (Article 48 of the Aviation Business Act);</p>
<p>Статья 2 Закона об авиационном бизнесе (Article 2 of the Aviation Busi-ness Act);</p>
<p>Статья 122 Закона об авиационной безопасности (Article 122 of the Avi-ation Security Act).</p>
<p><strong><em>Индия</em></strong></p>
<p>По данным Министерства гражданской авиации, полеты на дроне в Индии разрешены.</p>
<p>Все дроны, за исключением тех, что в категории Nano, должны быть зарегистрированы и иметь уникальный идентификационный номер.</p>
<p>Пилоты должны всегда поддерживать прямую визуальную линию видимости во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты более 150 м над землей.</p>
<p>Беспилотные самолеты не могут летать в районах, обозначенных как «запретные для полетов зоны», которые включают районы вблизи аэропортов, международные границы, комплекс государственного секретариата<br />
в столицах штатов, стратегические местоположения и военные объекты.</p>
<p>Разрешение на полет в контролируемом воздушном пространстве можно получить, заполнив план полета и получив уникальный номер Центра информации о полете (FIC).</p>
<p>Генеральное управление гражданской авиации DGCA планирует регистрировать гражданские БПЛА и выдавать разрешения на их работу.</p>
<p>Генеральное управление гражданской авиации находится в процессе разработки и согласования правил с аэронавигационной службой, службой безопасности, Министерством внутренних дел для сертификации и эксплуатации БПЛА в гражданском воздушном пространстве Индии. До момента выхода регламентирующих документов запрещается использование беспилотников в гражданском воздушном пространстве для любых целей.</p>
<p>Нормативный акт, регламентирующий правила и порядок регистрации:</p>
<p>Общественное уведомление (public notice) 05-13/2014-AED от 7.10.2014 «Использование беспилотных летательных аппаратов в гражданской авиации».</p>
<p><strong><em>Япония</em></strong></p>
<p>По данным Японского бюро гражданской авиации (JCAB), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Перед полетом необходимо запросить разрешение, подав заявку на получение разрешения в Министерство наземной инфраструктуры.</p>
<p>Дроны не могут летать без специального разрешения Министра земли, инфраструктуры, транспорта и туризма:</p>
<p>– более 150 м над уровнем земли;</p>
<p>– возле аэропортов;</p>
<p>– над густонаселенными районами, определенными Министерством внутренних дел и связи.</p>
<p>Дроны могут летать только днем.</p>
<p>Пилоты должны поддерживать визуальную линию видимости с дроном во время операций.</p>
<p>Дроны не должны летать в пределах 30 м от людей или частной собственности.</p>
<p>Аппараты нельзя использовать для перевозки опасных грузов.</p>
<p>Дроны не могут сбрасывать предметы во время полета, умышленно или случайно.</p>
<p>Нормативные акты, регламентирующие правила и порядок регистрации:</p>
<p>Закон о БПЛА в Японии от 10.12.2015 (Aviation Act came into effect December 10, 2015);</p>
<p>Закон о гражданской авиации № 118 от 2006 (Civil Aeronautics Act No. 118 of 2006);</p>
<p>Закон об исполнении Закона о гражданской аэронавтике (Оrdi-nance for Enforcement of the Civil Aeronautics Act).</p>
<p><strong><em>Австралия</em></strong></p>
<p>Согласно Управлению безопасности гражданской авиации Австралии (CASA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Разрешены полеты только днем с соблюдением визуальной видимости.</p>
<p>Высота полета не выше 120 м над землей.</p>
<p>Расстояние минимум 30 м от других людей.</p>
<p>Полеты запрещены над или вблизи зоны, затрагивающей общественную безопасность или где проводятся аварийные операции (без предварительного разрешения). Это может включать такие ситуации, как автомобильная авария, полицейские операции, пожар и связанные с этим противопожарные мероприятия, а также поиск и спасение людей.</p>
<p>Запрещены полеты в местах массового скопления людей: пляжи, парки, стадионы.</p>
<p>При массе дрона более 100 г, запрещено летать на расстоянии менее<br />
5,5 км от контролируемых аэродромов.</p>
<p>Фото и видео людей без их согласия запрещено.</p>
<p>Управление гражданской авиацией CASA утвердило сертификаты оператора БПЛА в категориях с несколькими роторами, с фиксированным крылом и вертолетом для четырех масс – до 2, 7, 20 и 150 кг.</p>
<p>Для управления БПЛА массой менее 2 кг не требуется сертификат оператора или лицензия удаленного пилота. Для остальных категорий необходимо разрешение в виде лицензии удаленного пилота, которым, в свою очередь, необходимо иметь сертификат оператора RPA.</p>
<p>Нормативный акт, регламентирующий правила и порядок регистрации:</p>
<p>Статья 101 Правил безопасности гражданской авиации (Part 101 of the Civil Aviation Safety Regulations.</p>
<p><strong><em>Аргентина</em></strong></p>
<p>Согласно Национальному управлению гражданской авиации Аргентины (ANAC), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Все беспилотники должны быть зарегистрированы в Национальном реестре воздушных судов (ANAC).</p>
<p>Минимальный возраст пилота для эксплуатации дрона – 18 лет. Лица 16 и 17-летнего возраста могут пилотировать беспилотный летательный аппарат, если он сопровождается взрослым во время операции.</p>
<p>Дроны запрещено использовать в пределах 5 км от аэропортов, аэродромов и вертодромов.</p>
<p>Дроны запрещены в густонаселенных районах или над местами массового скопления людей.</p>
<p><strong><em>Азербайджан</em></strong></p>
<p>По данным Государственного управления гражданской авиации Азербайджана (CAA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Дронам запрещено работать в любой зоне движения аэродрома / аэропорта, кроме как с разрешения соответствующего органа УВД или лица, ответственного за аэродром / аэропорт.</p>
<p>Дроны не могут летать на высоте более 120 м над уровнем земли.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны поддерживать прямую визуальную линию обзора с беспилотником во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты в пределах 150 м от любой перегруженной территории города, поселка или поселения.</p>
<p>Запрещены полеты в пределах 50 м от любого человека, судна, транспортного средства или сооружения.</p>
<p>Во время взлета или посадки БПЛА не должен летать в пределах 30 м от любого человека, если только этот человек не участвует в операции управления дрона.</p>
<p><strong><em>Бразилия</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Бразилии (ANAC), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Возраст пилота – не моложе 18 лет.</p>
<p>Пилоты не могут управлять более чем одним дроном одновременно.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны всегда поддерживать визуальную линию видимости своего беспилотника.</p>
<p>Пилоты, управляющие беспилотниками массой более 250 г, должны иметь страховку, покрывающую ущерб третьим лицам.</p>
<p>Любой дрон массой более 250 г должен быть зарегистрирован в системе беспилотных летательных аппаратов ANAC (SISANT), а регистрационный идентификатор должен быть нанесен на БПЛА.</p>
<p>Беспилотники массой более 250 г могут летать только на участках длиной 30 м или более от людей, не участвующих в полете, под полную ответственность пилота-оператора и в соответствии с правилами использования.</p>
<p>Полеты над тюрьмами, военными объектами или другой важной инфраструктурой запрещены.</p>
<p>Полеты не разрешаются на расстоянии менее 30 м от зданий.</p>
<p>Полеты над людьми запрещены.</p>
<p>Автономная работа дронов запрещена. Автономные операции отличаются от автоматических беспилотных операций тем, что пилот может вмешаться в управление в любой момент.</p>
<p><strong><em>Камерун</em></strong></p>
<p>Согласно данным Управления гражданской авиации Камеруна (CCAA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты на высоте более 120 м над землей.</p>
<p>Пилоты беспилотных летательных аппаратов должны поддерживать прямой визуальный обзор дрона во время полета.</p>
<p>Запрещены полеты в пределах 5,5 км от любого аэропорта или аэродрома; на расстоянии менее 15 м от любых сооружений, включая здания, транспортные средства, корабли, животных и людей; полеты ночью.</p>
<p><strong><em>Египет</em></strong></p>
<p>По данным Управления гражданской авиации Египта, полеты на дроне разрешены.</p>
<p>В соответствии с Законом № 28 от 1981 года, в который были внесены поправки, включающие в себя закон о беспилотниках и в соответствии с законом № 92 от 2003 года, прежде чем эксплуатировать беспилотник в Египте, необходимо получить разрешение Управления гражданской авиации.</p>
<p><strong><em>Индонезия</em></strong></p>
<p>Согласно данным Генерального директората гражданской авиации, полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Запрещены полеты выше 150 м без разрешения, БПЛА массой более</p>
<p>7 кг, в пределах 15 км от любого аэропорта, полеты ночью.</p>
<p>Дроны не могут летать с любого движущегося транспортного средства.</p>
<p>Пилоты должны поддерживать прямую линию визуального обзора во время полета.</p>
<p><strong><em>Иран</em></strong></p>
<p>По данным национального авиационного управления – Организации гражданской авиации Ирана (CAOI), беспилотники в Иране запрещены.</p>
<p><strong><em>Мексика</em></strong></p>
<p>Согласно Национальному авиационному органу – Генеральному директорату гражданской авиации Мексики (DGCA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Все беспилотники массой более 250 г должны быть зарегистрированы<br />
в DGCA. Для регистрации требуется официальное удостоверение личности, подтверждающее гражданство Мексики, поэтому запрещается регистрация иностранных лиц.</p>
<p>Запрещены полеты в ночное время, на расстоянии более 500 м от оператора, выше 100 м над уровнем земли, над людьми или животными, на исторических местах, на расстоянии менее 9,2 км от любого аэродрома, сброс любого рода предметов с БПЛА.</p>
<p>На данный момент для получения лицензии на дрон в Мексике пилот должен быть:</p>
<p>– не моложе 18 лет;</p>
<p>– мексиканцем по рождению;</p>
<p>– предоставить свою военную карту;</p>
<p>– иметь диплом средней школы;</p>
<p>– иметь справку о состоянии здоровья.</p>
<p><strong><em>Шри-Ланка</em></strong></p>
<p>По данным Национального авиационного управления Шри-Ланки – Управления гражданской авиации (SLCAA), беспилотники запрещены на неопределенный срок.</p>
<p><strong><em>Турция</em></strong></p>
<p>По данным Администрации аэропортов штатов Турции (SAMA), полеты на дроне разрешены.</p>
<p>БПЛА массой более 500 г должны регистрироваться в правительстве Турции перед полетом.</p>
<p>Разрешение требуется до всех коммерческих полетов.</p>
<p>Запрещены полеты выше 120 м и БПЛА массой более 4 кг для частных<br />
и личных рейсов.</p>
<p><strong><em>Венесуэла</em></strong></p>
<p>Согласно Национальному институту гражданской авиации (INAC), полеты на беспилотниках разрешены.</p>
<p>Венесуэла имеет несколько категорий лицензий на беспилотные полеты.</p>
<p>Заявители должны быть венесуэльцами или гражданами страны, которая предоставляет взаимный режим при выдаче лицензий венесуэльцам.</p>
<p>Пилоты должны говорить, читать и писать на испанском языке, иметь действующий авиационный медицинский сертификат, соответствующий типу лицензии.</p>
<p><strong><em>Украина</em></strong></p>
<p>По данным Государственного авиационного управления Украины, полеты на дроне разрешены.</p>
<p>Дроны массой более 2 кг должны быть зарегистрированны и иметь разрешение в UkrAirCenter (подать заявку как минимум за 10 дней)</p>
<p>Дроны массой менее 2 кг не требуют разрешения.</p>
<p>Пилот должен быть не далее 500 м от БПЛА.</p>
<p>Пилот не должен контролировать более одного БПЛА одновременно.</p>
<p>Запрещены полеты выше 50 м без разрешения, в пределах 5 км от внешних границ аэропорта, в пределах 30 м от отдельного человека, 50 м от группы людей в возрасте до 12 человек,150 м от группы более 12 человек, полеты ночью.</p>
<p><strong>Выводы:</strong></p>
<p>В результате выполненной работы проанализирована норматив-но-правовая документация использования беспилотных авиационных систем<br />
в 44 странах – Россия, США, Израиль, Канада, Германия, Франция, Великобритания, Нидерланды, Швеция, Швейцария, Австрия, Венгрия, Бельгия, Ирландия, Норвегия, Хорватия, Кипр, Греция, Болгария, Италия, Чешская Республика, Эстония, Польша, Португалия, Испания, Дания, Финляндия, Китай, Южная Корея, Индия, Япония, Австралия, Аргентина, Азербайджан, Бразилия, Камерун, Египет, Индонезия, Иран, Мексика, Шри-Ланка, Турция, Венесуэла, Украина.</p>
<p>Использование дронов в большинстве стран разрешены при различных условиях в зависимости от законодательства.</p>
<p>Запрещено использование беспилотников в Иране. По данным национального авиационного управления Шри-Ланки – беспилотники в ней запрещены на неопределенный срок.</p>
<h2><strong>2 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЭЛЕМЕНТОВ ТОЧНОГО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА В РФ</strong></h2>
<p>Центром прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ совместно<br />
с Департаментом научно-технологической политики и образования Минсельхоза РФ организован через региональные органы управления сбор статистической информации по использованию элементов точного сельского хозяйства.</p>
<p>При сборе статистической информации рассматривались элементы точного земледелия и животноводства (таблица 2.1).</p>
<p>Таблица 2.1 – Пример таблицы для изучения использования элементов точного сельского хозяйства в регионах России</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Наименование хозяйства</td>
<td>Район</td>
<td>Площадь, га</td>
<td>Используемые элементы</p>
<p>(с указанием названия и количества)</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4"><strong>Точное земледелие</strong></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>1. Определение границ полей с использованием спутниковых систем навигации</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>2. Локальный отбор проб почвы в системе координат</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>3. Параллельное вождение</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>4. Спутниковый мониторинг транспортных средств</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>5. Дифференцированное опрыскивание сорняков</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>6. Дифференцированное внесение удобрений</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>7. Дифференцированный посев</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>8. Дифференцированное орошение</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>9. Дифференцированная обработка почвы по почвенным картам</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>10. Мониторинг состояния посевов с использованием дистанционного зондирования (аэро- или спутниковая фотосъемки)</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>11. Составление цифровых карт урожайности</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>12. Составление карт электропроводности почв</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4"><strong>Точное животноводство</strong></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>1. Мониторинг качества продукции животноводства</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>2. Электронная база данных производственного процесса</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>3. Идентификация и мониторинг отдельных особей животных с использованием современных информационных технологий (рацион кормления, удой, привес, температура тела, активность), удовлетворение их индивидуальных потребностей</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>4. Мониторинг состояния здоровья стада</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>5. Роботизация процесса доения</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>6. Автоматическое регулирование микроклимата и контроль за вредными газами в животноводческих помещениях</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Рейтинги составлены на основе данных, полученных из 52 регионов,<br />
и достоверность полученных результатов обусловлена, прежде всего достоверностью представления информации региональными органами.</p>
<p>При анализе учитывалось следующее:</p>
<p>– количество хозяйств в регионе (по районам) с указанием их названия, площади и используемых элементов точного сельского хозяйства (земледелия и животноводства);</p>
<p>– количество сотрудников (по районам), прошедших повышение квалификации по направлению «Точное сельское хозяйство».</p>
<p>Если в хозяйстве используется хотя бы один элемент точного земледелия из двенадцати или один элемент точного животноводства из шести, то данное хозяйство учитывалось при подсчете.</p>
<p>На рисунке 2.1 представлена география хозяйств, использующих элементы точного земледелия (используется в 40 регионах, 1930 хозяйствах на площади 12,5 млн га).</p>
<p><img width="1724" height="966" class="wp-image-5281" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2617.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2617.png 1724w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2617-300x168.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2617-1024x574.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2617-768x430.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2617-1536x861.png 1536w" sizes="(max-width: 1724px) 100vw, 1724px" alt="word image 2617 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 2.1 – Количество хозяйств в регионах, использовавших элементы<br />
точного земледелия</p>
<p>По результатам анализа использования элементов точного земледелия (таблица 2.2) в лидерах находятся Краснодарский край (189 хозяйств), Воронежская область (182 хозяйства), Нижегородская область (144 хозяйства). Конкурируют по показателю общей площади, на которой используются элементы точного земледелия (таблица 2.3) Воронежская область (1129 тыс. га), Краснодарский край (963 тыс. га), Омская область (921 тыс. га).</p>
<p>Таблица 2.2 – Количество хозяйств, использующих элементы точного земледелия<br />
в регионах России</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th colspan="2" rowspan="2">Регион</th>
<th colspan="4">Количество хозяйств</th>
</tr>
<tr>
<th colspan="2">использующих элементы ТЗ, шт.</th>
<th colspan="2">всего с.-х., лесное, охота,<br />
рыболовство и рыбоводство<br />
(конец 2017 г.), шт. / %</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Краснодарский край</strong></td>
<td colspan="2"><strong>189</strong></td>
<td colspan="2">4827 / 4</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Воронежская область</strong></td>
<td colspan="2"><strong>182</strong></td>
<td colspan="2">1675 / 11</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Нижегородская область</strong></td>
<td colspan="2"><strong>144</strong></td>
<td colspan="2">2091 / 7</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Новосибирская область</td>
<td colspan="2">141</td>
<td colspan="2">2876 / 5</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Республика Башкортостан</td>
<td colspan="2">140</td>
<td colspan="2">2867 / 5</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Волгоградская область</td>
<td colspan="2">139</td>
<td colspan="2">1712 / 8</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Тамбовская область</td>
<td colspan="2">121</td>
<td colspan="2">1057 / 11</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Амурская область</td>
<td colspan="2">113</td>
<td colspan="2">654 / 17</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Архангельская область</td>
<td colspan="2">107</td>
<td colspan="2">1031 / 10</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Омская область</td>
<td colspan="2">85</td>
<td colspan="2">1050 / 8</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Белгородская область</td>
<td colspan="2">77</td>
<td colspan="2">1101 / 7</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Курганская область</td>
<td colspan="2">68</td>
<td colspan="2">925 / 7</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Удмуртская Республика</td>
<td colspan="2">64</td>
<td colspan="2">870 / 7</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Челябинская область</td>
<td colspan="2">54</td>
<td colspan="2">1679 / 3</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Свердловская область</td>
<td colspan="2">47</td>
<td colspan="2">2610 / 2</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Пензенская область</td>
<td colspan="2">39</td>
<td colspan="2">1121 / 4</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Вологодская область</td>
<td colspan="2">27</td>
<td colspan="2">1564 / 2</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Калининградская область</td>
<td colspan="2">21</td>
<td colspan="2">1393 / 2</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Пермский край</td>
<td colspan="2">21</td>
<td colspan="2">1861 / 1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Владимирская область</td>
<td colspan="2">19</td>
<td colspan="2">1468 / 1,3</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Республика Марий Эл</td>
<td colspan="2">18</td>
<td colspan="2">488 / 4</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Ивановская область</td>
<td colspan="2">16</td>
<td colspan="2">861 / 2</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Ленинградская область</td>
<td colspan="2">16</td>
<td colspan="2">4560 / 0,4</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Приморский край</td>
<td colspan="2">14</td>
<td colspan="2">2141 / 1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Калужская область</td>
<td colspan="2">13</td>
<td colspan="2">1464 / 1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Брянская область</td>
<td colspan="2">12</td>
<td colspan="2">848 / 1,4</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Смоленская область</td>
<td colspan="2">9</td>
<td colspan="2">1537 / 1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Чувашская Республика</td>
<td colspan="2">9</td>
<td colspan="2">749 / 1,2</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Костромская область</td>
<td colspan="2">5</td>
<td colspan="2">1104 / 0,5</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Карачаево-Черкесская<br />
Республика</td>
<td colspan="2">3</td>
<td colspan="2">619 / 0,5</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Республика Адыгея</td>
<td colspan="2">3</td>
<td colspan="2">422 / 0,7</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Московская область</td>
<td colspan="2">3</td>
<td colspan="2">6054 / 0,1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Астраханская область</td>
<td colspan="2">3</td>
<td colspan="2">1147 / 0,3</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Республика Бурятия</td>
<td colspan="2">3</td>
<td colspan="2">906 / 0,3</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Республика Крым</td>
<td colspan="2">2</td>
<td colspan="2">1538 / 0,1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Кабардино-Балкарская<br />
Республика</td>
<td colspan="2">1</td>
<td colspan="2">1279 / 0,1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Забайкальский край</td>
<td colspan="2">1</td>
<td colspan="2">855 / 0,1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Хабаровский край</td>
<td colspan="2">1</td>
<td colspan="2">1665 / 0,1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Еврейская автономная область</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Кемеровская область</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Магаданская область</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Мурманская область</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Ненецкий автономный округ</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Новгородская область</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Республика Ингушетия</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Республика Калмыкия</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Ростовская область</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Севастополь</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Чеченская Республика</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таблица 2.3 – Площадь, на которой используются элементы точного земледелия,<br />
по регионам России</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Регион</th>
<th>Общая площадь, га</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td><strong>Воронежская область</strong></td>
<td><strong>1129164</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Краснодарский край</strong></td>
<td><strong>962981</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Омская область</strong></td>
<td><strong>921293</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Тюменская область</td>
<td>909500</td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородская область</td>
<td>901513</td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская область</td>
<td>876972</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Башкортостан</td>
<td>859507</td>
</tr>
<tr>
<td>Амурская область</td>
<td>793169</td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>750318</td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградская область</td>
<td>746580</td>
</tr>
<tr>
<td>Курганская область</td>
<td>510803</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>478725</td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенская область</td>
<td>406141</td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>335541</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Коми</td>
<td>303297</td>
</tr>
<tr>
<td>Удмуртская Республика</td>
<td>233646</td>
</tr>
<tr>
<td>Свердловская область</td>
<td>214950</td>
</tr>
<tr>
<td>Калининградская область</td>
<td>187413</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>110364</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Марий Эл</td>
<td>107127</td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>94409</td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский край</td>
<td>88972</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская область</td>
<td>77693</td>
</tr>
<tr>
<td>Калужская область</td>
<td>72385</td>
</tr>
<tr>
<td>Владимирская область</td>
<td>70271</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Саха Якутия</td>
<td>45845</td>
</tr>
<tr>
<td>Брянская область</td>
<td>35013</td>
</tr>
<tr>
<td>Ивановская область</td>
<td>33905</td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>27958</td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарская Республика</td>
<td>27181</td>
</tr>
<tr>
<td>Забайкальский край</td>
<td>26057</td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская Республика</td>
<td>25364</td>
</tr>
<tr>
<td>Карачаево-Черкесская Республика</td>
<td>15170</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Адыгея</td>
<td>11641</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>7853</td>
</tr>
<tr>
<td>Московская область</td>
<td>7160</td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская область</td>
<td>5883</td>
</tr>
<tr>
<td>Астраханская область</td>
<td>6311</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Бурятия</td>
<td>3137</td>
</tr>
<tr>
<td>Хабаровский край</td>
<td>3000</td>
</tr>
<tr>
<td>Еврейская автономная область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Кемеровская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Магаданская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Мурманская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Ненецкий автономный округ</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Новгородская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Ингушетия</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Калмыкия</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Ростовская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Севастополь</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Чеченская Республика</td>
<td>–</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Большая часть экспертов считает, что точное земледелие в классическом понимании связано, прежде всего, с дифференцированным внесением удобрений. Среди лидеров по использованию этой технологии (таблица 2.4) можно выделить Краснодарский край (54 хозяйства), Воронежскую область<br />
(51 хозяйство), Белгородскую область (30 хозяйств).</p>
<p>Таблица 2.4 – Количество хозяйств в регионах, использующих дифференцированное<br />
внесение удобрений</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th rowspan="2">Регион</th>
<th colspan="2">Количество хозяйств, использующих</th>
</tr>
<tr>
<th>элементы<br />
точного земледелия</th>
<th>дифференцированное<br />
внесение удобрений</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td><strong>Краснодарский край</strong></td>
<td><strong>189</strong></td>
<td><strong>54</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Воронежская область</strong></td>
<td><strong>182</strong></td>
<td><strong>51</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Белгородская область</strong></td>
<td><strong>77</strong></td>
<td><strong>30</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградская область</td>
<td>139</td>
<td>19</td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская область</td>
<td>141</td>
<td>9</td>
</tr>
<tr>
<td>Курганская область</td>
<td>68</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенская область</td>
<td>39</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>121</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>27</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Калининградская область</td>
<td>21</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>14</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский край</td>
<td>21</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Владимирская область</td>
<td>19</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>16</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Карачаево-Черкесская Республика</td>
<td>3</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Удмуртская Республика</td>
<td>64</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>54</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Свердловская область</td>
<td>47</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Ивановская область</td>
<td>16</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Астраханская область</td>
<td>3</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Тюменская область</td>
<td>–</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>107</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Московская область</td>
<td>3</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Адыгея</td>
<td>3</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>144</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Башкортостан</td>
<td>140</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td>Омская область</td>
<td>85</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Марий Эл</td>
<td>18</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская область</td>
<td>9</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская Республика</td>
<td>9</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Бурятия</td>
<td>3</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>2</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td>Хабаровский край</td>
<td>1</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Коми</td>
<td>–</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Саха Якутия</td>
<td>–</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td>Еврейская автономная область</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Кемеровская область</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Магаданская область</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Мурманская область</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Ненецкий автономный округ</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Новгородская область</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Ингушетия</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Калмыкия</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Ростовская область</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Севастополь</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Чеченская Республика</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Лидеры рейтинга по элементам точного земледелия представлены<br />
на рисунке 2.2.</p>
<p>Рейтинг регионов по степени использования элементов точного земледелия с учетом общего количества хозяйств представлен в таблице 2.5 (общее количество хозяйств принято по данным Росстата на конец 2017 г.).</p>
<p><img width="434" height="563" class="wp-image-5282" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2618.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2618.png 434w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2618-231x300.png 231w" sizes="(max-width: 434px) 100vw, 434px" alt="word image 2618 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 2.2 – Топ-лидеров регионов по использованию элементов точного земледелия</p>
<p>Таблица 2.5 – Рейтинг регионов по соотношению хозяйств из общего количества,<br />
использующих элементы точного земледелия</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Регион</th>
<th>Процент</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td>Амурская область</td>
<td>17</td>
</tr>
<tr>
<td>Воронежская область</td>
<td>11</td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>11</td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградская область</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td>Омская область</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородская область</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>Курганская область</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>Удмуртская Республика</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская область</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Башкортостан</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Краснодарский край</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенская область</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Марий Эл</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Свердловская область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Калининградская область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Ивановская область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский край</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Брянская область</td>
<td>1,4</td>
</tr>
<tr>
<td>Владимирская область</td>
<td>1,3</td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская Республика</td>
<td>1,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Калужская область</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская область</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Адыгея</td>
<td>0,7</td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская область</td>
<td>0,5</td>
</tr>
<tr>
<td>Карачаево-Черкесская Республика</td>
<td>0,5</td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>0,4</td>
</tr>
<tr>
<td>Астраханская область</td>
<td>0,3</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Бурятия</td>
<td>0,3</td>
</tr>
<tr>
<td>Московская область</td>
<td>0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарская Республика</td>
<td>0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Забайкальский край</td>
<td>0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Хабаровский край</td>
<td>0,1</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В результате анализа определено, что около 1290 хозяйств (67 %) из проанализированных регионов используют определение границ полей, 1142 (59 %) – параллельное вождение, 973 (50 %) – спутниковый мониторинг транспортных средств (рисунок 2.3).</p>
<p><img width="640" height="436" class="wp-image-5283" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2619.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2619.png 640w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2619-300x204.png 300w" sizes="(max-width: 640px) 100vw, 640px" alt="word image 2619 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><img width="509" height="299" class="wp-image-5284" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2620.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2620.png 509w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2620-300x176.png 300w" sizes="(max-width: 509px) 100vw, 509px" alt="word image 2620 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 2.3 – Использование элементов точного земледелия<br />
хозяйствами России</p>
<p>Далее представлены данные регионов-лидеров (по количеству хозяйств) с градацией по площади хозяйств (тыс. га): до 1, 1–3, 3–5, 5–10, 10–30, более 30 – рисунок 2.4.</p>
<p>На основании анализа количества хозяйств (таблица 2.6) в Краснодарском крае 30 % точное земледелие внедрено в хозяйствах с площадью 1–<br />
3 тыс. га, Воронежской области 26 % – до 1 тыс. га, Нижегородской – 39 % – 1–3 тыс. га, Новосибирской 52 % – 3–10 тыс. га, Республике Башкортостан<br />
33 % – 1–3 тыс. га, Волгоградская область 32 % – 1–3 тыс. га.</p>
<p><img width="605" height="419" class="wp-image-5285" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2621.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2621.png 605w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2621-300x208.png 300w" sizes="(max-width: 605px) 100vw, 605px" alt="word image 2621 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 2.4 – Количество хозяйств по площадям, использующих элементы<br />
точного земледелия</p>
<p>Таблица 2.6 – Распределение хозяйств, использующих элементы точного земледелия<br />
с учетом количества хозяйств</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Регион</td>
<td colspan="6">Площадь хозяйства, тыс. га</td>
</tr>
<tr>
<td>до 1</td>
<td>1–3</td>
<td>3–5</td>
<td>5–10</td>
<td>10–30</td>
<td>более 30</td>
</tr>
<tr>
<td>Краснодарский край</td>
<td>5 %</td>
<td>30 %</td>
<td>22 %</td>
<td>27 %</td>
<td>15 %</td>
<td>1 %</td>
</tr>
<tr>
<td>Воронежская область</td>
<td>26 %</td>
<td>17 %</td>
<td>22 %</td>
<td>17 %</td>
<td>15 %</td>
<td>3 %</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>18 %</td>
<td>39 %</td>
<td>24 %</td>
<td>13 %</td>
<td>6 %</td>
<td>0 %</td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская область</td>
<td>6 %</td>
<td>24 %</td>
<td>26 %</td>
<td>26 %</td>
<td>17 %</td>
<td>1 %</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Башкортостан</td>
<td>17 %</td>
<td>33 %</td>
<td>20 %</td>
<td>17 %</td>
<td>10 %</td>
<td>3 %</td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградская область</td>
<td>17 %</td>
<td>32 %</td>
<td>19 %</td>
<td>17 %</td>
<td>12 %</td>
<td>3 %</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Рассмотрим степень внедрения цифровых технологий в животноводстве. На рисунке 2.5 представлена география хозяйств, использующих элементы точного животноводства (используется в 35 регионах, 789 хозяйствах с общим поголовьем 1,7 млн КРС).</p>
<p>По количеству хозяйств, использовавших элементы точного животноводства (таблица 2.7) доминируют Свердловская область (83 хозяйства), Республика Башкортостан (68 хозяйств), Удмуртская Республика (67 хозяйств); по поголовью КРС (таблица 2.8) – Омская область (218 тыс.), Свердловская область (151 тыс.), Воронежская область (119 тыс.). Общее поголовье принято по данным Росстата.</p>
<p><img width="1745" height="982" class="wp-image-5286" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2622.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2622.png 1745w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2622-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2622-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2622-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2622-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1745px) 100vw, 1745px" alt="word image 2622 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 2.5 – Количество хозяйств в регионах, использовавших элементы<br />
точного животноводства</p>
<p>Таблица 2.7 – Количество хозяйств, использующих элементы точного животноводства<br />
по регионам России</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Регион</th>
<th>Количество хозяйств</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td><strong>Свердловская область</strong></td>
<td><strong>83</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Республика Башкортостан</strong></td>
<td><strong>68</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Удмуртская Республика</strong></td>
<td><strong>67</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский край</td>
<td>50</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>42</td>
</tr>
<tr>
<td>Краснодарский край</td>
<td>41</td>
</tr>
<tr>
<td>Калужская область</td>
<td>41</td>
</tr>
<tr>
<td>Курганская область</td>
<td>37</td>
</tr>
<tr>
<td>Владимирская область</td>
<td>31</td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>31</td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская область</td>
<td>29</td>
</tr>
<tr>
<td>Воронежская область</td>
<td>26</td>
</tr>
<tr>
<td>Тюменская область</td>
<td>25</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>23</td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская Республика</td>
<td>23</td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>22</td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>21</td>
</tr>
<tr>
<td>Ростовская область</td>
<td>19</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Бурятия</td>
<td>15</td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородская область</td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Амурская область</td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Ивановская область</td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенская область</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская область</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Саха Якутия</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td>Калининградская область</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская область</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Коми</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Карачаево-Черкесская Республика</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Московская область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Хабаровский край</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Магаданская область</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Еврейская автономная область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарская Республика</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Кемеровская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Мурманская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Ненецкий автономный округ</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Новгородская область</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Ингушетия</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Калмыкия</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Севастополь</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Чеченская Республика</td>
<td>–</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таблица 2.8 – Поголовье КРС в хозяйствах, использующих элементы точного<br />
животноводства по регионам России</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th rowspan="2">Регион</th>
<th colspan="2">Поголовье</th>
</tr>
<tr>
<th>голов</th>
<th>процентов</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td><strong>Омская область</strong></td>
<td><strong>218054</strong></td>
<td>59</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Свердловская область</strong></td>
<td><strong>151250</strong></td>
<td>58</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Воронежская область</strong></td>
<td><strong>119363</strong></td>
<td>26</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Башкортостан</td>
<td>95389</td>
<td>9</td>
</tr>
<tr>
<td>Забайкальский край</td>
<td>93812</td>
<td>21</td>
</tr>
<tr>
<td>Удмуртская Республика</td>
<td>87784</td>
<td>25</td>
</tr>
<tr>
<td>Краснодарский край</td>
<td>78330</td>
<td>14</td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская область</td>
<td>77589</td>
<td>17</td>
</tr>
<tr>
<td>Тюменская область</td>
<td>75991</td>
<td>31</td>
</tr>
<tr>
<td>Калининградская область</td>
<td>74906</td>
<td>61</td>
</tr>
<tr>
<td>Владимирская область</td>
<td>69578</td>
<td>52</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>69312</td>
<td>42</td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>64978</td>
<td>36</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>46991</td>
<td>18</td>
</tr>
<tr>
<td>Калужская область</td>
<td>40882</td>
<td>26</td>
</tr>
<tr>
<td>Ростовская область</td>
<td>34853</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенская область</td>
<td>34530</td>
<td>21</td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>33640</td>
<td>76</td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородская область</td>
<td>33107</td>
<td>15</td>
</tr>
<tr>
<td>Курганская область</td>
<td>30833</td>
<td>26</td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>23492</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская Республика</td>
<td>23411</td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Бурятия</td>
<td>21298</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Амурская область</td>
<td>16944</td>
<td>21</td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский край</td>
<td>16066</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>Ивановская область</td>
<td>10845</td>
<td>17</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>9794</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Саха Якутия</td>
<td>4395</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская область</td>
<td>4211</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Приморский край</td>
<td>3743</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>2771</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Коми</td>
<td>2628</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td>Карачаево-Черкесская Республика</td>
<td>2536</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Московская область</td>
<td>1878</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Хабаровский край</td>
<td>1100</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Магаданская область</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Еврейская автономная область</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарская Республика</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Кемеровская область</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Мурманская область</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Ненецкий автономный округ</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Новгородская область</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Ингушетия</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Калмыкия</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Севастополь</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Чеченская Республика</td>
<td>–</td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Лидеры рейтинга по использованию цифровых технологий в животноводстве представлены ниже (рисунок 2.6).</p>
<p><img width="631" height="529" class="wp-image-5287" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2623.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2623.png 631w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2623-300x252.png 300w" sizes="(max-width: 631px) 100vw, 631px" alt="word image 2623 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 2.6 – Топ-лидеров регионов по использованию элементов<br />
точного животноводства</p>
<p>В результате анализа определено, что около 660 хозяйств (84 %) из проанализированных регионов используют мониторинг качества продукции животноводства, 589 (75 %) – электронную базу данных производственного процесса, 451 (57 %) – идентификацию и мониторинг отдельных особей животных (рисунок 2.7).</p>
<p><img width="649" height="381" class="wp-image-5288" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2624.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2624.png 649w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2624-300x176.png 300w" sizes="(max-width: 649px) 100vw, 649px" alt="word image 2624 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><img width="669" height="381" class="wp-image-5289" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2625.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2625.png 669w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2625-300x171.png 300w" sizes="(max-width: 669px) 100vw, 669px" alt="word image 2625 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 2.7 – Использование элементов точного животноводства<br />
хозяйствами России</p>
<p>На рисунке 2.8 представлены данные регионов-лидеров (по количеству хозяйств) с градацией поголовья в хозяйствах (тыс. голов): до 0,5; 0,5–1; 1–2; 2–3; 3–4; более 4.</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-5290" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2626.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2626.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2626-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2626-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2626-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2626-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 2626 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 2.8 – Количество хозяйств, использующих элементы<br />
животноводства земледелия</p>
<p>На основании анализа количества хозяйств (таблица 2.9) в Свердловской области 30 % точное животноводство внедрено в хозяйствах с поголовьем 1–2 тыс. голов, Республика Башкортостан 28 % – 1–2 тыс. голов, Удмуртская республика – 45 % – 0,5–2 тыс. голов.</p>
<p>Таблица 2.9 – Распределение хозяйств, использующих элементы точного земледелия<br />
с учетом количества хозяйств</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Регион</td>
<td colspan="6">Поголовье КРС, тыс. голов</td>
</tr>
<tr>
<td>до 0,5</td>
<td>0,5–1</td>
<td>1–2</td>
<td>2–3</td>
<td>3–4</td>
<td colspan="2">более 4</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Свердловская область</strong></td>
<td>8</td>
<td>18</td>
<td><strong>30</strong></td>
<td>11</td>
<td>10</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Республика Башкортостан</strong></td>
<td>7</td>
<td>20</td>
<td><strong>28</strong></td>
<td>10</td>
<td>1</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Удмуртская республика</strong></td>
<td>10</td>
<td><strong>23</strong></td>
<td><strong>22</strong></td>
<td>6</td>
<td>6</td>
<td>–</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Вопрос обучения и переподготовки кадров по цифровым технологиям<br />
в данное время является весьма актуальным.</p>
<p>По повышению квалификации работников в области точного животноводства лидируют Забайкальский край (35 хозяйств), Новосибирская область (29 хозяйств), Краснодарский край (20 хозяйств); Республика Башкортостан (500 человек), Забайкальский край (479 человек), Тамбовская область<br />
(209 человек) – таблицы 2.10 и 2.11.</p>
<p>Таблица 2.10 – Количество хозяйств, сотрудники которых прошли обучение в области точного сельского хозяйства</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Регион</td>
<td>Количество хозяйств</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Забайкальский край</strong></td>
<td><strong>35</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Новосибирская область</strong></td>
<td><strong>29</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Краснодарский край</strong></td>
<td><strong>20</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Воронежская область</td>
<td>18</td>
</tr>
<tr>
<td>Тамбовская область</td>
<td>17</td>
</tr>
<tr>
<td>Удмуртская Республика</td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородская область</td>
<td>9</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Саха Якутия</td>
<td>9</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td>Владимирская область</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Ивановская область</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Калининградская область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградская область</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский край</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарская Республика</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская область</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>1</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таблица 2.11 – Количество сотрудников, повысивших квалификацию в области точного сельского хозяйства</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th>Регион</th>
<th>Количество человек</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td><strong>Республика Башкортостан</strong></td>
<td><strong>500</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Забайкальский край</strong></td>
<td><strong>479</strong></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Тамбовская область</strong></td>
<td><strong>209</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Воронежская область</td>
<td>201</td>
</tr>
<tr>
<td>Краснодарский край</td>
<td>190</td>
</tr>
<tr>
<td>Калужская область</td>
<td>185</td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирская область</td>
<td>127</td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородская область</td>
<td>88</td>
</tr>
<tr>
<td>Вологодская область</td>
<td>71</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Крым</td>
<td>34</td>
</tr>
<tr>
<td>Республика Саха Якутия</td>
<td>29</td>
</tr>
<tr>
<td>Удмуртская Республика</td>
<td>22</td>
</tr>
<tr>
<td>Владимирская область</td>
<td>9</td>
</tr>
<tr>
<td>Калининградская область</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская область</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>Ивановская область</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Ленинградская область</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Архангельская область</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградская область</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский край</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарская Республика</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская область</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Челябинская область</td>
<td>1</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Некоторые примеры цифровизации регионов, озвученные представителями власти соответствующих регионов на различных площадках, представлены на рисунке 2.9.</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-5291" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2627.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2627.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2627-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2627-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2627-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2627-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 2627 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 2.9 – Примеры цифровизации</p>
<p><strong>Примеры региональных практик</strong></p>
<p><em>Республика Башкортостан </em></p>
<p>Покрытие навигационным оборудованием составляет около 40 %. Цифровые технологии в растениеводстве составляют примерно 70 %, животноводстве – 20 % (100 % идентификация КРС).</p>
<p>Согласно постановлению Правительства Республики от 15.02.2019 применяются субсидии на элементы точного земледелия (навигационное оборудование, ДЗЗ) – ставка 2,5 млн руб. (до 50 %).</p>
<p><em>Воронежская область</em></p>
<p>92 % контуров актуальной информации полей в области оцифрованы. Цифровые технологии используются на площади 1260 тыс. га (50 % пашни).</p>
<p><em>Республика Татарстан</em></p>
<p>Охват цифровыми технологиями: 96 % контуров полей оцифрованы; 6 % используют хотя бы одну технологию в растениеводстве; 13 % – в животноводстве; 23 % – в сельхозтехнике; 36 % – в управлении.</p>
<p><em>Орловская область</em></p>
<p>Оцифровка полей составляет около 100 %; 21,9 % с.-х. техники оснащено системами спутниковой навигации (200 хозяйств).</p>
<h2><strong>3 РЕЗУЛЬТАТЫ АНКЕТИРОВАНИЯ В ОБЛАСТИ ЦИФРОВОГО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА</strong></h2>
<p><img width="1003" height="567" class="wp-image-5292" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2628.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2628.png 1003w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2628-300x170.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2628-768x434.png 768w" sizes="(max-width: 1003px) 100vw, 1003px" alt="word image 2628 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"> Министерством сельского хозяйства Российской Федерации предложен ведомственный проект «Цифровое сельское хозяйство», в рамках которого предусмотрен комплекс мероприятий по внедрению цифровых технологий и платформенных решений в АПК.</p>
<p>Данный проект предполагает создание и развитие национальной платформы цифрового государствен­ного управления сельским хозяйством «Цифровое сельское хозяйство», модуля «Агрорешения», отраслевой электронной образовательной среды «Земля знаний».</p>
<p>Рассматриваемый в работе подход по внедрению национальной платформы цифрового государственного управления сельским хозяйством «Цифровое сельское хозяйство» ставит перед собой следующие цели:</p>
<p>1. Цифровая трансформация сельского хозяйства посредством внедрения цифровых технологий и платформенных решений для обеспечения технологического прорыва в АПК и достижения роста производительности на «цифровых» сельскохозяйственных предприятиях в 2 раза к 2024 г.</p>
<p>2. Повышение эффективности мер государственной поддержки в части стимулирования процессов цифровизации экономики агропромышленного комплекса за счет возможности выявления и анализа точечных проблем и условий, сдерживающих развитие цифровых технологий в агропромышленном комплексе исследуемого субъекта Российской Федерации, а также определения основных и наиболее перспективных цифровых технологий с позиции сельхозтоваропроизводителя.</p>
<p>3. Межведомственное взаимодействие для передачи данных о землях сельскохозяйственного назначения в цифровую платформу «Цифровое сельское хозяйство» для обеспечения последующего учета, мониторинга, аналитики.</p>
<p>4. Поэтапное регулирование реализации ведомственного проекта «Цифровое сельское хозяйство».</p>
<p>5. Создание системы подготовки специалистов сельскохозяйственных предприятий с целью формирования у них компетенций в области цифровой экономики по работе с цифровыми продуктами и цифровыми технологиями.</p>
<p>Центром прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ с целью изучения отношения к данному проекту экспертов разных регионов, связанных в той или иной мере с цифровыми технологиями в октябре 2019 г. проведено анкетирование по направлению «Цифровое сельское хозяйство». При составлении основных вопросов и технологических трендов учитывалась дорожная карта и задачи по реализации ведомственного проекта.</p>
<p>В анкетировании приняли участие 73 эксперта (66 % – наука и об­разование, 27 % – бизнес, 5 % – административные органы; рисунок 3.1)<br />
из Санкт-Петербурга, Москвы; Ленинградской, Московской, Ростовской, Пензенской, Рязанской, Орловской, Волгоградской, Свердловской, Самарской, Псковской, Тульской, Омской, Смоленской, Курской, Новосибирской, Калужской, Ульяновской, Саратовской, Воронежской областей; Красно­дарского, Приморского и Ставропольского края; республик Татарстан, Башкортостан, Кабардино-Балкарской, Дагестан, Северной Осетии, Крым, Чувашской, Удмуртской, Карелии.</p>
<p><img width="393" height="235" class="wp-image-5293" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2629.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2629.png 393w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2629-300x179.png 300w" sizes="(max-width: 393px) 100vw, 393px" alt="word image 2629 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Наука и образование</td>
<td>Бизнес</td>
<td>Администрация</td>
</tr>
<tr>
<td>Ректор – 1</p>
<p>Директор – 1</p>
<p>Проректор – 5</p>
<p>Зам. директора – 3</p>
<p>Зам. декана – 1</p>
<p>Помощник директора – 1</p>
<p>Декан – 4</p>
<p>Начальник УМУ – 1</p>
<p>Начальник НИЧ – 1</p>
<p>Заведующий кафедрой – 6</p>
<p>Заведующий сектором – 1</p>
<p>Заведующий лабораторией – 3</p>
<p>Профессор – 4</p>
<p>Доцент – 6</p>
<p>Начальник отдела – 1</p>
<p>Гл. специалист – 1</p>
<p>Гл. научный сотрудник – 1</p>
<p>Вед. научный сотрудник – 1</p>
<p>Старший научный<br />
сотрудник – 1</p>
<p>Инженер – 2</td>
<td>Генеральный директор – 5</p>
<p>Директор – 3</p>
<p>Зам. ген. директора – 1</p>
<p>Руководитель дивизиона – 1</p>
<p>Заместитель руководителя – 1</p>
<p>Руководитель проекта – 2</p>
<p>Руководитель группы – 1</p>
<p>Начальник отдела – 3</p>
<p>Зам. начальника отдела – 1</p>
<p>Главный специалист – 1</p>
<p>Менеджер – 1</p>
<p>Специалист – 1</p>
<p>&nbsp;</td>
<td>Советник Министра – 1</p>
<p>Начальник отдела – 2</p>
<p>Зам. начальника отдела – 1</p>
<p>&nbsp;</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Рисунок 3.1 – Состав экспертов</p>
<p>Анкетирование состояло из 20 основных вопросов, 6 вопросов по выполнению перспективных направлений в 2020–2030 гг. и проводилось в формате тестирования на сайте центра foresight.kubsau.ru (рисунок 3.2).</p>
<p>Заполнение анкет экспертами осуществлялось с 1 по 6 октября 2019 г.</p>
<p>Предложенные вопросы анкеты показаны в таблице 3.1.</p>
<p>Вопросы, связанные с реализацией перспективных направлений представлены в таблице 3.2.</p>
<p>Эксперты, которые участвуют в работе Центра, представлены в разделе <a href="http://foresight.kubsau.ru/experts/" target="_blank" rel="noopener">http://foresight.kubsau.ru/experts/</a> (рисунок 3.3).</p>
<p>Анализируя полученные результаты можно констатировать, что у большей части опрошенных экспертов есть понимание терминов цифровая экономика (92 %) и цифровое сельское хозяйство (97 %). При этом 82 % экспертов знакомы с ведомственным проектом, на основе которого подготовлены вопросы анкеты (рисунок 3.4).</p>
<p>Большинство респондентов (44 %) полагают, что не достаточно шесть предложенных проектов цифровых систем в программе: «Цифровые технологии в управлении АПК», «Цифровое землепользование», «Умное поле», «Умный сад», «Умная теплица», «Умная ферма».</p>
<p><img width="1442" height="814" class="wp-image-5294" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2630.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2630.png 1442w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2630-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2630-1024x578.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2630-768x434.png 768w" sizes="(max-width: 1442px) 100vw, 1442px" alt="word image 2630 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-5295" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2631.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2631.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2631-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2631-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2631-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2631-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 2631 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 3.2 – Анкета экспертного опроса</p>
<p>Таблица 3.1 – Вопросы анкеты</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th><strong>№</strong></th>
<th><strong>Вопрос</strong></th>
<th><strong>Ответ</strong></th>
<th><strong>Вариант ответа</strong></th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Есть ли у Вас понимание термина «Цифровая экономика»?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Есть ли у Вас понимание термина «Цифровое сельское хозяйство»?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Знакомы ли Вы с проектом программы «Цифровое сельское хозяйство»?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">По Вашему мнению, достаточно ли шесть проектов цифровых систем в программе: «Цифровые технологии в управлении АПК», «Цифровое землепользование», «Умное поле», «Умный сад», «Умная теплица», «Умная ферма»?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Согласны ли Вы, что программа «Цифровое сельское хозяйство» направлена исключительно на крупный бизнес?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Как Вы считаете, достигнет ли доля землепользователей, внедривших использование элементов цифровых технологий 50 %<br />
в 2024 г.?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Будет ли обеспечена к 2024 г. оцифровка<br />
и внесение в единую геоинформационную систему не менее 90 % площадей сельскохозяйственных садовых многолетних насаждений?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Будет ли выполнено обеспечение средствами сбора данных о состоянии почв, растений и окружающей среды не менее 70 % площадей промышленных садов к 2024 г.?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Увеличится ли объем производства овощей, выращенных в защищенном грунте за счет внедрения системы «Умная теплица»<br />
к 2024 г. на 45 %?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Прогнозируется ли снижение объема импорта овощей за счет внедрения системы «Умная теплица» более чем на 70 % к 2024 г.?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Считаете ли Вы, что автоматизированные системы откорма, дойки и мониторинга здоровья поголовья скота могут повысить надои на 30–40 %?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Приведет ли внедрение цифровых технологий и платформенных решений к повышению производительности на «цифровых» сельскохозяйственных предприятиях<br />
в 2 раза к 2024 г.?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Актуально ли создание экспериментальных цифровых фермерских хозяйств на базе учебно-опытных хозяйств Минсельхоза России и коммерческих предприятий?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Целесообразно ли создание системы подготовки специалистов сельскохозяйственных предприятий в области цифрового сельского хозяйства?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Есть ли необходимость создания центров компетенций «Цифровое сельское хозяйство» на базе аграрных вузов?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Целесообразно ли проведение переподготовки специалистов сельскохозяйственных предприятий на базе таких центров?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Считаете ли Вы цифровой «точкой входа» сельхозпредприятия использованием сервисов подачи отчетности в электронном виде, а также сервисов ОФД (подключенные кассы) и маркировки (Меркурий)?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Считаете ли Вы, что цифровизация имеет определяющее значение для развития сельского хозяйства в стране?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Будет ли способствовать ускорению цифровизации отрасли субсидирование приобретения цифровых технологий в соотношении 50 % (собственные) на 50 % (субсидии)?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="3"></td>
<td rowspan="3">Будет ли способствовать ускорению цифровизации отрасли льготное кредитование приобретения</p>
<p>цифровых технологий?</td>
<td></td>
<td><em>Да</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Нет</em></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td><em>Затрудняюсь ответить</em></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таблица 3.2 – Вопросы по реализации перспективных направлений</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th rowspan="2">Наименование перспективного направления</th>
<th colspan="4">Важность</p>
<p>для РФ</th>
<th colspan="5">Ожидаемые сроки выполнения</th>
</tr>
<tr>
<th>высокая</th>
<th>средняя</th>
<th>низкая</th>
<th>не актуально</th>
<th>2020</th>
<th>2021–2025</th>
<th>2026–2030</th>
<th>после 2030</th>
<th>не выполнится</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td>Доля землепользователей, внедривших использование элементов цифровых технологий до 50 %</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Оцифровка и внесение в единую геоинформационную систему не менее 90 % площадей сельскохозяйственных садовых многолетних насаждений</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Обеспечение средствами сбора данных о состоянии почв, растений и окружающей среды не менее 70 % площадей промышленных садов</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Увеличение объема производства овощей, выращенных в защищенном грунте за счет внедрения системы «Умная теплица» на 45 %</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Снижение объема импорта овощей за счет внедрения системы «Умная теплица» более чем на 70 %</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Внедрение цифровых технологий и платформенных решений повысит производительность на «цифровых» сельскохозяйственных предприятиях в 2 раза</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-5296" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2632.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2632.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2632-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2632-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2632-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2632-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 2632 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 3.3 – Эксперты центра</p>
<p>На некоторых форумах, проводившихся в 2019 г. прозвучали заключения, что программа направлена в целом на крупный бизнес, однако опрос экспертов говорит об обратном (70 % считают, что программа направлена не только на крупных игроков в сфере агробизнеса, но и на фермерские хозяйства).</p>
<p>Далее представлены вопросы, которые указаны в дорожной карте проекта. Мнения экспертов являются менее оптимистичными:</p>
<p>– 52 % считают, что доля землепользователей, внедривших использование элементов цифровых технологий, не достигнет 50 % в 2024 г.;</p>
<p>– 46 % уверены, что не будет обеспечена к 2024 г. оцифровка и внесение в единую геоинформационную систему не менее 90 % площадей сельскохозяйственных садовых многолетних насаждений;</p>
<p>– 44 % полагают, что не будет выполнено обеспечение средствами сбора данных о состоянии почв, растений и окружающей среды не менее 70 % площадей промышленных садов к 2024 г.;</p>
<p>– 41 % считают, что не снизится объем импорта овощей за счет внедрения системы «Умная теплица» более чем на 70 % к 2024 г.</p>
<p>При этом 53 % считают, что автоматизированные системы откорма, дойки и мониторинга здоровья поголовья скота могут повысить надои на 30–40 %.</p>
<p>Основной целью внедрения цифровых технологий и платформенных решений является повышение производительности на «цифровых» сельскохозяйственных предприятиях в 2 раза к 2024 г., однако 42 % экспертов считают, что этого не произойдет.</p>
<p>Следующие вопросы относятся к системе образования и повышению квалификации специалистов АПК.</p>
<p>Респонденты считают актуальным создание экспериментальных цифровых фермерских хозяйств на базе учебно-опытных хозяйств Минсельхоза России и коммерческих предприятий (95 %).</p>
<p>Целесообразно создание системы подготовки специалистов сельскохозяйственных предприятий в области цифрового сельского хозяйства полагают 99 % опрошенных.</p>
<p>При этом есть необходимость создания центров компетенций на базе аграрных вузов (98 %) и целесообразно проведение переподготовки специалистов сельскохозяйственных предприятий на базе таких центров (99 %).</p>
<p>Цифровой «точкой входа» сельхозпредприятия 45 % экспертов считают использование сервисов подачи отчетности в электронном виде, а также сервисов ОФД (подключенные кассы) и маркировки (Меркурий).</p>
<p>При этом будет способствовать ускорению цифровизации отрасли субсидирование приобретения цифровых технологий (83 %) и льготное кредитование приобретения цифровых технологий (88 %).</p>
<p><img width="627" height="437" class="wp-image-5297" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2633.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2633.png 627w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2633-300x209.png 300w" sizes="(max-width: 627px) 100vw, 627px" alt="word image 2633 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><img width="632" height="464" class="wp-image-5298" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2634.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2634.png 632w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2634-300x220.png 300w" sizes="(max-width: 632px) 100vw, 632px" alt="word image 2634 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p><img width="506" height="556" class="wp-image-5299" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2635.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2635.png 506w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2635-273x300.png 273w" sizes="(max-width: 506px) 100vw, 506px" alt="word image 2635 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 3.4 – Результаты экспертного опроса</p>
<p>Перспективы реализации технологических трендов по важности<br />
и ожидаемым срокам выполнения представлены в таблице 3.3.</p>
<p>Таблица 3.3 – Реализации перспективных направлений (в процентах)</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th rowspan="2">Наименование перспективного направления</th>
<th colspan="4">Важность</p>
<p>для РФ</th>
<th colspan="5">Ожидаемые сроки выполнения</th>
</tr>
<tr>
<th>высокая</th>
<th>средняя</th>
<th>низкая</th>
<th>не актуально</th>
<th>2020</th>
<th>2021–2025</th>
<th>2026–2030</th>
<th>после 2030</th>
<th>не выполнится</th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td>Доля землепользователей, внедривших использование элементов цифровых технологий до 50 %</td>
<td><strong>42</strong></td>
<td>40</td>
<td>18</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>26</td>
<td><strong>52</strong></td>
<td>21</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Оцифровка и внесение в единую геоинформационную систему не менее 90 % площадей сельскохозяйственных садовых многолетних насаждений</td>
<td><strong>55</strong></td>
<td>32</td>
<td>13</td>
<td>–</td>
<td>1</td>
<td><strong>39</strong></td>
<td>36</td>
<td>24</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Обеспечение средствами сбора данных о состоянии почв, растений и окружающей среды не менее 70 % площадей промышленных садов</td>
<td><strong>49</strong></td>
<td>41</td>
<td>9</td>
<td>1</td>
<td>–</td>
<td>32</td>
<td><strong>42</strong></td>
<td>26</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Увеличение объема производства овощей, выращенных в защищенном грунте за счет внедрения системы «Умная теплица» на 45 %</td>
<td><strong>49</strong></td>
<td>42</td>
<td>8</td>
<td>1</td>
<td>–</td>
<td>31</td>
<td><strong>52</strong></td>
<td>14</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Снижение объема импорта овощей за счет внедрения системы «Умная теплица» более чем на 70 %</td>
<td><strong>52</strong></td>
<td>33</td>
<td>14</td>
<td>1</td>
<td>–</td>
<td>26</td>
<td><strong>51</strong></td>
<td>20</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Внедрение цифровых технологий и платформенных решений повысит производительность на «цифровых» сельскохозяйственных предприятиях в 2 раза</td>
<td><strong>62</strong></td>
<td>29</td>
<td>9</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>17</td>
<td><strong>48</strong></td>
<td>32</td>
<td>3</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Данные направления эксперты относят к высокой важности для реализации в 2020–2030 гг. (по убыванию в процентном соотношении):</p>
<p>– внедрение цифровых технологий и платформенных решений повысит производительность на «цифровых» сельскохозяйственных предприятиях<br />
в 2 раза (считают важным 62 % экспертов);</p>
<p>– оцифровка и внесение в единую геоинформационную систему не менее<br />
90 % площадей сельскохозяйственных садовых многолетних насаждений (55 %);</p>
<p>– снижение объема импорта овощей за счет внедрения системы «Умная теплица» более чем на 70 % (52 %);</p>
<p>– обеспечение средствами сбора данных о состоянии почв, растений<br />
и окружающей среды не менее 70 % площадей промышленных садов (49 %);</p>
<p>– увеличение объема производства овощей, выращенных в защищенном грунте за счет внедрения системы «Умная теплица» на 45 % (49 %);</p>
<p>– доля землепользователей, внедривших использование элементов цифровых технологий до 50 % – важность высокая (42 %).</p>
<p>Обобщая результаты по предполагаемым срокам выполнения перспективных направлений в 2020–2030 гг. на основании экспертного опроса получим (по убыванию в процентном соотношении):</p>
<p>– доля землепользователей, внедривших использование элементов цифровых технологий до 50 % – 2026–2030 гг. (считают 52 % экспертов);</p>
<p>– увеличение объема производства овощей, выращенных в защищенном грунте за счет внедрения системы «Умная теплица» на 45 % – 2026–2030 гг. (52 %);</p>
<p>– снижение объема импорта овощей за счет внедрения системы «Умная теплица» более чем на 70 % – 2026–2030 гг. (51 %);</p>
<p>– внедрение цифровых технологий и платформенных решений повысит производительность на «цифровых» сельскохозяйственных предприятиях<br />
в 2 раза – 2026–2030 гг. (48 %);</p>
<p>– обеспечение средствами сбора данных о состоянии почв, растений<br />
и окружающей среды не менее 70 % площадей промышленных садов –<br />
2026–2030 гг. (42 %);</p>
<p>– оцифровка и внесение в единую геоинформационную систему не менее 90 % площадей сельскохозяйственных садовых многолетних насаждений – 2021–2025 гг. (39 %).</p>
<p>При этом, по мнению экспертов, реализация большей части направлений может произойти в 2026–2030 гг.</p>
<p><strong>Выводы:</strong></p>
<p>На основании проведенного опроса экспертов, связанных с вопросами цифровизации в сельском хозяйстве, можно констатировать, что у большей части опрошенных есть понимание вопросов, связанных с цифровой экономикой и цифровым сельским хозяйством, они знакомы с ведомственным проектом Минсельхоза России «Цифровое сельское хозяйство». При этом шесть предложенных проектов цифровых систем в программе: «Цифровые технологии в управлении АПК», «Цифровое землепользование», «Умное поле», «Умный сад», «Умная теплица», «Умная ферма» не охватывают все основные направления для цифровизации.</p>
<p>Реализация большей части направлений, представленных в проекте по мнению респондентов, может произойти в 2026–2030 гг. или после 2030 г.,<br />
а не в 2024 г., как указано в программе.</p>
<p>Ускорению цифровизации отрасли будет способствовать субсидирование и льготное кредитование приобретения элементов цифровых технологий.</p>
<p>Актуальным направлением является создание экспериментальных цифровых фермерских хозяйств на базе учебно-опытных хозяйств Минсельхоза России и коммерческих предприятий, создание системы подготовки специалистов сельскохозяйственных предприятий на базе таких центров.</p>
<p>Представленные в проекте направления в целом эксперты относят к высокой важности для реализации в России.</p>
<h2><strong>4 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В АГРАРНЫХ ВУЗАХ ТЕХНОЛОГИЙ ТОЧНОГО ЗЕМЛЕДЕЛИЯ</strong></h2>
<p>В настоящее время квалификация работающих в АПК специалистов недостаточна для внедрения и использования элементов точного сельского хозяйства, считают 88 % экспертов из проведенного нами опроса. При этом внедрение новых технологий ведет к сокращению рабочих мест в АПК (62 % согласились с тезисом, 20 % – «нет»). В то же время использование элементов точного сельского хозяйства может замедлить или остановить тенденцию оттока людей из сельских районов, так как создает новые деловые возможности и рабочие места для специалистов.</p>
<p>По результатам анкетирования, проведенного нами, 76 % опрошенных считают, что в настоящее время отсутствуют образовательные технологии подготовки специалистов для цифрового сельского хозяйства. При этом для обучения специалистов отсутствуют высоквалифицированные преподаватели<br />
в аграрных вузах (полагают 74 %).</p>
<p>95 % респондентов считают актуальным создание экспериментальных цифровых фермерских хозяйств на базе учебно-опытных хозяйств Минсельхоза России и коммерческих предприятий.</p>
<p>Целесообразно создание системы подготовки специалистов сельско­хозяйственных предприятий в области цифрового сельского хозяйства. При этом есть необходимость создания центров компетенций на базе аграрных вузов (98 %) и целесообразно проведение переподготовки специалистов сельскохозяйственных предприятий на базе таких центров думают 99 % опрошенных).</p>
<p>Учитывая тенденции времени, актуальным вопросом является улучшение системы подготовки кадров для сельского хозяйства. В образовательных программах важно предусмотреть изучение дисциплин, направленных на изучение технологий точного земледелия.</p>
<p>Центром прогнозирования и мониторинга с 14 ноября по 10 декабря 2019 г. был организован сбор информации по использованию в учебном процессе высших учебных заведений, подведомственных Минсельхозу России, дисциплин связанных с изучением технологий точного земледелия. Для этого были разосланы анкеты в 54 вуза, в результате которого проанализировано 46 вузов.</p>
<p>На основании полученных данных составлены рейтинги по следующим показателям: количество факультетов, количество специальностей и направлений подготовки, объем дисциплин в часах (таблица 4.1).</p>
<p>Таблица 4.1 – Пример таблицы для сбора информации об использовании в учебном<br />
процессе рассматриваемых дисциплины</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Факультеты</td>
<td>Наименование специальности, направления подготовки</td>
<td>Уровень образования (бакалавриат, магистратура, специалитет)</td>
<td>Объем дисциплины, часов</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Сводная информация об использовании в учебном процессе дисциплин, направленных на изучение технологий точного земледелия, представлена<br />
в таблице 4.2.</p>
<p>Среди аграрных вузов наибольшее количество факультетов (3), на которых обучают дисциплинам, связанным с применением элементов точного земледелия, можно выделить Волгоградский ГАУ, Вятскую ГСХА, Кубанский ГАУ, Новосибирский ГАУ, Ярославскую ГСХА (таблица 4.3, рисунок 4.1).</p>
<p>Среди аграрных вузов наибольшее количество специальностей (направлений подготовки), на которых есть дисциплины, связанные с технологиями точного земледелия, можно отметить Новосибирский ГАУ (9), Башкирский ГАУ (6), Кубанский ГАУ (6), Брянский ГАУ (5), Вятскую ГСХА (5), Донской ГАУ (5), Красноярский ГАУ (5), Самарский ГАУ (5), Северного Зауралья ГАУ (5), Уральский ГАУ (5), Ярославскую ГСХА (5) – таблица 4.4, рисунок 4.2.</p>
<p>Таблица 4.2 – Информация об использовании в учебном процессе технологий точного<br />
земледелия аграрных вузов России</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th colspan="2"><strong>ВУЗ</strong></th>
<th colspan="2"><strong>Факультет</strong></th>
<th colspan="2"><strong>Наименование<br />
специальности,<br />
направления<br />
подготовки</strong></th>
<th colspan="2"><strong>Уровень<br />
образования</strong></th>
<th><strong>Объем часов /<br />
дисциплина</strong></th>
<th><strong>Наименование<br />
оборудования</strong></th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="4">1. Алтайский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="3">Агрономический</td>
<td colspan="2">Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
<td rowspan="3">
<h2>Система параллельного вождения «Агронавигатор Плюс» с симулятором</h2>
<h2>Система параллельного вождения «Агронавигатор Плюс» с симулятором</h2>
</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Садоводство</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Инженерный</td>
<td colspan="2">Агроинженерия, профиль «Технические системы в агробизнесе»</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72</td>
<td>Аматрон – 3 шт.</p>
<p>Подруливающее устройство – 1 шт.</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"><strong>4</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>396</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">2. Алтайский<br />
ИПКРС АПК</td>
<td colspan="2">Растениеводства, переработки<br />
и механизации</td>
<td colspan="2">Повышение почвенного плодородия сельскохозяйственных угодий</td>
<td colspan="2">Программа повышения квалификации для специалистов агрономических и инженерных служб</td>
<td>18</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>18</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="6">3. Башкирский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="4">Агротехнологий<br />
и лесного<br />
хозяйства</td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>324</td>
<td rowspan="4">Персональные компьютеры DEPO</p>
<p>ПО ГИС «ИнГео», лицензия №0215-06/О и №1208-02/О от 26.02.2015</p>
<p>ПО ГИС MapInfo Professional, лицензия №73/2016-У от 11.08.2016</p>
<p>Лазерный принтер для цветной широкоформатной печати HP</p>
<p>Автоматический пробоотборник почвы WINTEХ 1000S</p>
<p>Модуль разбрасывателя минеральных удобрений с функцией дифференцированного внесения AMAZONE</p>
<p>Переносная лаборатория для комплексной листовой диагностики растений FITOSCAN</p>
<p>Переносная лаборатория для агрохимического экспресс – анализа почвы AST-15</p>
<p>GPS навигаторы GARMIN</p>
<p>Квадрокоптеры с спектральной видеокамерой DJI FANTOM 4</p>
<p>Планшет агронома HUAWEI</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.03 Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>324</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>288</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.03 Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>288</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2">Механический</td>
<td colspan="2">35.03.06</p>
<p>Агроинженерия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>144 / Сельскохозяйственные машины и технические средства точного земледелия</td>
<td rowspan="2">Распределитель (разбрасыватель) минеральных удобрений AMAZONE ZA-M1500 с системой дифференцированного внесения удобрений и бортовым компьютером AMADOS</p>
<p>Лабораторный стенд для исследования и проверки наконечников опрыскивателей</p>
<p>Лабораторный стенд дифференцированного внесения ЖКУ и ядохимикатов с дистанционным управлением и контролем</p>
<p>Система параллельного вождения &#8212; навигатор Trimble EZ-Guide 250</p>
<p>Пробоотборник почвы Wintex 1000S</p>
<p>Система параллельного вождения КАМПУС</p>
<p>Детектор сорняков</p>
<p>Система контроля высева зерновых сеялок и посевных комплексов</p>
<p>Система управления и контроля микроклиматом для возделывания растений в закрытом грунте</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.06</p>
<p>Агроинженерия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>180 / Современные цифровые технологии и технические средства высокоточного земледелия</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"><strong>6</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>1548</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="4">4. Белгородский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="2">Агрономический</td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
<td rowspan="4">Трактор John Deere 6155M, оборудованный бортовым компьютером и системой автовождения</p>
<p>Разбрасыватель минеральных удобрений Matermacc MMX (с возможностью дифференцированного внесения)</p>
<p>Опрыскиватель навесной Bagram (с возможностью дифференцированного внесения)</p>
<p>Беспилотный комплекс «Геоскан» (беспилотные летательные аппараты Геоскан-201 и Геоскан-401)</p>
<p>ГНСС станция и ровер South GNSS</p>
<p>N-тестер Minolta</p>
<p>Программная оболочка ЦПС «АгроУправление»</p>
<p>Цифровая метеостанция «Сокол-М»</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.03 Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2">Технологический</td>
<td colspan="2">36.03.02 Зоотехния</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.07 Технология производства и переработки сельскохозяйственной продукции</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"><strong>4</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>432</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="5">5. Брянский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="4">Институт<br />
экономики<br />
и агробизнеса</td>
<td colspan="2">35.03.03 Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72</td>
<td rowspan="4">Монитор блок управления Skipper</p>
<p>Кронштейн для Skipper 467040.650</p>
<p>Датчик уровня наклона для навигатора (ATD)</p>
<p>Приемник GPS высокого класса точности с магнитным кронштейном</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.07 Технология производства и переработки сельскохозяйственной продукции</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>144</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Инженерно-технологический институт</td>
<td colspan="2">35.04.06 Агроинженерия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72</td>
<td>Агрокоптер роторного типа, AgroFly</p>
<p>Одночастотный спутниковый приемник Trimble R3 – 2 шт.</p>
<p>Датчик азота Green Seeker (N-tester)</p>
<p>Экспресс-лаборатория pH-метр 150 МИ</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"><strong>5</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>468</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">6. Великолукская ГСХА</td>
<td colspan="2">Инженерный</td>
<td colspan="2">Агроинженерия, профиль «Технические системы в агробизнесе»</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
<td>Комплект мультимедийного оборудования с мультимедийными презентациями и видиоматериалами по техническому обеспечению технологии точного земледелия</p>
<p>Учебно-информационные стенды:</p>
<p>&#8212; EASY технологии компании CLAAS</p>
<p>&#8212; Информационные и навигационные технологии в сельском хозяйстве</p>
<p>Наглядный материал по устройству следующего оборудования:</p>
<p>&#8212; Система параллельного вождения Trimble AgGPS EZ-Guide 250</p>
<p>&#8212; Универсальный терминал управления сельскохозяйственной техникой AMATRON 3 Amazone</p>
<p>&#8212; Распределитель минеральных удобрений Amazone ZA-M 1500</p>
<p>&#8212; Система картирования и мониторинга урожайности для зерноуборочных и кормоуборочных комбайнов CLAAS на основе бортовой информационной системы CEBIS</p>
<p>Обучаюющая компьютерная программа по работе с бортовой информационной системой CEBIS компании CLAAS</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>108</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="3">7. Волгоградский ГАУ</td>
<td colspan="2">Инженерно-технологический</td>
<td colspan="2">35.04.06 Агроинженерия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>108</td>
<td rowspan="2">Почвенный пробоотборник – AmityTechnology 2450</p>
<p>Полевой компьютер – Trimble Nomad 900GXE</p>
<p>Полевой компьютер – TDS</p>
<p>Электронный влагомер TR 46908</p>
<p>Пенетрометр – Field Scout SC 900</p>
<p>Трость агронома</p>
<p>Твердомер «Ревякина»</p>
<p>pH-метр – Kelway</p>
<p>pH-метр, ЕС-метр – Combo HI 98130</p>
<p>Лаборатория функциональной диагностики растений (ФЭД)</p>
<p>Конструктор квадрокоптера – «Клевер»</p>
<p>Беспилотный летательный аппарат – «GEOSCAN-201»</p>
<p>Платформа для построения и использования геоинформационных систем – «ArcGIS»</p>
<p>Специализированное программное обеспечение для решения задач геодезии «ГИС Спутник АГРО»</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Агро­технологический</td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия, Защита растений</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>54</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Экологомелиоративный</td>
<td colspan="2">21.03.02</p>
<p>Землеустройство и кадастры</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>270</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="5">8. Вятская ГСХА</td>
<td colspan="2" rowspan="2">Инженерный</td>
<td colspan="2">35.03.06 Агроинженерия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>8 часов (в рамках дисциплины «Основы теории и тенденции развития сельскохозяйственных машин»)</td>
<td rowspan="5">Учебная модель Pilotage UFO 6 axis giro с видеокамерой, дрон Holybro Shuriken 250 RC Racing Drone с видеокамерой. Привлечение по договору ГПД профессиональных дронов Семакова Владимира Александровича: Квадрокоптер DJI Phantom 2, Октoкоптеp Таrоt T1020.</p>
<p>Программное обеспечение &#8212; Профессиональная ГИС «Карта 2011» (версия 11 включает GIS ToolKit).</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.06 Агроинженерия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>8 часов (в рамках дисциплины «Тенденции развития инженерного обеспечения в сельском хозяйстве»)</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Агрономический</td>
<td colspan="2">35.03.04</p>
<p>Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>20 часов (в рамках дисциплины «Географические информационные системы» (ГИС))</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2">Экономический</td>
<td colspan="2">38.03.01 Экономика</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>4 часа (в рамках дисциплины «Экономические основы производства и переработки продукции сельского хозяйства»)</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">38.03.02 Менеджмент</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>4 часа (в рамках дисциплины «Экономические основы производства и переработки продукции растениеводства»)</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"><strong>5</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>44</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">9. Горский ГАУ</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
<td>–</td>
<td>Программа QGIS (аналог Mapinfo) – создание географических информационных систем (позволяют создавать картограммы обеспеченности полей элементами питания, рельеф местности по результатам съемки)</p>
<p>Бур для определения влажности почвы (для осуществления контроля уровня влажности в почве, позволяет избежать чрезмерной увлажненности грунта и его пересыхания)</p>
<p>Видеофильмы о средствах точного земледелия</p>
<p>Самоадаптируемый культиватор КПП-2,8 конструкции Горского ГАУ</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="10">10. ГУЗ</td>
<td colspan="2" rowspan="10">Городской кадастр</td>
<td colspan="2" rowspan="3">21.03.02 Землеустройство и кадастры</td>
<td colspan="2" rowspan="3">бакалавриат</td>
<td>144 / Географические информационные системы</td>
<td rowspan="10">Тахеометр Leica TS09plus R500<br />
(5”) – 1Тахеометр Leica TS06plus R500<br />
(5”) – 1Тахеометр Leica TS02plus R500<br />
(5”) – 1Тахеометр Leica Builder 509 – 7Цифровой нивелир Leica DNA 10 – 1Цифровой нивелир Leica Sprinter<br />
50 – 1</p>
<p>Лазерный дальномер Bosch<br />
GLM150 – 25</p>
<p>Лазерный дальномер Leica Disto<br />
D5 – 5</p>
<p>Оптический нивелир Leica Jogger<br />
28 – 10</p>
<p>Оптический нивелир Leica Jogger<br />
24 – 20</p>
<p>GNSS приемник Leica GS10</p>
<p>GNSS приемник, 120 каналов, GPS L1+L2,1 Гц скорость позиционирования, недоступен RTK, легко модернизируется с помощью опций (в т.ч. ГЛОНАСС, Gallileo, GPS L5, неограниченный RTK, запись сырых данных), Страна производитель – Швейцария – 2</p>
<p>GNSS приемник Leica GS08Plus (смартантенна) – 2</p>
<p>Цифровой теодолит DGT10 – 30</p>
<p>БПЛА DJI PHANTOM 4 PRO</p>
<p>БПЛА DJI Mavic PRO</td>
</tr>
<tr>
<td>72 / Геоинформационные технологии при ведении кадастра</td>
</tr>
<tr>
<td>108 / Фотограмметрия и дистанционное зондирование</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2">21.05.01 Прикладная геодезия</td>
<td colspan="2" rowspan="2">специалитет</td>
<td>216 / Геоинформационные системы и технологии</td>
</tr>
<tr>
<td>72 / Дистанционное зондирование и фотограмметрия</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="5">21.03.03 Геодезия и дистанционное зондирование</td>
<td colspan="2" rowspan="5">бакалавриат</td>
<td>144 / Геоинформационные системы и технологии</td>
</tr>
<tr>
<td>504 / Дистанционное зондирование и фотограмметрия</td>
</tr>
<tr>
<td>144 / Навигационные методы в геодезии</td>
</tr>
<tr>
<td>108 / Информационные технологии в дистанционном зондировании</td>
</tr>
<tr>
<td>144 / Спутниковые навигационные системы в геодезии и дистанционном зондировании</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>1656</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">11. Дагестанский ГАУ</td>
<td colspan="2">Агротехнологии<br />
и землеустройства</td>
<td colspan="2">Агрономия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>36</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>36</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">12. Дальневосточный ГАУ</td>
<td colspan="2">Агрономии<br />
и экологии</td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия</td>
<td colspan="2"></td>
<td>6 / Технология производства продукции растениеводства</p>
<p>6 / Растениеводство</p>
<p>6 / Инновационные технологии в АПК</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>18</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">13. Донской ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="16">Агрономический</td>
<td colspan="2" rowspan="3">35.04.05 Садоводство, направленность «Плодоводство, виноградарство и декоративное садоводство»</td>
<td colspan="2" rowspan="3">магистратура</p>
<p>бакалавриат</td>
<td>144 / Инновационные технологии в садоводстве</td>
<td rowspan="16">Программное обеспечение Q Gis 2.18</p>
<p>Прибор геодезический (ГНСС-приемник) S-Max GEO</p>
<p>Лаборатория функциональной диагностики растений (ФЭД)</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="15"></td>
<td>144 / Цифровые технологии в растениеводстве</td>
</tr>
<tr>
<td>144 / Точное земледелие</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="3">35.04.04 Агрономия, направленность «Агрономия»</td>
<td colspan="2" rowspan="3">магистратура</p>
<p>бакалавриат</td>
<td>108 / Инновационные технологии в агрономии</td>
</tr>
<tr>
<td>144 / Цифровые технологии в растениеводстве</td>
</tr>
<tr>
<td>144 / Точное земледелие</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="4">35.04.03 Агрохимия и агропочвоведение, направленность «Агрохимия и агропочвоведение»</td>
<td colspan="2" rowspan="4">бакалавриат</td>
<td>108 / Инновационные технологии в агрономии</td>
</tr>
<tr>
<td>144 / Цифровые технологии в растениеводстве</td>
</tr>
<tr>
<td>144 / Точное земледелие</td>
</tr>
<tr>
<td>108 / ГИС-технологии в агрохимии</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="3">05.04.06 Экология и природопользование, направленность «Природопользование и охрана окружающей среды»</td>
<td colspan="2" rowspan="3">магистратура</td>
<td>144 / Дистанционные и ГИС-технологии в природопользовании</td>
</tr>
<tr>
<td>144 / Цифровые технологии в растениеводстве</td>
</tr>
<tr>
<td>144 / Точное земледелие</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="3">05.03.06 Экология и природопользование, направленность «Природопользование»</td>
<td colspan="2" rowspan="3">бакалавриат</td>
<td>72 / ГИС в экологии и природопользовании</td>
</tr>
<tr>
<td>144 / Цифровые технологии в растениеводстве</td>
</tr>
<tr>
<td>144 / Точное земледелие</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>5</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>2124</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">14. Ивановская ГСХА</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">15. Ижевская ГСХА</td>
<td colspan="2">Агрономический факультет</td>
<td colspan="2">35.04.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">магистрату­-ра</td>
<td>72</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>72</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="4">16. Иркутский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="4">Агрономический</td>
<td colspan="2">35.04.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>144</td>
<td rowspan="4">Приемник GNSS Sokkia GRX2; Контроллер полевой Archer 2</p>
<p>Оборудование сельхозтоваропроизводителей в рамках учебных и производственных практик: GPS навигация, приборы и оборудование для параллельного вождения с-х техники.</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.03 Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">21.04.02 Землеутройство и кадастры</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>72</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>4</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>432</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">17. Кабардино-Балкарский ГАУ</td>
<td colspan="2">Агрономический</td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72</td>
<td>Программное обеспечения Form Works Pro или Exact Farming</p>
<p>Стенд для управления сервоприводами распределителя удобрений ZA-M с терминалом Amatron 3</p>
<p>Стенд «Система контроля высева семян СКИФ»</p>
<p>Геодезический GPS- приемник ZENIT 10-20</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>72</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2">18. Костромская ГСХА</td>
<td colspan="2" rowspan="2">Агробизнеса</td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>144</td>
<td rowspan="2">Учебная лаборатория опытного поля: Квадрокоптер DJI Phantom 4 Pro+ V.2.0, навигационная система Агроном-1, Система параллельного вождения Trimble EZ-Guide 250</p>
<p>Аудитория 267, оснащенная специализированной мебелью и техническими средствами обучения. Компьютеры: Intel(R) Pentium(R) CPU G3260 @ 3.30GHz с выходом в Интернет, проектор с программным обеспечением Microsoft Windows SL 8.1 Russian Academic Open License 64407027, Microsoft Office 2010 Russian Academic Open License 47105980, Kaspersky Endpoint Security Standart Edition Educational</p>
<p>Электронная библиотека Костромской ГСХА <a href="http://lib.ksaa.edu.ru/marcweb" target="_blank" rel="noopener">http://lib.ksaa.edu.ru/marcweb</a></p>
<p>Информационная система «Единое окно доступа к образовательным ресурсам» <a href="http://window.edu.ru/" target="_blank" rel="noopener">http://window.edu.ru</a></p>
<p>Национальная электронная библиотека <a href="http://нэб.рф" target="_blank">http://нэб.рф </a></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.04</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>180</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>324</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="5">19. Красноярский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="4">Институт<br />
агроэкологических технологий</td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
<td rowspan="5">Агронавигатор – 3 шт.</p>
<p>Навигационный комплекс АГРОНАВИГАТОР-АСУР-Секция-1 шт.</p>
<p>Комплект оборудования системы Агронавигатор-тренажер – 3 шт.</p>
<p>Система «Агронавигатор – Тренажер» является дополнительной опцией к НК «Агронавигатор» и состоит из:</p>
<p>&#8212; НК «Агронавигатор плюс» – комплект;</p>
<p>&#8212; игровой руль и педали &#8212; комплект;</p>
<p>&#8212; преобразователь питания 220в/12в – 1 шт.</p>
<p>Учебный стенд «Автоматизированный штанговый опрыскиватель с автоматическим выдерживанием номы внесения при изменениях скорости и отключением секций/форсунок штанги при заходе на ранее обработанную поверхность</p>
<p>Стенд включает:</p>
<p>&#8212; Тренажер-симулятор системы параллельного вождения «Агронавигатор плюс», состоящий из монитора системы «Агронавигатор», игрового руля и педалей</p>
<p>&#8212; Электрический распределительный узел опрыскивающей системы штангового опрыскивателя, состоящий из:</p>
<p>&#8212; Главный кран, ARAG;</p>
<p>&#8212; пропорциональный кран,</p>
<p>ARAG; &#8212; напорный фильтр, ARAG;</p>
<p>&#8212; расходомер, ARAG; &#8212; секционные краны, 3 шт, ARAG;</p>
<p>&#8212; Настенный банер с гидравлической схемой автоматизированного штангового опрыскивателя с светодиодной подсветкой функционирующих гидравлических линий на различных этапах работы опрыскивателя.</p>
<p>&#8212; Портативный стол демонстрации работы распылителей, состоящий из: пластмассового демонстрационного стола с прозрачной стенкой для размещения воды;</p>
<p>&#8212; прозрачная штанга диаметром 1” с тремя револьверными держателями на 5 форсунок с электрическими отсечными кранами Prostop-E Hypro;</p>
<p>&#8212; электрический насос SHURﬂo переменного тока 220 В с фильтром;</p>
<p>&#8212; набор форсунок Hypro для демонстрации распыления в различных технологиях опрыскивания</p>
<p>Электрические силовые цилиндры (актуаторы) привода дозаторов La-12, 2 комплекта со жгутами подключения.</p>
<p>Ручной навигатор eTrex 20x</p>
<p>В учебно-опытном хозяйстве «Миндерлинское» заложен полевой опыт площадью 10 га по Точному земледелию.</p>
<p>Для проведения учебной практики со студентами используется опрыскиватель штанговый прицепной марки Заря-ОПГ-2000, оборудованный Навигационным комплексом российского производства АГРОНАВИГАТОР-АСУР-Секция</p>
<p>В 2019 году планируется открытие корпоративной аудитории по точному земледелию</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.03 Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.04 Агрономия направленность Технологии в растениеводстве</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.04 Агрономия направленность Защита растений</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Институт<br />
управления<br />
инженерными<br />
системами<br />
и энергетики</td>
<td colspan="2">35.03.06 Агроинженерия</td>
<td colspan="2">бакалавриат (2020 г.)</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"><strong>5</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>540</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="6">20. Кубанский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="3">Механизации</td>
<td colspan="2">35.03.06 Агроинженерия, Технические системы в агробизнесе</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72 / Точное земледелие</p>
<p>72 / Интеллектуальная сельскохозяйственная техника</td>
<td rowspan="6">Центр точного земледелия</p>
<p>Центр прогнозирования и мониторинга в области точного сельского хозяйства, автоматизации и роботизации</p>
<p>Ситуационный центр в области точного земледелия</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">23.05.01 Наземные транспортно-технологические средства, Технические средства АПК</td>
<td colspan="2">специалитет</td>
<td>72 / Точное земледелие</p>
<p>216 / Интеллектуальные технические средства АПК</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.06 Агроинженерия, Технологии и средства механизации сельского хозяйства</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>72 / Точное земледелие</p>
<p>72 / Интеллектуальные технические средства АПК (факультатив)</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Агрономии<br />
и экологии</td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия, Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108 / Точное земледелие</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2">Агрохимии<br />
и защиты растений</td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия, Защита растений</td>
<td colspan="2" rowspan="2">бакалавриат</td>
<td>108 / Точное земледелие</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.03 Агрохимия и агропочвоведение, Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td>72 / Точное земледелие</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"><strong>6</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>864</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2">21. Кузбасская ГСХА</td>
<td colspan="2" rowspan="2">Инженерный<br />
факультет</td>
<td colspan="2">35.03.06 Агроинженерия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
<td rowspan="2">Принтер 3D Prizm PRO; учебный компьютеризированный тренажер самоходного машины (комбайна) модель FORWARD VEKTOR F3D2; функциональная подсистема «Электронный атлас земель сельскохозяйственного назначения» (ФП АЗСН); федеральная государственная информационная систем учета и регистрации тракторов, самоходных машин и прицепов к ним (ФГИС УСМТ); автоматизированная информационная система реестров, регистров и нормативно-справочной информации (АИС НСИ); центральная информационно-аналитическая система Системы государственного информационного обеспечения в сфере сельского хозяйства (ЦИАС СГИО СХ); единая Федеральная Информационная Система о Землях Сельскохозяйственного Назначения (ЕФИС ЗСН)</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">23.05.01 Наземные транспортно-технологические средства</td>
<td colspan="2">специалитет</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>216</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">22. Курская ГСХА</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="3">23. Мичуринский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="2">Инженерный<br />
институт</td>
<td colspan="2">35.04.06 Агроинженерия, Электротехнологии и электрооборудование в сельском хозяйстве</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>108</td>
<td rowspan="3">
<ul>
<li>квадрокоптер DJI Inspire 1 2.0;</li>
<li>подвес Zenmuse X3 с камерой;</li>
<li>подвес Zenmuse X3 с NDVI камерой;</li>
<li>подвес Zenmuse XT ZXTB19SP с тепловизионной камерой;</li>
</ul>
<p>«ANT система управления сельхозпроизводством» – вебсервис для агрономов и руководителей.</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.06 Агроинженерия, Технологии и средства механизации сельского хозяйства</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Плодоовощной<br />
институт<br />
им. И. В. Мичурина</td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>288</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">24. Нижегородская ГСХА</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">25. Новосибирский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="3">Инженерный<br />
институт</td>
<td colspan="2">35.03.06 Агроинженерия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>2 / раздел в дисциплине «Информатика и цифровые технологии»</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="8">25. Новосибирский ГАУ</td>
<td colspan="2">35.04.06 Агроинженерия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>6 / раздел в дисциплине «Цифровые технологии в АПК»</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">44.04.04 Профессиональное обучение (по отраслям)</td>
<td colspan="2"></td>
<td>6 / раздел в дисциплине «Цифровые технологии в АПК»</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Государственного<br />
и муниципального управления</td>
<td colspan="2">38.04.04 Государственное и муниципальное управление», профиль «Устойчивое сельское хозяйство и развитие сельских территорий»</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>72 / раздел в дисциплине «Современные агротехнологии»</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="5">Агрономический</td>
<td colspan="2">35.03.03 Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72 / раздел в дисциплине «Цифровые технологии в АПК»</td>
<td rowspan="5">«Лабораторная навигационная система»</p>
<p>Оборудована: агронавигатор+тренажер симулятор АСУР-ВД, измеритель температуры и относительной влажности воздуха СЕМ DT-8880, лабораторный стенд для управления расходом рабочей жидкости, маятниковый сенсор для измерения густоты растительной массы CROP-METER 11, навеска задняя в сборе.</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72 / раздел в дисциплине «Цифровые технологии в АПК»</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.03 Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>108 / раздел в дисциплине «Математическое моделирование и анализ данных»</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>108 / раздел в дисциплине «Математическое моделирование и анализ данных»</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.03 Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>72 / раздел в дисциплине «ГИС-технологии в сельском хозяйстве»</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"><strong>9</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>518</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">26. Омский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="2">Агротехнологический</td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия, профиль «Полеводство»</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108 / Цифровые технологии в АПК</td>
<td rowspan="2">
<ul>
<li>Автоматизированная метеостанция с оборудованием для автоматической фиксации основных параметров: температура воздуха, влажность, скорость ветра, температура поверхности почвы – с последующей их обработкой и созданием электронных карт полей</li>
<li>Лицензированные программные продукты для обработки космических снимков и создания 3D-моделей полей: ENVi, QGIS, Multispeck, Map info</li>
<li>Электронные почвенные карты полей всех районов Омской области</li>
<li>Беспилотный летательный комплекс для проведения дистанционного зондирования земли с целью создания электронных карт полей</li>
<li>Учебные электронные карты полей с фиксацией фаз роста и развития сельскохозяйственных культур и потребности культур в удобрениях по фазам развития</li>
<li>Архив космических снимков территории России и Омской области высокого разрешения (Роскосмос, Европейское космическое агентство, Казахстан, Китай, Индия)</li>
</ul>
</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2"></td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия, профиль «Селекция и генетика сельскохозяйственных культур»</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108 / Цифровые технологии в АПК</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Технического сервиса в агропромышленном комплексе</td>
<td colspan="2">35.04.06 Агроинженерия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>72 / Основы точного земледелия</td>
<td>
<ul>
<li>Автоматизированная метеостанция с оборудованием для автоматической фиксации основных параметров: температура воздуха, влажность, скорость ветра, температура поверхности почвы – с последующей их обработкой и созданием электронных карт полей</li>
<li>Лицензированные программные продукты для обработки космических снимков и создания 3D-моделей полей: ENVi, QGIS, Multispeck, Map info</li>
<li>Электронные почвенные карты полей всех районов Омской области</li>
<li>Беспилотный летательный комплекс для проведения дистанционного зондирования земли с целью создания электронных карт полей</li>
<li>Учебные электронные карты полей с фиксацией фаз роста и развития сельскохозяйственных культур и потребности культур в удобрениях по фазам развития</li>
<li>Архив космических снимков территории России и Омской области высокого разрешения (Роскосмос, Европейское космическое агентство, Казахстан, Китай, Индия)</li>
</ul>
</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>288</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="3">27. Оренбургский ГАУ</td>
<td colspan="2">Инженерный</td>
<td colspan="2">35.03.06 Агроинженерия. Профили «Технический сервис в АПК», «Технические системы в агробизнесе»</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108 / Современные технологии в АПК</td>
<td rowspan="3">Система параллельного вождения AgGPS EZ- Guide 250, лаборатория для почвенного анализа, автоматический пробоотборник FritzmeierProfi 90, полевой компьютер AgLeader, бортовой компьютер комбайна CLAAS Lexion 540, телематический терминал CLAAS Telematics, персональный компьютер, система картирования урожайности зерноуборочных комбайнов CLAAS Lexion 540, система дифференцированного внесения гербицидов WeedSeeker, датчик системы дифференцированного внесения удобрений GreenSeeker.</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2">Агротехнологий, землеустройства<br />
и пищевых<br />
производств</td>
<td colspan="2" rowspan="2">35.03.04 Агрономия. Профиль «Агрономия»</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>144 / Системы земледелия</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>144 / Агрохимия</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>396</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">28. Орловский ГАУ</td>
<td colspan="2">Агробизнеса<br />
и экологии</td>
<td colspan="2">35.04.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>72 / Основы прецизионного земледелия</td>
<td>Автоматическая метеостанция Сокол-М, с выносным модулем и комплектом датчиков: влажности листа, температуры и влажности почвы. Основа цифровой платформы опытного цифрового хозяйства университета – комплексная система управления предприятием (AgroNetworkTechnologies).</p>
<p>Интерактивная доска, мультимедийный проектор, ноутбук, Лаборатория биохимическая. Одноканальный рН-метр. Поляриметр круговой СМ-3. Вытяжной шкаф из лаб. ЛОХ 1. Термостат ТС-1/80.Сахариметр СУ-4. Сушильный шкаф СНОЛ. Прибор Сокслета 01КШ-29/32.СП-200 комплект сит для почвы. Дистилятор ДЭ-4. Прибор рН 410. Нитратомер НИКОН 2</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>72</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">29. Пензенский ГАУ</td>
<td colspan="2">Инженерный</td>
<td colspan="2">35.03.06 Агроинженерия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72</td>
<td>Система параллельного вождения Trimble EZ-Guide 250</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>72</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">30. Пермский ГАТУ</td>
<td colspan="2">Агротехнологий<br />
и лесного хозяйства</td>
<td colspan="2">Агрономия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>28</td>
<td>Тракторы, оборудованные системой мониторинга ООО «Труд», компьютер с ГИС системой, БПЛА, камера NDVI, пенетрометр, навигаторы полевые, прибор для измерения температуры почвы</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>28</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">31. Приморская ГСХА</td>
<td colspan="2">Инженерно-технологический институт</td>
<td colspan="2">Агроинженерия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</p>
<p>реализуется с 2019 г.</td>
<td>108</td>
<td>Комплект мебели учебной. Доска аудиторная меловая в комплекте.</p>
<p>Мультимедийное оборудование: Экран Draper Luma 213×213 см настенный. Мультимедийный проектор: Epson EB-W12 – стационарного типа.</p>
<p>Компьютер Intel Core I3 (12 шт.), выход в Internet, комплект лицензионного программного обеспечения.</p>
<p>Станция автоматическая метеорологическая «СОКОЛ-М1»</p>
<p>Беспилотное воздушное судно DJI Phantom 4 Pro (серийный (идентификационный номер) 0AXCEA90A30112)</p>
<p>Программное обеспечение: ГИС Карта 2011; Autodesk AutoCAD Map 3D 2020; ArcMAP 10.3.1; Навигатор полей <a href="https://play.google.com/store/apps/details?id=lt.noframe.farmisfieldnavigator.free" target="_blank" rel="noopener">https://play.google.com/store/apps/details?id=lt.noframe.farmisfieldnavigator.free</a>;</p>
<p>OneSoil Scouting: мониторинг полей для фермера <a href="https://play.google.com/store/apps/details?id=io.onesoil.scouting" target="_blank" rel="noopener">https://play.google.com/store/apps/details?id=io.onesoil.scouting</a>;</p>
<p>Почвы-бур</p>
<p><a href="https://play.google.com/store/apps/details?id=com.noframe.farmissoilsamples" target="_blank" rel="noopener">https://play.google.com/store/apps/details?id=com.noframe.farmissoilsamples</a>;</p>
<p>GPS Измерение площади полей</p>
<p><a href="https://play.google.com/store/apps/details?id=lt.noframe.fieldsareameasure" target="_blank" rel="noopener">https://play.google.com/store/apps/details?id=lt.noframe.fieldsareameasure</a>;</p>
<p>My Data Plant &#8212; Crop Navigator</p>
<p><a href="https://play.google.com/store/apps/details?id=io.cordova.myapp.alpha01" target="_blank" rel="noopener">https://play.google.com/store/apps/details?id=io.cordova.myapp.alpha01</a>.</p>
<p>Иономер «Анион 4100»; иономер И-160МИ; Иономер «Анион 4100»; Анализатор жидкости кондуктометрический лабораторный Мультитест КСЛ-101; Спектрофотометр UNICO2100; Анализатор пламенно-фотометрический ПФА378; Тест –наборы STH для определения элементов питания растений в почве.</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"></td>
<td colspan="2">Институт<br />
землеустройства<br />
и агротехнологий</td>
<td colspan="2">Агрономия</td>
<td>бакалавриат</p>
<p>&nbsp;</p>
<p>реализуется с 2019 г.</td>
<td>108</td>
<td>Комплект мебели учебной. Доска аудиторная меловая в комплекте.</p>
<p>Мультимедийное оборудование: Экран Draper Luma 213×213 см настенный. Мультимедийный проектор: Epson EB-W12 – стационарного типа.</p>
<p>Компьютер Intel Core I3 (12 шт.), выход в Internet, комплект лицензионного программного обеспечения.</p>
<p>Станция автоматическая метеорологическая «СОКОЛ-М1»</p>
<p>Беспилотное воздушное судно DJI Phantom 4 Pro (серийный (идентификационный номер) 0AXCEA90A30112)</p>
<p>Программное обеспечение: ГИС Карта 2011; Autodesk AutoCAD Map 3D 2020; ArcMAP 10.3.1; Навигатор полей <a href="https://play.google.com/store/apps/details?id=lt.noframe.farmisfieldnavigator.free" target="_blank" rel="noopener">https://play.google.com/store/apps/details?id=lt.noframe.farmisfieldnavigator.free</a>;</p>
<p>OneSoil Scouting: мониторинг полей для фермера <a href="https://play.google.com/store/apps/details?id=io.onesoil.scouting" target="_blank" rel="noopener">https://play.google.com/store/apps/details?id=io.onesoil.scouting</a>;</p>
<p>Почвы-бур</p>
<p><a href="https://play.google.com/store/apps/details?id=com.noframe.farmissoilsamples" target="_blank" rel="noopener">https://play.google.com/store/apps/details?id=com.noframe.farmissoilsamples</a>;</p>
<p>GPS Измерение площади полей</p>
<p><a href="https://play.google.com/store/apps/details?id=lt.noframe.fieldsareameasure" target="_blank" rel="noopener">https://play.google.com/store/apps/details?id=lt.noframe.fieldsareameasure</a>;</p>
<p>My Data Plant &#8212; Crop Navigator</p>
<p><a href="https://play.google.com/store/apps/details?id=io.cordova.myapp.alpha01" target="_blank" rel="noopener">https://play.google.com/store/apps/details?id=io.cordova.myapp.alpha01</a>.</p>
<p>Иономер «Анион 4100»; иономер И-160МИ; Иономер «Анион 4100»; Анализатор жидкости кондуктометрический лабораторный Мультитест КСЛ-101; Спектрофотометр UNICO2100; Анализатор пламенно-фотометрический ПФА378; Тест –наборы STH для определения элементов питания растений в почве.</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"></td>
<td colspan="2"></td>
<td colspan="2">Агрохимия и агроэкология</td>
<td>Бакалавриат</p>
<p>реализуется с 2019 г.</td>
<td>108</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>324</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">32. РГАЗУ</td>
<td colspan="2">Агро-<br />
и биотехнологий</td>
<td colspan="2">35.03.04. Агрономия, профиль «Агрономия»</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>216</td>
<td>Комплекс приложений информационной системы «АНТ» на платформе «GeoLook» (https://ant.services/)</p>
<p>Весы аналитические OHAUS RV 214</p>
<p>Персональные компьютеры (11 шт.) на базе процессора Intel Pentium G620 ASUSP5KPL-CM/2048 RAM/DDR2/Intel Core 2Duo E7500, 2,9 MHz/AtiRadeon HD 4350 512 Mb/HDD 250/Win7-32/MSOficce 2010/Acer V203H ,с доступом к интернету</p>
<p>Водяная баня KG – 516</p>
<p>Весы аналитические OHAUS RV 214</p>
<p>Сушильный шкаф FД -53</p>
<p>Р-Н – метр /рН 211 стационарный HANNА</p>
<p>Спектрофотометр ПЭ-5400В</p>
<p>Иономер универсальный ЭВ-74</p>
<p>рН-метр рН-150МИ</p>
<p>Калориметр КФК-2</p>
<p>Весы лабораторные ГОСМЕТР ВЛТЭ-210</p>
<p>Ручной почвенный бур</p>
<p>Алюминиевые бюксы</p>
<p>Набор сит</p>
<p>Гербарий сорных растений</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>216</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">33. РГАУ-МСХА</td>
<td colspan="2" rowspan="3">Агрономии<br />
и биотехнологии</td>
<td colspan="2">35.04.04 Агрономия,</p>
<p>Адаптивные системы земледелия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>180 / Адаптивно-ландщафтные системы земледелия</p>
<p>144 / Инновационные технологии в земледелии</p>
<p>108 / Конструирование агроландшафтов</td>
<td rowspan="3">Презентации лекций, докладов, сообщений. Также используется оборудование учебно-опытного хозяйства, а также оборудование компаний-партнеров</p>
<p>Трактор JohnDeer 6920 с навигационным оборудованием</p>
<p>ТехникаAMAZONE:</p>
<p>&#8212; сеялкиDMC –Primera; D-9-30</p>
<p>&#8212; Распределитель твердых удобрений с возможностью Дифференц. внесения ZAM,</p>
<p>&#8212; опрыскиватель UF 901</p>
<p>Оптическиедатчики:</p>
<p>&#8212; N-sensorYara;</p>
<p>&#8212; GreenSeeker RT200 Trimble</p>
<p>Навигационное оборудование GPS, RTKTrimble</p>
<p>Программное обеспечение SMSAdvanced (платная лицензия уже закончилась).</p>
<p>Почвенные ручные зонды (твердомеры) и пробоотборники (буры)</p>
<p>2015 г – Джи Пи Эс Ком, беспилотная съемка самолетом eBee</p>
<p>2016-2017 г – ГеоСкан, беспилотная съемка (оборудование разное)</p>
<p>В настоящее время беспилотная съемка не используется, т.к. территория вуза – закрытая для полетов зона</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2"></td>
<td colspan="2">35.04.03 Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат (очно)</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Направление 35.04.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат (заочно)</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>648</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="3">34. Рязанский ГАТУ</td>
<td colspan="2">Инженерный</td>
<td colspan="2">Агроинженерия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>288 / Геоинформационные системы при эксплуатации и сервисе машинно-тракторного парка</td>
<td>Системы спутникового контроля и мониторинга: СКАУТ, Форт-Монитор, Wialon, Cybermonitor, Форватер Can-Log, система параллельного вождения: Trimble EZ-Guide 250, автопилот Topcon AES-35 с консолью управления Topcon х25 и контроллером управления нормой внесения удобрений (стенд), трактор Terrion ATM 3180 с автопилотом Topcon х25, дистанционное зондирование земли DJI Fantom PRO 4 + мультиспектральная камера Parrot Sequoia, геоинформационные сервисы: АНТ, Вега-Science, Геоаналитика.Агро, программное обеспечение: Norm Sat, ИнГео</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Технологический</td>
<td colspan="2">Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108 / Оптимизация основных технологических процессов в земледелии</td>
<td>Дистанционное зондирование земли DJI Fantom PRO 4 + мультиспектральная камера Parrot Sequoia, геоинформационные сервисы: АНТ, Вега-Science, Геоаналитика.Агро</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"></td>
<td colspan="2">Агрономия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>108 / Адаптивные системы земледелия</td>
<td>Дистанционное зондирование земли DJI Fantom PRO 4 + мультиспектральная камера Parrot Sequoia, геоинформационные сервисы: АНТ, Вега-Science, Геоаналитика.Агро</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>504</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="5">35. Самарский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="5">Инженерный</td>
<td colspan="2">Агроинженерия, Технические системы в агробизнесе</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108 / Автоматизированные системы управления техникой</td>
<td rowspan="5">Демо-стенд системы параллельного вождения Trimble Ez guide 500+Ez steer, полевые компьютеры с GPS-приемниками и программным обеспечением; почвенные пробоотборники Amity и Fritzmeier, опрыскиватель Amazone UF 3000, разбрасыватель Amazone ZA-M-Max, распределитель удобрений Amazone ZA-TS 3200 с диффвнесением,</p>
<p>терминал Amatron 3, системы телеметрии сельскохозяйственной техники «Глонассофт» и «Агросигнал», плакаты и справочные материалы; мультимедийное оборудование</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Агроинженерия, Электрооборудование и электротехнологии</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108 / Автоматизированные системы управления техникой</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Агроинженерия, Технический сервис в АПК</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72 / Системы дистанционного контроля эксплуатации с/х техники</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Агроинженерия, Эксплуатация транспортных средств</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>144 / Автоматизированные системы управления транспортными средствами</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Агроинженерия, Электрооборудование и электротехнологии</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>144 / Информационно-измерительные системы в АПК</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>5</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>576</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="3">36. Санкт-Петербургский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="3">Технических<br />
систем, сервиса<br />
и энергетики</td>
<td colspan="2">23.03.03 Эксплуатация транспортно-технологических машин и комплексов</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72</td>
<td rowspan="3">Трактор Dohn Deere 6400 с GPS навигацией</p>
<p>Мобильный комплекс для картографирования полей на базе автомобиля УАЗ «Патриот»</p>
<p>Мобильный пробоотборник «SpeedProb»</p>
<p>Система дифференцированной обработки почвы на базе устройства дистанционного зондирования почвенного состояния TopSoil</p>
<p>Пенетрологер Eijkelkamp</p>
<p>Автоматический детектор сорняков Weed Seeker</p>
<p>Оптико-сенсорная система GreenSeeker</p>
<p>Полевой компьютер Panasonic</p>
<p>Автоматизированный распределитель удобрений фирмы Bogbalee</p>
<p>Опрыскиватель лабораторный Hardi</p>
<p>Стенд для оценки равномерности работы пневматических сеялок фирмы Gaspardo</p>
<p>Стенд для демонстрации работы сеялки точного высева Kverneland</p>
<p>Интегрированная система для организации сельскохозяйственного производства (модуль для составления карт полей) Аграр-Офис</p>
<p>Система мониторинга и контроля для сельскохозяйственной техники ФАРВАТЕР</p>
<p>Компьютерный класс с мультимедийным оборудованием и интерактивной доской.</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.06 Агроинженерия профиль Эксплуатация транспортно-технологических машин</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.06 Агроинженерия профиль Технические системы в агробизнесе</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>72</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>216</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2">37. Саратовский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="2">Агрономический</td>
<td colspan="2">35.04.04 Агрономия, Экологическое земледелие</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>108 / Точное земледелие</p>
<p>72 / Агрометеорологические прогнозы</p>
<p>144 / Современная сельскохозяйственная техника</td>
<td rowspan="2">Почвенный влагомер Moisture Meter HH2</p>
<p>Метеостанция Сокол-М1</p>
<p>Многофункциональный дисплей Trimble CFX-750</p>
<p>Электрическое подруливающее устройство Trimble EZ-Pilot</p>
<p>Коллекция семян сорных растений (10 шт.)</p>
<p>Гербарий сорных растений (12 шт.)</p>
<p>Информационные стенды. Ноутбук Maxselect Misson A330 (1шт.). Ноутбук RoverBookVoyagerV400 L – 1 шт. (переносное оборудование)</p>
<p>Ноутбук DNSD800154 W100P – 2 шт. (переносное оборудование). Проектор AserXD1150 DPL – 1 шт. (переносное оборудование)</p>
<p>Комплект мультимедийный ViewSonic PJD6220 (1 шт.)</p>
<p>Проектор View Sonic PJD 3D DLP</p>
<p>MSI L1350D нетбук – переносной</p>
<p>Плакатная продукция – переносной</p>
<p>Проектор BENQ – 1 шт.</p>
<p>Доска-экран Lumien – 1 шт.</p>
<p>Монитор LG Studioworks 700B – 1 шт.</p>
<p>Системный блок CTEPX – 1 шт.</p>
<p>Экран CACTUS Wallscreen CS-PSW-213&#215;213, 213х213 см, 1:1, настенно-потолочный белый</p>
<p>Проектор OLDI computersPJ11.Колонки Inter M</p>
<p>Сушильный шкаф SNOL 58/350 (А421-104-351×1001) (1шт.)</p>
<p>Термостат ТС-1/80 СПУ (+25…+60<sup>0</sup>С) (1 шт.)</p>
<p>Фотоколориметр КФК-2 (1 шт.)</p>
<p>Сушильный шкаф SNOL 58/350 (А421-104-351×1001) (1 шт.)</p>
<p>Термостат ТС-1/80 СПУ (+25…+60<sup>0</sup>С) (1 шт.)</p>
<p>Сушильный шкаф SNOL 58/350 (А421-104-351×1001) (1 шт.)</p>
<p>Термостат ТС-1/80 СПУ (+25…+60<sup>0</sup>С) (1 шт.)</p>
<p>Фотоколориметр КФК-2 (1 шт.)</p>
<p>Сушильный шкаф SNOL 58/350 (А421-104-351×1001) (1 шт.)</p>
<p>Термостат ТС-1/80 СПУ (+25…+60<sup>0</sup>С) (1 шт.)</p>
<p>Осадкомер О-1 (2 шт.) (переносное)</p>
<p>Будка психрометр (БП) (1 шт.)</p>
<p>Гелиограф универсальный ГР-1 (1 шт.)</p>
<p>Почвенный дождемер ГР-28 (2 шт.) (переносное)</p>
<p>Плювиограф П-2 (1 шт.) (переносное)</p>
<p>Почвенный испаритель ГР-25 (1 шт.) (переносное)</p>
<p>Барограф М-22А (2 шт.) (переносное)</p>
<p>Гигрограф волосной М-21А (2 шт.) (переносное)</p>
<p>Термоэлектрический актинометр М-3 (2 шт.) (переносное)</p>
<p>Термоэлектрический пиранометр М-80М (3 шт.) (переносное)</p>
<p>Гальванометр типа ГСА-1 (2 шт.) (переносное)</p>
<p>Проектор мультимедийный NECNP40 (1 шт.) (переносное)</p>
<p>Метеостанция беспроводная VantageProPlus в сборе (крыша 5-и этажного корпуса) (1 шт.)</p>
<p>влагомер почвы и грунта НН2 (1 шт.)</p>
<p>Весы лабораторные ACCULABALC-2100d2 (1 шт.) (переносное)</p>
<p>Весы электронные ВЛТЭ-2200 (1 шт.) (переносное)</p>
<p>Электрошкаф сушильный СНОЛ/24/200 (2 шт.)</p>
<p>Актинометр (4 шт.) (переносное)</p>
<p>Альбедометр (1 шт.) (переносное)</p>
<p>Анемометр (10 шт.) (переносное)</p>
<p>Анемометр ручной (2 шт.) (переносное)</p>
<p>Барограф (6 шт.) (переносное)</p>
<p>Барометр-анероид (10 шт.) (переносное)</p>
<p>Бур почвенный (4 шт.) (переносное)</p>
<p>Влагомер «Днестр» (1 шт.)</p>
<p>Гальванометр (5 шт.) (переносное)</p>
<p>Гигрограф (5 шт.) (переносное)</p>
<p>Гигрометр РМ-39 (3 шт.) (переносное)</p>
<p>Дождемер ГР-28 (1 шт.) (переносное)</p>
<p>Пиранометр (8 шт.) (переносное)</p>
<p>Плотномер (1 шт.) (переносное)</p>
<p>Плювиограф (1 шт.) (переносное)</p>
<p>Почвенный измельчитель (1 шт.) (переносное)</p>
<p>Психрометр (17 шт.) (переносное)</p>
<p>Термометр-щуп (1 шт.) (переносное)</p>
<p>Трость агронома (1 шт.) (переносное)</p>
<p>Шкаф вытяжной (2 шт.) (переносное)</p>
<p>Спектрофотометр Unico 1201</p>
<p>Устройство измерительное рН-метр piccoloplusHANNA (переносное)</p>
<p>Установка ЭЛАМ-02</p>
<p>Пробоотборник почвы-бур «ППБ» (переносное)</p>
<p>Иономер Эконикс Эксперт 001 (переносное)</p>
<p>Иономер Эксперт – 001-3.01 (переносное)</p>
<p>Кондуктометр HANNADIST2 HI 98302 (переносное)</p>
<p>Кондуктометр HANNADIST5 HI 98311 (переносное)</p>
<p>Пенетрометр ПСГ МГ 4 (переносное)</p>
<p>Анемометр ручной (2шт.) (переносное)</p>
<p>Учебные макеты (переносное)</p>
<p>Весы WA-33</p>
<p>Весы лабораторные CAS MWP-300</p>
<p>Весы лабораторные CAS CAUX-220</p>
<p>Иономер Эконикс Эксперт 001 (переносное)</p>
<p>Иономер Эксперт – 001-3.01 (переносное)</p>
<p>Кондуктометр HANNA DIST2 HI 98302 (переносное)</p>
<p>Кондуктометр HANNA DIST5 HI 98311 (переносное)</p>
<p>Пенетрометр ПСГ МГ 4 (переносное)</p>
<p>Полевая лаборатория Литвинова ПЛП-9 (переносное).</p>
<p>Пробоотборник почвы-бур «ППБ-К» (переносное)</p>
<p>Пробоотборник ПЭ-1110 фторопластовый (переносное)</p>
<p>Устройство измерительное рН-метр piccolo plus HANNA (переносное)</p>
<p>Термометр биметаллический почвенный (30см) (переносное)</p>
<p>Термометр биметаллический почвенный (50см) (переносное)</p>
<p>Коллекция минералов (160шт. и 165 шт.)</p>
<p>Компьютер Intel Core i3 3/30 GH/2*2Gb/500Gb/DVD RW /keyb/ mouse/Win7/Monitor 18/5 – 5 шт.</p>
<p>Стенд демонстрационный с подруливающим устройством и навигационным оборудованием</p>
<p>Руль GW-300 &#8212; 1шт. (переносное оборудование)</p>
<p>Учебные пособия по сельскохозяйственной технике (отдельные агрегаты и узлы сельскохозяйственной техники) (переносное)</p>
<p>Проектор мультимедийный BenQ PB8120 Brighness:2000:1/1800 &#8212; 1шт. (переносное оборудование)</p>
<p>Экран настенный 203х203 см ScreenMedia Economy – 1 шт.</p>
<p>Плазменный телевизор 51” Samsung PS51 HD READY – 1 шт.</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия, Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>288 / Зональные системы удобрений</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>612</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="5">38. Северного<br />
Зауралья ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="5">Агротехнологический</td>
<td colspan="2">35.04.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td></td>
<td rowspan="5">Тренажер «БНК Агронавигатор»</p>
<p>Стенды: «Система дифференцированного внесения минеральных удобрений при посеве посевными агрегатами»</p>
<p>«Система автоматизированного управления опрыскивателем»</p>
<p>«Система автоматизированного управления разбрасывателем минеральных удобрений»</p>
<p>Пневмоавтоматический пробоотборник почвенных образцов (изготовитель ГАУ Северного Зауралья, защищен патентом)</p>
<p>Спутниковая система «Ashtech Promark 2»</p>
<p>NSS приемник Trimble Rover</p>
<p>Контроллер блок управления Trimble TSCS</p>
<p>Беспилотный летательный аппарат «Геоскан»</p>
<p>Учебный беспилотный летательный аппарат GeoDrone</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>144</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.04 Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>720</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.06.01 Сельское хозяйство</td>
<td colspan="2">Аспирантура</td>
<td>216</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">06.06.01 Биологические науки</td>
<td colspan="2">Аспирантура</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>5</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>1188</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">39. Смоленская ГСХА</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2">40. Тверская ГСХА</td>
<td colspan="2" rowspan="2">Технологический</td>
<td colspan="2">Агрономия</td>
<td colspan="2" rowspan="2">магистратура</td>
<td>108 / Ресурсосберегающее и точное земледелие</td>
<td rowspan="2">Демо-версия сервиса «Информационная система ANT»</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td>81 / ГИС-технологии</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>189</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="3">41. Ульяновский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="2">Инженерный</td>
<td colspan="2">Агроинженерия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>72</td>
<td rowspan="2">Учебный стенд «Автоматизированный штанговый опрыскиватель» (системы точного земледелия)</p>
<p>Учебный стенд Агронавигатор – Тренажер (системы точного земледелия);</p>
<p>Сошник DMС (AMAZONE)</p>
<p>Высевающий аппарат ED (AMAZONE)</p>
<p>Распределитель семян DMС (AMAZONE)</p>
<p>Стенд дозирования семян (AMAZONE)</p>
<p>Посевная секция сеялки ED (AMAZONE)</p>
<p>ПП АгроТехнология 2.0 – онлайн-сервис для управления агробизнесом</p>
<p>Панель NEC MultiSunc 1920*1080 1200</p>
<p>Системный блок IS Mechanicks Crown STD LG</p>
<p>Точка доступа Mikrotik</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Агроинженерия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>252</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Агротехнологий, земельных ресурсов и пищевых<br />
производств</td>
<td colspan="2">Агрономия, профиль «Агробизнес»</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>108</td>
<td>Лаборатория цифрового земледелия</p>
<p>Мультимедийное оборудование: проектор ViewSonik PA503S (1 шт), экран настенный DEXP WM-80 (1 шт).</p>
<p>Персональный ноутбук Lenovo Idea PAD 330-15AST E29000/4Gb/AMD (1 шт)</p>
<p>Персональный компьютер в составе: процессор INTEL Pentium G4560 LG1151 BOX, материнская плата Soc-1151 Intel H110 2, жесткий диск, накопитель оптический привод видеокарта, блок питания, корпус, монитор, мышь, клавиатура (10 шт.)</p>
<p>Доступ в онлайн-систему контроля и управления сельскохозяйственным производством «Агросигнал»</p>
<p>Стенды: «Цифровая информационная онлайн-система контроля и управления агропредприятием» 4 шт.</p>
<p>Опытное поле с набором техники, земельный участок 486 га</p>
<p>Оборудование ГЛОНАСС-мониторинга техники <strong>СМАРТ S-2333</strong> (5 шт.)</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>432</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="5">42. Уральский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="5">Агротехнологий<br />
и землеустройства</td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>144</td>
<td rowspan="5">Компьютерная лаборатория автоматизированных опытов в землеустройстве и кадастры:</p>
<p>– GNNS (GPS) приемник – 1 шт.</p>
<p>– БЛА (беспилотные летательные аппараты) – 2 шт.</p>
<p>– Система параллельного вождения – 1 шт.</p>
<p>Компьютерный класс с виртуальными тренажерами и программным обеспечением – 2 шт. на 15 и 8 посадочных мест</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.05 Садоводство</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>144</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">21.03.02 Землеустройство<br />
и кадастры</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>144</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.05 Садоводство</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>108</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>5</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>648</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2">43. Чувашская ГСХА</td>
<td colspan="2" rowspan="2">Инженерный</td>
<td colspan="2">35.04.06 Агроинженерия, направленность (профиль) «Технологии и средства механизации сельского хозяйства»</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>144 / Ресурсосберегающие технологии в растениеводстве</td>
<td rowspan="2">Метеостанция KaipoRain (для определения осадков, температуры, влажности воздуха, барометр, скорости и направления ветра)</p>
<p>Метеостанция KaipoRain (для определения влажности почвы на двух уровня, температуры почвы, влажности листа)</p>
<p>Прибор для определения основных гидрофизических характеристик дисперстных сред</p>
<p>Тензиометры</p>
<p>Комплект оборудования высокоточной навигации серии «Фарватер»</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.06.04 Технологии, средства механизации и энергетическое оборудование в сельском, лесном и рыбном хозяйстве, направленность (профиль) «Технологии и средства механизации сельского хозяйства»</td>
<td colspan="2">аспирантура</td>
<td>72 / Координатная система земледелия</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>216</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="2">44. Южно-Уральский ГАУ</td>
<td colspan="2" rowspan="2">Инженерно-технологический</td>
<td colspan="2">35.03.06 Агроинженерия, профиль «Технические системы в агробизнесе»</td>
<td colspan="2">бакалавриат</td>
<td>48 / Цифровые технологии</td>
<td rowspan="2">Стенд для автопилота «Trimble GFX-750»</p>
<p>Программное обеспечение «ГИС Панорама Агро»</p>
<p>Программное обеспечение «Комплекс агрономических задач»</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.06 Агроинженерия, программа подготовки «Технологии и средства механизации сельского хозяйства»</td>
<td colspan="2">магистратура</td>
<td>10 /</p>
<p>Методы и средства ресурсосбережения при производстве продукции растениеводства и животноводства</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>1</strong></td>
<td colspan="2"><strong>2</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>58</strong></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">46. Якутская ГСХА</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
<td colspan="2">–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2" rowspan="5">46. Ярославская ГСХА</td>
<td colspan="2" rowspan="3">Агробизнеса</td>
<td colspan="2">35.03.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">Бакалавриат</td>
<td>144 / Земледелие</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.03.03 Агрохимия и агропочвоведение</td>
<td colspan="2">Бакалавриат</td>
<td>180 / Земледелие</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">35.04.04 Агрономия</td>
<td colspan="2">Магистратура</td>
<td>108 / Инновационные технологии в агрономии</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Технологический</td>
<td colspan="2">35.03.07 Технология производства и переработки сельскохозяйственной продукции</td>
<td colspan="2">Бакалавриат</td>
<td>72 / Земледелие с основами почвоведения и агрохимии</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Инженерный</td>
<td colspan="2">35.03.06 Агроинженерия</td>
<td colspan="2">Бакалавриат</td>
<td>144 / Технологии в земледелии</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Всего</strong></td>
<td colspan="2"><strong>3</strong></td>
<td colspan="2"><strong>5</strong></td>
<td colspan="2"></td>
<td><strong>648</strong></td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таблица 4.3 – Рейтинг аграрных вузов по количеству факультетов, на которых<br />
обучают дисциплинам, связанным с точным земледелием</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th><strong>ВУЗ</strong></th>
<th><strong>Количество факультетов</strong></th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td>Волгоградский ГАУ</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Вятская ГСХА</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Кубанский ГАУ</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирский ГАУ</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Ярославская ГСХА</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Алтайский ГАУ</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Башкирский ГАУ</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородский ГАУ</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Брянский ГАУ</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Красноярский ГАУ</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Мичуринский ГАУ</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Омский ГАУ</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Оренбургский ГАУ</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Приморская ГСХА</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Рязанский ГАТУ</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Ульяновский ГАУ</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Алтайский ИПКРС АПК</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Великолукская ГСХА</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>ГУЗ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Дагестанский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Донской ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Иркутский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская ГСХА</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Кузбасская ГСХА</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Орловский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский ГАТУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>РГАЗУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>РГАУ-МСХА</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Самарский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Санкт-Петербургский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Саратовский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Северного Зауралья ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Тверская ГСХА</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Уральский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская ГСХА</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Южно-Уральский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Ижевская ГСХА</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Дальневосточный ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Горский ГАУ</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Ивановская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Курская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Якутская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><img width="642" height="403" class="wp-image-5300" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2636.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2636.png 642w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2636-300x188.png 300w" sizes="(max-width: 642px) 100vw, 642px" alt="word image 2636 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 4.1 – Количеству факультетов, на которых обучают дисциплинам,<br />
связанным с точным земледелием</p>
<p>Таблица 4.4 – Рейтинг аграрных вузов по количеству специальностей<br />
(направлений подготовки), на которых обучают дисциплинам<br />
по направлениям точного земледелия</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th><strong>ВУЗ</strong></th>
<th><strong>Количество специальностей,<br />
направлений подготовки</strong></th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td>Новосибирский ГАУ</td>
<td><strong>9</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Башкирский ГАУ</td>
<td><strong>6</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Кубанский ГАУ</td>
<td><strong>6</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Брянский ГАУ</td>
<td><strong>5</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Вятская ГСХА</td>
<td><strong>5</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Донской ГАУ</td>
<td><strong>5</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Красноярский ГАУ</td>
<td><strong>5</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Самарский ГАУ</td>
<td><strong>5</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Северного Зауралья ГАУ</td>
<td><strong>5</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Уральский ГАУ</td>
<td><strong>5</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Ярославская ГСХА</td>
<td><strong>5</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Алтайский ГАУ</td>
<td><strong>4</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородский ГАУ</td>
<td><strong>4</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Иркутский ГАУ</td>
<td><strong>4</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградский ГАУ</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>ГУЗ</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Мичуринский ГАУ</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Омский ГАУ</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Приморская ГСХА</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>РГАУ-МСХА</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Рязанский ГАТУ</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Санкт-Петербургский ГАУ</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Ульяновский ГАУ</td>
<td><strong>3</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская ГСХА</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Кузбасская ГСХА</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Оренбургский ГАУ</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Саратовский ГАУ</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Тверская ГСХА</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская ГСХА</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Южно-Уральский ГАУ</td>
<td><strong>2</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Алтайский ИПКРС АПК</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Великолукская ГСХА</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Дагестанский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Орловский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенский ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский ГАТУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>РГАЗУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Ижевская ГСХА</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Дальневосточный ГАУ</td>
<td><strong>1</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Горский ГАУ</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Ивановская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Курская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Якутская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><img width="622" height="423" class="wp-image-5301" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2637.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2637.png 622w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2637-300x204.png 300w" sizes="(max-width: 622px) 100vw, 622px" alt="word image 2637 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 4.2 – Рейтинг по количеству специальностей (направлений подготовки),<br />
на которых обучают дисциплинам по точному земледелию</p>
<p>Среди аграрных вузов с наибольшим по количеству часов, отводимых на данные дисциплины, можно выделить Донской ГАУ (2124 ч), ГУЗ (1656 ч), Башкирский ГАУ (1548 ч), Северного Зауралья ГАУ (1188 ч), Кубанский ГАУ (864 ч), РГАУ-МСХА (648 ч), Уральский ГАУ (648 ч), Ярославская ГСХА (648 ч), Саратовский ГАУ (612 ч), Самарский ГАУ (576 ч) – таблица 4.5, рисунок 4.3.</p>
<p>Таблица 4.5 – Рейтинг аграрных вузов по объему (часов) дисциплин, связанным<br />
с изучением точного земледелия</p>
<table>
<thead>
<tr>
<th><strong>ВУЗ</strong></th>
<th><strong>Объем, часов </strong></th>
</tr>
</thead>
<tbody>
<tr>
<td>Донской ГАУ</td>
<td><strong>2124</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>ГУЗ</td>
<td><strong>1656</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Башкирский ГАУ</td>
<td><strong>1548</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Северного Зауралья ГАУ</td>
<td><strong>1188</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Кубанский ГАУ</td>
<td><strong>864</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>РГАУ-МСХА</td>
<td><strong>648</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Уральский ГАУ</td>
<td><strong>648</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Ярославская ГСХА</td>
<td><strong>648</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Саратовский ГАУ</td>
<td><strong>612</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Самарский ГАУ</td>
<td><strong>576</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Красноярский ГАУ</td>
<td><strong>540</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Новосибирский ГАУ</td>
<td><strong>518</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Рязанский ГАТУ</td>
<td><strong>504</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Брянский ГАУ</td>
<td><strong>468</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Белгородский ГАУ</td>
<td><strong>432</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Иркутский ГАУ</td>
<td><strong>432</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Ульяновский ГАУ</td>
<td><strong>432</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Алтайский ГАУ</td>
<td><strong>396</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Оренбургский ГАУ</td>
<td><strong>396</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Костромская ГСХА</td>
<td><strong>324</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Приморская ГСХА</td>
<td><strong>324</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Мичуринский ГАУ</td>
<td><strong>288</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Омский ГАУ</td>
<td><strong>288</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Волгоградский ГАУ</td>
<td><strong>270</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Кузбасская ГСХА</td>
<td><strong>216</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>РГАЗУ</td>
<td><strong>216</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Санкт-Петербургский ГАУ</td>
<td><strong>216</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Чувашская ГСХА</td>
<td><strong>216</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Тверская ГСХА</td>
<td><strong>189</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Великолукская ГСХА</td>
<td><strong>108</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Кабардино-Балкарский ГАУ</td>
<td><strong>72</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Орловский ГАУ</td>
<td><strong>72</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Пензенский ГАУ</td>
<td><strong>72</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Ижевская ГСХА</td>
<td><strong>72</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Южно-Уральский ГАУ</td>
<td><strong>58</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Вятская ГСХА</td>
<td><strong>44</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Дагестанский ГАУ</td>
<td><strong>36</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Пермский ГАТУ</td>
<td><strong>28</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Алтайский ИПКРС АПК</td>
<td><strong>18</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Дальневосточный ГАУ</td>
<td><strong>18</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Горский ГАУ</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Ивановская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Курская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Нижегородская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Смоленская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Якутская ГСХА</td>
<td>–</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><img width="630" height="368" class="wp-image-5302" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2638.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2638.png 630w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2638-300x175.png 300w" sizes="(max-width: 630px) 100vw, 630px" alt="word image 2638 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 4.3 – Объем дисциплин</p>
<p><strong>Выводы:</strong></p>
<p>Центром прогнозирования и мониторинга организован сбор информации по использованию в учебном процессе высших учебных заведений, подведомственных Минсельхозу России (46 вузов), дисциплин связанных с изучением технологий точного земледелия.</p>
<p>На основании полученных данных составлены рейтинги по наибольшему количеству:</p>
<p>– факультетов (3), на которых обучают данным дисциплинам – Волгоградский ГАУ, Вятская ГСХА, Кубанский ГАУ, Новосибирский ГАУ, Ярославская ГСХА;</p>
<p>– специальностей (направлений подготовки) – Новосибирский ГАУ (9), Башкирский ГАУ (6), Кубанский ГАУ (6), Брянский ГАУ (5), Вятская ГСХА (5), Донской ГАУ (5), Красноярский ГАУ (5), Самарский ГАУ (5), Северного Зауралья ГАУ (5), Уральский ГАУ (5), Ярославская ГСХА (5);</p>
<p>– часов на дисциплины – Донской ГАУ (2124 ч), ГУЗ (1656 ч), Башкирский ГАУ (1548 ч), Северного Зауралья ГАУ (1188 ч), Кубанский ГАУ (864 ч), РГАУ-МСХА (648 ч), Уральский ГАУ (648 ч), Ярославская ГСХА (648 ч), Саратовский ГАУ (612 ч), Самарский ГАУ (576 ч).</p>
<h2><strong>5 РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ ЦЕНТРА ПО ПОПУЛЯРИЗАЦИИ ТЕХНОЛОГИЙ ТОЧНОГО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА</strong></h2>
<p>По итогам работы в 2019 г. подготовлено:</p>
<p>– 15 публикаций (учебник, статья Scopus, статья ВАК, лабораторный практикум, методические указания, 5 статей, 5 информационных материалов);</p>
<p>– 9 аналитических справок;</p>
<p>– 3 прогнозных материалов;</p>
<p>– проведено 19 научных и учебных мероприятий.</p>
<p>Создан ютуб-канал «Центр прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ», на котором размещено 42 видео (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/channel/UCrPRhGM7-WpIM2Z3MmfRjsQ/videos" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/channel/UCrPRhGM7-WpIM2Z3MmfRjsQ/videos</a>) – рисунок 5.1.</p>
<p><img width="1618" height="914" class="wp-image-5303" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2639.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2639.png 1618w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2639-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2639-1024x578.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2639-768x434.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2639-1536x868.png 1536w" sizes="(max-width: 1618px) 100vw, 1618px" alt="word image 2639 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 5.1 – Главная страница ютуб-канала<br />
«Центр прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ»</p>
<p>Подготовлены и размещены на ютуб-канале:</p>
<p>– две презентации: Презентация 1. Цифровая трансформация сельского хозяйства, Презентация 2. Применение беспилотных летательных аппаратов в сельском хозяйстве (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PqcZxzZTUZLmm6TxT2VI_rUFEUJXm_uy" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=<br />
PqcZxzZTUZLmm6TxT2VI_rUFEUJXm_uy</a>) – рисунок 5.2;</p>
<p>– четыре лекции: Лекция 1. Точное сельское хозяйство: состояние и перспективы, Лекция 2. Оцифровка полей и локальный отбор проб в системе координат, Лекция 3. Системы параллельного вождения, Лекция 4. Дистанционное зондирование земли (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZLyxsodbfBoTeYEHLRk6wpd" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist<br />
?list=PLAqcZxzZTUZLyxsodbfBoTeYEHLRk6wpd</a>) – рисунок 5.3;</p>
<p>– две лекции на английском языке: Lecture 1. Precision agriculture today and the development trends, Lecture 2. GIS and GPS agricultural mapping and soil sampling (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZI2bFBpG0JpAHh_Dh7_-_9v" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=PLA<br />
qcZxzZTUZI2bFBpG0JpAHh_Dh7_-_9v</a>) – рисунок 5.4;</p>
<p>– 13 лабораторных работ: Лабораторная работа 1. Система мониторинга и контроля для сельскохозяйственной техники, Лабораторная работа 2. Система контроля высева, Лабораторная работа 3. Симулятор работы разбрасывателя удобрений, Лабораторная работа 4. Симулятор работы опрыскивателя, Лабораторная работа 5. Система навигации, Лабораторная работа 6. Система спутникового мониторинга, Лабораторная работа 7. Система мониторинга состояния и использования сельхозугодий, Лабораторная работа 8. Подготовка БПЛА к полету, Лабораторная работа 9. Подготовка полетного задания для БПЛА, Лабораторная 10. Стенд для управления сервоприводами разбрасывателя удобрений, Лабораторная работа 11. Стенд автопилота, Лабораторная работа 12. Стенд для управления секциями опрыскивателя, Лабораторная работа 13. Система Telematics (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZI4d_OV4dP5EGvF51toYEPD" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/<br />
playlist?list=PLAqcZxzZTUZI4d_OV4dP5EGvF51toYEPD</a>) – рисунок 5.5;</p>
<p>– 17 видео: «Центр точного земледелия», «Центр прогнозирования и мониторинга», «Модель беспилотной технологии уборки урожая», «Факультет механизации Кубанского ГАУ», «Стенд автопилота», «Стенд для управления секциями опрыскивателя», «Стенд высевающего аппарата сеялки КЛЕН», «Учебно-опытное хозяйство «Краснодарское», «Сельское хозяйство: из прошлого в будущее», «Перспективные технологии будущего», «Студенты из Германии в Кубанском ГАУ», «Учебно-опытное хозяйство «Кубань», «Визит делегации Минсельхоза России» , «Центр прогнозирования и мониторинга<br />
в программе «Жить в южной столице», «Центр прогнозирования и мониторинга в программе «Тема дня», «Евгений Труфляк в программе «Тема дня», «Сотрудник центра прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ в Индии» (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playli?lisPLAqcZxzZTUZIZRaOh6cvghv1wLN1_Um0q" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playli?<br />
lisPLAqcZxzZTUZIZRaOh6cvghv1wLN1_Um0q</a>) – рисунок 5.6.</p>
<p><img width="1536" height="864" class="wp-image-5304" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2640.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2640.png 1536w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2640-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2640-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2640-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1536px) 100vw, 1536px" alt="word image 2640 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 5.2 – Плейлист «Презентации»</p>
<p><img width="1477" height="825" class="wp-image-5305" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2641.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2641.png 1477w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2641-300x168.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2641-1024x572.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2641-768x429.png 768w" sizes="(max-width: 1477px) 100vw, 1477px" alt="word image 2641 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 5.3 – Плейлист «Лекции»</p>
<p><img width="1487" height="828" class="wp-image-5306" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2642.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2642.png 1487w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2642-300x167.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2642-1024x570.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2642-768x428.png 768w" sizes="(max-width: 1487px) 100vw, 1487px" alt="word image 2642 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 5.4 – Плейлист «Lectures»</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-5307" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2643.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2643.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2643-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2643-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2643-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2643-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 2643 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 5.5 – Плейлист «Лабораторные работы»</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-5308" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2644.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2644.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2644-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2644-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2644-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2644-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 2644 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 5.6 – Плейлист «Видео»</p>
<p>На сайте цента <a href="https://foresight.kubsau.ru" target="_blank" rel="noopener">https://foresight.kubsau.ru</a> в разделе «Новости» подробно освещены все мероприятия (43) с участием сотрудников (рисунок 5.7):</p>
<p>– «Транспортная логистика», 25.01.2019. 25 января состоялась встреча сотрудников и студентов факультета механизации с генеральным директором ООО «Транспортная логистика» Игорем Троянским.</p>
<p>– «Делегация ВНИИ риса», 06.02.2019. В центре прогнозирования и мониторинга состоялась встреча с представителями ВНИИ риса.</p>
<p>– «Развитие агроинженерного образования», 12.02.2019. В день российской науки по инициативе института механики и энергетики имени В. П. Горячкина РГАУ-МСХА состоялась видеоконференция «Развитие агроинженерного образования».</p>
<p>– «Семинар-совещание инженерно-технических работников края», 15.02.2019. 14 февраля представители факультета механизации приняли участие в семинаре-совещании инженерно-технических работников края «О ходе ремонта и подготовки техники к весенне-полевым работам 2019 года», проходившем на заводе Кубаньжелдормаш г. Армавира.</p>
<p>– «Семинар-обучение по посеву», 18.02.2019. 18 февраля компания «Агри 2.0 Точное земледелие» провела семинар-обучение в центре прогнозирования и мониторинга.</p>
<p>– «Экосистема автономного цифрового сельского хозяйства», 20.02.2019. 19 февраля состоялась презентация проекта «Экосистема автономного цифрового сельского хозяйства».</p>
<p>– «Завод «Радиан», 26.02.2019. Завод «Радиан» организовал семинары по обучению монтажу и наладке оборудования для автоматического контроля высева «СКИФ» и «СОРМАТ».</p>
<p>– «Агропромышленный форум юга России», 04.03.2019. В Ростове-на-Дону прошел Агропромышленный форум Юга России, где приняли участие представители центра прогнозирования и мониторинга Кубанскго ГАУ.</p>
<p>– «Делегация Японии», 18.03.2019. 15 марта в Кубанский ГАУ прибыла делегация из Японии.</p>
<p>– «Повышение квалификации специалистов АПК», 25.03.2019. На базе центра прогнозирования и мониторинга с 20 по 22 марта проводились курсы дополнительного профессионального образования.</p>
<p>– «Делегация Депинформатизации Минсельхоза России», 08.04.2019. Подписано соглашение с «Аналитическим центром Минсельхоза России».</p>
<p>– «Делегация Уральского НИИСХ», 09.04.2019. Центр прогнозирования и мониторинга с деловым визитом посетили руководитель Уральского НИИСХ и член совета национального союза селекционеров и семеноводов.</p>
<p>– «Дополнительное образование по точному земледелию», 19.04.2019.<br />
С 17 по 18 апреля представители агрохолдинга Волгоградской области проходили повышение квалификации по направлению «Точное земледелие».</p>
<p>– «Всероссийский конкурс на лучшую научную работу», 30.04.2019. Участие студентов во Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу<br />
в рамках работы центра мониторинга и прогнозирования.</p>
<p>– «Компания Bosch», 16.05.2019. 14 мая в конференц-зале впервые состоялась встреча руководства вуза с представителями компании Robert Bosch GmbH.</p>
<p>– «Интеллектуальные технологии возделывания ягодных культур», 16.05.2019. 15 мая состоялась защита диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук.</p>
<p>– «Erasmus week», 22.05.2019. Участие сотрудника центра мониторинга и прогнозирования в ежегодном мероприятии Политехнического института Брагансы.</p>
<p>– «Практический семинар», 27.05.2019. В центре прогнозирования и мониторинга провели практический семинар для фермеров из разных уголков страны.</p>
<p>– «Международный форум иностранных выпускников», 29.05.2019. Международная делегация посетила центр прогнозирования и мониторинга.</p>
<p>– «Практическое применение беспилотных летательных аппаратов в сельском хозяйстве», 17.06.2019. 13 июня на базе центра прогнозирования и мониторинга проводился семинар, организованный центром беспилотной авиации.</p>
<p>– «Информационные технологии на службе АПК», 17.06.2019. На прошлой неделе на базе Московского университета связи и информатизации состоялась третья Всероссийская конференция «Информационные технологии на службе АПК России».</p>
<p>– «Межмуниципальный бизнес-форум «Новый Кубанский продукт», 19.06.2019. 18 июня 2019 года в городе Новокубанске состоялся второй межмуниципальный бизнес-форум «Новый Кубанский продукт».</p>
<p>– «День Поля с AMAZONE», 02.07.2019. Сотрудники центра точного земледелия посетили второй Всероссийский день поля Amatechnica 2019 организованный компанией АО «Евротехника» в г. Самара.</p>
<p>– «Визит Министра Республики Дагестан», 02.07.2019. Министр информатизации, связи и массовых коммуникаций Республики Дагестан Сергей Снегирев с рабочим визитом посетил центр прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ.</p>
<p>– «Мечты и реальность цифрового АПК», 15.07.2019. Делегаты из Кубанского ГАУ посетили Всероссийский день поля в г. Пушкин Ленинградской области.</p>
<p>– «Климат, плодородие почв, агротехнологии», 15.07.2019. Участие руководителя центра в Международной научно-практической конференции «Климат, плодородие, агротехнологии».</p>
<p>– «Атташе по вопросам сельского хозяйства», 18.07.2019. 16 июля<br />
в рамках обучения слушатели посетили центр прогнозирования и мониторинга.</p>
<p>– «Координационный совет по селекции и семеноводству», 29.07.2019.<br />
С 24 по 26 июля в Уральском научно-исследовательском институте сельского хозяйства (г. Екатеринбург) проходила Международная научно-практическая конференция «Координационный совет по селекции и семеноводству зернофуражных культур».</p>
<p>– Визит профессора из Малайзии, 06.09.2019. В Кубанском ГАУ впервые состоялась открытая лекция профессора Малайского университета.</p>
<p>– «Цифровые методы определения характеристик тракторов», 20.09.2019. 19 сентября состоялась защита диссертации «Цифровые методы<br />
и средства определения функциональных характеристик сельскохозяйственных тракторов».</p>
<p>– «Сотрудник центра в Индии», 04.10.2019. Делегация вуза прибыла<br />
в индийский колледж COER с деловым визитом.</p>
<p>– «Кубанская ярмарка», 04.10.2019. Вуз представил новейшие научные разработки на агропромышленной выставке.</p>
<p>– «Обмен опытом», 15.10.2019. Сотрудник центра мониторинга и прогнозирования поделился опытом научных исследований c преподавателями<br />
и студентами Аграрного факультета колледжа COER (Индия, г. Рурки).</p>
<p>– «Делегация из Белоруссии», 17.10.2019. Делегация из Белоруссии посетила центр прогнозирования и мониторинга.</p>
<p>– «Цифровой агрохолдинг», 17.10.2019. Центр прогнозирования и мониторинга принял участие в международном форуме.</p>
<p>– «Будущее агропромышленного комплекса в условиях цифровой трансформации», 22.10.2019. В рамках открывшейся университетской «Точки кипения» прошла панельная дискуссия, в которой принял участие сотрудник центра Евгений Труфляк.</p>
<p>– «Центр прогнозирования и мониторинга в МГУ», 01.11.2019. Представитель центра прогнозирования и мониторинга вуза посетил всероссийский форум.</p>
<p>– «Югагро», 20.11.2019. На «Югагро» была представлена продукция малых инновационных предприятий КубГАУ.</p>
<p>– «Стратегия и практика успешного бизнеса», 22.11.2019. На Межрегиональном форуме «Стратегия и практика успешного бизнеса» выступили представители центра прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ.</p>
<p>– «Дрон для агрономов», 06.12.2019. Центр беспилотной авиации провел семинар «Цифровизация и практическое применение беспилотных авиационных систем в сельском хозяйстве».</p>
<p>– «День науки в агрохолдинге», 07.12.2019. «День науки» на базе сервисного центра имени В. Т. Губаря.</p>
<p>– «Техническое и технологическое развитие зерновой отрасли России», 16.12.2019. Научные сотрудники вуза стали участниками международной конференции.</p>
<p>– «Внедрение инновационных разработок в реальный сектор экономики», 19.12.2019. В центре прогнозирования и мониторинга на факультете механизации провели круглый стол, посвященный внедрению инновационных разработок в реальный сектор экономики.</p>
<p><img width="1920" height="1080" class="wp-image-5309" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2645.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2645.png 1920w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2645-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2645-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2645-768x432.png 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2645-1536x864.png 1536w" sizes="(max-width: 1920px) 100vw, 1920px" alt="word image 2645 Прогнозирование и мониторинг научно-технологического развития АПК: технологии точного сельского хозяйства, включая автоматизацию и роботизацию"></p>
<p>Рисунок 5.7 – Раздел «Новости»</p>
<h2><strong>ОБЩИЕ ВЫВОДЫ</strong></h2>
<p>Согласно техническому заданию в 2019 г. выполнено следующее:</p>
<p>1. Актуализация фактического состояния нормативно-правовой документации по беспилотным авиационным системам.</p>
<p>В результате выполненной работы проанализирована норматив-но-правовая документация использования беспилотных авиационных систем<br />
в 44 странах – Россия, США, Израиль, Канада, Германия, Франция, Великобритания, Нидерланды, Швеция, Швейцария, Австрия, Венгрия, Бельгия, Ирландия, Норвегия, Хорватия, Кипр, Греция, Болгария, Италия, Чешская Республика, Эстония, Польша, Португалия, Испания, Дания, Финляндия, Китай, Южная Корея, Индия, Япония, Австралия, Аргентина, Азербайджан, Бразилия, Камерун, Египет, Индонезия, Иран, Мексика, Шри-Ланка, Турция, Венесуэла, Украина.</p>
<p>Использование дронов в большинстве стран разрешены при различных условиях в зависимости от законодательства.</p>
<p>Запрещено использование беспилотников в Иране. По данным национального авиационного управления Шри-Ланки – беспилотники в ней запрещены на неопределенный срок.</p>
<p>Публикация «Нормативно-правовая база использования беспилотных авиационных систем / Н. Ю. Курченко, Е. В. Труфляк. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – 41 с.» размещена на сайте <a href="https://foresight.kubsau.ru/upload/iblock/4a6/4a6710690321529aeba42ec101f12b72.pdf" target="_blank" rel="noopener">https://foresight.kubsau.ru/upload/iblock/4a6<br />
/4a6710690321529aeba42ec101f12b72.pdf</a>.</p>
<p>2. Выполнено изучение и анализ состояния современного рынка технологического оборудования и тенденций развития в области цифрового сельского хозяйства. На основе полученного материала подготовлена работа «Техническое обеспечение цифрового сельского хозяйства : лаб. практикум / Е. В. Труфляк. – Краснодар : КубГАУ, 2019. – 149 с.». В практикуме представлен порядок проведения лабораторных работ по интеллектуальным техническим средствам АПК, позволяющих овладеть практическими навыками систем цифрового сельского хозяйства.</p>
<p>Предназначен для специалистов в области сельского хозяйства, преподавателей, аспирантов и студентов аграрных вузов.</p>
<p>Работа размещена на сайте Центра <a href="https://foresight.kubsau.ru/upload/iblock/c81/c81706e33c29cae103ef1537d9bd3b56.pdf" target="_blank" rel="noopener">https://foresight.kubsau.ru/upload/<br />
iblock/c81/c81706e33c29cae103ef1537d9bd3b56.pdf</a>.</p>
<p>3. Выполнено изучение кадрового, интеллектуального, методического обеспечения научных и образовательных учреждений по цифровизации АПК и оценка научно-технологических тенденций и их индикаторов развития в РФ.</p>
<p>Учитывая тенденции времени, актуальным вопросом является улучшение системы подготовки кадров для сельского хозяйства. В образовательных программах важно предусмотреть изучение дисциплин, направленных на изучение технологий точного земледелия.</p>
<p>Центром прогнозирования и мониторинга с 14 ноября по 10 декабря 2019 г. был организован сбор информации по использованию в учебном процессе высших учебных заведений, подведомственных Минсельхозу России, дисциплин связанных с изучением технологий точного земледелия. Для этого были разосланы анкеты в 54 вуза, в результате которого проанализировано 46 вузов.</p>
<p>На основании полученных данных составлены рейтинги по наибольшему количеству:</p>
<p>– факультетов (3), на которых обучают данным дисциплинам – Волгоградский ГАУ, Вятская ГСХА, Кубанский ГАУ, Новосибирский ГАУ, Ярославская ГСХА;</p>
<p>– специальностей (направлений подготовки) – Новосибирский ГАУ (9), Башкирский ГАУ (6), Кубанский ГАУ (6), Брянский ГАУ (5), Вятская ГСХА (5), Донской ГАУ (5), Красноярский ГАУ (5), Самарский ГАУ (5), Северного Зауралья ГАУ (5), Уральский ГАУ (5), Ярославская ГСХА (5);</p>
<p>– часов на дисциплины – Донской ГАУ (2124 ч), ГУЗ (1656 ч), Башкирский ГАУ (1548 ч), Северного Зауралья ГАУ (1188 ч), Кубанский ГАУ<br />
(864 ч), РГАУ-МСХА (648 ч), Уральский ГАУ (648 ч), Ярославская ГСХА (648 ч), Саратовский ГАУ (612 ч), Самарский ГАУ (576 ч).</p>
<p>4. Выполнена актуализация прогноза о перспективных направлениях технологического развития АПК РФ в области цифровизации сельского хозяйства.</p>
<p>Центром прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ с целью изучения отношения к данному проекту экспертов разных регионов, связанных в той или иной мере с цифровыми технологиями в октябре 2019 г. проведено анкетирование по направлению «Цифровое сельское хозяйство». При составлении основных вопросов и технологических трендов учитывалась дорожная карта и задачи по реализации ведомственного проекта.</p>
<p>В анкетировании приняли участие 73 эксперта (66 % – наука<br />
и образование, 27 % – бизнес, 5 % – административные органы) из Санкт-Петербурга, Москвы; Ленинградской, Московской, Ростовской, Пензенской, Рязанской, Орловской, Волгоградской, Свердловской, Самарской, Псковской, Тульской, Омской, Смоленской, Курской, Новосибирской, Калужской, Ульяновской, Саратовской, Воронежской областей; Краснодарского, Приморского и Ставропольского края; республики Татарстан, Башкортостан, Кабардино-Балкарской, Дагестан, Северной Осетии, Крым, Чувашской, Удмуртской, Карелии.</p>
<p>Анкетирование состояло из 20 основных вопросов, 6 вопросов по выполнению перспективных направлений в 2020–2030 гг. и проводилось в формате тестирования на сайте центра foresight.kubsau.ru.</p>
<p>На основании проведенного опроса экспертов, связанных с вопросами цифровизации в сельском хозяйстве, можно констатировать, что у большей части опрошенных есть понимание вопросов, связанных с цифровой экономикой и цифровым сельским хозяйством, они знакомы с ведомственным проектом Минсельхоза России «Цифровое сельское хозяйство». При этом шесть предложенных проектов цифровых систем в программе: «Цифровые технологии в управлении АПК», «Цифровое землепользование», «Умное поле», «Умный сад», «Умная теплица», «Умная ферма» не охватывают все основные направления для цифровизации.</p>
<p>Реализация большей части направлений, представленных в проекте по мнению респондентов, может произойти в 2026–2030 гг. или после 2030 г.,<br />
а не в 2024 г., как указано в программе.</p>
<p>Ускорению цифровизации отрасли будет способствовать субсидирование и льготное кредитование приобретения элементов цифровых технологий.</p>
<p>Актуальным направлением является создание экспериментальных цифровых фермерских хозяйств на базе учебно-опытных хозяйств Минсельхоза России и коммерческих предприятий, создание системы подготовки специалистов сельскохозяйственных предприятий на базе таких центров.</p>
<p>Представленные в проекте направления в целом эксперты относят к высокой важности для реализации в России.</p>
<p>Анализируя полученные результаты можно констатировать, что у большей части опрошенных экспертов есть понимание терминов цифровая экономика (92 %) и цифровое сельское хозяйство (97 %). При этом 82 % экспертов знакомы с ведомственным проектом, на основе которого подготовлены вопросы анкеты.</p>
<p>Большинство респондентов (44 %) полагают, что не достаточно шесть предложенных проектов цифровых систем в программе: «Цифровые технологии в управлении АПК», «Цифровое землепользование», «Умное поле», «Умный сад», «Умная теплица», «Умная ферма».</p>
<p>На некоторых форумах, проводившихся в 2019 г. прозвучали заключения, что программа направлена в целом на крупный бизнес, однако опрос экспертов говорит об обратном (70 % считают, что программа направлена не только на крупных игроков в сфере агробизнеса, но и на фермерские хозяйства).</p>
<p>Далее представлены вопросы, которые указаны в дорожной карте проекта. Мнения экспертов являются менее оптимистичными:</p>
<p>– 52 % считают, что доля землепользователей, внедривших использование элементов цифровых технологий, не достигнет 50 % в 2024 г.;</p>
<p>– 46 % уверены, что не будет обеспечена к 2024 г. оцифровка и внесение в единую геоинформационную систему не менее 90 % площадей сельскохозяйственных садовых многолетних насаждений;</p>
<p>– 44 % полагают, что не будет выполнено обеспечение средствами сбора данных о состоянии почв, растений и окружающей среды не менее 70 % площадей промышленных садов к 2024 г.;</p>
<p>– 41 % считают, что не снизится объем импорта овощей за счет внедрения системы «Умная теплица» более чем на 70 % к 2024 г.</p>
<p>При этом 53 % считают, что автоматизированные системы откорма, дойки и мониторинга здоровья поголовья скота могут повысить надои на 30–40 %.</p>
<p>Основной целью внедрения цифровых технологий и платформенных решений является повышение производительности на «цифровых» сельскохозяйственных предприятиях в 2 раза к 2024 г., однако 42 % экспертов считают, что этого не произойдет.</p>
<p>Следующие вопросы относятся к системе образования и повышению квалификации специалистов АПК.</p>
<p>Респонденты считают актуальным создание экспериментальных цифровых фермерских хозяйств на базе учебно-опытных хозяйств Минсельхоза России и коммерческих предприятий (95 %).</p>
<p>Целесообразно создание системы подготовки специалистов сельскохозяйственных предприятий в области цифрового сельского хозяйства полагают 99 % опрошенных.</p>
<p>При этом есть необходимость создания центров компетенций на базе аграрных вузов (98 %) и целесообразно проведение переподготовки специалистов сельскохозяйственных предприятий на базе таких центров (99 %).</p>
<p>Цифровой «точкой входа» сельхозпредприятия 45 % экспертов считают использование сервисов подачи отчетности в электронном виде, а также сервисов ОФД (подключенные кассы) и маркировки (Меркурий).</p>
<p>При этом будет способствовать ускорению цифровизации отрасли субсидирование приобретения цифровых технологий (83 %) и льготное кредитование приобретения цифровых технологий (88 %).</p>
<p>Перспективы реализации технологических трендов по важности<br />
и ожидаемым срокам выполнения.</p>
<p>Рассматриваемые направления эксперты относят к высокой важности для реализации в 2020–2030 гг. (по убыванию в процентном соотношении):</p>
<p>– внедрение цифровых технологий и платформенных решений повысит производительность на «цифровых» сельскохозяйственных предприятиях<br />
в 2 раза (считают важным 62 % экспертов);</p>
<p>– оцифровка и внесение в единую геоинформационную систему не менее 90 % площадей сельскохозяйственных садовых многолетних насаждений (55 %);</p>
<p>– снижение объема импорта овощей за счет внедрения системы «Умная теплица» более чем на 70 % (52 %);</p>
<p>– обеспечение средствами сбора данных о состоянии почв, растений<br />
и окружающей среды не менее 70 % площадей промышленных садов (49 %);</p>
<p>– увеличение объема производства овощей, выращенных в защищенном грунте за счет внедрения системы «Умная теплица» на 45 % (49 %);</p>
<p>– доля землепользователей, внедривших использование элементов цифровых технологий до 50 % – важность высокая (42 %).</p>
<p>Обобщая результаты по предполагаемым срокам выполнения перспективных направлений в 2020–2030 гг. на основании экспертного опроса получим (по убыванию в процентном соотношении):</p>
<p>– доля землепользователей, внедривших использование элементов цифровых технологий до 50 % – 2026–2030 гг. (считают 52 % экспертов);</p>
<p>– увеличение объема производства овощей, выращенных в защищенном грунте за счет внедрения системы «Умная теплица» на 45 % – 2026–2030 гг. (52 %);</p>
<p>– снижение объема импорта овощей за счет внедрения системы «Умная теплица» более чем на 70 % – 2026–2030 гг. (51 %);</p>
<p>– внедрение цифровых технологий и платформенных решений повысит производительность на «цифровых» сельскохозяйственных предприятиях<br />
в 2 раза – 2026–2030 гг. (48 %);</p>
<p>– обеспечение средствами сбора данных о состоянии почв, растений<br />
и окружающей среды не менее 70 % площадей промышленных садов – 2026–2030 гг. (42 %);</p>
<p>– оцифровка и внесение в единую геоинформационную систему не менее 90 % площадей сельскохозяйственных садовых многолетних насаждений – 2021–2025 гг. (39 %).</p>
<p>5. В 2019 г. актуализированы разделы сайта:</p>
<p>– «Новости» – добавлено 43 новых материала;</p>
<p>– «Эксперты» – зарегистрировано 42 новых эксперта (в том числе, сотрудники вузов – 28, сотрудники НИИ – 12, сотрудники предприятий отрасли – 2);</p>
<p>– «Публикации» – добавлено 5 новых публикаций.</p>
<p>Разработаны структуры данных и спроектирована архитектура «Личного кабинета эксперта», который является неотъемлемой частью системы управления контентом и реализуется на базе CMS 1C-Bitrix. Задачами личного кабинета являются: корректировка данных пользователя, сервис оповещений<br />
(в виде сообщений электронной почты).</p>
<p>Реализованы сервисы автоматической обработки анкет для использования в виде диаграмм в презентационных и иных целях. Обеспечивается выгрузка диаграмм в форматах pdf и png.</p>
<p>Проведен частичный редизайн сайта, подготовлены макеты для проведения полного редизайна.</p>
<p>Выполнен второй этап разработки модуля «База знаний по точному сельскому хозяйству» (реализация основных структур хранения, адаптация<br />
к существующей системе управления контентом).</p>
<p>Основная задача модуля «База знаний по точному сельскому хозяйству» заключается в формировании источника верифицированных данных в области точного сельского хозяйства, реализации системы удобной подачи материалов пользователям через различные каналы (сайт, мессенджеры, RSS, электронная почта и другие). В настоящее время разработаны основные структуры хранения данных на базе CMS 1C-Bitrix, реализованы методы загрузки данных в систему в ручном режиме, реализована система тегирования материалов, реализована система размещения материалов на сайте, внедрены счетчики количества скачиваний материалов.</p>
<p>6. Центром прогнозирования и мониторинга в 2018–2019 гг. организован через региональные органы управления сбор статистической информации по использованию элементов точного сельского хозяйства.</p>
<p>При сборе статистической информации рассматривалось 12 элементов точного земледелия: определение границ полей с использованием спутниковых систем навигации; локальный отбор проб почвы в системе координат; параллельное вождение; спутниковый мониторинг транспортных средств; дифференцированное опрыскивание сорняков; дифференцированное внесение удобрений; дифференцированный посев; дифференцированное орошение; дифференцированная обработка почвы по почвенным картам; мониторинг состояния посевов с использованием дистанционного зондирования (аэро- или спутниковая фотосъемки); составление цифровых карт урожайности, составление карт электропроводности почв и 6 элементов точного животноводства: мониторинг качества продукции животноводства; электронная база данных производственного процесса; идентификация и мониторинг отдельных особей животных с использованием современных информационных технологий (рацион кормления, удой, привес, температура тела, активность), удовлетворение их индивидуальных потребностей; мониторинг состояния здоровья стада; роботизация процесса доения; автоматическое регулирование микроклимата<br />
и контроль за вредными газами в животноводческих помещениях.</p>
<p>Рейтинги составлены на основе данных, полученных из 52 регионов,<br />
и достоверность полученных результатов обусловлена, прежде всего, достоверностью представления информации региональными органами в сфере АПК.</p>
<p>При анализе учитывалось количество хозяйств в регионе (по районам)<br />
с указанием их названия, площади и используемых элементов точного сельского хозяйства (земледелия и животноводства); количество сотрудников (по районам), прошедших повышение квалификации по направлению «Точное сельское хозяйство».</p>
<p>Элементы точного земледелия из 52 проанализированных регионов используются в 40 (1930 хозяйств, на площади 12,5 млн га).</p>
<p>По результатам анализа использования элементов точного земледелия<br />
с учетом количества хозяйств в лидерах находятся Краснодарский край<br />
(189 хозяйств), Воронежская область (182 хозяйства), Нижегородская область (144 хозяйства). Конкурируют по показателю общей площади, на которой используются элементы точного земледелия Воронежская область<br />
(1129 тыс. га), Краснодарский край (963 тыс. га), Омская область<br />
(921 тыс. га).</p>
<p>Большая часть экспертов считает, что точное земледелие в классическом понимании связано, прежде всего, с дифференцированным внесением удобрений. Среди лидеров по использованию этой технологии можно выделить Краснодарский край (54 хозяйства), Воронежскую область (51 хозяйство), Белгородскую область (30 хозяйств).</p>
<p>В результате анализа определено, что около 1290 хозяйств (67 %) из про-анализированных регионов используют определение границ полей, 1142 (59 %) – параллельное вождение, 973 (50 %) – спутниковый мониторинг транс-портных средств, 460 (24 %) – локальный отбор проб в системе координат, 285 (15 %) – дифференцирование опрыскивание сорняков, 225<br />
(12 %) – дифференцированное внесение удобрений, 164 (8) – дифференцированный посев, 100 (5 %) – составление цифровых карт урожайности, 65<br />
(3 %) – мониторинг состояния посевов с использование ДЗЗ, 40 (2 %) – дифференцированное орошение.</p>
<p>На основании анализа количества хозяйств в Краснодарском крае около 30 % точное земледелие внедрено в хозяйствах с площадью 1–3 тыс. га, 27 % с площадью 5–10 тыс. га; Воронежской области 26 % – до 1 тыс. га, 22 % – 3–5 тыс. га; Нижегородской – 39 % – 1–3 тыс. га, 24 % – 3–5 тыс. га; Новосибирской 52 % – 3–10 тыс. га, 24 % – 1–3 тыс. га; Республике Башкортостан 33 % – 1–3 тыс. га, 20 % – 3–5 тыс. га; Волгоградской области 32 % –<br />
1–3 тыс. га, 19 % – 3–5 тыс. га.</p>
<p>Элементы точного животноводства используются в 35 регионах, 789 хозяйствах с общим поголовьем 1,7 млн КРС.</p>
<p>По количеству хозяйств, использовавших элементы точного животноводства доминируют Свердловская область (83 хозяйства), Республика Башкортостан (68 хозяйств), Удмуртская Республика (67 хозяйств); по поголовью КРС – Омская область (218 тыс.), Свердловская область (151 тыс.), Воронежская область (119 тыс.).</p>
<p>В результате анализа определено, что около 660 хозяйств (84 %) из проанализированных регионов используют мониторинг качества продукции животноводства, 589 (75 %) – электронную базу данных производственного процесса, 451 (57 %) – идентификацию и мониторинг отдельных особей животных, 273 (35 %) – мониторинг состояния здоровья стада, 106 (13 %) – роботизацию процесса доения, 88 (11 %) – автоматическое регулирование микроклимата.</p>
<p>На основании анализа количества хозяйств в Свердловской области около 30 % точное животноводство внедрено в хозяйствах с поголовьем 1–<br />
2 тыс. голов, Республике Башкортостан 28 % – 1–2 тыс. голов, Удмуртской республике 45 % – 0,5–2 тыс. голов.</p>
<p>7. Подготовлены учебно-методические, научные и аналитические материалы по направлению «Цифровое сельское хозяйство» (см. приложение):</p>
<p>– Точное сельское хозяйство : учебник / Е. В. Труфляк [и др.]. – Краснодар : КубГАУ, 2019. – 522 с.;</p>
<p>– Дистанционный мониторинг посевов риса и алгоритм выявления неоднородностей / Е. В. Труфляк, С. И. Скубиев, В. В. Цыбулевский, Н. В. Малашихин // Современные проблемы дистанционного зондирования Земли из космоса. – 2019. – Т. 16, № 3. – С. 110–124. – DOI : 10.21046/2070-7401-2019-16-3-110-124 (статья в базе данных Scopus);</p>
<p>– Труфляк Е. В. Оценка готовности регионов к внедрению цифровых технологий в сельское хозяйство / Е. В. Труфляк, Н. Ю. Курченко // Вестник Самарского государственного экономического университета. – 2019. – № 10 (180). – С. 22–26 (статья ВАК);</p>
<p>– Разработка программного обеспечения для обработки снимков, полученных с беспилотных летательных аппаратов / Н. Ю. Курченко,<br />
Я. А. Ильченко, Е. В. Труфляк. – Краснодар : КубГАУ, 2019. – 60 с.;</p>
<p>– Мониторинг и прогнозирование в области цифрового сельского хозяйства по итогам 2018 г. / Е. В. Труфляк, Н. Ю. Курченко, А. С. Креймер. – Краснодар : КубГАУ, 2019. – 100 с.;</p>
<p>– Цифровая трансформация сельского хозяйства России: офиц. изд. –<br />
М. : ФГБУ «Росинформагротех», 2019. – 80 с.;</p>
<p>– Труфляк Е. В. Результаты анкетирования по направлению ведомственного проекта «Цифровое сельское хозяйство» / Е. В. Труфляк, А. С. Креймер, Н. Ю. Курченко. – Краснодар : КубГАУ, 2019. – 20 с.;</p>
<p>– Труфляк Е. В. Техническое обеспечение цифрового сельского хозяйства : лаб. практикум / Е. В. Труфляк. – Краснодар : КубГАУ, 2019. – 149 с.;</p>
<p>– Труфляк Е. В. Использование в аграрных вузах технологий точного земледелия / Е. В. Труфляк. – Краснодар : КубГАУ, 2019. – 24 с;</p>
<p>– Курченко Н. Ю. Нормативно-правовая база использования беспилотных авиационных систем / Н. Ю. Курченко, Е. В. Труфляк. – Краснодар : КубГАУ, 2020. – 41 с;</p>
<p>Создан ютуб-канал «Центр прогнозирования и мониторинга Кубанского ГАУ» (дата регистрации: 3 января 2019 г.), на котором размещено 41 видео (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/channel/UCrPRhGM7-WpIM2Z3MmfRjsQ/videos" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/channel/UCrPRhGM7-WpIM2Z3<br />
MmfRjsQ/videos</a>).</p>
<p>Подготовлены и размещены на ютуб-канале:</p>
<p>– две презентации (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZLmm6TxT2VI_rUFEUJXm_uy" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=<br />
PLAqcZxzZTUZLmm6TxT2VI_rUFEUJXm_uy</a>);</p>
<p>– четыре лекции (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZLyxsodbfBoTeYEHLRk6wpd" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?list=<br />
PLAqcZxzZTUZLyxsodbfBoTeYEHLRk6wpd</a>);</p>
<p>– две лекции на английском языке (режим доступа: <a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZI2bFBpG0JpAHh_Dh7_-_9v" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/<br />
playlist?list=PLAqcZxzZTUZI2bFBpG0JpAHh_Dh7_-_9v</a>);</p>
<p>– 13 лабораторных работ (<a href="https://www.youtube.com/playlist?list=PLAqcZxzZTUZI4d_OV4dP5EGvF51toYEPD" target="_blank" rel="noopener">https://www.youtube.com/playlist?<br />
list=PLAqcZxzZTUZI4d_OV4dP5EGvF51toYEPD</a>)</p>
<p>8. Подготовлено по результатам работы Центра:</p>
<p>– 15 публикаций;</p>
<p>– 9 аналитических справок;</p>
<p>– 3 прогнозных материала;</p>
<p>– проведено 19 научных и учебных мероприятий.</p>
<h2><strong>СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ</strong></h2>
<ol>
<li>АгроНТИ – технологии для развития агробизнеса [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://agronti.belapk.ru.</li>
<li>Алгоритм вычисления положения БПЛА с использованием системы машинного зрения / А. А. Ардентов [и др.]. // Программные системы: теория и приложения. – 2012. – № 3. – С. 23–29.</li>
<li>Ассоциация БПЛА в Японии [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://www.juav.org.</li>
<li>Блохина, С. Ю. Применение дистанционного зондирования в точном земледелии / С. Ю. Блохина // Вестн. Российской с.-х. науки. – 2018. – № 5.</li>
<li>БПЛА в Израиле [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://uavcoach.com.</li>
<li>Обработка и анализ изображений в задачах машинного зрения: курс лекций и практ. занятий / Ю. В. Визильтер [и др.]. – М. : Физматиз, 2010. – 671 с.</li>
<li>Википедия : свободная энциклопедия [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://ru.wikipedia.org.</li>
<li>Воронков, В. Н. Специальное программное обеспечение для контроля и управления производством сельскохозяйственной продукции : учеб.-метод. пособие / В. Н. Воронков, И. В. Воронков. – М. : РИАМА, 2014. – 20 с.</li>
<li>Воронков, В. Н. Сравнительный анализ технических, эксплуатационных и экономических характеристик устройств параллельного вождения сельхозтехники : учеб.-метод. пособие / В. Н. Воронков, И. В. Воронков. – М. : Минсельхоз РФ, 2015. – 23 с.</li>
<li>Проектирование единой геоинформационной платформы на основе данных ДЗЗ / В. В. Самойлов [и др.]. // XLVI научные чтения памяти<br />
К. Э. Циолковского. – 2012. – С. 21–32.</li>
<li>Воронков, И. В. Методы обнаружения сорняков, болезней и вредителей растений по данным дистанционного зондирования / И. В. Воронков, И. М. Михайленко // Современные проблемы дистанционного зондирования Земли из космоса. – 2016. – Т. 13, № 3. – С. 72–83.</li>
<li>Воронков, И. В. Разработка методов и аппаратно-программных средств автоматизированного мониторинга и контроля выполнения посевных работ : дисс. … канд. техн. наук / И. В. Воронков. – М., 2018. – 147 с.</li>
<li>Генеральное управление гражданской авиации Индии [Электронный ресурс]. – Режим доступа : <a href="http://dgca.nic.in" target="_blank" rel="noopener">http://dgca.nic.in</a>.</li>
<li>ГОСТ Р 56084-2014. Глобальная навигационная спутниковая система. Система навигационно-информационного обеспечения координатного земледелия. Термины и определения. – Введ. 2015–03–01. – М. : Стандартинформ, 2014. – 6 с.</li>
<li>Универсальный биофотометр-эксергометр оптического излучения / А. П. Гришин [и др.]. // Плодоводство и Ягодоводство России. – 2012. –<br />
Т. 33. – С. 93–99.</li>
<li>Департамент транспорта США [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.transportation.gov.</li>
<li>Жалнин, Э. В. Методологические аспекты механизации производства зерна в России / Э. В. Жалнин. – М. : Полиграф сервис, 2012. – 368 с.</li>
<li>Журнал «Агроинвестор» [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://www.agroinvestor.ru.</li>
<li>Практикум по точному земледелию / А. И. Завражнов [и др.]. – СПб. : Лань, 2015. – 224 с.</li>
<li>Законодательство Японии [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://dronelawjapan.com.</li>
<li>Законы в Интернете [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://www.gesetze-im-internet.de.</li>
<li>Издательский дом Connect [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://www.connect-wit.ru.</li>
<li>Интеллектуальная система управления электроприводным энергосредством / А. Ю. Измайлов [и др.] // Энергообеспечение и энергосбережение в сельском хозяйстве : тр. Междунар. науч.-техн. конф. – М. : ВИМ, 2014. – Т. 5. – С. 61–64.</li>
<li>Измайлов, А. Ю. Инновационные механизированные технологии и автоматизированные технические системы для сельского хозяйства /<br />
А. Ю. Измайлов, Я. П. Лобачевский // Сб. науч. докл. ВИМ. – М., 2012. –<br />
Т. 1. – С. 31–44.</li>
<li>Актуальные проблемы создания новых машин для промышленного садоводства / А. Ю. Измайлов [и др.] // Сельскохозяйственные машины<br />
и технологии. – 2013. – № 3. – С. 20–23.</li>
<li>Концепция развития системы оперативного управления и предупредительной диагностики технического состояния автотранспортных и других мобильных технических средств / А. Ю. Измайлов [и др.]. – М. : ВИМ, 2014.</li>
<li>Измайлов, А. Ю. Точное земледелие – проблемы и пути решения / А. Ю. Измайлов, Г. И. Личман, Н. М. Марченко // Сельскохозяйственные машины и технологии. – 2010. – № 5.– С. 9–14.</li>
<li>Инженерный центр Геомир [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://www.geomir.ru.</li>
<li>Инновационная техника для животноводства (по материалам Международной выставки Euro Tier–2012) : науч. аналит. обзор. – М. : Росинформагротех, 2013. – 208 с.</li>
<li>КБ «Панорама» [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://gisinfo.ru.</li>
<li>Использование инновационных технологий координатного (точного) земледелия в сельском хозяйстве Самарской области : монография /<br />
С. В. Машков [и др.]. – Кинель : РИЦ СГСХА, 2016. – 200 с.</li>
<li>Меньшаев, Р. А. Анализ показателей и устройств для картографирования полей / Р. А. Меньшаев, С. А. Подымов, Т. С. Гриднева // Вклад молодых ученых в аграрную науку : материалы Междунар. науч.-практ. конф. – Кинель : РИЦ СГСХА, 2015. – С. 227–231.</li>
<li>Методические рекомендации по подготовке отчетов о патентном обзоре (патентный ландшафт) – Утверж. 2017–01–23. – М. : Роспатент, 2017. – 16 с.</li>
<li>Нугманов, С. С. Методы и технические средства для измерения твердости почвы в координатном земледелии : монография / С. С. Нугманов, С. И. Васильев, Т. С. Гриднева. – Самара, 2009. – 168 с.</li>
<li>Новые устройства для агрооценки почвы / С. С. Нугманов, С. И. Васильев, А. В. Иваськевич, Т. С. Гриднева // Сельский механизатор. – 2011. – № 11. – С. 10–11.</li>
<li>Определение показателей состояния почвы в точном земледелии / С. С. Нугманов, С. И. Васильев, А. В. Иваськевич, Т. С. Гриднева // Роль молодых ученых в реализации национального проекта «Развитие АПК» : сб. материалов Междунар. науч.-практ. конф. МГАУ им. В. П. Горячкина. –<br />
М., 2007. – С. 67–70.</li>
<li>Нугманов, С. С. ТЗ: обнадеживающие перспективы / С. С. Нугманов, С. И. Васильев, М. В. Сазонов // Сельский механизатор. – 2007. –<br />
№ 3. – С. 22.</li>
<li>План мероприятий («дорожная карта») «Аэронет» Национальной технологической инициативы.</li>
<li>Пестунов, И. А. Автоматизированная оценка всходов сельскохозяйственных культур по данным съемки с беспилотных летательных аппаратов / И. А. Пестунов, П. В. Мельников, С. А. Рылов // Применение средств дистанционного зондирования Земли в сельском хозяйстве : Материалы II Всеросс. науч. конф. с международным участием. – СПб : Агрофиз. НИИ, 2018. –<br />
С. 253–260.</li>
<li>Применение средств химизации в системе точного земледелия : метод. рекомендации / под общ. ред. А. А. Артюшина. – М. : ФГБНУ ВИМ, 2015. – 81 с.</li>
<li>Руководство по информации и услугам правительства Нидерландов [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://wetten.overheid.nl.</li>
<li>Рунов, Б. А. Основы технологии точного земледелия. Зарубежный<br />
и отечественный опыт / Б. А. Рунов, Н. В. Пильникова. – 2-е изд., исправ.<br />
и доп. – СПб. : АФИ, 2012. – 120 с.</li>
<li>Сайт Бозон [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://bozon-aero.ru.</li>
<li>Сайт компании Case IH [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.caseih.com.</li>
<li>Сайт компании Fendt [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://www.fendt.com.</li>
<li>Сайт Корейского управления гражданской авиации [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://koca.go.kr.</li>
<li>Сайт Минсельхоза России [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://mcx.ru.</li>
<li>Сайт Министерства инфраструктуры и окружающей среды Нидерландов [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.ilent.nl.</li>
<li>Сайт Министерства сельского хозяйства США [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.usda.gov.</li>
<li>Сайт Министерства транспорта Великобритании [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://maailm.tk.</li>
<li>Сайт Министерства экологии, устойчивого развития, транспорта<br />
и жилищного строительства Франции [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.ecologique-solidaire.gouv.fr.</li>
<li>Сайт Национальной ассоциации участников рынка робототехники [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://robotunion.ru.</li>
<li>Сайт новинок в управлении сельхозтехникой [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.mcelettronica.it.</li>
<li>Сайт правительства Канады. Транспорт [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.tc.gc.ca.</li>
<li>Сайт систем беспроводного мониторинга влажности почвы и погоды Caipos [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://www.caipos.com.</li>
<li>Сайт ситуационных центров [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://www.ситцентр.рф.</li>
<li>Сайт службы гражданской авиации Греции [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://uas.hcaa.gr.</li>
<li>Сайт СоХабра [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://sohabr.net.</li>
<li>Сайт точной посадки [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.precisionplanting.com.</li>
<li>Сайт Универсальной системы контроля высева [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://ускв.рф.</li>
<li>Сайт Управления гражданской авиацией Австралии [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.casa.gov.au.</li>
<li>Сайт Управления гражданской авиацией Великобритании [Электронный ресурс]. – Режим доступа : <a href="http://www.caa.co.uk" target="_blank" rel="noopener">http://www.caa.co.uk</a>.</li>
<li>Сайт Управления гражданской авиации Израиля [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://caa.gov.il.</li>
<li>Сайт Управления гражданской авиацией Норвегии [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://luftfartstilsynet.no.</li>
<li>Сайт Федерального авиационного управления Германии [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://www.lba.de.</li>
<li>Сайт Федерального управления гражданской авиации США [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.faa.gov.</li>
<li>Сайт Федерального управления гражданской авиации Швейцарии [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.bazl.admin.ch.</li>
<li>Сайт Центра продовольствия и сельскохозяйственного бизнеса университета Пердью [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://agribusiness.purdue.edu.</li>
<li>Сайт Aggeek [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://aggeek.net.</li>
<li>Сайт Austro Control [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.austrocontrol.at.</li>
<li>Сайт Cropio [Электронный ресурс]. – Режим доступа : ttps://about.cropio.com/ru.</li>
<li>Сайт Darpas [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://www.darpas.nl.</li>
<li>Сайт Drone industry insights [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.droneii.com.</li>
<li>Сайт FoodNet [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://www.nti2035.ru.</li>
<li>Сайт Hrvatska kontrola zračne plovidbe [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://www.crocontrol.hr.</li>
<li>Сайт IAA [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.iaa.ie.</li>
<li>Сайт JOZ [Электронный ресурс]. – Режим доступа : https://www.joz.nl.</li>
<li>Сайт Robotrends [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://robotrends.ru.</li>
<li>Сайт Transport styrelsen [Электронный ресурс]. – Режим доступа : http://www.transportstyrelsen.se.</li>
<li>Смирнов, И. Г. Разработка технологических процессов и технических средств для интеллектуальных технологий возделывания кустарниковых ягодных культур : дисс. &#8230; д-ра техн. наук : 05.20.01 / Смирнов И. Г. –<br />
М., 2019. – 432 c.</li>
<li>Спутниковый мониторинг объектов [Электронный ресурс]. – Режим доступа : <a href="http://glonasssoft.ru/" target="_blank" rel="noopener">http://glonasssoft.ru</a>.</li>
<li>Стратегия научно-технологического развития Российской Федерации : указ Президента Российской Федерации от 01.12.2016 № 642. – 2016. – 24 с.</li>
<li>Технологии, машины и оборудование для координатного (точного) земледелия / В. Ф. Федоренко [и др.] : учебник. – М. : Росинформагротех, 2016. – 240 с.</li>
<li>Точное земледелие : учеб. пособие / Е. В. Труфляк, Е. И. Трубилин,<br />
В. Э. Буксман, С. М. Сидоренко. – Краснодар : КубГАУ, 2015. – 376 с.</li>
<li>Точное сельское хозяйство (Precision Agriculture) : учеб.-практ. пособие / под ред. Д. Шпаара, А. В. Захаренко, В. П. Якушева. – СПб. : Пушкин, 2009. – 397 с.</li>
<li>Труфляк, Е. В. Интеллектуальные технические средства АПК : учеб. пособие / Е. В. Труфляк, Е. И. Трубилин. – Краснодар : КубГАУ, 2016. – 266 с.</li>
<li>Мониторинг и прогнозирование научно-технологического развития АПК в области точного сельского хозяйства, автоматизации и роботизации / Е. В. Труфляк, Н. Ю. Курченко, Л. А. Дайбова, А. С. Креймер, Ю. В. Подушин, Е. М. Белая. – Краснодар : КубГАУ, 2017. – 199 с.</li>
<li>Труфляк, Е. В. Техническое обеспечение точного земледелия :<br />
лаб. практикум / Е. В. Труфляк, Е. И. Трубилин. – Краснодар : КубГАУ, 2016. – 169 с.</li>
<li>Труфляк, Е. В. Точное земледелие : учеб. пособие / Е. В. Труфляк, Е. И. Трубилин. – СПб.: Лань, 2017. – 376 с.</li>
<li>Федоренко, В. Ф. Информационные технологии в сельскохозяйственном производстве: научный аналитический обзор / В. Ф. Федоренко. – М. : Росиформагротех, 2014. – 223 с.</li>
<li>Федоренко, В. Ф. Интеллектуальные системы в сельском хозяйстве: науч. аналит. обзор / В. Ф. Федоренко, В. Я. Гольтяпин, Л. М. Колчина. – М. : Росинформагротех, 2017. – 156 с.</li>
<li>Филиппов, Р. А. Оптимизация конструкции технических средств для ручного сбора ягод земляники / Р. А. Филиппов, Д. О. Хорт // Сб. науч. докл. ВИМ. – 2012. – Т. 1. – С. 467–472.</li>
<li>Фролов, В. Ю. Комплексная механизация свиноводства и птицеводства : учеб. пособие / В. Ю. Фролов, В. П. Коваленко, Д. П. Сысоев. – СПб. : Лань, 2016. – 176 с.</li>
<li>Фролов, В. Ю. Машины и технологии в молочном животноводстве : учеб. пособие / В. Ю. Фролов, Д. П. Сысоев, С. М. Сидоренко. – СПб. : Лань, 2017. – 305 с.</li>
<li>Шеуджен, А. Х. Агрохимическое обследование почв и составление картограмм / А. Х. Шеуджен, Т. Н. Бондарева, А. А. Тенеков. – Краснодар : КубГАУ, 2014.– 44 с.</li>
<li>Andrew, H. Forecasting grape yield with high spatial resolution optical remote sensing / H. Andrew // Fruit, Nut and Vegetable Production Engineering Symposium. – 5–9 January 2009, Concepciуn, Chile. – Р. 33–40.</li>
<li>Benjamin, C. Sugar cane yield monitoring system / C. Benjamin,<br />
M. Mailander, R. Price // ASAE Paper. – St. Joseph, MI: ASABE, 2001. –<br />
№ 011189.</li>
<li>Development of a test rig for evaluating a yield monitoring system for citrus mechanical harvesters / G. Bora, R. Ehsani, K. Lee, W. Lee // In Proceedings 4th World Congress Conference on Computers in Agriculture and Natural Resources. – Orlando, FL., 2006, July 24–26. – Р. 84–88.</li>
<li>Cerri, D. Sugar cane yield monitor / D. Cerri, P. Magalhães // ASAE Paper. – St. Joseph, MI: ASABE, 2005. – № 051154.</li>
<li>Chen, Y. Machine vision technology for agricultural applications /<br />
Y. Chen, K. Chao, M. Kim // Computers and Electronics in Agriculture. – 2002. – № 36. – Р. 173–191.</li>
<li>Vineyard Yield Estimation Based on the Analysis of High Resolution Images Obtained with Artificial Illumination at Night / F. Davinia, T. Marcel,<br />
M. Dani, M. Javier, C. Eduard, P. Jordi. – 2015. – № 15. – Р. 8284–8301.</li>
<li>Fillingham, D. Precision agriculture: In the field and beyond the farm gate. The application of precision farming technologies for rural land and asset management / D. Fillingham // A Nuffield Farming Scholarships Trust. – 2014. – 107 р.</li>
<li>Ground monitoring the light shadow windows of a tree canopy to yield canopy light interception and morphological traits / R. Giuliani, E. Magnanini,<br />
C. Fragassa, F. Nerozzi // Plant Cell Environment. – 2000. – Р. 783–796.</li>
<li>Grisso, R. Precision farming tools: Variable-rate application / R. Grisso, W. Thomason, М. Alley // VCE Publication. – 2011. – Р. 442–505.</li>
<li>Hermann, J. Heege. Precision in Crop Farming. Site Specic Concepts and Sensing. Methods: Applications and Results / Hermann, J. Heege // Springer Science + Business Media Dordrecht. – 2013. – Р. 361.</li>
<li>Bates Evaluation of a commercial grape yield monitor for use mid-season and atharvest / A. James, L. Sánchez, B. Sams, L. Haggerty, R. Jakubowski, S. Djafour, R. TerenceJournal international des sciences de la vigne et du vin Received. – 2016. – Vol. 50, № 2. – DOI : http://dx.doi.org/10.20870/oeno-one.2016.50.2.784.</li>
<li>Kise, M. A Stereovision-based crop row detection method for tractor-automated guidance / M. Kise, Q. Zhang, M.s F. Rovira // Biosystems Engineering. – 2005. – № 90(4). – Р. 357–367.</li>
<li>Larson, W. E. Farming by soil / W. E. Larson, P. C. Robert Ankeny;<br />
R. Lal, &amp; F. J. Pierce (Eds.) // Soil management for sustainability. – IA, USA : Soil and Water Conserv. Soc., 1991. – Р. 112–1030.</li>
<li>Sensing technologies for precision specialty crop production Computers and Electronics in Agriculture / W. S. Leea, V. Alchanatisb, C. Yangc, M. Hirafuji, D. Moshoue, C. Lif. – 2010. – Р. 2–33.</li>
<li>Methodology comparison for canopy structure parameters extraction from digital hemispherical photography in boreal forest / S. G. Leblanc,<br />
J. M. Chen, R. Fernandes, D. W. Deering, A. Conley // Agricultural and Forest Meteorology. – 2005. – № 129. – Р. 187–207.</li>
<li>Development of a virtual reality GIS using stereo visio / T. T. Lin,<br />
Y. K. Hsiung, G. L. Hong, H. K. Chang, F. M. Lu // Computers and Electronics in Agriculture. – 2008. – № 63.</li>
<li>Molin, J. Field-testing of a sugar cane yield monitor in Brazil / J. Molin, L. Menegatti // ASAE Paper. – St. Joseph, MI: ASABE, 2004. – № 041099.</li>
<li>Automatic detection of ‘yellow rust’ in wheat using reflectance measurements and neural networks / D. Moshou, C. Bravo, J. West, A. McCartney,<br />
H. Ramon // Comput. Electron. Agric. – 2004. – № 44(3). – Р. 173–188.</li>
<li>Mulla D. J. Mapping and managing spatial patterns in soil fertility and crop yield / D. J. Mulla; P. Robert, W. Larson, &amp; R. Rust (Eds.) // Soil specific crop management. – Madison, WI, USA : ASA, 1993. – Р. 15–26.</li>
<li>Mulla, D. J. An evaluation of indicator properties affecting spatial patterns in N and P requirements for winter wheat yield / D. J. Mulla, A. U. Bhatti;<br />
J. V. Stafford (Ed.) // Precision agriculture’97: Spatial variability in soil and crop. – Oxford, UK: BIOS Sci. Publ, 1997. – Vol. 1. – Р. 145–154.</li>
<li>Pelletier, G. Development of a tomato load/yield monitor / G. Pelletier, S. Upadhyaya // Computers andElectronics in Agriculture. – 1999. – № 23(2). –<br />
Р. 103–117.</li>
<li>Precision agriculture and the future of farming in Europe // Technical Horizon Scan. – Brussels, European Union, 2016. – 274 р.</li>
<li>Precision agriculture in rice production // Implementation &amp; Grower Insights. – Australia, 2016. – 44 р.</li>
<li>Precision agriculture technology for crop farming / Ed. by Qin Zhang. – Washington State University Prosser, Washington, USA, 2016. – 382 р.</li>
<li>Precision agriculture and the future of farming in Europe // Scientific Foresight Study. – Brussels, European Union, 2016. – 38 р.</li>
<li>Qarallah, B. Development of a yield sensor for measuring individual weights of onion bulbs / B. Qarallah, K. Shoji, T. Kawamura // Biosystems Engineering. – 2008. – Vol. 100. – Р. 511–515.</li>
<li>Research and development in agricultural robotics: A perspective of digital farming / Redmond Ramin Shamshiri, Cornelia Weltzien, Ibrahim A. Hameed, Ian J. Yule, Tony E. Grift, Siva K. Balasundram, Lenka Pitonakova, Desa Ahmad, Girish Chowdhary // Int J Agric &amp; Biol Eng. – 2018. – Vol. 11, № 4. – 14 р.</li>
<li>Analysis of a tomato yield monitor / U. Rosa, S. Upadhyaya, M. Josiah, M. Koller, M. Mattson, M. Pelletier // Transactions of the ASAE. – 2000. –<br />
№ 43(6). – Р. 1331–1339.</li>
<li>Obtaining the three-dimensional structure of tree orchards from remote 2D terrestrial LIDAR scanning / J. Rosell, J. Llorens, R. Sanz, J. Arn, M. Ribes-Dasi, J. Masip, A. Escol, F. Camp, F. Solanelles, F. Gr.cia, E. Gil, L. Val,<br />
S. Planas, J. Palac // Agricultural and Forest Meteorology. – 2009. – № 149. –<br />
Р. 1505–1515.</li>
<li>Rosell, J. A review of methods and applications of the geometric characterization of tree crops in agricultural activities / J. Rosell, R. Sanz // Computers and Electronics in Agriculture. – 2012. – № 81. – Р. 124–141.</li>
<li>Rovira, M. Creation of Three-dimensional Crop Maps based on aerial stereoimages / M. Rovira, Q. Zhang, J. Reid // Biosystems Engineering. – 2005. – № 90(3). – Р. 251–259.</li>
<li>Protz, R. An application of spectral image analysis to soil micromorphology / R. Protz, S. Sweeney // Methods of analysis. Geoderma. – 1992. –<br />
№ 53(3-4). – Р. 275–287.</li>
<li>Taghadomi-Saberi, S. Improving field management by machine vision –<br />
a review / S. Taghadomi-Saberi, A. Hemmat // Agric Eng Int. – 2015. – Vol. 17, № 3.</li>
<li>Steele, D. Analysis of Precision Agriculture Adoption &amp; Barriers in western Canada / D. Steele // Producer Survey of western Canada. – Canada, 2017. – 53 р.</li>
<li>Upadhyaya, S. Development of an impact type electronic weighing system for processing tomatoes / S. Upadhyaya, M. Shafii, L. Garciano // ASAE Paper. – St. Joseph, MI: ASABE, 2006. – № 061190.</li>
<li>АгроТехнология 2.0 [Электронный ресурс]. – Режим доступа : <a href="http://glonasssoft.ru/solutions/at2_0" target="_blank" rel="noopener">http://glonasssoft.ru/solutions/at2_0</a>.</li>
<li>Постановление Правительства РФ от 11.03.2010 № 138 (ред. от 13.06.2018) «Об утверждении Федеральных правил использования воздушного пространства Российской Федерации».</li>
<li>ГОСТ Р 60.0.0.1-2016. Роботы и робототехнические устройства. Общие положения. – Введ. 2018–01–01. – М. : Стандартинформ, 2016. – 7 с.</li>
</ol>
<h2><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2019-тема-4-Приложения.docx">Приложения</a></h2>
]]></content:encoded>
					
					<wfw:commentRss>https://apknet.ru/prognozirovanie-i-monitoring-nauchno-2/feed/</wfw:commentRss>
			<slash:comments>0</slash:comments>
		
		
			</item>
		<item>
		<title>Сравнительное изучение строения генов VvmybA1 и VvmybA2, контролирующих антоциановую окраску ягод у отечественных и зарубежных сортов винограда с целью создания молекулярно-генетических маркеров для отбора высококачественных технических и столовых сортов</title>
		<link>https://apknet.ru/sravnitelnoe-izuchenie-stroeniya-gen/</link>
					<comments>https://apknet.ru/sravnitelnoe-izuchenie-stroeniya-gen/#respond</comments>
		
		<dc:creator><![CDATA[redactor]]></dc:creator>
		<pubDate>Fri, 30 Oct 2020 22:39:57 +0000</pubDate>
				<category><![CDATA[Растениеводство]]></category>
		<category><![CDATA[Сельскохозяйственная биология]]></category>
		<category><![CDATA[ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ]]></category>
		<guid isPermaLink="false">https://apknet.ru/?p=5235</guid>

					<description><![CDATA[В работе представлены результаты исследований молекулярного строения генов VvMybA1 и VvMybA2, влияние на фенотипическую проявляемость признака, представлены особи содержащие гомо- и гетерозиготное состояние изученных аллелей; сделаны выводы о потенциальном влиянии строения аллелей на конечный признак; в результате было построено три кластерных древа для изучения филогенетических взаимодействий изученных генотипов (по каждому гены у отдельности и оба вместе); сделаны предположения о происхождении некоторых сортов и их родстве.]]></description>
										<content:encoded><![CDATA[<h2><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2019-тема-3-Титульный-и-исполнители.docx">Титульный лист и исполнители</a></h2>
<h2><strong>РЕФЕРАТ</strong></h2>
<p>Отчет 180 с., 3 ч., 6 табл., 35 рис., 209 источников литературы.</p>
<p>ВИНОГРАД, АБОРИГЕННЫЕ СОРТА, ДНК, ГИБРИДЫ, СЕЛЕКЦИЯ, ДНК-МАРКЕРЫ, ГЕНЫ, VVMYBA1, ИНТРОДУЦИРОВАННЫЕ СОРТА, КЛОНЫ, ПРОДУКТИВНОСТЬ.</p>
<p>Объект исследований – гены VvMybA1 и VvMybA2, детерминирующие окраску у сортов и клонов перспективных аборигенных и интродуцированных сортов винограда, отобранных в условиях Юга Российской Федерации и содержащихся в национальной ампелографической коллекции Анапской зональной опытной станции СКЗНИИСиВ.</p>
<p>В работе представлены результаты исследований молекулярного строения генов VvMybA1 и VvMybA2, влияние на фенотипическую проявляемость признака, представлены особи содержащие гомо- и гетерозиготное состояние изученных аллелей; сделаны выводы о потенциальном влиянии строения аллелей на конечный признак; в результате было построено три кластерных древа для изучения филогенетических взаимодействий изученных генотипов (по каждому гены у отдельности и оба вместе); сделаны предположения о происхождении некоторых сортов и их родстве.</p>
<p>Выявлены родственные взаимоотношения между аборигенными и интродуцированными сортами по средством обнаружения сходства строения исследованных генов с известными аборигенными и интродуцированными генотипами; определены гомо- и гетерозиготные генотипы.</p>
<p>Данные выводы могут быть использованы как при подборе пар для скрещивания с целью селекции новых высокопродуктивных и адаптивных сортов для выращивания на Юге Российской Федерации.</p>
<h2><strong>ВЕДЕНИЕ</strong></h2>
<p>Культурный виноград <em>Vitis vinifera </em>subsp.<em> sativa </em>D. C. является одной из наиболее ценных плодово-ягодных культур в мире по экономической эффективности и площади выращивания. Литературные, археологические и палео-ботанические источники позволяют понять распространение виноградарства в Европе и, в частности, в Российской Федерации, начиная с территории Кавказа [1, 9].</p>
<p>Сорта винограда, которые возделываются веками в традиционных винодельческих регионах, все чаще заменяются более высокопродуктивными клонами. Генетическое разнообразие, накопившееся за столетия культивирования традиционных сортов, крайне важно для улучшения их генома. Аборигенные сорта, вытесняемые новыми, представляют собой огромный, еще не раскрытый пласт знаний и значительный источник ценных генов для селекционной науки. Поэтому так важна молекулярно-генетическая идентификация коллекции АЗОСВиВ (Анапская зональная опытная станция виноградарства и виноделия), позволяющая не только узнать ее биологическое разнообразие, но также установить сортосоответствие в сравнении с другими известными мировыми коллекциями. Описание аборигенных сортов винограда по широкому спектру генетических признаков позволит не только создать ДНК-паспорта генотипов, но и использовать эти данные для установления родственных связей между ними<br />
и при поисках их родителей, что станет неоценимой помощью селекционерам во время подбора родительских пар для скрещиваний.</p>
<p>Обширная исследовательская программа проводится во всех странах развитого виноградарства на распространенных известных сортах для отбора «чистокровных» высокоурожайных и высококачественных генотипов, обладающих различным спектром полезных для сельского хозяйства и востребованных потребителем признаков. И конечной целью проведения этих исследований является обеспечение материальной и теоретической базы для обоснования совершенствования клоновой селекции и повышения ее результативности [74, 169].</p>
<p>Как известно, с развитием молекулярной биологии возникла возможность ускорения селекционного процесса на базе использования молекулярно-генетических методов, в результате чего появилась маркерная селекция.</p>
<p>Сортовой состав популяций Краснодарского края и, в целом, Юга Российской Федерации крайне многообразен. Распространение современной методологии маркер опосредованной селекции выявило перспективность использования молекулярно-генетических методов анализа, что повысило ее эффективность, особенно после открытия наличия генов детерминирующих антоциановую окраску ягод винограда, набор которых не только специфичен для каждого сорта винограда, но и может отличаться по своему строению как от сорта к сорту, так и от клона к клону.</p>
<p>Первые результаты по идентификации клонов молекулярными маркерами показали, что такие НИР ограничиваются лишь набором использованных локусов, в которые могут входить различные маркерные признаки, такие как, например, микросателлитные маркеры, iPBS-маркеры, IRAP, ISSR и пр. Таким образом, при использовании большого количества маркеров вероятность найти различающиеся аллели повышается [158, 159].</p>
<p><strong>Целью</strong> исследования было изучить молекулярно-генетическое разнообразие и строение генов VvmybA1 и VvmybA2 в семействе <em>Vitaceae</em>.</p>
<p>Для выполнения этой цели были поставлены следующие <strong>задачи:</strong></p>
<ol>
<li><strong>Сбор образцов.</strong> Выполнен в несколько этапов на нескольких коллекциях: ампелографическая коллекция АЗОС ВиВ и ампелографическая коллекция Крымской ОСС.</li>
<li><strong>Пробоподготовка и выделение ДНК.</strong> Пробоподготовка образцов листьев к выделению ДНК проводилась путем высушивания их в лиофильной сушке Martin Christ BETA 2-8 LDplus, имеющейся на кафедре биотехнологии, биохимии и биофизики Кубанского ГАУ. Дробление высушенных листьев производилось на кафедре на вибрационной мельнице GT200. Выделение ДНК из дробленых листьев осуществлялось при помощи DNeasy Plant Mini Kit и ЦТАБ-методом.</li>
<li><strong>ПЦР анализ.</strong> Праймерные пары и параметры амплификации уже разработаны и доступны в открытых литературных источниках.</li>
<li><strong>Очистка и клонирование амплифицированных фрагментов. </strong>Пробоподготовка к секвенированию проводилась путем очистки амплифицированных фрагментов при помощи QIAquick Gel Extraction Kit.</li>
<li><strong>Секвенирование.</strong> Секвенирование амплифицированных фрагментов двух генов проводилось в ЗАО «Евроген».</li>
<li><strong>Анализ полученых данных.</strong> Проводили <em>in silico</em> с использованием программ: ClustalO, NCBI BLAST, NCBI CD-search, MEGA7 и др.</li>
</ol>
<h2><strong>1 ОБЗОР СОСТОЯНИЯ ИЗУЧЕННОСТИ ВОПРОСА</strong></h2>
<h3><strong>1.1 Основы ДНК-маркирования генотипов винограда</strong></h3>
<p>Внутривидовая гибридизация применяется в течение многих веков. Результатами ее являются многие сорта сельскохозяйственных культур, в том числе винограда. Анализ литературных источников показывает, что полученные результаты в этом направлении, хотя и значительные, но не решают всех проблем виноградарской отрасли.</p>
<p>Основная причина невысокой эффективности селекции винограда – недостаток знаний о биологических особенностях сортов и генетически обусловленных механизмах передачи признаков и свойств потомству. Это, конечно, не означает, что возможности межсортовой гибридизации исчерпаны и что от нее следует отказаться как от устаревшего и непродуктивного метода. В последнее время получено немало сортов, обладающих комплексом ценных свойств, которые были выделены методами как традиционной гибридизации, так и клоновой селекции, они регистрируются и обогащают промышленный сортимент<br />
[8, 13, 45, 56].</p>
<p>Генетическая изменчивость сортов винограда, выраженная в возникновении мутаций и неоднородности исходного материала, проявляется в фенотипическом варьировании морфологических признаков, например, темпом роста, формирования органов, физиологических свойствах, изменяющих жизнеспособность организмов [28, 36, 43, 46]. Или фенотипически не выражается, например, в случаях изменения биохимических свойств, регулирующих синтез химических веществ [16, 24, 33]. Поэтому отбор можно вести по всем вышеперечисленным признакам и свойствам, особенно выделяя из них хозяйственно ценные. Однако морфологические, физиологические и биохимические признаки находятся в корреляции с генотипом и изменяются вместе с ним [14, 49, 53, 55]. Эти изменения могут быть вызваны влиянием каких-либо внешних условий, поэтому установить причину варьирования не всегда удается с достаточной точностью [19, 32, 42, 57]. Для этого необходимо использовать новые методы исследования сортов, такие как ДНК-маркирование [21, 35, 40]. В частности, направленных на идентификацию конкретных генов, несущих важное сельскохозяйственное значение.</p>
<p>ДНК-маркеры – характеристика генотипа, не зависящая от фенотипа, что обеспечивает богатство полиморфизмов, позволяющих идентифицировать сорта и строить точные генетические карты во многих высших растениях [12, 15, 30]. Высокое генетическое разнообразие у винограда, распространенного по всему миру, вызывает интерес к оценке генеалогии внутри рода <em>Vitis</em>, а также необходимость улучшения распознающих систем, пригодных для идентификации виноградных сортов [41, 58, 59]. Это поощряет попытки внедрения и использования данных о строении генов и генотипов в целом, из которых можно создавать сортовой резерв для улучшения существующего ампелографического разнообразия [4, 31, 44, 48, 135].</p>
<p>На данный момент, генетический резерв винограда – это смесь стародавних и недавно выведенных сортов [3, 9]. Перед тем как новые сорта полностью заменят старые, важно идентифицировать ценные древние генотипы и редкие формы. В настоящее время сорта идентифицируются различными молекулярными маркерами, такими как микросателлиты. Они представляют собой короткие последовательности ДНК, повторяющиеся несколько раз при каждом локусе. В связи<br />
с ошибками прочтения, полимеразы, во время репликации ДНК, создали множество аллелей, которые различны по длине из-за разного количества повторов последовательности. В растениях микросателлиты встречаются часто – один на каждые 1–2,4 тыс. нуклеотидов в таких видах, как арабидопсис, рис, соя, кукуруза и пшеница. Множество SSRs было обнаружено в винограде, а также выявлена высокая гетерозиготность, что повышает полиморфизм микросателлитных маркеров и ведет к решению многих проблем, связанных с клоновой и сортовой идентификацией, а также анализом генеалогии [25, 26, 27, 209].</p>
<p>Молекулярные маркеры имеют огромный потенциал по поиску генетических различий между генотипами и определению разнообразия между клонами. Среди молекулярных маркеров, SSR-маркеры являются наиболее подходящими из-за их кодоминантности, огромного числа повторов и высокой частоты в селективно нейтральной области. Высоко насыщенные карты сцепления на основе одних только микросателлитных маркеров, а также их совместное использование с другими типами маркеров доступных в винограде. Микросателлитные маркеры оказались полезными для установления «личности» генотипов, фингерпринтинга и анализа разнообразия подвоев и сортов, а также межвидовых гибридов [100, 119].</p>
<p>В последние годы создание ДНК-отпечатков показало себя очень полезным для картирования геномов и изучения биоразнообразия. Достаточно высокий полиморфизм позволяет получать большое разнообразие генетических «отпечатков» при известном наборе генетических маркеров. Они доказали свое преимущество перед биохимическими и фенотипическими маркерами, которые имеют низкую величину полиморфизма. В основном, ДНК методы основаны на обнаружении полиморфных геномных последовательностей для внутренних сайтов рестрикции путем гибридизации клонированных зондов с ДНК. Например, длина полиморфных рестрикционных фрагментов (AFLP), случайно амплифицированная полиморфная ДНК (RAPD) или амплификация между простыми повторами последовательностей или микросателитов (SSR). Метод амплификации полиморфных фрагментов опирается на полиморфизм в сайтах узнавания для ферментов рестрикции, но с начала использования праймеров есть необходимость в анализе последовательности ДНК для обнаружения полиморфизмов.</p>
<h3><strong>1.2 Методы исследования полиморфизма ДНК</strong></h3>
<p>На сегодняшний день существует огромное количество методов исследования ДНК. Каждый из них предоставляет большое количество возможностей получить ответы на бесконечное количество вопросов. В данном разделе мы рассмотрим только те, которые использовались в процессе работы по исследованию полиморфизма генетических ресурсов винограда.</p>
<p>Наиболее простой способ выделения ДНК СТАБ-методом был описан еще в 1994 г. в статье «Простой и эффективный способ для выделения ДНК из виноградных растений» [143].</p>
<p>Развитие методов потребовало более «чистую» ДНК. Приведенный ниже метод выделения дает достаточно большой «урожай» ДНК, но имеющей примеси-загрязнители [153, 191]. Поэтому при дальнейшей работе этот метод был улучшен применением бета-меркаптоэтанола и поливинилпропиллидона, которые позволяют очистить ДНК от фенольных соединений и соединений ДНК<br />
с сахаридами [62, 101, 102]. Такой метод называют «модифицированным СТАБ-методом». Он позволяет выделять ДНК не только из свежих листьев, но и из гербарных и мумифицированных, т. е. дает возможность изучать очень старые препараты листьев, что крайне важно при изучении происхождения видов и филогенеза [17, 18, 111].</p>
<p>Наличие загрязнителей сильно влияет на использование ДНК в исследованиях из-за ингибирования процесса реакции в целом и снижения активности Taq-полимеразы, а также из-за плохой очистки ДНК может меньше храниться из-за нестабильности. Поэтому так важно не только выделить большое количество ДНК, но и правильно и хорошо ее очистить [87, 125, 167].</p>
<p>В статьях, приведенных выше, описывается метод, дающий высокое количество чистой ДНК, которая долго хранится, но этот способ выделения имеет ряд отрицательных факторов. Во-первых, тратится много времени, во-вторых, используемые вещества, такие как хлороформ, изоамиловый спирт, бета-меркаптоэтанол являются крайне вредными для организма человека.</p>
<p>Такие чувства, как страх за свое здоровье, желание сделать больше за одинаковое количество времени, создали наборы для выделения нуклеиновых кислот различными методами. В настоящее время это направление активно развивается, создаются «наборы», позволяющие делать больше, быстрее и безопаснее, что сказывается не только на здоровье и работоспособности рабочих, но<br />
и на финансовом положении лаборатории, так как исключаются затраты на защитное снаряжение лаборантов.</p>
<p>К примеру, выделение ДНК с использованием PeqGOLD PLANT DNA mini KIT – это дорогой, но очень эффективный способ выделения и очистки ДНК. Если при использовании вышеописанных методик медленно, но верно выделялось 12 образцов, то при применении данного набора и двух центрифуг выделялось 24 биотипа сразу [34, 129].</p>
<p>ПЦР – полимеразная цепная реакция. Этот этап был разработан Кэри Мюллисом, за что в 1993 г. он был удостоен Нобелевской премии по химии [157].</p>
<p>Следует упомянуть, что для более эффективной работы разработаны наборы и для ПЦР-реакций, тот же Peqlab-Kit. Результатом этого явилась унификация параметров реакции, так теперь не надо подбирать для каждого праймера свою температуру отжига [151]. Тем не менее, данный набор удобно использовать при мультиплексной ПЦР, когда применяется большое число ДНК-маркеров одновременно. В случае же, когда используются маркеры на конкретные генетические признаки, применяются специализированные под каждый маркер параметры, а они, в свою очередь, применяются отдельно друг от друга.</p>
<p>На сегодня разработано огромное количество праймеров, используемых<br />
в работе. Они применяются как для генотипирования различных участков ДНК, как связанных, так и не связанных с кодирующими последовательностями.<br />
И, конечно же, разработаны маркеры, помогающие идентифицировать гены устойчивости к вредителям и болезням, которые обычно имеются не только<br />
в литературных источниках, но и в базах данных [146, 176].</p>
<p>Как уже было сказано, для большего упрощения и убыстрения работы были разработаны мультиплексы – подборка групп праймеров, гибридизирующихся с цепью исследуемой ДНК одновременно. Их подбирают таким образом, чтобы размер получаемых амплифицированных аллелей на перекрывал друг друга. Это крайне важно при анализе, дабы не возникло путаницы при дифференциации продуктов амплификации. При использовании мультиплексов<br />
в гель-электрофорезе используют Touch Down PCR. Это такая разновидность полимеразной цепной реакции, где в первых циклах температура отжига праймера выше необходимой, а в последующих она снижается до оптимальной. Таким образом, убираются неспецифичные элементы отжига, мешающие различать продукты амплификации. Следует заметить, что в капиллярном электрофорезе аллели могут накладываться друг на друга, но при отображении в программе GeneMapper прекрасно различимы по цветам, поэтому они могут применяться вместе [130].</p>
<p>Существует много видов ПЦР-реакции. На наш взгляд, следует обратить внимание на ПЦР в реальном времени. Это далеко не дешевый метод, но он позволяет определить, где и сколько ПЦР продукта амплифицировалось, что избавляет от проверки наличия результатов на любом электрофорезе.</p>
<p>В данном методе используют флюоресцентно-меченые праймеры или ДНК-зонды. Также используется краситель SybrGreen 1, он обеспечивает достаточно простой и экономичный способ детекции, без необходимости применения зондов или специальных праймеров [130].</p>
<p>Очень важно, что qPCR (количественная ПЦР) можно комбинировать<br />
с ОТ-ПЦР (обратно-транскрипционная ПЦР) для измерения малых количеств мРНК, что позволяет исследовать количественную информацию о содержании мРНК в клетке и, следовательно, позволяет судить о величине экспрессии гена в клетке или ткани.</p>
<p>Все полученные данные выводятся на экран компьютера и обрабатываются в реальном времени.</p>
<p>После амплификации следует визуализировать полученные ПЦР-продукты.</p>
<p><em>Визуализация результатов ПЦР.</em> Как экспериментальный метод электрофорез был разработан отечественными учеными, профессорами Московского университета П. И. Стаховым и Ф. Ф. Рейссом в 1809 г.</p>
<p>На данный момент существует большое количество публикаций, описывающих конкретно электрофорез в полиакриламидном геле или же статьи, повествующие о работах, в которых гель-электрофорез применялся как основной метод разделения продуктов амплификации или же белков [83, 122, 190].</p>
<p>Самый распространенный в мире метод оценки длины амплифицированных фрагментов – это электрофорез в полиакриламидном геле. Но с этим методом связано большое количество проблем и трудностей в использовании. Например, плохая полимеризация акриламидного геля, когда с виду он без изъянов, а после просвечивания ультрафиолетом оказывается, что образцы уползли в край спейсера. Также возможно, что ДНК просто растеклась по акриламиду во время вымачивании в растворе бромистого этидия. Или же произошло отключение электроэнергии и после четырех часов электрофореза, оказывается, что все образцы выстроились в одну линию, где невозможно что-либо идентифицировать [20, 23].</p>
<p>В 1960-х гг. был предложен метод секвенирования биополимеров – установление их нуклеотидной или аминокислотной последовательности. В результате чего получают строение первичной структуры молекулы. Обычно, размеры секвенируемых участков ДНК 100 пар нуклеотидов (при использовании методов next-generation sequencing) и 1000 пар (при секвенировании по Сенгеру). В итоге получают последовательности участков генов, всю мРНК и даже целые геномы [2].</p>
<p>При секвенировании обычно применяют методы Эдмана, Сэнгера и др. До начала сиквенса производят амплификацию участка ДНК при помощи ПЦР, последовательность которого нужно установить.</p>
<p>Метод определения первичной последовательности пептидов разработан<br />
в 1950–1956 гг. Виктором Эдманом. Обрабатывается исследуемый пептид специальным набором реагентов, это приводит к отщеплению одной аминокислоты с N-конца. Циклическое повторение реакции и анализ получаемой информации дают знания об исследуемом пептиде. В настоящее время он практически не применяется из-за неколичественного протекания реакции и побочных продуктов [37].</p>
<p>Другой метод секвенирования был открыт Фредериком Сенгером в 1977 г., за что он был удостоен Нобелевской премии по химии в 1980 г. Также метод известен как «метод обрыва цепи». Принцип метода заключается в том, что одна из цепочек ДНК является матрицей для синтеза второй [163].</p>
<p><em>Капиллярный электрофорез.</em> Если в вышеописанных методах разделение происходит в полиакриламидной пластине, то здесь уже происходит разделение ионов по заряду, в тонком капилляре, заполненном электролитом.</p>
<p>Детектирование с помощью флуоресценции используют для образцов, имеющих собственную флуоресценцию или же модифицированных химическими метками. Данный способ обеспечивает высокую чувствительность. Также используют детектирование флуоресценции, вызванное лазером, подобные системы могут детектировать в пределах 10<sup>–18</sup>–10<sup>–21</sup> моль [171]. При этом важно сказать, что именно данный метод обычно и используется для таргетного секвенирования выбранных участков геномов, полученных в результате амплификации<br />
с ДНК-маркерами, при использовании прямого и обратного праймеров.</p>
<h3><strong>1.3 Ампело-генетический анализ сортов и клонов винограда</strong></h3>
<p>Комбинированные маркерные системы являются отличными дескрипторами, описывающими сорта винограда. Использование их совместно с фенотипическими характеристиками дает наиболее полную картину о состоянии совокупности внешних и внутренних признаков виноградной лозы.</p>
<p>В настоящее время изучение генофонда и фенотипического разнообразия винограда – приоритетная цель для ученых многих стран мира. Этот процесс происходит по признакам, принятым на вооружение под эгидой Международной организации винограда и вина. По большей части, это фенотипические признаки, такие как окраска и форма ягод, цвет и вкус вина, наличие антоциана, биохимические свойства, но большинство исследователей склоняются к тому, что следует использовать молекулярно-генетические маркеры, которые способны не только выявить отличия, но и показать скрытый потенциал у гетерозиготных особей.</p>
<p>В целом и частности, проблема дифференциации сортов и клонов винограда, отбор протоклонов и выделение из них самостоятельных сортов существует давно.</p>
<p>В практике виноградарства известны случаи изменчивости отдельных свойств и признаков. Древнеримские ученые Палладий и Колумелла, наблюдая такие факты, советовали использовать их в практически полезных для человека целях. Колумелла, например, писал, что следует черенковать и использовать<br />
в производстве самые их плодородные части. Использовать клоновую селекцию советовали такие виноградари Швейцарии, Германии и Франции как Казенава, Гюйо, Каррьер, Сарториус, Мюллер-Тургау. В нашей стране основоположниками ее были С. А. Мельник, А. С. Мержаниан, М. П. Цебрия и др. Настойчиво рекомендовал применять отбор наиболее продуктивных растений И. В. Мичурин: «Тщательной селекцией (отбором) черенков, повторением отводки лучших частей лозы, сравнительно короткой обрезкой и посадкой на лучшую почву следует способствовать развитию лучших качеств» – писал он [7].</p>
<p>На данный момент, клоновой селекции винограда посвящено множество работ, признанных мировой научной элитой. Если говорить в целом, то работа по дифференциации клонов винограда включает в себя изучение фенотипической и генотипической изменчивости. И, как известно, иногда бывает, что фенотипа недостаточно, чтобы отличить сорта, тогда на помощь приходят молекулярно-генетические маркеры [15, 22, 29, 39].</p>
<p>В нашей стране методология проведения клоновой селекции винограда разработана профессором А. С. Мержанианом. На основании многолетних опытов и литературных данных о сортах Каберне-Совиньон, Рислинг, Алиготе, он пришел к выводу, что отбор клонов надо вести учитывая соотношение хозяйственно-ценных и морфологических признаков [38, 52]. Их он разделил на три группы: мутации, модификации (не передаются вегетативному потомству) и длительные модификации (передаются вегетативному потомству). Далее, этот метод был улучшен применением использования многомерного статистического анализа и технологии <em>in vitro</em>, что позволило поднять результативность клоновой селекции [51, 54].</p>
<p>Наиболее традиционным считается метод оценки полиморфизма по морфологическим признакам листьев среднего яруса кроны [10, 11]. В ампелографии полиморфизм – это явление биоразнообразия, одновременное существование нескольких форм растений, отличающихся друг от друга генотипически<br />
и фенотипически и, таким образом, наличие клоновой изменчивости [1, 5, 6]. Гетерогенный полиморфизм сортов и клонов имеет большое практическое применение, так как они обеспечивают высокую экономическую отдачу при правильном их использовании. И ранее уже проводились исследования различных групп фенотипов сортов Пино и Рислинг – показано различие фенотипов групп винограда 231 учетного куста по 10 листовым признакам [47]. Помимо этого, также была проведена оценка полиморфизма сортогруппы Мерло на базе учебного хозяйства «Кубань» Кубанского государственного аграрного университета. В процессе работы авторами установлено, что суммарно незначительное отличие по каждому признаку, в комплексном анализе дает достаточно большую разницу при отборе клонов [50]. Таким образом, это позволило отобрать протоклоны сортов для дальнейшего исследования. В целом, как<br />
в нашей, так и в других странах, этому направлению исследований отводятся отдельные темы научно-исследовательских работ [89, 194, 207].</p>
<p>Появление ДНК-маркеров произвело взрыв в клоновой селекции. Возможности ДНК-фингерпринтинга практически безграничны, они позволяют не только отличить друг от друга виноградные растения по каким-либо признакам, будь то гены или микросателлитные последовательности, но и создавать эталоны, с которыми можно сравнивать новые сорта и клоны.</p>
<p>Высокая изменчивость и генов и микросателлитных последовательностей дает возможность дифференцировать клоны внутри популяции [72, 110]. Применение этого метода привело к ускорению селекционного процесса. Вместе с идентификацией фенотипа этот метод дает огромное преимущество [134, 174, 180].</p>
<p>Например, описанным способом шестьдесят два иранских сорта были проанализированы по девяти микросателлитным маркерам. Было обнаружено наличие от 4 до 16 аллелей на локус в группах генотипов. Фенограммы, созданные для поиска различий среди сортов и клонов, выделили три группы, в которые были собраны все выбранные образцы. Среди иранских столовых сортов были обнаружены синонимы и омонимы [94].</p>
<p>В северо-западной части Испании, на астурианских виноградниках, выращивается много автохтонных сортов винограда. В связи со старостью виноградников, они характеризуются сортосмесью. С целью различения этих сортов и отбора перспективных протоклонов винограда, были проведены исследования по генотипированию 62 клонов виноградной лозы. По итогам отбора 62 генотипа были введены в селекционный процесс [132].</p>
<p>Достаточно большая работа была проведена Министерством сельского хозяйства США по генотипированию 3600 генотипов 35 видов винограда. Для исследования использовали 550 праймерных комбинаций. Было обнаружено от 16 до 38 различных аллелей на локус. Отсутствие аллелей не было обнаружено.<br />
В результате исследования были созданы ДНК-паспорта выбранных клонов, также обнаружены два сорта, показавшие одинаковые аллели, а также выявлена высокая полезность SSR маркирования для винограда [197].</p>
<p>Созданы карты сцепления признаков при помощи SSR и SNP маркеров основных популяций винограда, таких как Сирах, Пино нуар, Гренаш, Каберне-Совиньон и Рислинг. В общей сложности для создания карты было использовано 1134 молекулярных маркера. Данные карты могут служить отличным инструментом в селекции виноградной лозы [169].</p>
<p>В Хорватии проводится постоянная работа по выведению новых сортов<br />
и отбору протоклонов из старых образцов. Так, в соответствии с международной программой GrapeGen 06 на факультете агрономии в университете Загреба при помощи совместных методов фенотипического и генотипического анализа уже отобрано сто сортов. Была запущена не только клоновая селекция по отбору продуктивных клонов, но и фитосанитарная селекция наиболее устойчивых сортов к вредителям и болезням [149].</p>
<p>В Турции ведется активная работа по генотипированию сортов и клонов винограда. Например, 23 гибрида были отобраны для селекции по их сортовым характеристикам. Их исследовали в два этапа: по морфо-физиологическим<br />
и генетическим параметрам. Фенотипирование проводили в соответствии со стандартной методикой OIV. В генотипировании использовали 20 микросателлитных маркеров, которые показали размер аллелей от 88 до 294 пар оснований [71].</p>
<p>Также странами-участницами программы GeneRes являются Молдова<br />
и Румыния. В их задачу входит изучение сортов винограда бассейна Черного моря. Данная программа финансируется не только Европейским союзом, но<br />
и персонально правительством Люксембурга, что подчеркивает ее значимость для мирового научного сообщества [131].</p>
<p>В Республике Словения широко выращивают технические сорта винограда. Более 50 редких традиционных сортов используется в производстве. Методика их сохранности как генотипов, а также идентификация их по внешним<br />
и внутренним признакам была разработана на факультете биотехнологии Университета Любляна [161].</p>
<p>Наука не стоит на месте и поэтому произошло создание так называемых REMAP и IRAP техник для картирования генома винограда с помощью ретротранспозонных и интро-SSR-маркеров. Данные методы показывают еще большую вариабельность признаков не только между клоном и контролем, но<br />
и между клонами в популяции. Это позволяет поднять на новый уровень клоновую селекцию. Совместное использование этой техники с ампелографическими данными и SSR-маркерами, позволяет получить наиболее полное представление об изучаемом клоне [75, 118, 165].</p>
<p>Мобильные генетические элементы были найдены почти во всех живых организмах в гетеро- и эухроматиновых областях генома. Последствия движения этих элементов в геноме может спровоцировать расширение повторяющихся некодирующих регионов, нарушение функции гена дикого типа, ведущее<br />
к статусу псевдогена, модифицирование гена функционирования, что приводит к искажению выбираемых фенотипов и хромосомным перестройкам, приводящим к видообразованию [82. 119]. В европейском винограде наиболее известны три таких элемента Gret-1, Tvv-1 и Vine-1. Интересно, что Gret-1 и Vine-1 впервые были определены по их вставкам в регуляторные последовательности функциональных генов. В настоящее время только Gret-1 был полностью секвенирован, а также раскрыта его связь с мутациями, в результате чего в темно окрашенных сортах появляются светло окрашенные ягоды из-за его включения в промоутер VvMybA1 транскрипционного фактора, управляющего биосинтезом антоцианов в процессе созревания винограда [73, 78, 139].</p>
<p>Ретротранспозоны – это главные двигатели генетического разнообразия<br />
и инструменты для обнаружения изменений в геноме, возникших под их влиянием. После демонстрации того, что они часто встречаются в растительных кариотипах, были созданы различные маркерные системы для детекции полиморфизма, вызванного ими, а также анализа генетического разнообразия в популяциях [116].</p>
<p>Ретротранспозоны являются основным агентом эволюции генома. Были разработаны различные системы молекулярных маркеров, которые используют метод анализа этих генетических элементов и их стабильную интеграцию<br />
в дисперсные хромосомные локусы, которые полиморфны внутри каждого вида. Ключевыми методами SSAP, IRAP, REMAP, RBIP и ISBP обнаруживают сайты, в которых ретротранспозоны ДНК сохраняются между семьями элементов, интегрированых в геном. Маркерные системы, использующие эти методы, могут быть легко разработаны и применимы в отсутствии обширных данных<br />
о последовательностях генома. Они предлагают доступ к динамическим и полиморфным частям генома и дополняют методы, такие как SNPs, которые нацелены, в первую очередь, на разделение генов [166].</p>
<p>Ретротранспозоны могут быть использованы в качестве маркеров, потому что их интеграция создает новые соединения между геномной ДНК и их консервативными концами. Для обнаружения полиморфизмов вставки ретротранспозона маркерные системы обычно полагаются на ПЦР-амплификации между этими концами и некоторые фланговые компоненты геномной ДНК. В этой связи были разработаны два метода: анализ ретротранспозона-микросателлит (REMAP) и внутренний полиморфизм ретротранспозона (IRAP), которые не требуют рестрикции ферментами. IRAP продукты, полученные от двух близлежащих ретротранспозонов, используются для амплификации последовательностей, стоящих перед праймерами. В REMAP амплификация между ретротранспозонными последовательностями простых повторов (микросателлитов) производит маркерные полосы [117, 118, 120].</p>
<p>В Испании были исследованы клоны сорта Темпоранилло с совместным использованием микросателлитных и ретротранспозонных маркеров. Всего было описано 28 клонов, из которых только один смог пройти отбор по генетическим маркерам. Учитывая, что в исследовании использовался всего один ретротранспозонный маркер, можно сделать вывод о их высоком полиморфизме [84, 196, 199, 202].</p>
<p>В Японии было проведено исследование по изучению влияния ретротранспозонов на окраску кожицы ягод винограда. По результатам был сделан вывод, что мутации в изменении окраски ягод могут быть вызваны ретротранспозонами, что было подтверждено молекулярно-генетическими исследованиями с применением маркеров на гены VvmybA1 и VlmybA1-1 [124]. Окраска ягоды является одной из самых главных характеристик сортов винограда. Это морфологическое свойство различает сорта друг от друга в момент полной зрелости [85, 192, 195]. Дополнение формы листа, грозди и окраски побега может быть достаточно, чтобы идентифицировать сорт [77, 175]. Сорта с окрашенной ягодой содержат антоцианы в эпидермисе. Количество и концентрация красящего вещества определяет их типичную окраску. VvmybA1 (Myb-связанный транскрипционный фактор) регулирует синтез антоцианов и экспрессию гена, ответственного за окраску ягоды [182, 186, 187]. Наличие ретротранспозона Gret-1 рядом с кодирующей последовательностью блокирует его экспрессию, вызывая осветление окраски кожицы [160, 178, 181].</p>
<p>В Италии были описаны 62 сорта по 30 SSR, 4 REMAP и 1 IRAP маркерам.<br />
В результате выявили 58 маркер-специфичных аллелей, 22 генотип-специфичные аллели и четыре REMAP и IRAP частных аллели [203]. После чего в выборке сортов были найдены синонимы и омонимы. Также был сделан вывод, что совместное использование различных маркеров показывает себя наиболее эффективно и делает идентификацию генотипов наиболее легкой [204, 206, 208].</p>
<h3><strong>1.4 Анализ аллельного состояния локусов VvMybA1 и VvMybA2 у сортов и клонов винограда</strong></h3>
<p>Европейский виноград <em>Vitis vinifera</em> L. является одной из наиболее широко распространенных и экономически важных сельскохозяйственных культур. Такой признак как окраска ягоды – одна из важнейших характеристик при описании существующих сортов и в создании новых форм. И, как известно, окраска (как, впрочем, и некоторые другие признаки), зависит от количества и состава антоцианинов. Очевидно, что окрашенные сорта накапливают их в ягодах, в то время как не окрашенные – нет и, следовательно, не синтезируют такие пигменты [79]. Несмотря на то, что это одна из старейших многолетних одомашненных плодовых культур в мире, выбор метода культивации и переработки урожая виноградной лозы зависит от того, какой гибрид, клон и подвой используются в производстве, от его ампелографических свойств [173]. Очевидно, что вегетативное размножение позволило сохранить желаемые признаки, но в значительной степени повлияло на частоту спонтанных соматических мутаций, наблюдаемых в полевых условиях [65, 97]. Из этого следует, что многие признаки были отобраны не только в результате скрещиваний, но и клоновой селекции, например: урожайность с куста, форма и компактность грозди, размер и, конечно, цвет ягод [76, 112, 155]. В свою очередь, именно как результат гибридизации и мутаций мы можем видеть сорта, которые не только имеют или не имеют окраску ягод, но также формируют и промежуточные признаки окраски: розовые, красные, желтые и пр. Конечно же, важным фактором, влияющим на созревание и формирование ягод, является окружающая среда, в которой произрастает виноградное растение [60, 103, 107, 183]. Но все же окраска детерминируется генами, которые содержит тот или иной генотип. Изначально, метаболические пути антоцианового окраса регулируются группой генов Myb [99, 108, 124, 145, 200].</p>
<p>Изменения в семействе виноградных транскрипционных факторов VvMybA ответственны за содержание антоцианов в ягодах культурного и дикого винограда. Предыдущие исследования показали, что, например, неокрашенный виноград возник благодаря мутации двух соседних генов: инсерции ретроэлемента в VvMybA1 [141] и мутации однонуклеотидного полиморфизма<br />
в VvMybA2 [66, 113]. Таким образом, исследования генетических основ данного признака показали, что кластер генов, расположенный во второй хромосоме, ответственен за большую часть изменения цвета, и, что фенотип обусловлен совместной работой генов VvMybA [156]. Данный локус состоит из трех генов типа MYB, среди которых, достоверно известно, что VvMybA1<br />
и VvMybA2 функционально вовлечены в пигментацию ягод [145, 200]. И, на их примере, было продемонстрировано, что появление генотипа, характерного для белоягодных сортов, зависит именно от VvMybA1 и VvMybA2 [99, 145, 200]. Если, в частности, то блокирование функционирования гена VvMybA1 происходит из-за вставки транспозона Gret1 [141, 201], в то время как VvMybA2 может иметь однонуклеотидный полиморфизм (SNP) K980 в кодирующей последовательности, который модифицирует предполагаемую<br />
α-спираль домена узнавания R2R3, и, также, приводит к потере функциональсти аллели [93, 200].</p>
<p>Таким образом, одним из наиболее важных генов, отвечающих за данный признак, является VvMybA1, которые имеет несколько вариативных аллелей [99]. Как было показано ранее, до этого целью проведенных исследований было изучение хорошо известных западных сортов-интродуцентов для нашей зоны. В то время как аборигенные сорта, бассейна Черного моря, обладающие огромным селекционным потенциалом для выведения новых гибридов и отбора клонов, остаются не изученными. Тем более, не изученными остаются<br />
и структуры их конкретных генов, например, VvMybA1, изучение которых важно для выявления уникального генетического строения аллелей, понимания частных случаев фенотипического разнообразия и для изучения эволюции семейства <em>Виноградовых</em> в целом.</p>
<p>Исследование биологического разнообразия – одно из важнейших направлений современной ботаники. Как известно, изучение и описание растений проводится различными методами, которые, в основном, объединяют внешние и внутренние признаки: от строения листа до устройства генома. Не смотря на кажущуюся общность этих методов, они являются также и видоспецифичными, в виду того, что строения различных растений является уникальным и, соответственно, требует частного подхода.</p>
<p>Одним из таких уникальных и наиболее активно изучаемых растений является виноград культурный (<em>Vitis vinifera</em> L.). Для описания этого вида были разработаны специальные методики, утвержденные международным научным сообществом, в частности, организацией Office International de la Vigne et du Vin (IPGRI, 1997). В набор дескрипторов [64, 208] были включены, как и внешние признаки (форма и окраска побега, листа, ягод), так и генетические (микросателлитные последовательности в геноме винограда), которые остаются актуальными по сей день и используются во всех ампелографических коллекциях мира. В свою очередь, полученные данные объединяются в специализированные базы данных, что позволяет сравнивать изучаемые формы с установленными генотипами и определять, например, их чистосортность [90, 128].</p>
<p>Что касаемо морфологических дескрипторов, то все они характеризуют именно состояние признака. Это удобно при описании генотипов, но не при изучении фундаментальных причин, детерминирующих эти признаки, и определении филогенетических связей. Если брать во внимание общепринятые генетические дескрипторы, то установлено, что микросателлитные последовательности являются нейтральными и не обуславливают никаких признаков, но отлично подходят для филогенетического анализа, установления происхождения сортов или же изучения структуры генетических популяций [104]. Также,<br />
в селекционной практике различных сельскохозяйственных культур используются и маркеры, которые позволяют выявлять хозяйственно ценные признаки или же маркеры, которые могут быть ассоциированы с какими-либо признаками и выявлять потенциальные значимые мутации.</p>
<p>Если говорить о виноградном растении, то одной из его отличительных особенностей является склонность к спонтанным мутациям, которые зачастую влияют и на хозяйственно ценные признаки [91, 98, 133, 188]. Поэтому, помимо нейтральных, используются также и маркеры, способные различать между собой клоны различных сортов винограда [121, 142]. Данные маркерные системы показывают в большинстве своем, случайные мутации, поэтому, поиск конкретных изменений, конечно же, производится, в основном, при помощи SNP генотипирования или секвенирования генов, отвечающих за определенные признаки, которые также могут иметь однонуклеотидные замены, влияющие на конечный признак [61, 105, 109].</p>
<p>Одним из таких признаков является накопление антоцианинов в ягодах.<br />
В виноградном растении антоцианы синтезируются в разветвленном метаболическом процессе производства фенилпропанойдов, который на данный момент описан для многих растений [189, 205]. В частности, если говорить о винограде, то окраска ягод и, в целом синтез антоцианинов, является одним из ключевых факторов при отборе и выведении новых сортов и клонов, уже давно известны соматические вариации данного признака у этой экономически важной сельскохозяйственной культуры [185].</p>
<p>Выявлено что окраска ягод у винограда детерминируется кластером генов, расположенных во второй хромосоме генома [150, 201]. И, как было установлено, основную роль в формировании антоциановой окраски у винограда играют два гена: VvMybA1 и VvMybA2. При этом было обнаружено, что по той или иной причине, эти гены (одновременно или по одиночке) деактивированы в геномах белоягодных сортов. Как правило, причин три: 1) встраивание ретротранспозона Gret-1 в ген VvMybA1 [201]; 2) делеция в гене VvMybA1 [70]; 3) нуклеотидная замена в гене VvMybA2 [86]. В целом, доказано, что белоягодные формы и возникли из-за таких мутаций и закрепились в виде популяций, так как данные мутации устойчивы и стабильно передаются как вегетативному, так и генеративному потомству. Несмотря на это, данные мутации не являются необратимыми и известны случаи возвращения к окрашенному состоянию<br />
у белоягодных сортов [88, 205].</p>
<p>На данный момент строение гена VvMybA1 изучено у достаточно многих генотипов винограда, относящихся к сортам и гибридам, выведенных за пределами России. При этом, генетическое разнообразие этого признака в формах винограда из региона Северного Кавказа, бассейна Черного моря и других географических областей России практически не изучено и, поэтому, представляет большой интерес для фундаментальной и прикладной молекулярной генетики<br />
в виду потенциального наличия уникальных аллелей и в целях изучения происхождения аборигенных сортов. В свою очередь, добавление структуры генов Myb к описанию ампелографических признаков позволит более детально изучить биологическое разнообразие аборигенного винограда, и, возможно, выделить перспективные формы для селекции [162, 179].</p>
<p>Как уже было отмечено, окраска ягод винограда является одним из важнейших признаков в селекционной работе. По этой причине важно накапливать и анализировать информацию о строении генов, влияющих на этот признак, что позволит разрабатывать ДНК-маркеры для селекции [106]. Также важно отметить, что идентификация уникальных мутаций важна и для того, чтобы в дальнейшем их использовать с целью трансформации виноградного генома различными методами, исследования международных групп ученых по этой проблеме активно ведутся [92, 147, 154, 177, 184, 193]. В том числе, перенос данных генов находит применение не только для самого винограда, но и других растений [154].</p>
<p><em>Vitis vinifera</em> L. – одна из наиболее древних и распространенных растительных культур, издавна выращиваемых человеком. И, как известно, чаще всего данная культура используется для дальнейшей переработки урожая<br />
в вино. При этом хорошее вино – это продукт, который обладает балансом множества различных характеристик, например, кислотность, сахаристость, наличие различных аминокислот и т. д. В свою очередь, такие общие показатели как качество и количество вина зависят от еще большего числа факторов, таких как почвенно-климатические условия, наличие полива и наличие вредителей [67, 68]. Тем более, установлено, что цены на вино, произведенное на одной и той же территории, могут варьировать различное количество раз из года в год только из-за годовых погодных условий [67]. С другой стороны, стоимость вина, произведенного в один год, может варьировать из-за области, где оно произведено [67, 69].</p>
<p>Помимо этого, климат и агротехнология выращивания, в совокупности<br />
с внутренними факторами сильно влияют и на продолжительность жизни вина, так как в отличие от остальных продуктов переработки, после открытия бутылки – вкус и качество сильно изменяются с течением времени. И такая возможность сохранения создает еще более высокий и желанный для потребителя класс вин [95, 96, 136, 164].</p>
<p>Но несмотря на это, основной признак, на который обращает внимание потребитель при выборе вина – это его цвет [127]. Очевидно, фактом является то, что цвет выбранного вина играет и важную роль в представлении потребителем возможного вкуса вина и, в общем и целом, всех его ожиданий [148, 170]. Для самого же вина важно, что наличие пигментных компонентов влияет на его состав, например, наличие антиоксидантов в красных винах [152, 198]. В частности, в молодых красных винах окраска усиливается также и содержанием полифенольных соединений, присутствующих в кожице ягод, одними из наиболее распространенных являются антоцианины [80].</p>
<p>Как было установлено, антоциановая окраска ягод винограда контролируется кластером генов, расположенных в хромосоме 2 [88, 137, 156]. Этот локус близкородственен к R2R3-Myb генам и псевдогенам, среди которых функциональны MybA1 и MybA2, являющимися двумя смежными транскрипционными факторами, которые регулируют окраску ягод. Помимо них существуют MybA3 и MybA4, при этом они не показали наличие значительного (MybA3) или какого-либо (MybA4) влияния на синтез антоцианинов [140, 200]. Таким образом, сейчас научным сообществом, в основном, изучаются строение<br />
и экспрессия именно двух генов VvMybA1 и VvMybA2, у которых было<br />
открыто наличие аллелей, различных по своему строению, детерминированию признака и экспрессии, в том числе и возникающих при соматических мутациях [140, 141, 172].</p>
<p>На данный момент описаны различные варианты строения аллелей данных генов как для окрашенных сортов, так и для неокрашенных [123, 141]. При этом важно отметить, что было выявлено не только потеря окраски у мутантных форм [200], но и ее восстановление [88], что, конечно же, является интересным для конечного потребителя. Поэтому, в нашем исследовании мы поставили целью изучение строения аллелей генов VvMybA1 и VvMybA2 у ранее отобранных генотипов.</p>
<h2><strong>2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ</strong></h2>
<h3><strong>2.1 Растительный материал</strong></h3>
<p>В качестве растительного материала, нами были выбраны 105 генотипов сортов, форм и клонов винограда для изучения строения их аллелей генов VvMybA1 и VvMybA2 (таблица 1). При этом, в список вошли: аборигенные сорта, сорта новой селекции и перспективные клоны, отобранные в результате предыдущих работ профессором Л. П. Трошиным.</p>
<p><strong>Таблица 1</strong> – Список генотипов, отобранных для исследования</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>1</td>
<td>Кумшатский</td>
<td>28</td>
<td>Андижанский черный</td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>Варюшкин 9 ряд кл.19 (26)</td>
<td>29</td>
<td>Босса</td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>Траминер</td>
<td>30</td>
<td>Сиргула</td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>Совиньон Таманский</td>
<td>31</td>
<td>Хатми</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>Профессор Трубилин</td>
<td>32</td>
<td>Плавай</td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>Совиньон Таманский<br />
114-35 куст</td>
<td>33</td>
<td>Мсхвилтвала Тетри</td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>Сибирьковый 14р. Клет. 19с</td>
<td>34</td>
<td>Тита рбили</td>
</tr>
<tr>
<td>8</td>
<td>Шаани</td>
<td>35</td>
<td>Тавлинский поздний</td>
</tr>
<tr>
<td>9</td>
<td>Алый терский</td>
<td>36</td>
<td>Тавквери</td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>Португальский синий</td>
<td>37</td>
<td>Пти Вердо 1 к3 р7</td>
</tr>
<tr>
<td>11</td>
<td>Кульджинский</td>
<td>38</td>
<td>Рислинг Рейнский 1-7 (7)</td>
</tr>
<tr>
<td>12</td>
<td>Чинури 1-7 (18-19)</td>
<td>39</td>
<td>Солярис К</td>
</tr>
<tr>
<td>13</td>
<td>Риш баба 1-8 (33-34)</td>
<td>40</td>
<td>Шардоне 1-7 (13-14)</td>
</tr>
<tr>
<td>14</td>
<td>Чауш</td>
<td>41</td>
<td>Панагия Сумела 2</td>
</tr>
<tr>
<td>15</td>
<td>Уни белый (92-93)</td>
<td>42</td>
<td>Панагия Сумела 11</td>
</tr>
<tr>
<td>16</td>
<td>Нимранг 1-11 (19-20)</td>
<td>43</td>
<td>Жупски баядисер 3куст</td>
</tr>
<tr>
<td>17</td>
<td>Кизил сапак 1-8 (61-62)</td>
<td>44</td>
<td>Кумшацкий белый</td>
</tr>
<tr>
<td>18</td>
<td>Буланый 1-36 (63-64)</td>
<td>45</td>
<td>Сыпун черный</td>
</tr>
<tr>
<td>19</td>
<td>Хатми 1-11 (76-77)</td>
<td>46</td>
<td>Будай шули</td>
</tr>
<tr>
<td>20</td>
<td>Воскеат 1-38 (70-71)</td>
<td>47</td>
<td>Гок изюм</td>
</tr>
<tr>
<td>21</td>
<td>Цоликаури 1-36 (49-50)</td>
<td>48</td>
<td>Гюляби дагестанский</td>
</tr>
<tr>
<td>22</td>
<td>Шабаш</td>
<td>49</td>
<td>Гок ала</td>
</tr>
<tr>
<td>23</td>
<td>Гамэ черный</td>
<td>50</td>
<td>Яй изюм розовый</td>
</tr>
<tr>
<td>24</td>
<td>Чиляки 1-23 (35-36)</td>
<td>51</td>
<td>Яй изюм белый</td>
</tr>
<tr>
<td>25</td>
<td>Тербаш 1-23 (35-34)</td>
<td>52</td>
<td>Рислинг Алькадар 34а</td>
</tr>
<tr>
<td>26</td>
<td>Баян Ширей</td>
<td>53</td>
<td>Рислинг 34г</td>
</tr>
<tr>
<td>27</td>
<td>Катта-Курган</td>
<td>54</td>
<td>Рислинг К-830</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4"><em>Продолжение таблицы 1</em></td>
</tr>
<tr>
<td>55</td>
<td>Пино белый 32</td>
<td>97</td>
<td>Долгожданный 6-9</td>
</tr>
<tr>
<td>56</td>
<td>Рислинг 9-9-1</td>
<td>98</td>
<td>Долгожданный</td>
</tr>
<tr>
<td>57</td>
<td>Рислинг 2-19-6-1</td>
<td>99</td>
<td>Долгожданный Ф</td>
</tr>
<tr>
<td>58</td>
<td>Каберне-Совиньон 337</td>
<td>100</td>
<td>Антоний Великий 30-5</td>
</tr>
<tr>
<td>59</td>
<td>Рислинг 3-14-11-11-1</td>
<td>101</td>
<td>Антоний Великий 30-6</td>
</tr>
<tr>
<td>60</td>
<td>Пино белый 31</td>
<td>102</td>
<td>Антоний Великий</td>
</tr>
<tr>
<td>61</td>
<td>Рислинг 3-14-20-9-2</td>
<td>103</td>
<td>Антоний Великий Ф</td>
</tr>
<tr>
<td>62</td>
<td>Рислинг 9-6-4</td>
<td>104</td>
<td>Аркадия розовая 2-5</td>
</tr>
<tr>
<td>63</td>
<td>Пино белый 46</td>
<td>105</td>
<td>Аркадия розовая 2-6</td>
</tr>
<tr>
<td>64</td>
<td>Каберне-Совиньон 5А</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>65</td>
<td>Каберне-Совиньон 169</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>66</td>
<td>Рислинг 7-11-18-9-1</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>67</td>
<td>Каберне-Совиньон 15КМ</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>68</td>
<td>Каберне-Совиньон 15КМ</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>69</td>
<td>Рислинг 3-14-9-9-1</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>70</td>
<td>Пино белый 6</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>71</td>
<td>Рислинг 7-15-107-7п</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>72</td>
<td>Рислинг 3-14-4-11-1</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>73</td>
<td>Рислинг 7-12-201-15-1</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>74</td>
<td>Клон Грамотенко</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>75</td>
<td>Алиготэк</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>76</td>
<td>Мерло 14МГ</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>77</td>
<td>Рислинг контроль</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>78</td>
<td>Каберне-Совиньон контроль</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>79</td>
<td>Алиготе контроль</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>80</td>
<td>Совиньон 1</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>81</td>
<td>Совиньон 2</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>82</td>
<td>Совиньон 3</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>83</td>
<td>Совиньон 4</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>84</td>
<td>Совиньон контроль</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>85</td>
<td>Мерло контроль</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>86</td>
<td>Анюта 5-5</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>87</td>
<td>Анюта</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>88</td>
<td>Анюта Ф</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>89</td>
<td>Ливия 14-6</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>90</td>
<td>Ливия 14-5</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>91</td>
<td>Ливия</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>92</td>
<td>Ливия Ф</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>93</td>
<td>Гелиос 50-5</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>94</td>
<td>Гелиос 50-6</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>95</td>
<td>Академический К</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>96</td>
<td>Долгожданный 6-8</td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Помимо этих сортов, также в опыт были добавлены и другие, при невозможности идентифицировать какую-либо из аллелей у выбранных сортов.</p>
<h3><strong>2.2 Выделение ДНК</strong></h3>
<p>Выделение ДНК проводилось двумя способами: ЦТАБ-методом и при помощи коммерческого набора DNeasy Plant Mini Kit фирмы QIAGEN. Перед выделением ДНК из листьев, отобранные растительные ткани высушивались<br />
в лиофильной сушке Martin Christ BETA 2-8 LDplus в течение 24 ч. После этого, производилось их дробление при помощи металлических шариков в пробирках с пробами в вибрационной мельнице GT200. Ниже для каждого метода приводятся протоколы.</p>
<h4><strong><em>2.2.1 Выделение ДНК ЦТАБ-методом</em></strong></h4>
<p>Протокол выделения ЦТАБ-методом:</p>
<ol>
<li>К дробленой растительной ткани добавляли 1–2 % поливинилплоипиролидина и 810 мкл ЦТАБ-буфера. Полученный гомогенизат перемещали на инкубацию в термостат на 65 °С на 30 мин. В процессе инкубации перемешивали содержимое пробирки на вортексе каждые 5 мин.</li>
<li>После инкубации охлаждали пробирки до комнатной температуры<br />
и добавить в каждую пробу по 810 мкл раствора хлороформа и изоамилового спирта, смешанного в соотношении 24 : 1.</li>
<li>Далее перемешивали на вортексе, после чего центрифугировали 15 мин со скоростью 13000 об./мин.</li>
<li>Получившийся супернатант переносили в новую пробирку объемом 1,5 мл.</li>
<li>К нему добавляли 50 мкл 3М ацетата натрия, 150 мкл 4М хлорида натрия и 540 мкл холодного изопропанола.</li>
<li>Далее, перемешивали на вортексе и инкубировали при температуре минус 20 °С в течение 30 мин.</li>
<li>После чего центрифугировали в течении 15 мин со скоростью<br />
13000 об./мин.</li>
<li>Промывание образовавшегося осадка выполняли 70%-м этиловым спиртом объемом 500 мкл. Для этого удаляли из пробирки жидкую фазу, приливали к осадку спирт, перемешивали на вортексе, после чего спирт удаляли пипеткой.</li>
<li>Следующим этапом – в термостат помещали пробирки с открытыми крышками и высушивали осадок при температуре 37 °С в течение 20 мин.</li>
<li>После чего добавляли к осадку 300 мкл ТЕ буфера и 1 мкл РНКазы.</li>
<li>Данную смесь перемешивали на вортексе и инкубировали на термостате один час при температуре 37 °С.</li>
<li>Потом добавляли 100 мкл 10М ацетата аммония и 1000 мкл холодного этилового спирта.</li>
<li>После перемешали на вортексе и инкубировали при температуре минус 80 °С в течение 5 мин.</li>
<li>После чего центрифугировали 10 мин при 13000 об./мин.</li>
<li>Жидкую фазу удаляли и промывали 70%-м этиловым спиртом объемом 500 мкл.</li>
<li>Потом осадок высушивали в пробирках с открытыми крышками в термостате 20 мин при температуре 37 °С до полного испарения этанола.</li>
<li>В конце к осадку приливали 50 мкл ТЕ. Для лучшего растворения ДНК, пробирки инкубировали при плюс 3 °С в течение 12 ч.</li>
</ol>
<h4><strong><em>2.2.2 Выделение ДНК с использованием набора DNeasy Plant Mini Kit</em></strong></h4>
<p>Протокол выделения ДНК коммерческим набором DNeasy Plant Mini Kit компании QIAGEN:</p>
<ol>
<li>К раздробленным тканям листьев добавляли 400 мкл буфера AP1<br />
и 4 мкл РНКазы А. Перемешивали на вортексе и инкубировали в течение 10 мин при 65 °С. Перемешивали содержимое пробирки 2–3 раза во время инкубации.</li>
<li>Приливали 130 мкл буфера P3. Перемешивали и инкубировали в течение 5 мин на льду.</li>
<li>После чего центрифугировали лизат в течение 5 мин на скорости<br />
20000 об./мин.</li>
<li>Затем переносили верхнюю фазу в спин-колонку QIAshredder, находящуюся в прозрачной пробирке для сбора без крышки объемом 2 мл. Центрифугировали в течение 2 мин на скорости 20000 об./мин.</li>
<li>Аккуратно переносили жидкость, образовавшуюся под колонкой, в новую пробирку, не допуская встряхивания. К жидкости добавляли 1,5 объема буфера AW1 и перемешивали на вортексе.</li>
<li>Переносили 650 мкл смеси в спин-колонку DNeasy Mini, помещенную<br />
в пробирку объема 2 мл. Центрифугировали в течение 1 мин на скорости<br />
≥ 6000 об./мин. Повторяли этот шаг с оставшимся образцом необходимое количество раз.</li>
<li>Помещали спин-колонку в новую пробирку объемом 2 мл. Добавляли 500 мкл буфера AW2, центрифугировали в течение 1 мин на скорости<br />
≥ 6000 об./мин. Удаляли жидкость, образовавшуюся под колонкой в прозрачной пробирке.</li>
<li>После добавляли еще 500 мкл буфера AW2. Центрифугировали в течение 2 мин на скорости 20000 об./мин.</li>
<li>Переносили спин-колонку в новую пробирку объемом 1,5 мл или 2 мл.</li>
</ol>
<p>Примечание: извлекать спин-колонку из пробирки следует осторожно, не допуская контакта с жидкостью, находящейся под ней.</p>
<ol>
<li>Затем добавляли 100 мкл буфера AE для элюции и инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре (15–25 °C). После инкубации центрифугировали в течение 1 мин на скорости 6000 об./мин</li>
<li>Еще раз повторяли 11 шаг для увеличения количества полученной ДНК.</li>
</ol>
<h4><strong><em>2.2.3 Оценка качества и количества выделенной ДНК</em></strong></h4>
<p>Оценку качества и количества ДНК, выделенной из высушенных листьев, проводили двумя методами: 1) при помощи агарозного гель-электрофореза;<br />
2) при помощи спектрофотометра Implen NanoPhotometer NP80.</p>
<p>После проведения измерений, тотальная ДНК разбавлялась в деионизированной воде до концентрации 20 нг/мкл.</p>
<h3><strong>2.3 Проведение полимеразной цепной реакции</strong></h3>
<p>Полимеразная цепная реакция проводилась в амплификаторе ДТ-322, компании «ДНК-Технология». Для проведения ПЦР были выбраны праймеры, созданные с целью идентификации в генотипах винограда генов VvMybA1<br />
и VvMybA2 и, соответственно, ранее опубликованные в статьях [63, 201]. Последовательности праймеров приведены в таблице 2.</p>
<p><strong>Таблица 2 </strong>– Нуклеотидные последовательности, использованные<br />
в работе праймеров</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Название</td>
<td>Нуклеотидная последовательность</td>
</tr>
<tr>
<td>VvMybA1_F</td>
<td>GACGTAAAAAAATGGTTGCACGTG</td>
</tr>
<tr>
<td>VvMybA1_R</td>
<td>GAACCTTCTTTTTGAAGTGGTGACT</td>
</tr>
<tr>
<td>VvMybA2_F</td>
<td>GTGAGGAGAGTACATTGTAGGA</td>
</tr>
<tr>
<td>VvMybA2_R</td>
<td>GAACCTTCTTTTTCAGGTGGTGACC</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>При проведении ПЦР использовались следующие параметры амплификации:</p>
<p>95 °С – начальная денатурация, 5 мин;</p>
<p>далее 30 циклов:</p>
<p>95 °С –денатурация, 30 с;</p>
<p>55 °С – отжиг праймеров, 30 с;</p>
<p>72 °С – элонгация, 1 мин;</p>
<p>после чего дополнительный шаг:</p>
<p>72 °С – финальная элонгация, 5 мин.</p>
<h3><strong>2.4 Проверка наличия амплифицированных фрагментов (ДНК-бендов)</strong></h3>
<p>Проверка наличия амплифицированных фрагментов в результате ПЦР проводилась в камере для горизонтального электрофореза компании «Helicon», в 2%-м ТАЕ-агарозном геле. Параметры гель-электрофореза были выбраны следующие: 150V, 150А, в течение 20 мин. Далее агарозные пластины фотографировались в ультрафиолетовом свете и неудачные образцы ПЦР отмечались для повторного проведения амплификации.</p>
<h3><strong>2.5 Выделение и очистка амплифицированных фрагментов</strong></h3>
<p>Полученные фрагменты вырезали из гелевой пластины скальпелем и выделяли при помощи набора Cleanup Standart, компании ЗАО «Евроген» (<a href="http://evrogen.ru/kit-user-manuals/BC022.pdf" target="_blank" rel="noopener">http://evrogen.ru/kit-user-manuals/BC022.pdf</a>). Далее приводится протокол выделения и очистки ПЦР-фрагментов на колонке с незначительными изменениями, примененными во время работы.</p>
<p>Объемы растворов в наборе рассчитаны на средний вес фрагментов геля 150 мг.</p>
<p>Протокол выделения и очистки ПЦР-фрагментов:</p>
<ol>
<li>Фрагмент геля с целевой ДНК вырезали скальпелем в слабом ультрафиолетовом свете.</li>
<li>После чего гель помещали в микроцентрифужную пробирку объемом 2 мл.</li>
<li>К гелю добавляли три объема «связывающего раствора» (но не менее 350 мкл). Тем не менее, в связи с рекомендацией, при использовании гелей<br />
с концентрацией агарозы 1,8 % и выше, количество «связывающего раствора» было увеличено до четырех–пяти объемов.</li>
<li>Далее смесь инкубировали при 50–55 °C на твердотельном термостате «Термит» (компания «ДНК-Технология») до полного растворения геля. Для ускорения растворения раствор перемешивали путем встряхивания пробирки<br />
на вортексе каждые 5 мин.</li>
<li>После чего необходимо перейти к пункту «II. Выделение ДНК на колонке».</li>
</ol>
<p>Протокол выделения ДНК на колонке:</p>
<ol>
<li>Поместить спин-колонку в собирательную пробирку.</li>
<li>Перенести пробу в колонку и центрифугировать 30 с. Удалить фильтрат из собирательной пробирки, расположенной снизу. В связи с тем, что объем пробы был 1000 мкл, ее разделяли на несколько нанесений на колонку. После каждого нанесения аликвоты колонку центрифугировали.</li>
<li>После чего добавляли 700 мкл «промывочного раствора» в колонку<br />
и центрифугировали 30 с. Фильтрат, собранный снизу, удаляли.</li>
<li>Повторить пункт 3.</li>
<li>Пустую колонку центрифугировали 1 мин для полного удаления промывочного раствора.</li>
<li>Колонку переставляли в новую пробирку на 1,5 мл.</li>
<li>После чего оставляли при комнатной температуре на 10 мин для испарения остатка спирта.</li>
<li>В центр мембраны приливали 50 мкл элюирующего раствора и оставляли на 5 мин.</li>
<li>Центрифугировали 30 с.</li>
<li>Элюирующий раствор (50 мкл) повторно наносили на колонку, оставляли на 5 мин и центрифугировали 30 с для увеличения выхода ДНК.</li>
</ol>
<p>Очищенную ДНК хранили при минус 20 °C.</p>
<p>Концентрация образца ПЦР измерялась нанофотометром Implen NanoPhotometer NP80 и доведилась деионизированной водой до объема 6 мкл, содержащего очищенный фрагмент ПЦР в количестве 30 нг/мкл.</p>
<h3><strong>2.6 Секвенирование амплифицированных фрагментов</strong></h3>
<p>Секвенирование проводилось компанией ЗАО «Евроген» (<a href="http://evrogen.ru/services/sequencing/service-sequencing.shtml" target="_blank" rel="noopener">http://evrogen.ru/<br />
services/sequencing/service-sequencing.shtml</a>) методом Сэнгера, с использованием прямого и обратного ПЦР праймеров (таблица 2). Такой метод секвенирования был выбран для достижения наиболее достоверного результата, так как некоторые из изучаемых генотипов были геторозиготны, а также сравнение прямой и обратной последовательности позволяло избежать ошибок при секвенировании, которые могли возникнуть при амплификации Taq-полимеразой<br />
в процессе ПЦР.</p>
<h3><strong>2.7 Анализ нуклеотидных последовательностей</strong></h3>
<p>Анализ на соответствие ожидаемому результату проводился посредством поиска последовательности в базе данных NCBI, используя BLAST, blastx<br />
и CD-search [138].</p>
<p>Выравнивание полученных ДНК и протеиновых последовательностей проводили стандартными параметрами в программе ClustalO, форматами VIENNA (для выравнивая в fasta формате) и ClustalW (для дальнейшего анализа) [168]. Анализ выравненных последовательностей проводили при помощи интерфейса MView [81].</p>
<p>Филогенетические отношения между изучаемыми последовательностями аминокислот устанавливали с использованием программы MEGA7 [126] методом Maximum Likelihood [144], с моделью Jones-Taylor-Thornton [115]<br />
и 999 бутстрепами. Координатный анализ строился при помощи программы Jalview [114].</p>
<h2><strong>3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ</strong></h2>
<p>В результате исследований были получены последовательности исследованных генов у 105 генотипов. Данные сиквенсы были сравнены между собой<br />
и выявлены полиморфные участки. В итоге, для получения понятия о родстве генотипов были использованы методы кластеризации изученных ДНК-последовательностей.</p>
<h3><strong>3.1 Изучение аллелей гена VvMybA1 у аборигенных сортов</strong></h3>
<p>В результате амплификации ДНК-праймерами VvMybA1_F и VvMybA1_R (таблица 3), нами были выявлено наличие искомых аллелей гена VvMybA1<br />
у всех генотипов. Результаты разделения продуктов амплификации в 2%-м агарозном геле отображены на рисунках 1–6.</p>
<p><strong>Таблица 3 </strong>– Результаты поиска в базе данных NCBI</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Сорт</td>
<td>Результат/процент идентичности</td>
<td>Источник</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Яй изюм<br />
белый</td>
<td>Vitis vinifera cultivar Sirch MybA1 gene / 100 %</td>
<td>Roshani-Bakhsh et al., 2017, не опубликовано</td>
</tr>
<tr>
<td>Гюляби<br />
дагестанский</td>
<td>Vitis vinifera VvMybA3 gene for myb-related transcription factor / Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 99,84 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Воскеат</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Чиляки</td>
<td>Vitis vinifera VvMybA3 gene for Myb-related transcription factor / Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Шабаш</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Цоликаури</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 99,84 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Чауш</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Продолжение таблицы 3</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Совиньон<br />
Таманский</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Риш баба</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Шаани</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Хатми</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Плавай</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Баян<br />
Ширей</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Мсихлтвала<br />
Тетри</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Катта-Курган</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Тита Рбили</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Уни белый</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Хатми</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Тербаш</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Сиргула</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Чинури</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 100 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Босса</td>
<td>Vitis vinifera DNA, retrotransposon Gret1, complete sequence and VvMybA1 gene for Myb-related transcription factor / 99,84 %</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Академик<br />
Трубилин</td>
<td>Vitis vinifera Pinot noir transcription factor MYBA3 (MybA3) gene, MybA3-2 allele / 99,83 %</td>
<td>McCallum et al., 2009, не опубликовано</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Продолжение таблицы 3</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Гамэ<br />
черный</td>
<td>Vitis hybrid cultivar Grand Noir Chateau des Charmes transcription factor MYBA1 (MybA1) gene, MybA1-1 allele / 100 %</td>
<td>McCallum et al., 2009, не опубликовано</td>
</tr>
<tr>
<td>Гок ала</td>
<td>Vitis vinifera cultivar Alphonse Lavalle MYBA1 (MybA1) gene, mybA1-ALF allele / 99,84 %</td>
<td>Lijavetzky et al., 2006</td>
</tr>
<tr>
<td>Тавквери</td>
<td>Vitis vinifera cultivar Panje Arus MybA1 gene / 99,84 %</td>
<td>Roshani-Bakhsh et al., 2017, не опубликовано</td>
</tr>
<tr>
<td>Андижанский черный</td>
<td>Vitis vinifera cultivar Panje Arus MybA1 gene / 100 %</td>
<td>Roshani-Bakhsh et al., 2017, не опубликовано</td>
</tr>
<tr>
<td>Тавлинский поздний</td>
<td>Vitis vinifera cultivar Panje Arus MybA1 gene / 100 %</td>
<td>Roshani-Bakhsh et al., 2017, не опубликовано</td>
</tr>
<tr>
<td>Кумшацкий черный</td>
<td>Vitis vinifera cultivar Panje Arus MybA1 gene / 100 %</td>
<td>Roshani-Bakhsh et al., 2017, не опубликовано</td>
</tr>
<tr>
<td>Буланый</td>
<td>Vitis vinifera cultivar Panje Arus MybA1 gene / 100 %</td>
<td>Roshani-Bakhsh et al., 2017, не опубликовано</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><img width="1113" height="753" class="wp-image-5236" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA1\1. Аборигены и дикие виды 1-223\VvMybA1_F2R_1-223.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-.jpeg 1113w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2--300x203.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2--1024x693.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2--768x520.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1113px) 100vw, 1113px" /></p>
<p><strong>Рисунок 1</strong> – Разделение продуктов амплификации ДНК аборигенных сортов<br />
с праймерами VvMybA1_F и VvMybA1_R</p>
<p><img width="765" height="572" class="wp-image-5237" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-1.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA1\1. Аборигены и дикие виды 1-223\VvMybA1_F2R_1-223_2.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-1.jpeg 765w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-1-300x224.jpeg 300w" sizes="(max-width: 765px) 100vw, 765px" /></p>
<p><strong>Рисунок 2</strong> – Разделение продуктов амплификации ДНК аборигенных сортов<br />
с праймерами VvMybA1_F и VvMybA1_R</p>
<p><img width="1087" height="462" class="wp-image-5238" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-2.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA1\1. Аборигены и дикие виды 1-223\VvMybA1_F2R_1-223_3.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-2.jpeg 1087w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-2-300x128.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-2-1024x435.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-2-768x326.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1087px) 100vw, 1087px" /></p>
<p><strong>Рисунок 3</strong> – Разделение продуктов амплификации ДНК аборигенных сортов<br />
с праймерами VvMybA1_F и VvMybA1_R</p>
<p><img width="930" height="1119" class="wp-image-5239" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-3.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA1\1. Аборигены и дикие виды 1-223\VvMybA1_F2R_1-223_4.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-3.jpeg 930w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-3-249x300.jpeg 249w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-3-851x1024.jpeg 851w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-3-768x924.jpeg 768w" sizes="(max-width: 930px) 100vw, 930px" /></p>
<p><strong>Рисунок 4</strong> – Разделение продуктов амплификации ДНК аборигенных сортов<br />
с праймерами VvMybA1_F и VvMybA1_R</p>
<p><img width="889" height="627" class="wp-image-5240" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-4.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA1\1. Аборигены и дикие виды 1-223\VvMybA1_F2R_1-223_5.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-4.jpeg 889w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-4-300x212.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-4-768x542.jpeg 768w" sizes="(max-width: 889px) 100vw, 889px" /></p>
<p><strong>Рисунок 5</strong> – Разделение продуктов амплификации ДНК аборигенных сортов<br />
с праймерами VvMybA1_F и VvMybA1_R</p>
<p><img width="1404" height="566" class="wp-image-5241" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-5.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA1\1. Аборигены и дикие виды 1-223\VvMybA1_F2R_1-223_6.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-5.jpeg 1404w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-5-300x121.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-5-1024x413.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-5-768x310.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1404px) 100vw, 1404px" /></p>
<p><strong>Рисунок 6</strong> – Разделение продуктов амплификации ДНК аборигенных сортов<br />
с праймерами VvMybA1_F и VvMybA1_R</p>
<p>Стоит отметить, что выявленные аллели были визуально одинакового размера (примерно 800 п.н.) Такой результат является вполне ожидаемым, в связи с тем, что указанные маркеры дают возможность детектировать аллели как<br />
у окрашенных, так и у неокрашенных сортов, однако последовательности нуклеотидов данных аллелей могут быть полиморфны. Поэтому, нами было проведено секвенирование с последующим выравниванием данных сиквенсов при помощи программы Clustal Omega с целью анализа их строения (рисунок 7).</p>
<p><img width="1366" height="768" class="wp-image-5242" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2607.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2607.png 1366w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2607-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2607-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2607-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1366px) 100vw, 1366px" alt="word image 2607 Сравнительное изучение строения генов VvmybA1 и VvmybA2, контролирующих антоциановую окраску ягод у отечественных и зарубежных сортов винограда с целью создания молекулярно-генетических маркеров для отбора высококачественных технических и столовых сортов"></p>
<p><strong>Рисунок 7</strong> – Выравнивание нуклеотидных последовательностей<br />
в программе Clustal Omega</p>
<p>Выравнивание данных последовательностей аллелей изученных сортов показало полиморфное строение у многих образцов (см. рисунок 7). При этом наиболее интересным результатом было обнаружение у генотипа Яй изюм белый вставки, длинной 110 п.н. Это интересно в виду того, что на данный момент известна функциональная аллель mybA1-SUB, имеющая вставку почти<br />
в раза длиннее – 188 п.н. Предполагается, что данная вставка имеет схожее происхождение у сорта Яй изюм белый. Помимо этого, также предполагается, что она присутствует и у таких родственных генотипов как Яй изюм черный<br />
и Яй изюм розовый. Помимо этого, в результате секвенирования у всех изученных генотипов были выявлены как уникальные, так и общие нуклеотидные замены. Наибольшее количество однонуклеотидных полиморфизмов было выявлено у сорта Яй изюм белый, при этом, качество сиквенса данного генотипа было достаточно высоким (рисунок 8).</p>
<p><img width="952" height="218" class="wp-image-5243" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\1. Grants\1. Мой первый грант\Статьи\3 Вавиловский журнал\Рисунок 2 – Нуклеотидная замена, выявленная у сорта Яй изюм розовый.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-.jpeg 952w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1--300x69.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1--768x176.jpeg 768w" sizes="(max-width: 952px) 100vw, 952px" /></p>
<p><strong>Рисунок 8</strong> – Нуклеотидная замена, выявленная у сорта Яй изюм белый</p>
<p>Как один из примеров, на рисунке 8 мы можем видеть нуклеотидную замену у сорта Яй изюм белый в 418 нуклеотидной позиции. При этом, у всех остальных сортов встречается только один нуклеотид, т. е. данная мутация является уникальной для изученной выборки аборигенных сортов.</p>
<p>Для того, чтобы проверить имеются ли еще генотипы и, соответственно, аллели с такими же нуклеотидными заменами и насколько высока схожесть<br />
у изученных нами сортов с уже описанными, мы провели поиск в базе данных NCBI (см. таблицу 3). В целом, итоги, полученные при проверке совпадения<br />
в базе данных NCBI, дали вполне ожидаемый результат: наличие экспрессируемой аллели у красноягодных сортов и не функциональной у белоягодных (см. таблицу 3). Тем не менее, в виду того, что нами использовалось секвенирование с использованием прямого и обратного праймеров, у некоторых сортов было выявлено гетерозиготное состояние локуса. Это не является особенностью, так как подобные случаи уже были известны ранее. Тем не менее, были выявлены как процентные, так и качественные различия у изученных генотипов, в частности, у таких сортов как: Яй изюм белый, Гюляби дагестанский, Цоликаури, Босса, Академик Трубилин, Гамэ черный, Гок ала и Тавквери, в сравнении<br />
с референсными (см. таблицу 3).</p>
<p>Как показано в таблице 3, у некоторых сортов было выявлено наличие различий в строении изученных аллелей при сравнении с референсными сортами. Не смотря на это, при анализе результатов было уточнено, что обнаружены не столько различия между нуклеотидными последовательностями, сколько гетерогенность, очевидно вызванная одновременным наличием нескольких аллелей в генотипах и, соответственно, их сложным селекционным происхождением, которое до конца не установлено из-за того, что данные сорта являются стародавними.</p>
<p>Такая гетерогенность является крайне интересной для последующего изучения и, вполне возможно, станет одним из посылов к дальнейшему изучению истории этих аборигенных сортов и уточнению их происхождения.</p>
<p>Неожиданным же оказалось то, что у дагестанского аборигенного генотипа Яй изюм белый, который имеет неокрашенную ягоду, были найдены 100 % совпадения с сортами Сирх, Сира, Ягуты, Султанина Розада, а также с диким лесным виноградом <em>Vitis vinifera</em> subsp. <em>silvestris</em>. В свою очередь, это указывает на то, что данный аборигенный сорт имеет такую схожую функциональную аллель как MybA1-SUB, которая представлена в сортах с розовой ягодой: Султанина Розада и Кошу. Это же позволяет сделать вывод, что отсутствие окраски<br />
у данного сорта вполне возможно может иметь иную причину, нежели мутация в гене VvMybA1. Помимо этого, такие полученные данные представляют возможность предположить близкое родство данного сорта с диким лесным виноградом. И, возможно, данный генотип унаследовал строение своей аллели именно от сеянцев, которые появились в результате случайного опыления с диким виноградом, достаточно распространенным в Кавказском регионе, тем более что происхождение сорта до сих пор точно неизвестно.</p>
<p>Аборигенный сорт Гюляби дагестанский, имеющий розовую окраску ягод, показал наличие в своем геноме, по-видимому, гетерозиготной аллели. Такой вывод заключается из того факта, что при сравнение с базой данных NCBI было выявлено совпадение его нуклеотидного сиквенса с аллелью сорта Бенитака, который является мутантным окрашенным клоном сорта Италия. Не смотря на это, стоит отметить, что совпадение было выявлено именно с геном, имеющим ретротранспозонную вставку, которая блокирует его нормальную экспрессию. В виду этого факта и того, что в отличие от Бенитаки, происхождение этого аборигенного сорта неизвестно, мы не можем точно утверждать, что в этом случае произошло возвращение окраски из неокрашенной формы. С другой стороны, интересным было также и обнаружение схожей аллели у таких сортов как Чиляки, Баян Ширей и Босса (неокрашенная ягода). Это, в свою очередь, также показывает их гетерогенность и предполагает наличие таких генов в родительских формах.</p>
<p>Происхождение сортов Академик Трубилин и Гамэ черный, а также их принадлежность к группе западно-европейских были подтверждены. Интересным же является то, что было выявлено абсолютное сходство между аллелями Гамэ черный и французского аборигенного сорта Гранд нуар, который имеет ярко выраженную антоцианиновую окраску ягод и вина.</p>
<p>Помимо этого, установлена схожесть строения аллелей аборигенного генотипа Гок ала с сортом Альфонс Лавалле, выведенным во Франции. В частности, наличие у него в генотипе аллели VvMybA1<sup>ALF</sup>. Данная аллель является функциональной, и поэтому оба сорта имеют интенсивную окраску ягод, и, следовательно, наличие гомозиготной функциональной аллели.</p>
<p>В остальном стоит отметить, что полученные результаты у других аборигенных генотипов соответствовали ожидаемым и подтверждаются фенотипическими проявлениями исследуемого признака. Чтобы проверить влияние строения аллелей на аминокислотную последовательность, мы провели сравнение при помощи алгоритмов blastx (таблица 4).</p>
<p><strong>Таблица 4 </strong>– Результаты сравнения аминокислотных последовательностей<br />
изученных сортов винограда</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Сорт</td>
<td>Результат</td>
<td>Источник</td>
</tr>
<tr>
<td>Яй изюм белый</td>
<td>truncated MybA1 [Vitis vinifera]</td>
<td>Lijavetzky et al., 2006</td>
</tr>
<tr>
<td>Гюляби<br />
дагестанский</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Воскеат</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Чиляки</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Шабаш</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Цоликаури</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Чауш</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Совиньон<br />
Таманский</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Риш баба</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Шаани</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Хатми</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Плавай</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Баян Ширей</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Мсихлтвала<br />
Тетри</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Катта-Курган</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Тита Рбили</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Уни белый</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Хатми</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Тербаш</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Сиргула</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Чинури</td>
<td>myb-related transcription factor [Vitis vinifera]</td>
<td>Azuma et al., 2009</td>
</tr>
<tr>
<td>Босса</td>
<td>truncated MybA1 [Vitis vinifera]</td>
<td>Lijavetzky et al., 2006</td>
</tr>
<tr>
<td>Академик<br />
Трубилин</td>
<td>truncated MybA1 [Vitis vinifera]</td>
<td>Lijavetzky et al., 2006</td>
</tr>
<tr>
<td>Гамэ черный</td>
<td>truncated MybA1 [Vitis vinifera]</td>
<td>Lijavetzky et al., 2006</td>
</tr>
<tr>
<td>Гок ала</td>
<td>MybA1 [Vitis vinifera]</td>
<td>Lijavetzky et al., 2006</td>
</tr>
<tr>
<td>Тавквери</td>
<td>truncated MybA1 [Vitis vinifera]</td>
<td>Lijavetzky et al., 2006</td>
</tr>
<tr>
<td>Андижанский<br />
черный</td>
<td>truncated MybA1 [Vitis vinifera]</td>
<td>Lijavetzky et al., 2006</td>
</tr>
<tr>
<td>Тавлинский<br />
поздний</td>
<td>truncated MybA1 [Vitis vinifera]</td>
<td>Lijavetzky et al., 2006</td>
</tr>
<tr>
<td>Кумшацкий<br />
черный</td>
<td>truncated MybA1 [Vitis vinifera]</td>
<td>Lijavetzky et al., 2006</td>
</tr>
<tr>
<td>Буланый</td>
<td>truncated MybA1 [Vitis vinifera]</td>
<td>Lijavetzky et al., 2006</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таким образом, результаты показывают нам распределение выявленных аллелей на три основные группы по аминокислотным последовательностям. Но все исследованные сиквенсы показали 100 % схожесть с уже внесенными в базы данных NCBI (см. таблицу 4). Помимо этого, данные аминокислотные последовательности консервативны не только для сортов, но и при межвидовом сравнении. Так, например, сорт Гюляби дагестанский показал совпадение как<br />
с видом <em>Vitis hancockii</em>, так и с видом <em>Vitis pseudoreticulata</em>. Из этого очевидно, что данные виды не могут быть родственными данному сорту в виду их отдаленности по географическому признаку. В целом, сорта показали схожесть<br />
с разными образцами, и, очевидно, имеют различия между собой в аминокислотной последовательности, как это уже было показано для других сортов. Поэтому, для того чтобы выявить особенности их строения, мы провели их выравнивание в ClustalO (рисунок 9).</p>
<p><img width="1366" height="768" class="wp-image-5244" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2608.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2608.png 1366w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2608-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2608-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2608-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1366px) 100vw, 1366px" alt="word image 2608 Сравнительное изучение строения генов VvmybA1 и VvmybA2, контролирующих антоциановую окраску ягод у отечественных и зарубежных сортов винограда с целью создания молекулярно-генетических маркеров для отбора высококачественных технических и столовых сортов"></p>
<p><strong>Рисунок 9</strong> – Сравнение аминокислотных последовательностей<br />
аборигенных сортов</p>
<p>Как уже было сказано, изученные сорта сформировали три основных кластера по степени схожести аминокислотного состава. И в результате их выравнивания было выявлено, что в двух позициях (12 и 23) имеются замены.<br />
В частности в 23 – триптофан на изолейцин, в то время как в 23 – изолейцин на валин. При этом, такая замена в нашем исследовании была уникальной и выявлена только у сорта Гок ала. Тем не менее, известно, что данные аминокислоты обладают схожими свойствами и, в виду окраски ягод данного генотипа, по-видимому, данная замена не повлияла на проявление признака.</p>
<p>С другой стороны, интересно отметить корреляцию в большинстве случаев между изменениями аминокислоты под номером 12 и окраской ягод. Как можно увидеть из рисунка 9, большинство сортов, обладающих красной ягодой, имеют в этой позиции изолейцин, в то время как неокрашенные сорта – триптофан. При этом видно, что ClustalO указывает на неравнозначность замены данных аминокислот. При этом, указанные ранее результаты предполагают наличие гетерозиготного состояния у некоторых окрашенных сортов.</p>
<p>Для изучения филогенетических и проверки результатов взаимоотношений, по данным исследованиям аллелей гена VvMybA1 мы провели кластерный анализ изученных генотипов аборигенных сортов винограда с использованием, как ДНК, так и аминокислотных последовательностей для сравнения результатов между собой (рисунок 10).</p>
<p><img width="1160" height="778" class="wp-image-5245" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-1.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\1. Grants\1. Мой первый грант\Статьи\3 Вавиловский журнал\Рисунок 4 - UPGMA древа основанные на нуклеотидных и аминокислотных последовательностях.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-1.jpeg 1160w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-1-300x201.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-1-1024x687.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-1-768x515.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1160px) 100vw, 1160px" /></p>
<p><strong>Рисунок 10</strong> – UPGMA кластеризации основанные на нуклеотидных<br />
и аминокислотных последовательностях</p>
<p>Сравнение двух UPGMA кластеризаций, основанных на нуклеотидных<br />
и аминокислотных сиквенсах, выявило, в целом, схожее распределение генотипов. Большинство образцов распределилось между кластерами окрашенных<br />
и неокрашенных генотипов в соответствии с их окраской. Аборигенные сорта, такие как Баян Ширей и Чиляки, имеющие окраску ягод, вошли в кластер неокрашенных сортов, но, как говорилось ранее, это вызвано гетерозиготностью данных сортов.</p>
<p>Однако некоторые сорта не имели строгой привязки к какому-то определенному микро-кластеру. Например, сорт Яй изюм белый был выделен программой в отдельный кластер по результатам анализа ДНК последовательности, в том время как по результатам сиквенса аминокислот он вошел в кластер красноягодных сортов. С одной стороны, это объяснимо наличием уникальной вставки (которая не была обнаружена ни у одного из генотипов), с другой стороны, результат также интересен тем, что сорт обладает белой ягодой, в то время как аминокислотная последовательность его характерна для окрашенных сортов. Таким образом, данный результат поддерживает теорию о том, что потеря окраски у данного сорта имеет другую причину, нежели мутация гена VvMybA1.</p>
<p>Как было установлено, сорт Босса, имеющий интенсивную окраску ягод, по результатам анализа ДНК последовательностей был включен в кластер неокрашенных сортов, в то время как результаты анализа аминокислотного сиквенса были совершенно иными. Данный результат объясним тем, что, не смотря на изменения в строении последовательности нуклеотидов, аминокислоты не были изменены. Однако стоит заметить, что по результатам поиска<br />
с применением NCBI BLAST, данный сорт должен иметь вставку ретротранспозона Gret-1, блокирующую его нормальное функционирование. Этот факт предполагает по себе, что данный сорт народной селекции вполне может оказаться генотипом-ревертантом и, следовательно, был отобран как мутант, произошедший вследствие каких-то вегетативных изменений. В итоге данный сорт, сохранил строение аллели, схожее с изначальной, блокированной мобильным ДНК-элементом.</p>
<p>Таким образом, генетическое разнообразие исследованных сортов представлено несколькими типами известными ранее аллелей: VvMybA1a, VvMybA1c, VvMybA1<sup>AFL</sup>, VvMybA1<sup>SUB</sup> и VvMybA1<sup>BEN</sup>. При этом выявлено, что некоторые сорта гетерозиготны и, очевидно, имеют как функциональную, так<br />
и не экспрессируемую аллели гена VvMybA1. Помимо этого, обнаружены различия в строении генов, которые позволяли, как идентифицировать уникальные генотипы, так и выявить общие области в их строении. Дальнейший анализ при помощи трансляции нуклеотидной в аминокислотную последовательность подтвердил вышеизложенные гипотезы и показал, что имеется и уникальная для данной выборки аминокислотная замена. Таким образом, в целом, аминокислотные сиквенсы имели строение, характерное для групп сортов, которые они представляют по своему фенотипу. Что, в итоге, также было подтверждено<br />
и кластерным анализом аборигенных сортов.</p>
<p>Наиболее интересным результатом исследований было обнаружение у сорта Яй изюм белый 110 п.н. вставки, характерной для аллели mybA1-SUB, которая является функциональной. Тем не менее, так как сорт не имеет выраженной яркой окраски ягод, это дает возможность сделать предположение, что причина отсутствия такого проявления данного признака другая, например, однонуклеотидная мутация в гене VvMybA2. Помимо этого, интересным может оказаться<br />
и то, что такая вставка присутствует в строении аллелей гена антоциановой окраски ягод у близкородственных генотипов Яй изюм черный и Яй изюм розовый, что, конечно же, требует дополнительного изучения. Более того, при сравнении аллелей всех изученных генотипов между собой, у сорта Яй изюм белый выявлено уникальное строение аллели, в связи с тем, что у него было обнаружено наибольшее количество однонуклеотидных замен при сравнении<br />
с другими формами. Тем не менее, строение его аминокислотной последовательности, экспрессируемой геном совпадало с другими сортами, таким образом, наличие нуклеотидных замен, никак не повлияло на аминокислотное строение. По результатам сравнения в ClustalO и MEGA7 данный генотип вошел<br />
в кластер окрашенных сортов, что дает возможность предполагать о иной причине отсутствия окраски ягод сорта (не изменения в гене VvMybA1) и о его родстве с сортами Яй изюм черный и Яй изюм розовый. В то время как открытым же вопросом остается генеалогия этих трех сортов.</p>
<p>Также, мы провели изучение таких известных сортов как Сибирьковый, Шардоне, Сыпун черный и Каберне Кортис. После разделения продуктов амплификации в агарозном геле была визуализированы результаты, которые показали, что все четыре испытуемых образца (два имеющих окраску ягод и два не имеющих) имеют одинаковые по размеру аллели – примерно 850 п.н. Однако данный результат не является уникальным, так как в аналогичных работах, уже была продемонстрирована схожесть изученных ДНК последовательностей, полученных в результате ПЦР, не только по размеру, но и по строению аллелей. Тем не менее, было показано, что одинаковые по размеру области могут быть полиморфны и различаться по структуре, которая влияет и на сам признак окраски. Поэтому, для установления структуры одинаковых по размеру последовательностей аллелей нами было проведено их секвенирование. После чего, участки были сравнены друг с другом в программе ClustalO (рисунок 11) для анализа их полного строения.</p>
<p><img width="838" height="566" class="wp-image-5246" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj.jpeg" alt="D:\Документы\Гранты и госзадания\1. Гранты\1. Мой первый грант\Статьи\1 ВАК\Рисунок 1.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj.jpeg 838w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj-300x203.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj-768x519.jpeg 768w" sizes="(max-width: 838px) 100vw, 838px" /></p>
<p><strong>Рисунок 11</strong> – Анализ участков изученных аллелей гена VvMybA1<br />
в программе ClustalO</p>
<p>На рисунке 11 демонстрируются некоторые однонуклеотидные полиморфизмы, выявленные по результатам анализа. В итоге, в результате уравнения последовательностей, мы можем видеть, что присутствуют нуклеотидные замены отличающие между собой, в первую очередь, бело- и красноягодные сорта, например 4–10 нуклеотидные позиции. Помимо этого, результаты подтверждаются и методом поиска среди последовательностей, имеющихся в базе данных NCBI, так как при сравнении с ними была выявлена 100 % схожесть, за исключением аборигенного сорта Сыпун черный.</p>
<p>Таким образом, ДНК последовательности алелей выявленные у сортов Шардоне и Сибирьковый оказались идентичными и показали совпадение с аллелью, характерной для сортов, не имеющих окраску ягод. Эти же сорта имеют вставку транспозона Gret-1, который блокирует его работу. Таким образом, мы можем сделать вывод, что именно наличие такой транспозонной вставки в данном гене блокирует экспрессию гена, отвечающего за антоциановый окрас ягод у сорта Сибирьковый.</p>
<p>Помимо этого, не смотря на то, что у сорта Сыпун черный в 290 нуклеотиде была выявлена уникальная мутация, в целом, строение его аллели (так же как и у сорта Каберне Кортис) характерно для окрашенных сортов (в частности: KY406230.1, GU145121.1 и GU145120.1). Интересным же фактом является то, что схожесть выявлена конкретно с аллелью VvMybA1<sup>SUB</sup>, которая, в свою очередь, иногда может быть выявлена и не в экспрессируемом состоянии у таких неокрашенных сортов и клонов как Султанина, Пировано 166А и др., а, следовательно, не является здесь играющей основную роль в формировании окраски ягод.</p>
<p>После установления принадлежности сиквенсов к искомым аллелям, мы произвели поиск уже среди аминокислотных последовательностей, используя алгоритмы blastx. Таким образом, для всех четырех ДНК-сиквенсов была выявлена предположительная аминокислотной последовательность (рисунок 12).</p>
<p>Результаты поиска аминокислотных последовательностей с использованием blastx показали полное совпадение строения у всех анализируемых образцов за исключением крупной вставки в середине сиквенса, которая является трансляцией интронной последовательности в аминокислоты. По какой-то причине она не была исключена системой.</p>
<p><img width="692" height="876" class="wp-image-5247" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj-1.jpeg" alt="D:\Документы\Гранты и госзадания\1. Гранты\1. Мой первый грант\Статьи\1 ВАК\Рисунок 2.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj-1.jpeg 692w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj-1-237x300.jpeg 237w" sizes="(max-width: 692px) 100vw, 692px" /></p>
<p><strong>Рисунок 12</strong> – Результаты поиска аминокислотных последовательностей<br />
при помощи алгоритмов blastx</p>
<p>Посел выявления однонуклеотидных полиморфизмов, мы произвели выравнивание белковых последовательностей в ClustalO (рисунок 13), для поиска различий и в их строении.</p>
<p>Рисунок 13 раскрывает общие и уникальные особенности строения предполагаемых аминокислотных сиквенсов. Общие различия между белоягодными и красноягодными сортами были обнаружены в 12, 49 и 62 позициях аминокислот. Как мы видим, уникальная замена изолейцина на валин была выявлена<br />
у сорта Сыпун черный в 23 позиции сиквенса.</p>
<p><img width="928" height="382" class="wp-image-5248" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj-2.jpeg" alt="D:\Документы\Гранты и госзадания\1. Гранты\1. Мой первый грант\Статьи\1 ВАК\Рисунок 4.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj-2.jpeg 928w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj-2-300x123.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj-2-768x316.jpeg 768w" sizes="(max-width: 928px) 100vw, 928px" /></p>
<p><strong>Рисунок 13</strong> – Уравнение протеиновых последовательностей<br />
с интронной вставкой (выделена другим цветом)</p>
<p>Помимо этого важным будет заметить, что два из четырех полиморфизмов располагаются именно в кодирующей части. При этом один из них характерен для бело- и красноягодных генотипов, в то время как 23 аминокислота у сорта Сыпун черный, в данном исследовании, является уникальной. В частности потому, что, согласно CD-search, она располагается в консервативном участке. Также, интересным является и тот факт, что при поиске схожих последовательностей в данной позиции обнаружено сходство с сортом Альфонс Лавалле. Оба сорта являются ярко окрашенными, а, следовательно, изменение такой аминокислотной последовательности никак не влияет на экспрессию данного признака. Примечательно, что поиск данного сиквенса в NCBI выявил, его встречаемость у межвидовых гибридов, которые также имеют схожую структуру своих генов, но отличаются от изучаемого генотипа заменой валина на изолейцин, также как и при сравнении с изученными генотипами.</p>
<p>В свою очередь, неожиданным же оказалась схожесть строения аминокислотной последовательности сорта Сибирьковый с такими окрашенными сортами, такими как Бенитака, Каберне Совиньон и Родитис. Тем не менее, это может быть объяснимо тем, что, например, сорт Бенитака является спонтанным мутантом от белоягодного сорта Италия, сорт Каберне Совиньон – это гибрид, несущий обе аллели, так же как и сорт Родитис.</p>
<p>Дабы провести сравнительный анализ последовательностей генов обуславливающих окрашенные и неокрашенные ягоды, мы произвели их кластеризацию с использованием аминокислотных последовательностей. При этом мы ввели дополнительно генотип (<em>Rosa chinensis</em>, XP_024179665.1) из семейства Розоцветных для создания аут-группы (рисунок 14).</p>
<p><img width="516" height="350" class="wp-image-5249" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj-3.jpeg" alt="D:\Документы\Гранты и госзадания\1. Гранты\1. Мой первый грант\Статьи\1 ВАК\Рисунок 5.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj-3.jpeg 516w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-dokumenty-granty-i-goszadaniya-1-granty-1-moj-3-300x203.jpeg 300w" sizes="(max-width: 516px) 100vw, 516px" /></p>
<p><strong>Рисунок 14</strong> – Кластеризация изученных генотипов с использованием<br />
аминокислотных последовательностей (показаны бутстрепы 50 и выше)</p>
<p>При кластеризации, как и ожидалось, генотипы разделились на три группы: аут-группу, окрашенные и неокрашенные сорта. При этом интересным было то, что программа сформировала древо именно таким образом, что белоягодные сорта отделились от основной ветви: располагаются между окрашенными сортами и аут-группой. Эти данные подтверждаются также и другими исследованиями. Так ведь и в самом деле, некоторые сорта с неокрашенной ягодой появились в результате спонтанной мутации, как например, Пино блан.<br />
В это же время существуют также и сорта-ревертанты, например, сорт Бенитака у которого было зафиксировано обратное возвращение окраски, т. е. обратный переход от белого цвета ягод к розовому.</p>
<p>Впервые у некоторых аборигенных сортов России нами были идентифицированы аллели гена VvMybA1. Выравнивание последовательностей показало наличие характерных особенностей строения аллелей для каждого из изученных сортов. Были выявлены уникальные однонуклеотидные замены присущие конкретным генотипам с окрашенной и неокрашенной ягодой. Поиск полученных в результате секвенирования последовательностей в NCBI посредством алгоритмов BLAST показал, что, в целом, все генотипы имеют аллели характерные для бело- и черноягодных сортов.</p>
<h3><strong>3.2 Изучение аллелей гена VvMybA1 у клоновых форм распространенных сортов винограда</strong></h3>
<p>В результате работы были выявлены аллели (рисунки 15 и 16) и изучено строение последовательностей аллелей гена VvMybA1 у клонов, принадлежащих к распространенным сортотипам винограда. Для определения принадлежности генов к определенным аллелям, а также установления особенностей их строения, мы провели сравнение с уже известными генотипами в базе данных NCBI.</p>
<p><img width="1448" height="1121" class="wp-image-5250" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-6.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA1\2. Клоны 1-38\VvMybA1_F2R_1-38.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-6.jpeg 1448w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-6-300x232.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-6-1024x793.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-6-768x595.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1448px) 100vw, 1448px" /></p>
<p><strong>Рисунок 15</strong> – Разделение продуктов амплификации праймеров с сортоклонами</p>
<p><img width="1388" height="1448" class="wp-image-5251" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-7.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA1\2. Клоны 1-38\VvMybA1_F2R_1-38_2.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-7.jpeg 1388w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-7-288x300.jpeg 288w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-7-982x1024.jpeg 982w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-7-768x801.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1388px) 100vw, 1388px" /></p>
<p><strong>Рисунок 16</strong> – Разделение продуктов амплификации праймеров с сортоклонами</p>
<p>Таким образом, по результатам анализа было выявлено, что сорта имеют аллели, характерные для красноягодных и белоягодных генотипов. В целом<br />
и общем, для клоновых генотипов, относящихся к сортам Рислинг, Пино белый, Совиньон белый и Алиготе, не было обнаружено изменений или какой-либо гетерогенности в строении их аллелей, а последовательности их были характерны для белоягодных сортов. В то же время в сиквенсах таких клонов сортов как Каберне Совиньон и Мерло были выявлены как изменения, так и наличие гетерогенности (рисунок 17).</p>
<p>Как мы можем видеть у некоторых изученных генотипов имеются отличия, выраженные в одно- и динуклеотидных заменах (см. рисунок 17). При этом, интересно, что такие отличия показали именно парные клоны. Например, Каберне Совиньон 15КМ, что повышает вероятность достоверности. Помимо этого, интересно также и отметить, что клон Мерло 14МГ также показал наличие замен, схожих с другими красноягодными генотипами, имеющими такие же мутации. Таким образом, мы провели поиск подобных мест нуклеотидного полиморфизма в сиквенах, при помощи программы Unipro UGENE (рисунки 18 и 19).</p>
<p><img width="834" height="556" class="wp-image-5252" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-2.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\1. Grants\1. Мой первый грант\Статьи\2 ВАК\Рисунок 1 – Сравнение последовательностей изученных генотипов с выявленными различиями в программе ClustalO.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-2.jpeg 834w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-2-300x200.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-2-768x512.jpeg 768w" sizes="(max-width: 834px) 100vw, 834px" /></p>
<p><strong>Рисунок 17</strong> – Сравнение последовательностей изученных генотипов<br />
с выявленными различиями в программе ClustalO</p>
<p><img width="970" height="296" class="wp-image-5253" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-3.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\1. Grants\1. Мой первый грант\Статьи\2 ВАК\Рисунок 2 – Сравнение последовательностей окрашенных и неокрашенных генотипов в программе Unipro UGENE.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-3.jpeg 970w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-3-300x92.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-3-768x234.jpeg 768w" sizes="(max-width: 970px) 100vw, 970px" /></p>
<p><strong>Рисунок 18</strong> – Сравнение последовательностей окрашенных и неокрашенных клоновых генотипов</p>
<p>Как можно увидеть из рисунка 18, изученные окрашенные генотипы имеют отличия в строении последовательности их аллелей. И самое основное из таких отличий заключается в «двоении пиков» при секвенировании аллелей. Это говорит нам о наличии одновременно двух аллелей в генотипе, которые,<br />
в свою очередь, характерны для окрашенных и неокрашенных сортов. Такой вывод мы можем сделать при поиске подобного участка у сорта Рислинг, где нуклеотид аденин заменен на цитозин, в то время как окрашенные сорта, имеют обе аллели, что и выражается в «раздвоении пиков», характеризующих нуклеотиды.</p>
<p><img width="653" height="286" class="wp-image-5254" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-4.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\1. Grants\1. Мой первый грант\Статьи\2 ВАК\Рисунок 3 – Нуклеотидные замены, выявленные между окрашенными и неокрашенными сортами.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-4.jpeg 653w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-1-1-4-300x131.jpeg 300w" sizes="(max-width: 653px) 100vw, 653px" /></p>
<p><strong>Рисунок 19</strong> – Нуклеотидные замены, выявленные между окрашенными<br />
и неокрашенными сортоклонами</p>
<p>Помимо этого, при секвенировании был выявлен еще один сайт двоения последовательности, отмеченный стрелкой на рисунке. Но, также интересным является и то, что имеется замена и последующего нуклеотида: у окрашенных сортов – тимин, в то время как у неокрашенных – цитозин. Следует также отметить, что такое же различия были выявлены и в 298, 299 и 398 нуклеотидных позициях, где было обнаружено раздвоение сиквенса. Также, у клонов сорта Каберне Совиньон было выявлено наличие аллели имеющей ретротранспозонную вставку, характерную для сорта Совиньон блан и ответственную за экспресии этой аллели и, следовательно, окраски. В свою очередь, очевидно, что она могла быть получена им от одного из своих предков и, поэтому, была обнаружена путем секвенирования, которое показало «двоение» некоторых нуклеотидов в ДНК-последовательности.</p>
<p>Таким образом, проведенные исследования показывают, что изученные нами клоновые генотипы имеют аллели, характерные для этих групп сортов, как обладающих, так и не обладающих окраской ягод. В то же время, исследованные сорта имеют отличия, которые, в свою очередь, характерны для разных агробиологических и эколого-географических групп. Например, для всех белоягодных сортов выявлена схожесть с сортами и клонами, изученными ранее, что говорит об их возможности использования в дальнейшей сравнительной геномике. То же самое можно сказать и об окрашенных сортах, в связи с тем, что у них было подтверждено наличие искомых аллелей, позволяющих иметь антоциановую окраску ягод. Не смотря на это, для поиска различий между клонами, конечно же, очевидным будет рекомендовать использование более вариабельных участков.</p>
<p>Если же говорить о генах, контролирующих антоциановый окрас ягод, то наиболее вероятным представляется промотерная последовательность гена VvMybA2, в котором было выявлено девятнадцать полиморфных сайтов. Поэтому, мы можем заключить, что, хотя клоны и не имеют между собой отличий в изученных генах, но обладают аллелями, характерными для сортов имеющих и не имеющих окраску. Это, в свою очередь, позволяет использовать их в дальнейших исследованиях как референсные сорта при сравнении с другими неизвестными сортами.</p>
<h3><strong>3.3 Изучение аллелей гена VvMybA1 у родственных клоновых форм новых сортов винограда</strong></h3>
<p>С целью изучения сортов новой селекции мы провели амплификацию праймеров с ДНК новых сортогрупп. В результате работы были выявлены аллели (рисунок 20) и изучено строение последовательностей аллелей гена VvMybA1 у клонов сортов, принадлежащих к новым сортотипам. Для определения принадлежности генов к определенным аллелям и установления особенностей строения их последовательностей, мы провели сравнение с уже известными генотипами в базе данных NCBI.</p>
<p>Как видно из рисунка 20, все выявленные аллели обладали схожими размерами в п.н. Данное положение может быть объяснено несколькими причинами: 1) работа маркеров, рассчитанных на одну и ту же область; 2) отсутствие вставок в изученных аллелях; и 3) близкое родство некоторых из генотипов.</p>
<p>Поэтому, для того чтобы провести изучение строения аллелей и выявить их особенности было проведено секвенирование и выравнивание в программе Clustal Omega (рисунок 21).</p>
<p><img width="916" height="729" class="wp-image-5255" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-8.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA1\3. Varieties 1-26(22)\VvMybA1_F2R_1-26(22).JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-8.jpeg 916w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-8-300x239.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-8-768x611.jpeg 768w" sizes="(max-width: 916px) 100vw, 916px" /></p>
<p><strong>Рисунок 20</strong> – Результаты амплификации ДНК сортов новой селекции</p>
<p><img width="1366" height="768" class="wp-image-5256" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2609.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2609.png 1366w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2609-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2609-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2609-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1366px) 100vw, 1366px" alt="word image 2609 Сравнительное изучение строения генов VvmybA1 и VvmybA2, контролирующих антоциановую окраску ягод у отечественных и зарубежных сортов винограда с целью создания молекулярно-генетических маркеров для отбора высококачественных технических и столовых сортов"></p>
<p><strong>Рисунок 21</strong> – Выявление схожих последовательностей среди сиквенсов<br />
изученных аллелей</p>
<p>Как мы можем видеть, в большинстве своем изученные аллели были похожи друг на друга за исключением сорта Академический. Также, в отличие от остальных изученных генотипов, у сорта Академический была выявлена более короткая аллель в сравнении с другими образцами (рисунок 22).</p>
<p><img width="1366" height="768" class="wp-image-5257" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2610.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2610.png 1366w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2610-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2610-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2610-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1366px) 100vw, 1366px" alt="word image 2610 Сравнительное изучение строения генов VvmybA1 и VvmybA2, контролирующих антоциановую окраску ягод у отечественных и зарубежных сортов винограда с целью создания молекулярно-генетических маркеров для отбора высококачественных технических и столовых сортов"></p>
<p><strong>Рисунок 22</strong> – Укороченная аллель генотипа Академический</p>
<p>Тем не менее, чтобы произвести сравнение образцов между собой, нами была произведена кластеризация изученных генотипов. Как мы видим, близкородственные сорта не отличались друг от друга. Тем не менее, это: 1) подтверждает их происхождение; 2) говорит о высоком качестве полученных последовательностей. В свою очередь, сравнение полученных последовательностей<br />
с базой данных NCBI выявило, что изучаемые результаты были ожидаемыми. Таким образом, нами были получены сиквенсы близкородственных сортов новой селекции, которые могут использоваться в дальнейшем как основа для сравнения с сортами, выведенными с использованием таких генотипов как: Талисман, Кишмиш лучистый, Аркадия и Кишмиш находка.</p>
<h3><strong>3.4 Изучение строения гена VvMybA2 у сортов винограда</strong></h3>
<p>С целью изучения сортов новой селекции мы провели амплификацию праймеров с ДНК аборигенных сортогрупп. В результате работы были выявлены аллели (рисунки 23–29) и изучено строение последовательностей аллелей гена VvMybA2 у аборигенных сортов, принадлежащих к различным сортотипам. Для определения принадлежности генов к определенным аллелям и установления особенностей строения их последовательностей, мы провели сравнение с уже известными генотипами в базе данных NCBI.</p>
<p><img width="1035" height="1453" class="wp-image-5258" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-9.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA2\Фотографии форезов MybA2\DSC01378.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-9.jpeg 1035w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-9-214x300.jpeg 214w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-9-729x1024.jpeg 729w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-9-768x1078.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1035px) 100vw, 1035px" /></p>
<p><img width="1035" height="1453" class="wp-image-5259" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-10.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA2\Фотографии форезов MybA2\DSC01378.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-10.jpeg 1035w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-10-214x300.jpeg 214w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-10-729x1024.jpeg 729w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-10-768x1078.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1035px) 100vw, 1035px" /></p>
<p><strong>Рисунок 23</strong> – Разделение продуктов амплификации аллелей гена VvMybA2</p>
<p><img width="1275" height="1756" class="wp-image-5260" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-11.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA2\Фотографии форезов MybA2\DSC01377.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-11.jpeg 1275w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-11-218x300.jpeg 218w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-11-744x1024.jpeg 744w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-11-768x1058.jpeg 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-11-1115x1536.jpeg 1115w" sizes="(max-width: 1275px) 100vw, 1275px" /></p>
<p><img width="1275" height="1756" class="wp-image-5261" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-12.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA2\Фотографии форезов MybA2\DSC01377.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-12.jpeg 1275w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-12-218x300.jpeg 218w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-12-744x1024.jpeg 744w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-12-768x1058.jpeg 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-12-1115x1536.jpeg 1115w" sizes="(max-width: 1275px) 100vw, 1275px" /></p>
<p><strong>Рисунок 24</strong> – Разделение продуктов амплификации аллелей гена VvMybA2</p>
<p><img width="1275" height="875" class="wp-image-5262" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-13.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA2\Фотографии форезов MybA2\DSC01373.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-13.jpeg 1275w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-13-300x206.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-13-1024x703.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-13-768x527.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1275px) 100vw, 1275px" /></p>
<p><strong>Рисунок 25</strong> – Разделение продуктов амплификации аллелей гена VvMybA2</p>
<p><img width="1257" height="1854" class="wp-image-5263" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-14.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA2\Фотографии форезов MybA2\DSC01373 - копия.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-14.jpeg 1257w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-14-203x300.jpeg 203w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-14-694x1024.jpeg 694w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-14-768x1133.jpeg 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-14-1041x1536.jpeg 1041w" sizes="(max-width: 1257px) 100vw, 1257px" /></p>
<p><img width="1257" height="1854" class="wp-image-5264" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-15.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA2\Фотографии форезов MybA2\DSC01373 - копия.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-15.jpeg 1257w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-15-203x300.jpeg 203w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-15-694x1024.jpeg 694w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-15-768x1133.jpeg 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-15-1041x1536.jpeg 1041w" sizes="(max-width: 1257px) 100vw, 1257px" /></p>
<p><strong>Рисунок 26</strong> – Разделение продуктов амплификации аллелей гена VvMybA2</p>
<p><img width="1263" height="1811" class="wp-image-5265" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-16.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA2\Фотографии форезов MybA2\DSC01370.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-16.jpeg 1263w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-16-209x300.jpeg 209w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-16-714x1024.jpeg 714w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-16-768x1101.jpeg 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-16-1071x1536.jpeg 1071w" sizes="(max-width: 1263px) 100vw, 1263px" /></p>
<p><img width="1263" height="1811" class="wp-image-5266" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-17.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA2\Фотографии форезов MybA2\DSC01370.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-17.jpeg 1263w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-17-209x300.jpeg 209w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-17-714x1024.jpeg 714w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-17-768x1101.jpeg 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-17-1071x1536.jpeg 1071w" sizes="(max-width: 1263px) 100vw, 1263px" /></p>
<p><strong>Рисунок 27</strong> – Разделение продуктов амплификации аллелей гена VvMybA2</p>
<p><img width="1700" height="2556" class="wp-image-5267" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-18.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA2\Фотографии форезов MybA2\DSC01297.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-18.jpeg 1700w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-18-200x300.jpeg 200w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-18-681x1024.jpeg 681w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-18-768x1155.jpeg 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-18-1022x1536.jpeg 1022w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-18-1362x2048.jpeg 1362w" sizes="(max-width: 1700px) 100vw, 1700px" /></p>
<p><img width="1700" height="2556" class="wp-image-5268" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-19.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA2\Фотографии форезов MybA2\DSC01297.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-19.jpeg 1700w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-19-200x300.jpeg 200w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-19-681x1024.jpeg 681w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-19-768x1155.jpeg 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-19-1022x1536.jpeg 1022w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-19-1362x2048.jpeg 1362w" sizes="(max-width: 1700px) 100vw, 1700px" /></p>
<p><strong>Рисунок 28</strong> – Разделение продуктов амплификации аллелей гена VvMybA2</p>
<p><img width="1423" height="1762" class="wp-image-5269" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-20.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA2\Фотографии форезов MybA2\DSC01295.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-20.jpeg 1423w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-20-242x300.jpeg 242w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-20-827x1024.jpeg 827w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-20-768x951.jpeg 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-20-1240x1536.jpeg 1240w" sizes="(max-width: 1423px) 100vw, 1423px" /></p>
<p><img width="1423" height="1762" class="wp-image-5270" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-21.jpeg" alt="D:\Documents\Grants and Government Assignments\2. Госзадания\1. Кощаев виноград\VvMybA2\Фотографии форезов MybA2\DSC01295.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-21.jpeg 1423w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-21-242x300.jpeg 242w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-21-827x1024.jpeg 827w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-21-768x951.jpeg 768w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/d-documents-grants-and-government-assignments-2-1-21-1240x1536.jpeg 1240w" sizes="(max-width: 1423px) 100vw, 1423px" /></p>
<p><strong>Рисунок 29</strong> – Разделение продуктов амплификации аллелей гена VvMybA2</p>
<p>В результате работы нами были получены аллели искомого гена у изученных сортов. Стоит отметить, что выявленные аллели были визуально одинакового размера (примерно 1000 п.н.). Такой результат является вполне ожидаемым, в связи с тем, что указанные маркеры дают возможность детектировать аллели одинакового размера как у окрашенных, так и у неокрашенных сортов. Однако, как также известно, сами же последовательности нуклеотидов данных аллелей могут быть полиморфны. Поэтому, нами было проведено секвенирование с последующим выравниванием данных сиквенсов при помощи программы Clustal Omega с целью анализа их строения (рисунок 30).</p>
<p><img width="1366" height="768" class="wp-image-5271" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2611.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2611.png 1366w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2611-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2611-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2611-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1366px) 100vw, 1366px" alt="word image 2611 Сравнительное изучение строения генов VvmybA1 и VvmybA2, контролирующих антоциановую окраску ягод у отечественных и зарубежных сортов винограда с целью создания молекулярно-генетических маркеров для отбора высококачественных технических и столовых сортов"></p>
<p><strong>Рисунок 30</strong> – Выравнивание нуклеотидных последовательностей<br />
в программе Clustal Omega</p>
<p>Выравнивание данных последовательностей аллелей изученных сортов показало полиморфное строение у многих образцов (см. рисунок 30). При этом наиболее интересным было обнаружение полиморфности среди красноягодных сортов винограда. В то время как практически все белоягодные сорта имели практически одинаковое строение аллели. Это интересно в виду того, что, на данный момент известно всего несколько аллелей гена VvMybA2, которые ответственны за наличие либо отсутствие окраски (рисунок 31).</p>
<p>Помимо этого, известны также и последовательности у нескольких видов, принадлежащих к семейству <em>Vitaceae</em>, также доступные в NCBI. Тем не менее, для сравнения полученных результатов с уже имеющимися мы провели поиск алгоритмами NCBI BLAST среди семейства <em>Vitaceae </em>по параметрам наибольшего сходства (таблица 5).</p>
<p>Как мы видим из таблицы 5, практически все сорта показали сходство именно с аллелью Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds, при этом сортоклон Каберне-Совиньон 5А продемонстрировал высокую схожесть с формой аллели Vitis vinifera R2R3 MYB transcription factor (MYBA2) gene, MYBA2-white allele, complete cds. С одной стороны это было неожиданным, так как сорт Каберне-Совиньон обладает яркой окраской ягоды, с другой стороны, этот сорт гетерозиготный, так как произошел от белоягодного и красноягодного сортов. И, данный факт только подтверждает это, в связи<br />
с тем, что остальные клоны сорта Каберне-Совиньон показали схожесть с аллелью Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds. Данное совпадение является также интересным, так как это разные виды, тем не менее, как уже было сказано, аллелей VvMybA2 имеется всего несколько в базе данных. Тем более что качество сиквенса было достаточно хорошим (рисунок 32).</p>
<p><img width="1366" height="768" class="wp-image-5272" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2612.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2612.png 1366w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2612-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2612-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2612-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1366px) 100vw, 1366px" alt="word image 2612 Сравнительное изучение строения генов VvmybA1 и VvmybA2, контролирующих антоциановую окраску ягод у отечественных и зарубежных сортов винограда с целью создания молекулярно-генетических маркеров для отбора высококачественных технических и столовых сортов"></p>
<p><strong>Рисунок 31</strong> – Результаты поиска нуклеотидных последовательностей VvMybA2</p>
<p><img width="1366" height="768" class="wp-image-5273" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2613.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2613.png 1366w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2613-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2613-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2613-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1366px) 100vw, 1366px" alt="word image 2613 Сравнительное изучение строения генов VvmybA1 и VvmybA2, контролирующих антоциановую окраску ягод у отечественных и зарубежных сортов винограда с целью создания молекулярно-генетических маркеров для отбора высококачественных технических и столовых сортов"></p>
<p><strong>Рисунок 32</strong> – Нуклеотидная последовательность сорта Рислинг 34г</p>
<p>Для того чтобы проверить имеются ли еще генотипы и, соответственно, аллели с такими же нуклеотидными заменами и насколько высока схожесть<br />
у изученных нами сортов с уже описанными, мы провели поиск в базе данных NCBI (Таблица 5).</p>
<p><strong>Таблица 5 </strong>– Результаты поиска последовательностей в базе данных NCBI</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Название<br />
генотипа</td>
<td>Название гена</td>
<td>Процент совпадения</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Траминер</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Сибирьковый 14р. Клет. 19с</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,66</td>
</tr>
<tr>
<td>Сибирьковый</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>96,48</td>
</tr>
<tr>
<td>Шаани</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Алый терский</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,39</td>
</tr>
<tr>
<td>Португальский<br />
синий</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,51</td>
</tr>
<tr>
<td>Кульджинский</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Чинури 1-7<br />
(18-19)</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Риш баба 1-8<br />
(33-34)</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,09</td>
</tr>
<tr>
<td>Чауш</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Уни белый<br />
(92-93)</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Нимранг 1-11 (19-20)</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,51</td>
</tr>
<tr>
<td>Кизил сапак<br />
1-8 (61-62)</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,22</td>
</tr>
<tr>
<td>Буланый 1-36 (63-64)</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,36</td>
</tr>
<tr>
<td>Хатми 1-11<br />
(76-77)</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Воскеат 1-38<br />
(70-71)</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Цоликаури 1-36 (49-50)</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Шабаш</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Гамэ черный</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Чиляки 1-23<br />
(35-36)</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Продолжение таблицы 5</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Тербаш 1-23<br />
(35-34)</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Баян Ширей</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Катта-Курган</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Андижанский<br />
черный</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Босса</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>96,49</td>
</tr>
<tr>
<td>Хатми</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,66</td>
</tr>
<tr>
<td>Мсхвилтвала Тетри</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Тита рбили</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Пти Вердо 2<br />
к6 р7</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Пти Вердо 1<br />
к3 р7</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,54</td>
</tr>
<tr>
<td>Кортис 1<br />
к18 р 217</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>89,49</td>
</tr>
<tr>
<td>Пти Вердо 1<br />
к6 р7</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,54</td>
</tr>
<tr>
<td>Пти Вердо 2<br />
к3 р7</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,24</td>
</tr>
<tr>
<td>Солярис К</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,66</td>
</tr>
<tr>
<td>Шардоне 1-7<br />
(13-14)</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Панагия<br />
Сумела 2</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Панагия<br />
Сумела 4</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,24</td>
</tr>
<tr>
<td>Панагия<br />
Сумела 6</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,24</td>
</tr>
<tr>
<td>Панагия<br />
Сумела 11</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Антарис</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,24</td>
</tr>
<tr>
<td>Жупски<br />
Баядисер</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Жупски 3куст</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,24</td>
</tr>
<tr>
<td>Шампанчик Цимлянский</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Кумшацкий<br />
белый</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Сыпун черный</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,39</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Продолжение таблицы 5</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Будай шули</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Гок изюм</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Гюляби<br />
дагестанский</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>84,86</td>
</tr>
<tr>
<td>Аг изюм</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Гок ала</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,07</td>
</tr>
<tr>
<td>Яй изюм<br />
розовый</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>83,33</td>
</tr>
<tr>
<td>Яй изюм белый</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,66</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
Алькадар 34а</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>99,93</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг 34г</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,22</td>
</tr>
<tr>
<td>Пино белый 32</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,51</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг 9-9-1</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,36</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-Совиньон 217</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>84,15</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
2-19-6-1</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,66</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-Совиньон 337</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>86,19</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
3-14-11-11-1</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>96,49</td>
</tr>
<tr>
<td>Пино белый 31</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,51</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
3-14-20-9-2</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг 9-6-4</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,51</td>
</tr>
<tr>
<td>Пино белый 46</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-Совиньон 5А</td>
<td>Vitis vinifera R2R3 MYB transcription factor (MYBA2) gene, MYBA2-white allele, complete cds</td>
<td>90,07</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-Совиньон 169</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>84,75</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
7-11-18-9-1</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,66</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-Совиньон 15КМ</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>87,98</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-Совиньон 15КМ</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>89,41</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
3-14-9-9-1</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,80</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Продолжение таблицы 5</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Пино белый 6</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,66</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
Алькадар 34</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
7-15-107-7п</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,66</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
3-14-4-11-1</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Мерло 15</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
7-12-201-15-1</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Клон<br />
Грамотенко</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,51</td>
</tr>
<tr>
<td>Алиготэк</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>96,93</td>
</tr>
<tr>
<td>Мерло 14МГ</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,09</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
контроль</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,66</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-Совиньон<br />
контроль</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>85,66</td>
</tr>
<tr>
<td>Алиготе<br />
контроль</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Совиньон 1</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Совиньон 2</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Совиньон 3</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>93,37</td>
</tr>
<tr>
<td>Совиньон 4</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Совиньон<br />
контроль</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Пино белый<br />
контроль</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>95,31</td>
</tr>
<tr>
<td>Мерло контроль</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Ливия 14-6</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Ливия 14-5</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,66</td>
</tr>
<tr>
<td>Ливия</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,07</td>
</tr>
<tr>
<td>Ливия Ф</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Гелиос 50-5</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>96,78</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Продолжение таблицы 5</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Гелиос 50-6</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>96,78</td>
</tr>
<tr>
<td>Академический К</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Долгожданный 6-8</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Долгожданный 6-9</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Долгожданный</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Долгожданный Ф</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Антоний<br />
Великий 30-5</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Антоний<br />
Великий 30-6</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Антоний<br />
Великий</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Антоний<br />
Великий Ф</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Аркадия<br />
розовая 2-5</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>97,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Аркадия<br />
розовая 2-6</td>
<td>Vitis heyneana myb-related transcription factor A2 gene, complete cds</td>
<td>98,10</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В целом, результаты такой проверки, полученные при сравнении с базой данных NCBI дали, с одной стороны, вполне ожидаемый результат, а с другой – неожиданным было то, что схожесть выявлена именно с другим видом того же семейства. Тем не менее, в виду того, что нами использовалось секвенирование при использовании прямого и обратного праймеров, у некоторых сортов было выявлено гетерозиготное состояние локуса. Это, конечно же, является особенностью нашей выборки генотипов, но в целом не удивительно, так как у них не известно их происхождение. Тем не менее, как показано в таблице 5, были выявлены как процентные, так и качественные различия у изученных генотипов. Это говорит нам о гетерогенном строении гена, который был выбран для изучения, что также подтверждается предыдущими данными, так как при его анализе в прошлых исследованиях было выявлено 19 полиморфных сайтов.</p>
<p>Как показано в таблице 5 у некоторых сортов было выявлено наличие различий в строении изученных аллелей (что также подтверждается и выравниванием в программе Clustal Omega) при сравнении с уже имеющимися в базе данных сортами. Не смотря на это, при анализе результатов было уточнено, что обнаружены не только различия между нуклеотидными последовательностями, но и гетерогенность, очевидно вызванная одновременным наличием, очевидно, двух аллелей (функциональной и не функциональной) в генотипах и, соответственно, их сложным селекционным происхождением, которое до конца пока не установлено из-за того, что данные сорта являются стародавними и, вполне возможно, их родительские формы не могут быть обнаружены в виду того, что являются утерянными. Тем не менее, выявленные особенности их строения являются крайне интересными для последующего филогенетического изучения истории этих сортов и форм, а также уточнению их происхождения.</p>
<p>В остальном стоит отметить, что полученные результаты у генотипов соответствовали ожидаемым и, чтобы проверить влияние строения аллелей на аминокислотную последовательность, мы провели сравнение при помощи алгоритмов blastx (таблица 6).</p>
<p><strong>Таблица 6 </strong>– Результаты сравнение аминокислотных последовательностей<br />
изученных сортов винограда с базой данных NCBI</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Название</td>
<td>Результат поиска в NCBI</td>
<td>Процент<br />
совпадения</td>
<td>Код<br />
генбанка</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Траминер</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Сибирьковый 14р. Клет. 19с</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Сибирьковый</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>91,11</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Шаани</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Алый терский</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Португальский<br />
синий</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Кульджинский</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Чинури 1-7 (18-19)</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Риш баба 1-8<br />
(33-34)</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Чауш</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4"><em>Продолжение таблицы 6</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Уни белый<br />
(92-93)</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Нимранг 1-11<br />
(19-20)</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Кизил сапак 1-8<br />
(61-62)</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>93,33</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Буланый 1-36<br />
(63-64)</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>91,11</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Хатми 1-11<br />
(76-77)</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Воскеат 1-38<br />
(70-71)</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Цоликаури 1-36<br />
(49-50)</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Шабаш</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Гамэ черный</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Чиляки 1-23<br />
(35-36)</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Тербаш 1-23<br />
(35-34)</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Баян Ширей</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Катта-Курган</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Андижанский<br />
черный</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Босса</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Хатми</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Мсхвилтвала<br />
Тетри</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Тита рбили</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Пти Вердо 2 к6 р7</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Пти Вердо 1 к3 р7</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>93,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Кортис 1 к18 р 217</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Пти Вердо 1 к6 р7</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Пти Вердо 2 к3 р7</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Солярис К</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>95,56</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Шардоне 1-7<br />
(13-14)</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4"><em>Продолжение таблицы 6</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Панагия Сумела 2</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>95,67</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Панагия Сумела 4</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Панагия Сумела 6</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Панагия Сумела 11</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>95,56</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Антарис</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Жупски Баядисер</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Жупски 3куст</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Шампанчик<br />
Цимлянский</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Кумшацкий<br />
белый</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Сыпун черный</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Будай шули</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Гок изюм</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Гюляби<br />
дагестанский</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Аг изюм</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Гок ала</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>95,56</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Яй изюм розовый</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>70,37</td>
<td>RVW21054.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Яй изюм белый</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
Алькадар 34а</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>95,56</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг 34г</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Пино белый 32</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>93,33</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг 9-9-1</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-<br />
Совиньон 217</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг 2-19-6-1</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-<br />
Совиньон 337</td>
<td>Transcription factor MYB113<br />
[Vitis vinifera]</td>
<td>77,78</td>
<td>RVW21054.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
3-14-11-11-1</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>93,33</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4"><em>Продолжение таблицы 6</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Пино белый 31</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
3-14-20-9-2</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг 9-6-4</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Пино белый 46</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-<br />
Совиньон 5А</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>51,82</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-<br />
Совиньон 169</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
7-11-18-9-1</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-<br />
Совиньон 15КМ</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-<br />
Совиньон 15КМ</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
3-14-9-9-1</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Пино белый 6</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
Алькадар 34</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
7-15-107-7п</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
3-14-4-11-1</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Мерло 15</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг<br />
7-12-201-15-1</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Клон Грамотенко</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Алиготэк</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>95,56</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Мерло 14МГ</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>71,17</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Рисилинг контроль</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Каберне-<br />
Совиньон контроль</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Алиготе контроль</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Совиньон 1</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Совиньон 2</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Совиньон 3</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4"><em>Продолжение таблицы 6</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Совиньон 4</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Совиньон<br />
контроль</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Пино белый<br />
контроль</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>93,33</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Мерло контроль</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Ливия 14-6</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Ливия 14-5</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Ливия</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>95,56</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Ливия Ф</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Гелиос 50-5</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>93,33</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Гелиос 50-6</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>93,33</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Академический К</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>97,78</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Долгожданный<br />
6-8</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Долгожданный<br />
6-9</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Долгожданный</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Долгожданный Ф</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Антоний<br />
Великий 30-5</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Антоний<br />
Великий 30-6</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Антоний<br />
Великий</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Антоний<br />
Великий Ф</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Аркадия<br />
розовая 2-5</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Аркадия<br />
розовая 2-6</td>
<td>myb-relared transcription factor<br />
VvMYBA2 [Vitis vinifera]</td>
<td>100</td>
<td>BAD18978.1</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таким образом, результаты показывают нам распределение выявленных аллелей на три основные группы по аминокислотным последовательностям, относящимся к последовательностям в ген банке BAD18978.1, ABL14065.1<br />
и RVW21054.1. Все исследованные сиквенсы показали схожесть с уже имеющимися в базе данных NCBI сиквенсами. При этом важно отметить, что процент совпадения был разный. Это объясняется двумя фактами: 1) сорта имеют различную окраску, и изменения в гене VvMybA2 влияют на это; 2) сорта имеют гетерогенное строение, т. е. их аллели действительно отличаются от референсных, так как эти генотипы имеют в разной степени окрашенную ягоду.</p>
<p>В целом было выявлено, что данные аминокислотные последовательности консервативны как при сортовом, так и при межвидовом выравнивании. Интересным же было то, что такие клоны как Мерло 14МГ, Каберне-Совиньон 337<br />
и Яй изюм розовый показали наличие большого количества отличий от референсных аллелей, с которыми было проведено сравнение. Тем более что такие белки, обычно, являются консервативными. Также, в виду того, что все три сорта имеют яркую окраску у их ягод, предполагается, что данные различия, очевидно, не повлияли на экспрессию этого признака.</p>
<h3><strong>3.5 Филогенетический анализ изученных генотипов</strong></h3>
<p>Для изучения филогенетических взаимоотношений между изученными генотипами, мы провели кластеризацию методом Neighbor Join трех кластерных древ: гены VvMybA1 и VvMybA2 по отдельности и оба гена вместе. Такой алгоритм действий был выбран потому, как оба признака по сути являются признаками изученных организмов, но цель именно тройного анализа – сравнение полученных результатом: по отдельности и обобщенных.</p>
<p>Таким образом, нами были построены кластерные древа, содержащие изученные генотипы сортов и форм (рисунки 33–35).</p>
<p>Сравнение трех Neighbor Join кластеризаций, основанных на трех вариантах нуклеотидных сиквенсах, выявило, в целом, схожее распределение генотипов. Тем не менее, наиболее точное древо, как и ожидалось, было построено при использовании полных данных о нуклеотидных последовательностях двух генов.</p>
<p>В целом, все генотипы распределились на четыре макро-кластера, которые представлены основными четырьмя вариациями аллелей. И как мы можем видеть, через середину древа можно провести мнимую линию, которая будет разграничивать два основных сортотипа: с окрашенными и с не окрашенными ягодами.</p>
<p><img width="738" height="681" class="wp-image-5274" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2614.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2614.png 738w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2614-300x277.png 300w" sizes="(max-width: 738px) 100vw, 738px" alt="word image 2614 Сравнительное изучение строения генов VvmybA1 и VvmybA2, контролирующих антоциановую окраску ягод у отечественных и зарубежных сортов винограда с целью создания молекулярно-генетических маркеров для отбора высококачественных технических и столовых сортов"></p>
<p><strong>Рисунок 33</strong> – Neighbor Join древо, построенное на основе данных<br />
о ДНК-последовательностях гена VvMybA1</p>
<p><img width="681" height="686" class="wp-image-5275" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2615.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2615.png 681w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2615-298x300.png 298w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2615-150x150.png 150w" sizes="(max-width: 681px) 100vw, 681px" alt="word image 2615 Сравнительное изучение строения генов VvmybA1 и VvmybA2, контролирующих антоциановую окраску ягод у отечественных и зарубежных сортов винограда с целью создания молекулярно-генетических маркеров для отбора высококачественных технических и столовых сортов"></p>
<p><strong>Рисунок 34</strong> – Neighbor Join древо, построенное на основе данных<br />
о ДНК-последовательностях гена VvMybA2</p>
<p><img width="752" height="772" class="wp-image-5276" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2616.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2616.png 752w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2616-292x300.png 292w" sizes="(max-width: 752px) 100vw, 752px" alt="word image 2616 Сравнительное изучение строения генов VvmybA1 и VvmybA2, контролирующих антоциановую окраску ягод у отечественных и зарубежных сортов винограда с целью создания молекулярно-генетических маркеров для отбора высококачественных технических и столовых сортов"></p>
<p><strong>Рисунок 35</strong> – Neighbor Join древо, построенное на основе данных о ДНК-последовательностях генов VvMybA1 и VvMybA2</p>
<p>Тем не менее, имелись и некоторые смешения в кластерах. Например,<br />
к кластеру красноягодных сортов был отнесен генотип сорта Яй изюм белый. Это интересно в виду того, что имеются также такие сорта как Яй изюм черный и Яй изюм розовый. Как мы видим, Яй изюм розовый попал к сортам, имеющим яркую окраску, в то время как белоягодный сорт был дистанцирован от него ближе к макро-кластеру неокрашенных сортов. Отсюда можно предположить, что данный генотип имеет аллель близкородственную окрашенным генотипам и, возможно, произошел в виду появления какой-то мутации, заблокировавшей экспрессию окраски. Также интересно и то, что сорта Яй изюм белый<br />
и Яй изюм розовый не расположены рядом друг с другом, что наводит на мысль об их независимом происхождении, но, тем не менее, близком родстве. То есть вполне возможно они оба произошли от сорта Яй изюм черный, но<br />
в виду независимо произошедших мутаций.</p>
<p>Стоит отметить, что также в эту суб-группу сошел сорт Нимранг. Данный генотип имеет очень интересное проявление окраски, так как ягоды нельзя назвать полностью розовыми или зелеными. Тем не менее, мы отнесли его<br />
к слабоокрашенным сорта, но по результатам объединенных данных было выявлено, что строение его аллелей позволяет отнести его к окрашенным сортам. Также, его положение рядом с окрашенным сортом Гок ала дает возможность предположить, что происхождение сорта также относится к сортам бассейна Черного моря и, вполне возможно, кто-то из его близких или дальних предков был оттуда, отчего он и унаследовал такую аллель.</p>
<p>Неожиданным было то, что кластер белоягодных сортов вошел генотип Мерло клон Грамотенко, являющийся сортоклоном сорта Мерло, который имеет яркую окраску ягод. Тем не менее, выявление наличия «белой» аллели подтверждает его сложное происхождение, установленное в предыдущих исследования. Так как установлено, что его отцом является Каберне фран, а матерью – неизвестный ранее сорт.</p>
<p>Помимо этого, интересным результатом было и то, что такие сорта как Ливия, Гелиос и Аркадия Розовая вошли в макро-кластер белоягодных сортов. Конечно, данные сорта являются близкородственными, так как одним из их родителе был сорт Аркадия. В то время как Аркадия розовая и Гелиос имеют также общего и второго родителя: Кишмиш находка. Тем не менее, не смотря на наличие окраски у ягод, данные сорта были отнесены к группе сортов без нее. Вполне возможно, что тут наблюдается случай, противоположный тому, что мы можем видеть с сортов Нимранг. Не смотря на то, что данные сорта унаследовали наличие окраски от сорта Кишмиш находка, в то время как строение обоих или какого-то одного из генов VvMybA1 и VvMybA2 больше напоминает по своему строению «белую» аллель, что подтверждается также и слабой экспрессией данного признака.</p>
<p>Остальные же сорта, не имеющие окраски ягод, составили основу данного макро-кластера. Например, в отдельный микро-кластер были выделены генотипы, принадлежащие к сортотипу Рислинг. Также, интересным было и то, что аллели таких сортов как Совиньон и Пино белый, имеющие характерную окраску для белоягодных сортов, были разделены на два кластера, в которые вошли и аборигенные сорта. Это дает возможность предполодить, что, очевидно, такие сорта имеют также аллель, наиболее характерную для белоягодных сортов. В то же время как там был присовокуплен и сорт Мерло клон Грамотенко, у которого была выявлена не экспрессируемая аллель.</p>
<p>Таким образом, мы можем заключить, что кластеризация по принципу объединения данных прошла наиболее успешно, так как в таком случае наблюдалось наименьшее количество «примесей». Также важным является и то, что благодаря выполнению такой кластеризации, проливается свет на происхождение некоторых аборигенных сортов. Это также дает возможность определить<br />
и аллели, характерные для групп сортов, что в будущем станет основой как для сортоизучения, так и для фундаментальных исследований, ставящих перед собой цель понимание функционирования метаболических путей.</p>
<h2><strong>ВЫВОДЫ</strong></h2>
<ol>
<li>Впервые выполнено секвенирование нуклеотидных последовательностей аллелей VvMybA1 и VvMybA2 у перспективных аборигенных сортов<br />
и клоновых форм, отобранных и выращиваемых на территории Российской Федерации, что будет важным для проведения дальнейшей селекции опосредованной на получение конкретных агробиологических и производственных признаков.</li>
<li>По результатам секвенирования выбранных аллелей создана база данных ДНК-последовательностей изученных сортов (Прилолжения 1 и 2). Такие последовательности, по результатам сравнения с базой данных NCBI, показали наличие как уникального строения некоторых генотипов, так и выявили аллели, типичные для сортов с наличием или без наличия окраски.</li>
<li>Дальнейшее сравнение нуклеотидных последовательностей с аминокислотными последовательностями, имеющимися в NCBI, показали наличие как схожих сиквенсов, так и присутствие изменения в их последовательности. Тем не менее, при сравнении генотипов и фенотипов растений нельзя сказать, чтобы такие изменения привели и к сдвигу фенотипических признаков. Не смотря на это, ценным было изучение совокупности строения нуклеотидных и аминокислотных последовательностей, которые показали такие интересные результаты как при кластеризации сортов Аркадия Розовая, Гелиос и Ливия. Данные сорта хоть и имели аллели, сходные по нуклеотидному строению с белоягодными сортами, тем не менее, очевидным является и наличие у них розовой окраски ягод. Или же, говоря иначе, слабой экспрессии генов.</li>
<li>При изучении аборигенных сортов и строения их генов выявлены некоторые особенности строения. В частности, раскрыты однонуклеотидные полиморфизмы, которые привели к изменению в строении аминокислотной последовательности. Помимо этого, выявлены генотипы, причина потеря окраски ягод у которых вызвана движением ретротранспозона Gret-1 и также генотипы, у которых изменение окраски вызвано иными причинами.</li>
<li>Изучение филогенитеческих взаимоотношений между исследованными сортами позволило выявить как очевидные, так и неожиданные факты. Например, такие сорта как Нимранг и Яй изюм белый. Очевидно, что генотип Яй изюм белый должен находиться либо же рядом с сортов Яй изюм розовый, либо же, что еще более очевидно, располагаться в кластере белоягодных сортов. Тем не менее, его аллель VvMybA1 имеет уникальную вставку, которая характерна для аллели mybA1-SUB, которая является функциональной. Также, его аллель при сравнении с базой данных является даже более характерной для окрашенных сортов, что у его «собрата» Яй изюм розового, что также, неожиданно. В свою очередь, сорт Нимранг, имеющих окраску ягод более слабую, чем у Аркадии Розовой, Гелиоса или Ливии, был отнесен к группе окрашенных сортов. Это, в свою очередь, также объясняется строением аллели, которая более характерна для окрашенных сортов.</li>
<li>Остальные же сорта, как и предполагалось, были отнесены к принадлежащим им сортотипам, характерным для окрашенных и неокрашенных сортов. Не смотря на это, попадание к белоягодным сортам такой формы как Мерло клон Грамотенко указывает как и на то, что в процессе работы была выялвена «белая» аллель, так и на то, что такой стародавний сорт как Мерло имеет сложное происхождение, в которое были вовлечены гетерозиготные сорта, что подтверждается и предыдущими исследованиями.</li>
</ol>
<h2><strong>ЛИТЕРАТУРА</strong></h2>
<ol>
<li>Айвазян, П. К. Селекция виноградной лозы / П. К. Айвазян, Е. Н. Докучаева. – Киев : Изд-во Украинской академии с.-х. наук, 1960. – С. 288–296.</li>
<li>Альбертс, Б, Молекулярная биология клетки. В 3-х т. / Б. Альбертс,<br />
Д. Брей, Дж. Льюис. – М. : Мир, 1994. – 517 с.</li>
<li>Барышева, И. А. Исследование внутрисортовой изменчивости ДНК винограда ПДРФ и ПЦР методами / И. А. Барышева, М. И. Тулаева, В. С. Чисников // Цитология и генетика. – 2003. – Т. 37, № 6. – С. 31–38.</li>
<li>Беспалова, Л. А. Фотопериодическая чувствительность и молекулярное маркирование генов PPD и VRN в связи с селекцией сортов пшеницы альтернативного образа жизни / Л. А. Беспалова, В. А. Кошкин, Е. К. Потокина // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. – 2010. – № 6. – С. 3–6.</li>
<li>Бороевич, С. А. Принципы и методы селекции растений / С. А. Бороевич. – М. : Колос, 1984. – 344 с.</li>
<li>Вавилов, Н. И. Генетика и селекция / Н. И. Вавилов // Избр. соч. – М. : Колос, 1966. – 560 с.</li>
<li>Виноград. Всё о винограде [Электронный ресурс] / ред. В. Ю. Буря; Web-мастер В. Ю. Буря. – Электрон. дан. – Краснодар, 2012. – Режим доступа : <a href="http://vinograd.info" target="_blank" rel="noopener">http://vinograd.info</a>.</li>
<li>Волынкин, В. А. Триединство генетики, ампелографии и физиологии<br />
в современной селекции винограда / В. А. Волынкин, В. А. Зленко, Н. П. Олейников // Интерактивная ампелография. – Краснодар, 2012. – С. 14–30.</li>
<li>Гераськин, С. А. Биологический контроль окружающей среды: генетический мониторинг : учеб. пособие / С. А. Гераськин, Е. И. Сарапульцева,<br />
Л. В. Цаценко ; под ред. С. А. Гераськина, Е. И. Сарапульцевой. – М. : Академия, 2010. – 208 с.</li>
<li>Голодрига, П. Я. Понятие «клон» в виноградарстве / П. Я. Голодрига // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. – 1972. – № 11. –<br />
С. 28–29.</li>
<li>Грамотенко, П. М. Клоновая селекция как метод повышения урожайности сортов винограда / П. М. Грамотенко // Сорт в виноградарстве. – 1962. –<br />
№ 4. – С. 214–221.</li>
<li>Дивашук, М. Г. Идентичность генов короткостебельности RHT-11<br />
И RHT-B1E / М. Г. Дивашук, А. В. Васильев, Л. А. Беспалова // Генетика. – 2012. – № 7. – С. 897.</li>
<li>Дорошенко, Н. П. Физиологическое обоснование применение препарата «Эмистим» при клональном микроразмножении винограда / Н. П. Дорошенко // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2010. – № 58(04). – Режим доступа : http://ej.kubagro.ru/2010/04/pdf/32.pdf.</li>
<li>Драгович, А. Ю. Сопоставление двух существующих каталогов аллелей глиадинкодирующих локусов у озимой мягкой пшеницы / А. Ю. Драгович,<br />
В. Г. Зима, А. В. Фисенко // Генетика. – 2006. – Т. 42, № 8. – С. 1107–1116.</li>
<li>Драновский, В. А. Массовая и фитосанитарная селекция – необходимость современного виноградарства / В. А. Драновский, Л. П. Трошин // Виноград и вино России. – 1995. – № 4. – С. 20–23.</li>
<li>Еремин, Г. В. Размножение клоновых подвоев персика / Г. В. Еремин, В. Г. Еремин // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2010. – № 62(08). – Режим доступа : <a href="http://ej.kubagro.ru/2010/08/pdf/08.pdf" target="_blank" rel="noopener">http://ej.kubagro.ru/2010/08/pdf/08.pdf</a>.</li>
<li>Звягин, А. С. Выделение ДНК из гербарных листьев <em>Vitis vinifera</em> L. /<br />
А. С. Звягин // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2010. – № 58(04). – Режим доступа : http://ej.kubagro.ru/2010/04/pdf/22.pdf.</li>
<li>Звягин, А. С. Выделение ДНК из листьев Vitis vinifera L. / А. С. Звягин, Л. П. Трошин // Политематический сетевой электронный научный журнал<br />
кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2010. – № 60(06). – Режим доступа : http://ej.kubagro.ru/2010/06/pdf/36.pdf.</li>
<li>Зеленский, Г. Л. Борьба с пирикуляриозом риса путем создания устойчивых сортов / Г. Л. Зеленский // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанский государственный аграрный университет (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2013. –<br />
№ 85(01). – Режим доступа : http://ej.kubagro.ru/2013/01/pdf/48.pdf.</li>
<li>Зеленский, Г. Л. Изучение биоразнообразия сорных растений рода Echinochloa на территории Краснодарского края на основе морфологического<br />
и молекулярно-генетического подходов / Г. Л. Зеленский // Труды Кубанского государственного аграрного университета. – 2008. – № 11. – С. 110–114.</li>
<li>Зеленский, Г. Л. Новый исходный материал для селекции риса на повышение продуктивности / Г. Л. Зеленский, М. В. Шаталова // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного вниверситета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2013. – № 89(05). – Режим доступа : http://ej.kubagro.ru/2013/05/pdf/60.pdf.</li>
<li>Зотов, В. В. Улучшить стандартные сорта винограда методом отбора / В. В. Зотов // Виноделие и виноградарство СССР. – 1956. – № 8. – С. 31–35.</li>
<li>Изучение биоразнообразия возбудителя пирикуляриоза риса молекулярно-генетическими методами / Ж. М. Мухина, С. А. Волкова, Т. М. Коломиец, В. В. Тюрин // Труды Кубанского государственного аграрного университета. – 2008. – № 5(14). – С. 107–110.</li>
<li>Калайджян, А. А. Российский солнечный цветок / А. А. Калайджян,<br />
Л. В. Хлевной, Н. Н. Нещадим ; под ред. В. М. Пенчукова. – Краснодар : Совет. Кубань, 2007. – 351 с.</li>
<li>Кискин, П. Х. Филлоксера / П. Х. Кискин. – Кишинев : Штиинца, 1977. – 211 с.</li>
<li>Клочнева, В. И. Идентификация видов, сортов и клонов винограда по белкам как маркерам генов / В. И. Клочнева, Л. П. Трошин, А. В. Шурхал. – М. : Типография ВАСХНИЛ, 1990. – 35 с.</li>
<li>Клочнева, В. И. Межвидовая и внутривидовая изменчивость винограда по аллозимным локусам / В. И. Клочнева, Л. П. Трошин, А. В. Шурхал // Науч. тр. ВНИИВиПП «Магарач». – 1989. – № 9. – С. 109–114.</li>
<li>Коваленко, Н. Н. Стимуляторы корнеобразования и их влияние на укоренение зеленых черенков клоновых подвоев плодовых культур / Н. Н. Коваленко, А. П. Кузнецова // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2011. – № 73(09). – Режим доступа : <a href="http://ej.kubagro.ru/2011/09/pdf/26.pdf" target="_blank" rel="noopener">http://ej.kubagro.ru/2011/09/pdf/26.pdf</a>.</li>
<li>Козаченко, Д. М. Клоновая и санитарная селекция винограда и некоторые элементы питомниководства во Франции / Д. М. Козаченко // Виноград<br />
и вино России. – 1997. – № 6. – С. 56–58.</li>
<li>Лукомец, В. М. Селекционно-генетическое улучшение сои на юге европейской части России (обзор). Масличные культуры / В. М. Лукомец, А. В. Ко­чегура, С. В. Зеленцов // Научно-технический бюллетень Всероссийского научно-исследовательского института масличных культур. – 2012. – № 2 (151–152). – С. 207–210.</li>
<li>Лукомец, В. М. Цитологический скрининг мужского гаметофита линий подсолнечника, устойчивых к имидазолиновым гербицидам / В. М. Лукомец,<br />
Н. И. Бочкарев, Л. В. Цаценко // Труды Кубанского государственного аграрного университета. – 2012. – № 35. – С. 117–122.</li>
<li>Медведева, Н. И. Методические рекомендации по микроклональному размножению винограда in vitro / Н. И. Медведева, Н. В. Поливара, Л. П. Трошин // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2010. – № 62(08). – Режим доступа : http://ej.kubagro.ru/2010/08/pdf/31.pdf.</li>
<li>Медведева, Н. И. Особенности микроклонального размножения интродуцентов и клонов винограда / Н. И. Медведева, Н. В. Поливара, Л. П. Трошин // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2008. – № 40(6). – Режим доступа : http://ej.kubagro.ru/2008/06/pdf/18.pdf.</li>
<li>Милованов, А. В. Выделение ДНК при помощи PeqGOLD PLANT DNA mini KIT / А. В. Милованов, Л. П. Трошин // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2013. – № 90(06). – Режим доступа : http://ej.kubagro.ru/2013/06/pdf/11.pdf.</li>
<li>Мухина, Ж. М. Молекулярные маркеры и их использование в селекционно-генетических исследованиях / Ж. М. Мухина, Е. В. Дубина // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2011. – № 66(02). – Режим доступа : http://ej.kubagro.ru/2011/02/pdf/09.pdf.</li>
<li>Мухина, Ж. М. Создание внутригенных молекулярных маркеров риса для повышения эффективности селекционного и семеноводческого процессов /<br />
Ж. М. Мухина, С. В. Токмаков, Ю. А. Мягких // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанский государственный аграрный университет (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2011. – № 67(03). – Режим доступа : http://ej.kubagro.ru/2011/03/pdf/19.pdf.</li>
<li>Овчинников, Ю. А. Биоорганическая химия / Ю. А. Овчинникова. – М. : Просвещение, 1987. – 816 c.</li>
<li>Панарина, А. М. Изучение изменчивости признаков листа с целью выявления их ценности для ампелографических исследований / А. М. Панарина // Науч. тр. института «Магарач». – 1967. – Т. 16. – C. 167–182.</li>
<li>Подваленко, П. П. Клоновая селекция – современная основа подъема продуктивности виноградников / П. П. Подваленко, А. С. Звягин, Л. П. Трошин // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2009. – № 51(7). – Режим доступа : <a href="http://ej.kubagro.ru/2009/07/pdf/19.pdf" target="_blank" rel="noopener">http://ej.kubagro.ru/2009/07/pdf/19.pdf</a>.</li>
<li>Романенко, А. А. Селекция гибридов кукурузы в Краснодарском НИИСХ / А. А. Романенко, А. И. Супрунов // Земледелие. – 2011. – № 2. –<br />
С. 41–42.</li>
<li>Романенко, А. А. Селекция зерновых культур на устойчивость к абиотическим стрессорам / А. А. Романенко, Н. Ф. Лавренчук // Вестник РСАХН. – 2011. – № 1. – С. 17–21.</li>
<li>Супрун, И. И. Апробация микросателлитных ДНК-маркеров для идентификации клоновых форм сортов яблони / И. И. Супрун, С. Н. Артюх,<br />
С. В. Токмаков // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2012. – № 84(10). – Режим доступа : http://ej.kubagro.ru/2012/10/pdf/21.pdf.</li>
<li>Супрун, И. И. Создание селекционных форм риса, несущих ген широкого спектра устойчивости к пирикуляриозу Pi-40, с использование методов ДНК-маркирования / И. И. Супрун, В. С. Ковалев, В. Н. Шиловский // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанский государственный аграрный университет (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2013. – № 86(02). – Режим доступа : http://ej.kubagro.ru/2013/02/pdf/18.pdf.</li>
<li>Трошин, Л. П. Ампелографическая и селекционная научно-исследовательская работа Кубанского госагроуниверситета / Л. П. Трошин // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2012. – № 07 (081). – Режим доступа : http://ej.kubagro.ru/2012/07/pdf/39.pdf.</li>
<li>Трошин, Л. П. Ампелографические признаки в изучении таксономических отношений сортов <em>Vitis vinifera sativa pontica</em> Negr. / Л. П. Трошин,<br />
В. И. Рисованная, А. И. Полулях // Труды Научного центра виноградарства и виноделия. – 1999. – С. 10–12.</li>
<li>Трошин, Л. П. Анализ наследственной информации винограда /<br />
Л. П. Трошин // Виноград и вино России. – 1997. – № 1. – С. 17–19.</li>
<li>Трошин, Л. П. Биометрическая оценка полиморфизма сортогрупп винограда Пино и Рислинг по морфологическим признакам листьев среднего яруса кроны / Л. П. Трошин, Е. В. Луценко, П. П. Подваленко // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2009. – № 52(8). – Режим доступа : <a href="http://ej.kubagro.ru/2009/08/pdf/01.pdf" target="_blank" rel="noopener">http://ej.kubagro.ru/2009/08/pdf/01.pdf</a>.</li>
<li>Трошин, Л. П. Виноград: иллюстрированный каталог. Районированные, перспективные, тиражные сорта / Л. П. Трошин, П. П. Радчевский. – Ростов н/Д. : Феникс, 2010. – 271 с.</li>
<li>Трошин, Л. П. Изменчивость признаков листа сортов винограда <em>Vitis vinifera pontica balcanica</em> Negr. / Л. П. Трошин, В. И. Рисованная, А. А. Полулях // Виноградарство и виноделие. – 1996. – № 1. – С. 15–20.</li>
<li>Трошин, Л. П. Использование биометрической оценки морфологических признаков клонов для идентификации генотипов сортогрупп Мерло /<br />
Л. П. Трошин, А. С. Звягин // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2008. – № 38(4) – Режим доступа : <a href="http://ej.kubagro.ru/2008/04/pdf/10.pdf" target="_blank" rel="noopener">http://ej.kubagro.ru/2008/04/pdf/10.pdf</a>.</li>
<li>Трошин, Л. П. Методология клоновой селекции винограда / Л. П. Трошин // Юбилейный тематический сборник научных трудов. Ч. 2. Виноградарство. – Краснодар, 2001. – С. 92–94.</li>
<li>Трошин, Л. П. О значении метода клоновой селекции винограда, разработанного профессором А. С. Мержанианом / Л. П. Трошин // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар : КубГАУ, 2010. – № 57(03). – Режим доступа : <a href="http://ej.kubagro.ru/2010/03/pdf/16.pdf" target="_blank" rel="noopener">http://ej.kubagro.ru/2010/03/pdf/16.pdf</a>.</li>
<li>Трошин, Л. П. Оценка таксономических отношений сортов V. v. s. p. balcanica Negr. и V. v. s. p. meridionali-balcanica Trosh. по морфометрическим признакам листа / Л. П. Трошин, А. А. Полулях, В. И. Рисованная // Виноград<br />
и вино России. – 1998. – № 3. – C. 41–42.</li>
<li>Трошин, Л. П. Районированные сорта винограда России / Л. П. Трошин, П. П. Радчевский. – Краснодар : ООО «Вольные мастера», 2004. – 176 с.</li>
<li>Трошин, Л. П. Сортимент винограда России / Л. П. Трошин, П. П. Радчевский // Виноделие и виноградарство. – 2001. – № 3. – С. 24–25.</li>
<li>Трошин, Л. П. Статистический анализ количественных признаков популяции винограда сорта Рислинг / Л. П. Трошин, И. А. Суятинов, М. А. Чупраков // Пути совершенствования питомниководства и селекционного процесса в виноградарстве / Труды ВНИИВиПП «Магарач». – Ялта, 1986. – Т. 24. –<br />
С. 77–86.</li>
<li>Цаценко, Л. В. Методология научной агрономии : курс лекций /<br />
Л. В. Цаценко, Н. А. Щербаков. – Краснодар : КубГАУ, 2012. – С. 10–11.</li>
<li>Цаценко, Л. В. Молекулярная биология : учеб. пособие / Л. В. Цаценко, Ю. С. Бойко, Д. В. Крутенко. – Краснодар : КубГАУ, 2007. – С. 14–15.</li>
<li>Цаценко, Л. В. Цитология : учеб. пособие / Л. В. Цаценко, Ю. С. Бойко. – Краснодар : КубГАУ, 2007. – 27 с.</li>
<li>1H NMR metabolite fingerprints of grape berry: Comparison of vintage and soil effects in Bordeaux grapevine growing areas / G. E. Pereira [et al.] // Analytica Chimica Acta. – 2006. – Vol. 563, № 1–2. – Р. 346–352.</li>
<li>A 48 SNP set for grapevine cultivar identification / J. A. Cabezas, J. Ibáñez, D. Lijavetzky, D. Vélez, G. Bravo, V. Rodríguez, I. Carreño, A. M. Jermakow,<br />
J. Carreño, L. Ruiz-García, M. R. Thomas // BMC plant biology. – 2011. –<br />
Vol. 11(1). – Р. 153.</li>
<li>Abubakkar, M. Extraction of DNA suitable for PCR applications from mature leaves of Mangifera indica L. / M. Abubakkar, A. Khan, H. Cheema // Journal of Zhejiang University. – 2012. – Vol. 13. – Р. 239–243.</li>
<li>Allelic variation in the VvMYBA1 and VvMYBA2 domestication genes in natural grapevine populations (Vitis vinifera subsp. sylvestris) / D. Carrasco [et al.] // Plant Systematics and Evolution. – 2015. – Vol. 301, № 6. – Р. 1613–1624.</li>
<li>Ampelographic and genetic characterization of Croatian grapevine varieties / E. Maletić, I. Pejić, J. K. Kontić, D. Zdunić, D. Preiner, S. Šimon, D. Stupić // VITIS – Journal of Grapevine Research. – 2015. – Vol. 4(54). – Р. 93–98.</li>
<li>An extensive study of the genetic diversity within seven French wine grape variety collections / F. Pelsy [et al.] // Theoretical and Applied Genetics. – 2010. – Vol. 120, № 6. – Р. 1219–1231.</li>
<li>A PCR-based diagnostic tool for distinguishing grape skin color mutants /<br />
S. Giannetto [et al.] // Plant Science. – 2008. – Vol. 175, № 3. – Р. 402–409.</li>
<li>Ashenfelter, O. Predicting the prices and quality of Bordeaux wines /<br />
O. Ashenfelter // The Economic Journal. – 2008. – № 529. – Р. 174–184.</li>
<li>Ashenfelter, O. The economics of wine, weather, and climate change /<br />
O. Ashenfelter, K. Storchmann // Review of Environmental Economics and Policy. – 2016. – № 1. – Р. 25–46.</li>
<li>Ashenfelter, O. Using a hedonic model of solar radiation to assess the economic effect of climate change: the case of Mosel Valley vineyards / O. Ashenfelter, K. Storchmann // National Bureau of Economic Research. – 2006. – № 12. –<br />
Р. 122–130.</li>
<li>A skin color mutation of grapevine, from black-skinned Pinot Noir to white-skinned Pinot Blanc, is caused by deletion of the functional VvmybA1 allele / H. Yakushiji, S. Kobayashi, N. Goto-Yamamoto, S. T. Jeong, T. Sueta, N. Mitani,<br />
A. Azuma // Bioscience, biotechnology, and biochemistry. – 2006. – Vol. 70(6). –<br />
Р. 1506–1508. – doi.org/10.1271/bbb.50647.</li>
<li>Atak, A. Molecular and ampelographic characterization of some grape hybrids (Vitis vinifera L.) / A. Atak, A. Altindisli, A. Fuat // African Journal of Agricultural Research. – 2012. – Vol. 7. – P. 456–466.</li>
<li>Audeguin, L. L&#8217;experimtntation des clones des de vigne en France. Etat des lilex, metohodologie et perspectives / L. Audeguin, R. Boidron, P. Bloy // XXIV Weltkongress fur Rebe und Wein. – 1997. – Vol. 10. – P. 42–52.</li>
<li>Azuma, A. VvmybA1 genotype determines grape skin color / A. Azuma,<br />
S. Kobayashi, H. Yakushiji // Vitis. – 2007. – Vol. 46. – P. 154–155.</li>
<li>Balthazard, J. Clonal selection and gene pool preservation of traditional grape cultivars / J. Balthazard, P. Huglin // Proceedings of the Third International symposium on grape breeding. – 1980. – P. 63–64.</li>
<li>Benjak, A. Genome-wide analysis of the «Cut-and-Paste» transposons of grapevine / A. Benjak, A. Forneck, J. Casacuberta // PLoS ONE. – 2008. – Vol. 3. – P. 9–10.</li>
<li>Berry quality and antioxidant properties in Vitis vinifera cv. Tempranillo as affected by clonal variability, mycorrhizal inoculation and temperature / N. Torres<br />
[et al.] // Crop and Pasture Science. – 2016. – Vol. 67, № 9. – Р. 961–977.</li>
<li>Bodor, P. The separation of grapevine (Vitis vinifera L.) Conculta members with molecular markers / P. Bodor, G. Bisztray, A. Pedryc // Proceedings of International Ph. D. Students Conference. Brno. – 2008. – P. 118–123.</li>
<li>Bogs, J. The grapevine transcription factor VvMYBPA1 regulates proanthocyanidin synthesis during fruit development / J. Bogs, F. Jaffe, A. Takos // Plant Physiology. – 2007. – Vol. 143. – P. 1347–1361.</li>
<li>Boss, P. K. Expression of anthocyanin biosynthesis pathway genes in red and white grapes / P. K. Boss, C. Davies, S. P. Robinson // Plant molecular biology. – 1996. – Vol. 32, №. 3. – Р. 565–569.</li>
<li>Boulton, R. The copigmentation of anthocyanins and its role in the color of red wine: A critical review / R. Boulton // American journal of enology and viticulture. – 2001. – № 2. – Р. 67–87.</li>
<li>Brown, N. P. View: a web-compatible database search or multiple alignment viewer / N. P. Brown, C. Leroy, C. M. Sander // Bioinformatics (Oxford, England). – 1998. – Vol. 14, № 4. – Р. 380–381.</li>
<li>Cadle-Davidson, M. Radiation of the grape retroelement (GRET1) in Vitis spp. of the grapevine germplasm repository / M. Cadle-Davidson, C. Owens // Grape Genetics Research. – 2007. – Vol. 10. – P. 24.</li>
<li>Caetano-Anollks, G. Fast and sensitive silver staining of DNA in polyacrylamide gels / G. Caetano-Anollks, P. Gresshoff // Analyt. Bioch. – 1991. –<br />
Vol. 15. – P. 80–83.</li>
<li>Carcamo, C. Detection of polymorphism in ancient Tempranillo clones using microsatellite and retrotransposon markers / C. Carcamo, I. Provedo, R. Arroyo-Garcha // Iranian Journal of Biotechnology. – 2010. – Vol. 8. – P. 73–75.</li>
<li>Carputo, D. Use of SSR and retrotransposon-based markers to interpret the population structure of native grapevines from southern Italy Clizia Villano /<br />
D. Carputo, L. Frusciante, X. Santoro // Springer Science. – 2014. – Vol. 131. –<br />
P. 245–250.</li>
<li>Characterization of single nucleotide polymorphism in Tunisian grapevine genome and their potential for population genetics and evolutionary studies /<br />
L. Riahi, N. Zoghlami, A. Fournier-Level, A. Dereeper, L. Le Cunff, V. Laucou,<br />
A. Mliki, P. This // Genetic resources and crop evolution. – 2013. – Vol. 60(3). –<br />
Р. 1139–1151. – doi.org/10.1007/s10722-012-9910-y.</li>
<li>Choudhary, K. Protocol for isolation of genomic DNA from dry and fresh leaves of vigna species suitable for RAPD and restriction digestion / K. Choudhary, N. Mathur, O. Choudhary // Adv. in Biological Research. – 2008. – Vol. 2. –<br />
P. 83–89.</li>
<li>Color recovery in berries of grape (Vitis vinifera L.) ‘Benitaka’, a bud sport of ‘Italia’, is caused by a novel allele at the VvmybA1 locus / A. Azuma [et al.] // Plant Science. – 2009. – № 4. – С. 470–478.</li>
<li>Derent, X. Clonal selection of grapes / X. Derent, W. Deling, Z. Guoliang // Acta Ноrtic. Sin. – 1991. – Vol. 18(2). – P. 121–125.</li>
<li>Dettweiler, E. The two Vitis databases as tools for germplasm management / E. Dettweiler, E. Rudolf // Vitis international variety catalogue (http://www.dainet.de/<br />
genres/idb/vitis), European Vitis Database (<a href="http://www.dainet.de/eccdb/vitis/" target="_blank" rel="noopener">http://www.dainet.de/eccdb/vitis/</a>). – VIII International Conference on Grape Genetics and Breeding. – Kecskemet, 2002. –<br />
Р. 505–509. – doi.org/10.17660/ActaHortic.2003.603.66.</li>
<li>Duchêne, E. Variation of linalool and geraniol content within two pairs of aromatic and non‐aromatic grapevine clones / E. Duchêne // Australian Journal of Grape and Wine Research. – 2009. – Vol. 15(2). – Р. 120–130. – doi.org/10.1111/j.1755-0238.2008.00039.x.</li>
<li>Efficiency optimization of CRISPR/Cas9-Mediated targeted mutagenesis in grape / F. Ren, C. Ren, Z. Zhang, W. Duan, D. Lecourieux, S. H. Li, Z. C. Liang // Frontiers in plant science. – 2019. – Vol. 10(1). – Р. 612. – doi.org/10.3389/fpls.2019.00612.</li>
<li>Evolution of the VvMybA gene family, the major determinant of berry colour in cultivated grapevine (Vitis vinifera L.) / A. Fournier-Level [et al.] // Heredi­ty. – 2010. – Vol. 104, № 4. – Р. 351.</li>
<li>Fatahi, R. Characterization of Iranian grapevine cultivars using microsatellite markers / R. Fatahi, A. Ebadi, N. Bassil // Vitis. – 2003. – № 42(4). – P. 185–192.</li>
<li>Fogarty, J. J. To save or savor: A review of approaches for measuring wine as an investment / J. J. Fogarty, R. Sadler // Journal of Wine Economics. – 2014. –<br />
№ 3. – Р. 225–248.</li>
<li>Fogarty, J. J. Wine investment and portfolio diversification gains /<br />
J. J. Fogarty // Journal of Wine Economics. – 2010. – № 1. – Р. 119–131.</li>
<li>Forneck A. Plant breeding: clonality – a concept for stability and variability during vegetative propagation / A. Forneck // Progress in botany. – Springer, Berlin, Heidelberg, 2005. – Р. 164–183.</li>
<li>Genetic diversity and geographical dispersal in grapevine clones revealed by microsatellite markers / X. Moncada, F. Pelsy, D. Merdinoglu, P. Hinrichsen // Genome. – 2006. – Vol. 49(11). – Р. 1459–1472. – doi.org/10.1139/g06-102.</li>
<li>Genomic and genetic analysis of Myb-related genes that regulate anthocyanin biosynthesis in grape berry skin / A. Azuma [et al.] // Theoretical and Applied Genetics. – 2008. – Vol. 117, № 6. – С. 1009–1019.</li>
<li>Genotype identification and inference of genetic relatedness among different purpose grape varieties and rootstocks using microsatellite markers / S. Ajitpal, K. Krishan, I. Manav, I. Gill // African Journal of Biotechnology. – 2013. – Vol. 12. – P. 134–141.</li>
<li>Gil, J. Extraction of genomic DNA from the lipid–polysaccharide– and polyphenol rich coconut (Cocos nucifera L.) / J. Gil, C. Angeles, A. Laurena // Plant Molecular Biology Reporter. – 2005. – Vol. 23. – P. 297.</li>
<li>Ginwal, H. S. An efficient genomic DNA isolation protocol for RAPD and SSR analysis in Acorus calamus L. / H. S. Ginwal, N. Mittal // Journal of Biotechnology. – 2010. – Vol. 9. – P. 213–216.</li>
<li>Grapevine field experiments reveal the contribution of genotype, the influence of environment and the effect of their interaction (G× E) on the berry transcriptome / S. Dal Santo [et al.] // The Plant Journal. – 2018. – Vol. 93, № 6. –<br />
Р. 1143–1159.</li>
<li>Grapevine Non-Vinifera Genetic Diversity Assessed by SSR Markers as<br />
a Starting-Point for New Rootstock Breeding Programs / D. Migliaro, G. De Lorenzis, G. S. Di Lorenzo, B. De Nardi, M. Gardiman, O. Failla, L. Brancadoro,<br />
M. Crespan // American Journal of Enology and Viticulture. – 2019. – Vol. 70(4). – Р. 390–397. – doi.org/10.5344/ajev.2019.18054.</li>
<li>Grapevine powdery mildew resistance and susceptibility loci identified on a high-resolution SNP map / P. Barba, L. Cadle-Davidson, J. Harriman, J. C. Glaubitz, S. Brooks, K. Hyma, B. Reisch // Theoretical and applied genetics. – 2014. – Vol. 127(1). – Р. 73–84. – DOI : 10.1007/s00122-013-2202-x.</li>
<li>Gray, D. J. Precision breeding of grapevine (Vitis vinifera L.) for improved traits / D. J. Gray, Z. T. Li, S. A. Dhekney // Plant science. – 2014. – Vol. 228(1). –<br />
Р. 3–10. – doi.org/10.1016/j.plantsci.2014.03.023.</li>
<li>Guidoni, S. Effects of seasonal and agronomical practices on skin anthocyanin profile of Nebbiolo grapes / S. Guidoni, A. Ferrandino, V. Novello // American Journal of Enology and Viticulture. – 2008. – Vol. 59, № 1. – Р. 22–29.</li>
<li>Haplotype composition at the color locus is a major genetic determinant of skin color variation in Vitis× labruscana grapes / A. Azuma, Y. Udo, A. Sato,<br />
N. Mitani, A. Kono, Y. Ban, H. Yakushiji, Y. Koshita, S. Kobayashi // Theoretical and Applied Genetics. – 2011. – Vol. 122, № 7. – Р. 1427–1438.</li>
<li>High through put SNP discovery and genotyping in grapevine (Vitis vinifera L.) by combining a re-sequencing approach and SNPlex technology / D. Lijavetzky, J. A. Cabezas, A. Ibáñez, V. Rodríguez, J. M. Martínez-Zapater // BMC genomics. – 2007. – Vol. 8(1). – Р. 424. – doi.org/10.1186/1471-2164-8-424.</li>
<li>Huglin, P. L&#8217;Evaluation genetique et sanitaire du materiel clonal de la vigne / P. Huglin, R. Guillot, C. Valat // Bull. O. I. V. – 1980. – Vol. 53. – P. 857–882.</li>
<li>Ibrahim, R. A modified CTAB protocol for DNA extraction from young flower petals of some medicinal plant species / R. Ibrahim // Geneconserve. – 2011. – № 10(40). – P. 165–182.</li>
<li>Impact of clonal variability in Vitis vinifera Cabernet franc on grape composition, wine quality, leaf blade stilbene content, and downy mildew resistance /<br />
C. Van Leeuwen [et al.] // Journal of agricultural and food chemistry. – 2012. –<br />
Vol. 61, № 1. – Р. 19–24.</li>
<li>Investigation of VvMybA1 and VvMybA2 berry color genes in&#8217;Aglianico&#8217;biotypes / G. De Lorenzis [et al.] // Progress in Vitis Vinfera diversity evaluation and use. – Bundesanstalt fur Zuchtungsforschung an Kulturpflanzen, 2015, 7–9 October. – Vol. 54, № special issue. – Р. 43–44.</li>
<li>Jalview Version 2 – a multiple sequence alignment editor and analysis workbench / A. M. Waterhouse, J. B. Procter D. M., Martin, M. Clamp, G. J. Barton // Bioinformatics. – 2009. – Vol. 25, № 9. – Р. 1189–1191.</li>
<li>Jones, D. T. A model recognition approach to the prediction of all-helical membrane protein structure and topology / D. T. Jones, W. R. Taylor, J. M. Thorn­ton // Biochemistry. – 1994. – Vol. 33, № 10. – Р. 3038–3049.</li>
<li>Kalendar, R. Analysis of plant diversity with retrotransposon–based molecular markers / R. Kalendar, A. Flavell // Heredity. – 2011. – Vol. 106. – P. 520–530.</li>
<li>Kalendar, R. iPBS: a universal method for DNA fingerprinting and retrotransposon isolation / R. Kalendar, K. Antonius, P. Smýkal // Theor. Appl. Genet. – 2010. – Vol. 121. – Р. 1419–1430.</li>
<li>Kalendar, R. IRAP and REMAP for retrotransposon – based genotyping and fingerprinting / R. Kalendar, A. Schulman // Nature Protocols. – 2006. –<br />
Vol. 11. – P. 2478–2484.</li>
<li>Kalendar, R. IRAP and REMAP: two new retrotransposon – based DNA fingerprinting techniques / R. Kalendar, T. Grob, M. Regina // Theor. Appl. Genet. – 1998. – Vol. 109. – P. 704–711.</li>
<li>Kalendar, R. The Use of Retrotransposon–Based molecular markers to analyze genetic diversity / R. Kalendar // Field Veg. Crop Res. – 2011. – Vol. 48. –<br />
Р. 261–274.</li>
<li>Kalendar, R. Use of retrotransposon-derived genetic markers to analyse genomic variability in plants / R. Kalendar, A. Amenov, A. Daniyarov // Functional plant biology. – 2019. – Vol. 46(1). – Р. 15–29. – doi.org/10.1071/FP18098.</li>
<li>Ketan, P. Detection of Proteins in Polyacrylamide Gels Using an Ultrasensitive Silver Staining Technique / P. Ketan, D. Easty, M. Dunn // Methods in Molecular Biology. – 1988. – Vol. 3. – P. 159–168.</li>
<li>Kobayashi, S. Association of VvmybA1 gene expression with anthocyanin production in grape (Vitis vinifera) skin-color mutants / S. Kobayashi, N. Goto-Yamamoto, H. Hirochika // Japanese Society of Horticultural Science. – 2005. –<br />
№ 74. – Р. 196–203.</li>
<li>Kobayashi, S. Retrotransposon-induced mutations in grape skin color /<br />
S. Kobayashi, N. Goto-Yamamoto, H. Hirochika // Science. – 2004. – Vol. 304,<br />
№ 5673. – Р. 982.</li>
<li>Krizamn, M. Robust CTAB-activated charcoal protocol for plant DNA extraction / M. Krizamn, J. Jakse, D. Baricevic // Agriculturae Slovenica. – 2006. –<br />
Vol. 87. – P. 427–433.</li>
<li>Kumar, S. MEGA7: molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for bigger datasets / S. Kumar, G. Stecher, K. Tamura // Molecular biology and evolution. – 2016. – Vol. 33, № 7. – Р. 1870–1874.</li>
<li>Lawless, H. T. Sensory evaluation of food: principles and practices /<br />
H. T. Lawless, H. Heymann. – Springer Science &amp; Business Media, 2010.</li>
<li>Lefort, F. The Greek Vitis database: a multimedia web-backed genetic database for germplasm management of Vitis resources in Greece / F. Lefort, K. Roubelakis-Angelakis // Journal of Wine research. – 2000. – Vol. 11(3). – Р. 233–242. – doi.org/10.1080/713684241.</li>
<li>Lemke, L. A simple, inexpensive and environmentally friendly method for high through put DNA extraction from grapevine (Vitis spp.) / L. Lemke, M. Rex,<br />
E. Zyprian // Vitis. – 2011. – Vol. 14. – P. 4–6.</li>
<li>Life technologies company [Электронный ресурс] / Thermo Fisher Scientific Inc. – Электрон. дан. – Waltham : Thermo Fisher Scientific Inc., 2011. – Режим доступа : <a href="http://www.lifetechnologies.com" target="_blank" rel="noopener">http://www.lifetechnologies.com</a>.</li>
<li>Ligia, G. Assessment of diversity in grapevine gene pools from Romania and Republic of Moldova, based on SSR markers analysis / G. Ligia // Horticulture. – 2012. – Vol. 56. – P. 172.</li>
<li>Loureiro, M. D. Clonal preselection of grapevine cultivars of the appellation «Cangas Quality Wine» / M. D. Loureiro, P. Moreno-Sanz, B. Suarez // Hort. Sci. – 2011. – Vol. 38. – P. 71–80.</li>
<li>Mannini, F. Heat-treated V. Virus-infected grapevine clones: agronomical and enological modifications / F. Mannini, G. Vincenzo, C. Rino // International Symposium on the Importance of Varieties and Clones in the production of Quality Wine. – Kecskemét, 1997. – Р. 473.</li>
<li>Maras, V. Research of origin and work on clonal selection of Montenigrin grapevine varieties Vranac and Kratosija / V. Maras, M. Tomic, V. Kodzulovic // Agroznanje. – 2012. – Vol. 13. – Р. 103–112.</li>
<li>Maria, S. Grape microsatellite markers: Sizing of DNA alleles and genotype analysis of some grapevine cultivars / S. Maria, C. Frisinghelli // Vitis. – 1998. – Vol. 37. – P. 79–82.</li>
<li>Masset, P. Wine as an alternative asset class / P. Masset, C. Henderson // Journal of Wine Economics. – 2010. – № 1. – Р. 87–118.</li>
<li>Matus, J. T. Analysis of the grape MYB R2R3 subfamily reveals expanded wine quality-related clades and conserved gene structure organization across Vitis and Arabidopsis genomes / J. T. Matus, F. Aquea, P. Arce-Johnson // BMC plant biology. – 2008. – № 1. – Р. 83.</li>
<li>McGinnis, S. BLAST: at the core of a powerful and diverse set of sequence analysis tools / S. McGinnis, T. L. Madden // Nucleic acids research. – 2004. –<br />
Vol. 32, № suppl_2. – Р. W20–W25.</li>
<li>Moisy, C. The Tvv1 retrotransposon family is conserved between plant genomes separated by over 100 million years / C. Moisy, A. Schulman, R. Kalendar // Theor. Appl. Genet. – 2014. – Vol. 127. – P. 1223–1235.</li>
<li>Molecular characterization of berry skin color reversion on grape somatic variants / V. Ferreira [et al.] // Journal of Berry Research. – 2018. – № 3. –<br />
Р. 147–162.</li>
<li>Molecular genetics of berry color variation in table grape / D. Lijavetzky [et al.] // Molecular Genetics and Genomics. – 2006. – Vol. 276, № 5. – Р. 427–435.</li>
<li>Molecular tools for clone identification: the case of the grapevine cultivar ‘Traminer’ / S. Imazio, M. Labra, F. Grassi, M. Winfield, M. Bardini, A. Scienza // Plant Breeding. – 2002. – Vol. 121(6). – Р. 531–535. – doi.org/10.1046/j.1439-0523.2002.00762.x.</li>
<li>Muhammad, L. A simple and efficient method for DNA extraction from grapevine cultivars, Vitis species and Ampelopsis / L. Muhammad, Y. Guang-Ning, F. Norman // Plant Molecular Biology Reporter. – 1994. – № 12(1). – P. 6–13.</li>
<li>Murshudov, G. N. Refinement of macromolecular structures by the maximum-likelihood method / G. N. Murshudov, A. A. Vagin, E. J. Dodson // Acta Crystallographica Section D: Biological Crystallography. – 1997. – Vol. 53, № 3. –<br />
Р. 240–255.</li>
<li>Myb-related genes of the Kyoho grape (Vitis labruscana) regulate anthocyanin biosynthesis / S. Kobayashi [et al.] // Planta. – 2002. – Vol. 215, № 6. – Р. 924–933.</li>
<li>National Center for Biotechnology Information [Электронный ресурс] / National Center for Biotechnology Information. – Электрон. дан. – Rockville Pick : U. S. National Library of Medicine, 2011. – Режим доступа : www.ncbi.nlm.nih.gov/.</li>
<li>Optimizing Agrobacterium-mediated transformation of grapevine / Z. Li,<br />
S. Dhekney, M. Dutt, M. Van Aman, J. Tattersall, K. T. Kelley, D. J. Gray // In Vitro Cellular &amp; Developmental Biology Plant. – 2006. – Vol. 42(3). – Р. 220–227.</li>
<li>Parr, W. V. The nose knows: Influence of color on perception of wine aroma / W. V. Parr, K. Geoffrey White, D. A. Heatherbell // Journal of Wine Research. – 2003. – № 2–3. – Р. 79–101.</li>
<li>Pejic, I. Conservation, evaluation and revitalization of native grapevine varieties in Croatia / I. Pejic, E. Maletic // Mitteilungen Klosterneuburg. – 2010. –<br />
Vol. 60. – P. 363–368.</li>
<li>Pelsy, F. Molecular and cellular mechanisms of diversity within grapevine varieties / F. Pelsy // Heredity. – 2010. – Vol. 104(4). – Р. 331. – doi.org/10.1038/hdy.2009.161.</li>
<li>PeqLab company [Электронный ресурс] / VWR Company; Web-мастер VWR International GmbH. – Электрон. дан. – Erlangen : Life Science Competence Center, 2011. – Режим доступа : <a href="http://www.peqlab.com/wcms/en/index.php" target="_blank" rel="noopener">http://www.peqlab.com/wcms/en/index.php</a>.</li>
<li>Polyphenol content and total antioxidant activity of vini novelli (young red wines) / N. Pellegrini [et al.] // Journal of agricultural and food chemistry. – 2000. – № 3. – Р. 732–735.</li>
<li>Puchooa, D. A simple, rapid and efficient method for the extraction of genomic DNA from lychee / D. Puchooa // African Journal of Biotechnology. – 2004. – Vol. 3. – P. 253–255.</li>
<li>Purple-leaved Ficus lyrata plants produced by overexpressing a grapevine VvMybA1 gene / J. Zhao, Z. T. Li, J. Chen, R. J. Henny, D. J. Gray, J. Chen // Plant cell reports. – 2013. – Vol. 32(11). – Р. 1783–1793. – doi.org/10.1007/s00299-013-1491-5.</li>
<li>Quality criteria and targets for clonal selection in grapevine / E. Rühl<br />
[et al.] // I International Symposium on Grapevine Growing, Commerce and Research 652. – 2003. – Р. 29–33.</li>
<li>Quantitative genetic bases of anthocyanin variation in grape (<em>Vitis vinifera</em> L. ssp. sativa) berry: a quantitative trait locus to quantitative trait nucleotide integrated study / A. Fournier-Level [et al.] // Genetics. – 2009. – Vol. 183, № 3. –<br />
Р. 1127–1139.</li>
<li>Randall, K. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase / K. Randall, H. David, S. Susanne // Science. – 1988. – Vol. 29. – P. 487–491.</li>
<li>Regner, F. Genetic markers for the identification of varieties and clones as a guarantee of quality / F. Regner, K. Sefc, A. Stadlbauer // Acta Horticulturae. – 1998. – Vol. 473. – P. 49–61.</li>
<li>Regner, F. Highly variable Vitis microsatellite loci for the identification of Pinot Noir clones / F. Regner, R. Hack, J. L. Santiago // Vitis. – 2006. – Vol. 45. –<br />
P. 85–91.</li>
<li>Repetitive DNA of grapevine: classes present and sequences suitable for cultivar identification / M. R. Thomas, S. Matsumoto, P. Cain, N. S. Scott // Theor. Appl. Genet. – 1993. – Vol. 86. – P. 173–180.</li>
<li>Rusjan, D. Genetic and Phenotypic Diversity and Relations Between Grapevine Varieties: Slovenian Germplasm / D. Rusjan // The Mediterranean Genetic Code – Grapevine and Olive. – 2013. – Vol. 3. – P. 147–176.</li>
<li>Salmaso, M. Gene pool variation and phylogenetic relationships of an indigenous northeast Italian grapevine collection revealed by nuclear and chloroplast SSRs / M. Salmaso, R. D. Valle, M. Lucchin // Genome. – 2008. – Vol. 51(10). –<br />
Р. 838–855. – doi.org/10.1139/G08-064.</li>
<li>Sanger, F. DNA sequencing with chain–terminating inhibitors / F. Sanger,<br />
S. Nicklen, A. R. Coulson // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. – 1977. – Vol. 12. – P. 563–567.</li>
<li>Sanning, L. W. Bordeaux wine as a financial investment / L. W. Sanning, S. Shaffer, J. M. Sharratt // Journal of Wine Economics. – 2008. – № 1. – Р. 51–71.</li>
<li>Sant’Ana, G. C. Comparison of a retrotransposon-based marker with microsatellite markers for discriminating accessions of Vitis vinifera / G. C. Sant’Ana, J. L. Ferreira, H. S. Rocha // Genetics and Molecular Research. – 2012. – Vol. 11. – P. 1507–1525.</li>
<li>Schulman, A. The Application of LTR Retrotransposons as Molecular Markers in Plants / A. Schulman, A. Flavell, E. Paux // Methods in Molecular Biology. – 2012. – Vol. 59. – P. 115–153.</li>
<li>Shahzadi, I. Optimization of DNA extraction from seeds and fresh leaf tissues of wild marigold (Tagetes minuta) for polymerase chain reaction analysis /<br />
I. Shahzadi, R. Ahmed, A. Hassan // Genet. Mol. Res. – 2010. – Vol. 9. –<br />
P. 386–393.</li>
<li>Sievers, F. Clustal Omega, accurate alignment of very large numbers of sequences / F. Sievers, D. G. Higgins // Multiple sequence alignment methods. – Humana Press, Totowa, NJ, 2014. – Р. 105–116.</li>
<li>Silvia, V. A reference integrated map for cultivated grapevine (Vitis vinifera L.) from three crosses, based on 283 SSR and 501 SNP–based markers / V. Silvia, T. Michela, C. Giuseppina // Springer-Verlag. – 2008. – Vol. 85. – P. 34–45.</li>
<li>Singleton, V. L. Wine flavor and phenolic substances / V. L. Singleton,<br />
A. C. Noble // Phenolic, sulfur, and nitrogen compounds in food flavors. – 1976. –<br />
№ 2. – Р. 47–70.</li>
<li>Skoog, D. A. Principles of Instrumental Analysis. 6th ed. ThomsonBrooks / D. A. Skoog, F. J. Holler, S. R. Crouch. – Belmont : ColePublishing, 2007. – P. 573.</li>
<li>Spontaneous variation regarding grape berry skin color: A comprehensive study of berry development by means of biochemical and molecular markers / V. Ferreira [et al.] // Food research international. – 2017. – Р. 149–161.</li>
<li>Swanepoel, J. J. The influence of rootstock on the rooting pattern of the grapevine / J. J. Swanepoel, J. M. Southey // South African Journal of Enology and Viticulture. – 1989. – Vol. 10, № 1. – Р. 23–28.</li>
<li>Tassie, L. Vine identification – knowing what you have / L. Tassie // Wine Research and Development. – 2010. – Vol. 19. – P. 56–59.</li>
<li>Tautz, D. Cryptic simplicity in DNA is a major source of genetic variation / D. Tautz, M. Trick, G. Dover // Nature. – 1986. – Vol. 322. – P. 652–653.</li>
<li>The Greek Vitis Database [Электронный ресурс] / University of Crete. Wed-мастер S. Monachou. – Электрон. дан. – Heraklion : University of Crete, 2010. – Режим доступа : <a href="http://gvd.biology.uoc.gr/gvd/contents/general-info/02a.html" target="_blank" rel="noopener">http://gvd.biology.uoc.gr/gvd/contents/general-info/02a.html</a>.</li>
<li>The state-of-the-art of grapevine biotechnology and new breeding technologies (NBTS) / L. Dalla Costa, M. Malnoy, D. Lecourieux, L. Deluc, F.Ouaked-Lecourieux, M. R. Thomas, L. J. Torregrosa // OENO One. – 2019. – Vol. 53(2). –<br />
Р. 189–212. – doi.org/10.20870/oeno-one.2019.53.2.2405.</li>
<li>This, P. Development of stable RAPD markers for the identification of grapevine rootstocks and the analysis of genetic relationships / P. This, C. Cuisset,<br />
J. M. Boursiquot // Am. J. Enol. Vitic. – 1997. – Vol. 48. – P. 492–501.</li>
<li>This, P. Historical origins and genetic diversity of wine grapes / P. This,<br />
T. Lacombe, M. R. Thomas // Trends in Genetics. – 2006. – Vol. 22(9). – Р. 511–519. – doi.org/10.1016/j.tig.2006.07.008.</li>
<li>This, P. Towards marker-assisted selection for seedlessness in grapevine /<br />
P. This, F. Lahogue, A. F. Adam-Blondon // Acta Hort. – 2000. – Vol. 528. – P. 221–229.</li>
<li>Thomas, M. R. Microsatellite repeats in grapevine reveal DNA polymorphism when analysed as sequence-tagged sites (STSs) / M. R. Thomas, N. S. Scott // Theor. Appl. Genet. – 1993. – Vol. 86. – P. 985–990.</li>
<li>Thomas, M. R. Sequence-tagged site markers in grapevine and citrus /<br />
M. R. Thomas, N. S. Scott, R. Botta // Journal of the Japanese Society for Horticultural. – 1998. – Vol. 67. – P. 1189–1192.</li>
<li>Towards a scientific interpretation of the terroir concept: plasticity of the grape berry metabolome / A. Anesi [et al.] // BMC plant biology. – 2015. – Vol. 15, № 1. – Р. 191.</li>
<li>Transgenic plantlets of ‘Chancellor’ grapevine (Vitis sp.) from biolistic transformation of embryogenic cell suspensions / J. R. Kikkert, D. Hébert-Soulé,<br />
P. G. Wallace, M. J. Striem, B. I. Reisch // Plant Cell Reports. – 1996. – Vol. 15(5). – Р. 311–316.</li>
<li>Transposon‐induced gene activation as a mechanism generating cluster shape somatic variation in grapevine / L. Fernandez, L. Torregrosa, V. Segura,<br />
A. Bouquet, J. M. Martinez‐Zapater // The Plant Journal. – 2010. – Vol. 61(4). –<br />
Р. 545–557. – doi.org/10.1111/j.1365-313X.2009.04090.x.</li>
<li>Tschammer, J. Molecular characterization of grapevine cultivars of Riesling-type and of closely related Burgundies / J. Tschammer, E. Zyprian // Vitis. – 1994. – Vol. 33. – P. 249–250.</li>
<li>Umehara, Y. Construction and characterization of a rice YAC library for physical mapping / Y. Umehara, A. Inagaki, H. Tanoue // Molecular Breeding. – 1995. – Vol. 15. – P. 79–89.</li>
<li>Valat, L. Transgenic grapevine rootstock clones expressing the coat protein or movement protein genes of Grapevine fanleaf virus: Characterization and reaction to virus infection upon protoplast electroporation / L. Valat, M. Fuchs, M. Burrus // Plant Science. – 2006. – Vol. 170(4). – Р. 739–747. – doi.org/10.1016/j.plantsci.2005.11.005.</li>
<li>Verpoorte, R. Engineering secondary metabolite production in plants /<br />
R. Verpoorte, J. Memelink // Current opinion in biotechnology. – 2002. – Vol. 13(2). – Р. 181-187. – doi.org/10.1016/S0958-1669(02)00308-7.</li>
<li>Victor, M. U. A versatile microfabricated platform for electrophoresis of double– and single–stranded DNA / M. U. Victor, L. Rongsheng, S. Nimisha // Electrophoresis. – 2003. – Vol. 24. – P. 151–157.</li>
<li>Vishal, P. D. A simple method for isolation of genomic DNA from fresh and dry leaves of Terminalia arjuna (Roxb.) / P. D. Vishal, V. T. Prashant, S. C. Uddhav // Electronic Journal of Biotechnology. – 2007. – Vol. 10. – P. 31–35.</li>
<li>Vos, P. R. AFLP: A new technique for DNA fingerprinting / P. R. Vos,<br />
J. Hogers // Nucl. Acids Res. – 1995. – Vol. 23. – P. 407–414.</li>
<li>VpSTS29/STS2 enhances fungal tolerance in grapevine through a positive feedback loop / W. Xu, F. Ma, R. Li, Q. Zhou, W. Yao, Y. Jiao, C. Zhang, J. Zhang, X. Wang, Y. Xu, Y. Wang // Plant, cell &amp; environment. – 2019. – Vol. 42(11). –<br />
Р. 2979–2998. – doi.org/10.1111/pce.13600.</li>
<li>Walter, В. Consideration on grapevine selection and certification / В. Walter, G. P. Martelli // Vitis. – 1998. – Vol. 37. – P. 87–90.</li>
<li>Walter, T. W. Isoenzyme analysis of the grape / T. W. Walter,<br />
U. Posluszny, P. G. Kevan // Can. J. Bot. – 1989. – Vol. 67. – P. 294–299.</li>
<li>Wang, Z. Survey of plant short tandem repeats / Z. Wang, J. L. Weber,<br />
G. Zhong // Theor. Appl. Genet. – 1994. – Vol. 88. – P. 3–6.</li>
<li>Warren, F. Using simple sequence repeats (SSRs) for DNA fingerprinting germplasm accessions of grape (Vitis L.) species / F. Warren, C. Alpha // Amer. Soc. Hort. Sci. – 1998. – Vol. 123. – P. 182–188.</li>
<li>Waterhouse, A. L. The phenolic wine antioxidants / A. L. Waterhouse // Handbook of Antioxidants. – 2001. – № 3. – Р. 401–416.</li>
<li>Weber, J. L. Human DNA polymorphism and methods of analysis /<br />
J. L. Weber // Curr. Opin. Biotechnology. – 1990. – Vol. 11. – P. 166–171.</li>
<li>White grapes arose through the mutation of two similar and adjacent regulatory genes / A. R. Walker [et al.] // The Plant Journal. – 2007. – Vol. 49, № 5. –<br />
Р. 772–785.</li>
<li>Wine grape (Vitis vinifera L.) color associates with allelic variation in the domestication gene VvmybA1 / P. This, T. Lacombe, M. Cadle-Davidson, C. L. Owens // Theoretical and Applied Genetics. – 2007. – Vol. 114, № 4. – Р. 723–730.</li>
<li>Xu, H. Identification of grape (Vitis) rootstocks using sequence characterized amplified region DNA markers / H. Xu, A. T. Bakalinsky // Hort. Science. – 1996. – Vol. 32. – P. 267–268.</li>
<li>Ye, G. N. Analysis of the relationship between grapevine cultivars, sports and clones via DNA fingerprinting / G. N. Ye, G. Soylemezoglu, N. F. Weeden // Vitis. – 1998. – Vol. 37. – P. 33–38.</li>
<li>Zhang, Q. Molekular marker diversity and hybrid sterility in indica-japonica rice crosses / Q. Zhang, K. D. Liu, G. P. Yang // Theor. Appl. Genet. – 1997. – Vol. 95. – P. 112–118.</li>
<li>Zibibbo Nero characterization, a red-wine grape revertant of Muscat of Alexandria / G. De Lorenzis, M. Squadrito, L. Brancadoro, A. Scienza // Molecular biotechnology. – 2015. – Vol. 57(3). – Р. 265–274.</li>
<li>Zietkiewicz, E. Genome fingerprinting by simple sequence repeat (SSR)-anchored polymerase chain reaction amplification / E. Zietkiewicz, A. Rafalski,<br />
D. Labuda // Genomics. – 1994. – Vol. 20. – P. 176–183.</li>
<li>Zlenko, V. A. An optimized medium for clonal micropropagation of grapevine / V. A. Zlenko, L. P. Troshin, I. V. Kotikov // Vitis. – 1995. – Vol. 2. – P. 125–126.</li>
<li>Zulini, L. Characterization of the grapevine cultivar Picolit by means of morphological descriptors and molecular markers / L. Zulini, E. Fabro, E. Peterlun­ger // Vitis. – 2005. – Vol. 44. – P. 35–38.</li>
<li>Zulini, L. Genotyping wine and table grape cultivars from Apulia (Southern Italy) using microsatellite markers / L. Zulini, M. Russo, E. Peterlunger // Vitis. – 2002. – Vol. 41. – P. 183–187.</li>
</ol>
<h2><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2019-тема-3-Приложения.docx">Приложения</a></h2>
]]></content:encoded>
					
					<wfw:commentRss>https://apknet.ru/sravnitelnoe-izuchenie-stroeniya-gen/feed/</wfw:commentRss>
			<slash:comments>0</slash:comments>
		
		
			</item>
		<item>
		<title>Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов.</title>
		<link>https://apknet.ru/optimizaciya-xarakteristik-innovacio/</link>
					<comments>https://apknet.ru/optimizaciya-xarakteristik-innovacio/#respond</comments>
		
		<dc:creator><![CDATA[redactor]]></dc:creator>
		<pubDate>Fri, 30 Oct 2020 22:15:13 +0000</pubDate>
				<category><![CDATA[Животноводство]]></category>
		<category><![CDATA[ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ]]></category>
		<guid isPermaLink="false">https://apknet.ru/?p=5185</guid>

					<description><![CDATA[Проведено изучение лечебно-профилактического свойства разработанного пробиотика «Галлобакт-Ф-Плюс» на модели экспериментального дисбактериоза у лабораторных животных.]]></description>
										<content:encoded><![CDATA[<h2><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2019-тема-2-Титульный-и-исполнители.docx">Титульный лист и исполнители</a></h2>
<h2><strong>РЕФЕРАТ</strong></h2>
<p>Отчет 286 с., 105 табл., 36 рис., 251 источников литературы.</p>
<p>МИКРОБИОМ ЖКТ ПТИЦ, БАКТЕРИАЛЬНЫЕ ШТАММЫ, СВОЙСТВА МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕНИЕ, БИОПРЕПАРАТЫ, БАКТЕРИОЦИНЫ, ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ, АНАЛИЗ СТРУКТУРЫ, ПОЛИСАХАРИДЫ, ПЕКТИН, АЛЬГИНАТ НАТРИЯ, КСАНТАН, КОРМОВАЯ ПРОБИОТИЧЕСКАЯ ДОБАВКА, ОЦЕНКА КАЧЕСТВА, ТОКСИЧНОСТЬ, ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ, ПЕРЕПЕЛА, ЦЫПЛЯТА-БРОЙЛЕРЫ, ПРОДУКТИВНОСТЬ, СОХРАННОСТЬ, КРОВЬ, КАЧЕСТВО ПРОДУКЦИИ, РЕНТАБЕЛЬНОСТЬ.</p>
<p>В ходе выполнения проекта продемонстрирована важность применения информации, полученной в ходе полногеномного секвенирования пробиотических штаммов бактерий ‒ компонентов сельскохозяйственных биопрепаратов. Данные полногеномного секвенирования, такие, как уточненная информация о таксономической принадлежности штаммов, последовательности генов, отвечающих за проявление пробиотических свойств, кислотообразование, антогонистическую активность по отношению к патогенным и условно-патогенным штаммам (в первую очередь, структура бактериоцинов), необходимы при оптимизации характеристик инновационных биопрепаратов для выращивания сельскохозяйственной птицы.</p>
<p>Получены данные о полных геномах нескольких пробиотических штаммов кисломолочных бактерий, входящих в состав ранее разработанных препаратов «Галлобакт-Ф» и «Галлобакт-ЛТ». Исследования проведены методом высокоэффективного полногеномного секвенирования на секвенаторе нового поколения Illumina MiSeq. Полногеномные последовательности лактобактерий депонированы в международную базу данных NCBI. Уточнена таксономическая принодлежность компонентов препаратов – штаммов <em>Lactobacillus salivarius</em> 16РС20 и <em>Lactobacillus curvatus</em> 13PC723.</p>
<p>Впервые идентифицированы и депонированы в международную базу данных последовательности девяти бактериоцинов. Изучена их структура и выяснена информационная организация отдельных участков молекул.</p>
<p>В работе для оптимизации характеристик новой пробиотической добавки применяли полисахариды различного происхождения, в частности пектин, полученный из продуктов растительного сырья, альгинат натрия, выделенный из водорослей и ксантан, полученный из микробной массы. При подборе оптимальной дозы полисахарида с целью максимальной выживаемости лактобацилл выявлено, что полисахаридная смесь на основе альгината натрия из расчета 0,3 % в составе нового пробиотика, обеспечивает наилучший результат.</p>
<p>Разработан состав и технология получения новой пробиотической добавки «Галлобакт-Ф-Плюс». Отдельно изучены биологические свойства лактобацилл, используемых в составе пробиотика, а именно спектр сбраживаемости сахаров, потребность в отдельных витаминах, активное кислотообразование. Изучен фенотипический профиль антибиотикорезистентности лактобактерий, антагонизм к эталонной условно-патогенной и патогенной микрофлоре, а также к нормофлоре кишечника, антиадгезивные и адгезивные свойства молочнокислых бактерий к клеточным моделям.</p>
<p>Проведено изучение лечебно-профилактического свойства разработанного пробиотика «Галлобакт-Ф-Плюс» на модели экспериментального дисбактериоза у лабораторных животных. Продемонстрировано токсикологическое и раздражающее действие пробиотической добавки на организм лабораторных мышей, крыс и кроликов-альбиносов. Установлено, что доза пробиотика «Галлобакт-Ф-Плюс»: 0,5 мл/гол. – в мясном перепеловодстве и 0,75 мл/гол. – в бройлерном птицеводстве, способствует повышению сохранности птицы, увеличению массы тушки, снижению конверсии комбикорма, улучшению показателей биополноценности продукции птицеводства, а также повышению рентабельности ведения данной отрасли животноводства.</p>
<h2><strong>ВЕДЕНИЕ</strong></h2>
<p>В кишечнике здоровых птиц содержится около 900 видов микроорганизмов, и их совокупность рассматривается как микробная экологическая система. Существование животных без нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) невозможно, так как она контролирует многие метаболические функции хозяина. Поддерживать нормофлору в стабильном состоянии и регулировать ее состав можно введением в корм пробиотиков – живых организмов, которые при введении в физиологических количествах приносят пользу организму хозяина. Микроорганизмы, используемые в качестве пробиотиков, большинство микробиологов относят к нескольким группам (<em>Lactobacillus</em>, <em>Enterococcus</em> и др.). Традиционно наиболее широко применяются молочнокислые бактерии. В современной научной и технической литературе сформированы четкие требования к потенциальным пробиотическим штаммам. Поскольку одним из основных механизмов, направленных против патогенных бактерий, является конкурентоспособность нормофлоры в борьбе за экологическую нишу, применение представителей автохтонной микрофлоры, входящей в естественные для данного вида микробные ассоциации и, как следствие, обладающие повышенной функциональной адаптацией к физиологическим особенностям выращиваемой птицы, представляется более оправданным.</p>
<p>Учитывая особенности географического расположения промышленных птицеводческих хозяйств, перспективно использование зональных природных резервуаров микроорганизмов, сформировавшихся в конкретных климатических и физико-географических условиях Юга России. Генетическая селекция по признакам высокой продуктивности поголовья сельскохозяйственных птиц<br />
в настоящее время привела к понижению естественной резистентности организма и, как следствие, широкому использованию противомикробных препаратов в составе кормов.</p>
<p>Помимо профилактического и терапевтического действия по отношению<br />
к различным болезням бактериальной этиологии, они также используются как эффективные кормовые добавки, стимулирующие рост молодняка и улучшающие целый ряд зоотехнических параметров (сохранность, продуктивность, коэффициент конверсии корма и др.). Из-за постоянного воздействия антибиотиков патогенные и условно патогенные бактерии в течение времени вырабатывают устойчивость к ним, изменяется состав микрофлоры кишечника (снижается численность полезной кишечной микрофлоры), нарушаются физиологические и иммунологические механизмы защиты организма птиц, создаются условия для развития инфекционных процессов, вызываемых его собственной патогенной микрофлорой и бактериями из окружающей среды. Генетические детерминанты антибиотикорезистентности, попадая в геномы патогенных видов бактерий, а затем и в человека, делают вызываемые ими инфекционные заболевания практически неизлечимыми существующими медикаментами, повышается количество аллергических и аутоиммунных заболеваний у людей.</p>
<p>Одной из рассматриваемых альтернатив широкому применению антибиотиков считаются пробиотические препараты. Одними из наиболее перспективных видов-пробиотиков рода <em>Lactobacillus</em> могут выступать <em>L. salivarius</em><br />
и <em>L. curvatus</em>. Протокол исследования коммерчески интересных штаммов<br />
в настоящее время предполагает углубленное исследование их генома и транскриптома (как минимум – проведение полногеномного секвенирования).</p>
<p>В целом хотелось отметить, что глубокое изучение научной и патентной литературы показало отсутствие эффективных конструкций функционально-адаптированных пробиотических добавок, изготовленных с применением эволюционно-закрепленных микроорганизмов желудочно-кишечного тракта птицы для применения в промышленном птицеводстве.</p>
<h2><strong>1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ</strong></h2>
<h3><strong>1.1 МИКРОФЛОРА ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА ПТИЦ. МЕТОДЫ АНАЛИЗА</strong></h3>
<h4><strong><em>1.1.1 Роль микробиоты желудочно-кишечного тракта птицы</em></strong></h4>
<p>Целостность желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) и микробного сообщества кишечника играют жизненно важную роль в усвоении пищи, развитии иммунитета и устойчивости к болезням. Изменения в микробном сообществе ЖКТ могут оказывать неблагоприятное воздействие на эффективность кормов, продуктивность и здоровье птиц (Jeurissen S. H., Lewis F., Van der Klis J. D., Mroz Z., Rebel J. M., Ter Huurne A. A., 2002; Kohl K. D., 2012). Понимание роли микробиоты ЖКТ цыплят и понимание современных методов, используемых<br />
в исследованиях микробиома, имеет важное значение для улучшения микробиома ЖКТ птицы. Исторически сложилось так, что селективные культуральные методы использовались для идентификации и характеристики микробного разнообразия кишечника птиц. В последнее десятилетие использование секвенирования генов 16S рибосомной РНК (рРНК) значительно улучшило наше понимание состава и разнообразия микробиоты ЖКТ птиц, что привело к важным новым представлениям о биологической и экологической роли микробиоты ЖКТ. С помощью современных высокопроизводительных методов секвенирования можно быстро получить данные о полном видовом составе бактериального сообщества.</p>
<p>Желудочно-кишечные отделы птиц плотно заселены сложными микробными сообществами (бактериями, грибами, археями, простейшими и вирусами), в которых преобладают бактерии (Wei S., Morrison M., Yu Z., 2013). Взаимодействия между хозяином и бактериальным микробиомом куриного ЖКТ были широко изучены и рассмотрены многими исследовательскими группами (Danzeisen J. L., Kim H. B., Isaacson R. E., Tu Z. J., Johnson T. J., 2011; Hegde N. V., Kariyawasam S., DebRoy C., 2016; Kumar S. [et al.], 2018; Mancabelli L. [et al.], 2016; Pan D., Yu Z., 2014;) и в настоящее время считаются играющими важную роль в питании птиц, физиологии и развитии кишечника (Kau A. L., Ahern P. P., Griffin N. W., Goodman A. L., Gordon J. I., 2011).</p>
<p>Микробиота кишечника может образовывать защитный барьер, прикрепляясь к эпителиальным стенкам энтероцита, и тем самым снижая возможность колонизации патогенными бактериями (Yegani M., Korver D. R., 2008). Полезная микробиота продуцирует витамины (например, группы витамина К и B), короткоцепочечные жирные кислоты (уксусная кислота, масляная кислота<br />
и пропионовая кислота), органические кислоты (например, молочная кислота)<br />
и антимикробные соединения (например, бактериоцины), снижает уровень триглицеридов и индуцирует иммунные реакции, которые обеспечивают защиту животного (Jeurissen S. H., Lewis F., Van der Klis J. D., Mroz Z., Rebel J. M., Ter Huurne A. A., 2002; Yegani M., Korver D. R., 2008). С другой стороны, микробиом кишечника может также быть источником бактериальных патогенов, таких как <em>Salmonella</em> и <em>Campylobacter</em>, которые могут распространяться среди людей или выступать в качестве пула устойчивости к антибиотикам, т. е. представлять серьезную угрозу для здоровья населения (Zhou W., Wang Y., Lin J., 2012).</p>
<p>Нормальное микробное сообщество кишечника имеет и положительные,<br />
и отрицательные стороны для хозяина (Dibner J. J., Richards J. D., 2005). Основные преимущества, которые обеспечивает комменсальная микробиота, – это конкурентное исключение патогенов или некоренных микробов (Dibner J. J., Richards J. D., 2005), иммунная стимуляция и программирование, а также вклад в питание хозяина. В более ранних работах было установлено, что условно выращенные животные гораздо менее восприимчивы к патогенам по сравнению<br />
с животными, свободными от микробов (Koopman J. P. [et al.], 1984). Кроме того, комменсальная микробиота может стимулировать развитие иммунной системы, включая слой слизи, эпителиальный монослой, кишечные иммунные клетки (например, цитотоксические и хелперные Т-клетки, клетки, продуцирующие иммуноглобулин, и фагоцитарные клетки) и собственную пластинку – <em>lamina propria</em> (Dibner J. J., Richards J. D., 2005; Oakley B. B. [et al.], 2014; Shakouri M. D., Iji P. A., Mikkelsen L. L., Cowieson A. J., 2009). Эти ткани создают барьеры между хозяином и микробами и борются с нежелательными микроорганизмами кишечника. В дистальном отделе кишечника (т. е. в толстой кишке) микробиота также производит питательные вещества, такие как витамины, аминокислоты и короткоцепочечные жирные кислоты (SCFA) из непереваренного корма, которые в конечном итоге становятся доступными для хозяина (Dibner J. J., Richards J. D., 2005).</p>
<p>Также было установлено, что синтез SCFA снижает рН толстой кишки, что ингибирует превращение желчи во вторичные желчные продукты (Christl S. U., Bartram H. P., Paul A., Kelber E., Scheppach W., Kasper H., 1997). Кроме того, микробиота кишечника также способствует метаболизму азотистых соединений хозяина. Например, бактерии слепой кишки могут преобразовывать мочевую кислоту в аммиак, который впоследствии поглощается птицей и далее используется для производства аминокислот, таких как глутамин. Кроме того, часть азота из рациона включается в бактериальный клеточный белок, и поэтому сами бактерии могут быть источником белков/аминокислот.</p>
<p>С другой стороны, комменсальная микробиота также несет издержки для хозяина. В проксимальном отделе кишечника (желудке и тонком кишечнике) микробы конкурируют с хозяином за энергию и белок. Как в проксимальном, так и в дистальном отделе кишечника микробы продуцируют токсичные метаболиты (например, аминокислотные катаболиты) и катаболизируют желчные кислоты, которые могут подавлять рост и снижать усвояемость жира птицами. В присутствии микробиоты слизистый слой кишечника увеличивает секрецию муцина и скорость оборота эпителиальных клеток, тем самым сохраняя слизь желудочно-кишечного тракта и предотвращая проникновение микроорганизмов в эпителиальные клетки кишечника хозяина. Кишечная иммунная система также более развита и выделяет IgA, который специфически связывается с бактериальными эпитопами, помогает регулировать бактериальный состав в кишечнике (Suzuki K., Nakajima A., 2014). И хотя в целом эти процессы полезны, они увеличивают потребность в энергии и белке у хозяина и, следовательно, оказывают влияние на ростовые показатели птиц.</p>
<p>Дисбаланс микробиоты кишечника еще называют дисбактериозом. Он может быть определен как качественный и/или количественный дисбаланс нормальной микробиоты в тонком кишечнике, который может привести к последовательной реакции в ЖКТ, включая снижение барьерной функции кишечника (например, истончение кишечной стенки) и плохую усвояемость питательных веществ, и, следовательно, увеличение риска бактериальной транслокации<br />
и воспалительных реакций (Yan F., Dibner J. J., Knight C. D., Vazquez-Anon M., 2017). Как неинфекционные, так и инфекционные стрессоры могут привести<br />
к дисбактериозу. Неинфекционные факторы включают экологические стрессоры, пищевые дисбалансы, диетические изменения, микотоксины, ферментативную дисфункцию или генетику хозяина (Yan F., Dibner J. J., Knight C. D., Vazquez-Anon M., 2017). Инфекционные факторы включают вирусную или бактериальную инфекцию, кокцидиоз или токсические метаболиты, продуцируемые вредными микроорганизмами, такими как <em>Clostridium perfringens</em>.</p>
<p>Желудочно-кишечная микробиота может быть классифицирована как люминальная микробиота и слизистая (Jeurissen S. H., Lewis F., Van der Klis J. D., Mroz Z., Rebel J. M., Ter Huurne A. A., 2002). Состав люминальной микробиоты определяется наличием питательных веществ, наличием антимикробного вещества и скоростью прохождения корма. На состав микробиоты, прикрепленной<br />
к слизистой оболочке, влияют несколько факторов хозяев, таких как экспрессия специфических участков адгезии на мембране энтероцитов, секреция секреторных иммуноглобулинов и скорость образования слизи. Люминальная микробиота и связанная со слизистой оболочкой микробиота, конечно, также влияют друг на друга (Jeurissen S. H., Lewis F., Van der Klis J. D., Mroz Z., Rebel J. M., Ter Huurne A. A., 2002), и поэтому важно признать, что диета может изменять как люминальную, так и присоединенную к слизистой оболочке микробиоту, чтобы влиять на здоровье кишечника. Насколько известно, до настоящего времени не было проведено ни одного исследования, в котором сравнивался бы таксономический состав или метаболические функции этих двух местообитаний микробов. Однако было бы интересно изучить и проанализировать различия между бактериальными сообществами слизистой оболочки на протяжении различных участков ЖКТ. Кроме того, изучение бактериального сообщества, связанного со слизистой оболочкой, важно для понимания реакции слизистой оболочки хозяина, поскольку любые изменения в иммунитете слизистой оболочки могут иметь серьезные последствия для здоровья птицы (Borda-Moli­na D., Vital M., Sommerfeld V., Rodehutscord M., Camarinha-Silva A., 2016).</p>
<h4><strong><em>1.1.2 Разнообразие микробиоты кишечника птицы</em></strong></h4>
<p>Желудочно-кишечный тракт птицы содержит разнообразное бактериальное сообщество, в котором каждая бактерия адаптирована к своей собственной экологической нише и синергически живет с другими бактериальными видами в том же сообществе. Показано, что состав и функции этих сообществ изменяются в зависимости от возраста птиц, расположения в желудочно-кишечном тракте и от компонентов питания (Kogut M. H., Oakley B. B., 2016).</p>
<p>Возраст птиц является одним из наиболее важных факторов, влияющих на бактериальный состав ЖКТ, плотность клеток и метаболическую функцию. Значительные изменения в таксономическом составе микробиоты кишечника были изучены с использованием методов DNA finger-printing (Lu J., Idris U., Harmon B., Hofacre C., Maurer J. J., Lee M. D., 2003) и высокопроизводительного секвенирования (Shaufi M. A., Sieo C. C., Chong C. W., Gan H. M., Ho Y. W., 2015), и хорошо изучены многими исследовательскими группами (Kers J. G., Velkers F. C., Fischer E. A. J., Hermes G. D. A., Stegeman J. A., Smidt H., 2018). Было продемонстрировано, что через один день после вылупления цыплята-бройлеры уже имеют микробное сообщество в их ЖКТ (Ballou A. L. [et al.], 2016; Kumar S. [et al.], 2018). Имеются также сукцессионные изменения в составе микробиома ЖКТ, обусловленные заменой и установлением более устойчивых бактериальных таксонов, по мере того как птица прогрессирует в возрасте (Crhanova M. [et al.], 2011; Lu J., Idris U., Harmon B., Hofacre C., Maurer J. J., Lee M. D., 2003). Лу с соавторами (Lu J., Idris U., Harmon B., Hofacre C., Maur­er J. J., Lee M. D., 2003) обнаружили, что в ЖКТ цыплят в 3-дневном возрасте содержались <em>L. delbrueckii</em>, <em>C. perfringens </em>и <em>Campylobacter coli</em>, тогда как с 7 до 21-дневного возраста чаще встречались <em>L. acidophilus</em>, <em>Enterococcus</em> и <em>Strep­tococcus</em>. В 28-и и 49-дневном возрасте в желудочно-кишечном тракте содержится <em>L. crispatus</em>, но состав его значительно отличается от других возрастов (Lu J., Idris U., Harmon B., Hofacre C., Maur­er J. J., Lee M. D., 2003). В другой работе сукцессионные изменения микробного сообщества кишечника, измеренные с помощью NGS, показали, что относительное обилие <em>Clostridium</em> было выше по мере старения птицы, тогда как лактобациллы были низкими на протяжении всего цикла роста. Такая вариабельность результатов может быть обусловлена типами проб (фекалии из слепой кишки) и/или традиционными микробиологическими и молекулярными методами, которые имеют ограниченный охват и точность по сравнению с высокопроизводительными платформами NGS, которые предлагают более высокий охват и глубину определения микробного сообщества. Технологии высокопроизводительного секвенирования, такие как целенаправленное ампликонное секвенирование и метагеномное секвенирование, стали более распространенными для анализа микробного состава и функций кишечника на протяжении всего жизненного цикла бройлеров, но все еще недостаточно знаний о морфологическом развитии хозяина и функциональных свойствах микробиома кишечника по мере старения птицы.</p>
<h4><strong><em>1.1.3 Строение желудочно-кишечного тракта птицы</em></strong></h4>
<p>Желудочно-кишечный тракт цыпленка включает желудок, двенадцатиперстную кишку, тощую кишку, подвздошную кишку, толстую кишку и клоаку (Yeoman C. J., Chia N., Jeraldo P., Sipos M., Goldenfeld N. D., White B. A., 2012). Каждый участок желудочно-кишечного тракта имеет различные метаболические функции, которые формируют микробное сообщество (таблица 1), и поэтому, важно учитывать место отбора проб и дизайн исследования. В организме курицы, например, содержится от 10<sup>8</sup> до 10<sup>9 </sup>КОЕ/г бактерий, в которых обычно преобладают лактобациллы (Gong J. [et al.], 2007).</p>
<p>В желудке концентрация бактерий низка, главным образом, из-за низкого pH, большинство бактерий в желудке – лактобациллы, энтерококки, лактоза-отрицательные энтеробактерии, и бактерии кишечной палочки (Gong J. [et al.], 2007). Среди сегментов тонкой кишки бактериальная плотность является самой низкой в двенадцатиперстной кишке из-за короткого времени прохождения<br />
и разбавления секретируемой желчью (Waite D. W., Taylor M., 2015). Дуоденальное бактериальное сообщество в основном состоит из клостридий, стрептококков, энтеробактерий и лактобацилл (Waite D. W., Taylor M., 2015). Микробиота подвздошной кишки изучена больше всего среди сегментов тонкой кишки. Лу с соавторами (Lu J., Idris U., Harmon B., Hofacre C., Maur­er J. J., Lee M. D., 2003) оценили бактериальный состав подвздошной кишки путем изучения последовательностей генов 16S рРНК и обнаружили больше всего содержание <em>Lactobacillus</em> (70 %), затем представители семейств <em>Clostridiaceae</em> (11 %), <em>Streptococcus</em> (6,5 %) и <em>Enterococcus</em> (6,5 %). По сравнению с подвздошной кишкой слепая кишка содержит более разнообразное, богатое и стабильное микробное сообщество, включая анаэробы (Videnska P., Sisak F., Havlickova H., Faldynova M., Rychlik I., 2013). Окли с соавторами (Oakley B. B. [et al.], 2014) задокументировали значительные изменения в микробных сообществах слепой кишки со дня вылупления до 6-недельного возраста у коммерческих бройлеров (Kogut M. H., Oakley B. B., 2016; Oakley B. B. [et al.], 2014), а также значительные различия в образцах слепой кишки и фекалий от одной особи (Kogut M. H., Oakley B. B., 2016). Как правило, богатство и разнообразие слепой кишки увеличивается в течение этих 6 нед, и таксономический состав сообщества быстро смещается от <em>Proteobacteria</em>, <em>Bacteroides</em> и <em>Firmicutes</em>, почти полностью <em>Firmicutes</em> к 3-недельному возрасту (Kogut M. H., Oakley B. B., 2016; Oakley B. B. [et al.], 2014). Однако Кумар с соавторами (Kumar S. [et al.], 2018) обнаружили, что фирмикуты были наиболее распространенным типом как в толстой кишке, так и в подвздошной кишке во всех возрастах (день 0 – день 42). Различия в бактериальном составе можно объяснить различиями в протоколе экстракции нуклеиновых кислот, праймерах, подходе к секвенированию, факторах окружающей среды, диетическом лечении/составе, породе и географических условиях. В дополнение к типам образцов, адекватный размер выборки также необходим для правильного дизайна исследования. Более высокие индивидуальные различия в типах образцов (образцы культур) приводят к более высокому размеру выборки по сравнению с образцами слепой кишки, чтобы найти потенциальные различия (Lagkouvardos I., Overmann J., Clavel T., 2017).</p>
<p><strong>Таблица 1</strong> – Распределение наиболее распространенных бактериальных<br />
таксонов в ЖКТ птиц независимо от возраста, рациона питания<br />
(Chicken Gut Microbiota: Importance and Detection Technology, 2018)</p>
<p><img width="866" height="880" class="wp-image-5186" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-135.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-135.jpeg 866w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-135-295x300.jpeg 295w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-135-768x780.jpeg 768w" sizes="(max-width: 866px) 100vw, 866px" alt="word image 135 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p>Также известно, что кормовые компоненты и добавки, подходы к обработке кормов оказывают влияние на микробное сообщество кишечника Кнареборг с соавторами (Knarreborg A., Simon M. A., Engberg R. M., Jensen B. B., Tannock G. W., 2002) заявляют, что измельченный корм снижает количество <em>Enterococcus </em>spp.и кишечной палочки, но увеличивает содержание <em>Lactobacillus </em>spp. и <em>C. perfringens</em> в подвздошной кишке бройлеров по сравнению с гранулированным кормом (Knarreborg A., Simon M. A., Engberg R. M., Jensen B. B., Tannock G. W., 2002). Кумар с соавторами (Kumar S. [et al.], 2018) сообщили<br />
о низкой численности <em>Firmicutes</em> и высокой численности <em>Bacteroidetes</em> с 0-го по 42-й день, когда птицы перешли от стартовой диеты к финишной, и утверждали, что представители типа <em>Bacteroidetes</em> жизненно важны для ферментации крахмала до простых сахаров. Кроме того, кормовые добавки, такие как сбраживаемые сахара (пребиотики), также могут оказывать влияние на состав<br />
и разнообразие микробиоты кишечника цыпленка.</p>
<h4><strong><em>1.1.4 Исследование микробиоты из кишечника сельскохозяйственной птицы с помощью молекулярных подходов</em></strong></h4>
<p>Классические методы, основанные на изучении бактериальных культур, исторически широко использовались для изучения микробиоты кишечника. Тем не менее, эти методы очень избирательны к культивируемым бактериям<br />
в определенных условиях. Большинство бактерий являются некультультивируемыми. Более 10 лет назад было замечено, что из 52 известных типов микроорганизмов только половина имела хотя бы одного культивируемого представителя, и это подтверждает описание «некультивируемого большинства» (Rap­pe M. S., Giovannoni S. J., 2003). Следовательно, представленность (количество видов) и разнообразие (количество видов, взвешенных по их относительной численности) кишечных бактерий были недооценены, и наши знания о кишечной микробиоте остаются неполными (Gong J. [et al.], 2002).</p>
<p>Развитие молекулярной биотехнологии предложило новые инструменты для изучения состава, разнообразия, прогнозируемой функции и взаимодействия кишечной микробиоты в различных отделах желудочно-кишечного тракта. В настоящее время доступны различные молекулярные методы, каждый из которых имеет свои сильные и слабые стороны. В таблице 2 представлены состав образца, применение и ограничения некоторых из применяемых наиболее распространенных молекулярных методов, которые можно использовать для изучения экологических микробных микроорганизмов микробиома сельскохозяйственной птицы. Высокопроизводительное секвенирование ампликонов гена 16S рРНК быстро стало наиболее применяемым методом. Хотя этот метод широко использовался в других областях исследований, в 2013 г. был опубликован первый отчет, в котором было использовано высокопроизводительное секвенирование генов 16S рРНК для изучения популяции микробных сообществ и их взаимодействий в курином ЖКТ (Diaz-Sanchez S., Hanning I., Pendleton S., D&#8217;souza D., 2013).</p>
<p><strong>Таблица 2 </strong>– Молекулярные подходы на основе 16S рРНК для изучения<br />
микробиома ЖКТ курицы. Цитировано по Chicken Gut Microbiota: Importance and Detection Technology, 2018</p>
<p><img width="1145" height="718" class="wp-image-5187" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/https-www-frontiersin-org-files-articles-420757-.jpeg" alt="https://www.frontiersin.org/files/Articles/420757/fvets-05-00254-HTML/image_m/fvets-05-00254-t002.jpg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/https-www-frontiersin-org-files-articles-420757-.jpeg 1145w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/https-www-frontiersin-org-files-articles-420757--300x188.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/https-www-frontiersin-org-files-articles-420757--1024x642.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/https-www-frontiersin-org-files-articles-420757--768x482.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1145px) 100vw, 1145px" /></p>
<p>Молекула 16S рРНК представляет собой небольшую субъединицу рибосомы, которая содержит последовательности, которые высоко консервативны для всех бактерий. Для амплификации этих генов метагеномную ДНК выделяют из образцов фекалий или содержимого ЖКТ, и амплифицируют методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с помощью праймеров на консервативные участки гена 16S рРНК (Apajalahti J., Kettunen A., Graham H., 2004). Секвенирование этих амплифицированных продуктов (ампликонов) позволяет различить бактерии, как правило, на уровне рода или вида (Flint H. J. [et al.], 2006), а относительная численность каждой последовательности отражает относительную численность этой бактерии в исходном образце. Таким образом, секвенирование генов 16S рРНК обеспечивает реальный состав бактериального сообщества<br />
с помощью определения типов бактерий, присутствующих в образце, и их относительной численности. Из-за высокой представленности и разнообразия кишечных бактериальных сообществ только в последние несколько лет технология секвенирования ДНК достигла такого уровня, что теперь можно полностью определить количественный состав метагеномных сообществ. Начиная<br />
с 2008 г., технический прогресс в секвенировании позволил анализировать на несколько порядков больше последовательностей, чем это было возможно ранее (Hamady M., Walker J. J., Harris J. K., Gold N. J., Knight R., 2008). Благодаря этим глубоким методологическим достижениям и огромным новым базам данных, теперь можно легко и точно провести анализ микробиома ЖКТ птицы, чтобы определить, например, как микробиом реагирует на различные кормовые добавки, условия содержания или болезненные состояния (рисунок 1).</p>
<p>Высокопроизводительное секвенирование, или секвенирование следующего поколения (NGS), является мощным инструментом для исследования биологической и экологической роли кишечной микробиоты (Diaz-Sanchez S., Hanning I., Pendleton S., D&#8217;souza D., 2013). NGS стал удобным, быстрым, точным и недорогим методом геномных исследований (Park S. H., Hanning I., Perrota A., Bench B. J., Alm E., Ricke S. C., 2013). Современные платформы NGS обеспечивают высокую пропускную способность, быстрое время исследования и невысокие затраты. Среди этих платформ приборы Illumina HiSeq и MiSeq являются двумя наиболее часто используемыми системами в недавних исследованиях<br />
в области микробиома и метагеномики в ЖКТ. Несмотря на многие преимущества, эти платформы имеют ограничения, например, краткую сборку прочтения и высокую стоимость (Kumar S., Pitta D. W., 2015). Платформы секвенирования третьего поколения, такие как single molecule real-time (SMRT) и секвенирование нанопор, требуют меньше времени для подготовки ДНК (без ПЦР) и являются экономически эффективными (Kumar S., Pitta D. W., 2015). Поскольку эти платформы продолжают развиваться, их применение, несомненно, приведет<br />
к новому пониманию микробиома желудочно-кишечного тракта птицы.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="352" height="872" class="wp-image-5188" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-136.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-136.jpeg 352w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-136-121x300.jpeg 121w" sizes="(max-width: 352px) 100vw, 352px" alt="word image 136 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></td>
<td><strong>Рисунок 1</strong> – Стандартная процедура<br />
исследования микробиома<br />
птицы</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Для биоинформационного анализа данных последовательностей, полученных в результате секвенирования, требуются платформы с открытым исходным кодом, такие как QIIME или Mothur, которые используют общедоступные базы данных GreenGenes, проект базы данных Ribosomal и SILVA (Caporaso J. G.<br />
[et al.], 2010) для выполнения таксономического ранжирования. Предсказание метаболических функций на основе таксономических идентификаторов последовательностей генов 16S рРНК может быть дополнительно получено с использованием таких алгоритмов, как PICRUSt и Tax4Fun (Abhauer K. P., Wemheu­er B., Daniel R., Meinicke P., 2015). Для анализа функций генов или отдельных геномов могут использоваться метагеномный или метатранскриптомный подходы (в которых гены или транскрипты, соответственно, секвенируются напрямую без ПЦР) для предоставления информации о разнообразии сообществ, структуре и метаболических функциях или экспрессии генов. Биоинформационный анализ таких наборов данных является более сложным, чем анализ амплификации 16S, и обычно содержит сборщик последовательностей, такой как Velvet (CLC workbench, Newbler version 3.0, Biospace) или MG-RAST. Бактериальные таксоны и функциональные группы могут быть определены на основе Basic Local Alignment Инструмент поиска (BLAST), а функции генов могут быть проанализированы с использованием либо Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG), либо кластера ортологичных генов (COG). Например, для изучения микробиома ЖКТ птиц с целью выяснения функций слепой кишки и реакции кишечника на заражение патогенами, а именно изучение корреляции между представленностью микробиологического сообщества и параметрами производительности, выявление генов устойчивости к антибиотикам и др., проводили метагеномные исследования (Borda-Molina D., Seifert J., Camarinha-Sil­va A., 2018). Некоторые из исследований, основанных на NGS, в которых изучаются состав и функции микробного сообщества кишечника цыпленка в отношении изменения рациона/лечения антибиотиками, представлены в таблице 3. Однако для изучения микробиома кишечника и получения сопоставимых результатов необходим стандартный протокол. В настоящее время большинство метагеномных подходов к изучению куриного ЖКТ до сих пор недоступны для большинства исследователей или ветеринаров.</p>
<p><strong>Таблица 3 </strong>– Применение разных омических подходов для изучения<br />
микробного сообщества и функций кишечника птиц</p>
<p><img width="743" height="939" class="wp-image-5189" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-137.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-137.jpeg 743w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-137-237x300.jpeg 237w" sizes="(max-width: 743px) 100vw, 743px" alt="word image 137 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p>Чтобы обойти некоторые ограничения анализа методом NGS, для определения метаболических и функциональных свойств микробиома недавно были также использованы протеомные подходы (Tilocca B., Witzig M., Rodehuts­cord M., Seifert J., 2016). Транскриптомика измеряет транскрипцию генов <em>in situ</em>, обеспечивая точное отражение физиологических функций (Kumar S., Pitta D. W., 2015). Поскольку в современных базах данных количество опубликованных бактериальных штаммов ЖКТ птицы ограничено, увеличение количества бактериальных культур и надлежащая каталогизация их биохимических и генетических свойств облегчит протеомику и другие «омические» подходы.</p>
<h4><strong><em>1.1.5 Пребиотики и пробиотики в рационе сельскохозяйственной птицы</em></strong></h4>
<p>Использование пребиотиков в качестве пищевых модуляторов оказывает положительное влияние на некоторые бактериальные таксоны в толстой кишке (Gaggia F., Mattarelli P., Biavati B., 2010). Например, фруктоолигосахариды (FOS) и галактоолигосахариды (GOS) увеличивают популяцию <em>Bifidobacterium</em> и <em>Lactobacillus</em> (Jung S. J., Houde R., Baurhoo B., Zhao X., Lee B. H., 2008; Xu Z. R., Hu C. H., Xia M. S., Zhan X. A., Wang M. Q., 2003). Исследования <em>in vitro</em> показали, что фекальные взвеси, которые инкубировали с олигофруктозой и инулином, демонстрировали увеличение популяций бифидобактерий в толстой кишке человека, тогда как потенциальные патогены, такие как <em>Escherichia coli</em><br />
и <em>Clostridium </em>spp. поддерживались на более низких уровнях. Большинство штаммов бифидобактерий (например, <em>B. fiagilk</em>, <em>B. thetaiotaomicron</em>, <em>B. vulgatus</em>, <em>B. dktasonk </em>и<em> B. ovatus</em>), за исключением <em>B. bifidum,</em> могут использовать FOS<br />
в качестве стимулятора роста и ферментации. Эти бактерии выделяют фермент бета-фруктозидазу, которая может легко перерабатывать и ферментировать FOS. Однако микроорганизмы, такие как <em>E.coli</em> и <em>C. perfringens</em>, не способны использовать FOS в качестве источника углевода. Было показано, что у крыс, которых кормили FOS, временно увеличивалось содержание бактерий, продуцирующих молочную кислоту, и долгосрочно повышался уровень масляной кислоты в слепой кишке. Включение в рацион бройлеров FOS уменьшало популяции <em>C. perfringens</em> и <em>E. coli</em> и увеличивало разнообразие <em>Lactobacillus</em><br />
в ЖКТ бройлеров (Kim H. J., Eom S. J., Park S. J., Cha C. J., Kim G. B., 2011). Паттерсон с соавторами (Patterson J. A., Orban J. I., Sutton A. L., Richards G. N., 1997) оценивали влияние термических кетозных олигосахаридов на микробные популяции слепой кишки цыплят бройлеров. Результаты показали, что концентрации бифидобактерий и лактобацилл слепой кишки были увеличены в 24 раза и в 7 раз, соответственно, при добавлении в рацион кетоз по сравнению с контрольной группой.</p>
<p>Другой тип пребиотиков – манноолигосахариды (MOS) – имеет различные механизмы действия (Patterson J. A., Orban J. I., Sutton A. L., Richards G. N., 1997). Манноолигосахариды выполняют несколько функций:</p>
<p>1) связываются с потенциальными патогенными грамотрицательными бактериями (например, <em>E. coli</em> и <em>Salmonella</em>), которые обладают фимбриями 1-го типа (чувствительными к маннозе лектином), для предотвращения прикрепления патогенов к стенке кишечника;</p>
<p>2) проявляют иммуномодулирующий эффект, основанный на особенностях антигенности компонентов маннана и глюкана;</p>
<p>3) модулируют морфологию кишечника;</p>
<p>4) усиливают экспрессию муцина и снижают скорость энтероцитов (Yang Y., Iji P. A., Choct M., 2009).</p>
<p>Воздействие пребиотиков на нижний отдел желудочно-кишечного тракта включает:</p>
<p>1) подачу и ферментацию пищи для микробиоты слепой и толстой кишок;</p>
<p>2) производство конечных продуктов ферментации (например, SCFA);</p>
<p>3) стимуляцию сахаролитической ферментации;</p>
<p>4) подкисление содержимого толстой кишки;</p>
<p>5) гиперплазию эпителия слепой и толстой кишок;</p>
<p>6) стимуляцию секреции гормональных пептидов толстой кишки (Gag­gia F., Mattarelli P., Biavati B., 2010).</p>
<p>Состав кишечной микробиоты помимо возраста, места ЖКТ и пребиотиков во многом зависит от породы и пола птицы (Kers J. G., Velkers F. C., Fischer E. A. J., Hermes G. D. A., Stegeman J. A., Smidt H., 2018). Кроме того, было показано, что факторы окружающей среды (уровень биологической безопасности, жилье, мусор, доступ к корму и климат) также существенно влияют на бактериальный состав кишечника. Таким образом, интерпретация данных и результаты исследований во многом зависят от дизайна исследования.</p>
<p>Наряду с пребиотиками, пробиотики являются инструментом, используемым для уменьшения применения противомикробных препаратов в сельском хозяйстве (Borda-Molina D., Seifert J., Camarinha-Silva A., 2018). Пробиотики являются жизнеспособными бактериями, которые обеспечивают пользу при приеме внутрь, в том числе усиление функций кишечного барьера хозяина против потенциальных патогенов, поддержание гомеостаза в ЖКТ (Bajagai Y. S., Klieve A. V., Dart P. J., Bryden W. L., 2016). Пробиотики могут принести пользу хозяину напрямую без изменения микробиоты в целом (Bajagai Y. S., Klieve A. V., Dart P. J., Bryden W. L., 2016). У самцов бройлеров добавление в рацион <em>Bacillus subtilis</em> CGMCC 1.1086 привело к увеличению прироста веса и улучшению коэффициента конверсии корма (FCR) (Li Y., Xu Q., Huang Z., Lv L., Liu X., Yin C., Yan H., Yuan J., 2016). Другое исследование включало кормление пробиотиком <em>Lactobacillus planatarum</em>, в результате чего повышался иммунитет, наблюдали увеличение секреции сывороточного IgG и IgA (Gao P., Ma C., Sun Z., Wang L., Huang S., Su X., Xu J., Zhang H., 2017). В качестве пробиотиков у домашней птицы обычно применяются штаммы <em>Lactobacillus</em> и <em>Enterococcus </em>spp., оба обнаружены в естественной микробиоте из ЖКТ птицы в большом количестве (Markowiak P., Slizewska K., 2018; Pourabedin M., Guan L., Zhao X., 2015). Добавление <em>Lactobacillus </em>spp. в рацион связывают с увеличением массы тела, увеличением количества бокаловидных клеток и снижением колонизации кишечной палочки в пищеварительном тракте (Ashraf S., Zaneb H., Yousaf M. S., Ijaz A., Sohail M. U., Muti S., Usman M. M., Ijaz S., Rehman H., 2013). Добавка в пищу <em>Enterococcus </em>spp. повышает коэффициент конверсии корма (FCR) и положительно влияет на рост бройлеров (Samli H. E., Senkoylu N., Koc F., Kanter M., Agma A., 2007). Stanley с соавторами продемонстрировали, что представители семейств <em>Lachnospiraceae</em>, <em>Ruminococcaceae </em>и <em>Erysipelotrichaceae</em> являются потенциальными пробиотиками, их добавление в рацион птицы значительно коррелировало с хорошими показателями коэффициент конверсии корма (Stan­ley D., Hughes R. J., Geier M. S., Moore R. J., 2016). В дугой работе Torok с соавторами показали ассоциацию применения <em>Lactobacillus </em>spp. с плохой продуктивностью животных (Torok V. A., Hughes R. J., Mikkelsen L. L., Perez-Maldo­nado R., Balding K., MacAlpine R., Percy N. J., Ophel-Keller K., 2011). Кстати, оба исследования назвали <em>Clostridium lactatifermentans</em> потенциальным пробиотиком для выращивания сельскохозяйственных птиц.</p>
<p>В большинстве случаев добавление в рацион только пребиотиков или пробиотиков не всегда приводит к желаемому эффекту. Даже после прохождения полного курса нормализации баланса микроорганизмов в ЖКТ, уже через две недели–месяц пробиотические микроорганизмы погибают, и уровень микроорганизмов становится прежним. В связи с этим образовалась стратегия создания нового средства коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта с эффектом синергизма в результате комбинированного действия про- и пребиотиков (Alloui M. N., Szczurek W., Swiatkiewicz S., 2013).</p>
<p>Синбиотики – средства нового поколения для нормализации микрофлоры кишечника, которые включают пробиотики и пребиотики. Первые представляют собой бактерии, которые положительно влияют на здоровье человека. Они усиливают барьерные функции слизистой оболочки кишечника, восстанавливают ее целостность, улучшают работу иммунной системы, метаболизм, продуцируют витамины группы В. Вторые, в свою очередь, – не перевариваемые углеводы, стимулирующие рост микроорганизмов-пробиотиков. Только за последнее время проведено огромное количество исследований, показывающих положительное влияние синбиотических добавок на рост, вес, снижение значения FCR и увеличение сохранности птицы, но ни один из показателей не является двукратным повышением эффективности применения синбиотиков по сравнению с использованием только про- или пребиотических добавок (Awad W. A., Ghareeb K., Abdel-Raheem S., Bohm J., 2009; Mohnl M., Acosta Aragon Y., Acosta Ojeda A., Rodriguez Sanchez B., Pasteiner S., 2007; Mookiah S., Sieo C. C., Ramasamy K., Abdullah N., Ho Y. W., 2014). Определено влияние синбиотических композиций на слизистую кишечника (сохранение рисунка ворсинок, глубины криптов) (Sohail M. U., Hume M. E., Byrd J. A., Nisbet D. J., Ijaz A., Shabbir M. Z., Rehman H., 2012). Принимая во внимание теоретически возможные синергические эффекты альтернативных добавок этого типа, потенциал использования синбиотиков в сельском хозяйстве никто не отвергает, но дальнейшее развитие этого подхода в птицеводстве пока не получает нужного внимания (Sohail M. U., Hume M. E., Byrd J. A., Nisbet D. J., Ijaz A., Shabbir M. Z., Rehman H., 2012).</p>
<h4><strong><em>1.1.6 Компоненты ветеренарных препаратов и кормовых добавок (органические кислоты, ферменты, антимикробные пептиды)</em></strong></h4>
<p><strong>Органические кислоты</strong></p>
<p>В качестве пищевых добавок в птицеводстве применяются карбоновые (муравьиная, уксусная, пропионовая, масляная) и оксикарбоновые (молочная, яблочная, винная, лимонная) кислоты (Dibner J. J., Buttin P., 2002). Эти вещества широко распространены в природе и являются метаболитами процессов усвоения пищи (биологического окисления жиров, сахаров, белков) у живых организмов.</p>
<p>Препараты на основе органических кислот и/или их солей применяются<br />
в виде отдельных водных растворов или коктейлей (при выпаивании) или в виде сухих кормовых добавок в различных рационах (Huyghebaert G., Ducatelle R., Van Immerseel F., 2011).</p>
<p>Выгода от использования органических кислот как альтернативных добавок известна уже давно. Еще в 1988 г. было показано, что добавление фумаровой кислоты в рацион цыплят увеличивало такие производственные показатели как привес и усвояемость корма (Patten J. D., Waldroup P. W., 1988). Подобное влияние на производственные показатели роста продукции птицеводства были продемонстрированы для масляной, молочной и других кислот (Adil S., Ban­day T., Bhat G. A., Salahuddin M., Raquib M., Shanaz S., 2011; Hernandez F., Madrid J., Garcia V., Orendo J., Megias M. D., 2006; Salgado-Transito L., Rio-Garcia J. C., Moreno-Martinez J. L., Mendez-Albores A., 2011). Подробно исследовано влияние смесей органических кислот в составе коктейлей (Samanta S., Haldar S., Ghost T. K., 2010).</p>
<p>Механизм влияния добавок органических кислот еще не изучен. Но повышение эффективности потребления пищи у птиц в случае использования органических кислот связывается, в первую очередь, с антимикробными свойствами этих соединений. Механизмы влияния могут быть взаимосвязаны: 1) с понижением значений рН в верхних отделах ЖКТ птиц (зоб, железистый желудок, мускульный желудок) и изменениями физиологических свойств мукозального слоя (Panda A. K., Rama S. V., Raju M. N., Shyam Sunder G., 2009); 2) изменениями состава микрофлоры за счет уменьшения количества кислотолабильных патогенных бактерий и повышения числа автохтонной кислотоустойчивой молочно-кислой микрофлоры, обладающей пробиотическими свойствами (Boroоjeni F., Vahjen W., Mader A., Knorr F., Ruhnke I., Rohe I., Hafees A., Villodre C., Manner K., Zentek J., 2014); 3) повышением усвояемости пищи, за счет повышения активности метаболизирующих энзимов и перехода витаминов и минеральных веществ из малодоступных или труднодоступных для организма соединений в более доступные формы (Nezhad Y. E., Gale-Kandi J. G., Farahvash T., Yeganeh A. R., 2011); 4) регенерационным потенциалом эпителиальных клеток, связанным<br />
с секретами и/или продуктами метаболизма симбионтной микрофлоры. Влияние препаратов органических кислот на повышение рентабельности птицеводства при их вводе в рационы бройлеров очевидно, но из-за многообразия видов, форм и методов использования научные результаты исследования механизмов влияния этих соединений пока не показаны (Kim J. W., Kim J. H., Kil D. Y., 2015).</p>
<p><strong>Ферменты</strong></p>
<p>Общепринятые способы производства комбикормов с использованием<br />
в рационах исключительно животного белка в настоящее время не могут удовлетворить растущие потребности промышленного птицеводства. Методом использования растительного сырья и применения биотехнологических приемов его переработки в настоящее время создаются новые функциональные продукты для кормления птицы.</p>
<p>Основными источниками углеводов для птицы остаются зерновые корма. Они неоднородны по своему составу. Зерновые корма (кукуруза, пшеница, ячмень, овес) имеют в своем составе практически одинаковое содержание углеводов, но качественные и количественные различия содержания олигосахаридов, декстринов, крахмала, целлюлозы, лигнина влияют на перевариваемость корма и, как следствие, его использования в организме.</p>
<p>Организм птицы способен вырабатывать ферменты, гидролизующие почти все крупные молекулы корма на мономеры для последующего усвоения в организме, но в силу физиологических причин качество работы собственной ферментной системы может быть недостаточным из-за избыточного присутствия<br />
в современных рационах трудногидролизуемых компонентов, ингибиторов протеолитических ферментов и ряда других, менее значимых для питания компонентов. Поэтому применение ферментных препаратов в кормопроизводстве продиктовано необходимостью уменьшения или полным исключением влияния содержащихся в сырье антипитательных веществ на биологическую ценность рациона.</p>
<p>В качестве кормовых добавок традиционно в птицеводстве используются три группы ферментов: фитазы, протеазы, карбогидразы (ксиланазы, целлюлазы, галактозидазы, манназы, амилазы и пектиназы).</p>
<p>Ферменты, используемые в промышленных масштабах, обычно имеют микробное или грибковое происхождение. С момента первых публикаций<br />
Ф. Кликнера и Е. Фолуэлла (1926 г., цитировано по Швыдков А. Н., Мартышенко А. Е., Ланцева Н. Н.,. Чебаков В. П, Кобцева Л. А., 2014) об улучшении роста цыплят (и повышения яйценоскости кур за счет применения в комбикормах протезима) эффективное влияние ферментных добавок на такие производственные показатели как повышение продуктивности птицы и усвояемость корма доказана многочисленными обзорами, например (Adeola O., Cowieson A. J., 2011; Bed­ford M. R., Schulze H., 1998; Woyengo T. A., Nyachoti C. M., 2011). Поэтому для улучшения перевариваемости и питательности кормов<br />
в настоящее время ферментные добавки кормов в рационах животных используются повсеместно.</p>
<p>Помимо прямого улучшения гидролизуемости растительных добавок,<br />
и, как следствие, усвояемости корма, введение карбогидраз в промышленные рационы опосредованно может влиять и на состав микрофлоры ЖКТ птицы. Как было уже сказано выше, растительные полисахариды обладают пребиотическими эффектами, поскольку после ферментации они могут являться питательными веществами полезной микрофлоры. Так ферменты могут индуцировать заселение ЖКТ конкурентоспособными штаммами-пробионтами и осуществлять контроль над численностью условно-патогенной микрофлоры (Cheng G., Hao H., Xie S., Wang X., Dai M., Huang L., Yuan Z., 2014).</p>
<p>Дороговизна в обеспечении бройлеров кормами животного происхождения вызывает постоянную необходимость разработки кормов растительного типа<br />
и применения биотехнологических приемов его ресурсосберегающей переработки. Из-за этого в условиях промышленного птицеводства обогащение кормов ферментными препаратами на сегодня является обязательным условием.<br />
И роль ферментных (полиферментных) добавок для повышения перевариваемости и питательности кормов огромна. Например, введение в рецептуру рационов ферментных добавок препаратов фитазы в сочетании с β-манназой может приводить к увеличению веса бройлеров на 4,2 %, и к уменьшению такого показателя как FCR вплоть до 4,8 %.</p>
<p>Однако постоянно следует иметь ввиду множественные расхождения<br />
в количественных показателях эффективности использования комплексных ферментных добавок, зависящих от вида и источника белка, соотношения входящих в рацион бройлера компонентов, побочных реакций, генетических особенностей кросса и многих других (Cheng G., Hao H., Xie S., Wang X., Dai M., Huang L., Yuan Z., 2014).</p>
<p><strong>Антимикробные пептиды </strong></p>
<p>К числу антимикробных препаратов относятся и эндогенные антимикробные пептиды (АМП). Они представляют собой рибосомально синтезируемые молекулы и включают в себя 10–100 аминокислотных остатков. АМП различаются большим содержанием гидрофобных основных остатков лизина и аргинина, обладают амфифильными свойствами и проявляют активность против широко круга патогенов. Механизм прямого антимикробного действия, как правило, связан с нарушением целостности мембраны мишени, однако также и опосредован специфическим взаимодействием с поверхностными или внутриклеточными мишенями.</p>
<p>На сегодняшний день известно уже более 2600 представителей семейства АМП и их рекомбинантных аналогов (http://aps.unmc.edu/AP/main.php; (Fosge­rau K., Hoffmann T., 2015)). Их условно можно разделить на три группы: а) цистеин-содержащие пептиды, стабилизированные внутримолекулярными дисульфидными связями; б) линейные пептиды, содержащие в своем составе<br />
α-спиральные участки и в)линейные пептиды, обогащенные остатками определенных аминокислот.</p>
<p>Поскольку выработка популяционной устойчивости у бактерий к АМП занимает длительное время, с биологической точки зрения АМП являются эффективной альтернативой антибиотикам микробного происхождения. Поэтому большинство исследований связано с изучением действия АМП против патогенов, вызывающих инфекционные заболевания.</p>
<p>Однако в некоторых исследованиях были продемонстрированы промоторные ростовые свойства АМП и показано, что добавление АМП в корм продуктивных животных улучшает их сохранность, нормализует микрофлору<br />
и морфологию ЖКТ. Одним из примеров такого действия, т. е. использования АМП как альтернативной добавки, было применение в рационах промышленной птицы генноинженерного аналога цекропина А (1-11)-D-(12-37)-Asn-(CADN). Подобные результаты были также получены с еще одним химерным вариантом этого же класса пептидов – магаинином (Choi S. C., Ingale S. L., Kim J. S., Park Y. K., Kwon I. K., Chae B. J., 2013).</p>
<p>Иммуностимулирующая активность АМП была доказана группой ученых, которые на протяжении нескольких лет оценивали изменение роста промышленной птицы при ее выпаивании экстрактами лимфоидного органа желудков (<em>Sacculus rotundus</em>) кроликов и свиней (Wang D., Ma W., She R., Sun Q., Liu Y., Hu Y., Liu L., Yang Y., Peng K., 2009). При этом было показано, что использование природных пептидов в качестве кормовой добавки улучшает рост птиц<br />
и сопровождается увеличением количества интраэпителиальных Т-лимфоци­тов (популяция, попадающая из периферической крови в прослойку между базолатеральными мембранами эпителиальных клеток, играет важную роль<br />
в иммунной защите, осуществляемой слизистой тонкой кишки), тучных клеток и уровня IgA.</p>
<p>АМП, продуцируемые бактериями и угнетающие развитие родственных микроорганизмов получили название «бактериоцины».</p>
<h3><strong>1.2 МЕТОДЫ ПОЛНОГЕНОМНОГО СЕКВЕНИРОВАНИЯ БАКТЕРИЙ</strong></h3>
<p>Секвенирование целого генома является важным инструментом для картирования геномов новых организмов, разделения геномов известных организмов или сравнения геномов по нескольким образцам. Секвенирование целых бактериальных, вирусных и других микробных геномов важно для создания точных эталонных геномов, для идентификации и для других сравнительных геномных исследований.</p>
<p>В отличие от капиллярного секвенирования или подходов, основанных на ПЦР, секвенирование следующего поколения (NGS) позволяет исследователям секвенировать сотни организмов. В отличие от традиционных методов секвенирование микробного генома на основе NGS не зависит от трудоемких этапов клонирования, экономя время и упрощая рабочий процесс. NGS может идентифицировать низкочастотные варианты и перестройки генома, которые могут быть пропущены или являются слишком трудоемкими для идентификации<br />
с использованием других методов.</p>
<p>Полногеномное секвенирование бактерий <em>de novo</em> включает сборку генома без использования геномного референса, и часто используется для секвенирования новых микробных геномов. Современные секвенаторы обеспечивают точность считывания, длину и глубину считывания для получения высококачественных драфтов и полных сборок микробного генома.</p>
<p>Полногеномное ресеквенирование включает секвенирование всего генома бактерии, вируса или другого микроба и сравнение последовательности с известным драфтом. Генерирование быстрой и точной информации о последовательности микробного генома имеет решающее значение для выявления низкочастотных мутаций, поиска ключевых делеций и вставок, а также для обнаружения других генетических изменений среди штаммов микроорганизмов.</p>
<p>Система MiSeq (Illumina) наиболее удобная система для проведения целенаправленного ресеквенирования и секвенирования генома малого размера (www.illumina.com/miseq).</p>
<p>Основные особенности системы MiSeq:</p>
<p>• Исключительное качество данных, продемонстрированное по результатам рецензируемого научного сравнения.</p>
<p>• Прибор с простым и интуитивно-понятным рабочим процессом.</p>
<p>• Наименьшее время выполнения цикла. Самое быстрое секвенирование<br />
и обнаружение вариантов позволяет проводить срочные исследования.</p>
<p>• Обширный набор областей применения. Настраиваемая длина считывания и различные типы проточных кювет обеспечивают максимальную адаптируемость к широкому диапазону областей применения.</p>
<p>Система MiSeq предлагает первое комплексное решение для секвенирования, объединяя в одном приборе генерацию кластеров, амплификацию, секвенирование и анализ данных. Благодаря небольшой площади занимаемой поверхности – приблизительно 0,2 м<sup>2</sup> – система с легкостью вписывается буквально в любую лабораторную среду. В системе MiSeq используется секвенирование посредством технологии синтеза (SBS) от компании Illumina, наиболее широко используемой химической реакции секвенирования нового поколения.</p>
<p>На сегодняшний день существует более 750 публикаций о системе MiSeq, которая является идеальной платформой для проведения быстрого и экономичного генетического анализа. Исключительное качество данных. Химическая реакция на основе SBS от компании Illumina – это технология секвенирования нового поколения, которая получила наиболее широкое распространение. Исключительное качество данных достигается благодаря химической реакции на основе технологии SBS – запатентованного обратимого метода на основе нуклеотидов, прерывающих цепь, который выявляет одиночные основания по мере их встраивания в массивно параллельные цепи ДНК. Флуоресцентные красители нуклеотида, прерывающего цепь, визуализируются по мере добавления дНТФ с последующим расщеплением, что обеспечивает встраивание следующего основания. Благодаря наличию в каждом цикле всех четырех дНТФ, обратимо связанных с нуклеотидом, прерывающим цепь, естественная конкуренция сводит к минимуму систематическую ошибку встраивания. Распознавания оснований производятся непосредственно по измерениям интенсивности сигнала во время каждого цикла, что значительно снижает частоту возникновения серьезных ошибок по сравнению с другими технологиями (Junemann S. [et al.], 2013; Liu L. [et al.], 2012; Loman N. J. [et al.], 2012; Quail M. A. [et al.], 2012; Ravi R. K., Walton K., Khosroheidari M., 2018; Ross M. G. [et al.], 2013). Результатом является последовательное секвенирование оснований с высокой точностью, что фактически устраняет ошибки последовательности, зависящие от контекста, даже в пределах участков с повторяющейся последовательностью. Высочайшая производительность секвенирования Illumina обеспечивает получение данных без ошибок при проведении анализа наиболее чувствительных или сложных образцов.</p>
<p>Прибор с простым и интуитивнопонятным рабочим процессом. Управляющее программное обеспечение прибора системы MiSeq является простым<br />
и понятным. Интуитивно-понятный интерфейс на основе сенсорного экрана, автоматически настраиваемые картриджи с реактивами с функцией отслеживания RFID, возможность просматривать обучающие видео и следовать пошаговым инструкциям в каждом рабочем процессе секвенирования. Все системы MiSeq имеют возможность автономного проведения анализа данных и доступ<br />
к BaseSpace® – платформе для геномного анализа Illumina. Эта платформа предоставляет возможность выгрузки данных в реальном времени, простые инструменты для анализа данных, мониторинг цикла с подключением к сети Интернет и надежное решение для хранения с варьируемым размером. Пакет инструментов для анализа данных и растущий список приложений для BaseSpace от сторонних разработчиков дают исследователям возможность настраивать информационные системы индивидуально. Платформа BaseSpace обеспечивает также быстрый и простой обмен данными с коллегами или клиентами. Для получения более подробной информации посетите веб-сайт по адресу www.illumina.com/basespace. Малое время выполнения цикла, чтобы на получение результатов уходили не дни, а часы, система MiSeq в сочетании с быстрой подготовкой библиотеки с легкостью ускоряет время выполнения цикла. Подготовьте библиотеку секвенирования за 90 мин с помощью реактивов для подготовки Nextera®, а затем перейдите к автоматизированной клональной амплификации, секвенированию и распознаванию оснований, прошедших оценку качества, что на приборе MiSeq займет всего лишь 4 ч. Выравнивание последовательностей можно выполнить непосредственно на встроенном компьютере прибора с помощью программного обеспечения MiSeq Reporter или на платформе BaseSpace в течение 3 ч.</p>
<p>Революционный рабочий процесс системы MiSeq сокращает время выполнения цикла и позволяет проводить настольное секвенирование нового поколения. Образцы были подготовлены с помощью комплекта подготовки библиотеки Nextera XT. Секвенирование продолжительностью 4 ч включает в себя генерацию кластеров, секвенирование и распознавание оснований, прошедших оценку качества, со сканированием двух поверхностей для цикла с 1 × 36 пар оснований на системе MiSeq с программным обеспечением MiSeq Control v2.4.</p>
<p>Рабочий процесс включает следующие стадии:</p>
<ol>
<li>Подготовка библиотеки (добавление адаптеров для секвенирования<br />
и подготовка библиотек к секвенированию).</li>
<li>Секвенирование (перенос библиотек в проточную кювету и секвенирование).</li>
<li>Анализ данных (обработка данных/ добавление комментариев, составление отчета в приборе).</li>
<li>Получение окончательных результатов (интерпретация и составление отчета о биологическом контексте).</li>
</ol>
<p>Благодаря меньшему времени выполнения цикла и упрощенным рабочим процессам система MiSeq предлагает экономичную альтернативу капиллярному электрофорезу (КЭ) для таких областей применения, как целенаправленное ресеквенирование, проверка клонов и секвенирование ампликона (Nelson M. C., Morrison H. G., Benjamino J., SGrim. L., Graf J., 2014). Рабочие процессы анализа также оптимизированы для секвенирования генома малого размера, метагеномного анализа 16S рРНК, секвенирования РНК, секвенирования человеческого лейкоцитарного антигена (HLA), судебномедицинской экспертизы, преимплантационного генетического скрининга (ПГС) и преимплантационной генетической диагностики (ПГД), а также для областей применения с крайне сложной структурой, таких как TruSeq® Custom Amplicon и TruSeq Custom Enrichment (Frey K. G., Herrera-Galeano J. E., Redden C. L., Luu T. V., Servetas S. L., Matec­zun A. J., Mokashi V. P., Bishop-Lilly K. A., 2014). Настраиваемая длина считывания, различные типы проточных кювет и возможность выбора считывания одиночных или парных концевых фрагментов обеспечивают беспрецедентную адаптируемость, благодаря чему выходные данные соответствуют широкому ряду потребностей, возникающих в ходе экспериментов.</p>
<h3><strong>1.3 БАКТЕРИОЦИНЫ ‒ БЕЛКИ, ПОДАВЛЯЮЩИЕ ЖИЗНЕДЕЯТЕЛЬНОСТЬ КЛЕТОК<br />
ПАТОГЕННЫХ ШТАММОВ</strong></h3>
<p>В настоящее время антибиотикорезистентность является одним из основных глобальных вызовов, с которым столкнулось человечество. Трудность заключается в том, что в мире микроорганизмов все процессы изменчивости<br />
и отбора происходят чаще и проявляются быстрее, а значит, вновь созданный препарат для борьбы с инфекцией необязательно будет абсолютной панацеей (Zhao W., Wang B., Yu G., 2018).</p>
<p>Антибиотикорезистентность обусловлена различными факторами: микроорганизмы научились либо изменять ту мишень, на которую направлено действие антибиотика, либо разрушать антибиотик, производя соответствующие ферменты. В то же время большинство бактериоцинов воздействуют в основном на клеточную стенку бактерий. Поскольку изменить ее основные характеристики и выработать устойчивость микроорганизму не так-то просто. Поэтому резистентность к антимикробным пептидам если и возникает, то в редких случаях и зачастую является временной. В этом и заключается преимущество подобных веществ перед традиционными антибиотиками (Vieco-Saiz N., Belgu­esmia Y., Raspoet R., Auclair E., Gancel F., Kempf I., Drider D., 2019).</p>
<p>Бактериоцины (антимикробные пептиды) в определенном смысле также являются антибиотиками, но иного происхождения. Это синтезируемые на рибосомах короткие последовательности аминокислот, которые в силу своих физико-химических свойств эффективно воздействуют на микроорганизмы, подавляя их развитие. Поскольку способностью синтезировать такие пептиды обладают многие живые существа, она рассматривается как наиболее древний и универсальный механизм защиты организма от чужеродных агентов.</p>
<p>Бактериоцины отличаются от классических антибиотиков тремя основными свойствами: синтез бактериоцинов происходит на рибосомах, бактериоцины обладают специфическим спектром действия, каждый бактериоцин имеет свой собственный специализированный иммунный белок.</p>
<p>Бактериоцины представляют собой комплекс пептидов с молекулярной массой от 2 до 35 кДа, существенно отличающихся друг от друга по физико-химическим характеристикам и биологическим эффектам (Sultimova T. D., Zak­harov E. V., 2016). Выявлено, что на проявление антагонистической активности бактериоцинов, продуцируемых молочнокислыми бактериями, влияют температура, электрическое поле, рН, состав, консистенция среды, присутствие Ca<sup>2+</sup> и Mg<sup>2+</sup> и другие факторы (Kamarajan P., Hayami T., Matte B., Liu Y., Danciu T., Ramamoorthy A., Worden F., Kapila S., Kapila Y., Nisin Z. P., 2015; De Vuyst L., Leroy F., 2007). К числу общих свойств бактериоцинов относится их чувствительность к температуре, хотя это свойство также может варьировать в широких пределах. Некоторые разрушаются при температуре 48–50 С, другие кратковременно выдерживают температуру 60–70 С, а отдельные сохраняют активность даже при 100 С. Низин выдерживает кипячение до 120 С без потери активности. Бактериоцины чувствительны к воздействию протеаз и имеют различный молекулярный вес (30000–100000 Да). Белок бактериоцина связан с липополисахаридом клеточной оболочки, но только белковая часть молекулы обладает антибактериальной активностью (Oscariz J. C., Pissabarro A. G., 2011).</p>
<p>В настоящее время бактериоцины являются объектом изучения во многих странах. Исследования сосредоточены на свойствах новых бактериоцинов, выделенных у микроорганизмов разных таксономических групп (физико-хими­ческая характеристика, спектр антибактериального действия, механизмы взаимодействия с микробной клеткой и макроорганизмом, возможности практического применения и т. д.). Как правило, изучение сопровождается определением молекулярно-генетических особенностей штаммов-продуцентов. На основании полученных результатов проводится классификация вещества (Kuma­riya R., Garsa A. K., Rajput Y. S., Sood S. K., Akhtar N., Patel S., 2011). Стоит отметить, что система международной классификации бактериоцинов несовершенна, ее продолжают уточнять и дополнять, так же, как и основные критерии принадлежности бактериальной субстанции к группе бактериоцинов. Особый интерес вызывают пептидсодержащие бактериоцины, как правило, имеющие широкий спектр действия и обладающие регуляторным влиянием на макроорганизм. Установлено, что как пробиотические штаммы, так и многие из изученных клинических культур обладают бактериоцинпродуцирующей активностью. Скрининг новых безопасных штаммов-продуцентов бактериоцинов, выявление их прикладного потенциала (пробиотики, анибактериальные средства, консерванты биопрепаратов, пищевых продуктов и др.) и получение соответствующих бактериоцинов является весьма актуальным и перспективным.</p>
<p>Использование бактериоцинов является одним из активно разрабатываемых альтернативных подходов к консервированию продуктов питания. Как известно, бактериоцины тесно ассоциированы с пищевыми продуктами<br />
и имеют «GRAS» (Generally Recognized As Safe) статус, что определяет их как абсолютно безопасные для здоровья человека и животных (Taguchi S., Ooi T., Mizu­no K., Matsusaki H., 2015; Vijayakumar P. P., Muriana P. M., 2015). Кроме того, бактериоцины в отличие от антибиотиков полностью расщепляются<br />
в организме, и вероятность возникновения осложнений от бактериоцинов минимальна, а применение антибиотиков имеет для человека отрицательные последствия. Однако сферы применения известных форм бактериоцинов, как уже отмечалось, ограничены из-за низкой активности при нейтральных или щелочных значениях pH. Поэтому поиск бактериоцинов с улучшенными физико-химичес­кими свойствами и широким антимикробным спектром представляет большой интерес не только для пищевой промышленности, но и для фармацевтической при создании альтернативных антибиотиков, что является одной из самых актуальных проблем в области микробиологии и биотехнологии.</p>
<h4><strong><em>1.3.1 Классификация бактериоцинов</em></strong></h4>
<p>Существует универсальная классификация бактериоцинов. Она включает четыре группы, различающиеся структурой, физико-химическими свойствами, особенностями синтеза и секреции (Rea M. C., Ross R. P., Cotter P. D., Hill C., 2011). Однако четвертый класс, в который входили бактериоцины в виде крупных комплексов с углеводными или липидными фрагментами, стали называть бактериолизинами (состоят из лейконоцина S и лактоцина 27) (Gulluce M., Karadayi M., Baris O., 2013), был расформирован. Таким образом, бактериоцины исследователи разделяют на три класса: I, II, III (таблица 4) (Liu W., Pang H., Zhang H., Cai Y., 2014).</p>
<p><strong>Таблица 4 </strong>– Классификация бактериоцинов</p>
<p><img width="739" height="1315" class="wp-image-5190" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/image5.jpeg" alt="image5" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/image5.jpeg 739w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/image5-169x300.jpeg 169w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/image5-575x1024.jpeg 575w" sizes="(max-width: 739px) 100vw, 739px" /></p>
<p><em>1.3.1.1 Бактериоцины I класса</em></p>
<p>Обычно состоят из 19–50 аминокислот и обычно сильно посттрансляционно модифицированы.</p>
<p>В результате образуются нетипичные аминокислоты, такие как лантионин, β-метиллантионин, дегидробутирин, дегидроаланин и лабиринтин (Cuozzo S., Sesma F., 2001; Parada J. L., Caron C. R., Medeiros A. B. P., Soccol C. R., 2007).<br />
К этой группе относятся низины, образуемые <em>Lactococcus</em> (<em>Streptococcus</em>) <em>lactis</em>, эпидермин, галлидермин, продуцентом которого является <em>St. gallinarum</em>, а также субтилин (<em>B. subtilis</em>). Примером первого класса бактериоцинов является низин  лантибиотик, секретируемый бактериями <em>Lactococcus lactis</em>. Содержит<br />
34 остатка аминокислот (из них 30 остатков кислот – Lis, His, Asp, Ser, Pro, Gli, Ala, Val, Met, Ile, Leu), а также остатки редко встречающихся серосодержащих аминокислот: лантионина, -метиллантионина и ненасыщенных аминокислот дегидроаланина и -метилдегидроаланина. Низин обладает бактерицидным действием на грамположительные микроорганизмы: стрептококки различных серологических групп, стафилококки, пневмококки, микобактерии, споровые  аэробные и анаэробные бактерии. Обладая способностью адсорбироваться на поверхности спор чувствительных к нему спорообразующих микроорганизмов, низин нарушает проницаемость спор, снижает устойчивость спор к воздействию высоких температур. Из аэробных споровых бактерий рода <em>Bacillus</em> к низину наиболее чувствительны <em>B. stearothermophilus</em>, <em>B. coagulans</em>, <em>B. cereus</em>, вызызвающие порчу молочных продуктов. Также чувствительны к действию низина споровые анаэробы рода <em>Clostridium</em>.</p>
<p>Класс I подразделяют на три подкласса:</p>
<p><strong>Класс Ia</strong>, или лантибиотики, – низкомолекулярные катионные, гидрофобные, температуроустойчивые пептиды, в состав которых входят такие редкие тиоэфирные аминокислоты, как лантионин и -метиллантионин, дегидроаланин, дегидробутирин. Несколько тиоэфирных мостиков замещают дисульфидные связи и придают этим белковым соединениям некоторую полициклическую структуру. Низин является наиболее популярным бактериоцином класса Ia (Le Lay C., Dridi L., Bergeron M. G., Ouellette M., Fliss I., 2016).</p>
<p><strong>Класс Ib</strong> – лабиринтопептины.</p>
<p><strong>Класс Ic</strong> – сантибиотики (Cuozzo S., Sesma F., 2001).</p>
<p><em>1.3.1.2 Бактериоцины II класса</em></p>
<p>Большинство бактериоцинов относится ко II классу. Этот класс содержит небольшие термостабильные, немодифицированные, сохраняющие свою активность при широком диапазоне рН (3–9), слабо иммуногенные и нетоксичные для человека и животных (Dicks L. M. T., Balla E., Toit M., 2013; Oppegard, Rogne P., Emanuelsen L., Kristiansen P. E., Fimland G., Nissen-Meyer J., 2007). Бактериоцины II класса чаще всего синтезируются как препептиды, а затем без модификации их аминокислотных остатков, на стадии секреции из клетки продуцентов утрачивают свои лидирующие компоненты. Гены, необходимые для синтеза бактериоцинов II класса (регуляторные, гены, кодирующие препептид, обеспечивающие транспорт через мембрану и устойчивость бактерий к собственному антимикробному пептиду), располагаются в плазмидах или в хромосоме, а иногда в транспозоноподобных генетических модулях ДНК-содержа­щих бактериофагов (Farias R. N., Farias M. E., Holgado R., 2005). Бактериоцины II класса по химическому строению, способу выведения из клетки продуцента, спектру антимикробной активности разделяют на четыре подкласса: IIa, IIb, IIc, IId (Сультимова Т. Д. , 2006; Farias R. N., Farias M. E., Holgado R., 2005; Oscariz J. C., Pissabarro A. G., 2011).</p>
<p><strong>Класс IIa</strong> – педиоцинподобные бактериоцины. Бактериоцины подкласса IIa наиболее хорошо изучены (Drider D., Fimland G., Hechard Y., McMullen L. M., Prevost H., 2006). Во время экспорта через клеточную мембрану от молекулы их препептидов отрезается N-терминальная лидирующая последовательность<br />
с двумя глициновыми аминокислотными остатками на конце (Ермоленко Е. И., 2009). Педиоцинподобные бактериоцины имеют консенсусную последовательность YGNGV-C в N-конце.</p>
<p>После секреции из клетки эти бактериоцины представляют собой пептиды с молекулярной массой до 10 кДа, образующие, как правило, один дисульфидный мостик. После попадания в окружающую среду бактериоцины данного подкласса атакуют клетку-мишень за счет электростатического гидрофобного взаимодействия с последующим проникновением внутрь чувствительной клетки. Для специфического распознавания бактериоцином клетки-мишени необходимо присутствие на ее клеточной мембране маннозопротеиновых рецепторов, являющихся частью фосфотрансферазной системы. При помощи C-части пептиды проникают в мембрану и действуют на клетку-мишень, что определяет антибактериальную активность и специфичность бактериоцина. Показано, что степень проникновения зависит от заряда липосом, а также от расположения аминокислотных остатков в С-части молекулы бактериоцина. Бактериоцины IIa типа формируют ионоселективные поры в клетках-мишенях, вызывая выход из последних ионов калия, аминокислот и других низкомолекулярных веществ. Это приводит к изменению ионного баланса, уровня рН в клетке и последующей быстрой потере внутриклеточной АТФ (Ермоленко Е. И., 2009).</p>
<p><strong>Класс IIb</strong> – двупептидные бактериоцины, состоят из двух различных субъединиц или пептидов, действующих вместе или раздельно как синергисты (Farias R. N., Farias M. E., Holgado R., 2005; Kraus A., Peschel D., 2006; Osca­riz J. C., Pissabarro A. G., 2011). До настоящего времени, несмотря на способность проявлять антимикробную активность самостоятельно и расположение<br />
в различных генах, эти вещества не были выделены.</p>
<p><strong>Класс IIc</strong> – кольцевые бактериоцины. Примером является бактериоцин AS-48. Он является циклическим пептидом с молекулярной массой 7,2 кДа, представляет собой полипептидную цепь из 70 аминокислотных остатков, замкнутых в кольцо. Известно, что подобная молекула обладает высокой конформационной изменчивостью (Farias R. N., Farias M. E., Holgado R., 2005). Это свойство позволяет молекуле бактериоцина AS-48 связываться с поверхностными структурами широкого спектра бактерий.</p>
<p><strong>Класс IId</strong> – линейные, не относящиеся к педиоцино-подобным бактериоцинам (Belguesmia Y., Naghmouchi K., Chihib N.-E., Drider D., 2011; Drider D., Fimland G., Hechard Y., McMullen L. M., Prevost H., 2006; Oppegard C., Rogne P., Emanuelsen L., Kristiansen P. E., Fimland G., NissenMeyer J., 2007). Бактофенцин А является новым бактериоцином класса IId, обладает определенными уникальными функциями. Это положительно заряженный антимикробный пептид, имеет сходство с некоторыми эукариотическими катионными антимикробными пептидами (O&#8217;Connor P. M., O&#8217;Shea E. F., Cotter P. D., Hill C., Ross R. P., 2018; O&#8217;Shea E. F., O&#8217;Connor P. M., O&#8217;Sullivan O., Cotter P. D., Ross R. P., Hill C., 2013).</p>
<h5><em>1.3.1.3 Бактериоцины III класса</em></h5>
<p>Бактериоцины этого класса представляют собой крупные чувствительные к изменениям температуры белки с молекулярной массой более 30 кДа. Они способные разрушать муреин клеточной стенки. Колицин является одним из примеров бактериоцинов класса III, продуцируемых <em>E.coli.</em> К классу III бактериоцинов также относятся гельветицин М, гельветицин J и энтеролизин А, продуцируемые <em>Lactobacillus crispatus</em>, <em>Lactobacillus helveticus </em>и <em>E. faecalis</em>, соответственно (Nilsen T., Nes I. F., Holo H., 2003; Sun Z., Wang X., Zhang X., Wu H., Zou Y., Li P., Sun C., Xu W., Liu F., Wang D., 2018; Thompson J. K., Collins M. A., Mercer W. D., 1996). Гельветицин М эффективен против грамположительных<br />
и грамотрицательных бактерий (Sun Z., Wang X., Zhang X., Wu H., Zou Y., Li P., Sun C., Xu W., Liu F., Wang D., 2018).</p>
<p>Классификация бактериоцинов дает возможность систематизировать информацию о природе и механизмах действия соответствующих групп антимикробных пептидов. Это позволяет осуществлять подбор комбинаций антимикробных пептидов для лечения и профилактики различной инфекционной патологии (Ankaiah D., Palanichamy E., Antonyraj C. B., Ayyanna R., Perumal V., Ahamed S. B., Arul V., 2018).</p>
<h4><strong><em>1.3.2 Механизм действия бактериоцинов</em></strong></h4>
<p>Учитывая большое разнообразие химического строения бактериоцинов, можно предположить, что они воздействуют на жизненно важные функции чувствительных клеток, но большинство действуют, образуя в мембране поры или каналы, способствующие нарушению мембранного потенциала чувствительных клеток (Сультимова Т. Д., 2006; Surugau L. N., 2011). Анионные липиды цитоплазматической мембраны являются основными рецепторами бактериоцинов молочнокислых бактерий для стимуляции спорообразования.</p>
<p>Бактериоцины I класса могут вызывать формирование пор по типу клиноподобной модели, в то время как бактериоцины II класса способны функционировать, создавая поры, посредством которых пептиды располагаются параллельно мембранной поверхности и оказывают влияние на структуру мембран (Chatterjee M., Raichaudhuri A., 2017; Lopez-Lara I. M., Geiger O., 2017). Наиболее хорошо изучен механизм действия бактериоцинов на примере низина (рисунок 2).</p>
<p><img width="837" height="717" class="wp-image-5191" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-138.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-138.jpeg 837w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-138-300x257.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-138-768x658.jpeg 768w" sizes="(max-width: 837px) 100vw, 837px" alt="word image 138 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 2</strong> – Механизм действия бактериоцинов</p>
<p>При изучении действия низина стало ясно, что часть C-конца молекулы деполяризует цитоплазматическую мембрану, что ведет к мгновенной остановке синтеза компонентов клеточной стенки и всех биосинтетических процессов<br />
в клетке. Основной характер действия низина  это взаимодействие с отрицательно заряженными мембранами (билипидный слой), предпочтительно с мембранами, содержащими анионные липиды. Грамположительные бактерии имеют более высокие концентрации анионного липида в их цитоплазматической мембране по сравнению с грамотрицательными. Бактериоцин сначала связывает его C-конец с анионными липидами, после чего N-конец опускается в липид мембраны и пептид принимает параллельное положение на мембранной поверхности. И, в конечном счете, целый пептид имеет возможность переместиться по всей длине поры (Surugau L. N., 2011). Низин ингибирует синтез муреина клеточной стенки. В результате действия антибиотика происходит накопление промежуточного липида, с которым низин образует прочный комплекс, что и приводит к остановке дальнейшего синтеза пептидогликана бактериальной стенки. Низин может вызывать лизис клеток вследствие необратимой деструкции клеточной мембраны, которая регулирует осмотическое давление клетки. Он изменяет поверхностное натяжение цитоплазматической мембраны, что приводит к нарушению клеточной проницаемости и, как следствие этого,<br />
к бактериальному лизису.</p>
<p>Низин ингибирует синтез муреина клеточной стенки. В результате действия антибиотика происходит накопление промежуточного липида, с которым низин образует прочный комплекс, что и приводит к остановке дальнейшего синтеза пептидогликана бактериальной стенки. Низин может вызывать лизис клеток вследствие необратимой деструкции клеточной мембраны, которая регулирует осмотическое давление клетки. Он изменяет поверхностное натяжение цитоплазматической мембраны, что приводит к нарушению клеточной проницаемости и, как следствие этого, к бактериальному лизису.</p>
<h4><strong><em>1.3.3 Бактериальные штаммы – продуценты бактериоцинов</em></strong></h4>
<p>Известно, что многие микроорганизмы способны к синтезу бактериоцинов. Но наибольший интерес с точки зрения применения в качестве новых консер­вантов и антибактериальных препаратов представляют бактериоцины молочнокислых бактерий. Исследования в области изучения бакте риоцинов у молочнокислых бактерий начались в 1930-х гг. прошлого столетия с работы по низину, продуцентом которого были лактококки <em>L. lactis </em>subsp. <em>lactis</em> (Yanagida F., Chen Y., Shinohara T. J., 2005). К настоящему времени изучено и полностью охарактеризовано большое количество бактериоцинов, синтезируемых как грамположительными, так и грамотрицательными бактериями. Продуцирующие бактериоцин молочнокислые бактерии включают представителей разных родов: <em>Lactococcus</em>, <em>Lactobacillus</em>, <em>Leuconostoc</em>, <em>Pediococcus </em>и <em>Streptococcus</em>. Синтез бактериоцинов штаммоспецифичен. Наибольшее количество бактериоцинобразующих бактерий было выделено из молочных и мясных ферментированных продуктов, силоса, но ряд штаммов (<em>Enterococcus durans</em>, <em>Lactobacillus animalis</em>, <em>Leuconostoc </em>sp.) были выделены из почвенных образцов (Beasley S., Saris P., 2004). Имеются сведения, что штаммы <em>L. lactis </em>subsp.<em> lactis</em>, продуцирующие низин, были выделены из женского молока (Fimland G., Eijsink, Nissen&#8217;Meyer J., 2002).</p>
<p>Микроорганизмы – продуценты бактериоцинов – имеют систему защиты от своих собственных продуктов с помощью экспрессии генов иммунных белков. Чувствительность продуцента варьирует и зависит от уровня продукции бактериоцина (Willey M., van der Donk W., 2007). Иммунные белки проявляют значительную вариабельность: у практически одинаковых бактериоцинов могут быть абсолютно разные иммунные белки. Для низина известен NisI – белок<br />
с липопротеиновой сигнальной последовательностью, кодируемый геном nisI<br />
в опероне биосинтеза низина. Белок NisI прикрепляется к внешней поверхности мембраны клетки-продуцента, где связывает низин, уменьшая его локальную концентрацию (Mapelli C., Musatti A., Barbiroli A., Saini S., Bras J., Cavicchioli D., Rollini M., 2019).</p>
<p>В таблице 5 перечислены представители наиболее хорошо изученного<br />
и широко представленного класса II бактериоцинов и их продуцентов.</p>
<p>Скрининг бактериоцин-продуцирующих микроорганизмов в природных объектах является самым часто используемым методом получения новых продуцентов бактериоцинов. Молочнокислые бактерии широко распространены<br />
в природе: их можно обнаружить в почве, на разлагающихся остатках животного и растительного происхождения, в кишечнике позвоночных, в молоке и молочных продуктах. Вместе с растениями и пищей они попадают в желудочно-кишечные тракты человека и животных, составляя его микробиоту. В зависимости от источников разработаны и оптимизированы для использования различные системы скрининга бактериоцинов.</p>
<p><strong>Таблица 5 </strong>– Представители класса II бактериоцинов и их продуцентов</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td colspan="3">Бактериоцины Класса IIa</td>
</tr>
<tr>
<td>Бактериоцин</td>
<td>Продуцент</td>
<td>Ссылка</td>
</tr>
<tr>
<td>Сакацин A</p>
<p>Сакацин 674</p>
<p>Лактицин Q</p>
<p>Лактококцин А</p>
<p>Лактококцин 972</p>
<p>Лактококцин DR</p>
<p>Карнобактериоцин А</p>
<p>Карнобактериоцин В2</p>
<p>Курвацин А</p>
<p>Диверцин V41</p>
<p>Дивергицин</p>
<p>Лактококцин ММFII</p>
<p>Лейкоцин А</p>
<p>Мезентерицин Y105</p>
<p>Плантарицин 423</p>
<p>Педиоцин РА­1</p>
<p>Педиоцин АсН</p>
<p>Сакацин G</td>
<td><em>Lactobacillus sakei</em> Lb 706</p>
<p><em>L. sake</em> Lb764</p>
<p><em>Lactococcus lactis</em> QU 5</p>
<p><em>L. lactis</em> subsp. <em>cremoris</em> LMG 2130</p>
<p><em>L. lactis</em> subsp. <em>lactis</em> IPLA 972</p>
<p><em>L. lactis</em> subsp. <em>lactis</em> ADRIA 85L030</p>
<p><em>Carnobacterium piscicola</em> LV17A</p>
<p><em>C. piscicola</em> LV17</p>
<p><em>Lactobacillus curvatus</em> LTH1174</p>
<p><em>Carnobacterium divergens</em> М35</p>
<p><em>C. divergens</em> M35</p>
<p><em>L. lactis</em> MMFII</p>
<p><em>Leuconostoc gelidum</em> UAL 187</p>
<p><em>L. mesenteroides </em>Y105</p>
<p><em>Lactobacillus plantarum</em> 423</p>
<p><em>Pediococcus acidilactici</em> PAC 1.0</p>
<p><em>P. acidilactici</em> AcH</p>
<p><em>Lactobacillus sake</em> 2512</td>
<td>[134, 135]</p>
<p>[136]</p>
<p>[137]</p>
<p>[138]</p>
<p>[139]</p>
<p>[140]</p>
<p>[141]</p>
<p>[142]</p>
<p>[143]</p>
<p>[144]</p>
<p>[145]</p>
<p>[146]</p>
<p>[147]</p>
<p>[148]</p>
<p>[149]</p>
<p>[150]</p>
<p>[151]</p>
<p>[152]</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3">Бактериоцины Класса IIb</td>
</tr>
<tr>
<td>Лактококцин G</p>
<p>Лактококцин MN</p>
<p>Лактококцин Q</p>
<p>Плантарицин E/F</p>
<p>Плантарицин J/K</p>
<p>Плантарицин NC8</p>
<p>Лактацин F</p>
<p>Лактоцин 705</p>
<p>Термофилин 13</p>
<p>Лейкоцин Н</td>
<td><em>L. lactis</em> LMGT2081</p>
<p><em>L. lactis</em> 9B4</p>
<p><em>L. lactis</em> QU 4</p>
<p><em>Lactobacillus plantarum</em> C11</p>
<p><em>L. plantarum</em> C11</p>
<p><em>L. plantarum</em> NC8</p>
<p><em>Lactobacillus johnsonii</em> VPI11088</p>
<p><em>Lactobacillus casei</em> CRL 705</p>
<p><em>Streptococcus thermophilus</em> Sfi13</p>
<p><em>Leuconostoc</em> MF215B</td>
<td>[153]</p>
<p>[153]</p>
<p>[154]</p>
<p>[155]</p>
<p>[156]</p>
<p>[157]</p>
<p>[158]</p>
<p>[159]</p>
<p>[160]</p>
<p>[161]</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Приведем несколько примеров выделения продуцентов бактериоцинов из различных источников. Штамм <em>Leuconostoc gelidiumstain</em> UAL187 был выделен из упакованного мяса. Он синтезирует бактериоцин лейкоцин А, который активен против молочнокислых бактерий, <em>Listeria</em> и <em>E. faecalis</em>. Кодирующую последовательность лейкоцина А находится в плазмиде pLG7.6. Культуру растили,<br />
и лейкоцин выделяли из супернатанта культуры, получив 2,06 мг белка, и этот бактериоцин состоял из 37 аминокислот. Теоретическая молекулярная масса, рассчитанная по предполагаемой аминокислотной последовательности, составила 3932,3 Да, что на 2 Да больше, чем молекулярная масса, определенная из масс-спектрометрического анализа выделенного лейкоцина А. Уменьшение молекулярной массы объясняется потерей двух протонов при образовании дисульфидной связи между двумя остатками цистеина во время созревания белка (US20100129864 A1, 2010; US6403082 B1, 2002).</p>
<p>Штамм <em>Brochothrix campestris</em> ATCC 43754 был выделен из образца почвы. Этот штамм продуцирует бактериоцин брохоцин-С.</p>
<p>Последовательность, кодирующая брохоцин, была выделена из хромосомной ДНК. Бактериоцин проявлял активность в отношении возбудителя ботулизма <em>Clostridium botulinum</em> и широкого спектра грамположительных бактерий. Брохоцин-С был стабилен при 121 °С в течение 15 мин и инактивировался ферментативной обработкой (US20100129864 A1, 2010; US6403082 B1, 2002; Sira­gusa G. R., Cutter C. N., 1993).</p>
<p><em>E. faecium</em> 900 продуцирует энтероцин 900. Ген экспрессии белка находится на его хромосоме. Энтероцин состоит из 71 аминокислотных остатков и проявляет активность против широкого спектра грамположительных и грамотрицательных бактерий (US20100129864 A1, 2010; US6403082 B1, 2002; Franz C. M., Schillinger U., Holzapfel W. H., 1996).</p>
<p><em>Streptomyces scopuliridis</em> RB72 был выделен из почвы. Это грамположительная неспоровая неподвижная аэробная бактерия, продуцирующая бактерицидно-подобное вещество широкого спектра действия (BLIS RB72), которое убивает/ингибирует грамположительные и грамотрицательные бактерии. BLIS RB72 имеет молекулярную массу 27 кДа и демонстрирует остаточную активность при температуре от минус 20 до 60 °C и рН 3–9 и активен против бактерий при рН 7 (US20100286030 A1, 2010; Farris M. H., Duffy C., Findlay R. H., Olson J. B., 2011).</p>
<p><em>Bifidobacterium longum</em> DJO10A – это бактериальный штамм с пробиотическими свойствами, выделенный из человека. Эта бактерия продуцирует лантибиотик, который активен против грамположительных и грамотрицательных бактерий. Неочищенный лантибиотик, выделенный из культуры, способен выдержать при 100 °C в течение 10 мин и обработку трипсином – при 25 °C в течение 24 ч (US7960505 B2, 2011).</p>
<p><em>Lactobacillus casei</em> MRTL3 выделен из образцов сырого молока молочных ферм г. Харьяна, Индия. Оптимальная температура для культурального роста 38 °С. Бактериальный штамм <em>Lactobacillus casei</em> MRTL3 продуцирует бактериоцин, проявляющий стабильность при 100 °C в течение 5 мин, и активен<br />
в отношении грамположительных бактерий (<em>Staphylococcus aureus</em> ATCC 6538P, <em>S. Epidermidis</em> ATCC 12228, <em>Bacillus cereus</em> ATCC 11770, <em>L. monocytogenes</em> MTCC 657 и <em>L. innocua</em> ATCC 33090) и грамотрицательных бактерий (<em>Shigella flexneri</em> ATCC 9199, <em>Salmonella typhi</em> MTCC 733 и <em>Pseudomonas aeruginosa</em> ATCC 15442). Наряду с бактериоцином лактобациллы продуцирует гликолипиды, обладающие антимикробными свойствами (Sharma D., Singh Saha­ran B.). Штамм <em>Bacillus coagulans</em> был выделен из ризосферы. Максимальный рост этой бактерии был получен в среде MRS наряду с высокой продукцией бактериоцина. Очищенный бактериоцин имеет молекулярную массу 8 кДа. Концентрированный и лиофилизированный бактериоцин показал высокую антагонистическую активность против <em>S. aureus</em>, <em>P. aeruginosa</em>, <em>E.coli </em>и низкую активность в отношении <em>S. typhi</em>, <em>L. monocytogenes</em> и <em>C. perfringins</em> (Ranganath B. S., Sharmila T., Balasubramanyam B. V., 2015). Несмотря на то, что многие бактериоцин-продуцирующие бактерии были выделены из огромного разнообразия источников, ни один из них не был подготовлен для промышленного производства и не получил разрешения FDA для использования в пищевом производстве. Вновь выделенные бактериоцины-продуценты бактерий перечислены<br />
в таблице 6.</p>
<p><strong>Таблица 6 </strong>– Штаммы-продуценты бактериоцинов</p>
<p><img width="693" height="1412" class="wp-image-5192" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/image7.jpeg" alt="image7" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/image7.jpeg 693w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/image7-147x300.jpeg 147w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/image7-503x1024.jpeg 503w" sizes="(max-width: 693px) 100vw, 693px" /></p>
<h4><strong><em>1.3.4 Рекомбинантные бактериоцины</em></strong></h4>
<p>Принимая во внимание успешные примеры производства рекомбинантных белков с использованием бактерий и дрожжевых клеток, также изучено производство рекомбинантных бактериоцинов. Как правило, гетерологические системы экспрессии бактериоцинов ограничены бактериями и клетками дрожжей.</p>
<h5><em>1.3.4.1 Экспрессия в бактериальных клетках. </em></h5>
<p>Гетерологическая экспрессия трех различных бактериоцинов класса II (Sakacin P, Pediocin PA-1 и Piscicolin 61) была успешно проведена в <em>L. sake</em> Lb790 (pSAK20). Этот штамм-хозяин не имеет каких-либо нативных генов продукции бактериоцинов. Две плазмиды – pSAK20, содержащая ген бактериоцина для гетерологичной экспрессии, и производная плазмиды pLPV111, содержащая структурные гены и гены иммунитета для представляющего интерес бактериоцина, – были совместно экспрессированы. С использованием этой системы различные бактериоцины продуцировались на уровнях, равных или более высоких, чем уровни, полученные с соответствующими штаммами-продуцентами дикого типа. Антимикробную активность количественно выражали в арбитражных единицах (АU; из общепринятого англоязычного обозначения arbi­tration units, аналогичного аббревиатуре МПК – минимальная подавляющяя концентрация), отнесенных к 1 мл или 1 мг пробы. Максимальная активность бактериоцина, полученная в жидкой культуре, для Sakacin P, составила 24, Pediocin PA-1 – 32, а Piscicolin 61 – 3,9 kAU (1 кAU мл<sup>–1</sup> = 1000 AU/мл), что было выше, чем у соответствующего штамма дикого типа (Axelsson L., Katla T., Bjørnslett M., Eijsink V. G., Holck A., 1998). Бактериоцин энтероцин A (Ent A)<br />
и его иммунный белок Ent I (EntIA) из <em>E. faecium </em>T136 были клонированы для коэкспрессии сигнального пептида белка Usp45 в <em>L. lactis</em> MG1363. Три плазмиды pSIP409UAI, pSIP411UAI (индуцибельная) и pMGUAI (конститутивная) были сконструированы и трансформированы в <em>L. sakei</em> Lb790, <em>L. plantarum</em> NC8 и <em>L. casei</em> CECT475. Определяли экспрессию бактериоцина в супернатантах культуры (мкг/мг сухого веса клеток), антимикробную активность (BU/мг сухого веса клеток) и специфическую антимикробную активность (BU/мкг EntA). Было отмечено, что эти значения варьировались для всех трех штаммов-хозяинов и были выше в <em>L. casei</em> CECT475, который можно рассматривать как фабрику перспективных бактериальных клеток для гетерологичной экспрессии бактериоцина (Jiménez J. J., Diep D. B., Borrero J., Gútiez L., Arbulu S., Nes I. F., Herranz C., Cintas L. M., Hernández P. E., 2015). <em>L. mesentemides</em> Y105 продуцируют антилистериальный бактериоцин мезентерицин Y105. В нативном штамме бактериоцин экспрессировался в секреторном режиме с использованием специальной транспортной системы (DTS от dedicated transport system). Гетерологичная экспрессия мезентерицина Y105 была проведена в <em>E. coli</em> DH5α<em>,<br />
L. mesentroides </em>DSM 20484 и <em>L. lactis </em>штаммов IL1403 и RD230 как для DTS, так и для общего пути секреции (GSP от general secretion pathway). Гетерологическая экспрессия в <em>L. lactis</em> не удалась. В <em>E.coli</em> рекомбинантный белок был токсичным для клеток-хозяев, что приводило к лизису клеток. Однако секретируемый белок проявлял умеренную антагонистическую активность против <em>Listeria</em>. Плазмидная конструкция, содержащая как ген мезентерицина, так и его иммунный ген, а также три предполагаемых гена мезентрицина, которые участвуют<br />
в синтезе транспортной системы DTS, как было показано, экспрессирует рекомбинантный белок (Biet F., Berjeaud J. M., Worobo R. W., Cenatiempo Y., Fremaux C., 1998).</p>
<p><em>L. plantarum</em> ZJ316 экспрессирует бактериоцин плантарицин NC8. Он состоит из двух пептидов – PLNC8α и PLNC8β, гетерологически экспрессированных в <em>E. coli</em> BL21 (DE3). Рекомбинантные пептиды PLNC8α и PLNC8β экспрессировали в виде слитых белков His6-tag для легкой очистки с помощью аффинной хроматографии на колонке Ni<sup>2+</sup>. Для получения нативных N-кон­цевых рекомбинантных пептидов His-меченые белки расщепляли энтерокиназой и очищали с использованием Ni-NTA Sefinose<img src="https://s.w.org/images/core/emoji/13.1.0/72x72/2122.png" alt="™" class="wp-smiley" style="height: 1em; max-height: 1em;" /> ResinKit. По результатам электрофоретического анализа молекулярные массы рекомбинантных пептидов составляли 3,58 и 4 кДа, соответственно. Выходы чистых белков составили<br />
2–2,5 и 1,5–2 мг/л соответственно для PLNC8α и PLNC8β. Очищенные белки показали бактерицидную активность против возбудителя <em>Salmonella </em>spp. (Jiang H., Li P., Gu Q., 2016).</p>
<p><em>Geobacillus thermodenitrificans</em> NG-80-2 был выделен из образца глубинной поверхности нефтяного месторождения Даганг в Китае. Температура недр была около 50–60 °С. Как было показано, в образце обнаружены бактериоцины широкого спектра геобациллин I и II. Кодирующие последовательности геобациллина I и II были амплифицированы и гетерологически экспрессированы в клетки <em>E. coli</em> BL21 (DE3). Его меченые рекомбинантные белки были очищены, а их структуры определены. Геобациллин I проявлял активность против многих антибиотикорезистентных патогенных микроорганизмов в отличие от геобациллина II. Геобациллин I ингибирует бактерии подобно низину, а именно, он ингибирует синтез пептидогликана путем связывания с молекулой липида II в зависимости от дозы (US9326523 B2, 2016).</p>
<h5><em>1.3.4.2 Экспрессия в дрожжевых клетках</em></h5>
<p><em>L. plantarum</em> 423 содержит оперон, экспрессирующий бактериоцин. Этот оперон имеет четыре гена, первая открытая рамка считывания (ORF) включает plaA CDS, экспрессирующий плантарин 423. Вторая ORF имеет plaBen-кодирующий предполагаемый иммунный белок, PlaC и PlaD гены, идентичные оперону PA-1 педиоцина (PedC and PedD) и оперон, идентичный коагулину (CoaC и CaencoA). plaA кодирует пептид-предшественник длиною в 56 аминокислотных остатков, который состоит из зрелого белка (37 а.к.о.) и NH2-концевого лидерного пептида (19 а.к.о.). PlaA CDS был клонирован в челночный вектор для секреторной экспрессии (YEpPla423) в <em>S. cerevisiae</em> L5366 h. Секреторная экспрессия плантарицина 423 была подтверждена образованием зоны ингибирования над индикаторными пластинками <em>L. monocytogenes</em> LM1 (Van Reenen C. A., Chikindas M. L., Van Zyl W. H., Dicks L. M., 2003). Последовательность SEC-зависимого бактериоцина хирацина JM79 из <em>Enterococcus hirae</em> DCH5 была клонирована и экспрессирована в плазмиду PICZαA под промотором AOX1 и трансформирована в дрожжевой штамм Pichia pastoris X-33. Рекомбинантный дрожжевой клон X-33TH, содержащий плазмиду, секретировал биологически активный бактериоцин, как в минимальной среде с буферизованным метанолом (BMM), так и в среде с буферизованным комплексом метанола (BMMY). Продукция белка достигала своего максимума через 6 ч, концентрация составляла 6,57 мкг/мг CDW и 2,75 мкг/мг CDW в BMM и BMMY, соответственно (Sánchez J., Borrero J., Gómez-Sala B., Basanta A., Herranz C., Cintas L. M., Hernández P. E., 2008).</p>
<p>Ген энтероцина A (EntA) из <em>E. faecium </em>T136 клонировали в разные плазмиды дрожжей для секреторной экспрессии в <em>P. pastoris</em>, <em>Kluyveromyces lactis</em>, <em>Hansenula polymorpha</em> и <em>Arxula adeninivorans</em>. Самая высокая экспрессия энтероцина А достигается в <em>P. pastoris</em> X-33EA, <em>K. lactis</em> GG799EA и <em>H. polymorpha</em> KL8-1EA, что соответственно в 30, 7 и 3,2 раз выше, чем у нативного штамма. В аналогичных линиях антимикробная активность супернатантов из <em>C. pastoris</em> and <em>K. lactis </em>была в 432 и 59 раз выше, чем у нативного штамма. Антимикробная активность <em>H. polymorpha</em> и <em>A. adeninivorans</em> составила, соответственно, 85 и 19 % от активности нативного штамма. Специфическая антимикробная активность <em>С. pastoris</em> и <em>K. LACTIS</em> были в 14,4 и 8,4 раза выше, чем у <em>E. faecium</em> (Borrero J., Kunze G., Jiménez J. J., Böer E., Gútiez L., Herranz C., Cintas L. M., Hernández P. E., 2012).</p>
<p>Белки бактериоцина широкого спектра действия из различных бактерий SRCAM602, OR-7, E-760 и L-1077 были отобраны для секреторной экспрессии в <em>P. pastoris</em>. Оптимизированные по кодонам синтетические гены были клонированы в pPICZαA для секреторной экспрессии in <em>P. pastoris </em>X-33. Рекомбинантные белки из супернатанта не проявляли какой-либо антимикробной активности. Очищенные белки проявили свою антимикробную активность только после гидрофобной хроматографии. Масс-спектрометрический анализ очищенного белка показал более высокую молекулярную массу, чем ожидалось, из-за присутствия дополнительных посттрансляционных модификаций нативных дрожжей (Arbulu S., Jiménez J. J., Gútiez L., Cintas L. M., Herranz C., Hernández P. E., 2015).</p>
<p>Ген PedA, продуцирующий педиоцин, был клонирован в эписомальной плазмиды под сигнальную последовательность α-фактора для секреторной экспрессии в <em>S. сerevisiae</em> Y294. Рекомбинантный белок присутствовал в супернатанте культуры с молекулярной массой 4,6 кДа. Было обнаружено, что уровень гетерологичной экспрессии бактериоцина является низким, но он проявляет значительную антимикробную активность на <em>L. monocytogenes</em> B73. Рекомбинантный штамм дрожжей одновременно производил спирт во время брожения пива и вина, но также выделял бактериоцины. Эти секретированные бактериоцины могут ингибировать рост бактерий, вызывающих порчу пива и вина (Schoeman H., Vivier M. A., Dutoit M., Dicks L. M. T., Pretorius I. S., 1999).</p>
<p>Ген PedA, экспрессирующий бактериоцин педиоцин PА-1 из <em>P. acidilactici</em>, клонировали в плазмиду pPICZαA для секреторной экспрессии in <em>P. pastoris</em> штаммов X-33, GS115 и KM71H. Ферментация при встряхивании в шейере<br />
в рекомбинантных штаммах позволяла получить белков концентрацией<br />
74 мкг/мл без антимикробной активности. Вестерн-блот анализ показал наличие трех разных изоформ белков с молекулярной массой 7–8, 11 и 20 кДа, которые выше, чем у природного педиоцина PA-1 (4,6 кДа). Анализ рекомбинантного белка путем изоэлектрического фокусирования, секвенирования белка<br />
и расщепления коллагеназой показал, что белок ведет себя подобно коллагену<br />
и образует четные волокна. Причину такого специфического поведения рекомбинантного педиоцина еще предстоит выяснить (Beaulieu L., Groleau D., Miguez C. B., Jette J. F., Aomari H., Subirade M., 1999).</p>
<p>Продукция рекомбинантных бактериоцинов методом гетерологической экспрессии является относительно низкой и иногда приводит к низкой или даже к отсутствию антимикробной активности. Удивительно, что в хорошо зарекомендовавших себя платформах экспрессии дрожжевого белка, таких как <em>P. pastoris</em>, экспрессия рекомбинантного белка была очень низкой или бесполезно продуцировала инактивированные белки. Необходимо разрабатывать более сложные стратегии для повышения уровня экспрессии и антимикробной активности.</p>
<p><em>Промышленное применение бактериоцинов</em></p>
<p>Применение бактериоцинов преимущественно сосредоточено в пищевой промышленности. В связи с увеличением количества вновь открытых бактериоцинов, спектр их применения может быть расширен и в таких областях, как садоводство, биомедицина и личная гигиена. Последние 10-летние отчеты<br />
о применении бактериоцина в различных областях кратко изложены ниже.</p>
<p>Например, штамм <em>L. plantarum </em>subsp. <em>plantarum</em> Zhang-LL (CGMCC<br />
№ 6936) был выделен из бекона (г. Фуцзянь, Китай). Эта бактерия продуцирует бактериоцин, который может подавлять рост <em>L. monocytogenes</em>, проявляет высокую термостабильность, а также стабильность в кислотных и основных pH. И в то же время расщепляется пищеварительным соком и ферментами в желудке человека, что делает его идеальным пищевым биоконсервантом. Композиция, содержащая и бактериоцин из штамма Zhang-LL и низин, показала синергизм действия этих веществ (Hongxing L., Astrøm A. N., List T., Nilsson I. M., Johans­son A., 2016; Zhang, Hongxing, Liu, Hui, Bai, Yongqiang, Xu, Hongyuan, Duan, Huixia, Hao, Yanfang, Xie, Yuanhong, Jin, Junhua, Xiong, Lixia, Gao, Xiuzhi, 2015).</p>
<p>Кукурузная мезга используется для производства биоэтанола. Такие лактобактерии, как <em>Lactobacillus</em>, <em>Lactococcus</em>, <em>Weissella</em>, <em>Leuconostoc</em>, <em>Pediococcus</em><br />
и <em>Enterococcus</em> бактерии, загрязняют мезгу, способствуя преобразованию крахмала в молочную и укусную кислоты, тем самым снижают продуктивность процесса и выход биоэтанола. Не молочнокислые бактерии, такие как <em>Streptococcus</em>, <em>Staphylococcus</em>, <em>Bacillus</em> и <em>Clostridium</em> являются общезагрязняющими микроорганизмами, которые влияют на общую эффективность ферментации. Для преодоления проблемы загрязнения бактериями, из кукурузной мезги был выделен бактериоцин-продуцирующий штамм <em>L. plantarum</em> GP15. Он производит бактериоцин GP15-cin широкого спектра действия. Использование GP15-cin уменьшило общее микробное загрязнение кукурузной мезги на 99,9999 %<br />
(&gt; 800 000 раз) в течение 2 ч, что значительно снижало уровень производства молочной кислоты и уксусной кислоты в процессе ферментации этанола.</p>
<p>LferInf – бактериофаг широкого спектра действия, обладающий антагонистической способностью против как кисломолочных, так и не кисломолочных бактерий. Состав, содержащий 1 % бактериофага LferInf и GP15-cin, при различных концентрациях патогенов способствовал снижению роста заражения бактериями до 0 в течение 25 мин, повышая при этом эффективность биоэтанольного брожения (US20140148379 A1, 2014; US20150320829 A1, 2015).</p>
<p>В рецептуре хлеба при добавлении 20 % штамма <em>P. pentosaceus</em> KTU05-9<br />
к закваске, данный штамм <em>Pediococcus</em> продуцирует органические кислоты<br />
и бактериоцины, которые ингибируют рост <em>B. subtilis</em>, придают вязкости хлебу и продлевают срок годности хлеба до 6 дней. Микробиотическая смесь, содержащая <em>P. acidilactici</em> KTU05-7, <em>P. pentosaceus</em> KTU05-8 и KTU05–10, распыленная на поверхности упакованного хлеба, ингибирует рост грибков и сохраняет его свежим в течение 8 дней (Cizeikiene D., Juodeikeine G., Paskevicius A., Bartkiene E., 2013).</p>
<p>Бактериоцины являются промышленно привлекательными веществами из-за их большого потенциала в качестве натуральных консервантов в пищевой, кормовой и косметической промышленностях. До сих пор низин является единственным бактериоцином, который был одобрен для применений в пищевой промышленности. Низин преимущественно используется в консервировании мяса и мясопродуктов, морепродуктов и овощей. Рынок низина в Азиатско-Тихоокеанском регионе быстро растет, за ним следует рынок Европы и Северной Америки. Ожидается, что к 2020 г. мировой рынок низина достигнет<br />
545,5 млн долл., годовой темп роста (CAGR) в период 2015–2020 гг. составил 4,3 % (http://www.marketsandmarkets.com/PressReleases/nisin.asp).</p>
<p>Учитывая растущий спрос и низкую производительность низина (до<br />
9960 IU/mL), необходимо применить меры для увеличения эффективности производства низина и снижения его себестоимости.</p>
<p>Для производства низина используют негенномодифицированные лактобактерии, с помощью мутагенеза целых клеток возможно получение высокопроизводительных штаммов. Разнообразные физические мутагены (γ-лучи<br />
и излучение плазмы), химические мутагены (этилметилсульфат, алкилирующие агенты) и адаптационная эволюция может быть использована для создания негенномодифицированные лактобактерии (Juturu V., Wu J. C., 2018).</p>
<h4><strong><em>1.3.5 Бактериоцины, имеющие статус в международной системе безопасности микроорганизмов</em></strong></h4>
<p>Несмотря на значительное количество недавно открытых бактериоцин-продуцирующих бактерий широкого спектра действия, получить утверждение от правительственных агентств для их промышленного применение не удается. Учитывая открытие новых бактериоцинов с новыми свойствами, следует исследовать их применение в таких областях, как корма для животных, органические удобрения и охрана окружающей среды, а также в продуктах личной гигиены.</p>
<p>Бактериоцин низин ‒ единственный из бактериоцинов, с 1998 г. имеющий cтатус GRAS (Generally Recognized As Safe) и разрешенный для использования в качестве пищевой добавки (код Е234) (European Parliament. EC 248/97, 1997).</p>
<p>В результате широкого использования молочнокислых бактерий в традиционных ферментированных продуктах большая их часть считается безопасной согласно международной системе безопасности микроорганизмов (Generally Recognized As Safe, GRAS), предоставленной Американским агентством по контролю за продуктами и лекарствами (FDA). Европейский орган по безопасности пищевых продуктов (EFSA) также предоставил статус «Квалифицированная презумпция безопасности» (QPS) большинству родов молочнокислых бактерий, таким как <em>Lactococcus</em>, <em>Lactobacillus</em>, <em>Leuconostoc</em>, <em>Pediococcus</em> и некоторые виды <em>Streptococcus</em> (Question № EFSA-Q-2005-293) // EFSA J., 2007). Тем не менее, виды рода <em>Enterococcus</em> и некоторые виды <em>Streptococcus</em> являются патогенными, поэтому они не имеют статуса GRAS и не были предложены для статуса QPS (EFSA, 2007).</p>
<p>В целом, согласно GRAS, пробиотики признаны полностью безопасными, поскольку они достаточно хорошо переносятся человеческим организмом. Безопасным штаммом, имеющим статус GRAS, признаны бифидобактерии <em>B. lactis</em> BB12, они одобрены к применению Управлением по контролю за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (Food and Drug Administration, FDA). Клетки стрептококков <em>S. thermophilus</em> TH4 также признаны FDA безопасным штаммом с присвоением статуса GRAS.</p>
<h2><strong>2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ</strong></h2>
<h3><strong>2.1 ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ</strong></h3>
<h4><strong><em>2.1.1 Протокол для фрагментации дцДНК и приготовления NSG-библиотек из 5–500 нг очищенной дцДНК</em></strong></h4>
<p>Исходный материал: 5–500 нг очищенной дцДНК (например, бактериальной геномной ДНК или геномной ДНК человека).</p>
<p><em>2.1.1.1 Фрагментация дцДНК</em></p>
<p>В ПЦР-пробирку на льду внести следующие компоненты:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Компонент</td>
<td>Объем, мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>10x SD-буфер</td>
<td>2,5</td>
</tr>
<tr>
<td>MgCl<sub>2 </sub> (50 мМ)</td>
<td>1,75</td>
</tr>
<tr>
<td>дцДНК (50–500 нг)</td>
<td>1–5</td>
</tr>
<tr>
<td>Смесь ферментов для фрагментации (SDpol+ДНКаза I)</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>ddH<sub>2</sub>O</td>
<td>До 25</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Инкубировали в ПЦР-амплификаторе в следующем режиме:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Температура, <sup>о</sup>С</td>
<td>Время</td>
</tr>
<tr>
<td>30</td>
<td>10–60 мин</td>
</tr>
<tr>
<td>70</td>
<td>20 мин</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><em>2.1.1.2 Лигирование индексированных вилочковых адаптеров<br />
с фрагментированной ДНК</em></p>
<p>Добавить следующие компоненты в пробирку с фрагментированной ДНК и перемешать встряхиванием.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Компонент</td>
<td>Объем, мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>Фрагментированная дцДНК</td>
<td>25</td>
</tr>
<tr>
<td>10x T4 лигазный буфер</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Индексированные вилочковые адаптеры* (12,5 мкM)</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>ddH<sub>2</sub>O</td>
<td>16</td>
</tr>
<tr>
<td>T4 ДНК-лигаза (5 Ед/мкл)</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Примечание: * В наборе используются индексированные адаптеры Illumina.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Инкубировать лигазную смесь (50 мкл) в течение 20 мин при комнатной температуре. После инкубации развести лигазную смесь 0,1х ТЕ-буфером до конечного объема 100 мкл. Образцы на этом этапе можно заморозить для хранения при минус 20 °C.</p>
<p>Набор содержит следующие адаптеры Illumina:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><strong>№</strong></td>
<td>Индекс Illumina</td>
<td>Структура</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>Universal</td>
<td>5’AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T</td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>Index 2</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>CGATGT</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>Index 3</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>TTAGGC</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>Index 4</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>TGACCA</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>Index 5</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>ACAGTG</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>Index 6</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>GCCAAT</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>Index 9</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>GATCAG</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>8</td>
<td>Index 10</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>TAGCTT</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>9</td>
<td>Index 11</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>GGCTAC</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>Index 12</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>CTTGTA</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>11</td>
<td>Index 14</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>AGTTCC</strong>GTATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>12</td>
<td>Index 15</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>ATGTCA</strong>GAATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>13</td>
<td>Index 16</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>CCGTCC</strong>CGATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<h5><em>2.1.1.3 Очистка ДНК, лигированной с адаптерами</em></h5>
<p>Необходимо дать шарикам AMPure XP прогреться до комнатной температуры не менее 30 мин перед использованием. Для ресуспендирования встряхнуть шарики AMPure XP на вортексе.</p>
<p>Добавить 80 мкл (0,8X) ресуспендированных шариков к реакции лигирования адаптеров. Хорошо перемешать пипетированием по меньшей мере 10 раз. Манипуляции следует проводить осторожно, чтобы исключить всю жидкость из наконечника во время последнего смешивания. Также можно использоваться смешивание на вортексе в течение 3–5 с. Если после центрифугирования образцы центрифугируются, необходимо остановить центрифугирование до того, как шарики начнут оседать.</p>
<p>Инкубировать образцы на столе не менее 5 мин при комнатной температуре.</p>
<p>Чтобы отделить шарики от супернатанта, планшет/пробирки помещают на соответствующую магнитную подставку. При необходимости образец центрифугируют, чтобы собрать жидкость со стенок лунки пробирки или планшета перед постановкой на магнитную подставку.</p>
<p>Через 5 мин (или когда раствор станет прозрачным) осторожно удаляют супернатант. Это действие надо проводить осторожно, чтобы не потревожить шарики, содержащие целевую ДНК.</p>
<p>Добавить 200 мкл 80%-го свежеприготовленного этанола в пробирку/план­шет, находящиеся в магнитной подставке. Инкубируют при комнатной температуре в течение 30 с, а затем осторожно удаляют и отбрасывают супернатант.</p>
<p>Повторяют эту стадию промывки один раз, чтобы получить в итоге две стадии промывки. Обязательно удалить всю видимую жидкость после второй промывки. При необходимости, кратковременно центрифугируйте пробирку/планшет, поместите обратно на магнит и удалите следы этанола с помощью автоматического дозатора на 20 мкл. Это действие надо проводить осторожно, чтобы не потревожить шарики, содержащие целевую ДНК.</p>
<p>Высушить шарики на воздухе до 5 мин, пока пробирка/планшет находятся на магнитной подставке с открытой крышкой.</p>
<p>Внимание: важно не пересушивать шарики. Это может привести к снижению выделения ДНК-мишени. Образцы следует элюировать, когда шарики остаются темно-коричневого цвета и выглядят блестящими, но когда вся видимая жидкость испарилась. Когда шарики становятся светло-коричневыми,<br />
и их поверхность начинает покрываться трещинами, они являются уже пересушенными.</p>
<p>Снимите пробирку/планшет с магнитной подставки. Элюируйте ДНК-мишень с шариков, добавляя 22–23 мкл 10 мМ Трис-HCl или 0,1X TE. Хорошо перемешайте суспензию пипетированием 10 раз или встряхиванием на вортексе. Инкубируйте суспензию не менее 2 мин при комнатной температуре. При необходимости шарики можно центрифугировать в течение короткого времени, чтобы собрать жидкость со стенок пробирки или лунок планшета, прежде чем поставить их обратно на магнитную подставку.</p>
<p>Поместите пробирку/планшет на магнитную подставку. Через 5 мин (или когда раствор станет прозрачным), перенести 20 мкл в новую ПЦР-пробирку для амплификации.</p>
<p>Примечание: образцы можно хранить при минус 20 °C.</p>
<h5><em>2.1.1.4 ПЦР-амплификация лигированной ДНК адаптера</em></h5>
<p>Добавить следующие компоненты в новую ПЦР-пробирку:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Компонент</td>
<td>Объем, мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>ДНК, лигированная с адаптерами</td>
<td>20</td>
</tr>
<tr>
<td>Смесь праймеров для ПЦР* (20 мкM (по 10 мкМ каждого праймера)</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>10x SD-буфер</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>MgCl<sub>2 </sub> (50 мM)</td>
<td>3,5</td>
</tr>
<tr>
<td>Смесь ферментов для амплификации (20 Ед/мкл)</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>ddH<sub>2</sub>O</td>
<td>16,5</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Примечание: *ПЦР-праймеры – P5.2_PCR 5’ AATGATACGGCGACCACCGA 3’, P7.1_PCR 5’ CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT 3’.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Смешать компоненты быстрым встряхиванием на вортексе и сбросить капли центрифугированием. Поместить пробирку в термоциклер и провести ПЦР-амплификации с использованием следующих условий циклов:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Температура, <sup>о</sup>С</td>
<td>Время, с</td>
<td>Циклы</td>
</tr>
<tr>
<td>94</td>
<td>120</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>95</td>
<td>20</td>
<td rowspan="3">5–12**</td>
</tr>
<tr>
<td>62</td>
<td>20</td>
</tr>
<tr>
<td>68</td>
<td>45</td>
</tr>
<tr>
<td>68</td>
<td>45</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>∞</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3">Примечание: ** количество циклов ПЦР следует выбирать, исходя из количества введенной ДНК.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Число циклов должно быть достаточно большим, чтобы обеспечить достаточное количество фрагментов библиотеки для успешного секвенирования, но также должно быть достаточно низким, чтобы избежать появления артефактов вследствие ПЦР и избыточной амплификации (появления высокомолекулярных фрагментов на Биоаналайзере). Рекомендованное количество циклов ПЦР приведено ниже. Его можно использовать в качестве отправной точки для определения числа циклов ПЦР, наилучшего для приготовления образцов библиотек ДНК.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Количество исходной ДНК, нг</td>
<td>Число циклов ПЦР, требуемое для выхода<br />
библиотеки примерно 250–500 нг</td>
</tr>
<tr>
<td>≥ 250</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>200</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>100</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>40–50</td>
<td>8–9</td>
</tr>
<tr>
<td>20</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>11</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>12</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<h5><em>2.1.1.5 Очистка ПЦР-реакции</em></h5>
<p>Необходимо дать шарикам AMPure XP прогреться до комнатной температуры не менее 30 мин перед использованием. Для ресуспендирования встряхнуть шарики AMPure XP на вортексе.</p>
<p>Добавить 45 мкл (0,9X) ресуспендированных шариков к ПЦР-реакции. Хорошо перемешать с пипетированием по меньшей мере 10 раз. Манипуляции следует проводить осторожно, чтобы исключить всю жидкость из наконечника во время последнего смешивания. Также можно использоваться смешивание на вортексе в течение 3–5 с. Если после центрифугирования образцы центрифугируются, необходимо остановить центрифугирование до того, как шарики начнут оседать.</p>
<p>Инкубировать образцы на столе не менее 5 мин при комнатной температуре.</p>
<p>Чтобы отделить шарики от супернатанта, планшет/пробирки помещают на соответствующую магнитную подставку. При необходимости образец центрифугируют, чтобы собрать жидкость со стенок лунки пробирки или планшета перед постановкой на магнитную подставку.</p>
<p>Через 5 мин (или когда раствор станет прозрачным) осторожно удаляют супернатант. Это действие надо проводить осторожно, чтобы не потревожить шарики, содержащие целевую ДНК.</p>
<p>Добавить 200 мкл 80%-го свежеприготовленного этанола в пробирку/план­шет, находящиеся в магнитной подставке. Инкубируют при комнатной температуре в течение 30 с, а затем осторожно удаляют и отбрасывают супернатант.</p>
<p>Повторяют эту стадию промывки один раз, чтобы получить в итоге две стадии промывки. Обязательно удалить всю видимую жидкость после второй промывки. При необходимости, кратковременно центрифугируйте пробирку/планшет, поместите обратно на магнит и удалите следы этанола с помощью автоматического дозатора на 20 мкл. Это действие надо проводить осторожно, чтобы не потревожить шарики, содержащие целевую ДНК.</p>
<p>Высушить шарики на воздухе до 5 мин, пока пробирка/планшет находятся на магнитной подставке с открытой крышкой.</p>
<p>Внимание: важно не пересушивать шарики. Это может привести к снижению выделения ДНК-мишени. Образцы следует элюировать, когда шарики остаются темно-коричневого цвета и выглядят блестящими, но когда вся видимая жидкость испарилась. Когда шарики становятся светло-коричневыми,<br />
и их поверхность начинает покрываться трещинами, они являются уже пересушенными.</p>
<p>Снимите пробирку/планшет с магнитной подставки. Элюируйте ДНК-мишень с шариков, добавляя 32–33 мкл 0,1X TE. Хорошо перемешайте суспензию пипетированием 10 раз или встряхиванием на вортексе. Инкубируйте суспензию не менее 2 мин при комнатной температуре. При необходимости шарики можно центрифугировать в течение короткого времени, чтобы собрать жидкость со стенок пробирки или лунок планшета, прежде чем поставить их обратно на магнитную подставку.</p>
<p>Поместите пробирку/планшет на магнитную подставку. Через 5 мин (или когда раствор станет прозрачным), перенести 30 мкл в новую ПЦР-пробирку для хранения при минус 20 °C.</p>
<p>Далее необходимо проверить распределение фрагментов библиотеки (например, с использованием Agilent Bioanalyzer High Sensitivity DNA chip).</p>
<h4><strong><em>2.1.2 Измерение концентрации ДНК с помощью  PicoGreen dsDNA Assay Kit</em></strong></h4>
<p>В ходе работы не следует использовать для раствора стеклянную посуду.</p>
<p><em>Подготовка красителя:</em></p>
<p>Перед началом работы следует дать реагенту Quant-iT<img src="https://s.w.org/images/core/emoji/13.1.0/72x72/2122.png" alt="™" class="wp-smiley" style="height: 1em; max-height: 1em;" /> PicoGreen® нагреться до комнатной температуры, прежде чем открывать пробирку с ним. Для наилучшего результата раствор необходимо использовать в течение нескольких часов после приготовления. Приготовленный раствор с красителем следует защищать от света (помещая его в темное место или накрывая фольгой).</p>
<ol>
<li>Проверить корректность установки даты и времени в приборе (Set­tings → «Instrument settings» → «Date/Time»). При необходимости установить верные значения.</li>
<li>В чистую 15-миллилитровую пробирку внести 1005 мкл 20х TE буфера.</li>
<li>Добавить в пробирку 19095 мкл Н<sub>2</sub>О.</li>
<li>Добавить к нему 101 мкл красителя.</li>
<li>Тщательно перемешать.</li>
<li>Приготовить контрольную ДНК для построения кривой (0 и 100 нг<br />
в 5 мкл):</p>
<ol>
<li>внести в пробирку на 0,2 мл 8 мкл 1хТЕ буфера;</li>
<li>добавить 2 мкл контрольной ДНК из набора (100нг/мкл). Хорошо перемешать пипетированием;</li>
<li>подготовить две оптически прозрачные пробирки на 0,5 мл;</li>
<li>одну подписать как К1, другую – К2;</li>
<li>в К1 внести 200 мкл раствора для измерения концентрации;</li>
<li>в К2 внести 195 мкл раствора для измерения и 5 мкл разведенной контрольной ДНК (из шага b);</li>
</ol>
</li>
<li>Раскапать по 195 мкл в оптически прозрачные пробирки на 0,5 мл.</li>
<li>Внести в каждую пробирку по 5 мкл соответствующей коровьей ДНК.</li>
<li>Внести в пробирку К1 5 мкл раствора ДНК второго разведения<br />
(38 + 2 мкл).</li>
<li>Внести в пробирку К2 5 мкл раствора ДНК первого разведения<br />
(8 + 2 мкл).</li>
<li>Включить прибор, подключить его к компьютеру.</li>
<li>Выбрать на первом экране программу PicoGreen.</li>
<li>Произвести измерения.</li>
</ol>
<h4><strong><em>2.1.3 Подготовка библиотеки к нанесению в картридж</em></strong></h4>
<p>После объединения образцов измерить концентрацию ДНК.</p>
<p>Произвести пересчет массовой концентрации в молярность, программа выдает данные в пикомолях, необходимо пересчитать в наномоли – <a href="http://molbiol.ru/scripts/01_07.html" target="_blank" rel="noopener">http://molbiol.ru/scripts/01_07.html</a>.</p>
<p>Далее необходимо следовать инструкциям Protocol A из «MiSeq System Denature and Dilute Libraries Guide».</p>
<p><em>2.1.3.1 Разведение щелочи (NaOH)</em></p>
<p>К 100 мкл стокового раствора (10М) добавить 900 мкл Н<sub>2</sub>О.</p>
<p>К отобранным 200 мкл полученного раствора (1N NaOH) добавить<br />
800 мкл Н<sub>2</sub>О.</p>
<p>В результате получится 1 мл 0,2N NaOH.</p>
<p><em>2.1.3.2 Денатурация библиотеки</em></p>
<p>1. В микроцентрифужной пробирке смешать следующие объемы.</p>
<ul>
<li>4 нM библиотека (5 мкл);</li>
<li>0,2N NaOH (5 мкл).</li>
</ul>
<p>2. Перемешать кратким встряхиванием на вортексе и центрифугировать при 280×g в течение минуты.</p>
<p>3. Инкубировать при комнатной температуре в течение 5 мин.</p>
<p>4. В пробирку, содержащую денатурированную библиотеку, добавить<br />
990 мкл холодного НТ1-буфера.</p>
<p>5. В результате получается 1 мл денатурированной библиотеки с концентрацией 20 пМ.</p>
<p>6. Нанести в картридж 600 мкл.</p>
<h3><strong>2.2 СОЗДАНИЕ ПРЕДСТАВИТЕЛЬНЫХ ГЕНОИНЫХ БИБЛИОТЕК ДЛЯ МАССИВНОГО ПАРАЛЛЕЛЬНОГО СЕКВЕНИРОВАНИЯ ИССЛЕДУЕМЫХ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ</strong></h3>
<h4><strong><em>2.2.1 Приготовление геномных библиотек для массивного параллельного секвенирования</em></strong></h4>
<p>Было выделено восемь образцов геномной ДНК для следующих клонов<br />
с рабочими названиями: 1sq, 1/2sq, 2sq, 5sq, 7sq, 8sq, 10sq, MhP. Видовая принадлежность соответствующих клонов, установленная путем анализа фрагментов последовательностей генов 16S РНК, указана в таблице 7.</p>
<p><strong>Таблица 7 </strong>– Видовая принадлежность образцов геномной ДНК</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>1sq</td>
<td><em>Lactobacillus salivarius</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1/2sq</td>
<td><em>Lactobacillus salivarius</em></td>
</tr>
<tr>
<td>2sq</td>
<td><em>Lactobacillus curvatus</em></td>
</tr>
<tr>
<td>5sq</td>
<td><em>Lactobacillus buchneri</em></td>
</tr>
<tr>
<td>7sq</td>
<td><em>Lactobacillus parabuchneri</em></td>
</tr>
<tr>
<td>8sq</td>
<td><em>Lactobacillus heilongjiangensis</em></td>
</tr>
<tr>
<td>10sq</td>
<td><em>Lactobacillus </em>sp.</td>
</tr>
<tr>
<td>MhP</td>
<td><em>Lactobacillus </em>sp.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<h4><strong><em>2.2.2 Анализ выделенной геномной ДНК с помощью электрофореза в агарозном геле</em></strong></h4>
<p>По 5 мкл из каждого образца наносили на 1,2%-й агарозный гель, содержащий бромид этидия в концентрации 0,5 мкг/мкл, в буфере для наноса образцов и разделяли электрофорезом при напряженности электрического поля<br />
5 В/см. Результат представлен на рисунке 3.</p>
<p><img width="1027" height="613" class="wp-image-5193" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/izobrazhenie-vyglyadit-kak-vnutrennij-obuekt-stena.jpeg" alt="Изображение выглядит как внутренний, объект, стена, чашка Автоматически созданное описание" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/izobrazhenie-vyglyadit-kak-vnutrennij-obuekt-stena.jpeg 1027w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/izobrazhenie-vyglyadit-kak-vnutrennij-obuekt-stena-300x179.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/izobrazhenie-vyglyadit-kak-vnutrennij-obuekt-stena-1024x611.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/izobrazhenie-vyglyadit-kak-vnutrennij-obuekt-stena-768x458.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1027px) 100vw, 1027px" /></p>
<p><strong>Рисунок 3 </strong>– Изображение образцов геномной ДНК, разделенной<br />
электрофорезом в 1,2%-ом агарозном геле, содержащем 0,5 мкг этидий<br />
бромида. Слева находится маркер молекулярных весов. Снизу указаны<br />
краткие (рабочие) названия выделенных образцов ДНК, видовая<br />
принадлежность которых указана в таблице 7</p>
<p>Из рисунка3 видно, что все образцы содержали геномную ДНК, однако<br />
в разных количествах, сильно отличающихся друг от друга. Образец 8sq имел наименьшую геномной ДНК, тогда как образцы 1sq и 10sq содержали больше всего геномной ДНК. Кроме того, из рисунка видно, что образцы 1sq, 10sq<br />
и MhP загрязнены РНК. Для очистки образцов от РНК, а также для выравнивания и концентрирования полученной геномной ДНК проводили дополнительную очистку и концентрирование геномной ДНК на магнитных шариках AMPure XP.</p>
<h4><strong><em>2.2.3 Очистка геномной ДНК на магнитных шариках  AMPure XP Beads</em></strong></h4>
<p>Для очистки шарикам AMPure XP давали прогреться до комнатной температуры не менее 30 мин перед использованием. Шарики AMPure XP Beads разбивали на вортексе для ресуспендирования. Добавляли 30 мкл (0,6X) ресуспендированных шариков для процедуры очистки ДНК. Хорошо перемешивали шарики с ДНК пипетированием с использованием автоматического дозатора по крайней мере 10 раз. Инкубировали смешанные с шариками образцы ДНК на столе 5 мин при комнатной температуре. После этого капли со стенок собирали кратким (15 с) центрифугированием при 8000g. Далее пробирки, содержащие образцы ДНК с шариками, помещали на магнитную подставку, чтобы отделить шарики от супернатанта. Инкубировали смесь ДНК с шариками на магнитной подставке в течение 5 мин и аккуратно удаляли надосадочную жидкость. Шарики промывали 2 раза, добавляя по 200 мкл 80%-го свежеприготовленного этанола в пробирку на магнитной подставке. Инкубировали при комнатной температуре в течение 30 с, а затем осторожно удаляли надосадочную жидкость. После второй промывки удаляли остаточную жидкость с помощью автоматического дозатора на 20 мкл. Шарики высушивали на воздухе в течение<br />
5 мин, при этом пробирка оставалась на магнитной подставке. ДНК с шариков элюировали 30 мкл 0,1х ТЕ-буфера. 5 мкл элюата наносили на 1,2%-й агарозный гель, содержащий 0,5 мкг/мл бромистого этидия, и разделяли электрофорезом при напряженности электрического поля 5 В/см.</p>
<p>Результаты разделения очищенных образцов ДНК приведены на рисунке 4.</p>
<p><img width="624" height="534" class="wp-image-5194" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2574.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2574.png 624w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2574-300x257.png 300w" sizes="(max-width: 624px) 100vw, 624px" alt="word image 2574 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 4 </strong>– Изображение образцов геномной ДНК, разделенной<br />
электрофорезом при 5 В/см в 1,2%-ом агарозном геле, содержащем 0,5 мкг<br />
этидий бромида. Маркер молекулярных весов находится справа. Сверху<br />
указаны названия прошедших очистку на магнитных шариках<br />
AMPure XP Beads образцов геномной ДНК</p>
<p>Из рисунка 4 видно, что после проведения процедуры очистки/нор­мализации ДНК на шариках AMPure XP Beads содержание геномной ДНК в образцах значительно выровнялось, а кроме того на существенном уровне была удалена РНК из образцов.</p>
<p>Однако для приготовления библиотек кроме качественной характеристики выделенной ДНК также было необходимо определить точную концентрацию выделенной геномной ДНК.</p>
<h4><strong><em>2.2.4 Определение концентрации геномной ДНК с помощью красителя PicoGreen</em></strong></h4>
<p>Концентрацию ДНК определяли с помощью набора Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit (Thermo Fisher Scientific), следуя инструкциям производителя. Этот набор, основанный на методе с использованием красителя PicoGreen, выгодно отличается от всех других способов измерения, тем что данный краситель высокоизбирательно связывается с двухцепочечной ДНК, при этом не окрашивая одноцепочечную ДНК или РНК, что позволяет использовать его для высокоточных измерений концентрации ДНК в присутствии РНК. Кроме того, этот краситель позволяет измерять концентрации ДНК в широком диапазоне, включая пикомолярный. Таким образом, для определения концентрации геномной ДНК в образцах было принято решение использовать данный метод с красителем PicoGreen.</p>
<p>Для этого приготавливали свежий раствор красителя PicoGreen в разведении 1 : 200 в ТЕ-буфере. После этого приготавливали необходимое количество оптически прозрачных пробирок, в которые добавляли по 200 мкл раствора PicoGreen в ТЕ-буфере. Для построения калибровочной кривой использовали ДНК фага лямбда в ТЕ. Калибровочную кривую строили с использованием 2–<br />
5 концентраций ДНК фага лямбда. Концентрацию образцов ДНК определяли, добавляя в 200 мкл раствора PicoGreen в ТЕ-буфере по 5 мкл раствора измеряемого образца (фактор разведения 40). Конечную измеряемую концентрацию<br />
и концентрацию ДНК с учетом фактора разведения определяли с использованием программы, записанной в памяти прибора.</p>
<p>В таблице 8 приведены концентрации геномной ДНК, измеренной с помощью набора Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit.</p>
<p><strong>Таблица 8 </strong>– Концентрации гемномной ДНК</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Номер</td>
<td>Рабочее название</td>
<td>Концентрация выделенной ДНК</td>
<td>Единицы</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>1sq</td>
<td>48</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>1/2sq</td>
<td>4,72</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>2sq</td>
<td>2,66</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>MhP</td>
<td>66,4</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>01sq</td>
<td>27,96</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>01/1sq</td>
<td>70,8</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>9</td>
<td>07sq</td>
<td>34,04</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>08/1sq</td>
<td>0,704</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Из таблицы 8 видно, что концентрации выделенной геномной ДНК отличаются друг от друга, но все (за исключением образца № 10, 08sq) подходят для концентрационных диапазонов, указанных в наборе для приготовления геномных библиотек. Тем не менее было решено также использовать образец 08sq для создания библиотеки, поскольку несмотря на низкую концентрацию он все-таки содержал геномную ДНК, и было решено проверить возможность использования набора для создания библиотек с использованием геномной ДНК<br />
в концентрациях, значительно ниже указанной в описании к набору.</p>
<h4><strong><em>2.2.5 Синтез библиотек для массивного параллельного секвенирования (NSG)</em></strong></h4>
<p>Исходя из данных качества выделенной и очищенной геномной ДНК, полученных электрофорезом в агарозном геле, и концентрации, полученной флуоресцентным методом с использованием красителя PicoGreen, было решено для синтеза использовать количество геномной ДНК и число циклов амплификации, которые приведены в таблице 9.</p>
<h4><strong><em>2.2.6 Фрагментация ДНК</em></strong></h4>
<p>На льду размораживали компоненты набора, используемые для фрагмен­тации ДНК. На льду приготавливали для каждого образца ДНК смесь из компонентов набора. Количества указаны в таблице 10.</p>
<p><strong>Таблица 9 </strong>– Количество геномной ДНК, использованной для синтеза<br />
NSG-библиотек, и число циклов, используемых в процессе<br />
амплификации при приготовлении NSG-библиотек</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Номер</td>
<td>Рабочее<br />
название</td>
<td>мкл<br />
на синтез</td>
<td>нг<br />
на синтез</td>
<td>мкл воды<br />
до 5 мкл</td>
<td>Наложенный<br />
циклеж</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>1sq</td>
<td>4</td>
<td>200</td>
<td>1</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>1/2sq</td>
<td>5</td>
<td>20</td>
<td>0</td>
<td>14</td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>2sq</td>
<td>5</td>
<td>15</td>
<td>0</td>
<td>14</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>MhP</td>
<td>3</td>
<td>200</td>
<td>2</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>01sq</td>
<td>5</td>
<td>150</td>
<td>0</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>01/1sq</td>
<td>3</td>
<td>200</td>
<td>2</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>9</td>
<td>07sq</td>
<td>5</td>
<td>150</td>
<td>0</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>08/1sq</td>
<td>5</td>
<td>5</td>
<td>0</td>
<td>14</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 10 </strong>– Схема приготовления смеси для фрагментации геномной ДНК</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Компоненты</td>
<td>Объем, мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>10x SD-буфер</td>
<td>2,5</td>
</tr>
<tr>
<td>MgCl<sub>2 </sub> (50 мM)</td>
<td>1,75</td>
</tr>
<tr>
<td>Смесь ферментов для фрагментации (SDpol и ДНКаза I)</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>ddH<sub>2</sub>O</td>
<td>До 20</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>К полученной смеси добавляли указанные в таблице 9 количества геномной ДНК и воды, сбрасывали на центрифуге, смешивали и снова сбрасывали, и проводили процедуру фрагментации ДНК согласно протоколу, указанному в таблице 11. Процедуру фрагментации геномной ДНК проводили в ПЦР-амплифика­торе. Стадия прогрева при 70 °С была необходима для инактивации ДНКазы I.</p>
<p><strong>Таблица 11 </strong>– Протокол фрагментации геномной ДНК</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Температура, <sup>о</sup>С</td>
<td>Время</td>
</tr>
<tr>
<td>30</td>
<td>20 мин</td>
</tr>
<tr>
<td>70</td>
<td>20 мин</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>После фрагментации образцы помещали на лед до проведения следующей процедуры.</p>
<h4><strong><em>2.2.7 Лигирование индексированных вилочковых адаптеров в фрагментированной ДНК</em></strong></h4>
<p>К полученным фрагментам геномной ДНК с помощью процесса лигирования присоединяли предварительно гибридизованные пары индексированных вилочковых адаптеров и универсального адаптера.</p>
<p>В таблице 12 приведены последовательности универсального адаптера<br />
и адаптеров, используемых для синтеза NSG-библиотек для каждого образца.</p>
<p><strong>Таблица 12 </strong>– Нуклеотидные последовательности адаптеров, используемых<br />
в синтезе NSG-библиотек</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Номер</td>
<td>Рабочий номер</td>
<td>Индекс Illumina</td>
<td>Структура</td>
</tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td>Универсальный</td>
<td>5’AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>1sq</td>
<td>Index 2</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>CGATGT</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>1/2sq</td>
<td>Index 3</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>TTAGGC</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>2sq</td>
<td>Index 4</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>TGACCA</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>MhP</td>
<td>Index 5</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>ACAGTG</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>01sq</td>
<td>Index 6</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>GCCAAT</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>01/1sq</td>
<td>Index 9</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>GATCAG</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>07sq</td>
<td>Index 10</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>TAGCTT</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>8</td>
<td>08/1sq</td>
<td>Index 11</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC<strong>GGCTAC</strong>ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В пробирку с фрагментированной ДНК на льду добавляли компоненты набора согласно количествам, приведенным в таблице 13.</p>
<p><strong>Таблица 13 </strong>– Схема приготовления смеси для проведения реакции<br />
лигирования пар индексированных адаптеров</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Компонент</td>
<td>Объем, мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>10x T4 лигазный буфер</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Гибридизованные пары адапторов (12,5 мкM)</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>ddH<sub>2</sub>O</td>
<td>16</td>
</tr>
<tr>
<td>ДНК-лигаза фага Т4 (5 Ед/мкл)</td>
<td>2</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Полученную смесь (объем 50 мкл) собирали центрифугированием, перемешивали встряхиванием, собирали центрифугированием и инкубировали<br />
20 мин при комнатной температуре – 20–22 °С.</p>
<p>После инкубации разводили лигированную смесь 1 : 1 0,1х ТЕ-буфером до конечного объема 100 мкл.</p>
<h4><strong><em>2.2.8 Очистка фрагментированной геномной ДНК с прикрепленными адаптерами на магнитных шариках AMPure XP Beads</em></strong></h4>
<p>Для очистки шарикам AMPure XP давали прогреться до комнатной температуры не менее 30 мин перед использованием. Шарики AMPure XP Beads разбивали на вортексе для ресуспендирования.</p>
<p>К 100 мкл смеси фрагментов геномной ДНК с лигированными парами индексированных адаптеров добавляли по 80 мкл (0,8X) ресуспендированных шариков для процедуры очистки ДНК. Хорошо перемешивали шарики с ДНК встряхиванием на вортексе в течение 5–10 с. Инкубировали смешанные с шариками образцы ДНК на столе 5 мин при комнатной температуре. После этого капли со стенок собирали кратким (15 с) центрифугированием при 8000g. Далее пробирки, содержащие образцы ДНК с шариками, помещали на магнитную подставку, чтобы отделить шарики от супернатанта. Инкубировали смесь ДНК с шариками на магнитной подставке в течение 5 мин и аккуратно удаляли надосадочную жидкость. Шарики промывали 2 раза, добавляя по 200 мкл 80%-го свежеприготовленного этанола в пробирку на магнитной подставке. Инкубировали при комнатной температуре в течение 30 с, а затем осторожно удаляли надосадочную жидкость. После второй промывки удаляли остаточную жидкость с помощью автоматического дозатора на 20 мкл. Шарики высушивали на воздухе в течение 5 мин, при этом пробирка оставалась на магнитной подставке. ДНК с шариков элюировали в 20 мкл 0,1х ТЕ-буфера и сразу использовали<br />
в последующей реакции ПЦР-амплификации.</p>
<h4><strong><em>2.2.9 Амплификация смеси фрагментов геномной ДНК с лигированными парами индексированных адаптеров</em></strong></h4>
<p>В новых ПЦР-пробирках приготавливали следующую амплификационную смесь для каждого образца геномной ДНК. Состав смеси приведен в таблице 14.</p>
<p>В таблице 15 приведена структура используемых для ПЦР праймеров.</p>
<p><strong>Таблица 14 </strong>– Схема приготовления смеси для ПЦР-амплификации смеси фрагментов геномной ДНК с лигированными парами<br />
индексированных адаптеров</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Компонент</td>
<td>Объем, мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>Смесь праймеров для ПЦР (20 мкM (10 мкМ каждого))</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>10x SD-буфер</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>MgCl<sub>2 </sub> (50 mM)</td>
<td>3,5</td>
</tr>
<tr>
<td>Амплификационная смесь ферментов (20 Ед/мкл)</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>ddH<sub>2</sub>O</td>
<td>16,5</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 15 </strong>– Нуклеотидная последовательность праймеров, используемых<br />
для амплификации</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Название праймера</td>
<td>Последовательность</td>
</tr>
<tr>
<td>P5.2_PCR</td>
<td>5’ AATGATACGGCGACCACCGA 3’</td>
</tr>
<tr>
<td>P7.1_PCR</td>
<td>5’ CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT 3’</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>К смеси компонентов для проведения ПЦР добавляли элюированные образцы ДНК. Смешивали компоненты для ПЦР встряхиванием и собирали центрифугированием. После чего пробирки помещали в амплификатор и проводил реакцию ПЦР при параметрах, указанных в таблице 16. При этом для каждого образца использовали число циклов ПЦР, приведенное в таблице 9.</p>
<p><strong>Таблица 16 </strong>– Параметры проведения реакции амплификации фрагментов<br />
геномной ДНК, лигированных с парами индексированных<br />
адаптеров</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Температура, <sup>о</sup>С</td>
<td>Время, с</td>
<td>Число циклов</td>
</tr>
<tr>
<td>94</td>
<td>120</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>95</td>
<td>20</td>
<td rowspan="3">6 или14 (см. таблицу 3)</td>
</tr>
<tr>
<td>62</td>
<td>20</td>
</tr>
<tr>
<td>68</td>
<td>45</td>
</tr>
<tr>
<td>68</td>
<td>45</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>∞</td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Число циклов выбирали, исходя из количества вводимой ДНК. Соответственно при количестве исходной ДНК 100–200 нг использовали 6 циклов,<br />
а при количестве исходной ДНК 5 нг – использовали 14 циклов амплификации.</p>
<h4><strong><em>2.2.10 Очистка амплифицированных библиотек после ПЦР-реакции на магнитных шариках AMPure XP Beads</em></strong></h4>
<p>Для очистки шарикам AMPure XP давали прогреться до комнатной температуры не менее 30 мин перед использованием. Шарики AMPure XP Beads разбивали на вортексе для ресуспендирования.</p>
<p>К 50 мкл аплифицированных с помощью ПЦР библиотек добавляли по<br />
45 мкл (0,9X) ресуспендированных шариков для процедуры очистки ДНК. Хорошо перемешивали шарики с ДНК встряхиванием на вортексе в течение 5–<br />
10 с. Инкубировали смешанные с шариками образцы ДНК на столе 5 мин при комнатной температуре. После этого капли со стенок собирали кратким (15 с) центрифугированием при 8000g. Далее пробирки, содержащие образцы ДНК<br />
с шариками, помещали на магнитную подставку, чтобы отделить шарики от супернатанта. Инкубировали смесь ДНК с шариками на магнитной подставке<br />
в течение 5 мин и аккуратно удаляли надосадочную жидкость. Шарики промывали 2 раза, добавляя по 200 мкл 80%-го свежеприготовленного этанола в пробирку на магнитной подставке. Инкубировали при комнатной температуре<br />
в течение 30 с, а затем осторожно удаляли надосадочную жидкость. После второй промывки удаляли остаточную жидкость с помощью автоматического дозатора на 20 мкл. Шарики высушивали на воздухе в течение 5 мин, при этом пробирка оставалась на магнитной подставке. ДНК с шариков элюировали<br />
в 30 мкл 0,1х ТЕ-буфера.</p>
<p>5 мкл элюированной ДНК геномных библиотек для NSG-секвенирования использовали для оценки качества и размера полученных библиотек. Концентрацию ДНК библиотек измеряли с помощью набора Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit.</p>
<p>Оценка качества и размера полученных NSG-библиотек электрофорезом<br />
в 1,2%-ом агарозном геле.</p>
<p>Качество и размер полученных NSG-библиотек оценивали с помощью электрофореза в 1,2%-ом агарозном геле, содержащем 0,5 мкг/мл бромистого этидия, при напряженности электрического поля 5 В/см. Для этого использовали 5 мкл элюированной ДНК. Результаты разделения показаны на рисунке 5<br />
(А и Б). Панель А рисунка 5 соответствует короткому прогону разделяемой ДНК, а панель Б – длинному прогону разделяемой ДНК.</p>
<p><img width="717" height="482" class="wp-image-5195" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-139.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-139.jpeg 717w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-139-300x202.jpeg 300w" sizes="(max-width: 717px) 100vw, 717px" alt="word image 139 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."> <img width="603" height="677" class="wp-image-5196" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2575.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2575.png 603w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2575-267x300.png 267w" sizes="(max-width: 603px) 100vw, 603px" alt="word image 2575 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p>А)</p>
<p>Б)</p>
<p><img width="606" height="312" class="wp-image-5197" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2576.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2576.png 606w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2576-300x154.png 300w" sizes="(max-width: 606px) 100vw, 606px" alt="word image 2576 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 5 </strong>– Изображение образцов геномной ДНК, разделенной<br />
электрофорезом при 5 В/см в 1,2%-ом агарозном геле, содержащем 0,5 мкг<br />
этидий бромида. Маркер молекулярных весов находится справа. Сверху<br />
указаны названия образцов, используемых для создания библиотек</p>
<p>Из результатов качественной оценки видно, что все образцы соответствуют требуемому разбросу размеров фрагменов и концентраций. Однако поскольку все-таки наблюдается некоторая вариабельность в концентрациях синтезированных библиотек, концентрацию ДНК в них далее определяли количественно и приготавливали смесь библиотек исходя из количественной оценки концентраций библиотек.</p>
<h4><strong><em>2.2.11 Определение концентрации NSG-библиотек с помощью красителя PicoGreen</em></strong></h4>
<p>Концентрацию ДНК в синтезированных NSG-библиотеках определяли<br />
с помощью набора Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit (Thermo Fisher Scientific), следуя инструкциям производителя.</p>
<p>Для этого приготавливали свежий раствор красителя PicoGreen в разведении 1 : 200 в ТЕ-буфере. После этого приготавливали необходимое количество оптически прозрачных пробирок, в которые добавляли по 200 мкл раствора PicoGreen в ТЕ-буфере. Для построения калибровочной кривой использовали ДНК фага лямбда в ТЕ. Калибровочную кривую строили с использованием 2–<br />
5 концентраций ДНК фага лямбда. Концентрацию образцов ДНК определяли, добавляя в 200 мкл раствора PicoGreen в ТЕ-буфере по 5 мкл раствора измеряемого образца (фактор разведения 40). Конечную измеряемую концентрацию<br />
и концентрацию ДНК с учетом фактора разведения определяли с использованием программы, записанной в памяти прибора.</p>
<p>В таблице 17 приведены концентрации ДНК в синтезированных NSG-биб­лиотеках, измеренные с помощью набора Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit.</p>
<p><strong>Таблица 17 </strong>– Концентрации ДНК в синтезированных NSG-библиотеках</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Номер</td>
<td>Рабочее название</td>
<td>Концентрация ДНК</td>
<td>Единицы</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>1sq</td>
<td>4,2</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>1/2sq</td>
<td>4</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>2sq</td>
<td>2,024</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>MhP</td>
<td>2,516</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>01sq</td>
<td>1,08</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>01/1sq</td>
<td>6,56</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>9</td>
<td>07sq</td>
<td>2,152</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>08/1sq</td>
<td>0,536</td>
<td>нг/мкл</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таким образом, на данном этапе исполнения проекта получено достаточное количество тотальной геномной ДНК исследуемых штаммов и созданы<br />
в необходимой концентрации библиотеки для секвенирования бактериальных геномов отобранных образцов с использованием набора MiSeq Reagent Micro Kit v2 (300-cycles) MS-103-1002 для получения наибольшего покрытия, на платформе Illumina MiSeq.</p>
<h3><strong>2.3 РЕЗУЛЬТАТЫ АНАЛИЗА ПОЛНОГЕНОМНЫХ СИКВЕНСОВ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ</strong></h3>
<p>За отчетный период (2019 г.) получены чистые культуры штаммов<br />
<em>L. salivarius</em> PC20b и <em>L. curvatus</em> PC723_5. Выделены тотальные геномные ДНК этих культур, и получены очищенные нормализованные образцы. Впервые двумя независимыми методами созданы представленные геномные библиотеки для массивного параллельного секвенирования (NGS). Осуществлено секвенирование подготовленных библиотек на платформе Illumina MiSeq. В ходе необходимого числа запусков секвенирования получены массивы данных, содержащие информацию о фрагментах генома штаммов <em>L. salivarius</em> PC20b и <em>L. cur­vatus</em> PC723_5, которые позволили восстановить полногеномные последовательности и уточнить таксономическую идентификацию штаммов. В результате сравнительного биоинформационного анализа собраны четыре генома, депонированные в международную базу данных NCBI.</p>
<p>Проведен предварительный структурный анализ геномов депонированных штаммов. Полученные данные послужат основой для выяснения молекулярных механизмов реализации пробиотических и антагонистических свойств исследуемых штаммов <em>L. salivarius</em> PC20b и <em>L. curvatus</em> PC723_5. Кроме того, проведенные в отчетном году исследования и приобретенные коллективом компетенции обеспечивают успешность реализации планов последующих лет и выполнение поставленных в проекте задач.</p>
<h4><strong><em>2.3.1 Депонирование полногеномных сиквенсов в международную базу данных NCBI</em></strong></h4>
<p>Все цели, поставленные на 2019 г., достигнуты в полной мере. Более того, в ходе полногеномного секвенирования штаммов <em>L. salivarius </em>PC20b и <em>L. cur­vatus</em> PC723_5 проведено уточнение их таксономической принадлежности, собраны последовательности геномов этих штаммов. Полногеномные последовательности подготовлены к депонированию и размещены в международной базе NCBI (англ. National Center for Biotechnological Information – Национальный центр биотехнологической информации США) с присвоением соответствующих индивидуальных номеров.</p>
<p>1. На основании выделенных ранее чистых бактериальных культур штаммов <em>L. salivarius </em>PC20b и <em>L. curvatus</em> PC723_5 получено достаточное количество биомассы для выделения тотальной геномной ДНК.</p>
<p>2. При помощи коммерчески доступного набора Genomic DNA Purification Kit (#K0512, Thermo Scientific, USA) получены образцы тотальной геномной ДНК штаммов <em>L. salivarius</em> PC20b и <em>L. curvatus</em> PC723_5. ДНК очищена и нормализована при помощи магнитных шариков AMPure XP Beads (Thermo Scientific, USA).</p>
<p>3. Определена концентрация ДНК с помощью набора Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit (Thermo Fisher Scientific), с использованием красителя PicoGreen.</p>
<p>4. Синтезировано шесть библиотек (по три каждого из изучаемых штаммов) для массивного параллельного секвенирования (NSG).</p>
<p>5. Осуществлено секвенирование бактериальных геномов отобранных образцов с использованием набора MiSeq Reagent Micro Kit v2 (300-cycles) MS-103-1002 для получения наибольшего покрытия, на платформе Illumina MiSeq.</p>
<p>6. С использованием автоматической платформы Illumina MiSeq осуществлена сборка геномов и проведено сравнение с аннотированными референсными геномы, доступными в NCBI.</p>
<p>7. Уточнено таксономическое положение штаммов <em>L. salivarius</em> PC20b<br />
и <em>L. curvatus</em> PC723_5.</p>
<p>8. Проведено размещение в международной базе данных NCBI четырех последовательностей полных геномов штаммов <em>L. salivarius</em> PC20b и <em>L. curvatus</em> PC723_5. После проверки и аннотации рецензентами NCBI депонированным последовательностям присвоены индивидуальные номера:</p>
<p><a id="post-5185-__DdeLink__10505_2859748360"></a><em>Lactobacillus salivarius</em> PC20b (VRA_1sq_f) (Assembly: GCA_009683065.1),</p>
<p><em>Lactobacillus salivarius</em> PC20b (VRA_01-1sq_f) (Assembly: GCA_009683115.1),</p>
<p><em>Lactobacillus curvatus</em> PC723_5 (VRA_2sq_f) (Assembly: GCA_009683015.1),</p>
<p><em>Lactobacillus curvatus</em> PC723_5 (VRA_2sq_n) (Assembly: GCA_009683145.1).</p>
<p>9. Проведен предварительный структурный анализ геномов депонированных штаммов, который позволил определить для каждого из трех геномов GC%-состав, идентифицировать гены, псевдогены, белки и плазмиды.</p>
<p>Данные о полных геномах исследуемых штаммов <em>L. salivarius</em> PC20b<br />
и <em>L. curvatus</em> PC723_5 получены впервые. Кроме того, в обоих случаях уточнена таксономическая идентификация и получены приоритетные данные о первичных последовательностях генов и белков, способных определять пробиотические и антагонистические свойства исследуемых штаммов.</p>
<p>Впервые получены приведенные в таблице 18 данные.</p>
<p><strong>Таблица 18 </strong>– Геномы <em>L. salivarius</em> и <em>L. curvatus</em>, депонированные в NCBI (PRJNA588983)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Штамм</td>
<td>Размер<br />
генома (Mb)</td>
<td>GC%</td>
<td>Кол-во генов</td>
<td>Кол-во белков</td>
<td>Кол-во плазмид</td>
</tr>
<tr>
<td>L. salivarius PC20b VRA_1sq_f</td>
<td>2.28982</td>
<td>32,60</td>
<td>3186</td>
<td>2886</td>
<td>30</td>
</tr>
<tr>
<td>L. salivarius PC20b VRA_01-1sq_f</td>
<td>2.22963</td>
<td>32,40</td>
<td>2953</td>
<td>2722</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>L. curvatus PC723_5 VRA_2sq_f</td>
<td>2.02224</td>
<td>41,20</td>
<td>2208</td>
<td>2114</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>L. curvatus PC723_5 VRA_2sq_n</td>
<td>1.97745</td>
<td>41,10</td>
<td>2034</td>
<td>1948</td>
<td>5</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<h4><strong><em>2.3.2 Анализ полученных данных о полногеномных последовательностей пробиотических штаммов</em></strong></h4>
<p>Выделение чистых культур проводили с использованием коммерчески доступных селективных сред для видов рода <em>Lactobacillus</em> (Лактобакагар и MRS). Предварительное таксономическое определение проводили путем определения первичной нуклеотидной последовательности фрагментов вариантов гена 16S РНК методом прямого ферментативного секвенирования по Сенгеру.</p>
<p>Выделение тотальной геномной ДНК проводили при помощи коммерчески доступного набора Genomic DNA Purification Kit (#K0512, Thermo Scientific, USA) согласно рекомендациям производителя. ДНК очищена и нормализована при помощи магнитных шариков AMPure XP Beads (Thermo Scientific, USA).</p>
<p>Определение концентрации ДНК проводили с помощью набора Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit (Thermo Fisher Scientific), с использованием красителя PicoGreen. Приготовление геномных библиотек для массивного параллельного секвенирования (NSG) проводили с помощью набора Nextera DNA Flex.</p>
<p>Секвенирование бактериальных геномов отобранных образцов осуществляли с использованием набора MiSeq Reagent Micro Kit v2 (300-cycles) MS-103-1002 для получения наибольшего покрытия, на платформе Illumina MiSeq. Сборку геномов осуществляли с использованием автоматической платформы Illumina MiSeq. Было проведено сравнение с аннотированными референсными геномы, доступными в NCBI.</p>
<p>В результате нашей работы было проведено секвенирование геномов штаммов бактерий, принадлежащих к видам <em>Lactobacillus salivarius</em>, <em>Lacto­bacillus curvatus</em>, <em>Lactobacillus parabuchneri </em>и <em>Lactobacillus heilongjiangensis</em>. При этом секвенирование некоторых штаммов было выполнено несколько раз.</p>
<p>По итогам, количество информации, полученное в первое секвенирование было разным для разных штаммов (таблица 19) и сильно разнилось. Как предполагается, это было вызвано количеством ДНК, использованным для секвенирования.</p>
<p><strong>Таблица 19 </strong>– Количество информации, полученное при секвенировании<br />
исследуемых штаммов бактерий</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Название вида</td>
<td>Количество информации, Кб</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius</em></td>
<td>1476745</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus</em></td>
<td>352506</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus parabuchneri</em></td>
<td>1160156</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus heilongjiangensis</em></td>
<td>516300</td>
</tr>
<tr>
<td>Итого:</td>
<td>3505707</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Как уже было сказано, разное количество ДНК привело к разному количество полученной информации. Тем не менее, по всем полученным геномам нами были проведены сборки геномов с использованием референсных геномов, имеющихся в базе данных NCBI (NC_018610.1 <em>Lactobacillus buchneri</em> CD034, NZ_CP035110.1 <em>Lactobacillus curvatus</em> strain SRCM103465, NZ_CP012559.1 <em>Lactobacillus heilongjiangensis</em> strain DSM 28069, NZ_CP018796.1 <em>Lactobacillus parabuchneri</em> strain FAM21731 и NC_007929.1 <em>Lactobacillus salivarius</em> UCC118), при помощи программы UGENE Unipro с использованием различных алгоритмов (BWA и Bowtie2). При этом по результатам сравнения сборок геномов было принято использовать алгоритм BWA.</p>
<p>Таким образом, нами были получены сборки некоторых геномов, которые могли быть выравнены, используя референсные последовательности. В виду того, что количество данных по некоторым штаммам не давало возможность полностью выравнить геномы и, таким образом, собрать полные их последовательности, нами было произведено повторное секвенирование (таблица 20).</p>
<p><strong>Таблица 20 </strong>– Количество информации, полученное при секвенировании<br />
исследуемых штаммов бактерий</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Название вида</td>
<td>Количество информации, Кб</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius 01-1sq</em></td>
<td>160172</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius 1-2sq</em></td>
<td>3494894</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius 1sq</em></td>
<td>130251</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus 2sq</em></td>
<td>1753077</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus parabuchneri 07sq</em></td>
<td>80128</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus heilongjiangensi 08-1sq</em></td>
<td>1848677</td>
</tr>
<tr>
<td>Итого:</td>
<td>7467199</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Как мы можем видеть, количество информации собранной о строении геномов бактериальных штаммов разнилось и во второй раз. При этом, как и ранее, наибольшее количество информации было получено о штамме <em>Lactobacillus salivarius</em>, в то время как по <em>Lactobacillus parabuchneri</em> – нет. Тем не менее, получилось собрать информацию о геномах <em>Lactobacillus curvatus</em> и <em>Lactobacillus heilongjiangensi</em>. Не смотря на это, количество информации, собранное о других видах бактерий было достаточно небольшим. Тем не менее, количество информации, собранное во второй раз было почти в два раз больше, чем в первый.</p>
<p>В виду того, что по литературным данным в отношении создания пробиотических препаратов наиболее приоритетными являются штаммы <em>Lactobacillus salivarius 1-2sq</em>, <em>Lactobacillus curvatus 2sq</em> и <em>Lactobacillus heilongjiangensi 08-1sq</em>, нами было проведено секвенирование этих генотипов отдельно в третий раз (таблица 21).</p>
<p>В итоге, после сбора данных о строении геномов, нами было проведено выравнивание исследуемых образцов на референсные последовательности. Результаты представлены на рисунках 6–10. В случае, когда геномы плохо выравнивались на референсные, для подтверждения их видовой принадлежности, нами был выполнен поиск и сравнение 16S rRNA последовательностей с референсными для этого вида бактерий, депонированными в базу данных NCBI.</p>
<p><strong>Таблица 21 </strong>– Количество информации, полученное при секвенировании<br />
исследуемых штаммов бактерий</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Название вида</td>
<td>Количество информации, Кб</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius 1-2sq</em></td>
<td>346172</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus 2sq</em></td>
<td>421439</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus heilongjiangensi 08-1sq</em></td>
<td>198894</td>
</tr>
<tr>
<td>Итого:</td>
<td>966505</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>1sq_S3_L001 Lactobacillus salivarius</strong></p>
<p><img width="1366" height="768" class="wp-image-5198" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2577.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2577.png 1366w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2577-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2577-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2577-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1366px) 100vw, 1366px" alt="word image 2577 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 6 </strong>– Результаты сравнения рефернсного генома<br />
<em>Lactobacillus salivarius</em> с выравненным</p>
<p>Как мы можем видеть, при выравнивании в NCBI BLAST было выявлено, что длина собранного генома без «пробелов» составила 1588285 п.н., против 1827111 п.н. референсного генома.</p>
<p>При сравнении референсного и выравненого геномов <em>Lactobacillus curvatus</em> было выявлено, что длина сборки составила1203496 п.н. против 2042320 п.н. референсного. Поэтому, для уточнения систематического положения данного штамма нами был проведен поиск последовательности 16S rRNA и сравнение ее с референсной (рисунок 7).</p>
<p>Как мы можем видеть, сравнение последовательности 16S rRNA изучаемого генома с референсной NR_042437.1 показало 99 % схожести. В свою очередь, это дает предположить верное систематическое определение данного штамма бактерий.</p>
<p><strong>2sq_S4_L001 Lactobacillus curvatus</strong></p>
<p><img width="1366" height="768" class="wp-image-5199" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2578.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2578.png 1366w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2578-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2578-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2578-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1366px) 100vw, 1366px" alt="word image 2578 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 7 </strong>– Результаты сравнения рефернсного генома<br />
<em>Lactobacillus curvatus</em> с выравненным</p>
<p><img width="1366" height="768" class="wp-image-5200" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2579.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2579.png 1366w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2579-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2579-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2579-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1366px) 100vw, 1366px" alt="word image 2579 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 8 </strong>– Результаты сравнения 16S rRNA последовательностей <em>Lactobacillus salivarius</em></p>
<p>Как мы можем видеть, сборка генома штамма <em>Lactobacillus parabuchneri</em> прошла достаточно успешно и практически полный геном был собран<br />
(2600578 п.н. референсного против 2539591 п.н. собранного).</p>
<p>Удивительным было то, что не смотря на большое количество полученных данных, нами не был собран геном бактерии <em>Lactobacillus heilongjiangensis</em>. Поэтому, мы также как и в прошлый раз провели сравнение 16S rRNA изучаемого штамма с уже известными и имеющимися в базе данных NCBI.</p>
<p><strong>07sq_S5_L001 Lactobacillus parabuchneri</strong></p>
<p><img width="1366" height="768" class="wp-image-5201" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2580.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2580.png 1366w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2580-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2580-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2580-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1366px) 100vw, 1366px" alt="word image 2580 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 9 </strong>– Результаты сравнения рефернсного генома<br />
<em>Lactobacillus parabuchneri</em> с выравненным</p>
<p>При этом интересным было то, что при сравнение генома с «пробелами»<br />
с NR_109370.1, последовательность 16S rRNA была найдена. Поэтому, для проверки нами был проведен поиск 16S rRNA в консенсус-последовательности генома без «пробелов» (рисунок 10).</p>
<p><img width="1366" height="768" class="wp-image-5202" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2581.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2581.png 1366w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2581-300x169.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2581-1024x576.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2581-768x432.png 768w" sizes="(max-width: 1366px) 100vw, 1366px" alt="word image 2581 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 10 </strong>– Результаты сравнения 16S rRNA последовательностей<br />
<em>Lactobacillus parabuchneri</em></p>
<p>В итоге, последовательность была обнаружена с 99 % идентичности при покрытии 96 % длины сиквенса. Это, в свою очередь, дает сделать предположение о том, что вид определен правильно.</p>
<p>Таким образом, из желудочно-кишечного тракта дикого кавказского фазана (<em>Phasianus colchicus</em>), добытого на территории Краснодарского края выделены чистые культуры кисломолочных бактерий. По результатам анализа последовательностей вариантов гена 16S РНК эти культуры были отнесены к четырем видам рода <em>Lactobacillus</em> – потенциальным пробиотикам. По результатам полногеномного секвенирования пробиотических штаммов <em>Lactobacillus Sali­varius</em> PC20b, <em>Lactobacillus curvatus</em> PC723_5, <a id="post-5185-__DdeLink__10396_1162033859"></a><em>Lactobacillus parabuchneri</em> и <em>Lacto­bacillus heilongjiangensis</em> получен большой массив данных, первичный анализ которых позволил уточнить таксономическое положение штаммов. Так за несколько циклов запуска NGS в общей сложности получено 11939411 Кб данных. Данные о полных геномах исследуемых штаммов получены впервые. Кроме того, во всех случаях уточнена таксономическая идентификация и получены приоритетные данные о первичных последовательностях генов и белков, способных определять пробиотические и антагонистические свойства исследуемых штаммов.</p>
<h3><strong>2.4 ИДЕНТИФИЦИРОВАННЫЕ БАКТЕРИОЦИНЫ И РЕЗУЛЬТАТЫ БИОИНФОРМАЦИОННОГО АНАЛИЗА ИХ СТРУКТУР</strong></h3>
<h4><strong><em>2.4.1 Идентификация последовательностей бактериоцинов, найденных в ходе автоматичего анализа полногеномных сиквенсов штаммов L.salivarius VRA_1sq_f и VRA_01-1sq_f</em></strong></h4>
<p>В штамме <em>Lactobacillus salivarius</em> PC20b впервые идентифицированы и депонированы в базу данных NCBI последовательности девяти бактериоцинов (таблица 22).</p>
<p><strong>Таблица 22 </strong>– Список бактериоцинов, обнаруженных в штаммах<br />
<em>L. salivarius</em> VRA_1sq_f и VRA_01-1sq_f</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Номер</td>
<td>Название белка</td>
<td>Номер в NCBI</td>
<td>Длина, а.о.</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>bacteriocin</td>
<td>MSE07706.1</td>
<td>44</td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>bacteriocin immunity protein</td>
<td>MSE08628.1</td>
<td>103</td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>bacteriocin</td>
<td>MSE08789.1</td>
<td>72</td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>bacteriocin immunity protein, partial</td>
<td>MSE08809.1</td>
<td>111</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>bacteriocin</td>
<td>MSE08900.1</td>
<td>57</td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>bacteriocin</td>
<td>MSE08901.1</td>
<td>85</td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>bacteriocin</td>
<td>MSE08902.1</td>
<td>79</td>
</tr>
<tr>
<td>8</td>
<td>bacteriocin</td>
<td>MSE08971.1</td>
<td>39</td>
</tr>
<tr>
<td>9</td>
<td>bacteriocin immunity protein, partial</td>
<td>MSE09644.1</td>
<td>55</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Ниже приведены первичные аминокислотные последовательности бактериацинов, найденных в ходе выполнения проекта и идентифицированных в ходе автоматического анализа полногеномных сиквенсов штаммов <em>L. salivarius</em> VRA_1sq_f и VRA_01-1sq_f.</p>
<p>1. MSE07706.1</p>
<p><strong>MDNCNNFTSL NNTELQGIIG GKHGLGYHIV DAVVSFGEGF LNAI</strong></p>
<p>2. MSE08628.1</p>
<p><strong>MEKVQELQRL VVELYDSFEN DNRKGVEEIR QVLANVNEKY KTSSHPLAWT GRLVLYLQVN AVKKDLYLTP EQKDIIKELA RIGKRTNLNY VYLSPVDDAK QFV</strong></p>
<p>3. MSE08789.1</p>
<p><strong>MDKEFTVLTE CELAKVDGGK GSKGSSYVAG FASAAIADTG LGGAICGVPC AMIGAHYAPI GWTIVTGATG GF</strong></p>
<p>4. MSE08809.1</p>
<p><strong>MKKVNVEETK EVIHELYNNL MDRPQKTSGL LDITDVLLQV YKKIDTTKYP EYLLNKLVNY IYSVGFDQKI RFMGRDGELL RKLADESNKA GLNSRYRADY SAKSQFYSYS E</strong></p>
<p>5. MSE08900.1</p>
<p><strong>MNNNFVQIDK KELAHIIGGR NSYDYIDSGK FGYDIGCTIA NTKFFKRLRH SNQNICS</strong></p>
<p>6. MSE08901.1</p>
<p><strong>MLKKLWETWL DGGFIRGKKR YVIAPVIWAL LISLGIWLFG NEEMSYLDYI QTPKMIIVTI FCLVGGSTLL YLLDTAMKVN KHMKG</strong></p>
<p>7. MSE08902.1</p>
<p><strong>MKEFTVLTEC ELAKVDGGYT PKNCAMAVGG GMLSGAIRGG VSGTVFGVGT GNLTGAFAGA HIGLVAGGLA CIGGYLGSH</strong></p>
<p>8. MSE08971.1</p>
<p><strong>MKFEVLTEKK LQVVVGGTTK NFGKSQYKKC LFNFFGTCK</strong></p>
<p>9. MSE09644.1</p>
<p><strong>MERTKLINQA QTDIKELLGI LNNYEKKQSE LLDIIDVLAQ VYRKLPETKN PEALL</strong></p>
<h4><strong><em>2.4.2 Биоинформационный анализ бактериоцинов. Идентификация структурных элементов</em></strong></h4>
<p>На рисунках 11‒19 приведены примеры результатов расчетов информационных структур бактериоцинов, обнаруженных нами в штаммах <em>L. salivarius</em> VRA_1sq_f и VRA_01-1sq_f и депонированных в международную базу данных NCBI. В подписях к рисункам указаны номера депонирования в базе в соответствии с таблицей 22.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><img width="247" height="415" class="wp-image-5203" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2582.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2582.png 247w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2582-179x300.png 179w" sizes="(max-width: 247px) 100vw, 247px" alt="word image 2582 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></td>
<td><img width="205" height="374" class="wp-image-5204" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2583.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2583.png 205w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2583-164x300.png 164w" sizes="(max-width: 205px) 100vw, 205px" alt="word image 2583 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></td>
<td><img width="216" height="385" class="wp-image-5205" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2584.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2584.png 216w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2584-168x300.png 168w" sizes="(max-width: 216px) 100vw, 216px" alt="word image 2584 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Рисунок 11</strong> – MSE07706.1</td>
<td><strong>Рисунок 12</strong> – MSE08628.1</td>
<td><strong>Рисунок 13</strong> – MSE08789.1</td>
</tr>
<tr>
<td><img width="213" height="390" class="wp-image-5206" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2585.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2585.png 213w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2585-164x300.png 164w" sizes="(max-width: 213px) 100vw, 213px" alt="word image 2585 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></td>
<td><img width="238" height="407" class="wp-image-5207" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2586.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2586.png 238w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2586-175x300.png 175w" sizes="(max-width: 238px) 100vw, 238px" alt="word image 2586 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></td>
<td><img width="216" height="386" class="wp-image-5208" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2587.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2587.png 216w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2587-168x300.png 168w" sizes="(max-width: 216px) 100vw, 216px" alt="word image 2587 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Рисунок 14 </strong>– MSE08809.1</td>
<td><strong>Рисунок 15 </strong>– MSE08900.1</td>
<td><strong>Рисунок 16 </strong>– MSE08901.1</td>
</tr>
<tr>
<td><img width="270" height="439" class="wp-image-5209" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2588.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2588.png 270w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2588-185x300.png 185w" sizes="(max-width: 270px) 100vw, 270px" alt="word image 2588 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></td>
<td><img width="230" height="409" class="wp-image-5210" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2589.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2589.png 230w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2589-169x300.png 169w" sizes="(max-width: 230px) 100vw, 230px" alt="word image 2589 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></td>
<td><img width="248" height="422" class="wp-image-5211" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2590.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2590.png 248w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2590-176x300.png 176w" sizes="(max-width: 248px) 100vw, 248px" alt="word image 2590 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Рисунок 17 </strong>– MSE08902.1</td>
<td><strong>Рисунок 18 </strong>– MSE08971.1</td>
<td><strong>Рисунок 19 </strong>– MSE09644.1</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>На рисунках 11‒19 оси представляют номера остатков последовательности (по вертикали) и коэффициент сглаживания а (по горизонтали). Ввиду этого на рисунках 11, 15, 18 и 19, где длины аминокислотных последовательностей бактериоцинов сравнительно не велики (от 39 до 57 а.о.), мы наблюдаем структуры с визуально меньшим разрешением, а в случае остальных четырех последовательностей – с большим количеством а.о. – мы можем видеть более «сглаженную» структуру. Такой эффект не отражается на точности расчетов, а возникает за счет того, что по вертикали отдельный элемент изображения соответствует одной аминокислоте, линейная же длина осей уравнена.</p>
<p>Более темные области соответствуют центрам областей длины а с максимальным уровнем координации между информацией единицы в последовательности белка. На рисунке показана иерархически организованная структура.</p>
<h3><strong>2.5 ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ ПОЛИСАХАРИДОВ (ПЕКТИНА) ИЗ ПРОДУКТОВ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ</strong></h3>
<p>Пектииновые вещества, или пектины – полисахариды, образованные остатками, главным образом, <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%93%D0%B0%D0%BB%D0%B0%D0%BA%D1%82%D1%83%D1%80%D0%BE%D0%BD%D0%BE%D0%B2%D0%B0%D1%8F_%D0%BA%D0%B8%D1%81%D0%BB%D0%BE%D1%82%D0%B0" target="_blank" rel="noopener">галактуроновой кислоты</a>. Присутствуют во всех высших растениях, особенно во фруктах, и в некоторых водных растениях, примером является <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%92%D0%B7%D0%BC%D0%BE%D1%80%D0%BD%D0%B8%D0%BA_%D0%BC%D0%BE%D1%80%D1%81%D0%BA%D0%BE%D0%B9" target="_blank" rel="noopener">взморник морской</a>. Пектины, являясь структурным элементом растительных тканей, способствуют поддержанию в них тургора, повышают засухоустойчивость растений, устойчивость овощей и фруктов при хранении. Используются в пищевой промышленности – в качестве структурообразователей (гелеобразователей), загустителей, а также в медицинской и фармацевтической промышленности – в качестве физиологически активных веществ, также в виде модифицированного пектина, с полезными для организма человека свойствами. В промышленных масштабах пектиновые вещества получают<br />
в основном из яблочных и цитрусовых выжимок, жома сахарной свеклы, корзинок подсолнечника, тыквы. Пектины являются <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%AD%D0%BD%D1%82%D0%B5%D1%80%D0%BE%D1%81%D0%BE%D1%80%D0%B1%D0%B5%D0%BD%D1%82%D1%8B" target="_blank" rel="noopener">энтеросорбентами</a>.</p>
<p>Пектин для применения в пищевой и фармацевтической промышленности – очищенный полисахарид – получают кислотной экстракцией из цитрусовых (лайм, лимон, апельсин, грейпфрут), яблочных выжимок, жома сахарной свеклы, морской травы, или из корзинок подсолнечника. Технологическая схема получения пектина предусматривает его экстрагирование из исходного сырья, очистку, осаждение органическими растворителями, сушку, измельчение и стандартизацию. Последний представляет собой процесс модификации свойств пектина, достигаемой физическими и/или химическими способами, с целью приведения их<br />
в соответствие с технологическими и рецептурными требованиями производства различных групп пищевых и непищевых продуктов. Пектин является гелеобразователем, стабилизатором, загустителем, влагоудерживающим агентом, осветлителем, веществом, облегчающим фильтрование, и средством для капсулирования, зарегистрирован в качестве пищевой добавки E440.</p>
<p>В пищевой промышленности пектин используют в производстве начинок для конфет, производстве фруктовых начинок, кондитерских желейных и пастильных изделий (например, зефир, пастила, мармелад), молочных продуктов, десертов, <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%9C%D0%BE%D1%80%D0%BE%D0%B6%D0%B5%D0%BD%D0%BE%D0%B5" target="_blank" rel="noopener">мороженого</a>, спредов, майонеза, кетчупа, сокосодержащих напитков. В фармацевтической и медицинской промышленности его применяют, например, для капсулирования лекарств.</p>
<p>Важное место в увеличении выпуска пектиносодержащих пищевых изделий в России принадлежит яблочному пектину. Пектин из яблочных выжимок составляет 3035 % мирового объема пектиновых веществ и выпускается<br />
в США, Великобритании, Дании, Италии, Германии, Австрии, Болгарии, Польше и Венгрии.</p>
<p>В свежих яблоках протопектин преобладает перед растворимым пектином и составляет 52,3–97,0 % общего количества. Содержание пектина в яблоках невелико – всего 0,95 0,01 %, в том числе нерастворимого – 0,80 0,01 %,<br />
а растворимого – 0,16 0,01 %. При этом наибольшее количество пектиновых веществ сосредоточено в кожице и в семенных камерах.</p>
<p>Схематично строение яблока представлено на рисунке 20.</p>
<p><strong><img width="421" height="255" class="wp-image-5212" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2591.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2591.png 421w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2591-300x182.png 300w" sizes="(max-width: 421px) 100vw, 421px" alt="word image 2591 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></strong></p>
<p><strong>Рисунок 20 </strong>– Схема строения плода яблони:</p>
<p>А зона эпидермиса; В внешняя паренхима; С паренхима семенной камеры; Д семена</p>
<p>Соотношение объемов зоны эпидермиса (кожицы), паренхимы внешней (мякоти) и семенной камеры в зависимости от сорта яблока составляет примерно 25 : 56 : 19.</p>
<p>Внешняя паренхима (В) является структурной основной зоной плода и составляет более, чем 80 % к сухой массе (рисунок 21).</p>
<p>Химический состав зон плода яблони различен, что подтверждают данные, приведенные в таблице 23.</p>
<p>Содержание пектиновых веществ распределяется по зонам следующим образом: А – 4,7–5,2 % к массе сухих веществ; В – 1,8–1,9 %; С и Д – 5,1–5,3 %. При этом наибольшая доля протопектина содержится в кожице, а водорастворимого пектина – в мякоти. Моносахаридный состав пектиновых полисахаридов различных зон яблока также отличается (таблица 24). При этом существенно отличается фракционный состав пектиновых веществ.</p>
<p><img width="614" height="317" class="wp-image-5213" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2592.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2592.png 614w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2592-300x155.png 300w" sizes="(max-width: 614px) 100vw, 614px" alt="word image 2592 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p>С</p>
<p><strong>Рисунок 21 </strong>– Распределение основных структурных зон в плодах яблони</p>
<p><strong>Таблица 23 </strong> Химический состав различных зон яблока, мг/г</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Зоны</td>
<td colspan="8">Углеводный состав спирторастворимых веществ</td>
<td rowspan="2">Белок</td>
<td rowspan="2">Липиды</td>
</tr>
<tr>
<td>Rha</td>
<td>Ara</td>
<td>Xyl</td>
<td>Man</td>
<td>Gal</td>
<td>Glc</td>
<td>GalA</td>
<td>Общее</td>
</tr>
<tr>
<td>А</td>
<td>15</td>
<td>47</td>
<td>34</td>
<td>19</td>
<td>54</td>
<td>154</td>
<td>265</td>
<td>588</td>
<td>57</td>
<td>290</td>
</tr>
<tr>
<td>В</td>
<td>13</td>
<td>83</td>
<td>74</td>
<td>24</td>
<td>98</td>
<td>296</td>
<td>287</td>
<td>875</td>
<td>27</td>
<td>55</td>
</tr>
<tr>
<td>С</td>
<td>11</td>
<td>48</td>
<td>88</td>
<td>23</td>
<td>48</td>
<td>301</td>
<td>283</td>
<td>802</td>
<td>44</td>
<td>62</td>
</tr>
<tr>
<td>Д</td>
<td>13</td>
<td>32</td>
<td>135</td>
<td>28</td>
<td>27</td>
<td>344</td>
<td>253</td>
<td>832</td>
<td>55</td>
<td>38</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 24 </strong> Моносахаридный состав пектиновых полисахаридов в различных зонах плода яблони</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Фракция</td>
<td rowspan="2">Зоны<br />
плода</td>
<td colspan="9">Углеводный состав (mole %)</td>
</tr>
<tr>
<td>Rha</td>
<td>Ara</td>
<td>Xyl</td>
<td>Man</td>
<td>Gal</td>
<td>Glc</td>
<td>GalA</td>
<td>Степень</p>
<p>метокси-</p>
<p>лиров</td>
<td>Общее,<br />
мг/г</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="4">Раство-</p>
<p>римый</p>
<p>пектин</td>
<td>А</td>
<td>1,5</td>
<td>9,6</td>
<td>0,8</td>
<td>0,5</td>
<td>6,3</td>
<td>1,3</td>
<td>80,0</td>
<td>70</td>
<td>582</td>
</tr>
<tr>
<td>В</td>
<td>1,8</td>
<td>22,7</td>
<td>1,0</td>
<td>0,2</td>
<td>11,1</td>
<td>0,4</td>
<td>62,8</td>
<td>71</td>
<td>722</td>
</tr>
<tr>
<td>С</td>
<td>1,9</td>
<td>5,9</td>
<td>0,6</td>
<td>следы</td>
<td>5,4</td>
<td>0,2</td>
<td>86,0</td>
<td>62</td>
<td>516</td>
</tr>
<tr>
<td>Д</td>
<td>2,4</td>
<td>7.4</td>
<td>1,3</td>
<td>1,0</td>
<td>5,8</td>
<td>1,3</td>
<td>80,8</td>
<td>65</td>
<td>428</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="4">Прото-</p>
<p>пектин</td>
<td>А</td>
<td>4,9</td>
<td>9,7</td>
<td>2,9</td>
<td>0,7</td>
<td>8,2</td>
<td>1,8</td>
<td>71,8</td>
<td>52</td>
<td>650</td>
</tr>
<tr>
<td>В</td>
<td>5,7</td>
<td>9,0</td>
<td>4,5</td>
<td>0,4</td>
<td>13,2</td>
<td>2,9</td>
<td>64,3</td>
<td>41</td>
<td>795</td>
</tr>
<tr>
<td>С</td>
<td>6,2</td>
<td>10,7</td>
<td>4,6</td>
<td>0,4</td>
<td>8,4</td>
<td>2,3</td>
<td>67,4</td>
<td>55</td>
<td>759</td>
</tr>
<tr>
<td>Д</td>
<td>7,1</td>
<td>8,4</td>
<td>4,2</td>
<td>0,8</td>
<td>7,3</td>
<td>1,9</td>
<td>70,3</td>
<td>49</td>
<td>692</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Содержание пектиновых веществ в яблоках зависит также от сорта и района произрастания. Так, в 122 образцах яблок Белоруссии содержание пектина составило от 0,42 до 0,79 %, в 129 – от 0,8 до 0,99 %, в 104 – от 1,0 до 1,5 %;<br />
в 13 – от 1,51 до 1,8 % и в 1 – 2,52 %.</p>
<p>В яблоках среднего Урала в 30 образцах содержание пектина составило до 1,0 %, в 130 – до 1,3 %, в 70 – до 1,9 %. Наибольшее количество пектина содержится в яблоках позднеспелых сортов.</p>
<p>При хранении яблок соотношение фракций пектиновых веществ изменяется. Общее содержание пектина, как правило, уменьшается. Так, в яблоках сорта Джонатан в начале хранения содержится 0,78 %, сорта Голден Делишес – 0,80 % пектиновых веществ, а в конце хранения остается 0,54 и 0,59 % соответственно.</p>
<p>Для получения пектина применяют в основном выжимки среднеспелых<br />
и позднеспелых сортов яблок. Однако установлено, что и раннеспелые сорта Кубани по содержанию пектиновых веществ в период их биологической зрелости (2,6–2,7 %) вполне пригодны для получения из них пектина, хотя полученный пектин уступает по чистоте пектину из средне- и позднеспелых сортов (40,1 против 69,7 %).</p>
<p>По степени метоксилирования, количеству свободных и связанных карбоксильных групп, молекулярной массе пектин ранне- и позднеспелых сортов яблок не различается.</p>
<p>В зависимости от физико-химических показателей яблочного вторичного сырья выжимок и типа получаемого пектина в каждом климатическом районе существуют особенности технологии их переработки.</p>
<p>Технология получения яблочного пектина включает в себя следующие технологические процессы:</p>
<p>Сушеные яблочные выжимки перед процессом гидролиза–экстрагирования пектиновых веществ промывают трижды водой температурой 3035 С. При получении пектина с низкой скоростью студнеобразования промывку ведут водой более высокой температуры (температура смеси 5560 С). Гидролиз–экстрагирование пектина осуществляют водным раствором азотной кислоты при рН 1,5–2,0 при температуре гидролизной смеси – 7080 С, соотношении сырья и экстрагента – 1 : (1012) в течение 3,0–3,5 ч в экстракторе периодического действия. По истечении времени процесса на прессах отделяют<br />
А-экстракт. Отпрессованные яблочные выжимки снова загружают в экстрактор, заливают водой температурой 4550 С в соотношении 1 : (1214). Повторное экстрагирование пектиновых веществ ведут в течение 1,52 ч, получая<br />
В-экстракт, который отделяют прессованием суспензии. Влажность отпрессованных выжимок должна быть не более 80 %, остаточное содержание в них пектина – 0,8–1,0 %.</p>
<p>А-экстракт и В-экстракт смешивают и отстаивают 24 ч для отделения большей части механических примесей. Среднее содержание сухих веществ<br />
в экстракте – 1,0–1,2 %, в том числе пектиновых веществ – 0,3–0,4 %. Отстоявшийся экстракт сепарируют и фильтруют на кизельгуровом фильтре. Концентрирование экстракта проводят в двухкорпусных вакуум-выпарных установках непрерывного действия. Температура продукта в первом корпусе не должна превышать 7075 С, во втором – 45 С. Содержание сухих веществ в концентрате составляет 67 %, концентрация спиртоосаждаемых пектиновых веществ – 2,5–3,5 %, рН концентрата – 1,7–2,2.</p>
<p>Дальнейшее концентрирование до большего содержания сухих веществ считается нецелесообразным, так как повышаются вязкость и кислотность экстракта. Полученный концентрат охлаждают до 25 С, используя для этого пластинчатый теплообменник. Осаждение пектиновых веществ осуществляют этиловым техническим или ректификованным спиртом, крепостью 9095 %. Объемное количество спирта на один объем пектинового концентрата составляет три части. Во избежание выпадения вместе с пектином минеральных примесей осаждение пектиновых веществ ведут при рН 1,7–1,9. Если значение рН концентрата выше, вводят спирт, подкисленный азотной кислотой.</p>
<p>Получаемая пектиноспиртовая суспензия непрерывно поступает на разделение в центрифугу типа ОГШ-353К-09. После центрифугирования пектиновый коагулят с влажностью 7075 % непрерывно ссыпается в промыватель, в который непрерывно подается спирт с крепостью 70 %об. в соотношении 1 : 8. Суспензия первой промывки поступает самотеком на разделение в центрифугу такого же типа. Сырой пектин снова ссыпается в промыватель, где осуществляется вторая промывка спиртом крепостью 9095 %об. в соотношении 1 : 8. Суспензия второй промывки также поступает в центрифугу для отделения пектина. Очищенный пектин подают на сушку.</p>
<p>Сушку осуществляют в барабанной вакуум-сушилке при 5560 С, оборудованной устройствами для удаления конденсированного спирта без остановки процесса, улавливания паров спирта и пектиновой пыли. Продолжительность сушки 23 ч. Сухой пектин измельчают, сушат и направляют на купажирование.</p>
<p>В научно-исследовательской работе использовали пищевой пектин (в соответствии с требованиями нормативного документа «ГОСТ 29186-91. Пектин. Технические условия») – который должен представлять собой порошок тонкого помола без посторонних примесей, однако, допускается наличие волокнистой фракции пектина в виде хлопьев; слабокислый, без запаха, цвет ‒ от светло-серого до кремового, массовая доля влаги – не более 10 %, степень этерификации – от 60 до 70 % в зависимости от типа, студнеобразующая способность – 170 или 200 (не менее, в зависимости от сорта), массовая доля нитратов в расчете на ион NO – не более 0,18 %, массовая доля частиц волокнистой фракции размером более 0,5 мм должна быть не более 20 % и посторонние примеси, видимые невооруженным глазом, должны отсутствовать.</p>
<h3><strong>2.6 ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ ПОЛИСАХАРИДОВ (АЛЬГИНАТОВ) ИЗ ВОДОРОСЛЕЙ</strong></h3>
<p>Водоросли составляет подавляющую часть фитобентоса Мирового океана, являясь уникальным сырьем для получения ценных пищевых, технических<br />
и медицинских продуктов. Морские водоросли обладают кумулятивной способностью к накоплению разнообразного комплекса микроэлементов, в частности йода, в количествах, значительно превышающих их содержание в окружающей среде.</p>
<p>Уникальной особенностью водорослей является их способность синтезировать и накапливать комплекс полиуроновых кислот, известных под названием «альгиновая кислота», которая в виде альгинатов – солей кальция, магния, натрия – содержится в макрофитах, принадлежащих к родам <em>Macrocystis</em>, <em>Laminaria</em>, <em>Fucus</em> (Наумов И. А. [и др.], 2014).</p>
<p>Альгиновая кислота – полимер уроновых (гулуроновой и маннуровой кислот, соединенных по 1–4 глюкозидным связям) различной степени полимеризации (СП), в результате чего ее молекулярный вес и реологические свойства значительно варьируют. Альгиновая кислота и ее соли способны к 200–300-кратному поглощению воды, образуя гели, для которых характерна высокая кислотоустойчивость. В пищевой промышленности они используются в качестве эмульгаторов, стабилизаторов, желирующих и влагоудерживающих компонентов. В тканях водорослей альгиновые кислоты находятся в форме калиевых, натриевых или кальциевых солей, входящих в состав клеточных стенок, локализованных в межклеточных пространствах слизевых каналов. Водоросли используются в качестве источника альгинатов с целью получения из них неочищенных биогелей, что является альтернативой и позволяет решать многие проблемы, связанные с комплексным использованием сырья и обеспечением населения альгинатсодержащими продуктами (Hecht H., Srebnik S., 2016).</p>
<p>Одной из солей альгиновой кислоты, нашедшей широчайшее использование, является альгинат натрия. Это вещество представляет собой натриевую соль альгиновых кислот, хорошо растворимую в воде.</p>
<p>Альгинат натрия – полисахарид, построенный из единиц D-маннуроновой кислоты, соединенных β–(1,4)–глюкозидными связями. Молекулярный вес альгината натрия колеблется от 50000 до 200000 и зависит от степени полимеризации, которая может достигать 750.</p>
<p>Выпускается для пищевых и технических целей. Образцы отличаются друг от друга чистотой и величиной основных показателей. Альгинат натрия хорошо растворим в воде. Альгинаты биосовместимы, биодеградируемы и относительно недороги в производстве, хорошо растворяются в воде и обладают высокой водоудерживающей способностью, легко образуют гидрогели. Благодаря всему этому альгинаты нашли широкое применение в качестве загустителей, гелеобразователей и стабилизаторов в медицине и фармацевтике, а также в текстильной индустрии. Но особенно широко применение альгинатов в сфере производства продуктов питания, в частности – соусов, паст, желирующих заливок, крем-супов, мороженого и т. д.</p>
<p>Технология получения альгината натрия включает в себя следующие этапы:</p>
<p>Измельченные до размера 3‒5 мм или воздушно-сушеные водоросли, предварительно замоченные и промытые в воде, смешивают с 1‒2%-м раствором поваренной соли в соотношении 1 : 10‒1 : 15, обрабатывают в анодной камере диафрагменного электролизера, снабженного рубашкой с подогревом, до достижения рН ≤ 2,0 и выдерживают при температуре 40‒50 °С<br />
в течение 0,5‒1 ч.</p>
<p>В другом варианте, после электрохимической обработки, т. е. после достижения рН ≤ 2,0, при комнатной температуре в анодной камере элекролизера без тепловой рубашки смесь водорослей с раствором электролита сливают в емкость (реактор с подогревом и мешалкой) и выдерживают при температуре 40‒50 °С при постоянном перемешивании в течение 2 ч.</p>
<p>Отделенные от раствора электролита и промытые водоросли заливают 1‒2 % раствором NaCl в соотношении 1 : 30‒1 : 50 и обрабатывают в катодной камере электролизера, снабженного рубашкой для подогрева, при рН ≥ 12,0 и температуре 60 °С при постоянном перемешивании в течение 0,5‒1 ч (альгиновая варка) до получения однородной вязкой массы, т. е. до полного экстрагирования альгинатов из обрабатываемого сырья, или, в другом варианте, после достижения рН ≥ 12,0 в катодной камере электролизера без тепловой рубашки смесь переводят в реактор с мешалкой и подогревом и выдерживают в нем при температуре 50‒60 °С и постоянном перемешивании в течение 2‒3 ч. Далее смесь фильтруют и охлаждают до 18 °С. Фильтрат помещают в анодную камеру электролизера и обрабатывают при постоянном перемешивании до достижения рН ≤ 2,0 и полного осаждения альгиновой кислоты (перевод в нерастворимую форму), которую затем промывают холодной водой. Промытую альгиновую кислоту смешивают с горячей водой при температуре 80‒90 °С в соотношении 1 : 2 и выдерживают 1‒2 ч для коагуляции. Воду сливают и дают альгиновой кислоте обтечь в течение 30 мин. Осадок альгиновой кислоты сушат и расфасовывают. Полученная светлая альгиновая кислота представляет собой готовый продукт или может служить полуфабрикатом для получения альгината натрия.</p>
<p>Для получения альгината натрия альгиновую кислоту смешивают с 0,5‒1,0 % раствором NaCl в соотношении 1 : 10 и обрабатывают в катодной камере электролизера при слабощелочной реакции среды (рН не выше 8,0)<br />
в течение 0,5 ч. Раствор альгината натрия направляется в бак-накопитель,<br />
а затем на сушку, дробление, расфасовку и упаковку. Образующиеся стоки после анодной и катодной обработки взаимно нейтрализуются.</p>
<p>В научно-исследовательской работе использовали пищевой альгинат натрия (в соответствии с требованиями нормативного документа ТУ 15-544-83 «Альгинат натрия пищевой. Технические условия») – который должен представлять собой сухой порошок или небольшие тонкие пластинки, его окраска колеблется в зависимости от сырья – от кремовой (из ламинарных водорослей) до коричневой (из фукусов). Массовая доля влаги в продукте не должна быть выше 16 %; массовая доля золы (в пересчете на сухое вещество) – не выше 26 %; количество веществ, не растворимых в кипящей воде – не выше 0,3 %; содержание альгиновой кислоты – не менее 70 % (в пересчете на сухое вещество); кинематическая вязкость 1 %-го раствора альгината натрия (в пересчете на сухое вещество) при температуре 20 °С не должна быть ниже 30 сСт.</p>
<h3><strong>2.7 ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ ПОЛИСАХАРИДОВ (КСАНТАНА) МИКРОБНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ</strong></h3>
<p>Ксантановая камедь (ксантан) природное химическое соединение (<a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%A3%D0%B3%D0%BB%D0%B5%D1%80%D0%BE%D0%B4" target="_blank" rel="noopener">C</a><sub>35</sub><a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%92%D0%BE%D0%B4%D0%BE%D1%80%D0%BE%D0%B4" target="_blank" rel="noopener">H</a><sub>49</sub><a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%9A%D0%B8%D1%81%D0%BB%D0%BE%D1%80%D0%BE%D0%B4" target="_blank" rel="noopener">O</a><sub>29</sub>)<sub>n</sub>, пищевая добавка Е415, относится к группе стабилизаторов.</p>
<p>По химической природе ксантановая камедь представляет собой полисахарид, полученный путем ферментации с использованием бактерии <em>Xanthomonas campestris</em>. В жизненном цикле бактерий служит им защитой от вирусов и пересыхания, поэтому может использоваться в косметических средствах для увлажнения кожи. Производство ксантана основано на аэробном брожении в водном растворе углеводов, источника азота и др., после чего среду пастеризуют<br />
и осаждают спиртом или очищают методом микрофильтрации.</p>
<p>Свойства ксантана регулируют, изменяя условия жизни бактерий. Главная цепь полимера идентична молекуле целлюлозы. Ответвления представляют собой остатки молекул глюкозы, <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%9C%D0%B0%D0%BD%D0%BD%D0%BE%D0%B7%D0%B0" target="_blank" rel="noopener">маннозы</a>, глюкуроновой кислоты, а также <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%9F%D0%B8%D1%80%D0%BE%D0%B2%D0%B8%D0%BD%D0%BE%D0%B3%D1%80%D0%B0%D0%B4%D0%BD%D0%B0%D1%8F_%D0%BA%D0%B8%D1%81%D0%BB%D0%BE%D1%82%D0%B0" target="_blank" rel="noopener">пировинограднокислые</a> (пируватные) и ацетильные группы. Число пируватных групп определяет вязкость водных растворов ксантана. Для пищевых целей кислотные группы нейтрализуют, переводя ксантан в калиевые, натриевые или кальциевые <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%A1%D0%BE%D0%BB%D0%B8" target="_blank" rel="noopener">соли</a>.</p>
<p>Впервые ксантан был получен в конце 1950-х гг. в Северной Региональной научно-исследовательской лаборатории (NRRL) Министерства сельского хозяйства США группой исследователей во главе с Розалиндой Джинсе, которая вместе с другими исследователями, внесла заметный вклад в исследование структуры этого полисахарида.</p>
<p>Экзополисахариды фитопатогенных бактерий рода <em>Xanthomonas </em>являются гетерополисахаридами. Моносахаридный состав их сходен. В большинстве случаев они содержат D-глюкозу, D-маннозу, D-глюкуроновую кислоту. При сходном качественном составе, существуют значительные отличия в молярном соотношении даже у штаммов <em>Xanthomonas </em>одного вида – у некоторых преобладает глюкоза, у других соотношение глюкозы и маннозы одинаково или сдвинуто в сторону маннозы. Углеводный состав ксантана сложно изучить из-за высокой устойчивости целлюлозной основы к гидролизу.</p>
<p>Основная цепь ксантана состоит из (1→4)глюкопиранозы. Каждый второй остаток глюкопиранозы имеет трисахаридную боковую цепь, которая прикрепляется к остатку глюкопиранозы основной цепи. Боковая цепь содержит два остатка маннозы и остаток глюкуроновой кислоты. Одна молекула маннопиранозы соединена с остатком глюкопиранозы основной цепи связью (1→3),<br />
а с глюкуроновой кислотой β 1→2 связью. Конечный β–маннопиранозный остаток связан с остатком β-глюкуроновой кислоты связью 1→4, которая,<br />
в свою очередь, (1→2) связью прикреплена к неконечному остатку<br />
α-маннопиранозы. Одна молекула α-маннопиранозы ацетилирована в положении О – 6, маннопираноза, находящаяся в конце боковой цепи включает пировиноградную кислоты. Химический состав ксантана может варьироваться в зависимости от способа получения биополимера.</p>
<p>Химическое строение молекул ксантана обеспечивает ему многообразие функционально-технологических свойств: высокую растворимость в холодной и горячей воде; стабильность в растворах при низких и высоких температурах<br />
и широком диапазоне рН от 1 до 13, к действию ферментов; к предотвращению синерезиса (отделение влаги) в продукте и др.</p>
<p>В пищевой промышленности ксантан используют при производстве молочных пудингов, сметаны, йогуртов, мороженого, майонеза и других пищевых продуктов (Липатов Н. Н., 1987; Губанова Т. С., 2001; Горощенко Г., 2003).</p>
<p>В косметической промышленности ксантан применяют при изготовлении солнцезащитных лосьонов и кремов, в том числе для автозагара; очищающих средств и кремов для лица, тела; краски для волос; шампуней и гелей для душа; зубных паст.</p>
<p>В фармацевтической индустрии ксантан находит применение при производстве пероральных лекарственных препаратов (капсулы, порошки) и препаратов местного действия (мази, гели, линименты). При использовании 5 % этого вещества изменяются реологические свойства коллоидной системы, что положительно влияет на структуру производимых продуктов. Последние годы получило развитие производство микробных экзополисахаридов в сравнении<br />
с получением полисахаридов из высших организмов. К числу таких веществ принадлежат полисахариды, использующиеся в медицинской и пищевой отраслях промышленности (Шацкая Н. Г., 1994; Забодалова П. А., 2000; Wes­sels S., 2004). Это связано с тем, что микробные полисахариды имеют более разнообразные функциональные свойства, легко воспроизводимы и безопасны, получаются независимо от времени года с наименьшими затратами (Гвоздяк Р. И., 1989).</p>
<p>Ряд авторов отмечают, что ксантан является иммуностимуляторам<br />
и проявляет лечебно-профилактические свойства при язвенной болезни, гипертонии, атеросклерозе, онкологических заболеваниях (Шендеров Б. А., 1998; Мартынов А. В., 1999).</p>
<p>Основными физическими свойствами полисахаридов являются способность к набуханию и растворению в холодной или горячей воде с образованием гелей. На эти свойства в зависимости от вида полисахарида влияют следующие факторы: температура, активная pH среды, структура и его состав, происхождение, а также степень очистки. Применение полисахарида в пищевой промышленности в качестве структурообразователей определяется их технологическими свойствами.</p>
<p>В последние годы, в связи с увеличивающимся объемом производства кисломолочных продуктов с длительным сроком хранения, повысился интерес к закваскам, образующим вязкие сгустки, которые обладают влагоудерживающей способностью. Было установлено, что такие закваски при сквашивании молока продуцируют экзополисахариды, которые являются естественными загустителями, заменяющими стабилизаторы растительного и животного происхождения.</p>
<p>Особенно важным является использование штаммов продуцирующих ксантан для улучшения реологических свойств и функциональных характеристик кисломолочных продуктов в странах, где запрещено использование стабилизаторов. Эта особенность на сегодняшний день находится в центре внимания среди производителей продуктов питания.</p>
<p>На основании всего вышеизложенного, можно выделить основные функции ксантана, которые имеют важное значение в пищевой, косметологической и фармацевтической промышленностях:</p>
<ul>
<li>стабилизирует эмульсии и суспензии в широком диапазоне температур;</li>
<li>при механическом воздействии (при перемешивании, перекачке и на­полнении тары) вязкость продукта, стабилизированного ксантаном, понижается с последующим восстановлением;</li>
<li>способствует пенообразованию и стабилизирует пену;</li>
<li>образует прозрачный раствор, пригодный для загущения прозрачных продуктов;</li>
<li>легко диспергируется.</li>
</ul>
<p>Технология получения ксантана включает в себя следующие этапы:</p>
<p>В состав ферментационной среды для культивирования продуцента (<em>Xanthomonas campestris</em>) ксантана входят источник сахаров (упаренный гидролизат древесного сырья – УГДС), кукурузный экстракт (ростовой фактор), аммоний сернокислый, калий фосфорнокислый однозамещенный, магний сернокислый и вода.</p>
<p>Основой источника сахаров является отход – древесная щепа. Размер исходных частиц щепы варьирует в широком пределе и зависит от вида древесины. Гидролиз щепы может быть как кислотным, так и ферментативным. В любом варианте гидролиз проводят известным образом.</p>
<p>Выращивание посевного материала проводят на скошенной агаризованной среде. В качестве среды для твердофазного культивирования используют агаризованный 2 % агара бульон МПА с добавлением 2 % стерильной глюкозы. Полученную среду в асептических условиях разливают в стерильные пробирки<br />
с ватными пробками. Укладывают пробирки на валик для получения скошенной твердой среды. После остывания и затвердения агаризованной среды<br />
в пробирках, их помещают в термостат при температуре 37 °C на 5 сут для проращивания.</p>
<p>Через 5 сут отбирают визуально стерильные пробирки со скошенной агаризованной средой и производят в асептических условиях посев культуры продуцента ксантана микробиологической петлей с пробирки с культурой, проверенной на отсутствие контаминантов визуально и микроскопированием, хранящейся в холодильнике не более 20 сут.</p>
<p>Пробирки после посева помещают в термостат при температуре 2728 °C на 24 ч. Посевная среда для выращивания в колбах имеет следующий состав, г/л: УГДС (по глюкозе) 10,0; кукурузный экстракт 15,0; аммоний сернокислый 1,0; калий фосфорнокислый однозамещенный 1,5; магний сернокислый пятиводный 0,7; водопроводная вода остальное.</p>
<p>В асептических условиях посевную среду по 10 мл заливают в пробирки<br />
с культурой, полученной ранее, и производят смыв культуры с поверхности агаризованной среды стерильной пипеткой. Среду с культурой из пробирок асептически переносят в посевную среду. Перемешивают и разливают по стерильным колбам емкостью 250 мл по 30 мл в каждую колбу. Приготовленные колбы устанавливают на качалке. Включают перемешивание на 380400 об./мин и устанавливают температуру культивирования 2628 °C.<br />
В установленном режиме колбы культивируют в течение 24 ч. Затем снимают их с качалки и в асептических условиях сливают посевной материал из каждой колбы в стерильную колбу с нижним тубусом, шлангом и зажимом на нем. Из этой колбы отбирают пробу усредненного посевного материала из колб и осуществляют проверку посевного материала на отсутствие контаминантов микроскопированием и высевом на твердую питательную среду.</p>
<p>При культивировании продуцента ксантана в биореактор, в котором находится 8 л стерильной УГДС, вносят ранее полученный посевной материал, а также ранее подготовленные стерильные растворы солей и ростового фактора. Включают подачу стерильного воздуха в биореактор. Процесс проводят при термостатировании и перемешивании содержимого биореактора.<br />
В процессе культивирования из биореактора периодически отбирают пробу на отсутствие контаминантов, оптическую плотность и содержание редуцирующих веществ (РВ, по глюкозе). По показаниям контрольного pH-метра корректируют значение pH в начальной ферментационной среде. При соблюдении всех вышеперечисленных условий, в асептических условиях присоединяют к биореактору колбу с 2 л посевного материала и переносят содержимое колбы в биореактор. Затем культивирование продуцента ксантана осуществляют в биореакторе.</p>
<p>В течение всего процесса культивирования из биореактора периодически отбирают пробу культуральной жидкости для контроля на отсутствие контаминантов, определения концентрации биомассы и ксантана и концентрации остаточных РВ. При необходимости проводят корректировки состава питательной среды.</p>
<p>Окончание процесса культивирования определяется по результатам анализа проб из биореактора на содержание РВ и показаниям датчика измерения парциального давления растворенного кислорода. По окончании процесса культивирования культуральную жидкость сливают из биореактора через нижний штуцер в пластиковые канистры и культуральная жидкость поступает на стадию выделения ксантана.</p>
<p>Культуральную жидкость обрабатывают этиловым спиртом при перемешивании, отделяют спиртовую фракцию, из которой любым известным способом (предпочтительно, выпариванием спирта) выделяют ксантан.</p>
<p>В научно-исследовательской работе использовали ксантан пищевой<br />
(в соответствии с требованиями нормативного документа ГОСТ 333332015 «Добавки пищевые. Камедь ксантановая Е415. Технические условия»), который должен представлять собой белый, кремово-белый или серовато-белый сыпучий порошок, без запаха, растворим в дистиллированной воде и нерастворим в этиловом спирте. По физико-химическим показателям ксантан при проведении теста на гелеобразование должен давать положительный результат, массовая доля основного вещества в высушенной ксантановой камеди 91,0108,0 %, что соответствует массовой доли диоксида углерода (СО<sub>2</sub>) 4,25,0 %; массовая доля потерь при высушивании – не более 15,0 %; массовая доля потерь при прокаливании – не более 16,0 %; массовая доля пировиноградной кислоты – не менее 1,5 %; массовая доля азота – не более1,5 %; массовая доля этилового или изопропилового спирта, или суммарно – не более 0,05 %.</p>
<h3><strong>2.8 ВЛИЯНИЕ ПОЛИСАХАРИДНЫХ КОМПОНЕНТОВ РАЗЛИЧНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ НА ВЫЖИВАЕМОСТЬ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ</strong></h3>
<p>Немаловажным показателем пробиотических свойств молочнокислой флоры является их способность колонизировать желудочно-кишечный тракт,<br />
а также их резистентность к биологическим жидкостям организма-хозяина (Андрейчин М. А., 1980; Петров Л. Н., 2002; Буряко И. А. [и др.], 2004). Последний показатель визуализировали по наличию или отсутствию роста изучаемой микрофлоры в жидкой питательной среде, содержащей натуральный желудочный сок лошади (препарат «Эквин»), желчь крупного рогатого скота медицинская консервированная (20 %, 30 %, 40 %), фенол (0,4 %) и NaCl (2 %, 4 %) (Лабинская А. С., 1978; МУ 2.3.2.2789-10). Результаты по влиянию агрессивных сред на выживаемость лактобактерий без применения полисахаридных компонентов представлены в таблице 25.</p>
<p><strong>Таблица 25 </strong>– Устойчивость лактобацилл к агресивным средам<br />
без полисахаридов</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Штамм</td>
<td colspan="2">Рост в питательной среде, содержащей NaCl</td>
<td colspan="3">Рост в питательной<br />
среде, содержащей желчь</td>
<td rowspan="2">Рост в питательной среде, содержащей фенол (0,4 %)</td>
<td rowspan="2">Рост в питательной среде, содержащей желудочный сок</td>
</tr>
<tr>
<td>2 %</td>
<td>4 %</td>
<td>20 %</td>
<td>30 %</td>
<td>40 %</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">Примечание: «+» – хороший рост; «±» – слабый рост.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты исследований показали, что культуры изучаемых лактобактерий проявили хороший рост только на среде с содержанием 2,0 и 4,0 % хлорида натрия, а также при наличии в среде желчии – в концентрации 20 %. Незначительный рост дала культура <em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b на питательной среде, содержащей 30 % желчи. В остальных случаях рост исследуемых культур<br />
не проявился.</p>
<p>Результаты влияния различных доз микробных полисахаридов (ксантана) на выживаемость лактобацилл, представлены в таблице 26.</p>
<p><strong>Таблица 26 </strong>– Устойчивость лактобацилл к агресивным средам с добавлением ксантана</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Штамм</td>
<td colspan="2">Рост в питательной среде, содержащей NaCl</td>
<td colspan="3">Рост в питательной<br />
среде, содержащей желчь</td>
<td rowspan="2">Рост в питательной среде, содержащей фенол (0,4 %)</td>
<td rowspan="2">Рост в питательной среде, содержащей желудочный сок</td>
</tr>
<tr>
<td>2 %</td>
<td>4 %</td>
<td>20 %</td>
<td>30 %</td>
<td>40 %</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
<td>7</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,1 % ксантана</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,2 % ксантана</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,3 % ксантана</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8"><em>Продолжение таблицы 26</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
<td>7</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,4 % ксантана</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,5 % ксантана</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">Примечание: «+» – хороший рост; «±» – слабый рост.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Проведенные результаты исследований показали, что использование в составе питательных сред ксантана в изучаемых концентрациях (0,1‒0,5 %) не оказало влияния на жизнеспособность изучаемых лактобактерий при действии на них агресивных растворов. Из таблиц 26 видно, что культуры изучаемых лактобактерий проявили хороший рост, как и в случае отсутствия полисахаридных компонентов, только на среде с содержанием 2,0 и 4,0 % хлорида натрия,<br />
а также при наличии в среде желчи в концентрации 20 %. В остальных вариантах рост изучаемых лактобацилл не проявился или был незначительным.</p>
<p>Результаты влияния различных доз полисахаридов из водорослей (альгината натрия) на выживаемость лактобацилл представлены в таблице 27.</p>
<p>Серия проведенных экспериментов с использованием в составе питательных сред различных доз альгината натрия (таблица 27) показала, что в дозе полисахарида 0,3; 0,4 и 0,5 % наблюдается хороший рост лактобацилл не зависимо от действия на них изучаемых агрессивных растворов.</p>
<p><strong>Таблица 27 </strong>– Устойчивость лактобацилл к агресивным средам с добавлением альгината натрия</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Штамм</td>
<td colspan="2">Рост в питательной среде, содержащей NaCl</td>
<td colspan="3">Рост в питательной<br />
среде, содержащей желчь</td>
<td rowspan="2">Рост в питательной среде, содержащей фенол (0,4 %)</td>
<td rowspan="2">Рост в питательной среде, содержащей желудочный сок</td>
</tr>
<tr>
<td>2 %</td>
<td>4 %</td>
<td>20 %</td>
<td>30 %</td>
<td>40 %</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
<td>7</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,1 % альгинат натрия</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,2 % альгинат натрия</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,3 % альгинат натрия</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,4 % альгинат натрия</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,5 % альгинат натрия</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8"><em>Продолжение таблицы 27</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
<td>7</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">Примечание: «+» – хороший рост; «±» – слабый рост.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты влияния дозличных доз полисахаридов растительного происхождения (пектина) на устойчивость лактобактерий к агрессивным средам представлены в таблице 28.</p>
<p><strong>Таблица 28 </strong>– Устойчивость лактобацилл к агресивным средам с добавлением пектина</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Штамм</td>
<td colspan="2">Рост в питательной среде, содержащей NaCl</td>
<td colspan="3">Рост в питательной<br />
среде, содержащей желчь</td>
<td rowspan="2">Рост в питательной среде, содержащей фенол (0,4 %)</td>
<td rowspan="2">Рост в питательной среде, содержащей желудочный сок</td>
</tr>
<tr>
<td>2 %</td>
<td>4 %</td>
<td>20 %</td>
<td>30 %</td>
<td>40 %</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
<td>7</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,1 % пектина</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,2 % пектина</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,3 % пектина</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8"><em>Продолжение таблицы 28</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
<td>7</td>
<td>8</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>−</td>
<td>±</td>
<td>−</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,4 % пектина</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>±</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">0,5 % пектина</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="8">Примечание: «+» – хороший рост; «±» – слабый рост.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Из таблицы видно, что наилучшие результаты исследований проявились<br />
с применением в составе питательной среды, на которой выращивали изучаемые лактобактерии, пектина в экспериментально-максимальной дозе 0,5 %.</p>
<p>Таким образом, проведенные исследования показали, что выделенные из желудочно-кишечного тракта фазана лактобациллы за счет использования полисахаридного компонента способны проявлять резистентность к фенолу, желчи, хлориду натрия и желудочному соку, что позволяет предложить данные культуры микроорганизмов в качестве основных объектов для конструирования биопрепарата с высокой пробиотической активностью, а также рекомендовать для максимальной выживаемости лактобацилл, в состав пробиотического препарата Галлобакт-Ф вносить полисахаридную смесь на основе альгината натрия в дозе 0,3 %.</p>
<h3><strong>2.9 ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИКА ГАЛЛОБАКТ-Ф-ПЛЮС</strong></h3>
<p>Галлобакт-Ф-Плюс включает в себя ассоциацию трех видов молочнокислых бактерий: <em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b, <em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5, <em>Lactobacillus </em>sp. PC18A с добавлением в состав пробиотика полисахарада ‒ альгината натрия. Все штаммы не являются генномодифицированными.</p>
<p>Готовая добавка состоит из жизнеспособных штаммов молочнокислых бактерий и имеет титр в количестве не менее 1,0 × 10<sup>9</sup> КОЕ/см<sup>3</sup> (колониеобразующих единиц) и представляет жидкость со слабым, специфическим для данного продукта запахом, так как содержит вспомогательные вещества – воду, мелассу свекловичную, молоко или молочную сыворотку, а также альгинат натрия.</p>
<p>Технологический процесс производства Галлобакт-Ф-Плюс включает в себя следующие стадии:</p>
<ul>
<li>получение чистых культур <em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b, <em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5, <em>Lactobacillus </em>sp. PC18A и их хранение;</li>
<li>размножение чистых культур <em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b, <em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5, <em>Lactobacillus </em>sp. PC18A на обезжиренном молоке по отдельности в течение 1–3 сут при температуре 30–35 °С в пробирках в лабораторных условиях;</li>
<li>приготовление маточной культуры (культурной жидкости) в колбах<br />
и трехлитровых банках на основе данных микроорганизмов;</li>
<li>культивирование штаммов с добавлением полисахаридных компонентов растительного происхождения в ферментере;</li>
<li>расфасовка препарата;</li>
<li>хранение готовой продукции.</li>
</ul>
<p>Используемые культуры микроорганизмов имеют постоянный размер – это небольшие палочки размером от 3–4 мкм и толщиной до 0,5 мкм (рисунки 22–24). Полиморфизм, который очень часто наблюдается у отдельных видов лактобацилл, не выявлен. В процессе жизнедеятельности клетки становятся короче и уменьшаются в размере, что связано с их старением.</p>
<p><img width="1151" height="866" class="wp-image-5214" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-c-users-a33c1-appdata-local-.jpeg" alt="Описание: Описание: C:\Users\A33C~1\AppData\Local\Temp\Rar$DI36.696\2-4 мазок 2 поле 01.bmp" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-c-users-a33c1-appdata-local-.jpeg 1151w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-c-users-a33c1-appdata-local--300x226.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-c-users-a33c1-appdata-local--1024x770.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-c-users-a33c1-appdata-local--768x578.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1151px) 100vw, 1151px" /></p>
<p><strong>Рисунок 22 </strong> Микроскопия клеток <em>Lactobacillus salivarius</em> PC20b через 24 ч культивирования</p>
<p><img width="1360" height="1024" class="wp-image-5215" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-f-image_011231_014-jpg.jpeg" alt="Описание: Описание: F:\image_011231_014.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-f-image_011231_014-jpg.jpeg 1360w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-f-image_011231_014-jpg-300x226.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-f-image_011231_014-jpg-1024x771.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-f-image_011231_014-jpg-768x578.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1360px) 100vw, 1360px" /></p>
<p><strong>Рисунок 23 </strong> Микроскопия клеток <em>Lactobacillus</em> sp. PC18A через 24 ч<br />
культивирования</p>
<p><img width="1360" height="1024" class="wp-image-5216" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-f-image_011231_014-jpg-1.jpeg" alt="Описание: Описание: F:\image_011231_014.JPG" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-f-image_011231_014-jpg-1.jpeg 1360w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-f-image_011231_014-jpg-1-300x226.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-f-image_011231_014-jpg-1-1024x771.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/opisanie-opisanie-f-image_011231_014-jpg-1-768x578.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1360px) 100vw, 1360px" /></p>
<p><strong>Рисунок 24 </strong> Микроскопия клеток <em>Lactobacillus curvatus</em> PC723_5 через 24 ч культивирования</p>
<p><em>Размножение штаммов микроорганизмов в пробирках в лабораторных условиях</em>. Культуры лактобактерий засевают в стерильное обезжиренное молоко (обрат) в пробирки. Культивируют 72 ч при температуре 37 ºС.</p>
<p><em>Культивирование штаммов микроорганизмов в трехлитровых емкостях</em>. Питательная среда для маточной культуры I генерации бактерий готовится тоже на основе обезжиренного молока, разведенного в два раза водопроводной водой.</p>
<p>Маточная культура II генерации бактерий в трехлитровых банках культивируется на обезжиренном молоке (обрате), разведенном в три раза водопроводной водой.</p>
<p>Рост маточной культуры I и II генерации длится 5–7 дней при температуре 35–38 ºС. После этого производят контроль чистоты культур. При хорошем качестве маточной культуры ее передают для засева в ферментеры.</p>
<p><em>Культивирование используемых штаммов в ферментерах</em>. Производственная среда для бактерий готовится на основе обезжиренного молока или молочной сыворотки (четвертая часть от объема среды), воды водопроводной и 2,0 % мелассы. В качестве компонента, обеспечивающего пребиотические свойства добавки, а также максимальную выживаемость культур лактобактерий в желудочно-кишечном тракте, добавляют 0,3 % смеси полисахарида растительного происхождения (альгинат натрия). В подготовленные питательные среды вносят маточные закваски в количестве 3– % от объема среды. Ферментация культур длится 2−3 сут при температуре 35–38 ºС в анаэробных условиях. Во время ферментации регулярно берутся пробы для контроля происходящего процесса. Контролируется рН препарата, чистота культивируемого штамма. В конце процесса берутся пробы для определения титра. Титр лактобактерий в жидкой форме препарата должен быть не менее 50 млн живых бактериальных клеток в 1 см<sup>3</sup>.</p>
<p>Получение готового продукта Галлобакт-Ф-Плюс заключается в совместном культивировании молочнокислых микроорганизмов: <em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b, <em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5, <em>Lactobacillus </em>sp. PC18A<em>.</em></p>
<p><em>Оснащение и подготовка ферментера. </em>Ферментер должен быть оснащен необходимым оборудованием для выполнения следующих технологических операций: культивирование штаммов молочнокислых микроорганизмов; перемешивание; рН-статирование; регистрация значения рН в постоянном режиме; посев через инокуляционную емкость с помощью перистальтического насоса.</p>
<p><em>Приготовление питательной среды.</em> После полного растворения всех компонентов среды, доводят рН раствора до значения 7,0–7,2, используя 25%-й водный аммиак.</p>
<p><em>Стерилизация питательной среды. </em>Стерилизацию осуществляют по следующему режиму: нагрев и выдержка при температуре 121 ± 1 С в течение<br />
20 мин для удаления воздуха из ферментера; нагрев до температуры 121 ± 1 С (1,0 атм.) с выдержкой при этой температуре 30 мин и пропаркой всех отводов; охлаждение питательной среды до температуры 37 С, поддерживая избыточное давление в полости ферментера 0,04 ± 0,01 МПа.</p>
<p>В момент стерилизации питательной среды для штаммов молочнокислых микроорганизмов инокуляционная емкость с маточной культурой и емкость<br />
с раствором 25%-го водного аммиака должны быть установлены и присоединены к ферментеру.</p>
<p>После достижения питательной средой температуры 37 С значения рН необходимо установить на уровне 7,0. В случае необходимости микробиолог сообщает оператору и асептически осуществляет контрольный отбор пробы для химического анализа и контроля стерильности.</p>
<p><em>Инокуляция маточной культуры. </em>Инокуляция осуществляется путем асептической передачи жидкой маточной культуры из инокуляционной емкости<br />
в ферментер с помощью перистальтического насоса. В момент передачи в полости ферментера должно поддерживаться избыточное давление на уровне 0,01−0,02 МПа.</p>
<p><em>Режим культивирования. </em>Культивирование штаммов молочнокислых микроорганизмов осуществляется в течение 20−22 ч с соблюдением следующих параметров:</p>
<ul>
<li>температура – 37–40 С;</li>
<li>перемешивание – 15–20 об./мин.;</li>
<li>аэрирование – отсутствует (избыточное давление воздухом 0,04 МПа).</li>
</ul>
<p>Оператор сообщает микробиологу о необходимости отбора контрольной пробы через 16–18 и 30–32 ч культивирования. Отбор пробы осуществляется через предварительно пропаренный в течение 15 мин пробоотборник.</p>
<p><em>Завершение ферментации. </em>На основании анализа контрольной пробы микробиолог дает заключение о завершении процесса культивирования. Перед розливом готового продукта в тару хранения оператор сообщает микробиологу<br />
о необходимости отбора проб готовой продукции. В течение часа после расфасовывания готовый продукт должен быть размещен на хранение в холодильной камере либо реализован потребителю.</p>
<p><em>Контрольные точки. </em></p>
<ul>
<li>стерильность воздуха перед входом в ферментер (при необходимости);</li>
<li>контроль стерильности и химический анализ питательной среды после стерилизации (при необходимости);</li>
<li>контрольная проба продукта через 16–18 ч (обязательно);</li>
<li>контрольная проба готового продукта (обязательно).</li>
</ul>
<p><em>Расфасовка препарата</em>. Галлобакт-Ф-Плюс расфасовывают по 2,0; 5,0; 10,0 дм<sup>3</sup> в герметичную тару, изготовленную из полимерных материалов по ГОСТ Р 51760. Емкости обрабатывают спиртом. Каждую упаковочную единицу снабжают инструкцией по применению.</p>
<p>Пробиотическую добавку Галлобакт-Ф-Плюс хранят в чистом, защищенном от света помещении при температуре от 2 до 10 °С. Срок годности препарата – 3 мес со дня изготовления. Галлобакт-Ф-Плюс после истечения срока годности не должен применяться.</p>
<h3><a id="post-5185-_Toc27057846"></a><strong>2.10 ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ИССЛЕДУЕМЫХ КУЛЬТУР</strong></h3>
<p>В качестве биохимических свойств выделенных лактобацилл проводили определение спектра сбраживаемости сахаров, потребность молочнокислых микроорганизмов в отдельных витаминах, которое оценивали отсутствием роста в питательной среде без пищевого фактора, а также активное кислотообразование исследуемых лактобацилл – титрометрическим методом (Лабинская А. С., 1978).</p>
<p>Сбраживаемость углеводов, является важным физиолого-биохимическим свойством лактобактерий (таблица 29). Как видно из таблицы 29, исследуемые лактобациллы из девяти используемых сахаров не способны были утилизировать только ксилозу. Глюкозу, арабинозу, мальтозу, целлобиозу, фруктозу, лактозу, раффинозу и сахарозу молочнокислые бактерии легко использовали в качестве пищевого фактора.</p>
<p><strong>Таблица 29 </strong>– Сбраживание углеводов молочнокислыми бактериями</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Штамм</td>
<td colspan="9">Сбраживание*</td>
</tr>
<tr>
<td>глюкозы</td>
<td>целлобиозы</td>
<td>фруктозы</td>
<td>лактозы</td>
<td>раффинозы</td>
<td>сахарозы</td>
<td>ксилозы</td>
<td>арабинозы</td>
<td>мальтозы</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus<br />
salivarius </em>PC20b</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>–</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus<br />
curvatus </em>PC723_5</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>–</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>–</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="10">Примечание: «+» – сбраживается; «–» – не сбраживается.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>При подборе штамма-пробионта немаловажно знать трофические способности микроорганизма по таким питательным компонентам как витамины, так как чем меньше штамм будет в них нуждаться, тем проще формировать питательную среду для накопления биомассы клеток. Нами использовались такие витамины как тиамин (витамин В<sub>1</sub>), рибофлавин (витамин В<sub>2</sub>) и фолиевая кислота (витамин В<sub>9</sub>). Потребность испытуемых лактобактерий в витаминах представлена в таблице 30.</p>
<p><strong>Таблица 30 </strong>– Потребность молочнокислых бактерий в витаминах</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Штамм</td>
<td colspan="3">Потребность в*</td>
</tr>
<tr>
<td>тиамине</td>
<td>рибофлавине</td>
<td>фолиевой кислоте</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus<br />
salivarius </em>PC20b</td>
<td>–</td>
<td>+</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus<br />
curvatus </em>PC723_5</td>
<td>–</td>
<td>+</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>−</td>
<td>+</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4">Примечание: «+» – требуется для роста; «–» – не требуется для роста.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты исследований показали, что используемые в работе лактобактерии не сильно требовательны к витаминам, в частности, витамину В<sub>1</sub> и В<sub>9</sub>, так как отсутствие их в качестве пищевого фактора не сказалось на росте микроорганизмов. Однако следует отметить, что присутствие в питательной среде рибофлавина является обязательным фактором роста.</p>
<p>Нормируемым показателем специфической активности лактосодержащих пробиотиков является активность кислотообразования, а значит, одним из важных критериев отбора штаммов при разработке биопрепаратов (Кощаев А. Г., 2008) (таблица 31).</p>
<p><strong>Таблица 31 </strong>– Активное кислотообразование исследуемых штаммов</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Штамм</td>
<td colspan="3">Титруемая кислотность, °Т</td>
</tr>
<tr>
<td>6 ч</td>
<td>12 ч</td>
<td>24 ч</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus<br />
salivarius </em>PC20b</td>
<td>43,5 ± 1,3</td>
<td>124,7 ± 2,4</td>
<td>246,7 ± 4,2</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus<br />
curvatus </em>PC723_5</td>
<td>60,4 ± 1,5</td>
<td>132,2 ± 2,1</td>
<td>267,6 ± 4,6</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
<td>47,7 ± 1,4</td>
<td>118,5 ± 2,2</td>
<td>241,3 ± 4,1</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Из таблицы 31 видно, что изучаемые штаммы обладали высокими показателями титруемой кислотности. Наивысшая титруемая кислотность наблюдалась у <em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5, которая на конец выращивания микроорганизмов (через 24 ч) составила ‒ 267,6 °Т, в то время как в питательной среде<br />
с <em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b и<em> Lactobacillus </em>sp. PC18A данный показатель составил 246,7 и 241,3 °Т, соответственно.</p>
<p>Таким образом, проведенные исследования показали, что выделенные из желудочно-кишечного тракта дикого фазана лактобациллы обладают свойствами, характерными для молочнокислых бактерий – у них наблюдается высокая кислотообразующая способность, они утилизируют широкий спектр сахаров, что дает им преимущества при конкуренции за субстрат. Все эти свойства позволяют предложить данные культуры микроорганизмов в качестве основных объектов для конструирования биопрепарата с высокой пробиотической активностью.</p>
<h3><a id="post-5185-_Toc27057847"></a><strong>2.11 ИЗУЧЕНИЕ ФЕНОТИПИЧЕСКОГО ПРОФИЛЯ АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТИ ОТОБРАННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ</strong></h3>
<p><a id="post-5185-_Toc401174285"></a><a id="post-5185-_Toc397603316"></a> К важным технологическим и пробиотическим свойствам молочнокислых микроорганизмов относится их устойчивость к антибиотикам, так как<br />
в промышленном животноводстве, в частности птицеводстве, использование данных препаратов является повседневным (Глушанова Н. А., 2003).</p>
<p>Резистентность штаммов определяли к терапевтическим дозам антимикробных веществ диско-диффузионным методом в агар с использованием стандартных дисков (Балтрашевич А. К., Комаровская Т. П., 1982; Воробьёва Л. И., 1989; МУ 2.3.2.2789-10). Результаты чувствительности используемых штаммов к терапевтическим дозам некоторых антибиотиков представлены в таблице 32.</p>
<p>Результаты оценки антибиотикочувствительности отобранных штаммов показали, что ингибирующие рост препараты в различной степени действовали на лактобациллы. При этом хотелось бы отметить, что согласно критериям оценки чувствительности лактобактерий, с учетом диаметра зоны ингибирования их роста все используемые микроорганизмы можно отнести к категории «устойчивые» к действию применяемых антимикробных веществ (Назырова Н. Р., Тимербаева Р. X., Туйгунов М. М., 2006; МУ 2.3.2.2789-10). Только лишь при действии линкомицина и цефалотина на <em>Lactobacillus </em>sp. PC18A,<br />
а также цефалотина – на <em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b была выявлена зона задержки роста в пределах 11 мм, что является минимальным значением, чтобы отнести используемые лактокультуры по отношению к данным антимикробным вещестам к категории «промежуточно устойчивые».</p>
<p><strong>Таблица 32 </strong>– Антибиотикочувствительность лактобактерий</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Антимикробное вещество</td>
<td rowspan="2">Дозировка в диске, мкг</td>
<td colspan="3">Диаметр зоны ингибирования роста, мм</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus<br />
salivarius </em>PC20b</td>
<td><em>Lactobacillus<br />
curvatus </em>PC723_5</td>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
</tr>
<tr>
<td>Пенициллин</td>
<td>10</td>
<td>9,0 ± 0,2</td>
<td>7,0 ± 0,3</td>
<td>10,0 ± 0,3</td>
</tr>
<tr>
<td>Эритромицин</td>
<td>15</td>
<td>8,0 ± 0,3</td>
<td>7,0 ± 0,2</td>
<td>9,0 ± 0,3</td>
</tr>
<tr>
<td>Линкомицин</td>
<td>15</td>
<td>10,0 ± 0,3</td>
<td>10,0 ± 0,3</td>
<td>11,0 ± 0,3</td>
</tr>
<tr>
<td>Цефалотин</td>
<td>30</td>
<td>11,0 ± 0,3</td>
<td>9,0 ± 0,3</td>
<td>11,0 ± 0,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Тетрациклин</td>
<td>30</td>
<td>10,0 ± 0,2</td>
<td>9,0 ± 0,2</td>
<td>11,0 ± 0,4</td>
</tr>
<tr>
<td>Стрептомицин</td>
<td>10</td>
<td>5,0 ± 0,2</td>
<td>4,0 ± 0,3</td>
<td>8,0 ± 0,3</td>
</tr>
<tr>
<td>Ампициллин</td>
<td>10</td>
<td>8,0 ± 0,3</td>
<td>5,0 ± 0,2</td>
<td>9,0 ± 0,2</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Для повышения значения антибиотикоустойчивости исследуемых лактобацилл, их многократно культивировали на гидролизованном молоке с добавлением ранее используемых антибиотиков. В общей сложности было проведено 67 пассажей. Результаты антибиотикочувствительности микроорганизмов после пересевов представлены в таблице 33.</p>
<p><strong>Таблица 33 </strong>– Антибиотикочувствительность молочнокислых микроорганизмов</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Антимикробное вещество</td>
<td rowspan="2">Дозировка в диске, мкг</td>
<td colspan="3">Диаметр зоны ингибирования роста, мм</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus<br />
salivarius </em>PC20b</td>
<td><em>Lactobacillus<br />
curvatus </em>PC723_5</td>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
</tr>
<tr>
<td>Пенициллин</td>
<td>10</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>3,0 ± 0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Эритромицин</td>
<td>15</td>
<td>2,0 ± 0,1</td>
<td>3,0 ± 0,1</td>
<td>4,0 ± 0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Линкомицин</td>
<td>15</td>
<td>5,0 ± 0,2</td>
<td>4,0 ± 0,1</td>
<td>5,0 ± 0,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Цефалотин</td>
<td>30</td>
<td>4,0 ± 0,1</td>
<td>3,0 ± 0,1</td>
<td>4,0 ± 0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Тетрациклин</td>
<td>30</td>
<td>3,0 ± 0,1</td>
<td>‒</td>
<td>5,0 ± 0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Стрептомицин</td>
<td>10</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>3,0 ± 0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Ампициллин</td>
<td>10</td>
<td>2 ± 0,1</td>
<td>‒</td>
<td>4,0 ± 0,1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="5">Примечание: «‒» – отсутствие задержки роста.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В результате селекционного отбора удалось уменьшить зоны ингибиции роста исследуемых штаммов к используемым концентрациям антибиотиков как минимум в 2 раза, а в отдельных случаях они вообще не образовывали зон угнетения. Так, отсутствовала зона задержки роста отобранных культур при действии на <em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b антибиотиков пенициллина и стрептомицина; <em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5 зона задержки роста отсутствовала при действии пенициллина, тетрациклина, стрептомицина и ампициллин.</p>
<p>Таким образом, за счет многократных пересевов отобранных культур удалось повысить их антибиотикоустойчивость, что обеспечит максимальный лечебно-профилактический эффект (пробиотический потенциал) разрабатываемого биопрепарата в промышленных условиях.</p>
<h3><a id="post-5185-_Toc27057848"></a><strong>2.12 ИЗУЧЕНИЕ ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПОТЕНЦИАЛА ИССЛЕДУЕМЫХ КУЛЬТУР ЛАКТОБАЦИЛЛ</strong></h3>
<p><em>Антагонизм к эталонной патогенной микрофлоре.</em> Проводили изучение анагонистической способности изучаемых культур по отношению к эталонным тест-культурам патогенной и условно-патогенной микрофлоры методом отсроченного антагонизма (МУ 2.3.2.2789-10). Результы исследований представлены в таблице 34.</p>
<p><strong>Таблица 34 </strong>− Антагонистическая активность изучаемых лактобактерий в отношении лабораторных тест-культур, мм</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Тест-культура</td>
<td colspan="3">Изучаемые лактобактерии</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus<br />
salivarius </em>PC20b</td>
<td><em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5</td>
<td><em>Lactobacillus </em>sp. PC18A</td>
</tr>
<tr>
<td><em>S. aureus</em> АТСС 25923</td>
<td>20,0± 0,11</td>
<td>23,0± 0,21</td>
<td>22,0± 0,15</td>
</tr>
<tr>
<td><em>В. subtilis</em> 534</td>
<td>16,0± 0,09</td>
<td>13,0± 0,20</td>
<td>15,0± 0,16</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Е. coli</em> АТСС 25922</td>
<td>23,0± 0,15</td>
<td>27,0± 0,19</td>
<td>22,0± 0,13</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Sh. sonnei</em> 941</td>
<td>12,0± 0,14</td>
<td>8,0± 0,17</td>
<td>9,0± 0,17</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Р. aeruginosa</em> АТСС 27853</td>
<td>21,0± 0,13</td>
<td>24,0± 0,20</td>
<td>18,0± 0,13</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Klebsiella pneumonia</em> К<sub>1</sub> 5054</td>
<td>10,0± 0,16</td>
<td>26,0± 0,14</td>
<td>12,0± 0,15</td>
</tr>
<tr>
<td><em>С. albicans</em> АТСС 885-653</td>
<td>13,0± 0,13</td>
<td>15,0± 0,13</td>
<td>11,0± 0,16</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В результате проведенных исследований установлено, что антагонистическая активность изучаемых культур лактобактерий в отношении эталонных тест-штаммов выше, чем при влиянии на полевые тест-культуры. Согласно рекомендациям, за положительный результат антагонистических свойств микроорганизмов принимается зона ингибирования ими тест-культуры в 20 мм (МУ 2.3.2.2789-10). В таком случае, высокие антагонистические свойства <em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b проявляет в отношении<em> S. aureus</em> АТСС 25923 (20 мм), <em>Е. coli</em> АТСС 25922 (23 мм) и <em>Р. aeruginosa</em> АТСС 27853 (21 мм). <em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5 хорошо подавляет рост <em>S. aureus</em> АТСС 25923 (23 мм), <em>Е. coli</em> АТСС 25922 (27 мм), <em>Р. aeruginosa</em> АТСС 27853 (24 мм) и <em>Klebsiella pneumonia</em> К<sub>1</sub> 5054 (26 мм). К <em>Lactobacillus </em>sp. PC18A особо чувствительны <em>S. aureus</em> АТСС 25923 (22 мм) и <em>Е. coli</em> АТСС 25922 (22 мм). По отношению к другим эталонным тест-штаммам изучаемые лактобациллы также проявляют антагонистические свойства, но в меньшей степени, что не снижает их пробиотического потенциала.</p>
<p><em>Антагонизм к нормофлоре кишечника</em>. Следующим этапом работы было выявить способность пробиотических штаммов ингибировать представителей нормофлоры кишечника, а также друг друга. Определение взаимодействия исследуемых штаммов с представителями нормофлоры изучали методом перпендикулярных штрихов. Проводили посев исследуемой культуры<br />
в виде штриха по диаметру на чашку с питательной средой МРС. Перпендикулярно первому посеву делали штрихи других тест-культур. Культивирование проводили при 37 °С в течение 24−48 ч. Изучение способности штаммов-пробионтов <em>in vitro </em>ингибировать рост представителей нормофлоры кишечника, а также друг друга проводили, согласно рекомендациям (МУ 2.3.2.2789-10). В качестве тест-организмов применяли чистую культуру <em>Lactobacillus acidophilus</em>, выделенную из медицинского препарата «Линекс» (Словения); <em>Lactobacillus acidophilus </em>штамм n.v. Ep 317/402 (препарат «Наринэ», Армения); <em>Lactobacillus galinarum </em>ВКПМ-10134, выделенную из кишечника кур. Результаты исследований учитывали по зоне задержки роста (таблица 35).</p>
<p><strong>Таблица 35 </strong>− Ингибирующая активность изучаемых лактобактерий<br />
в отношении нормофлоры, мм</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Тест-культура</td>
<td colspan="3">Зона ингибирования роста, мм</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus<br />
salivarius</em> PC20b</td>
<td><em>Lactobacillus<br />
curvatus</em> PC723_5</td>
<td><em>Lactobacillus</em> sp. PC18A</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus acidophilus</em><br />
(шт. Линекс)</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus acidophilus</em><br />
штамм n.v. Ep 317/402</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus galinarum</em><br />
ВКПМ-10134</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius</em> PC20b</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus</em> PC723_5</td>
<td>0</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus</em> sp. PC18A</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>−</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты исследований показали, что при совместном выращивании культур в любом из вариантов, не было зафиксировано задержки роста исследуемых и тестируемых культур микроорганизмов.</p>
<p><em>Антиадгезивные свойства лактобацилл</em>. Антиадгезивные свойства микроорганизмов – это способность культуры предотвращать или снижать прикрепительные действия (адгезию) патогенных микроорганизмов к объекту адгезии, в нашем случае эритроцитам крови барана. Изучаемое свойство лактобацилл определяли методом прямой и косвенной реакции (МУ 2.3.2.2789-10). Антиадгезивные свойства лактобактерий осушествляли по отношению<br />
к тест-культурам (<em>E. coli</em> и <em>S. aureus</em>). Результаты исследований представлены в таблицах 36 и 37.</p>
<p><strong>Таблица 36 </strong>– Результаты антиадгезивных свойств объектов исследований<br />
к <em>E. coli</em></p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Метод<br />
исследований</td>
<td>Объекты антиадгезивных свойств</td>
<td>Антиадгезивные<br />
свойства к контролю, %</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="4">Прямой<br />
метод</td>
<td>Контроль</td>
<td>100,0</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus</em> sp. PC18A</td>
<td>46,7</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius</em> PC20b</td>
<td>41,5</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus</em> PC723_5</td>
<td>53,3</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="4">Косвенный<br />
метод</td>
<td>Контроль</td>
<td>100,0</td>
</tr>
<tr>
<td>Супернатант <em>Lactobacillus</em> sp. PC18A</td>
<td>34,3</td>
</tr>
<tr>
<td>Супернатант <em>Lactobacillus salivarius</em> PC20b</td>
<td>37,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Супернатант <em>Lactobacillus curvatus</em> PC723_5</td>
<td>29,8</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В результате проведенных исследований установлено, что изучаемые культуры обладали по отношению к тест-штаммам антиадгезивными свойсвами, однако в различной степени. Так, при влиянии лактобацилл на адгезию <em>E. coli </em>к эритроцитам крови барана в прямом методе выявлено, что наибольшими антиадгезивными свойствами (53,3 %) обладала культура <em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5. <em>Lactobacillus </em>sp. PC18A и<em> Lactobacillus salivarius </em>PC20b способствовали антиадгезии <em>E. coli </em>равной 46,7 и 41,5 %, соответственно. При изучении антиадгезивных свойств супернатанта лактобактерий против <em>E. coli</em>, также выявлено положительное их действие. Супернатанты лактобактерий обладали антиадгезивными свойствами, что говорит о наличии метаболитов, подавляющих адгезию, которые выработали лактокультуры. Однако следует отметить, что использование живых культур лактобацилл обеспечивает более высокий результат антиадгезивных свойств.</p>
<p><strong>Таблица 37 </strong>– Результаты антиадгезивных свойства объектов исследований<br />
к <em>S. aureus</em></p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Метод<br />
исследований</td>
<td>Объекты антиадгезивных свойств</td>
<td>Антиадгезивные<br />
свойства к контролю, %</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="4">Прямой<br />
метод</td>
<td>Контроль</td>
<td>100,0</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus</em> sp. PC18A</td>
<td>65,6</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius</em> PC20b</td>
<td>54,1</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus</em> PC723_5</td>
<td>71,9</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="4">Косвенный<br />
метод</td>
<td>Контроль</td>
<td>100,0</td>
</tr>
<tr>
<td>Супернатант <em>Lactobacillus</em> sp. PC18A</td>
<td>36,8</td>
</tr>
<tr>
<td>Супернатант <em>Lactobacillus salivarius</em> PC20b</td>
<td>42,3</td>
</tr>
<tr>
<td>Супернатант <em>Lactobacillus curvatus</em> PC723_5</td>
<td>31,4</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Аналогичные результаты были получены при исследовании антиадгезивных свойств лактобактерий по отношению к <em>S. aureus</em>. Антиадгезивные свойства <em>Lactobacillus </em>sp. PC18A, <em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b и<em> Lactobacillus curvatus </em>PC723_5 против <em>S. aureus</em> составили 71,9; 65,6 и 54,1 %, соответсвенно. Супернатанты исследуемых культур в отношении <em>S. aureus </em>также показали антиадгезивное действие, но в меньшей степени, чем нативные лактобациллы.</p>
<p><em>Адгезивные свойства лактобацилл</em> (МУ 2.3.2.2789-10). Адгезивная активность – способность микроорганизмов прикрепляться к эпителиальным клеткам кишечника и размножиться прежде, чем энтероциты слизистого слоя будут обновлены. Данная способность микрофлорой обеспечивается за счет продукции ряда компонентов (пили или фимбрии), которые помогают закрепиться на клетке эпителия. Эти компоненты получили название – факторы колонизации или адгезии. Микроорганизмы могут экспрессировать различные типы пилий, которые кодируются разными хромосомальными и плазмидными генами. Это генетическое многообразие дает возможность культуре клеток приспосабливаться к меняющейся окружающей среде и использовать эту возможность по отношению<br />
к различным поверхностным структурам организма-хозяина. Результаты адгезивности исследуемых лактобацилл по отношению к энтероцитам кишечника куриного эмбриона представлены в таблице 38.</p>
<p><strong>Таблица 38 </strong>– Средний показатель адгезии (СПА) (при подсчете на 25<br />
энтероцитах) исследуемых культур лактобактерий</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Исследуемые лактобациллы</td>
<td>Средний показатель адгезии (СПА)</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus salivarius</em> PC20b</td>
<td>12,4 ± 0,51</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus curvatus</em> PC723_5</td>
<td>17,5 ± 0,49</td>
</tr>
<tr>
<td><em>Lactobacillus</em> sp. PC18A</td>
<td>14,1 ± 0,52</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>При подсчете количества микробных клеток, прикрепившихся к энтероцитам, установлено, что все исследуемые культуры лактобацилл обладали высокоадгезивными свойствами, так как показатель СПА варьировал от 12,4 до 17,5. При этом следует обратить внимание, что наибольшей адгезией к энтероцитам кишечника куриного эмбриона обладала культура <em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5 (СПА = 17,5), затем <em>Lactobacillus </em>sp. PC18A (СПА = 14,1) и <em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b (СПА = 12,4).</p>
<p>Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что выделенные из кишечника фазана молочнокислые культуры характеризуются высоким пробиотическим потенциалом, так как не обладают ингибирующим действием на нормофлору кишечника, в различной степени проявляют антагонистическую активность в отношении эталонной условно-патогенной тест-культуры, обладают высокими антиадгезивными и адгезивными свойствами,<br />
в связи с чем, данные лактобациллы перспективны и могут быть включены<br />
в состав биопрепарата микробного происхождения для применения в промышленном птицеводстве.</p>
<h3><a id="post-5185-_Toc27057849"></a><strong>2.13 ИЗУЧЕНИЕ БЕЗОПАСНОСТИ ИССЛЕДУЕМЫХ ЛАКТОБАЦИЛЛ</strong></h3>
<p>Безопасность используемых в работе культур лактобактерий изучали путем проявления ими гемолитической активности на кровяном агаре и при пероральном введении их мышам (МУ 2.3.2.2789-10).</p>
<p>Определение гемолитической активности проводили на 5%-м кровяном агаре. Для его приготовления взвесь эритроцитов барана добавляли к охлажденной до 40−45 °С плотной питательной среде МРС с расчетом, чтобы взвесь эритроцитов составляла в агаре 5 %. Далее смесь осторожно перемешивали<br />
и разливали в чашки Петри. После застывания среды проводили посев в разведениях культуры штамма для формирования отдельных колоний. Далее чашки инкубировали при 37 °С в течение 24 ч. Затем чашки Петри вынимали из термостата и осуществляли учет результатов. Положительным результатом гемолиза является формирование зоны лизиса.</p>
<p>Безвредность исследуемых культур <em>in vivo </em>изучали на лабораторных белых мышах с приблизительной массой 20 ± 1 г. Для этого колонии 24-часовой культуры лактобацилл, выращенных на агаризованной среде МРС, снимали<br />
с агара петлей и суспендировали в 0,5 мл 0,9%-го раствора натрия хлорида до концентрации 100 млн/мл и выдерживали 30 мин при температуре 37 °С. По 0,5 мл полученной взвеси вводили через ротопищеводный зонд в желудок пяти белым мышам. Наблюдение за лабораторными животными проводили в течение пяти дней. Результаты исследований представлены в таблице 39.</p>
<p>Выработка гемолизинов считается фактором патогенности, в этой связи продукция гемолизина во многих случаях является маркером вирулентности.<br />
В результате проведенного эксперимента, при выращивании лактокультур на 5 %-м кровяном агаре зоны лизиса вокруг них выявлено не было. Таким образом, результат гемолиза – отрицательный. Изучаемые культуры молочнокислых бактерий не проявляют гемолитической активности.</p>
<p><strong>Таблица 39 </strong>– Безопасность исследуемых лактобацилл на мышах (n = 5)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Группа</td>
<td rowspan="2">Вид<br />
животного</td>
<td rowspan="2">Объем вводимой жидкости, способ введения</td>
<td colspan="3">Результат испытаний, гол.</td>
</tr>
<tr>
<td>заболело</td>
<td>пало</td>
<td>выжило</td>
</tr>
<tr>
<td>Интактная</td>
<td rowspan="5">Мышь</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Контрольная</td>
<td>0,5 мл, перорально<br />
(физ. раствор)</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>1-я опытная</td>
<td>0,5 мл, перорально</p>
<p>(<em>Lactobacillus salivarius</em> PC20b)</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>2-я опытная</td>
<td>0,5 мл, перорально</p>
<p>(<em>Lactobacillus curvatus</em> PC723_5)</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>3-я опытная</td>
<td>0,5 мл, перорально</p>
<p>(<em>Lactobacillus</em> sp. PC18A)</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>5</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В результате проведенного эксперимента (в течении 5 дней) установлено, что во всех группах мышей не было зафиксировано гибели и заболевших животных. При ежедневном осмотре лабораторных животных можно было наблюдать, что мыши оставались подвижными и активными, регистрировалась удовлетворительная поедаемость корма, при сохранении всех жизненных рефлексов.</p>
<p>Таким образом, используемые в научно-иследовательской работе культуры лактобацилл, безопасны для применения.</p>
<h3><a id="post-5185-_Toc27057852"></a><a id="post-5185-_Toc485416663"></a><strong>2.14 ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРОБИОТИКА ГАЛЛОБАКТ-Ф-ПЛЮС НА МОДЕЛИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ДИСБАКТЕРИОЗА У ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ</strong></h3>
<p>Одним из главных предназначений клинического использования препаратов микробного происхождения является лечение и профилактика заболеваний, вызванных нарушением дисбаланса микробиоты желудочно-кишечного тракта. В связи с чем, следующим этапом исследований было изучение эффективности применения разработанного биопрепарата на модели экспериментального дисбактериоза кишечника у мышей и крыс, вызванного использованием антибиотика рифампицин. Для этого было изучено влияние пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс и его отдельных компонентов (штаммов-пробионтов) в варианте лечебного и профилактического действия.</p>
<p>Оценку пробиотической эффективности использования консорциума выделенных культур в составе разработанного пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс,<br />
а также по отдельности проводили на модели экспериментального дисбактериоза у белых лабораторных беспородных мышей и крыс. Дисбаланс микробиоты вызывали введением перорально 0,5 см<sup>3</sup> антибиотика рифампицин в дозировке 3,0 мг/гол. для мышей и 1,0 см<sup>3</sup> рифампицина в дозировке 40,0 мг/гол. для крыс. Антибиотик задавали в течение 10 дней (Митрохин С. Д., Шендеров Б. А., 1989; Романчук Л. А., Елизбаращвили Д. А., Гинодман Г. А., 1991; Нуртдинова А. Н., 2003; Осипова И. Г., Васильева Е. А., 2006; Назырова Н. Р., 2007). Количество активных культур в дозировке препаратов составляло не менее 1,0 × 10<sup>9</sup> КОЕ/мл. Одновременно изучали лечебный и профилактичекий эффект от действия штаммов-пробионтов по отдельности и в составе пробиотика.</p>
<p>Для изучения лечебного эффекта используемых культур по отдельности<br />
и в составе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс их задавали внутрижелудочно по 1,0 мл лабораторным мышам и крысам в течение 10 дней. Для этого было сформировано по каждому биообъекту исследования шесть групп-аналогов по 10 гол. в каждой: интактная группа – мыши и крысы получали стандартный рацион<br />
и питье, без каких либо дополнительных препаратов и они были здоровы, ранее не получали антибиотик; контрольная группа – мыши и крысы с экспериментальным дисбактериозом, получали стандартный рацион, питье и физиологический раствор хлорида натрия; 1-я опытная группа – мыши и крысы с экспериментальным дисбактериозом, получали стандартный рацион и культуру <em>Lactobacillus </em>sp. PC18A; 2-я опытная группа – мыши и крысы с экспериментальным дисбактериозом, получали стандартный рацион и культуру <em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5; 3-я опытная группа – мыши и крысы с экспериментальным дисбактериозом, получали стандартный рацион и культуру <em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b; 4-я опытная группа – мыши и крысы с экспериментальным дисбактериозом, получали стандартный рацион и пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс.</p>
<p>Для изучения профилактического эффекта используемых культур по отдельности и в составе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс их задавали за 20 мин до введения рифампицина в течении 10 дней в аналогичных дозировках. Также были сформированы по каждому биообъекту исследования группы-аналоги по 10 гол. в каждой: интактная группа – здоровые мыши и крысы, получавшие стандартный рацион и питье, без каких либо дополнительных препаратов; контрольная группа – мыши и крысы получали в течении 10 сут рифампицин, а за 20 мин до введения антибиотика им задавали физиологический раствор хлорида натрия; 1-я опытная группа – мыши и крысы в течении 10 сут получали рифампицин, а за 20 мин до введения антибиотика им задавали <em>Lactobacillus </em>sp. PC18A; 2-я опытная группа – мыши и крысы в течении 10 сут получали рифампицин, а за 20 мин до введения антибиотика им задавали <em>Lactobacillus curvatus </em>PC723_5; 3-я опытная группа – мыши и крысы в течении 10 сут получали рифампицин, а за 20 мин до введения антибиотика им задавали культуру <em>Lactobacillus salivarius </em>PC20b; 4-я опытная группа – мыши и крысы в течении 10 сут получали рифампицин, а за 20 мин до введения антибиотика им задавали пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс.</p>
<p>Изменение кишечного баланса микробиоты лабораторных животных оценивали по результатам микробиологических исследований фекалий толстой кишки и коэффициенту массы слепой кишки (КМСК) – отношение массы слепой кишки к массе тела лабораторного животного (Зельцер И. З., 1989; Назырова Н. Р., 2007).</p>
<p><em>Лечебное действие. </em>Для выявления дисбиотического состояния микробного фона кишечника лабораторных животных после 10-дневнего введения антибиотика рифампицина проводили микробиологические исследования кишечника интактной и контрольной групп животных (таблица 40).</p>
<p>В результате введения антибиотика рифампицина у лабораторных животных контрольной группы были зафиксированы статистически достоверные признаки дисбактериоза кишечника. Выявлено, что в контрольной группе содержание полезных микроорганизмов (лакто- и бифидобактерий) снижалось по сравнению с условно-патогенной микрофлорой. Так, в контрольной группе мышей по сравнению с интактной группой титр лактобактерий с 7,75 снизился до 4,43 lg КОЕ/г; бифидобактрий – с 9,47 до 5,16 lg КОЕ/г (P &lt; 0,05). При этом содержание эшерихий в контрольной группе увеличилось с 3,25 до 7,13 lg КОЕ/г, а условно-патогенных грибов – с 2,86 до 5,18 lg КОЕ/г при статистически достоверной разнице (P &lt; 0,05). Также были выявлены изменения в показателе КМСК, значение которого в контрольной группе возрасло с 1,24 до 1,87 % (P &lt; 0,05). Аналогичная картина выявлена в интактной и контрольной группах крыс.</p>
<p><strong>Таблица 40 </strong>– Состояние кишечной микробиоты и коэффициент массы<br />
слепой кишки (КМСК) у лабораторных животных интактной<br />
и контрольной групп после 10-дневного применения<br />
антибиотика</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Группа</td>
<td rowspan="2">Вид<br />
животного</td>
<td colspan="4">Содержание микробиоты кишечника, lg КОЕ/г</td>
<td rowspan="2">КМСК, %</td>
</tr>
<tr>
<td>лакто­бактерии</td>
<td>бифидобактерии</td>
<td>кишечная палочка</td>
<td>грибы</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Интактная</td>
<td>Мышь</td>
<td>7,75±0,11*</td>
<td>9,47±0,09*</td>
<td>3,25±0,10*</td>
<td>2,86±0,07*</td>
<td>1,24±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>6,49±0,09*</td>
<td>7,58±0,12*</td>
<td>2,67±0,06*</td>
<td>1,59±0,04*</td>
<td>1,35±0,02*</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Контрольная</td>
<td>Мышь</td>
<td>4,43±0,10</td>
<td>5,16±0,14</td>
<td>7,13±0,10</td>
<td>5,18±0,13</td>
<td>1,87 ±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>3,12±0,07</td>
<td>3,65±0,08</td>
<td>6,78±0,09</td>
<td>5,22±0,09</td>
<td>2,03±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7">Примечание:* – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таким образом, антибиотик рифампицин проявил мощное нарушение фекального микробиоценоза кишечника, тем самым спровоцировал дисбаланс<br />
в пользу условно-патогенной микрофлоры, что проявилось признаком дисбактериоза.</p>
<p>Результаты влияния пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс и его отдельных штаммов-пробионтов после 10-и дней терапии вызванного дисбактериоза, представлены в таблице 41.</p>
<p>В результате проведенных микробиологических исследований фекалий толстого отдела кишечника лабораторных животных была установлена статистически достоверная разницы между данными микробиоты контрольной группы и опытных. При этом статистически достоверные различия была зафиксированы во всех опытных группах и по всем изучаемым показателя в сравнении<br />
с контрольной.</p>
<p><strong>Таблица 41 </strong>– Состояние кишечной микробиоты и коэффициент массы<br />
слепой кишки (КМСК) у лабораторных животных после<br />
лечения экспериментального дисбактериоза</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Группа</td>
<td rowspan="2">Вид<br />
животного</td>
<td colspan="4">Содержание микробиоты кишечника, lg КОЕ/г</td>
<td rowspan="2">КМСК, %</td>
</tr>
<tr>
<td>лактобактерии</td>
<td>бифидобактерии</td>
<td>кишечная палочка</td>
<td>грибы</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Интактная</td>
<td>Мышь</td>
<td>7,75±0,11</td>
<td>9,47±0,09</td>
<td>3,25±0,10</td>
<td>2,86±0,07</td>
<td>1,24±0,01</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>6,49±0,09</td>
<td>7,58±0,12</td>
<td>2,67±0,06</td>
<td>1,59±0,04</td>
<td>1,35±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Контрольная</td>
<td>Мышь</td>
<td>4,43±0,10</td>
<td>5,16±0,14</td>
<td>7,13±0,10</td>
<td>5,18±0,13</td>
<td>1,87 ±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>3,12±0,07</td>
<td>3,65±0,08</td>
<td>6,78±0,09</td>
<td>5,22±0,09</td>
<td>2,03±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">1-я опытная</td>
<td>Мышь</td>
<td>6,54±0,10*</td>
<td>7,67±0,07*</td>
<td>4,34±0,05*</td>
<td>3,67±0,05*</td>
<td>1,46±0,02*</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>5,78±0,08*</td>
<td>6,32±0,16*</td>
<td>3,78±0,07*</td>
<td>2,68±0,05*</td>
<td>1,57±0,02*</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">2-я опытная</td>
<td>Мышь</td>
<td>6,43±0,14*</td>
<td>7,27±0,08*</td>
<td>4,76±0,11*</td>
<td>3,64±0,06*</td>
<td>1,51±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>5,23±0,10*</td>
<td>5,87±0,11*</td>
<td>3,71±0,07*</td>
<td>2,48±0,06*</td>
<td>1,58±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">3-я опытная</td>
<td>Мышь</td>
<td>5,98±0,06*</td>
<td>7,21±0,16*</td>
<td>4,55±0,10*</td>
<td>3,48±0,04*</td>
<td>1,49±0,02*</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>5,08±0,09*</td>
<td>6,27±0,05*</td>
<td>3,78±0,09*</td>
<td>2,65±0,05*</td>
<td>1,59±0,02*</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">4-я опытная</td>
<td>Мышь</td>
<td>7,14±0,11*</td>
<td>9,07±0,14*</td>
<td>3,89±0,06*</td>
<td>2,98±0,05*</td>
<td>1,27±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>6,14±0,13</td>
<td>7,15±0,08</td>
<td>2,97±0,06*</td>
<td>1,85±0,03*</td>
<td>1,39±0,02*</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Применямые в научно-исследовательской работе лактобактерии по отдельности и в составе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс способствовали нормализации показателей кишечной микрофауны, а также КМСК у лабораторных животных. Наилучшая картина фекального микробиоценоза была выявлена при использовании в лечении лабораторных животных консоциума исследуемых лактобацилл в составе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс. Установлено, что применение пробиотика позволило повысить содержание лакто- и бифидобактерий, а также снизить уровень условно-патогенной микрофлоры у мышей, соответственно с 4,43 до 7,14 lg КОЕ/г; с 5,16 до 9,07 lg КОЕ/г; с 7,13 до 3,89 lg КОЕ/г и с 5,18 до 2,98 lg КОЕ/г (P &lt; 0,05). Аналогично группам мышей наблюдалась статистически достоверная разница по отношению к контролю у опытных крыс – с 3,12 до 6,14 lg КОЕ/г; с 3,65 до 7,15 lg КОЕ/г; с 6,78 до 2,97 lg КОЕ/г и с 5,22 до 1,85 lg КОЕ/г (P &lt; 0,05). Также следует обратить внимание, что опытная группа животных, получавших пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс по всем изучаемым показателям (содержание лактобактерий, бифидобактерий, эшерийхий, грибов и КМСК) приближалась к значениям интактной группы (здоровые животные).</p>
<p>Таким образом, использование исследуемых культур лактобацилл, особенно в составе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс способствует высокому лечебному эффекту и дает основание предполагать, что применение данной композиции микроорганизмов позволит повысить эффективность лечения дисмикробных состояний и добиться стойких клинических эффектов.</p>
<p><em>Профилактическое действие. </em>В связи с тем, что ведение промышленного животноводста, в том числе птицеводства, немыслимо без применения ряда антибиотиков, могут возникать случаи дисбактериальных нарушений, которые повышают риск заболеваний. В связи с этим, интересным было изучить возможность применения разработанного консоциума лактобактерий в составе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс для профилактики дисбиотический состояний при использовании антибиотиков. Для этого формировали из лабораторных мышей и крыс группы-аналоги согласно плану исследований.</p>
<p>Состояние микробиального фона кишечника у лабораторных животных после проведенной профилактики экспериментального дисбактериоза исследуемыми лактобактериями по отдельности и в составе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс представлены в таблице 42.</p>
<p><strong>Таблица 42 </strong>– Состояние кишечной микробиоты и коэффициент массы<br />
слепой кишки (КМСК) у лабораторных животных после<br />
профилактики экспериментального дисбактериоза</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Группа</td>
<td rowspan="2">Вид<br />
живот­ного</td>
<td colspan="4">Содержание микробиоты кишечника, lg КОЕ/г</td>
<td rowspan="2">КМСК, %</td>
</tr>
<tr>
<td>лактобактерии</td>
<td>бифидобактерии</td>
<td>кишечная палочка</td>
<td>грибы</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Интактная</td>
<td>Мышь</td>
<td>7,75±0,11</td>
<td>9,47±0,09</td>
<td>3,25±0,10</td>
<td>2,86±0,07</td>
<td>1,24±0,01</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>6,49±0,09</td>
<td>7,58±0,12</td>
<td>2,67±0,06</td>
<td>1,59±0,04</td>
<td>1,35±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Контрольная</td>
<td>Мышь</td>
<td>4,67±0,11</td>
<td>5,11±0,12</td>
<td>7,06±0,09</td>
<td>5,23±0,10</td>
<td>1,92 ±0,01</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>3,28±0,08</td>
<td>3,54±0,09</td>
<td>6,69±0,11</td>
<td>5,11±0,11</td>
<td>2,01±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">1-я опытная</td>
<td>Мышь</td>
<td>6,78±0,11*</td>
<td>7,89±0,11*</td>
<td>4,22±0,07*</td>
<td>3,36±0,06*</td>
<td>1,41±0,02*</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>5,83±0,09*</td>
<td>6,64±0,11*</td>
<td>3,54±0,09*</td>
<td>2,35±0,04*</td>
<td>1,52±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">2-я опытная</td>
<td>Мышь</td>
<td>6,58±0,11*</td>
<td>7,48±0,17*</td>
<td>4,48±0,10*</td>
<td>3,42±0,08*</td>
<td>1,51±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>5,76±0,12*</td>
<td>5,97±0,10*</td>
<td>3,42±0,09*</td>
<td>2,23±0,05*</td>
<td>1,53±0,02*</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">3-я опытная</td>
<td>Мышь</td>
<td>6,24±0,09*</td>
<td>7,64±0,12*</td>
<td>4,37±0,11*</td>
<td>3,38±0,07*</td>
<td>1,43±0,02*</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>5,32±0,08*</td>
<td>6,38±0,19*</td>
<td>3,41±0,07*</td>
<td>2,45±0,06*</td>
<td>1,51±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">4-я опытная</td>
<td>Мышь</td>
<td>7,43±0,15*</td>
<td>9,22±0,12*</td>
<td>3,47±0,07*</td>
<td>2,95±0,06*</td>
<td>1,25±0,02*</td>
</tr>
<tr>
<td>Крыса</td>
<td>6,27±0,11</td>
<td>7,31±0,10</td>
<td>2,83±0,05*</td>
<td>1,71±0,02*</td>
<td>1,37±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты изучения профилактического действия исследуемых культур по отдельности и в составе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс продемонстрировали положительную динамику в анализируемых показателях. При этом выявлено, что совместное использование антибиотика и физиологического раствора в контрольной группе дало отрицательный результат, так как в данной группе животных наблюдались дисбиотические нарушения в кишечнике, которые выражались в снижении полезной микрофлоры, повышении условно-патогенной, а также повышении показателя КМСК с 1,24 до 1,92 для мышей<br />
и с 1,35 до 2,01 для крыс.</p>
<p>В пользу опытных групп по сравнению с контрольной наблюдались достоверно статистически значимые изменения в балансе кишечного микробиоценноза: повышался титр активных молочнокислых и бифидобактерий (P &lt; 0,05), снижалась численность микроорганизмов группы кишечной палочки и грибов (P &lt; 0,05), а также наблюдалось снижение показателя КМСК (P &lt; 0,05). В целом, установлено, что применение в качестве профилактического средства композиции лактобактерий в составе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс показывает наилучшие результаты при анализе кишечного микробиома у лабораторных животных, которые близки к данным показателям<br />
в группе здоровых животных.</p>
<p>Таким образом, результаты изучения лечебно-профилактического действия выделенных культур лактобацилл на модели экспериментального дисбактериоза кишечника у лабораторных животных показали, что применение их консоциума<br />
в составе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс способствует стойкому клиническому результату, характеризующемуся повышением уровня представителей нормофлоры (лакто- и бифидобактерий), а также снижением численности представителей патогенной и условно-патогенной микробиоты, с последующим достижением уровня показателей характерных для здоровых животных.</p>
<h3><a id="post-5185-_Toc27057853"></a><strong>2.15 ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ И РАЗДРАЖАЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ПРОБИОТИКА ГАЛЛОБАКТ-Ф-ПЛЮС</strong></h3>
<p>Токсикологическое действие пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс оценивали путем изучения параметров острой, подострой и хронической токсичностей, а также раздражающих характеристик на подопытных лабораторных животных. <a id="post-5185-_Toc485416664"></a></p>
<p>Изучение параметров токсичности пробиотика проводили согласно требований и рекомендаций (Тишков А. И., Аргунов М. Н., Ляшко Н. И., 1987; Хабриев Р. У., 2005; Смирнов А. А., Дорожин В. И., 2008).</p>
<p>Изучение кожно-резорбтивного действия и раздражающего свойства на слизистые оболочки глаз проводили на кроликах-альбиносах согласно ГОСТ Р ИСО 10993.10-99.</p>
<p>Изучение острой, подострой и хронической токсичностей проводили на клинически здоровых лабораторных животных (мыши, крысы), предварительно прошедших карантин в течение 14 дней. Лабораторные животные были распределены на группы по принципу пар-аналогов. Количество животных в каждой группе составляло по 10 гол. обоих полов, содержание самок и самцов было раздельным. В качестве лабораторных биообъектов исследований использовали нелинейных белых мышей с массой тела 18–20 г (возраст 2,5 мес) и половозрелых беспородных белых крыс с массой тела 180–200 г (возраст 2,5 мес). Лабораторные животные всех групп содержались в соотсветствии с требованиями (СП 2.2.1.3218-14).</p>
<p>При изучении показателей острой токсичности пробиотик лабораторным животным вводили однократно после 12-часовой голодной выдержки. Для получения достоверных результатов, эксперимент проводили в трех повторностях. Для перорального введения применяли металлический внутрижелудочный зонд. При введении препаратов животных фиксировали в вертикальном положении с незначительным запрокидыванием головы, вводили зонд в желудок<br />
и медленно растворы. Кормление животных осуществляли через 3 ч с момента введения биопрепарата. После применения пробиотика за лабораторными животными вели наблюдение в течение двух недель, учитывая при этом изменения их общего поведения и состояния.</p>
<p>Титр микробных клеток в пробиотике Галлобакт-Ф-Плюс составлял 7,9 × 10<sup>9</sup> КОЕ/мл. С учетом массы лабораторных животных, а также рекомендаций по максимально вводимому объему жидкости зондовым способом (50,0 мл/кг) (ГОСТ Р ИСО 10993-11-2009) были рассчитаны объемы вводимые для мышей и крыс, которые составили – 1,0 и 10,0 мл пробиотика на одно животное, соответственно. Жидкости в объеме 10,0 мл крысам давали дробно<br />
в течение суток.</p>
<p>Для изучения острой токсичности пробиотика было сформировано методом пар-аналогов пять групп животных: интактная группа – лабораторные мыши и крысы не получали дополнительных растворов, кроме стандартного поения и кормления; контрольная группа – вместо биопрепарата лабораторные мыши и крысы получали физиологический раствор в максимальном объеме (1,0 и 10,0 мл, соответственно) как в 3-й опытной группе; 1-я опытная группа – пробиотик в испытуемой дозе вводили перорально в объеме 0,2 мл мышам и 2,0 мл крысам; 2-я опытная группа − мышам жидкий пробиотик вводили внутрижелудочно в объеме 0,5 мл, а крысам– 5,0 мл; 3-я опытная группа – Галлобакт-Ф-Плюс вводили внутрижелудочно мышам в объеме 1,0 мл, а крысам – 10,0 мл.</p>
<p>Изучение подострой и хронической токсичностей кормовой добавки дает возможность выявить длительное действие их основных компонентов на функциональное состояние отдельных органов, тканей и систем, а также их способность к кумуляции. Подострая токсичность длилась 3 мес, а хроническая –<br />
6 мес (Смирнов А. А., Дорожин В. И., 2008). При изучении подострой и хронической токсичностей опытным лабораторным животным пробиотик вводили ежедневно, внутрижелудочно в дозировках, составляющих 1/10, 1/20 и 1/50 от максимально введенной в остром эксперименте. После разбавления в полученные дозы прибавляли физиологический раствор до объема, обеспечивающего комфортное введение испытуемых добавок подопытным животным. За лабораторными животными велось ежедневное наблюдение, при этом контролировали их сохранность, поведение, аппетит и общее состояние. В начале и конце эксперимента проводилось индивидуальное взвешивание лабораторных животных. На финальном этапе эксперимента лабораторные животные подвергались умерщвлению путем эвтаназии с целью изучения морфо-биохимических показателей крови, а также проводился анализ состояния их органов и тканей, путем патолого-анатомического вскрытия.</p>
<p>На двух половозрелых кроликах-альбиносах разного пола (масса тела 2,2‒2,5 кг) для пробиотика проводили изучение кожно-резорбтивного действия. Кроликам за сутки до проведения исследований выстригали шерсть на симметричных участках обоих боков для аппликации. Один из выстриженных участков являлся контролем. Размер обрабатываемого участка кожи составлял от 5,0 до 8,0 % поверхности тела лабораторного кролика-альбиноса. На ватные тампоны наносили 1,0 мл биопрепарата и прикладывали его на выстриженный участок кожи. Фиксировали ватный тампон марлевой повязкой. Местно-раздража­ющее действие биопрепарата на кожу оценивали после 4-часовой выдержки,<br />
а далее через 24; 48 и 72 ч. Учитывали наличие покраснения, повышение чувствительности, припухлости, воспаления, возможное проявление эритемы<br />
и отека, а также другие общие реакции организма лабораторного животного на изучаемые биопрепараты. Проводили оценку индекса первичного раздражения.</p>
<p>Изучение раздражающего действия разрабатываемой кормовой добавки на конъюнктиву проводили на двух половозрелых кроликах-альбиносах обоего пола (масса 2,9‒3,1 кг). Перед исследованиями проводили осмотр состояния глаз каждого лабораторного кролика-альбиноса. Для проведения эксперимента подопытным кроликам в нижний конъюнктивальный мешок правого глаза вводили 0,1 мл изучаемого биопрепарата. После введения испытуемого биопрепарата нижнее и верхнее веки смыкали и выдерживали в течение 2–3 с. Контролем служил левый глаз. Осмотр глаза лабораторных животных после инсоляции биопрепарата проводили через 1; 24; 48 и 72 ч. Учитывали следующее: состояние конъюнктивы, роговицы, радужной оболочки, наличие отека, а также других выделений из правого глаза. Оценивали индекс первичного раздражения.</p>
<p><em>Изучение острой токсичности</em>. Изучение острой токсичности биопрепарата Галлобакт-Ф-Плюс осуществляли на нелинейных белых мышах и половозрелых беспородных белых крысах. Результаты острой токсичности пробиотика представлены в таблице 43.</p>
<p>В результате проведенного эксперимента установлено, что в опытных группах не зависимо от того, какие в опыте применялись дозы пробиотика, не было зафиксировано гибели и заболевших животных, как и в группах интактной и контрольной. При ежедневном осмотре лабораторных животных можно было наблюдать, что мыши и крысы оставались подвижными и активными, регистрировалась удовлетворительная поедаемость корма, при сохранении всех жизненных рефлексов. В изучаемом диапазоне доз пробиотика смертность<br />
в опытных группах не выявлена, что говорит об отсутствии полулетальной дозы. Таким образом, пробиотическая добавка Галлобакт-Ф-Плюс в исследуемых микробных концентрациях не вызывает выраженного токсикоза у лабораторных животных, в связи с чем ее можно согласно ГОСТ 12.1.007-76, отнести<br />
к 4-му классу опасности (малотоксичные вещества).</p>
<p><a id="post-5185-_Toc485416665"></a><em>Изучение подострой токсичности</em>. Так как определить полулетальную дозу пробиотика в остром опыте не удалось, в качестве основной дозы при изучении подострой токсичности был взят максимальный объем вводимого биопрепарата для мышей и крыс (1,0 и 10,0 мл). Опытным лаборторным животным пробиотическую добавку задавали внутрь жедудка в концентрациях, составляющих 1/10, 1/20 и 1/50 от максимально вводимой в остром эксперименте. Таким образом, мыши получали пробиотик в объеме, соответственно, 0,1; 0,05 и 0,02 мл (7,9 × 10<sup>8</sup>; 3,9 × 10<sup>8</sup> и 1,5 × 10<sup>8</sup> КОЕ/мл), а крысы 1,0; 0,5 и 0,2 мл (7,9 × 10<sup>9</sup>; 3,9 × 10<sup>9</sup><br />
и 1,5 × 10<sup>9</sup> КОЕ/мл). Помимо опытных групп формировались также группы, в которых не использовали аналогичные препараты: интактная группа – лабораторные мыши и крысы не получали дополнительных растворов, кроме стандартного поения и кормления; контрольная группа – вместо биопрепарата лабораторные мыши и крысы получали физиологический раствор в максимальном объеме (1,0<br />
и 10,0 мл, соответственно). Введение растворов осуществляли ежедневно, через зонд, перорально. Результаты определения подострой токсичности биопрепарата Галлобакт-Ф-Плюс представлены в таблице 44.</p>
<p><strong>Таблица 43 </strong>– Острая токсичность пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на лабораторных животных (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Группа</td>
<td rowspan="2">Вид<br />
животного</td>
<td rowspan="2">Объем вводимой жидкости,<br />
способ введения</td>
<td rowspan="2">Доза пробиотика,<br />
КОЕ/мл</td>
<td colspan="3">Результат испытаний, гол.</td>
</tr>
<tr>
<td>заболело</td>
<td>пало</td>
<td>выжило</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Интактная</td>
<td>Мыши</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Контрольная</td>
<td>Мыши</td>
<td>1,0 мл физ. раствора, перорально</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>10,0 мл физ. раствора, перорально</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">1-я опытная</td>
<td>Мыши</td>
<td>0,2 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>1,6 × 10<sup>9</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>2,0 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>1,5 × 10<sup>10</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">2-я опытная</td>
<td>Мыши</td>
<td>0,5 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>3,9 × 10<sup>9</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>5,0 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>3,9 × 10<sup>10</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">3-я опытная</td>
<td>Мыши</td>
<td>1,0 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>7,9 × 10<sup>9</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>10,0 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>7,9 × 10<sup>10</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 44 </strong>– Подострая токсичность пробиотической добавки Галлобакт-Ф-Плюс на лабораторных животных (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Группа</td>
<td rowspan="2">Вид<br />
животного</td>
<td rowspan="2">Объем вводимой жидкости,<br />
способ введения</td>
<td rowspan="2">Доза пробиотика,<br />
КОЕ/мл</td>
<td colspan="3">Результат испытаний, гол.</td>
</tr>
<tr>
<td>заболело</td>
<td>пало</td>
<td>выжило</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Интактная</td>
<td>Мыши</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Контрольная</td>
<td>Мыши</td>
<td>1,0 мл физ. раствора, перорально</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>10,0 мл физ. раствора, перорально</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">1-я опытная</td>
<td>Мыши</td>
<td>0,1 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>7,9 × 10<sup>8</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>1,0 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>7,9 × 10<sup>9</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">2-я опытная</td>
<td>Мыши</td>
<td>0,05 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>3,9 × 10<sup>8</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>0,5 мл Галлобакт-Ф-Плюс перорально</td>
<td>3,9 × 10<sup>9</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">3-я опытная</td>
<td>Мыши</td>
<td>0,02 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>1,5 × 10<sup>8</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>0,2 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>1,5 × 10<sup>9</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Из эксперимента по наблюдению за общим состоянием и поведением животных установлено, что пробиотик в изучаемых дозировках не оказал негатичного влияния на организм подопытных биообъектов. Подопытные животные удовлетворительно переносили дозы биопрепарата. Гибели – не выявлено. Мыши и крысы в период постановки эксперимента оставались подвижными<br />
и активными, а шерстный покров был гладким с характерным отблеском.</p>
<p>Проводилось изучение влияния пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на прирост живой массы лабораторных животных за период исследований. Учет живой массы мышей и крыс проводили перед постановкой опыта и после его завершения. Результаты эксперимента представлены в таблице 45.</p>
<p><strong>Таблица 45 </strong>– Влияние Галлобакт-Ф-Плюс на рост и развитие лабораторных животных</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Группа</td>
<td colspan="2">Масса тела, г</td>
<td rowspan="2">Прирост за опыт, г</td>
</tr>
<tr>
<td>в начале опыта</td>
<td>в конце опыта</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4">Мыши</td>
</tr>
<tr>
<td>Интактная</td>
<td>18,87±0,27</td>
<td>25,63 ± 0,29</td>
<td>6,76</td>
</tr>
<tr>
<td>Контрольная</td>
<td>18,56±0,25</td>
<td>26,14 ± 0,25</td>
<td>7,58</td>
</tr>
<tr>
<td>1-я опытная</td>
<td>18,37±0,28</td>
<td>31,89 ± 0,24*</td>
<td>13,89</td>
</tr>
<tr>
<td>2-я опытная</td>
<td>18,43±0,30</td>
<td>30,58 ± 0,27*</td>
<td>12,15</td>
</tr>
<tr>
<td>3-я опытная</td>
<td>18,69±0,27</td>
<td>31,43 ± 0,26*</td>
<td>12,74</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4">Крысы</td>
</tr>
<tr>
<td>Интактная</td>
<td>189,75±1,67</td>
<td>222,63 ± 1,85</td>
<td>32,88</td>
</tr>
<tr>
<td>Контрольная</td>
<td>190,12±1,58</td>
<td>224,36 ± 1,71</td>
<td>34,24</td>
</tr>
<tr>
<td>1-я опытная</td>
<td>189,65±1,72</td>
<td>235,93 ± 1,68*</td>
<td>46,28</td>
</tr>
<tr>
<td>2-я опытная</td>
<td>189,71±1,59</td>
<td>234,71 ± 1,75*</td>
<td>45,00</td>
</tr>
<tr>
<td>3-я опытная</td>
<td>190,42±1,64</td>
<td>234,32 ± 1,63*</td>
<td>43,90</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Установлено, что масса тела лабораторных животных, в частности 1–3-й опытных группах была выше, чем в контрольной группе при статистичеки достоверной разнице (Р &lt; 0,05). Так, в 1-й опытной группе масса тела мышей была выше, чем в контрольной и интактной группах на 22,1 и 24,4 %, во 2-й опытной группе выше на 16,9 и 19,3 %, а в 3-й группе – на 20,2 и 22,6 %, соответсвенно.</p>
<p>Аналогичная тенденция наблюдалась в опытных группах лабораторных крыс. Так, в 1–3-й опытных группах живая масса крыс была достоверно выше, чем в контрольной на 5,2; 4,6 и 4,4 %, соответсвенно (Р &lt; 0,05).</p>
<p>Проводилось изучение действия пробиотической добавки Галлобакт-Ф-Плюс на обмен веществ организма подопытных групп лабораторных мышей<br />
и крыс через их морфо-биохимические показатели крови (таблица 46 и 47).</p>
<p><strong>Таблица 46 </strong>– Морфологические и биохимические показатели крови<br />
лабораторных мышей после применения пробиотика<br />
Галлобакт-Ф-Плюс (n = 6)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>интактная</td>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Морфологические показатели</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>7,32±0,21</td>
<td>7,31±0,19</td>
<td>7,29±0,18</td>
<td>7,30±0,17</td>
<td>7,26±0,22</td>
</tr>
<tr>
<td>Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л</td>
<td>8,21±0,17</td>
<td>8,32±0,16</td>
<td>8,53±0,12</td>
<td>8,51±0,19</td>
<td>8,49±0,20</td>
</tr>
<tr>
<td>Тромбоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>235,32±3,12</td>
<td>238,94±3,42</td>
<td>241,26±3,33</td>
<td>245,14±3,26</td>
<td>245,63±3,64</td>
</tr>
<tr>
<td>Гемоглобин, г/л</td>
<td>125,21±2,58</td>
<td>122,54±2,71</td>
<td>131,32±2,65</td>
<td>133,51±2,61</td>
<td>128,12±2,46</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Биохимические показатели</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Общий белок, г/л</td>
<td>53,99±1,25</td>
<td>55,04±1,36</td>
<td>62,72±1,01*</td>
<td>63,47±1,12*</td>
<td>63,24±1,09*</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>альбумин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>22,45±0,65</td>
<td>22,53±0,79</td>
<td>27,34±0,77*</td>
<td>27,26±0,71*</td>
<td>27,79±0,74*</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>глобулин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>31,54±0,71</td>
<td>32,51±0,85</td>
<td>35,38±0,56</td>
<td>36,21±0,62</td>
<td>35,45±0,61</td>
</tr>
<tr>
<td>А/Г коэффициент</td>
<td>0,71±0,03</td>
<td>0,69±0,02</td>
<td>0,77±0,03</td>
<td>0,75±0,02</td>
<td>0,78±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td>Мочевина, мМ/л</td>
<td>19,16±0,43</td>
<td>19,21±0,51</td>
<td>18,87±0,39</td>
<td>19,12±0,40</td>
<td>18,97±0,39</td>
</tr>
<tr>
<td>Холестерин, мМ/л</td>
<td>1,53±0,03</td>
<td>1,55±0,02</td>
<td>1,51±0,03</td>
<td>1,50±0,04</td>
<td>1,49±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Кальций, мМ/л</td>
<td>2,37±0,05</td>
<td>2,31±0,04</td>
<td>2,38±0,04</td>
<td>2,41±0,05</td>
<td>2,35±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Фосфор, мМ/л</td>
<td>1,32±0,03</td>
<td>1,36±0,02</td>
<td>1,42±0,03</td>
<td>1,49±0,04</td>
<td>1,43±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td>АСТ, Ед/л</td>
<td>105,86±3,45</td>
<td>103,53±3,73</td>
<td>106,52±3,51</td>
<td>104,75±3,49</td>
<td>106,48±3,62</td>
</tr>
<tr>
<td>АЛТ, Ед/л</td>
<td>85,46±2,78</td>
<td>88,67±2,91</td>
<td>84,65±2,84</td>
<td>85,84±2,93</td>
<td>86,41±2,79</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>При анализе морфо-биохимического статуса крови лабораторных мышей после использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс установлено, что в конце подострого эксперимента показатели крови находились в пределах физиологической нормы для данных биологических объектов исследований. Патологии<br />
в обмене веществ выявлено не было. Однако по уровню отдельных показателей можно было выявить то, что использование добавки позитивно повлияло на организм лабораторных мышей. Так, в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах мышей уровень эритроцитов и гемоглобина был более завышен, чем в контрольной группе на 2,5 и 7,1 %; 2,3 и 8,9 %; 2,0 и 4,6 %, соответственно. Повышение изучаемых показателей свидетельствует о том, что наблюдается улучшение насыщаемости органов и тканей подопытных животных, так как гемоглобин способен связыватся с кислородом, а эритроциты переносят его с током крови по организму, и как следствие наблюдается усиление окислительно-восстановитель­ного процесса. Также повышеный в пределах нормы гемоглобин будет обеспечивать лучшее освобождение углекислого газа в легких. Содержание лейкоцитов в опытных группах было в пределах физиологической нормы, а также находилось на одном уровне с интактной и контрольной группой, что говорит об отсутствии негативных воздействий на организм лабораторных мышей от применяемой добавки, так как данные клетки крови ответственны за специфическую и неспецифическую защиту организма от внешних и внутренних негативных агентов. Аналогичная позитивная динамика была обнаружена при анализе биохимических показателей крови белых мышей. Статистически достоверная разница была выявлена при изучении уровня общего белка и его отдельных составляющих в крови опытных групп. Так, в 1-й опытной группе содержание общего белка было выше, чем в контроле, на 13,9 %, во 2-й – на 15,3 % и в<br />
3-й ‒ на 14,9 % (Р &lt; 0,05). Степень интенсивности процесса биосинтеза белковых компонентов крови показывает белковый коэффициент (А/Г), который в первой опытной группе был незначительно выше, чем в контрольной и интактной группах на 11,6 и 8,5 %, во 2-й опытной группе выше на 8,7 и 5,6 %, а в 3-й группе – на 13,0 и 9,8 %, соотвественно. По остальным биохимическим показателям крови существенной разницы не наблюдалось. В целом негативные последствия со стороны действия пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс отсутствовали, а в отдельных случаях выявлено позитивное его влияние на обмен веществ в организме.</p>
<p>При проведении подострой токсичности на лабораторных крысах выявлено положительное влияние изучаемой добавки на морфо-биохимический статус крови животных. Из таблицы 47 видно, что содержание эритроцитов в цельной крови опытных групп животных было незначительно выше, чем в контрольной на 2,6; 1,9 и 1,7 %, соответственно. Уровень гемоглобина в эритроцитах по сравнению с контрольной группой в 1-й опытной группе был выше на 4,1 %, во 2-й – на 3,7 %, а в 3-й – на 6,3 %. Количество других элементов цельной крови находилось на одном физиологически нормальном уровне. В целом, морфологический статус крови лабораторных крыс показал отсутствие негативного воздействия пробиотика на организм животных, а даже наоборот, способствовал усилению обмена веществ.</p>
<p><strong>Таблица 47 </strong>– Морфологические и биохимические показатели крови<br />
лабораторных крыс после применения пробиотика<br />
Галлобакт-Ф-Плюс (n = 6)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>интактная</td>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Морфологические показатели</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>11,34±0,35</td>
<td>11,41±0,29</td>
<td>11,31±0,28</td>
<td>11,33±0,33</td>
<td>11,29±0,31</td>
</tr>
<tr>
<td>Гемоглобин, г/л</td>
<td>102,63±3,78</td>
<td>105,73±3,62</td>
<td>110,11±3,71</td>
<td>109,63±3,84</td>
<td>112,42±3,67</td>
</tr>
<tr>
<td>Тромбоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>153,54±3,32</td>
<td>154,83±3,31</td>
<td>161,38±3,41</td>
<td>158,84±3,28</td>
<td>158,38±3,36</td>
</tr>
<tr>
<td>Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л</td>
<td>5,32±0,12</td>
<td>5,37±0,13</td>
<td>5,51±0,11</td>
<td>5,47±0,15</td>
<td>5,46±0,17</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Биохимические показатели</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Общий белок, г/л</td>
<td>66,13±1,34</td>
<td>65,13±1,21</td>
<td>68,80±1,36</td>
<td>68,51±1,31</td>
<td>69,60±1,27</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>альбумин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>29,64±0,82</td>
<td>28,98±0,78</td>
<td>31,12±0,76</td>
<td>31,02±0,79</td>
<td>31,78±0,81</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>глобулин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>36,49±0,74</td>
<td>36,15±0,69</td>
<td>37,68±0,54</td>
<td>37,49±0,59</td>
<td>37,82±0,61</td>
</tr>
<tr>
<td>А/Г коэффициент</td>
<td>0,81±0,02</td>
<td>0,80±0,01</td>
<td>0,83±0,02</td>
<td>0,83±0,02</td>
<td>0,84±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Мочевина, мМ/л</td>
<td>5,64±0,16</td>
<td>5,60±0,19</td>
<td>5,58±0,15</td>
<td>5,62±0,13</td>
<td>5,61±0,14</td>
</tr>
<tr>
<td>Холестерин, мМ/л</td>
<td>1,87±0,03</td>
<td>1,83±0,04</td>
<td>1,79±0,03</td>
<td>1,81±0,03</td>
<td>1,81±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Кальций, мМ/л</td>
<td>2,49±0,05</td>
<td>2,52±0,06</td>
<td>2,55±0,04</td>
<td>2,58±0,03</td>
<td>2,56±0,07</td>
</tr>
<tr>
<td>Фосфор, мМ/л</td>
<td>13,18±0,25</td>
<td>13,24±0,31</td>
<td>13,32±0,36</td>
<td>13,30±0,28</td>
<td>13,28±0,29</td>
</tr>
<tr>
<td>АСТ, Ед/л</td>
<td>153,65±3,85</td>
<td>155,48±3,67</td>
<td>158,54±3,74</td>
<td>156,38±3,48</td>
<td>156,21±3.54</td>
</tr>
<tr>
<td>АЛТ, Ед/л</td>
<td>135,17±3,45</td>
<td>139,24±3,21</td>
<td>139,49±3,67</td>
<td>141,82±3,42</td>
<td>138,15±3,33</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Аналогичная позитивная динамика была выявлена при анализе биохимических показателей крови подопытных крыс. Показатели крови располагались на уровне физиологической нормы. Показатель общего белка в сыворотке крови 1-й, 2-й и 3-й подопытных групп был выше, чем в группе контроля на 5,2<br />
и 6,9 %. Негативного действия на биохимические показатели сыворотки крови лабораторных крыс не зафиксировано.</p>
<p>Таким образом, результаты подострой токсичности пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс показали, что биопрепарат не оказал негативного (токсического) воздействия на организм подопытных лабораторных мышей и крыс.</p>
<p><em>Изучение хронической токсичности</em>. Влияние пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на организм лабораторных животных в хроничеком эксперименте осуществляли аналогично подострому опыту, однако срок проведения испытаний составил 6 мес. Также дополнительно проводили патологоанатомическое вскрытие подопытных животных для изучения влияния биопрепарата на органы и ткани мышей и крыс.</p>
<p>Исследования показали, что лабораторные животные удовлетворительно переносили изучаемые дозы пробиотика. Гибели животных ‒ не выявлено. Нарушений в физиологической картине лабораторных животных не зафиксировано. Мыши и крысы в период проведения хронического опыта оставались жизнеспособны, движения были активные. Шерстный покров в норме (таблица 48).</p>
<p>Результаты изучения влияния действия биопрепарата на массу тела подопытных лабораторных животных, а также прирост представлены в таблице 49.</p>
<p>Из данных таблицы 49 установлено, что введение пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс в рацион подопытных групп оказало статистически достоверное повышение на массу тела лабораторных животных. В первой, во второй и третьей опытных группах мышей масса животных на конец эксперимента была выше, чем в контрольной группе на 3,85 г (10,9 %), 3,56 г (10,1 %) и 3,25 г (9,2 %), соответственно (Р &lt; 0,05). Прирост биообъектов был аналогично массе их тела, больше в опытных группах, чем в контрольной на 3,92 г (23,3 %), 3,54 г (21,0 %) и 3,3 г (19,6 %). В 1-й опытной группе лабораторных крыс наблюдаласть тенденция к возрастанию массы животных по отношению к крысам<br />
в контрольной группе на 10,19 г, или 4,1 %. Во 2-й и 3-й опытных группах масса тела животных была достоверно выше, чем в контрольной группе на 11,75 г (4,8 %) и 10,3 г (4,2 %), соотвественно (Р &lt; 0,05). Прирост в 1–3-й опытных группах крыс был выше, чем в группе контроля на 10,0 г, или 19,0 %.</p>
<p>Аналогично подострому эксперименту в хроническом опыте также проводили изучение влияния пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на организм лабораторных животных, через их морфологические и биохимические показатели цельной крови и сыворотки. Результаты исследований представлены в таблице 50 и 51.</p>
<p><strong>Таблица 48 </strong>– Хроническая токсичность пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на лабораторных животных (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Группа</td>
<td rowspan="2">Вид<br />
животного</td>
<td rowspan="2">Объем вводимой жидкости, способ введения</td>
<td rowspan="2">Доза пробиотика,<br />
КОЕ/мл</td>
<td colspan="3">Результат испытаний, гол.</td>
</tr>
<tr>
<td>заболело</td>
<td>пало</td>
<td>выжило</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Интактная</td>
<td>Мыши</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>−</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Контрольная</td>
<td>Мыши</td>
<td>1,0 мл физ. раствора, перорально</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>10,0 мл физ. раствора, перорально</td>
<td>−</td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">1-я опытная</td>
<td>Мыши</td>
<td>0,1 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>7,9 × 10<sup>8</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>1,0 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>7,9 × 10<sup>9</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">2-я опытная</td>
<td>Мыши</td>
<td>0,05 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>3,9 × 10<sup>8</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>0,5 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>3,9 × 10<sup>9</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">3-я опытная</td>
<td>Мыши</td>
<td>0,02 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>1,5 × 10<sup>8</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>Крысы</td>
<td>0,2 мл Галлобакт-Ф-Плюс, перорально</td>
<td>1,5 × 10<sup>9</sup></td>
<td>0</td>
<td>0</td>
<td>10</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 49 </strong>– Влияние Галлобакт-Ф-Плюс на рост и развитие лабораторных животных</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Группа</td>
<td colspan="2">Масса тела, г</td>
<td rowspan="2">Прирост за опыт, г</td>
</tr>
<tr>
<td>в начале опыта</td>
<td>в конце опыта</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4">Мыши</td>
</tr>
<tr>
<td>Интактная</td>
<td>18,45±0,42</td>
<td>34,64 ± 0,47</td>
<td>16,19</td>
</tr>
<tr>
<td>Контрольная</td>
<td>18,54±0,44</td>
<td>35,37 ± 0,44</td>
<td>16,83</td>
</tr>
<tr>
<td>1-я опытная</td>
<td>18,47±0,38</td>
<td>39,22 ± 0,42*</td>
<td>20,75</td>
</tr>
<tr>
<td>2-я опытная</td>
<td>18,56±0,39</td>
<td>38,93 ± 0,49*</td>
<td>20,37</td>
</tr>
<tr>
<td>3-я опытная</td>
<td>18,49±0,43</td>
<td>38,62 ± 0,44*</td>
<td>20,13</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4">Крысы</td>
</tr>
<tr>
<td>Интактная</td>
<td>195,32±2,87</td>
<td>245,56 ± 1,13</td>
<td>50,24</td>
</tr>
<tr>
<td>Контрольная</td>
<td>194,67±2,64</td>
<td>246,48 ± 1,11</td>
<td>51,81</td>
</tr>
<tr>
<td>1-я опытная</td>
<td>195,14±2,83</td>
<td>256,67 ± 1,16</td>
<td>61,53</td>
</tr>
<tr>
<td>2-я опытная</td>
<td>196,34±2,72</td>
<td>258,23 ± 1,22*</td>
<td>61,89</td>
</tr>
<tr>
<td>3-я опытная</td>
<td>194,89±2,79</td>
<td>256,78 ± 1,07*</td>
<td>61,89</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="4">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 50 </strong>– Морфологические и биохимические показатели крови<br />
лабораторных мышей после применения пробиотика<br />
Галлобакт-Ф-Плюс (n = 6)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>интактная</td>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Морфологические показатели</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л</td>
<td>8,03±0,12</td>
<td>8,10±0,14</td>
<td>8,34±0,14</td>
<td>8,39±0,13</td>
<td>8,38±0,12</td>
</tr>
<tr>
<td>Гемоглобин, г/л</td>
<td>102,76±2,87</td>
<td>105,38±2,94</td>
<td>110,34±2,89</td>
<td>108,36±2,77</td>
<td>109,83±2,92</td>
</tr>
<tr>
<td>Тромбоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>201,53±3,73</td>
<td>203,17±3,56</td>
<td>208,42±3,68</td>
<td>210,11±3,73</td>
<td>206,82±3,84</td>
</tr>
<tr>
<td>Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>7,21±0,22</td>
<td>7,20±0,18</td>
<td>7,19±0,19</td>
<td>7,22±0,16</td>
<td>7,22±0,18</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Биохимические показатели</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Общий белок, г/л</td>
<td>51,25±0,76</td>
<td>52,73±0,67</td>
<td>59,62±0,81*</td>
<td>60,57±0,80*</td>
<td>59,65±0,75*</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>альбумин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>21,13±0,79</td>
<td>21,26±0,75</td>
<td>25,14±0,81</td>
<td>25,75±0,79</td>
<td>24,96±0,83</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>глобулин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>30,12±0,71</td>
<td>31,47±0,69</td>
<td>34,48±0,68</td>
<td>34,82±0,71</td>
<td>34,69±0,75</td>
</tr>
<tr>
<td>А/Г коэффициент</td>
<td>0,70±0,02</td>
<td>0,67±0,03</td>
<td>0,72±0,03</td>
<td>0,74±0,02</td>
<td>0,72±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Холестерин, мМ/л</td>
<td>1,67±0,03</td>
<td>1,62±0,04</td>
<td>1,53±0,03</td>
<td>1,55±0,04</td>
<td>1,54±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Мочевина, мМ/л</td>
<td>21,46±0,52</td>
<td>20,89±0,49</td>
<td>21,64±0,45</td>
<td>20,84±0,46</td>
<td>20,17±0,43</td>
</tr>
<tr>
<td>Кальций, мМ/л</td>
<td>2,14±0,03</td>
<td>2,11±0,03</td>
<td>2,22±0,02</td>
<td>2,24±0,03</td>
<td>2,19±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Фосфор, мМ/л</td>
<td>1,14±0,03</td>
<td>1,17±0,02</td>
<td>1,20±0,03</td>
<td>1,19±0,03</td>
<td>1,17±0,04</td>
</tr>
<tr>
<td>АСТ, Ед/л</td>
<td>125,27±3,56</td>
<td>122,02±3,73</td>
<td>126,28±3,84</td>
<td>124,27±3,63</td>
<td>123,87±3,81</td>
</tr>
<tr>
<td>АЛТ, Ед/л</td>
<td>91,63±1,76</td>
<td>90,46±1,85</td>
<td>91,47±1,68</td>
<td>90,97±1,73</td>
<td>89,68±1,95</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 51 </strong>– Морфологические и биохимические показатели крови<br />
лабораторных крыс после применения пробиотика<br />
Галлобакт-Ф-Плюс (n = 6)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>интактная</td>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Морфологические показатели</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л</td>
<td>5,24±0,15</td>
<td>5,28±0,16</td>
<td>5,35±0,15</td>
<td>5,33±0,16</td>
<td>5,36±0,17</td>
</tr>
<tr>
<td>Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>11,01±0,19</td>
<td>11,24±0,19</td>
<td>10,57±0,18</td>
<td>11,03±0,18</td>
<td>10,96±0,21</td>
</tr>
<tr>
<td>Тромбоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>143,65±2,45</td>
<td>147,62±2,32</td>
<td>145,38±2,53</td>
<td>148,23±2,52</td>
<td>145,32±2,62</td>
</tr>
<tr>
<td>Гемоглобин, г/л</td>
<td>111,64±2,34</td>
<td>109,38±2,46</td>
<td>118,65±2,41</td>
<td>117,73±2,47</td>
<td>115,27±2,40</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Биохимические показатели</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Общий белок, г/л</td>
<td>62,58±0,75</td>
<td>63,24±0,72</td>
<td>65,22±0,75*</td>
<td>66,32±0,76*</td>
<td>66,29±0,61*</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>альбумин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>28,32±0,74</td>
<td>28,23±0,68</td>
<td>29,85±0,61</td>
<td>30,11±0,71</td>
<td>30,32±0,65</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>глобулин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>34,26±0,62</td>
<td>35,01±0,58</td>
<td>35,37±0,56</td>
<td>36,21±0,59</td>
<td>35,97±0,60</td>
</tr>
<tr>
<td>А/Г коэффициент</td>
<td>0,82±0,02</td>
<td>0,80±0,02</td>
<td>0,84±0,02</td>
<td>0,83±0,02</td>
<td>0,84±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Мочевина, мМ/л</td>
<td>5,43±0,12</td>
<td>5,51±0,09</td>
<td>5,41±0,11</td>
<td>5,45±0,12</td>
<td>5,48±0,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Холестерин, мМ/л</td>
<td>2,12±0,05</td>
<td>2,07±0,03</td>
<td>1,98±0,03</td>
<td>1,99±0,04</td>
<td>2,05±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Кальций, мМ/л</td>
<td>2,23±0,04</td>
<td>2,27±0,03</td>
<td>2,31±0,03</td>
<td>2,28±0,04</td>
<td>2,27±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Фосфор, мМ/л</td>
<td>11,26±0,22</td>
<td>11,35±0,25</td>
<td>11,38±0,19</td>
<td>11,33±0,23</td>
<td>11,29±0,22</td>
</tr>
<tr>
<td>АСТ, Ед/л</td>
<td>167,87±3,35</td>
<td>165,97±3,21</td>
<td>170,12±3,33</td>
<td>166,75±3,26</td>
<td>168,64±3,19</td>
</tr>
<tr>
<td>АЛТ, Ед/л</td>
<td>139,64±3,11</td>
<td>143,37±3,06</td>
<td>141,68±3,09</td>
<td>144,85±3,18</td>
<td>140,39±3,02</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Показатели крови всех изучаемых подопытных лабораторных животных были в норме для данных видов биообъектов. Патологии в изучаемых показателях, аналогично поставленным опытам в подостром эксперименте, не выявлено. Как в подостром, так и в хроническом опыте при использовании пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс по анализируемым показателям крови можно было сделать вывод о позитивном влиянии добавки на организм мышей и крыс.</p>
<p>При проведении вскрытия лабораторных подопытных биообъектов, а также интактных и контрольных групп животных изменений и патологий в расположении и структуре внутренних органов – не выявлено. Органы в грудной<br />
и брюшной полостях располагались анатомически правильно.</p>
<p>Таким образом, длительное применение пробиотической добавки Галлобакт-Ф-Плюс на нелинейных белых мышах и половозрелых беспородных белых крысах не оказало токсического воздействия на их организм.<a id="post-5185-_Toc485416666"></a></p>
<p><em>Изучение кожно-резорбтивного и раздражающего свойства. </em>Применение пробиотика предполагает его возможное попадание на кожу или слизистые оболочки глаз, в связи с чем, чтобы исключить какое-либо негативные вляиние в тахих случаях, важным было изучить раздражающие характеристики Галлобакт-Ф-Плюса на поверхность кожи и конъюнктиву глаз лабораторных животных. Биообъектами исследований выступали кролики-альбиносы.</p>
<p>Результаты накожных аппликаций показали, что в ходе опыта у лабораторных кроликов-альбиносов отсутствовали: местное покраснение, повышенная чувствительность, припухлость, воспаление, эритемы и отеки. Индекс первичного раздражения был зафиксирован как нулевой.</p>
<p>Конъюктивальная проба показала незначительное покраснение слизистой оболочки с одновременным выделением слезных желез сразу после введения биопрепарата, которые прошло в течении 2 мин. В дальнейшем негативного влияния не зафиксировано. Общее поведение и состояние животных через анализируемые промежутки времени (1; 24; 48 и 72 ч) оставалось положительным. Индекс первичного раздражения согласно ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009 был равен нулю.</p>
<p>Таким образом, проведенный комплекс токсикологических исследований биопрепарата Галлобакт-Ф-Плюс доказал, что пробиотик не проявляет токсического и раздражающего свойства, в связи с чем может быть использован в промышленном птицеводстве независимо от дозы применения в изучаемых пределах.</p>
<h3><a id="post-5185-_Toc485416667"></a><a id="post-5185-_Toc27057860"></a><strong>2.16 ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ПРОБИОТИКА ГАЛЛОБАКТ-Ф-ПЛЮС НА ОРГАНИЗМ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПТИЦЫ</strong></h3>
<p>Изучение фармакологических свойств, а также выявление наиболее эффективной дозы и схемы применения пробиотика проводили на перепелах мясной породы Техасские белые и Фараон, а также цыплятах-бройлерах быстрорастущих кроссов Кобб 500 и Росс 308.</p>
<p>Для изучения влияния пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на организм перепелов был проведен научно-хозяйственный опыт. Схема эксперимента на перепелах представлена в таблице 52.</p>
<p><strong>Таблица 52 </strong>– Схема научно-хозяйственного опыта на перепелах<br />
при использовании пробиотика</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Группа</td>
<td>Кол-во голов</td>
<td>Условия кормления<br />
и выпаивания</td>
<td>Схема<br />
выпаивания, дни</td>
</tr>
<tr>
<td>Контрольная</td>
<td>200</td>
<td>Стандартный рацион (СР)<br />
и питьевая вода (ПВ)</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>1-я опытная</td>
<td>200</td>
<td>СР, ПВ + 0,25 мл/гол. Галлобакт-Ф-Плюс</td>
<td rowspan="4">1; 3; 5; 7; 14; 21; 28; 35; 42; 49</td>
</tr>
<tr>
<td>2-я опытная</td>
<td>200</td>
<td>СР, ПВ + 0,5 мл/гол. Галлобакт-Ф-Плюс</td>
</tr>
<tr>
<td>3-я опытная</td>
<td>200</td>
<td>СР, ПВ + 0,75 мл/гол. Галлобакт-Ф-Плюс</td>
</tr>
<tr>
<td>4-я опытная</td>
<td>200</td>
<td>СР, ПВ + 1,0 мл/гол. Галлобакт-Ф-Плюс</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Для изучения влияния пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на организм цыплят-бройлеров быстрорастищих кроссов Кобб 500 и Росс 308 был проведен научно-хозяйственный опыт (таблица 53).</p>
<p>Продолжительность научно-хозяйственных экспериментов для каждой сельскохозяйственной птицы было индивидуальным. При выращивании перепелов испытания длились в течении 56 дней, для цыплят-бройлеров быстрорастущих кроссов – 42 дня.</p>
<p><strong>Таблица 53 </strong>– Схема научно-хозяйственного опыта на цыплятах-бройлерах быстрорастищих кроссов при использовании пробиотика<br />
Галлобакт-Ф-Плюс</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Группа</td>
<td>Кол-во голов</td>
<td>Условия кормления<br />
и выпаивания</td>
<td>Схема выпаивания, дни</td>
</tr>
<tr>
<td>Контрольная</td>
<td>60</td>
<td>Стандартный рацион (СР)<br />
и питьевая вода (ПВ)</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>1-я опытная</td>
<td>60</td>
<td>СР, ПВ + 0,25 мл/гол. Галлобакт-Ф-Плюс</td>
<td rowspan="4">1; 3; 5; 7; 14; 21;<br />
28; 35</td>
</tr>
<tr>
<td>2-я опытная</td>
<td>60</td>
<td>СР, ПВ + 0,5 мл/гол. Галлобакт-Ф-Плюс</td>
</tr>
<tr>
<td>3-я опытная</td>
<td>60</td>
<td>СР, ПВ + 0,75 мл/гол. Галлобакт-Ф-Плюс</td>
</tr>
<tr>
<td>4-я опытная</td>
<td>60</td>
<td>СР, ПВ + 1,0 мл/гол. Галлобакт-Ф-Плюс</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Каждый день велось наблюдение за клинико-физиологическим состоянием птицы путем осмотра поголовья, при этом обращали внимание на поведение, подвижность, перьевой покров, поедаемость корма и потребление воды. Во всех изучаемых группах рассчитывали процент сохранности птицы за весь период эксперимента. Еженедельно осуществляли изучение динамики живой массы птиц путем индивидуального взвешивания. По разнице начальной и конечной масс рассчитывали прирост птицы за весь эксперимент. Ежедневно велся учет за расходом комбикормов птицей. Конверсию корма рассчитывали как отношение съеденного комбикорма к 1 кг прироста за весь период исследований (Имангулов Ш. А., 2013).</p>
<p>Для изучения показателей мясной продуктивности после применения пробиотика в рационе птиц в конце исследований проводили их убой и анатомическую разделку. Проводили ветеринарно-санитарную экспертизу мяса птицы. Согласно требований изучали реакцию на пероксидазу, с формалином и сернокислой медью. Изучали содержание общего количества летучих жирных кислот (Правила ветеринарного осмотра, 1988). Проводили изучение показателя кислотности мяса птицы с использованием иономера pH-метр И-500 (ГОСТ<br />
Р 51478-99). Органолептические показатели, упитанность, а также микробиологическую чистоту мяса птицы изучали согласно нормативной документации (ГОСТ Р 50396.1-92; ГОСТ Р 51944-2002; ГОСТ Р 54673-2011; ГОСТ 31962-2013). Дегустация мяса птицы и бульона из них проводилась согласно методическим рекомендациям (Имангулов Ш. А., 2013).</p>
<p>Для изучения переваримости компонентов комбикорма птицей проводился балансовый эксперимент за неделю до окончания исследований (Имангулов Ш. А., 2013). Химический анализ комбикорма и помета изучали по нормативной документации: отбор пробы – ГОСТ 26712-94; определение влаги – ГОСТ 13496.3-92; определение сухого остатка – ГОСТ 26713-85; определение сырого протеина – ГОСТ 13496.4-93; определение сырого жира – ГОСТ 13496.15-97; определение сырой золы – ГОСТ 26226-95; определение сырой клетчатки – ГОСТ 13496.2-91.</p>
<p>Изучался морфологический статус крови сельскохозяйственной птицы<br />
и лабораторных животных. Количество клеток (эритроциты, лейкоциты и тром­боциты) в цельной крови подсчитывалось в камере с сеткой Горяева (Кудрявцев А. А., Кудрявцева Л. А., 1973). Содержание гемоглобина в эритроцитах измеряли на анализаторе НemoCue Hb. Биохимические показатели сыворотки крови подопытных животных и птиц изучали на полуавтоматическом настольном анализаторе Stat fax 4500. <em>In vitro</em> анализировали бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови (БАСК и ЛАСК) согласно методикам (Смирнова Н. П., Кузьмина Т. А., 1966; Стогник В. И. [и др.], 1989).</p>
<p>Проводился анализ химического состава мышечной ткани птиц после использования биопрепаратов. Изучали содержание влаги по ГОСТ 9793-74; жира – ГОСТ 23042-78 и белка – ГОСТ 25011-81. Диетическое свойство мяса птиц определяли отношением количества жира к белку (индекс качества мяса) в соответствии с рекомендациями (Имангулов Ш. А., 2013). Аминокислотный скор мышц подопытных птиц изучался методом капиллярного электрофореза, на приборе «Капель–105 М», с применением предварительной гидролизацией белка мяса кислотным способом.</p>
<p>В эксперименте по эффективности использования пробиотика в рационе птиц после убоя проводили резекцию отделов кишечника для изучения микробного фона. Содержимое кишечника ресуспендировали в физиологическом растворе, а выделение и идентификацию микрофлоры осуществляли согласно методическим рекомендациям (Выделение и идентификация бактерий, 2004).</p>
<p>Расчеты экономической эффективности использования пробиотика на сельскохозяйственной птице осуществляли с учетом стоимости его расхода, количества съеденного комбикорма и сохранностью птицепоголовья. Учитывали фактическую стоимость комбикормов и цену продукции птицеводства в период проведения испытаний.</p>
<p>Полученные в опытах данные подвергались биометрической обработке<br />
с помощью программного обеспечения фирмы Microsoft®. Критерий достоверности определяли по таблице Стъюдента. Разницу считали достоверной при Р &lt; 0,05.</p>
<h4><strong><em>2.16.1 Фармакологическое действие пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на организм перепелов Техасской породы</em></strong></h4>
<p>Был проведен научный опыт на перепелах Техасской породы (мясной белый перепел), выведенной сотрудниками селекционно-генетического центра Всероссийского института птицеводства и ООО «Генофонд». Методом групп-аналогов в научно-исследовательской работе было сформировано пять групп птиц по 200 гол. в каждой: контрольная группа – птица получала стандартный рацион, рекомендованный ВНИТИП, и имела свободный доступ к воде; первая опытная группа – перепела получали стандартный рацион, а также дополнительно в воду вводился пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс в дозе 0,25 мл/гол.; вторая опытная группа – аналогично первой, однако Галлобакт-Ф-Плюс вводили<br />
в дозе 0,5 мл/гол.; третья опытная группа – объекты исследований получали стандартный рацион, рекомендованный ВНИТИП, а также в воду добавляли пробиотик в дозе 0,75 мл/гол.; четвертая опытная группа – объекты исследований получали стандартный рацион, а в воду добавляли пробиотик в дозе 1,0 мл/гол. Эксперимент длился в течение 56 дней.</p>
<p><a id="post-5185-_Toc485416668"></a><em>Рост и развитие перепелов. </em>В эксперименте использовались перепела<br />
с признаками клинически здоровой птицы. Группы формировались методом аналогов. В течение всего эксперимента учитывали ряд зоотехнических показателей, результаты которых представлены в таблице 54 и рисунке 25.</p>
<p><img width="947" height="517" class="wp-image-5217" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2593.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2593.png 947w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2593-300x164.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2593-768x419.png 768w" sizes="(max-width: 947px) 100vw, 947px" alt="word image 2593 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 25 </strong>‒ Динамика живой массы, г</p>
<p><strong>Таблица 54 </strong> Зоотехнические показатели перепелов (n = 200)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Сохранность<br />
перепелов, %</td>
<td>95,5</td>
<td>97,5</td>
<td>99,0</td>
<td>98,5</td>
<td>99,0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Прирост живой массы за период выращивания (056 сут)</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Одной головы<br />
в среднем, г</td>
<td>317,20</td>
<td>325,30</td>
<td>337,98</td>
<td>339,93</td>
<td>337,47</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Расход комбикорма за период выращивания (056 сут)</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1-й головы, г</td>
<td>1056,47</td>
<td>1087,95</td>
<td>1107,65</td>
<td>1121,12</td>
<td>1119,83</td>
</tr>
<tr>
<td>Конверсия, кг</td>
<td>3,33</td>
<td>3,34</td>
<td>3,28</td>
<td>3,29</td>
<td>3,31</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (Р &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>При изучении сохранности перепелов за период выращивания (56 дней) установлено, что наибольшая выживаемость птиц была зафиксирована в опытных группах. В частности, максимальный показатель был зафиксирован во второй и четвертой опытных группах, который составил 99,0 %, затем в третьей опытной группе – 98,5 % и далее в первой – 97,5 %. Самая низкая сохранность (95,5 %) наблюдалась в контрольной группе перепелов, при чем основная гибель перепелят была зафиксирована в первые недели жизни птицы.</p>
<p>При изучении живой массы перепелов установлено, что уже на первую неделю жизни при взвешивании была выявлена незначительная тенденция к повышению данного показателя в опытных группах. Так, в 1-й, 2-й, 3-й и 4-й опытных группах на 7-е сутки взвешивания показатель живой массы перепелов был незначительно выше, чем в контрольной на 2,6; 5,0; 5,6 и 4,6 %, соответственно. До 21-х суток наблюдалась аналогичная картина. Однако с 28-и дней<br />
и до конца эксперимента во 2–4-й опытных группах была выявлена статистически достоверная разница по изучаемому показателю в сравнении с контрольной группой птиц. На 28-е сутки взвешивания перепелов установлено, что масса птиц во 2-й, 3-й и 4-й опытных группах была достоверно выше, чем в контрольной на 4,7; 5,5 и 4,8 % при Р &lt; 0,05. При этом в 1-й опытной группе в данный период статистически достоверной разницы не выявлено, как и в принципе до конца эксперимента, но наблюдалась положительная динамика в изучаемом показателе в сравнении с контрольной группой. На 35-й день живая масса перепелов 2–4-й опытных групп была выше, чем в контрольной на 4,1; 4,5 и 3,8 % (Р &lt; 0,05). Аналогичные статистически достоверные (Р &lt; 0,05) показатели<br />
в изучаемых опытных группах по отношению к контрольной были выявлены на 42-й и 49-й день взвешивания перепелов. На 56-е сутки были также зафиксированы достоверные различия во 2-й, 3-й и 4-й опытных группах<br />
в сравнении с контрольной, соответственно, было выше на 6,3; 6,9 и 6,2 % (Р &lt; 0,05). В 1-й опытной группе масса перепелов не значительно превышала контрольную на 2,5 %.</p>
<p>Расчет прироста перепелов во всех группах показал, что в опытных группах изучаемый показатель превосходил контрольную на следующие значения:<br />
в 1-й опытной прирост выше на 2,6 %; во 2-й группе – на 6,6 %; в 3-й – на 7,1 % и в 4-й – на 6,4 %.</p>
<p>Одним из главных зоотехнических показателей эффективности использования в рационе животных, а в нашем случае птиц, добавок или биопрепаратов является показатель расхода кормов на 1 кг прироста массы (конверсия). Анализ данного значения показал, что в контрольной группе на 1 кг прироста требуется 3,33 кг комбикорма, в то время как в 1–4-й опытных группах необходимо 3,34; 3,28; 3,29 и 3,31 кг. Из этого следует, что наилучшее значение показателя было выявлено во 2-й опытной группе, которое было ниже, чем<br />
в группе контроля, на 1,5 %. В 3-й опытной группе значение показателя было ниже, чем в контроле на 1,2 %, в 4-й опытной группе – на 0,6 %, а в 1-й опытной выше на 0,3 %.</p>
<p>Таким образом, перепела получавшие в своем рационе пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс в изучаемых дозировках имели наилучшие зоотехнические показатели в сравнении с птицей без дополнительных биопрепаратов. Наилучшие показатели были зафиксированы в опытной группе, получавшей пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс в дозе 0,5 мл/гол.</p>
<p><em>Морфологические и биохимические показатели крови. </em>Такая система организма как кровь является одним из главных «посредников», отражающая большое количество процессов, которые происходят в тех или иных органах и тканях макроорганизма. Особая роль в крови отводится эритроцитам, тромбоцитам и лейкоцитам. Данные форменные элементы обладают большой функциональной способностью. Также следует обращать внимание на такой компонент крови как гемоглобин, который играет очень важную роль при переносе кислорода за счет эритроцитов от одного органа к другому, а также тканям. Наиболее глубокое понимание о влиянии на организм биопрепаратов дают результаты биохимических анализов сыворотки крови. Анализ данных компонентов крови позволяет выявить функциональное состояние внутренних органов, а также обнаружить развитие патологических и воспалительных явлений в организме.<br />
В связи с этим, в середине (28-е сутки) и в конце (56-е сутки) опыта проводили забой птицы и взятие крови для изучения влияния пробиотика на организм птицы через ее морфологические и биохимические показатели. Данные анализа цельной крови и ее сыворотки представлены в таблицах 55 и 56.</p>
<p><strong>Таблица 55 </strong>– Морфологический анализ крови перепелов (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>28-е сутки</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Гемоглобин, г/л</td>
<td>128,56±3,33</td>
<td>129,97±3,45</td>
<td>132,54±3,53</td>
<td>132,31±3,62</td>
<td>131,32±3,60</td>
</tr>
<tr>
<td>Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>23,65±0,64</td>
<td>23,12±0,54</td>
<td>22,43±0,52</td>
<td>22,65±0,29</td>
<td>22,15±0,49</td>
</tr>
<tr>
<td>Тромбоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>123,32±3,56</td>
<td>123,87±3,78</td>
<td>127,37±3,68</td>
<td>128,26±3,63</td>
<td>127,02±3,61</td>
</tr>
<tr>
<td>Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л</td>
<td>3,65±0,10</td>
<td>3,71±0,10</td>
<td>3,75±0,10</td>
<td>3,76±0,11</td>
<td>3,74±0,11</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>56-е сутки</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л</td>
<td>3,42±0,08</td>
<td>3,47±0,10</td>
<td>3,52±0,11</td>
<td>3,51±0,11</td>
<td>3,50±0,08</td>
</tr>
<tr>
<td>Тромбоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>121,56±3,86</td>
<td>122,51±3,87</td>
<td>126,83±3,95</td>
<td>126,31±3,88</td>
<td>125,88±3,98</td>
</tr>
<tr>
<td>Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>26,34±0,54</td>
<td>25,58±0,42</td>
<td>24,73±0,49</td>
<td>24,67±0,48</td>
<td>24,71±0,64</td>
</tr>
<tr>
<td>Гемоглобин, г/л</td>
<td>127,54±3,94</td>
<td>128,87±3,87</td>
<td>131,76±4,01</td>
<td>130,87±3,99</td>
<td>130,79±3,87</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Изучая морфологический состав отдельных форменных элементов крови, нами установлено положительное влияние использования в рационе перепелов пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс, независимо от дозы и сроков применения. Так, на 28-й день количество эритроцитов в крови птиц 1–4-й опытных групп было незначительно выше, чем в контрольной на 1,6; 2,7; 3,0 и 2,5 %. Аналогичная динамика наблюдалась и на 56-й день изучения данного показателя, который был выше на 1,5; 2,9; 2,6 и 2,3 %, соответственно. Также незначительное положительное повышение наблюдалось тромбоцитов в опытных группах. Так, например, на 56-е сутки количество тромбоцитов по сравнению с контрольной группой было выше в 1-й опытной на 0,8 %; во 2-й – на 4,3 %; в 3-й – на 3,9 %<br />
и в 4-й – на 3,6 %. Об отсутствии негативного влияния на организм птиц пробиотика также свидетельствует уровень лейкоцитов в крови птиц, содержание которого на 28-е и 56-е сутки анализа во всех группах было почти на одном уровне. Положительная динамика была зафиксирована в количестве гемоглобина в крови перепелов. Так, на 28-е сутки исследования цельной крови птиц<br />
в 1–4-й опытных группах значение уровня гемоглобина было физиологически выше, чем в контрольной группе на 1,1; 3,1; 2,9 и 2,1 %, соответственно. На 56-й день исследований данного показателя была выявлена аналогичная картина.</p>
<p>В целом статистически достоверной разницы в разрезе изучаемых групп<br />
не выявлено по анализируемым показателям крови. При этом введение в рацион опытных групп перепелов биопрепарата Галлобакт-Ф-Плюс способствовало незначительному физиологически нормальному повышению эритроцитов, тромбоцитов и гемоглобину, что обеспечило усиление обменных процессов<br />
в организме птиц.</p>
<p>Результаты анализа сыворотки крови перепелов также продемонстрировали положительное влияние на организм птиц применяемого пробиотика (таблица 56). Проведенные исследования сыворотки крови перепелов в 28-дневном возрасте показали положительную динамику изучаемых показателей в опытных группах. Так, количество белка в крови 1–4-й опытных групп было выше, чем<br />
в контрольной группе на 4,3; 10,6; 10,0 и 9,8 %. Количество белковых фракций в сыворотке крови перепелов опытных групп также было выше, чем в контрольной группе: альбуминов – на 5,3; 12,1; 11,1 и 11,4 %, а глобулинов – на 3,5; 9,5; 9,2 и 8,5 %, соответственно. Альбумино-глобулиновый коэффициент<br />
в крови птиц 1-й, 2-й, 3-й и 4-й опытных групп превышал значение данного показателя в контрольной группе на 2,6; 3,9; 2,6 и 3,9 %. Аналогичные позитивные данные были получены при изучении других показателей сыворотки крови на 28-й день исследования без проявления статистически достоверной разницы. Однако на 56-й день эксперимента при анализе сыворотки крови перепелов была выявлена статистически достоверная разницы по отдельным изучаемым показателям. Так, во 2-й и 3-й опытных группах птиц в сыворотке крови белковый коэффициент (А/Г) был достоверно выше, чем в контрольной группе на 9,1<br />
и 10,4 % (Р &lt; 0,05).</p>
<p><strong>Таблица 56 </strong>– Биохимический анализ сыворотки крови перепелов (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>28-е сутки</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Общий белок, г/л</td>
<td>33,23±0,87</td>
<td>34,65±0,91</td>
<td>36,76±1,02</td>
<td>36,56±0,99</td>
<td>36,48±1,01</td>
</tr>
<tr>
<td>Альбумины, г/л</td>
<td>14,56±0,32</td>
<td>15,33±0,40</td>
<td>16,32±0,42</td>
<td>16,17±0,38</td>
<td>16,22±0,45</td>
</tr>
<tr>
<td>Глобулины, г/л</td>
<td>18,67±0,54</td>
<td>19,32±0,48</td>
<td>20,44±0,51</td>
<td>20,39±0,53</td>
<td>20,26±0,58</td>
</tr>
<tr>
<td>А/Г коэффициент</td>
<td>0,77±0,01</td>
<td>0,79±0,02</td>
<td>0,80±0,01</td>
<td>0,79±0,02</td>
<td>0,80±0,01</td>
</tr>
<tr>
<td>Холестерин, мМ/л</td>
<td>3,52±0,08</td>
<td>3,48±0,09</td>
<td>3,38±0,09</td>
<td>3,40±0,07</td>
<td>3,40±0,10</td>
</tr>
<tr>
<td>АСТ, ед./л</td>
<td>354,24±7,54</td>
<td>352,18±8,02</td>
<td>347,67±7,86</td>
<td>347,54±8,13</td>
<td>348,38±7,69</td>
</tr>
<tr>
<td>АЛТ, ед./л</td>
<td>25,67±1,01</td>
<td>25,34±0,98</td>
<td>24,87±1,05</td>
<td>25,04±1,09</td>
<td>24,97±1,13</td>
</tr>
<tr>
<td>Фосфор, мМ/л</td>
<td>2,17±0,04</td>
<td>2,21±0,04</td>
<td>2,24±0,05</td>
<td>2,25±0,04</td>
<td>2,24±0,07</td>
</tr>
<tr>
<td>Кальций, мМ/л</td>
<td>1,85±0,05</td>
<td>1,94±0,03</td>
<td>2,00±0,04</td>
<td>2,01±0,03</td>
<td>1,98±0,04</td>
</tr>
<tr>
<td>БАСК, %</td>
<td>40,7±1,56</td>
<td>43,2±1,32</td>
<td>47,4±1,43</td>
<td>47,3±1,46</td>
<td>46,3±1,48</td>
</tr>
<tr>
<td>ЛАСК, %</td>
<td>31,2±1,05</td>
<td>33,4±1,15</td>
<td>35,1±1,09</td>
<td>35,6±1,08</td>
<td>35,2±1,10</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>56-е сутки</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Общий белок, г/л</td>
<td>34,56±0,91</td>
<td>35,47±0,92</td>
<td>36,87±0,94</td>
<td>36,77±0,89</td>
<td>36,78±0,95</td>
</tr>
<tr>
<td>Альбумины, г/л</td>
<td>15,11±0,21</td>
<td>15,89±0,34</td>
<td>16,78±0,36</td>
<td>16,87±0,40</td>
<td>16,73±0,38</td>
</tr>
<tr>
<td>Глобулины, г/л</td>
<td>19,45±0,52</td>
<td>19,58±0,48</td>
<td>20,09±0,51</td>
<td>19,90±0,53</td>
<td>20,05±0,59</td>
</tr>
<tr>
<td>А/Г коэффициент</td>
<td>0,77±0,01</td>
<td>0,81±0,02</td>
<td>0,84±0,01*</td>
<td>0,85±0,01*</td>
<td>0,83±0,01</td>
</tr>
<tr>
<td>Холестерин, мМ/л</td>
<td>3,87±0,05</td>
<td>3,78±0,06</td>
<td>3,65±0,06*</td>
<td>3,67±0,05*</td>
<td>3,67±0,04*</td>
</tr>
<tr>
<td>АСТ, ед./л</td>
<td>335,36±6,78</td>
<td>330,48±7,12</td>
<td>328,87±6,89</td>
<td>329,37±6,98</td>
<td>329,21±7,04</td>
</tr>
<tr>
<td>АЛТ, ед./л</td>
<td>24,61±1,02</td>
<td>24,12±0,97</td>
<td>23,96±1,01</td>
<td>24,08±0,94</td>
<td>24,04±0,97</td>
</tr>
<tr>
<td>Фосфор, мМ/л</td>
<td>2,19±0,01</td>
<td>2,25±0,02</td>
<td>2,29±0,01*</td>
<td>2,29±0,01*</td>
<td>2,28±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td>Кальций, мМ/л</td>
<td>1,92±0,01</td>
<td>1,97±0,01</td>
<td>2,07±0,01*</td>
<td>2,08±0,01*</td>
<td>2,08±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td>БАСК, %</td>
<td>43,1±0,86</td>
<td>47,4±0,92</td>
<td>52,3±1,02*</td>
<td>53,1±0,98*</td>
<td>52,8±0,96*</td>
</tr>
<tr>
<td>ЛАСК, %</td>
<td>33,5±0,53</td>
<td>35,2±0,61</td>
<td>39,5±0,56*</td>
<td>39,4±0,50*</td>
<td>39,1±0,51*</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (Р &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Уровень холестерина в крови перепелов 2–4-й опытных групп был ниже, чем в контроле на 5,7; 5,2 и 5,1 % при статистически достоверном различии (Р &lt; 0,05). Наблюдалась положительная динамика в изучении ферментов сыворотки крови перепелов опытных групп. Так, содержание АСТ в крови перепелов опытных групп было незначительно ниже, чем в контрольной группе на 1,5; 1,9 и 1,8 %. Уровень фермента АЛТ в сыворотке крови опытных групп было также незначительно ниже на 2,0; 2,6; 2,2 и 2,3 %. Была зафиксирована статистически достоверная положительная разница при изучении минерального обмена. Так, уровень фосфора и кальция в сыворотке крови птиц 2-й, 3-й и 4-й опытных групп был достоверно выше, чем в контрольной на 4,1 % (по фосфору), а также 7,8 и 8,3 % (по кальцию) (Р &lt; 0,05). Уровень неспецифической резистентности организма птиц опытных групп был статистически достоверно выше в сравнении с показателями контрольной группы. Так, бактерицидная активность сыворотки крови 2-й, 3-й и 4-й опытных групп была выше, чем в контрольной на 9,2; 10,0 и 9,7 % (Р &lt; 0,05). Лизоцимная активность во 2-й опытной группе была статистически выше, чем в контрольной, на 6,0 %, в 3-й опытной – на 5,9 %, а в 4-й – на 5,6 % (Р &lt; 0,05).</p>
<p>Таким образом, применение в рационе птиц пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс способствует повышению обменных процессов, в частности белкового<br />
и минерального, при одновременном улучшении протекания жирового, за счет уменьшения холестерина в крови перепелов опытных групп, а также повышается иммунный статус перепелов. Негативное влияние от применения биопрепарата на морфобиохимический статус крови перепелов не выявлено.</p>
<p><em>Влияние пробиотика на пищеварение.</em> Показатели переваримости компонентов корма в желудочно-кишечном тракте позволяют продемонстрировать эффективность использования биопрепаратов, в нашем случае пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс. Анализ переваримости питательных компонентов комбикорма представлен на рисунке 26.</p>
<p>Проведенный балансовый эксперимент показал, что применение в рационе перепелов пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс положительно сказывается на показателях переваримости компонентов комбикорма. Так, установлено, что в 1-й опытной группе переваримость органического вещества была выше, чем в контрольной группе на 2,9 %, во 2-й опытной – на 6,7 %, в 3-й группе – на 6,8 %,<br />
а в 4-й – на 6,6 %. Количество сырого протеина птицей 1–4-й опытных групп усвоилось больше, чем в контрольной группе, на 2,9; 5,9; 6,0 и 5,7 %. Количество жира комбикорма перепелами опытных групп также переварилось больше, чем в контрольной группе на 3,1; 4,9; 5,1 и 4,7 %, соответственно. Сырая клетчатка, не смотря на то, что усваивается птицей незначительно, в опытных группах показатель ее переваримости был выше, чем в контрольной, на 3,1; 4,8; 5,0 и 4,8 %.</p>
<p><img width="634" height="518" class="wp-image-5218" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2594.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2594.png 634w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2594-300x245.png 300w" sizes="(max-width: 634px) 100vw, 634px" alt="word image 2594 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 26 </strong>– Переваримость питательных веществ комбикорма, %</p>
<p>Также было выявлено незначительное повышение переваримости безазотистых экстрактивных веществ комбикорма перепелами 1–4-й опытных групп по сравнению с контрольной группой на 2,1; 3,9; 3,4 и 3,7 %, соответственно. Данные изменения носили динамический характер, статистически верной разницы не обнаружено.</p>
<p>Таким образом, пробиотик стимулирует процесс переваримости компонентов комбикорма, что способствует наилучшему росту живой массы эксперимента<a id="post-5185-_Toc485416673"></a>льной птицы.</p>
<p><em>Микробиоценноз химуса кишечника.</em> В случаях замедленного формирования микробного сообщества желудочно-кишечного тракта жизнеспособность сельскохозяйственной птицы может незначительно снижаться, что также может зависеть от санитарного состояния условий содержания и кормления. Данные изменения могут влиять на распространение таких желудочно-кишечных болезней как: гастроэнтерит, диспепсия, клоацит, энтероколит и токсико-септические инфекции. В связи с данными заболеваниями уместно в систему профилактических процедур включать применение биопрепаратов для формирования нормофлоры и колонизационной резистентности, к которым в первую очередь относят препараты микробного происхождения, в частности, пробиотики.</p>
<p>Для того чтобы изучить влияние пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на качественный и количественный состав микробной фауны ЖКТ перепелов, были проведены микробиологические анализы химуса слепых отростков кишечника исследуемой птицы. Результаты представлены в таблице 57.</p>
<p><strong>Таблица 57 </strong>– Микробный баланс химуса кишечника перепелов (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Молочнокислые<br />
бактерии, 10<sup>8 </sup>КОЕ/г</td>
<td>1,2±0,03</td>
<td>2,8±0,03*</td>
<td>4,2±0,03*</td>
<td>4,8±0,04*</td>
<td>4,5±0,03*</td>
</tr>
<tr>
<td>Бифидобактерии, 10<sup>7 </sup>КОЕ/г</td>
<td>0,9±0,03</td>
<td>2,1±0,04*</td>
<td>2,7±0,04*</td>
<td>2,8±0,04*</td>
<td>2,9±0,03*</td>
</tr>
<tr>
<td>Эшерихии, 10<sup>2 </sup>КОЕ/г</td>
<td>4,5±0,05</td>
<td>3,2±0,03*</td>
<td>2,5±0,04*</td>
<td>2,3±0,03*</td>
<td>2,2±0,04*</td>
</tr>
<tr>
<td>Энтерококки, 10<sup>2</sup> КОЕ/г</td>
<td>1,1±0,02</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Псевдомонады, 10 КОЕ/г</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Стафилококки, 10<sup>2</sup> КОЕ/г</td>
<td>1,1±0,02</td>
<td>0,7±0,02*</td>
<td>0,4±0,01*</td>
<td>0,4±0,01*</td>
<td>0,3±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td>Стрептококки, 10<sup>2</sup> КОЕ/г</td>
<td>3,5±0,06</td>
<td>3,0±0,03*</td>
<td>2,7±0,02*</td>
<td>2,6±0,03*</td>
<td>2,6±0,02*</td>
</tr>
<tr>
<td>Клостридии, 10 КОЕ/г</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Микробиологический анализ химуса слепых отростков перепелов после использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс показал статистически достоверную разницу между опытными группами и контрольной. Так, при анализе содержания молочнокислых бактерий установлено, что в слепых отростках птиц опытных групп их титр был достоверно выше, чем в контрольной в 2,3; 3,5; 4,0 и 3,7 раза (P &lt; 0,05). Количество активных бифидобактерий в 1–4-й опытных группах было выше, чем в контрольной, в 2,3; 3,0; 3,1 и 3,2 раза, соответственно, при статистически достоверной разнице (P &lt; 0,05).</p>
<p>Было зафиксировано отсутствие в слепых отростках перепелов всех групп представителей клостридий и псевдомонад. Зафиксировано статистически достоверное снижение активных форм эшерихий в опытных группах перепелов<br />
в сравнении с контрольной в 1,4; 1,8; 2,0 раза (P &lt; 0,05). В опытных группах на питательных средах не было выявлено роста стрептококков, в то время как<br />
в контрольной группе значение данного показателя наблюдалось. Также<br />
в опытных группах было выявлено статистически достоверное снижения количеств представителей стафилококков и стрептококков.</p>
<p>Таким образом, пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс способствует стимуляции роста полезной микрофлоры и снижению условно-патогенной микробиоты.</p>
<p><a id="post-5185-_Toc485416670"></a><em>Мясная продуктивность, развитие внутренних органов и качество мяса перепелов. </em>Результаты изучения мясной продуктивности перепелов после использования в их рационе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс в возрасте 56-и суток продемонстрированы в таблице 58.</p>
<p>В результате проведенного убоя установлено, что масса тушки после обескровливания во 2-й, 3-й и 4-й опытных группах оставалась статистически достоверно выше, чем в контрольной группе на 6,4; 6,7 и 6,2 % (Р &lt; 0,05). Аналогичная тенденция наблюдалась и по другим показателям. Так, разница с контрольной группой была достоверна и при анализе непотрошеной тушки без перьев, масса которой во 2–4-й опытных группах превышала контроль на 6,4; 6,6 и 6,2 % (Р &lt; 0,05). В 1-й опытной группе масса непотрошеной тушки без перьев была выше, чем в контрольной группе на 2,3 %, но разница не достоверна. Самые крупные мышцы тела у перепела – это грудные, масса которых была достоверно выше во 2-й, 3-й и 4-й опытных группах, чем в контрольной на 11,4; 11,6 и 10,6 % (Р &lt; 0,05). Также во 2-й, 3-й и 4-й опытных группах была зафиксирована статистически достоверная разница по массе всех мышц тела птицы по отношению к контрольной группе, которая была выше на 13,1; 13,4 и 12,0 %, соответственно (Р &lt; 0,05).</p>
<p><strong>Таблица 58 </strong>– Мясная продуктивность перепелов (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Живая масса птицы перед убоем, г</td>
<td>325,76±2,12</td>
<td>333,67±2,06</td>
<td>347,35±2,12*</td>
<td>348,36±2,16*</td>
<td>347,12±2,10*</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса тушки после обескровливания, г</td>
<td>316,31±2,01</td>
<td>324,32±2,02</td>
<td>336,58±2,06*</td>
<td>337,56±2,11*</td>
<td>335,87±2,02*</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса непотрошеной тушки без<br />
перьев, г</td>
<td>295,79±1,98</td>
<td>302,63±1,99</td>
<td>314,69±2,03*</td>
<td>315,26±2,04*</td>
<td>314,13±2,01*</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошеной тушки, г</td>
<td>243,66±1,86</td>
<td>250,58±1,72</td>
<td>263,63±1,68*</td>
<td>263,75±1,71*</td>
<td>262,89±1,69*</td>
</tr>
<tr>
<td>Грудные мышцы, г</td>
<td>70,68±0,71</td>
<td>73,45±0,63</td>
<td>78,76±0,75*</td>
<td>78,87±0,74*</td>
<td>78,14±0,70*</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса бедренных<br />
мышц, г</td>
<td>25,40±0,53</td>
<td>26,69±0,62</td>
<td>28,13±0,63</td>
<td>28,56±0,57</td>
<td>28,06±0,61</td>
</tr>
<tr>
<td>Мышцы голени, г</td>
<td>12,37±0,31</td>
<td>13,36±0,36</td>
<td>14,04±0,39</td>
<td>14,31±0,37</td>
<td>14,10±0,40</td>
</tr>
<tr>
<td>Остальные<br />
мышцы, г</td>
<td>12,05±0,45</td>
<td>12,67±0,42</td>
<td>14,71±0,47</td>
<td>14,87±0,48</td>
<td>14,56±0,43</td>
</tr>
<tr>
<td>Всего съедобных<br />
мышц, г</td>
<td>120,50±1,21</td>
<td>126,17±1,14</td>
<td>136,27±1,17*</td>
<td>136,61±1,11*</td>
<td>134,86±1,13*</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (Р &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты влияния используемого биопрепарата на массу различных органов и накопление внутриполостного жира перепелов представлены в таблице 59.</p>
<p><strong>Таблица 59 </strong>– Масса внутренних органов и внутриполосного жира, г (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Легкие</td>
<td>3,32±0,10</td>
<td>3,35±0,11</td>
<td>3,38±0,09</td>
<td>3,38±0,10</td>
<td>3,37±0,08</td>
</tr>
<tr>
<td>Печень</td>
<td>8,35±0,33</td>
<td>8,38±0,29</td>
<td>8,39±0,30</td>
<td>8,40±0,31</td>
<td>8,39±0,27</td>
</tr>
<tr>
<td>Сердце</td>
<td>3,51±0,07</td>
<td>3,57±0,09</td>
<td>3,58±0,08</td>
<td>3,60±0,09</td>
<td>3,58±0,09</td>
</tr>
<tr>
<td>Мышечный желудок</td>
<td>6,17±0,21</td>
<td>6,26±0,19</td>
<td>6,34±0,19</td>
<td>6,37±0,18</td>
<td>6,35±0,17</td>
</tr>
<tr>
<td>Железистый желудок</td>
<td>1,18±0,03</td>
<td>1,22±0,04</td>
<td>1,26±0,04</td>
<td>1,28±0,04</td>
<td>1,25±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Кишечник</td>
<td>11,29±0,34</td>
<td>11,37±0,33</td>
<td>11,43±0,32</td>
<td>11,44±0,34</td>
<td>11,41±0,34</td>
</tr>
<tr>
<td>Внутриполостной жир</td>
<td>2,57±0,07</td>
<td>2,47±0,09</td>
<td>2,21±0,08</td>
<td>2,22±0,09</td>
<td>2,25±0,07</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты взвешивания внутренних органов перепелов всех групп достоверных различий не показали. Разница массы отдельных органов была не значительна и не носила патологического характера, а была связана с изменением живой массы тела. В целом, масса внутренних органов была физиологически нормальной. При изучении массы внутриполостного жира статистически достоверной разницы не зафиксировано, однако следует отметить, что данный показатель в опытных группах имел тенденцию к снижению по сравнению с контрольной группой на 3,8; 14,0; 13,6 и 12,4 %, соответственно. По нашему мнению, часть жира птицей опытных групп, в связи с более активным метаболизмом, использовалось как источник энергии для поддержания обменных процессов.</p>
<p>Проводился анализ химического состава мышц перепелов всех групп<br />
(таблица 60).</p>
<p><strong>Таблица 60 </strong>– Химический состав мышц перепелов (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Ножные мышцы</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Влага, %</td>
<td>72,18±1,24</td>
<td>71,84±1,08</td>
<td>71,74±1,18</td>
<td>71,72±1,26</td>
<td>71,70±1,28</td>
</tr>
<tr>
<td>Белок, %</td>
<td>22,43±0,51</td>
<td>23,11±0,51</td>
<td>23,35±0,46</td>
<td>23,36±0,42</td>
<td>23,30±0,53</td>
</tr>
<tr>
<td>Жир, %</td>
<td>4,87±0,14</td>
<td>4,53±0,11</td>
<td>4,38±0,12</td>
<td>4,39±0,10</td>
<td>4,38±0,14</td>
</tr>
<tr>
<td>Зола, %</td>
<td>0,52±0,02</td>
<td>0,52±0,01</td>
<td>0,53±0,02</td>
<td>0,53±0,01</td>
<td>0,53±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td>Индекс качества мяса (ИКМ)</td>
<td>0,22</td>
<td>0,20</td>
<td>0,19</td>
<td>0,19</td>
<td>0,19</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Грудные мышцы</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Влага, %</td>
<td>71,38±0,98</td>
<td>70,91±0,89</td>
<td>69,82±0,96</td>
<td>70,00±1,07</td>
<td>70,12±1,07</td>
</tr>
<tr>
<td>Белок, %</td>
<td>24,67±0,75</td>
<td>25,23±0,70</td>
<td>26,37±0,71</td>
<td>26,19±0,72</td>
<td>26,20±0,69</td>
</tr>
<tr>
<td>Жир, %</td>
<td>3,34±0,07</td>
<td>3,23±0,07</td>
<td>3,17±0,09</td>
<td>3,18±0,08</td>
<td>3,17±0,07</td>
</tr>
<tr>
<td>Зола, %</td>
<td>0,61±0,02</td>
<td>0,63±0,01</td>
<td>0,64±0,02</td>
<td>0,63±0,02</td>
<td>0,64±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Индекс качества мяса (ИКМ)</td>
<td>0,14</td>
<td>0,13</td>
<td>0,12</td>
<td>0,12</td>
<td>0,12</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты изучения химического состава ножных и грудных мышц перепелов опытных групп продемонстрировали превосходство по сравнению с контрольной группой, но без достоверной разницы. Выявлено, что в мышцах перепелов опытных групп содержание влаги было незначительно ниже, чем в контрольной группе на 0,34; 0,44; 0,46 и 0,48 % (ножные), а также 0,47; 1,56; 1,38<br />
и 1,26 % (грудные), соответственно. Количество белка в ножных мышцах перепелов 1–4-й опытных групп было выше, чем в контрольной на 0,68; 0,92; 0,93<br />
и 0,87 %, а в грудных мышцах – 0,57; 1,7; 1,52 и 1,53 %, соответственно. Количество жира в мышцах птиц опытных групп незначительно снижалось по сравнению с контрольной. Важным показателем, характеризующим диетическое свойство мясной продукции, является индекс качества мяса, который<br />
у перепелов в 1–4-й опытных группах был ниже, чем в контрольной группе на 9,1 и 13,6 % (ножные мышцы), а также 7,1 и 14,3 % (грудные мышцы),<br />
соответственно.</p>
<p>Таким образом, использование пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс способствует улучшению химического состав мышц птицы, при этом за счет снижения жира и повышения белка, а также снижения показателя индекса качества мяса повышается диетическое свойство мясной продукции и ее биополноценность.</p>
<p>Биополноценность мясной продукции перепеловодства также оценивалась содержанием особо значимых незаменимых аминокислот белка мышц птиц (рисунок 27).</p>
<p>Оценка аминокислотного скора мышц перепелов показала, что уровень изучаемых незаменимых аминокислот в опытных группах незначительно превосходил аналоги в контрольной группе. Установлено, что в ножных мышцах птиц 1-й опытной группы содержание лизина, триптофана, фенилаланина, лейцина и метионина было выше, чем в контрольной на 1,8; 3,8; 1,1; 1,1 и 1,7 %, соответственно. Во 2-й опытной группе данный показатель также был выше, чем в контрольной на 4,7; 7,6; 3,2; 2,0 и 2,3 %. Аналогичное превосходство зафиксировано в ножных мышцах 3-й и 4-й опытных группах в сравнении с контрольной и изучаемые аминокислоты были выше на 3,8; 7,3; 3,0; 1,6 и 2,6 %, а также 4,4; 7,6; 2,4; 1,4 и 1,7 % соответственно. В грудных мышцах птиц опытных групп содержание изучаемых незаменимых аминокислот также было выше, чем в контрольной группе. Так в 1−4-й опытных группах уровень лизина превосходил контрольную на 2,0; 4,2; 4,0 и 3,4 %, соответственно. Количество триптофана в 1-й опытной группе было выше, чем в контрольной группе на 2,9 %, во 2-й на 4,1 %, в 3-й опытной группе – 4,4 % и в 4-й – 3,2 %. В разрезе изучаемых групп в грудных мышцах была выявлена аналогичная картина по содержанию фенилаланина, лейцина и метионина.</p>
<p><img width="649" height="375" class="wp-image-5219" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2595.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2595.png 649w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2595-300x173.png 300w" sizes="(max-width: 649px) 100vw, 649px" alt="word image 2595 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><img width="648" height="478" class="wp-image-5220" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2596.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2596.png 648w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2596-300x221.png 300w" sizes="(max-width: 648px) 100vw, 648px" alt="word image 2596 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 27 </strong>– Аминокислотный скор в мышцах перепелов, мг/г</p>
<p>Проводилась органолептическая и дегустационная оценка мяса перепелов и бульона из них. Органолептику изучали пробой варки. Для этого ножные<br />
и грудные мышцы мелко измельчали, помещали в плоскодонную колбу, добавляли небольшое количество дистиллированной воды, закрывали колбу ватно-марлевой пробкой и кипятили на слабом огне в течение 30 мин. Как бульон закипал, с осторожностью приоткрывали пробку и определяли запах паров. Во всех пробах установлено, что запах оставался ароматным, свойственный мясу, иных ароматов не зафиксировано. Далее проводилась дегустация грудных, ножных мышц и бульона из них по пятибалльной шкале (таблица 61).</p>
<p><strong>Таблица 61 </strong>− Дегустационная оценка мяса перепелов и бульона из них (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Ножные мышцы</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Аромат</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Вкус</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Нежность (жесткость)</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Сочность</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,2</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Грудные мышцы</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Аромат</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Вкус</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Нежность<br />
(жесткость)</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Сочность</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Бульон</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Аромат</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Вкус</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Прозрачность</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Крепость<br />
(наваристость)</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,7±0,2</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты дегустационной оценки показали не существенную разницу<br />
в разрезе изучаемых групп. Мясо перепелов всех групп имело коричнево-серый цвет, запах свойственный свежему мясу, приятный вкус. Бульон из-под мяса перепелов опытных и контрольных групп был прозрачный, с незначительным скоплением жира на поверхности. При этом дегустационной комиссией было отмечено, что мясо перепелов 1–4-й опытных групп было более сочным и нежным.</p>
<p>В целом, пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс оказывает позитивное влияние на мясную продуктивность исследуемой птицы, а также способствует улучшению качества получаемой продукции перепеловодства.</p>
<p><em>Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса птицы</em>. Данные мероприятия являются обязательными при заключении о возможности дальнейшего использовании мяса животных, в том числе птицы, в рацион потребителя после применения того или иного биопрепарата.</p>
<p>Первоначально проводилось патологоанатомическое вскрытие птицы с целью выявления внешних признаков патологии. Вскрытие показало, что изменений в структуре органов и тканей перепелов не выявлено. У птиц всех групп органы имели правильное анатомическое расположение в полостях. Жидкость<br />
в брюшной и плевральной полостях на зафиксирована. Просвет органов дыхания свободный, ткань легкого слабо-розового оттенка. Слизистая оболочка ЖКТ птиц серо-розового цвета без видимых повреждений и кровоизлияний.<br />
В целом, патологические процессы не обнаружены.</p>
<p>Согласно ГОСТ Р 54673-2011 тушки перепелов испытуемых групп отнесены к 1-й категории. Так как по показателям упитанности тушки птиц имели хорошо развитую мускулатуру тела, грудь была округлой формы, наличие подкожного жир – умеренное. Масса переработанной тушки перепелов имела значение не ниже требований ГОСТа.</p>
<p>Обязательной процедурой при проведении ветеринарно-санитарной оценки является изучение физико-химических и микробиологических показателей мясо птицы (таблица 62).</p>
<p>Результаты исследований показали, что мясо перепелов всех групп было свежим и получено от здоровой птицы, так как бульон после добавления CuSO<sub>4 </sub>оставался прозрачным, при этом не было зафиксировано образования хлопьев или выпадения желеобразного сгустка сине-голубого или зеленоватого цвета.</p>
<p>При проведении реакции с формалином (формольная реакция) образование сгустка или хлопьев не выявлено, что говорило о свежести мяса перепелов. Следовательно, в мясе птиц всех групп не обнаружены продукты первичного метаболизма белка (аммиак и соли аммония).</p>
<p><strong>Таблица 62 </strong>– Физико-химическая и микробиологическая оценка мяса<br />
перепелов (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Р-ция с сернокислой медью</td>
<td rowspan="2">–</td>
<td rowspan="2">–</td>
<td rowspan="2">–</td>
<td rowspan="2">–</td>
<td rowspan="2">–</td>
</tr>
<tr>
<td>Р-ция с формалином</td>
</tr>
<tr>
<td>Р-ция на пероксидазу</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td>Кол-во ЛЖК, мг КОН/100 г</td>
<td>2,15±0,07</td>
<td>2,12±0,05</td>
<td>2,10±0,06</td>
<td>2,10±0,07</td>
<td>2,12±0,08</td>
</tr>
<tr>
<td>Количество микробных клеток в одном поле<br />
зрения микроскопа:</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>– с поверхности тушки</td>
<td>3,35±0,11</td>
<td>3,30±0,10</td>
<td>3,29±0,09</td>
<td>3,30±0,10</td>
<td>3,28±0,11</td>
</tr>
<tr>
<td>– с глубоких слоев</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>рН мяса, ед.</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Первые сутки</td>
<td>6,81±0,21</td>
<td>6,72±0,21</td>
<td>6,70±0,18</td>
<td>6,68±0,17</td>
<td>6,75±0,15</td>
</tr>
<tr>
<td>Вторые сутки</td>
<td>6,52±0,20</td>
<td>6,41±0,26</td>
<td>6,26±0,20</td>
<td>6,20±0,21</td>
<td>6,29±0,22</td>
</tr>
<tr>
<td>Третьи сутки</td>
<td>6,05±0,17</td>
<td>5,96±0,25</td>
<td>5,84±0,16</td>
<td>5,83±0,24</td>
<td>5,91±0,18</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>При проведении реакции на наличие пероксидазы выявлено, что мясо было получено от здоровой птицы, так как вытяжка приобретала сине-зеленый цвет, переходящая в буро-коричневый в течение 1–2 мин.</p>
<p>При определении количества летучих жирных кислот в мясе перепелов выявлено, что во всех группах птиц количество ЛЖК находилось в пределах требований (до 4,5 мг КОН/100 г), что согласно утвержденной документации характерно для свежего и здорового мяса.</p>
<p>При изучении мазков-отпечатков с поверхности тушек перепелов под микроскопом во всех испытуемых группах птиц была обнаружена единичная микрофлора, преимущественно кокки. При микроскопии мазков-отпечатков глубоких слоев мышц птиц посторонняя микрофлора не зафиксирована, остатки распада ткани не выявлены, что подтверждает свежесть мяса перепелов.</p>
<p>При изучении pH выявлено, что такое резкое снижение показателя кислотности мышц в течение первых трех суток характерно для мяса полученного от здоровой птицы.</p>
<p>Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс обладает стимулирующим действием на обмен веществ, повышает приросты, сохранность, способствует высоким показателям биополноценностии мясной продукции перепеловодства. Мясо перепелов может быть использовано в пищу независимо от дозы и сроков использования испытуемого биопрепарата.</p>
<p>В целом, результаты изучения фармакологических свойств пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс, а также подбор эффективной его дозы показали, что по совокупности эффекта наилучшей дозой для перепелов можно считать 0,5 мл/гол. Данное количество пробиотика в рационе перепелов позволяет проявить высокий биоресурстный потенциал птицы.</p>
<p><em>Экономическая эффективность использования пробиотика. </em>Важным показателем характеризующий эффективность применения тех или иных добавок для производства является экономическая целесообразность введения их в рацион животных, в частности, сельскохозяйственной птице. В связи с этим, для подбора наиболее экономически выгодной дозы с целью дальнейшей производственной апробации разработанных биопрепаратов, проводился предварительный расчет экономической эффективности их применения. Результаты экономической эффективности от использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на перепелах Техасской породы представлены в таблице 63.</p>
<p>В результате проведенной предварительной экономической оценки эффективности применения в рационе перепелов Техасской породы пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс выявлено, что с учетом затрат на комбикорм и микробной добавки, прибыль в 1–4-й опытных группах составила 13 150,25; 14 241,30; 14 069,55 и 14 049,60 руб., против 12 562,30 руб. в контрольной группе, что выше на 587,95; 1 679,00; 1 507,25 и 1 487,30 руб., соответственно.</p>
<p>В целом, наилучшие результаты были получены во 2-й опытной группе,<br />
в которой экономический эффект превышал контрольную группу на 13,36 %.</p>
<p>Таким образом, экономически целесообразно проводить производственную апробацию биопрепарата на перепелах Текасской породы в дозе, составляющей 0,5 мл/гол.</p>
<p><strong>Таблица 63 </strong>– Экономическая эффективность использования пробиотической добавки Галлобакт-Ф-Плюс</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="6">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я опытная</td>
<td colspan="2">2-я опытная</td>
<td>3-я опытная</td>
<td>4-я опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в начале опыта, гол.</td>
<td>200</td>
<td>200</td>
<td colspan="2">200</td>
<td>200</td>
<td>200</td>
</tr>
<tr>
<td>Сохранность, %</td>
<td>95,5</td>
<td>97,5</td>
<td colspan="2">99,0</td>
<td>98,5</td>
<td>99,0</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в конце опыта, гол.</td>
<td>191</td>
<td>195</td>
<td colspan="2">198</td>
<td>197</td>
<td>198</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Масса тушки на реализацию</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошенной тушки, г</td>
<td>243,66±1,86</td>
<td>250,58±1,72</td>
<td colspan="2">263,63±1,68*</td>
<td>263,75±1,71*</td>
<td>262,89±1,69*</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошенной тушки всего, кг</td>
<td>46,54</td>
<td>48,86</td>
<td colspan="2">52,20</td>
<td>51,96</td>
<td>52,05</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Затраты комбикорма за период выращивания</em></td>
</tr>
<tr>
<td>На голову, г</td>
<td>1056,47</td>
<td>1087,95</td>
<td colspan="2">1107,65</td>
<td>1121,12</td>
<td>1119,83</td>
</tr>
<tr>
<td>На все поголовье, кг</td>
<td>201,79</td>
<td>212,15</td>
<td colspan="2">219,31</td>
<td>220,86</td>
<td>221,72</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Затраты пробиотика</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Всего, мл</td>
<td>–</td>
<td>487,5</td>
<td colspan="2">990,0</td>
<td>1 477,5</td>
<td>1980,0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Экономическая эффективность</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 кг комбикорма, руб.</td>
<td colspan="6">30</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма всего, руб.</td>
<td>6 053,70</td>
<td>6 364,50</td>
<td colspan="2">6 579,30</td>
<td>6 625,80</td>
<td>6 651,60</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 л пробиотика, руб.</td>
<td colspan="3">–</td>
<td colspan="3">60</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость пробиотика всего, руб.</td>
<td>–</td>
<td>29,25</td>
<td colspan="2">59,40</td>
<td>88,65</td>
<td>118,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма и пробиотика, руб.</td>
<td>6 053,70</td>
<td>6 393,75</td>
<td colspan="2">6 638,70</td>
<td>6 714,45</td>
<td>6 770,40</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена реализации 1 кг мяса перепелов, руб.</td>
<td colspan="6">400,0</td>
</tr>
<tr>
<td>Выручка от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>18 616,00</td>
<td>19 544,00</td>
<td colspan="2">20 880,00</td>
<td>20 784,00</td>
<td>20 820,00</td>
</tr>
<tr>
<td>Прибыль от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>12 562,30</td>
<td>13 150,25</td>
<td colspan="2">14 241,30</td>
<td>14 069,55</td>
<td>14 049,60</td>
</tr>
<tr>
<td>Экономический эффект от использования пробиотика<br />
к контролю,руб.%</td>
<td>–</p>
<p>–</td>
<td>587,95</p>
<p>4,68</td>
<td colspan="2">1 679,00</p>
<p>13,36</td>
<td>1 507,25</p>
<p>12,00</td>
<td>1 487,30</p>
<p>11,83</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<h4><a id="post-5185-_Toc27057861"></a><strong><em>2.16.2 Фармакологическое действие пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на организм перепелов породы Фараон</em></strong></h4>
<p>В качестве объектов исследований использовались перепела породы Фараон (французские), выведенные сотрудниками селекционно-генетического центра Всероссийского института птицеводства и ООО «Генофонд». Для проведения испытаний эффективности применения в рационе перепелов породы Фараон пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс, а также подбора дозы биопрепарата, формировали группы птиц аналогично научным экспериментам на перепелах Техасской породы. Так, методом аналогов было сформировано пять групп птиц по 200 гол. в каждой: контрольная группа – птица получала стандартный рацион, рекомендованный ВНИТИП, и имела свободный доступ к воде; 1-я опытная группа – птица получала стандартный рацион, а также дополнительно в воду вводился пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс в дозе 0,25 мл/гол.; 2-я опытная группа – пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс вводили в дозе 0,5 мл/гол.; 3-я опытная группа – перепела получали стандартный рацион, а также в воду добавляли пробиотик<br />
в дозе 0,75 мл/гол.; 4-я опытная группа – перепелам в воду вводили пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс в дозе 1,0 мл/гол. Эксперимент длился в течение 56 дней.</p>
<p><em>Рост и развитие перепелов. </em>Для проведения исследований использовалась здоровая птица. Результаты хозяйственных показателей перепелов после использования пробиотика представлены в таблице 64 и на рисунке 28.</p>
<p>Изучение сохранности птиц в процессе их выращивания (56 дней) показало, что наибольшая выживаемость птиц зафиксирована в экспериментальных группах. Так, наибольший уровень сохранности был зафиксирован во второй<br />
и третьей опытных группах и составил 98,5 %, в первой и четвертой группах – 95,5 и 97,5 %, соответственно. Из данных таблицы 64 видно, что самый низкий показатель сохранности птицы (93,5 %) зафиксирован в контрольной группе.</p>
<p>Установлено, что показатели живой массы перепелов в течение первой недели жизни имели незначительную тенденцию к увеличению в опытных группах.</p>
<p><img width="959" height="544" class="wp-image-5221" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2597.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2597.png 959w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2597-300x170.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2597-768x436.png 768w" sizes="(max-width: 959px) 100vw, 959px" alt="word image 2597 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 28 </strong>‒ Динамика живой массы, г</p>
<p><strong>Таблица 64 </strong> Хозяйственные показатели перепелов (n = 200)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Сохранность<br />
перепелов, %</td>
<td>93,5</td>
<td>95,5</td>
<td>98,5</td>
<td>98,5</td>
<td>97,5</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Прирост живой массы за период выращивания (056 сут)</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Одной головы<br />
в среднем, г</td>
<td>282,89</td>
<td>295,88</td>
<td>303,84</td>
<td>302,94</td>
<td>301,61</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Расход комбикорма за период выращивания (056 сут)</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1-й головы, г</td>
<td>937,85</td>
<td>980,37</td>
<td>990,40</td>
<td>993,65</td>
<td>989,49</td>
</tr>
<tr>
<td>Конверсия, кг</td>
<td>3,31</td>
<td>3,31</td>
<td>3,25</td>
<td>3,28</td>
<td>3,28</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">* Разница с контролем достоверна (Р &lt; 0,05)</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Так, в 1-й, 2-й, 3-й и 4-й опытных группах на 7-е сутки выращивания данный показатель был незначительно выше, чем в контрольной на 1,2; 2,4; 2,9<br />
и 1,7 %, соответственно. Аналогичная картина отмечалась до 35-х суток выращивания птицы. При этом к 42-дневному возрасту и до конца эксперимента<br />
у перепелов 2–4-й опытных групп была установлена статистически достоверная разница по изучаемому показателю по отношению к контрольной группе птиц. При взвешивании перепелов на 42-е сутки установлено, что масса птиц во 2-й, 3-й и 4-й опытных группах была достоверно выше, чем в контрольной на 6,9; 7,4 и 6,5 % (Р &lt; 0,05). При этом в 1-й опытной группе в данный период и до конца опыта статистически достоверной разницы не выявлено, но наблюдалась положительная динамика в изучаемом показателе в сравнении с контрольной группой. На 49-е сутки выращивания живая масса перепелов 2–4-й опытных групп была выше, чем в контрольной на 6,8; 6,6 и 6,4 % (Р &lt; 0,05). На 56-й день были также зафиксированы достоверные различия во 2-й, 3-й и 4-й опытных группах в сравнении с контрольной и были выше на 7,2; 6,9 и 6,4 % (Р &lt; 0,05), соответственно. В то время как масса перепелов 1-й опытной группы на 4,4 % превышала данные показатели контрольной.</p>
<p>При расчете прироста живой массы за весь период выращивания птицы установлено, что в опытных группах изучаемый показатель превосходит идентичный показатель в контрольной группе: в 1-й опытной группе – на 4,6 %; во 2-й группе – на 7,4 %; в 3-й – на 7,1 % и в 4-й – на 6,6 %.</p>
<p>Анализ конверсии показал, что в контрольной группе на 1 кг прироста требуется 3,31 кг комбикорма, в то время как в 1–4-й опытных группах необходимо 3,31; 3,25 и 3,28 кг. Из полученных данных следует, что оптимальное значение показателя было выявлено во 2-й опытной группе, что на 1,8 % ниже по отношению к показателям контроля. В 3-й и 4-й опытных группах значение показателя было ниже на 0,9 %. Показатели конверсии в контрольной и 1-й опытной группах идентичны.</p>
<p>Таким образом, перепела породы Фараон, в рационе которых применяли различные дозы пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс, имели наилучшие хозяйственные показатели, чем у птиц контрольной группы. При этом максимальные значения изучаемых показателей были зафиксированы в группе птиц, где доза пробиотика составила 0,5 мл/гол.</p>
<p><em>Морфологические и биохимические показатели крови. </em>Морфобиохимический статус птиц после применения исследуемого биопрепарата представлен<br />
в таблицах 65 и 66.</p>
<p><strong>Таблица 65 </strong>– Морфологический анализ крови перепелов (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>28-е сутки</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л</td>
<td>3,72±0,08</td>
<td>3,72±0,06</td>
<td>3,74±0,05</td>
<td>3,73±0,08</td>
<td>3,74±0,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Тромбоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>119,54±2,37</td>
<td>120,48±2,42</td>
<td>121,37±2,51</td>
<td>120,78±2,46</td>
<td>121,94±2,56</td>
</tr>
<tr>
<td>Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>21,63±0,45</td>
<td>21,36±0,64</td>
<td>21,44±0,54</td>
<td>21,62±0,58</td>
<td>21,86±0,46</td>
</tr>
<tr>
<td>Гемоглобин, г/л</td>
<td>124,83±2,48</td>
<td>124,76±2,61</td>
<td>126,48±2,52</td>
<td>125,62±2,42</td>
<td>126,13±2,57</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>56-е сутки</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л</td>
<td>3,68±0,05</td>
<td>3,78±0,04</td>
<td>3,86±0,06</td>
<td>3,84±0,05</td>
<td>3,83±0,07</td>
</tr>
<tr>
<td>Тромбоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>121,74±2,85</td>
<td>122,89±2,89</td>
<td>125,06±2,92</td>
<td>126,46±2,98</td>
<td>125,32±2,93</td>
</tr>
<tr>
<td>Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>22,78±0,78</td>
<td>22,36±0,65</td>
<td>21,58±0,57</td>
<td>21,74±0,48</td>
<td>22,16±0,67</td>
</tr>
<tr>
<td>Гемоглобин, г/л</td>
<td>125,68±2,53</td>
<td>126,87±2,61</td>
<td>128,84±2,49</td>
<td>128,37±2,57</td>
<td>127,89±2,72</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>При изучении влияния использования в рационе перепелов пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс установлен положительный эффект на отдельные форменные элементы крови. Так, на 28-е сутки уровень эритроцитов в крови птиц 2-й, 3-й и 4-й опытных групп был незначительно выше, чем в контрольной на 0,5; 0,3 и 0,5 %, в то время как показатели контрольной и 1-й опытной группы находились на одном уровне.</p>
<p>Аналогичная динамика наблюдалась и на 56-й день изучения данного показателя во всех опытных группах, который был выше на 2,7; 4,9; 4,3 и 4,1 %, соответственно. Также наблюдалось незначительное положительное увеличение уровня тромбоцитов в опытных группах. Так, например, на 56-е сутки количество тромбоцитов по сравнению с контрольной группой было выше в 1-й опытной – на 0,9 %; во 2-й – на 2,7 %; в 3-й – на 3,9 % и в 4-й – на 2,9 %. Об отсутствии отрицательного влияния пробиотика на организм птиц также свидетельствует уровень лейкоцитов в крови, содержание которого на 28-е и 56-е сутки анализа во всех группах было почти на одном уровне. Также была установлена положительная динамика уровня гемоглобина в крови перепелов. Так, на 56-е сутки исследования цельной крови птиц в 1–4-й опытных группах значение уровня гемоглобина было физиологически выше, чем в контрольной группе на 0,9; 2,5; 2,1 и 1,8 %, соответственно.</p>
<p>Биохимические показатели крови занимают особое место и очень важны как для оценки физиологического статуса организма птиц, так и для своевременной диагностики патологических состояний. Результаты биохимического анализа сыворотки крови перепелов отражают то, что показатели крови птиц опытной группы проявили положительную динамику. Так, у перепелов, получавших корм с добавкой, уровень общего белка на 28-е сутки составил в 1-й опытной группе – 35,84 г/л; во 2-й – 36,32 г/л; в 3-й – 36,14 г/л; в 4-й – 35,95 г/л, что на 3,4; 4,8; 4,2 и 3,7 % выше, чем в контрольной группе. В возрасте 56-и дней по сравнению с предыдущим периодом проведения исследований содержание общего белка у перепелов повысилось во всех опытных группах с преобладанием концентрации показателя во второй группе по отношению к контролю на 9,3 %; в 1-й, 3-й и 4-й – на 3,5; 8,7 и 8,5 %, соответственно.</p>
<p>Из данных таблицы 66 видно, что количество альбуминов в сыворотке крови у перепелов на 28-е сутки во всех группах находилось приблизительно<br />
в одном диапазоне – 15,63–15,87 г/л. Но уже к 56-м суткам выращивания наблюдалась тенденция к увеличению данного показателя в 1–4-й опытных группах по отношению к контролю на 4,8; 10,6; 9,9 и 9,3 %. Концентрация глобулинов<br />
в крови перепелов на 28-е сутки в контрольной группе составил 19,04 ± 0,37 г/л, в 1-й опытной – 20,05 ± 0,41 г/л; во 2-й – 20,47 ± 0,39 г/л, в 3-й – 20,39 ± 0,43 г/л, в 4-й – 20,08 ± 0,48 г/л. В 56 дней наблюдалось увеличение количества глобулинов в контрольной и опытных группах. Так, у птиц контрольной и первой опытной группы показатель находился приблизительно на одном уровне, в то время как в крови перепелов 2–4-й групп наблюдалась тенденция к увеличению и было выше контроля на 6,6; 5,5 и 5,7 %. Таким образом, применение в рационе птицы пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс, обуславливает увеличение уровня общего белка и его белковых фракций в опытных группах, что свидетельствует о положительном влиянии на уровень белкового обмена веществ, за счет чего будет происходить усиление естественной резистентности организма птицы.</p>
<p><strong>Таблица 66 </strong>– Биохимический анализ сыворотки крови перепелов (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>28-е сутки</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Общий белок, г/л</td>
<td>34,67±0,96</td>
<td>35,84±0,83</td>
<td>36,32±0,74</td>
<td>36,14±0,69</td>
<td>35,95±0,84</td>
</tr>
<tr>
<td>Альбумины, г/л</td>
<td>15,63±0,46</td>
<td>15,79±0,49</td>
<td>15,85±0,52</td>
<td>15,75±0,39</td>
<td>15,87±0,42</td>
</tr>
<tr>
<td>Глобулины, г/л</td>
<td>19,04±0,37</td>
<td>20,05±0,41</td>
<td>20,47±0,39</td>
<td>20,39±0,43</td>
<td>20,08±0,48</td>
</tr>
<tr>
<td>А/Г коэффициент</td>
<td>0,82±0,02</td>
<td>0,79±0,01</td>
<td>0,77±0,01</td>
<td>0,77±0,02</td>
<td>0,79±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td>Холестерин, мМ/л</td>
<td>3,42±0,07</td>
<td>3,37±0,08</td>
<td>3,32±0,08</td>
<td>3,31±0,09</td>
<td>3,32±0,07</td>
</tr>
<tr>
<td>АСТ, ед./л</td>
<td>343,54±5,67</td>
<td>342,43±6,09</td>
<td>342,53±5,81</td>
<td>341,74±6,11</td>
<td>342,54±5,65</td>
</tr>
<tr>
<td>АЛТ, ед./л</td>
<td>23,82±0,86</td>
<td>23,31±0,92</td>
<td>22,89±0,87</td>
<td>22,94±1,02</td>
<td>22,98±0,93</td>
</tr>
<tr>
<td>Фосфор, мМ/л</td>
<td>2,24±0,05</td>
<td>2,27±0,04</td>
<td>2,29±0,06</td>
<td>2,28±0,05</td>
<td>2,28±0,06</td>
</tr>
<tr>
<td>Кальций, мМ/л</td>
<td>1,75±0,03</td>
<td>1,80±0,04</td>
<td>1,83±0,03</td>
<td>1,84±0,04</td>
<td>1,83±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>БАСК, %</td>
<td>41,4±1,32</td>
<td>43,8±1,38</td>
<td>45,8±1,33</td>
<td>45,5±1,43</td>
<td>45,3±1,41</td>
</tr>
<tr>
<td>ЛАСК, %</td>
<td>32,3±0,87</td>
<td>33,7±0,97</td>
<td>34,2±0,94</td>
<td>34,1±0,96</td>
<td>33,8±1,02</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>56-е сутки</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Общий белок, г/л</td>
<td>36,47±0,54</td>
<td>37,76±0,64</td>
<td>39,87±0,48</td>
<td>39,64±0,49</td>
<td>39,57±0,45</td>
</tr>
<tr>
<td>Альбумины, г/л</td>
<td>16,86±0,47</td>
<td>17,67±0,44</td>
<td>18,65±0,49</td>
<td>18,54±0,38</td>
<td>18,43±0,41</td>
</tr>
<tr>
<td>Глобулины, г/л</td>
<td>20,01±0,57</td>
<td>20,09±0,53</td>
<td>21,33±0,51</td>
<td>21,10±0,49</td>
<td>21,14±0,57</td>
</tr>
<tr>
<td>А/Г коэффициент</td>
<td>0,84±0,02</td>
<td>0,87±0,01</td>
<td>0,87±0,01</td>
<td>0,87±0,01</td>
<td>0,87±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td>Холестерин, мМ/л</td>
<td>3,73±0,03</td>
<td>3,62±0,02</td>
<td>3,44±0,05*</td>
<td>3,42±0,06*</td>
<td>3,47±0,04*</td>
</tr>
<tr>
<td>АСТ, ед./л</td>
<td>345,65±4,62</td>
<td>344,68±4,86</td>
<td>343,76±5,32</td>
<td>343,71±4,84</td>
<td>343,84±5,23</td>
</tr>
<tr>
<td>АЛТ, ед./л</td>
<td>24,27±0,76</td>
<td>24,03±0,92</td>
<td>23,86±0,96</td>
<td>24,02±0,91</td>
<td>23,93±0,89</td>
</tr>
<tr>
<td>Фосфор, мМ/л</td>
<td>2,27±0,01</td>
<td>2,35±0,02</td>
<td>2,43±0,01*</td>
<td>2,45±0,01*</td>
<td>2,41±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td>Кальций, мМ/л</td>
<td>1,76±0,01</td>
<td>1,87±0,02</td>
<td>2,05±0,01*</td>
<td>2,03±0,01*</td>
<td>2,01±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td>БАСК, %</td>
<td>42,4±0,46</td>
<td>45,3±0,53</td>
<td>52,8±0,63*</td>
<td>52,5±0,58*</td>
<td>51,8±0,56*</td>
</tr>
<tr>
<td>ЛАСК, %</td>
<td>34,5±0,32</td>
<td>35,3±0,42</td>
<td>38,5±0,41*</td>
<td>39,1±0,40*</td>
<td>38,4±0,31*</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (Р &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>К 56-м суткам у перепелов, потреблявших комбикорм с добавление Галлобакт-Ф-Плюс, отмечается статистически достоверное повышение уровня фосфора, кальций, БАСК, ЛАСК и снижение уровня холестерина. Так, уровень холестерина в крови перепелов опытных групп был ниже, чем в контроле: в 1-й – на 2,9 %; во 2-й – на 7,8 %; в 3-й – на 8,3 % и в 4-й – на 6,9 % при статистически достоверном различии (Р &lt; 0,05). Это свидетельствует, что все процессы метаболизма липидов находятся в физиологической норме. Данному виду птицы свойственна высокая энергия роста, интенсивный обмен веществ, хорошо развитая воспроизводительная функция. Эти биологические особенности оказывают влияние на процессы минерального обмена. При изучении влияния биопрепарата Галлобакт-Ф-Плюс на организм перепелов из минеральных элементов в крови определяли кальций и фосфор. К 56-м суткам выращивания установлено статистически достоверное увеличение уровня фосфора и кальция во 2–4-й опытных группах по отношению к контролю: по фосфору – на 7,1; 7,9<br />
и 6,2 %, по кальцию – на 16,5; 15,3 и 14,2 %. Полученные данные свидетельствуют об эффективном усвоении минеральных веществ птицей и активизации минерального обмена.</p>
<p>Влияние добавки на естественную резистентность организма оценивали по уровню бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови (БАСК<br />
и ЛАСК). Так, бактерицидная активность у птиц контрольной группы составила 42,4 %, а у перепелов, потреблявших корма с биопрепаратом, она достоверно<br />
(Р &lt; 0,05) превышала во 2-й группе на 10,4; в 3-й – на 10,1 и в 4-й – на 9,4 %. Показатель лизоцимной активности сыворотки крови статистически был выше во 2–4-й опытных группах, чем в контрольной на 4,0; 4,6 и 3,9 %. Следовательно, уровень БАСК и ЛАСК у птиц опытных групп свидетельствует о повышенной способности организма к самоочищению.</p>
<p>Таким образом, исследуемый пробиотик не оказывает негативного влияния на организм перепелов, стимулирует различные виды обмена веществ,<br />
в частности белковый – за счет повышения общего белка и белковых фракций, жировой – за счет снижения холестерина в крови, минеральный – за счет незначительного повышения кальция и фосфора в сыворотки крови перепелов, а также наблюдается повышение иммунного статуса птицы – за счет повышения показателей бактерицидной и лизоцимной активностей.</p>
<p><em>Влияние пробиотика на пищеварение.</em> Показатели переваримости питательных компонентов комбикорма после применения пробиотика представлены на рисунке 29.</p>
<p><img width="638" height="458" class="wp-image-5222" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2598.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2598.png 638w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2598-300x215.png 300w" sizes="(max-width: 638px) 100vw, 638px" alt="word image 2598 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 29 </strong>– Переваримость питательных веществ комбикорма, %</p>
<p>В ходе эксперимента было выявлено, что введение в рацион Галлобакт-Ф-Плюс положительно сказалось на переваримости питательных веществ комбикорма птицей. Установлено, что усвояемость органического вещества комбикорма в контрольной группе составило 57,43 %, в то время как в опытных группах наблюдалась тенденция к увеличению данного показателя: в 1-й группе – на 3,2 %; во 2-й – на 6,4 %; в 3-й – на 5,9 % и в 4-й – на 4,8 %. Важным показателем корма является протеиновая питательность, которая удовлетворяет потребность птицы во всех заменимых и незаменимых аминокислотах. Из данных рисунка 29 установлено, что процент переваримости сырого протеина корма лучше в 1–4-й опытных группах и превышает контроль на 1,8; 4,1; 3,9<br />
и 3,5 %. Птица экспериментальных групп также лучше переваривала сырую клетчатку потребляемого корма, чем перепела контрольной группы, в среднем на 1,8 %.</p>
<p>Переваримость сырого жира комбикорма в контрольной группе составило 72,78 % против 74,82 % в 1-й опытной группе, 77,98 – во 2-й; 78,43 – в 3-й и 76,89 % – в 4-й, что выше на 2,0; 5,2; 5,7 и 4,1 %, соответственно. Что касается переваримости БЭВ, то у перепелов 1–4-й сравниваемых групп отмечается повышение уровня переваримости при скармливании птице по отношению к контрольной группе и выше на 1,2; 2,9; 3,2 и 2,1 %. Полученные данные показывают, что у птиц опытных групп наблюдается повышенная переваримость компонентов корма и как следствие перепелами усваивается больше питательных веществ, но статистически выраженной разницы между группами не выявлено.</p>
<p>Таким образом, пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс стимулирует процесс переваримости компонентов корма, а это в свою очередь способствует наилучшему приросту массы перепелов, особенно опытных групп.</p>
<p><em>Микробиоценноз химуса кишечника.</em> Микробный фон химуса слепых отростков кишечника исследуемых групп перепелов представлен в таблице 67.</p>
<p><strong>Таблица 67 </strong>– Микробный баланс химуса кишечника перепелов (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Молочнокислые<br />
бактерии, 10<sup>8 </sup>КОЕ/г</td>
<td>3,4±0,04</td>
<td>5,6±0,02*</td>
<td>7,8±0,05*</td>
<td>7,9±0,06*</td>
<td>7,6±0,05*</td>
</tr>
<tr>
<td>Бифидобактерии, 10<sup>8 </sup>КОЕ/г</td>
<td>1,6±0,02</td>
<td>2,4±0,03*</td>
<td>3,1±0,03*</td>
<td>3,1±0,02*</td>
<td>2,9±0,04*</td>
</tr>
<tr>
<td>Эшерихии, 10<sup>2 </sup>КОЕ/г</td>
<td>6,3±0,04</td>
<td>5,4±0,04*</td>
<td>4,0±0,05*</td>
<td>3,9±0,03*</td>
<td>4,5±0,04*</td>
</tr>
<tr>
<td>Энтерококки, 10<sup>2</sup> КОЕ/г</td>
<td>5,3±0,02</td>
<td>2,1±0,02*</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Псевдомонады, 10 КОЕ/г</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Стафилококки, 10<sup>2</sup> КОЕ/г</td>
<td>4,3±0,02</td>
<td>3,2±0,02*</td>
<td>1,4±0,01*</td>
<td>1,3±0,02*</td>
<td>1,7±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td>Стрептококки, 10<sup>2</sup> КОЕ/г</td>
<td>5,7±0,03</td>
<td>4,1±0,04*</td>
<td>3,3±0,03*</td>
<td>3,1±0,03*</td>
<td>3,6±0,04*</td>
</tr>
<tr>
<td>Клостридии, 10 КОЕ/г</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Скармливание перепелам экспериментальных групп комбикорма с пробиотической добавкой Галлобакт-Ф-Плюс оказывает положительное влияние на количественный и качественный состав микробиоты пищеварительного канала. Установлено, что данные полученные при микробиологическом исследовании химуса слепых отростков птицы статистически достоверны. Показано, что титр молочнокислых бактерий в контрольной группе составил 3,4 × 10<sup>8</sup> КОЕ/г, в то время как в опытных группах был достоверно выше (P &lt; 0,05) в 1,6; 2,2; 2,3<br />
и 2,2 раза. Анализ содержания титра бифидогенных бактерий показал, что количество микроорганизмов было выше в экспериментальных группах, чем<br />
в контрольной, в 1,5; 1,9 и 1,8 раза и является достоверным показателем (P &lt; 0,05). При исследовании химуса установлен рост лакто- и бифидобактерий, при достоверном (P &lt; 0,05) снижении или отсутствии роста и размножения энтеропатогенных бактерий – эшерихий, энтерококков, псевдомонад, клостридий, стафило- и стрептококков, что оказывает положительное влияние на желудочно-кишечный тракт птицы и, как следствие, на результаты выращивания. Так, нами установлено статистически достоверное снижение титра эшерихий<br />
в опытных группах в сравнении с контрольной в 1,2; 1,6 и 1,4 раза (P &lt; 0,05).<br />
В экспериментальных группах выявлено, что количество стафилококков и стрептококков ниже и разница с контролем была достоверна (P &lt; 0,05): в 2,6 раза – для стафилококков и в 1,6 раза – для стрептококков. Также отмечено, что клостридии и псевдомонады не дали роста при их изучении, а уровень энтерококков составил 5,3 × 10<sup>8 </sup>КОЕ/г в контрольной группе, что в 2,5 раза больше к аналогичному показателю в 1-й опытной группе и является достоверным (P &lt; 0,05).</p>
<p>Таким образом, пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс способствует стимуляции роста полезной микрофлоры и снижению титра условно-патогенных форм микроорганизмов в кишечнике птиц.</p>
<p><em>Мясная продуктивность, развитие внутренних органов и качество мяса перепелов. </em>Результаты изучения мясной продуктивности перепелов породы Фараон после применения пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс представлены<br />
в таблице 68.</p>
<p><strong>Таблица 68 – Мясная продуктивность перепелов (n = 10) </strong></p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Живая масса птицы<br />
перед убоем, г</td>
<td>289,78±2,26</td>
<td>302,78±2,37</td>
<td>310,37±2,08*</td>
<td>309,67±2,13*</td>
<td>310,13±2,10*</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса тушки после обескровливания, г</td>
<td>280,73±2,56</td>
<td>293,67±2,68</td>
<td>301,32±2,75*</td>
<td>299,67±2,69*</td>
<td>300,56±2,73*</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса непотрошеной тушки без перьев, г</td>
<td>262,89±2,13</td>
<td>273,29±2,09</td>
<td>281,17±2,12*</td>
<td>280,67±2,16*</td>
<td>280,89±2,06*</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошеной тушки, г</td>
<td>216,84±1,78</td>
<td>226,84±2,04</td>
<td>232,59±1,86*</td>
<td>231,58±2,12*</td>
<td>232,12±2,07*</td>
</tr>
<tr>
<td>Грудные мышцы, г</td>
<td>63,49±1,34</td>
<td>66,28±1,64</td>
<td>69,58±1,43</td>
<td>68,90±1,28</td>
<td>69,45±1,54</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса бедренных<br />
мышц, г</td>
<td>22,69±0,89</td>
<td>24,16±0,94</td>
<td>26,57±0,88</td>
<td>26,34±0,82</td>
<td>26,47±0,92</td>
</tr>
<tr>
<td>Мышцы голени, г</td>
<td>10,69±0,43</td>
<td>11,17±0,46</td>
<td>12,67±0,51</td>
<td>12,23±0,46</td>
<td>12,45±0,49</td>
</tr>
<tr>
<td>Остальные мышцы, г</td>
<td>8,67±0,34</td>
<td>9,06±0,27</td>
<td>9,87±0,42</td>
<td>9,56±0,39</td>
<td>9,67±0,40</td>
</tr>
<tr>
<td>Всего съедобных<br />
мышц, г</td>
<td>105,54±3,76</td>
<td>110,67±3,23</td>
<td>118,69±3,65</td>
<td>117,03±3,27</td>
<td>118,04±3,58</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (Р &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Для установления эффективности влияния изучаемой добавки на мясную продуктивность перепелов проводился контрольный убой. Анализ результатов анатомической разделки птицы показал, что перепела опытных групп по таким показателям мясных качеств, как живая масса птицы перед убоем, масса тушки после обескровливания, а также непотрошеной и потрошеной тушки, достоверно превосходили идентичные показатели в контрольной группе. Так, предубойный вес птицы в контрольной группе составил 289,78 г против 302,78; 310,37; 309,67 и 310,13 г опытных групп, что статистически достоверно выше во 2-й,<br />
3-й и 4-й на 7,1; 6,9 и 7,0 % (Р &lt; 0,05), чем в контроле. Масса тушки после обескровливания, а также масса потрошеной тушки во 2–4-й опытных группах была достоверна выше, чем в контроле в среднем на 7,1 % (Р &lt; 0,05). Тушки птиц экспериментальных групп обладают более высокими мясными качествами – выход съедобных частей в них достигает 95,1; 87,5; 89,1 и 88,1 %, что выше на 4,86; 12,5; 10,9 и 11,9 %, чем у перепелов контрольной группы.</p>
<p>Результаты влияния используемого биопрепарата на массу различных органов и накопление внутриполостного жира птиц представлены в таблице 69.</p>
<p><strong>Таблица 69 </strong>– Масса внутренних органов и внутриполосного жира, г (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Легкие</td>
<td>3,09±0,07</td>
<td>3,11±0,10</td>
<td>3,11±0,09</td>
<td>3,12±0,09</td>
<td>3,10±0,07</td>
</tr>
<tr>
<td>Печень</td>
<td>7,37±0,26</td>
<td>7,43±0,25</td>
<td>7,43±0,31</td>
<td>7,42±0,28</td>
<td>7,39±0,29</td>
</tr>
<tr>
<td>Сердце</td>
<td>3,32±0,06</td>
<td>3,37±0,05</td>
<td>3,39±0,07</td>
<td>3,40±0,05</td>
<td>3,38±0,06</td>
</tr>
<tr>
<td>Мышечный желудок</td>
<td>5,68±0,07</td>
<td>5,75±0,11</td>
<td>5,76±0,13</td>
<td>5,74±0,12</td>
<td>5,76±0,09</td>
</tr>
<tr>
<td>Железистый желудок</td>
<td>1,03±0,01</td>
<td>1,09±0,02</td>
<td>1,11±0,02</td>
<td>1,09±0,03</td>
<td>1,10±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td>Кишечник</td>
<td>9,34±0,23</td>
<td>9,45±0,31</td>
<td>9,47±0,27</td>
<td>9,46±0,29</td>
<td>9,48±0,25</td>
</tr>
<tr>
<td>Внутриполостной жир</td>
<td>2,76±0,04</td>
<td>2,67±0,05</td>
<td>2,57±0,06</td>
<td>2,60±0,05</td>
<td>2,59±0,08</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Анализ морфологического состава внутренних органов птицы показывает, что их масса в опытных группах незначительно превышает контрольную, в то время как масса внутриполостного жира имела тенденцию к снижению. Установлено, что статистически достоверной разницы по массе отдельных органов не выявлено, лишь наблюдалось незначительное увеличение в пределах физиологической нормы, что можно объяснить большей массой птицы в экспериментальных группах. Определено, что количество внутриполостного жира у птиц опытных групп было меньше, чем у перепелов контрольной на 3,4; 7,4; 6,2 и 6,6 %, но статистически достоверной разницы не установлено. Данное снижение объясняется тем, что запас внутриполостного жира является весьма мобильным и в первую очередь используется в различных физиологических процессах.</p>
<p>Результаты химического состава мышц перепелов всех групп представлены в таблице 70.</p>
<p>Применение пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс не равнозначно сказалось на химическом составе мяса, но достоверной разницы в показателях не выявлено. Так, показатель влаги в ножных и грудных мышцах у птиц контрольной группы составил – 73,49 и 72,36 %, что выше одноименного показателя в опытных группах в среднем на 1,4 и 1,2 %. Содержание белка в ножных мышцах испытуемых групп увеличилось на 1,9; 9,3; 8,2 и 5,7 %, а уровень жира снизился на 2,4; 4,1; 3,6 и 3,3 %. В грудных мышцах соответственно наблюдалось увеличение на 2,9; 6,5; 6,2 и 5,8 % уровня белка и уменьшение на 3,5; 9,1; 5,2 и 6,3 % жира. Определение химического состава мышц перепелов позволило рассчитать индекс качества мяса потрошеных тушек, именно этот показатель характеризует свойства мяса и выражается в отношении «жир : белок», принимая за эталон соотношение 1 : 1. Так, у перепелов опытных групп данный индекс был ниже, чем в контрольной<br />
у ножных мышц – на 5,3; 17,7 и 11,2 %, у грудных мышц – на 8,3 и 18,2 %.</p>
<p><strong>Таблица 70 </strong>– Химический состав мышц перепелов (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Ножные мышцы</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Влага, %</td>
<td>73,49±1,43</td>
<td>73,17±1,37</td>
<td>71,63±1,38</td>
<td>71,85±1,45</td>
<td>72,37±1,44</td>
</tr>
<tr>
<td>Белок, %</td>
<td>21,65±0,43</td>
<td>22,06±0,41</td>
<td>23,67±0,47</td>
<td>23,42±0,45</td>
<td>22,89±0,51</td>
</tr>
<tr>
<td>Жир, %</td>
<td>4,35±0,11</td>
<td>4,25±0,10</td>
<td>4,18±0,09</td>
<td>4,20±0,08</td>
<td>4,21±0,3</td>
</tr>
<tr>
<td>Зола, %</td>
<td>0,51±0,01</td>
<td>0,52±0,02</td>
<td>0,52±0,02</td>
<td>0,53±0,02</td>
<td>0,53±0,01</td>
</tr>
<tr>
<td>Индекс качества мяса (ИКМ)</td>
<td>0,20</td>
<td>0,19</td>
<td>0,17</td>
<td>0,18</td>
<td>0,18</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Грудные мышцы</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Влага, %</td>
<td>72,36±1,37</td>
<td>71,79±1,29</td>
<td>71,06±0,99</td>
<td>71,04±1,49</td>
<td>71,15±1,22</td>
</tr>
<tr>
<td>Белок, %</td>
<td>23,89±0,69</td>
<td>24,57±0,79</td>
<td>25,45±0,73</td>
<td>25,36±0,77</td>
<td>25,28±0,68</td>
</tr>
<tr>
<td>Жир, %</td>
<td>3,23±0,04</td>
<td>3,12±0,06</td>
<td>2,96±0,08</td>
<td>3,07±0,07</td>
<td>3,04±0,08</td>
</tr>
<tr>
<td>Зола, %</td>
<td>0,52±0,02</td>
<td>0,52±0,01</td>
<td>0,53±0,02</td>
<td>0,53±0,01</td>
<td>0,53±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td>Индекс качества мяса (ИКМ)</td>
<td>0,13</td>
<td>0,12</td>
<td>0,11</td>
<td>0,12</td>
<td>0,12</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таким образом, использование пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс способствует повышению диетических особенностей мяса перепелов опытных групп.</p>
<p>Аминокислотный скор мяса перепелов изучали по содержанию незаменимых аминокислот в мышцах птиц (рисунок 30).</p>
<p>Биополноценность мяса определяется его сбалансированным аминокислотным составом, но наиболее объективной оценкой мяса является его аминокислотный скор, а именно содержание в нем незаменимых аминокислот. Анализ данных показывает, что в белке мяса перепелов опытных групп содержалось более оптимальное количество незаменимых аминокислот. Так, уровень лизина в ножных и грудных мышцах опытных групп был выше в среднем на 3,5 %, чем в контрольной. Показатели таких аминокислот как триптофан, фенилаланин, лейцин, метионин имели более высокие показатели в ножных мышцах и были выше в среднем на 3,7; 3,4; 2,7 и 5,3 %, а в грудных мышцах – на 7,7; 2,4; 2,1 и 3,1 %. Таким образом, применение пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс в рационе перепелов способствовало повышению биологической полноценности мышечной ткани.</p>
<p><img width="637" height="465" class="wp-image-5223" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2599.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2599.png 637w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2599-300x219.png 300w" sizes="(max-width: 637px) 100vw, 637px" alt="word image 2599 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><img width="640" height="440" class="wp-image-5224" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2600.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2600.png 640w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2600-300x206.png 300w" sizes="(max-width: 640px) 100vw, 640px" alt="word image 2600 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 30 </strong>– Аминокислотный скор в мышцах перепелов, мг/г</p>
<p>Качество мяса перепелов оценивалось органолептикой, а также проводился дегустационный анализ по пятибалльной шкале (таблица 71).</p>
<p><strong>Таблица 71 </strong>− Дегустационная оценка мяса перепелов и бульона из них (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="6">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Ножные мышцы</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Аромат</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td colspan="2">4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Вкус</td>
<td>4,7±0,2</td>
<td colspan="2">4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Нежность (жесткость)</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td colspan="2">4,8±0,1</td>
<td>4,9±0,1</td>
<td>4,9±0,1</td>
<td>4,9±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Сочность</td>
<td>4,7±0,2</td>
<td colspan="2">4,8±0,1</td>
<td>4,9±0,2</td>
<td>4,9±0,2</td>
<td>4,9±0,2</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Грудные мышцы</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Аромат</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td colspan="2">4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Вкус</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td colspan="2">4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Нежность<br />
(жесткость)</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td colspan="2">4,8±0,1</td>
<td>4,9±0,1</td>
<td>4,9±0,1</td>
<td>4,9±0,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Сочность</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td colspan="2">4,8±0,1</td>
<td>4,9±0,1</td>
<td>4,9±0,2</td>
<td>4,9±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Бульон</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Аромат</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td colspan="2">4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Вкус</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td colspan="2">4,8±0,1</td>
<td>4,9±0,2</td>
<td>4,9±0,2</td>
<td>4,9±0,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Прозрачность</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td colspan="2">4,7±0,2</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Крепость<br />
(наваристость)</td>
<td>4,7±0,2</td>
<td colspan="2">4,7±0,1</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,2</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Органолептический анализ показал, что запах мяса и бульона из него был ароматным, свойственный свежему мясу, посторонних запахов не ощущалось. Результаты дегустационной оценки показали несущественную разницу в разрезе изучаемых групп. Мясо перепелов всех групп имело коричнево-серый цвет, запах свойственный свежему мясу, вкус – приятный. Бульон из-под мяса перепелов опытных и контрольных групп был прозрачный, с незначительным скоплением жира на поверхности. Мясу перепелов и бульону из них в опытных группах дегустационная комиссия дала более высокую оценку, за счет того что оно было более сочным и нежным.</p>
<p>В целом, пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс оказывает положительное влияние на мясную продуктивность перепелов породы Фараон, а также способствует улучшению качества получаемой продукции перепеловодства.</p>
<p><em>Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса птицы</em>. При проведении ветеринарно-санитарной оценки обязательным является проведение патологоанатомического вскрытия птицы, чтобы исключить возможные заболевания или патологию на органы и ткани животного вызванную применяемым биопрепаратом. В результате вскрытия перепелов изменений или патологий зафиксировано не было. Органы располагались анатомически правильно, цвет их и окружающих тканей соответствовал цвету здоровой птицы. Посторонних новообразований, кровоизлияний, эрозий, язв во всех группах перепелов – не выявлено.</p>
<p>Согласно ГОСТ Р 54673-2011 тушки перепелов контрольной и опытных групп отнесены к 1-й категории. Так как по показателям упитанности они имели хорошо развитую мускулатуру тела, грудь была округлой формы, наличие подкожного жир – умеренное. Масса переработанной тушки перепелов составляло значение не ниже требований нормативной документации.</p>
<p>Результаты изучения мяса перепелов по физико-химическим и микробиологическим показателям представлены в таблице 72.</p>
<p><strong>Таблица 72 </strong>– Физико-химическая и микробиологическая оценка мяса<br />
перепелов (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Р-ция с сернокислой медью</td>
<td rowspan="2">–</td>
<td rowspan="2">–</td>
<td rowspan="2">–</td>
<td rowspan="2">–</td>
<td rowspan="2">–</td>
</tr>
<tr>
<td>Р-ция с формалином</td>
</tr>
<tr>
<td>Р-ция на пероксидазу</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td>Кол-во ЛЖК, мг КОН/100 г</td>
<td>2,65±0,04</td>
<td>2,53±0,06</td>
<td>2,39±0,04</td>
<td>2,40±0,05</td>
<td>2,45±0,05</td>
</tr>
<tr>
<td>Количество микробных клеток в одном поле зрения микроскопа:</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>– с поверхности тушки</td>
<td>2,78±0,08</td>
<td>2,65±0,09</td>
<td>2,64±0,08</td>
<td>2,60±0,10</td>
<td>3,66±0,07</td>
</tr>
<tr>
<td>– с глубоких слоев</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>рН мяса, ед.</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Первые сутки</td>
<td>6,83±0,17</td>
<td>6,81±0,20</td>
<td>6,76±0,19</td>
<td>6,79±0,19</td>
<td>6,81±0,18</td>
</tr>
<tr>
<td>Вторые сутки</td>
<td>6,56±0,18</td>
<td>6,48±0,18</td>
<td>6,45±0,21</td>
<td>6,39±0,15</td>
<td>6,43±0,20</td>
</tr>
<tr>
<td>Третьи сутки</td>
<td>6,08±0,15</td>
<td>6,03±0,21</td>
<td>5,98±0,18</td>
<td>6,07±0,22</td>
<td>5,97±0,19</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>По результатам ветеринарно-санитарной экспертизы установлено, что мясо, полученное от птицы, соответствует нормативной документации. Так, при проведении реакции с сернокислой медью и формалином показало отрицательный результат, на пероксидазу – положительный, что говорит о том, что мясо получено от здоровой птицы. При изучении летучих жирных кислот в мясе перепелов установлено, что их количество во всех группах было в пределах допустимых требований и составило в контрольной – 2,65 мг КОН/100 г, против 22,65; 2,64; 2,60 и 3,66 мг КОН/100 г в 1-й, 2-й, 3-й и 4-й опытных группах. Изучение количества микробных клеток с поверхности тушки и с ее глубоких слоев показало, что показатели находятся в пределах допустимых норм. Исследование кислотности мяса выявило резкое снижение показателя рН мышц в течение первых трех суток, которое характерно для мяса, полученного от здоровой птицы. Следовательно, применение пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс не оказало негативного воздействия на тушки перепелов и их мясо, полученные результаты показали соответствие, изучаемых параметров нормативной документации, а полученные продукты допускаются к употреблению.</p>
<p>Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс обладает стимулирующим действием на обмен веществ, повышает приросты, сохранность, способствует высоким показателям биополноценностии мясной продукции перепеловодства. Мясо перепелов может быть использовано в пищу независимо от дозы и сроков использования испытуемого биопрепарата.</p>
<p>В целом, результаты изучения фармакологических свойств пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс, а также подбор эффективной его дозы показали, что по совокупности эффекта наилучшей дозой для перепелов можно считать 0,5 мл/гол. Данное количество пробиотика в рационе перепелов породы Фараон позволяет проявить высокий биоресурстный потенциал птицы.</p>
<p><em>Экономическая эффективность использования пробиотика.</em> Результаты экономической эффективности использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на перепелах породы Фараон представлены в таблице 73.</p>
<p><strong>Таблица 73 </strong>– Экономическая эффективность использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="6">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я опытная</td>
<td colspan="2">2-я опытная</td>
<td>3-я опытная</td>
<td>4-я опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в начале опыта, гол.</td>
<td>200</td>
<td>200</td>
<td colspan="2">200</td>
<td>200</td>
<td>200</td>
</tr>
<tr>
<td>Сохранность, %</td>
<td>93,5</td>
<td>95,5</td>
<td colspan="2">98,5</td>
<td>98,5</td>
<td>97,5</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в конце опыта, гол.</td>
<td>187</td>
<td>191</td>
<td colspan="2">197</td>
<td>197</td>
<td>195</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Масса тушки на реализацию</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошенной тушки, г</td>
<td>216,84±1,78</td>
<td>226,84±2,04</td>
<td colspan="2">232,59±1,86*</td>
<td>231,58±2,12*</td>
<td>232,12±2,07*</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошенной тушки всего, кг</td>
<td>40,55</td>
<td>43,32</td>
<td colspan="2">45,82</td>
<td>45,62</td>
<td>45,26</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Затраты комбикорма за период выращивания</em></td>
</tr>
<tr>
<td>На голову, г</td>
<td>937,85</td>
<td>980,37</td>
<td colspan="2">990,40</td>
<td>993,65</td>
<td>989,49</td>
</tr>
<tr>
<td>На все поголовье, кг</td>
<td>175,38</td>
<td>187,25</td>
<td colspan="2">195,11</td>
<td>195,75</td>
<td>192,95</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Затраты пробиотика</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Всего, мл</td>
<td>–</td>
<td>477,5</td>
<td colspan="2">985,0</td>
<td>1 477,5</td>
<td>1950,0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Экономическая эффективность</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 кг комбикорма, руб.</td>
<td colspan="6">30</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма<br />
всего, руб.</td>
<td>5 261,40</td>
<td>5 617,50</td>
<td colspan="2">5 853,30</td>
<td>5 872,5</td>
<td>5 788,5</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 л пробиотика, руб.</td>
<td colspan="3">–</td>
<td colspan="3">60</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость пробиотика всего, руб.</td>
<td>–</td>
<td>28,65</td>
<td colspan="2">59,10</td>
<td>88,65</td>
<td>117,00</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма<br />
и пробиотика, руб.</td>
<td>5 261,40</td>
<td>5 646,15</td>
<td colspan="2">5 912,40</td>
<td>5 961,15</td>
<td>5 905,50</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена реализации 1 кг мяса перепелов, руб.</td>
<td colspan="6">400,0</td>
</tr>
<tr>
<td>Выручка от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>16 220,00</td>
<td>17 328,00</td>
<td colspan="2">18 328,00</td>
<td>18 248,00</td>
<td>18 104,00</td>
</tr>
<tr>
<td>Прибыль от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>10 958,60</td>
<td>11 681,85</td>
<td colspan="2">12 415,60</td>
<td>12 286,85</td>
<td>12 198,50</td>
</tr>
<tr>
<td>Экономический эффект от использования пробиотика к контролю,</p>
<p>руб.</p>
<p>%</td>
<td>–</p>
<p>–</td>
<td>723,25</p>
<p>6,60</td>
<td colspan="2">1 457,00</p>
<p>13,30</td>
<td>1 328,25</p>
<p>12,12</td>
<td>1 239,90</p>
<p>11,31</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В результате проведенного предварительного анализа экономической эффективности применения в рационе перепелов породы Фараон пробиотической добавки Галлобакт-Ф-Плюс выявлено, что с учетом затрат на комбикорм<br />
и микробной добавки, прибыль в 1–4-й опытных группах составила 11 681,85; 12 415,60; 12 286,85 и 12 198,50 руб., против 10 958,60 руб. в контрольной группе, что выше на 723,25; 1 457,00; 1 328,25 и 1 239,90 руб., соответственно. В целом, наилучшие результаты были получены во 2-й опытной группе, в которой экономический эффект превышал контрольную группу на 13,30 %.</p>
<p>Таким образом, экономически целесообразно проводить производственную апробацию пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на перепелах породы Фараон<br />
в дозе, составляющей 0,5 мл/гол.</p>
<h4><a id="post-5185-_Toc27057862"></a><strong><em>2.16.3 Фармакологическое действие пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на организм цыплят-бройлеров быстрорастущих кроссов</em></strong></h4>
<p>Следующим этапом исследований явилось изучить влияние пробиотической добавки Галлобакт-Ф-Плюс на организм цыплят-бройлеров быстрорастущих кроссов. В качестве объектов исследований использовали цыплят-брой­леров кроссов Росс 308 и Кобб 500.</p>
<p><a id="post-5185-_Toc25459437"></a><em>Влияние пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на цыплят-бройлеров<br />
кросса Росс 308</em></p>
<p>Для изучения влияния пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на сохранность, продуктивность, основные показатели обмена веществ, а также качество продукции от цыплят-бройлеров кросса Росс 308 был проведен научно-хозяй­ственный опыт, в котором методом групп-аналогов было сформировано пять групп птиц по 60<em> </em>гол. в каждой: контрольная группа – птица получала стандартный рацион, рекомендованный ВНИТИП, и имела свободный доступ к воде; первая опытная группа – подопытная птица получала стандартный рацион,<br />
а также дополнительно в воду вводился пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс в дозе 0,25 мл/гол.; вторая опытная группа – Галлобакт-Ф-Плюс вводили в дозе 0,5 мл/гол.; третья опытная группа – объекты исследований получали стандартный рацион, рекомендованный ВНИТИП, а также в воду добавляли пробиотик в дозе 0,75 мл/гол.; четвертая опытная группа – объекты исследований получали стандартный рацион, а в воду добавляли пробиотик в дозе 1,0 мл/гол. Опыт продолжался 42 дня.</p>
<p><em>Рост и развитие цыплят-бройлеров. </em>Для проведения научно-хозяйствен­ного опыта на первые сутки рождения формировали группы из клинически здоровых цыплят, живая масса которых была практически аналогичной, с учетом требований. В процессе выращивания птицы наблюдали за ее поведением, перьевым покровом, поеданием корма. Установлено, что изучаемые клинические показатели были удовлетворительными. Данные динамики живой массы, прироста, употребленного комбикорма птицей, а также сохранности представлены в таблице 74 и на рисунке 31.</p>
<p><strong>Таблица 74 </strong>– Изучаемые хозяйственные показатели цыплят-бройлеров<br />
кросса Росс 308, (n = 60)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Сохранность, %</td>
<td>93,3</td>
<td>96,6</td>
<td>96,6</td>
<td>100</td>
<td>100</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Прирост живой массы за период выращивания (042 сут)</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Одной головы<br />
в среднем, г</td>
<td>2636,18</td>
<td>2661,37</td>
<td>2682,37</td>
<td>2712,92</td>
<td>2709,42</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Расход комбикорма за период выращивания (042 сут)</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Одной головы, г</td>
<td>4798,74</td>
<td>4814,25</td>
<td>4828,76</td>
<td>4836,41</td>
<td>4843,68</td>
</tr>
<tr>
<td>Конверсия, кг</td>
<td>1,82</td>
<td>1,81</td>
<td>1,80</td>
<td>1,78</td>
<td>1,79</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (Р &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты изучения хозяйственных показателей при выращивании цыплят-бройлеров кросса Росс 308 показали, что применение пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс способствовало повышению сохранности птицы 1-й и 2-й опытных групп по сравнению с контрольной на 3,3 %, а в 3-й и 4-й опытных группах данный показатель был максимальным и выше, чем в контрольной, на 6,7 %.</p>
<p><img width="950" height="528" class="wp-image-5225" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2601.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2601.png 950w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2601-300x167.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2601-768x427.png 768w" sizes="(max-width: 950px) 100vw, 950px" alt="word image 2601 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 31 </strong>‒ Динамика живой массы, г</p>
<p>Изучение живой массы птиц показало, что в опытных группах изучаемый показатель в каждый период взвешивания цыплят-бройлеров равномерно повышался в зависимости от дозы пробиотика. Однако статистически достоверная разница была выявлена на 35-е сутки выращивания птицы в 3-й и 4-й опытных группах по сравнению с контрольной, в которых масса оказалась выше на 2,4<br />
и 2,3 % (P &lt; 0,05). В 1-й и 2-й опытных группах также масса птиц была выше, чем в контрольной, на 0,9 и 1,3 %, но разница была не достоверна. На 42-й день взвешивания масса цыплят-бройлеров во 2-й, 3-й и 4-й опытных группах была выше, чем в контрольной, на 1,7; 2,8 и 2,7 % при статистически достоверной разнице (P &lt; 0,05). В целом, прирост цыплят-бройлеров в контрольной группе составил 2636,18 г, а в 1–4-й опытных группах – 2661,37; 2682,37; 2712,92 и 2709,42 г, соответственно, что выше, чем в контроле на 1,0; 1,6; 2,9 и 2,8 %.</p>
<p>В связи с тем, что масса птиц опытных групп была выше, чем в контрольной, у них наблюдалась повышенная поедаемость комбикормов. Однако анализ конверсии комбикорма показал, что изучаемый показатель в опытных группах был ниже, чем в контрольной на 0,01; 0,02; 0,04 и 0,03 кг.</p>
<p>Таким образом, применение биопрепарата на основе живых культур лактобацилл способствовал повышению сохранности, живой массы цыплят-бройлеров,<br />
а также снижению показателя конверсии корма, что максимально было выражено в 3-й опытной группе при дозе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс 0,75 мл/гол.</p>
<p><em>Морфологические и биохимические показатели крови. </em>Показатели цельной<br />
и сыворотки крови являются главнейшими интерьерными значениями состояния организма птицы, в особенности при использовании в их рационе новых биопрепаратов. Количественный и качественный состав крови говорит об интенсивности обменных процессов, а также связанных с ними процессах развития и продуктивности птицы. Результаты морфологических и биохимических показателей крови цыплят-бройлеров кросса Росс 308 представлены в таблице 75.</p>
<p>Результаты анализа цельной крови и ее сыворотки на 21-е сутки исследований не дали статистически достоверных изменений в показателях и в разрезе изучаемых подопытных групп все они находились в пределах физиологической нормы (таблица 75). Однако изучение данных показателей на 42-е сутки выращивания цыплят-бройлеров имели не только тенденцию к их улучшению, но<br />
и в отдельных опытных группах были достоверно изменены по сравнению<br />
с контрольной. Так, в 3-й и 4-й опытных группах были зафиксированы статистические различия по ряду показателей, в частности, по уровню эритроцитов, которых в данных группах было выше, чем в контрольной на 8,1 и 7,3 %, гемоглобина – на 4,7 и 4,6 %, общего белка – на 4,6 %, альбуминов – на 12,9<br />
и 11,1 %, кальция – на 4,8 и 4,6 %, БАСК – на 4,5 и 4,1 %, ЛАСК – на 3,6<br />
и 3,4 % (Р &lt; 0,05). Также в 3-й и 4-й опытных группах было выявлено достоверное снижение уровня холестерина в сыворотки крови цыплят-бройлеров кросса Росс 308 по сравнению с контрольной на 9,3 и 8,5 % (Р &lt; 0,05).</p>
<p><strong>Таблица 75 </strong>– Морфо-биохимический статус крови цыплят-бройлеров<br />
кросса Росс 308</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>21-е сутки</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л</td>
<td>2,64±0,04</td>
<td>2,65±0,03</td>
<td>2,69±0,03</td>
<td>2,67±0,05</td>
<td>2,70±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Гемоглобин, г/л</td>
<td>83,34±1,45</td>
<td>83,45±1,54</td>
<td>83,54±1,60</td>
<td>84,12±1,63</td>
<td>83,89±1,62</td>
</tr>
<tr>
<td>Тромбоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>62,34±0,86</td>
<td>62,51±0,76</td>
<td>62,79±0,71</td>
<td>62,97±0,64</td>
<td>62,76±0,72</td>
</tr>
<tr>
<td>Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>23,34±0,41</td>
<td>23,44±0,35</td>
<td>23,49±0,39</td>
<td>23,38±0,33</td>
<td>23,43±0,30</td>
</tr>
<tr>
<td>Общий белок, г/л</td>
<td>36,76±0,54</td>
<td>36,79±0,53</td>
<td>36,87±0,50</td>
<td>37,12±0,43</td>
<td>37,05±0,47</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>альбумин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>14,54±0,22</td>
<td>14,65±0,15</td>
<td>14,79±0,18</td>
<td>15,11±0,16</td>
<td>14,97±0,20</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>глобулин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>22,22±0,36</td>
<td>22,14±0,28</td>
<td>22,08±0,33</td>
<td>22,01±0,30</td>
<td>22,08±0,26</td>
</tr>
<tr>
<td>А/Г коэффициент</td>
<td>0,65±0,01</td>
<td>0,66±0,02</td>
<td>0,67±0,01</td>
<td>0,68±0,02</td>
<td>0,67±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Холестерин, мМ/л</td>
<td>3,54±0,06</td>
<td>3,56±0,05</td>
<td>3,53±0,04</td>
<td>3,51±0,04</td>
<td>3,53±0,05</td>
</tr>
<tr>
<td>АСТ, Ед/л</td>
<td>213,36±2,74</td>
<td>214,84±2,46</td>
<td>214,47±2,57</td>
<td>213,45±2,54</td>
<td>213,54±2,50</td>
</tr>
<tr>
<td>АЛТ, Ед/л</td>
<td>22,65±0,26</td>
<td>22,73±0,29</td>
<td>22,84±0,22</td>
<td>22,79±0,19</td>
<td>22,64±0,24</td>
</tr>
<tr>
<td>Кальций, мМ/л</td>
<td>9,58±0,11</td>
<td>9,59±0,09</td>
<td>9,63±0,12</td>
<td>9,64±0,10</td>
<td>9,62±0,14</td>
</tr>
<tr>
<td>Фосфор, мМ/л</td>
<td>4,57±0,05</td>
<td>4,59±0,08</td>
<td>4,62±0,06</td>
<td>4,63±0,07</td>
<td>4,65±0,08</td>
</tr>
<tr>
<td>БАСК, %</td>
<td>37,8±1,87</td>
<td>38,1±1,82</td>
<td>38,2±1,73</td>
<td>38,3±1,66</td>
<td>38,2±1,78</td>
</tr>
<tr>
<td>ЛАСК, %</td>
<td>32,5±1,24</td>
<td>32,7±1,19</td>
<td>32,9±1,29</td>
<td>32,9±1,18</td>
<td>32,7±1,22</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>42-е сутки</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л</td>
<td>2,73±0,02</td>
<td>2,76±0,01</td>
<td>2,80±0,03</td>
<td>2,95±0,02*</td>
<td>2,93±0,03*</td>
</tr>
<tr>
<td>Гемоглобин, г/л</td>
<td>84,35±0,53</td>
<td>84,78±0,58</td>
<td>84,98±0,61</td>
<td>88,34±0,60*</td>
<td>88,25±0,52*</td>
</tr>
<tr>
<td>Тромбоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>64,54±0,74</td>
<td>64,87±0,71</td>
<td>66,21±0,62</td>
<td>66,57±0,68</td>
<td>66,52±0,70</td>
</tr>
<tr>
<td>Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>24,56±0,34</td>
<td>24,65±0,31</td>
<td>24,62±0,33</td>
<td>24,68±0,30</td>
<td>23,61±0,31</td>
</tr>
<tr>
<td>Общий белок, г/л</td>
<td>37,45±0,21</td>
<td>37,76±0,28</td>
<td>38,12±0,24</td>
<td>39,23±0,26*</td>
<td>39,18±0,27*</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>альбумин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>14,78±0,25</td>
<td>14,86±0,27</td>
<td>15,56±0,29</td>
<td>16,68±0,27*</td>
<td>16,42±0,29*</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>глобулин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>22,67±0,31</td>
<td>22,90±0,29</td>
<td>22,56±0,35</td>
<td>22,55±0,27</td>
<td>22,76±0,30</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 75</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>А/Г коэффициент</td>
<td>0,65±0,03</td>
<td>0,65±0,02</td>
<td>0,68±0,03</td>
<td>0,73±0,01</td>
<td>0,72±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td>Холестерин, мМ/л</td>
<td>3,78±0,02</td>
<td>3,75±0,04</td>
<td>3,62±0,06</td>
<td>3,43±0,03*</td>
<td>3,46±0,02*</td>
</tr>
<tr>
<td>АСТ, Ед/л</td>
<td>227,45±2,54</td>
<td>225,41±2,49</td>
<td>225,32±2,47</td>
<td>224,67±2,64</td>
<td>224,87±2,56</td>
</tr>
<tr>
<td>АЛТ, Ед/л</td>
<td>23,45±0,28</td>
<td>23,33±0,32</td>
<td>23,25±0,31</td>
<td>23,15±0,29</td>
<td>23,21±0,25</td>
</tr>
<tr>
<td>Кальций, мМ/л</td>
<td>9,34±0,05</td>
<td>9,43±0,09</td>
<td>9,54±0,06</td>
<td>9,79±0,05*</td>
<td>9,77±0,06*</td>
</tr>
<tr>
<td>Фосфор, мМ/л</td>
<td>4,21±0,07</td>
<td>4,32±0,08</td>
<td>4,37±0,07</td>
<td>4,45±0,08</td>
<td>4,44±0,07</td>
</tr>
<tr>
<td>БАСК, %</td>
<td>41,0±0,25</td>
<td>41,7±0,32</td>
<td>42,3±0,28</td>
<td>45,5±0,30*</td>
<td>45,12±0,27*</td>
</tr>
<tr>
<td>ЛАСК, %</td>
<td>32,8±0,28</td>
<td>33,4±0,24</td>
<td>33,8±0,22</td>
<td>36,4±0,21*</td>
<td>36,2±0,27*</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (Р &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таким образом, результаты анализа крови цыплят-бройлеров кросса Росс 308 свидетельствовали о том, что на конец эксперимента у птиц опытных групп, в рационе которых использовали пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс, наблюдалась активизация, а также стимуляция обменных процессов, с одновременным усилением иммунного статуса птицы за счет повышения показателей бактерицидной<br />
и лизоцимной активностей сыворотки крови, что в итоге обеспечило высокий показатель сохранности и продуктивности сельскохозяйственной птицы.</p>
<p><em>Влияние пробиотика на пищеварение.</em> В конце научно-хозяйственного эксперимента проводили балансовый опыт для изучения показателей переваримости компонентов комбикорма. Данные представлены на рисунке 32.</p>
<p>Установлено, что показатели переваримости изучаемых питательных веществ комбикорма в опытных группах были незначительно выше, чем в контрольной. Так, переваримость органического вещества комбикорма в 1–4-й опытных группах составили 80,78; 81,67; 82,47 и 82,32 %, против 80,04 %<br />
в контрольной группе (разница – 0,74; 1,63; 2,43 и 2,28 %, соответственно). Переваримость сырого жира также имела тенденцию к повышению в опытных группах по сравнению с контрольной на 0,31; 0,56; 1,4 и 1,1 %, клетчатки – на 0,32; 0,6; 0,95 и 0,87 %, БЭВ – на 0,73; 1,2; 1,61 и 1,4 %, соответственно. По переваримости сырого протеина в разрезе исследуемых групп была выявлена<br />
в 3-й и 4-й опытных группах статистически достоверная разница по сравнению с контрольной и составила 79,51 и 78,79 % против 74,54 %, что соответственно выше, чем в контроле на 5,0 и 4,3 % (Р &lt; 0,05).</p>
<p><img width="643" height="479" class="wp-image-5226" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2602.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2602.png 643w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2602-300x223.png 300w" sizes="(max-width: 643px) 100vw, 643px" alt="word image 2602 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 32 </strong>– Переваримость питательных веществ комбикорма<br />
цыплятами-бройлерами, %</p>
<p>Таким образом, применение в составе рациона птиц пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс поспособствовало лучшему перевариванию веществ комбикорма, что обеспечило повышение продуктивности цыплят-бройлеров опытных групп.</p>
<p><em>Микробиоценноз химуса кишечника.</em> Для изучения влияния испытуемого биопрепарата Галлобакт-Ф-Плюс на формирование микробного фона в слепых отростках кишечника цыплят-бройлеров была проведена посмертная резекция данного отдела желудочно-кишечного тракта с последующим микробиологическим анализом. Результаты микробиологических исследований слепых отростков кишечника птиц представлены в таблице 76.</p>
<p>Микробиоценноз кишечника птиц всех опытных групп по уровню нормофлоры достоверно превосходил данный показатель в контрольной группе. По содержанию молочнокислых бактерий ее титр в 1–4-й опытных группах был выше, чем в контрольной в 1,4; 1,6; 1,9 и 1,8 раз (P &lt; 0,05). Уровень бифидобактерий достоверно был повышен в опытных группах по сравнению с контролем в 1,1; 1,2<br />
и 1,3 раза (P &lt; 0,05). Также в опытных группах была выявлена статистически достоверное снижение уровня условно-патогенной микрофлоры, а по отдельным группам изучаемой микрофлоры наблюдалось ее отсутствие в кишечнике цыплят-бройлеров. Так, содержание бактерий группы кишечной палочки в контрольной группе составило 6,7 × 10<sup>3</sup> КОЕ/г, против 4,4 × 10<sup>3 </sup>КОЕ/г в 1-й и 2-й опытных группах; 2,8 и 3,1 × 10<sup>3</sup> КОЕ/г в 3-й и 4-й опытных группах (P &lt; 0,05). Наблюдалось достоверное снижение стафилококков и стрептококков в опытных группах по сравнению с контролем в 1,2; 1,4; 1,9 и 1,8 раза, а также 1,2; 1,3; 1,5 и 1,4 раза, соответственно (P &lt; 0,05). В 1-й опытной группе было зафиксировано достоверное снижение по сравнению с контрольной группой содержание энтерококков<br />
в 3,2 раза (P &lt; 0,05). При этом во 2-й, 3-й и 4-й опытных группах не было выявлено данной группы микроорганизмов. Псевдомонады в контрольной группе составили 3,2 × 10 КОЕ/г, а титр клостридий – 2,5 × 10 КОЕ/г, в то время как в 1–4-й опытных группах данную микрофлору не выявили.</p>
<p><strong>Таблица 76 </strong>– Баланс полезной и условно-патогенной микрофлоры химуса<br />
слепых отростков цыплят-бройлеров (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Молочнокислые<br />
бактерии, 10<sup>8 </sup>КОЕ/г</td>
<td>2,3±0,05</td>
<td>3,2±0,04*</td>
<td>3,8±0,03*</td>
<td>4,4±0,03*</td>
<td>4,3±0,06*</td>
</tr>
<tr>
<td>Бифидобактерии, 10<sup>8 </sup>КОЕ/г</td>
<td>3,2±0,07</td>
<td>3,5±0,05*</td>
<td>3,8±0,05*</td>
<td>4,1±0,06*</td>
<td>4,1±0,04*</td>
</tr>
<tr>
<td>Эшерихии, 10<sup>3 </sup>КОЕ/г</td>
<td>6,7±0,07</td>
<td>4,4±0,06*</td>
<td>3,7±0,05*</td>
<td>2,8±0,04*</td>
<td>3,1±0,05*</td>
</tr>
<tr>
<td>Энтерококки, 10<sup>2</sup> КОЕ/г</td>
<td>6,8±0,04</td>
<td>2,1±0,05*</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Псевдомонады, 10 КОЕ/г</td>
<td>3,2±0,03</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Стафилококки, 10<sup>2</sup> КОЕ/г</td>
<td>6,4±0,04</td>
<td>5,3±0,03*</td>
<td>4,5±0,04*</td>
<td>3,3±0,04*</td>
<td>3,5±0,03*</td>
</tr>
<tr>
<td>Стрептококки, 10<sup>2</sup> КОЕ/г</td>
<td>5,5±0,05</td>
<td>4,7±0,04*</td>
<td>4,2±0,05*</td>
<td>3,7±0,04*</td>
<td>3,8±0,03*</td>
</tr>
<tr>
<td>Клостридии, 10 КОЕ/г</td>
<td>2,5±0,05</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таким образом, пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс за счет наличия в своем составе полезных лактобактерий, обладающих высокими пробиотическими свойствами, способствовал угнетению развития патогенной микробиоты, при этом оказывал позитивное влияние на рост нормофлоры кишечника.</p>
<p><em>Мясная продуктивность, развитие внутренних органов и качество мяса птиц. </em>Показателем продуктивности ссельскохозяйственных животных, в том числе птицы, являются не только данные прироста, но и доля нарощенной мышечной ткани. Данные убойного выхода цыплят-бройлеров кросса Росс 308 представлены в таблице 77.</p>
<p><strong>Таблица 77 </strong>– Убойные показатели цыплят-бройлеров (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Предубойная масса птицы, г</td>
<td>2658,76±10,56</td>
<td>2697,57±10,25</td>
<td>2711,67±10,87</td>
<td>2747,73±10,37*</td>
<td>2743,26±10,43*</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошеной тушки, г</td>
<td>1813,27±10,56</td>
<td>1853,23±10,87</td>
<td>1873,76±11,04</td>
<td>1912,42±11,35*</td>
<td>1903,82±11,42*</td>
</tr>
<tr>
<td>Убойный выход, %</td>
<td>68,2</td>
<td>68,7</td>
<td>69,1</td>
<td>69,6</td>
<td>69,4</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Изучая убойные показатели цыплят-бройлеров кросса Росс 308 при использовании в их рационе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс было установлено, что биопрепарат в 3-й и 4-й опытных группах статистически достоверно повысил массу потрошенной тушки по сравнению с контрольной группой на 5,5<br />
и 5,0 % (P &lt; 0,05). Результаты убойного выхода в 1–4-й опытных группах составили 68,7; 69,1; 69,6 и 69,4 %, что выше, чем в контрольной, на 0,5; 0,9; 1,4<br />
и 1,2 %, соответственно.</p>
<p>Такие показатели тушки как ее морфологический состав, а именно соотношение мышечной, кожной и костной тканей друг к другу, определяют количественные и качественные особенности мясной продуктивности цыплят-бройлеров. В связи с чем, проводился морфологический состав грудных и ножных мышц тушки подопытных птиц. Результаты разделки грудины на части представлены в таблице 78.</p>
<p>Анализ морфологического состава грудки цыплят-бройлеров кросса Росс 308 показал, что масса грудных мышц в опытных группах была выше, чем<br />
в контрольной на 12,54; 20,86; 39,21 и 31,44 г. Доля данной группы мышц<br />
в контроле по отношению к массе потрошенной тушки составила 22,1 %, в то время как в 1–4-й опытных группах этот показатель был выше на 0,2; 0,4; 0,8<br />
и 0,6 %. Масса кожи и костей грудной части в опытных группах также была незначительно выше, чем в контрольной, что связано с большей массой тела птицы. В целом, масса всех тканей груди в опытных группах была выше, чем<br />
в контрольной на 2,9; 5,5; 10,2 и 8,6 %, а на долю их пришлось 29,3; 29,7; 30,4<br />
и 30,1 % против 29,1 % в контрольной группе.</p>
<p>Данные по морфологическому составу бедренной части цыплят-бройлеров представлены в таблице 79.</p>
<p>При изучении морфологического состава бедра цыплят-бройлеров установлено, что выход бедренных мышц без кости и кожи во 2-й, 3-й и 4-й опытных группах был выше, чем в контрольной, на 0,1; 0,5 и 0,3 %, а их масса превосходила – на 4,2; 9,8 и 7,6 %, соответственно. В 1-й опытной группе выход бедренных мышц по отношению к массе потрошенной тушки был идентичен контрольной, однако масса изучаемых мышц была выше на 2,2 %. Масса кожи бедренной части 1–4-й опытных групп незначительно превосходила изучаемый показатель в контрольной группе на 0,88; 3,2; 6,0 и 5,8 г, но выход данного показателя был практически на одном уровне и составил в контроле 2,2 %, а в опытных – 2,2; 2,3; 2,4 и 2,4 %, соответственно. В целом, по массе всех частей бедра максимальное значение было зафиксировано в 3-й опытной группе, которое составило 338,52 г, в 4-й опытной группе – 333,19 г, во 2-й группе – 322,33 г и 1-й опытной группе – 313,21 г, против 306,50 г в контрольной группе.</p>
<p>Морфологический состав голени птиц представлен в таблице 80.</p>
<p>Аналогичная тенденция в пользу опытных групп была выявлена при анализе морфологического состава голени цыплят-бройлеров кросса Росс 308 при использовании пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс. Масса всех тканей голени (мышцы, кожа и кости) в 1–4-й опытных группах превосходила контрольную группу на 2,2; 5,5; 7,7 и 7,2 %, соответственно, а выход данной части тела птиц по отношению к потрошенной тушки во 2–4-й опытных группах был выше на 0,5 и 0,3 %.</p>
<p>Данные по состоянию и развитию органов цыплят-бройлеров кросса Росс 308 представлены в таблице 81.</p>
<p><strong>Таблица 78 </strong>– Морфологический состав грудки цыплят-бройлеров (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td rowspan="2">Ед. изм.</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я опытная</td>
<td>2-я опытная</td>
<td>3-я опытная</td>
<td>4-я опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошеной тушки</td>
<td>г</td>
<td>1813,27±10,56</td>
<td>1853,23±10,87</td>
<td>1873,76±11,04</td>
<td>1912,42±11,35*</td>
<td>1903,82±11,42*</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса грудных мышц</td>
<td>г</td>
<td>400,73±5,87</td>
<td>413,27±5,69</td>
<td>421,59±5,82</td>
<td>439,94±5,76</td>
<td>432,17±5,75</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>22,1</td>
<td>22,3</td>
<td>22,5</td>
<td>22,9</td>
<td>22,7</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса кожи</td>
<td>г</td>
<td>56,21±1,12</td>
<td>57,45±1,13</td>
<td>59,96±1,22</td>
<td>63,11±1,04</td>
<td>62,83±1,09</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>3,1</td>
<td>3,1</td>
<td>3,2</td>
<td>3,3</td>
<td>3,3</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса костей</td>
<td>г</td>
<td>70,72±2,32</td>
<td>72,28±2,43</td>
<td>74,95±2,35</td>
<td>78,41±2,23</td>
<td>78,06±2,21</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>3,9</td>
<td>3,9</td>
<td>4,0</td>
<td>4,1</td>
<td>4,1</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса всех тканей</td>
<td>г</td>
<td>527,66±6,75</td>
<td>543,00±6,54</td>
<td>556,50±6,86</td>
<td>581,46±6,59</td>
<td>573,06±6,64</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>29,1</td>
<td>29,3</td>
<td>29,7</td>
<td>30,4</td>
<td>30,1</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 79 </strong>– Морфологический состав бедра птицы (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td rowspan="2">Ед. изм.</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я опытная</td>
<td>2-я опытная</td>
<td>3-я опытная</td>
<td>4-я опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошеной тушки</td>
<td>г</td>
<td>1813,27±10,56</td>
<td>1853,23±10,87</td>
<td>1873,76±11,04</td>
<td>1912,42±11,35*</td>
<td>1903,82±11,42*</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса бедренных мышц</td>
<td>г</td>
<td>223,04±3,45</td>
<td>227,95±3,25</td>
<td>232,35±3,47</td>
<td>244,79±3,44</td>
<td>239,89±3,36</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>12,3</td>
<td>12,3</td>
<td>12,4</td>
<td>12,8</td>
<td>12,6</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса кожи</td>
<td>г</td>
<td>39,90±0,78</td>
<td>40,78±0,67</td>
<td>43,10±0,72</td>
<td>45,90±0,58</td>
<td>45,70±0,65</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>2,2</td>
<td>2,2</td>
<td>2,3</td>
<td>2,4</td>
<td>2,4</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса костей</td>
<td>г</td>
<td>43,52±0,87</td>
<td>44,48±0,83</td>
<td>46,85±0,76</td>
<td>47,81±1,11</td>
<td>47,60±0,95</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>2,4</td>
<td>2,4</td>
<td>2,5</td>
<td>2,5</td>
<td>2,5</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса всех тканей</td>
<td>г</td>
<td>306,5±5,87</td>
<td>313,2±5,89</td>
<td>322,3±6,23</td>
<td>338,5±6,21</td>
<td>333,19±5,98</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>16,9</td>
<td>16,9</td>
<td>17,2</td>
<td>17,7</td>
<td>17,5</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 80 </strong>– Морфологический состав голени птицы (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td rowspan="2">Ед. изм.</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я опытная</td>
<td>2-я опытная</td>
<td>3-я опытная</td>
<td>4-я опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошеной тушки</td>
<td>г</td>
<td>1813,27±10,56</td>
<td>1853,23±10,87</td>
<td>1873,76±11,04</td>
<td>1912,42±11,35*</td>
<td>1903,82±11,42*</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса мышц голени</td>
<td>г</td>
<td>157,76±2,45</td>
<td>161,24±2,35</td>
<td>164,89±2,54</td>
<td>168,30±2,46</td>
<td>167,54±2,49</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>8,7</td>
<td>8,7</td>
<td>8,8</td>
<td>8,8</td>
<td>8,8</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса кожи</td>
<td>г</td>
<td>38,08±0,87</td>
<td>38,92±0,95</td>
<td>41,23±0,82</td>
<td>42,08±0,88</td>
<td>41,89±0,82</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>2,1</td>
<td>2,1</td>
<td>2,2</td>
<td>2,2</td>
<td>2,2</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса костей</td>
<td>г</td>
<td>59,84±0,81</td>
<td>61,16±0,76</td>
<td>63,71±0,80</td>
<td>65,03±0,80</td>
<td>64,73±0,94</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>3,3</td>
<td>3,3</td>
<td>3,4</td>
<td>3,4</td>
<td>3,4</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса всех тканей</td>
<td>г</td>
<td>255,68±4,56</td>
<td>261,32±4,87</td>
<td>269,83±4,86</td>
<td>275,41±4,68</td>
<td>274,16±4,69</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>14,1</td>
<td>14,1</td>
<td>14,6</td>
<td>14,4</td>
<td>14,4</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 81 </strong>– Развитие внутренних органов цыплят-бройлеров (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td rowspan="2">Ед. изм.</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я опытная</td>
<td>2-я опытная</td>
<td>3-я опытная</td>
<td>4-я опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Предубойная масса птицы</td>
<td>г</td>
<td>2658,76±10,56</td>
<td>2697,57±10,25</td>
<td>2711,67±10,87</td>
<td>2747,73±10,37*</td>
<td>2743,26±10,43*</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Печень</td>
<td>г</td>
<td>36,64±0,62</td>
<td>36,85±0,73</td>
<td>37,26±0,74</td>
<td>37,38±0,87</td>
<td>37,32±0,93</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>1,38</td>
<td>1,37</td>
<td>1,38</td>
<td>1,36</td>
<td>1,36</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Сердце</td>
<td>г</td>
<td>11,74±0,32</td>
<td>11,86±0,44</td>
<td>12,10±0,55</td>
<td>12,22±0,46</td>
<td>12,15±0,31</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>0,45</td>
<td>0,44</td>
<td>0,45</td>
<td>0,44</td>
<td>0,44</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Мышечный желудок</td>
<td>г</td>
<td>31,31±0,82</td>
<td>31,53±0,64</td>
<td>31,95±0,57</td>
<td>32,33±0,78</td>
<td>32,18±0,63</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>1,18</td>
<td>1,17</td>
<td>1,18</td>
<td>1,18</td>
<td>1,17</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Железистый желудок</td>
<td>г</td>
<td>10,10±0,33</td>
<td>10,37±0,34</td>
<td>10,74±0,45</td>
<td>11,03±0,42</td>
<td>10,98±0,37</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>0,38</td>
<td>0,38</td>
<td>0,40</td>
<td>0,40</td>
<td>0,40</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Селезенка</td>
<td>г</td>
<td>4,03±0,11</td>
<td>4,11±0,16</td>
<td>4,13±0,13</td>
<td>4,17±0,09</td>
<td>4,15±0,10</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>0,16</td>
<td>0,15</td>
<td>0,15</td>
<td>0,15</td>
<td>0,15</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Кишечник</td>
<td>г</td>
<td>117,76±1,13</td>
<td>118,65±1,10</td>
<td>119,34±1,17</td>
<td>120,79±1,20</td>
<td>120,16±1,15</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>4,43</td>
<td>4,39</td>
<td>4,40</td>
<td>4,40</td>
<td>4,38</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Легкие</td>
<td>г</td>
<td>10,54±0,36</td>
<td>10,65±0,32</td>
<td>10,75±0,26</td>
<td>11,12±0,28</td>
<td>10,97±0,33</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>0,40</td>
<td>0,39</td>
<td>0,40</td>
<td>0,40</td>
<td>0,40</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Почки</td>
<td>г</td>
<td>8,76±0,26</td>
<td>8,79±0,21</td>
<td>8,83±0,27</td>
<td>8,86±0,23</td>
<td>8,79±0,26</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>0,33</td>
<td>0,33</td>
<td>0,33</td>
<td>0,32</td>
<td>0,32</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Желчный пузырь</td>
<td>г</td>
<td>2,45±0,07</td>
<td>2,48±0,06</td>
<td>2,49±0,08</td>
<td>2,52±0,05</td>
<td>2,51±0,07</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>0,1</td>
<td>0,09</td>
<td>0,09</td>
<td>0,09</td>
<td>0,09</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты анализа развития (массы) представленных в таблице 81 внутренних органов показали, что в разрезе исследуемых групп статистически достоверной разницы не наблюдалось. Расположение органов было анатомически правильным, размер и консистенция их свидетельствовали об отсутствии той или иной патологии. Соотношение исследуемых органов в разрезе групп к массе тела птицы были почти идентичны.</p>
<p>Незначительная разница в массе органов между контрольной и опытными группами зависела от превосходившей в опытных группах массы тела и не связана с патологическими процессами. Так, например, масса печени в опытных группах была больше, чем в контрольной на 0,6; 1,7; 2,0 и 1,9 %, соответственно; масса сердца – на 1,0; 3,0; 4,1 и 3,5 % и т. д. Было изучено влияние пробиотика на развитие эндокринных желез у цыплят-бройлеров кросса Росс 308, данные которых представлены в таблице 82. Эндокринные железы продуцируют гормоны, которые из клеток железы попадают в кровяное русло. В свою очередь гормоны, разносятся с током крови по всему организму, тем самым регулируя все основные процессы жизнедеятельности (Фисинин В. И. [и др.], 2016).</p>
<p><strong>Таблица 82 </strong>– Развитие эндокринных желез цыплят-бройлеров, мг (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Щитовидная<br />
железа</td>
<td>183,56±1,45</td>
<td>184,21±1,49</td>
<td>184,35±1,57</td>
<td>184,43±1,55</td>
<td>184,41±1,41</td>
</tr>
<tr>
<td>Паращитовидная железа</td>
<td>15,23±0,45</td>
<td>15,36±0,41</td>
<td>15,58±0,47</td>
<td>15,87±0,35</td>
<td>15,75±0,44</td>
</tr>
<tr>
<td>Надпочечник</td>
<td>165,86±1,87</td>
<td>166,12±1,89</td>
<td>166,32±1,85</td>
<td>166,83±1,76</td>
<td>166,73±1,74</td>
</tr>
<tr>
<td>Фабрициева<br />
сумка</td>
<td>2,67±0,04</td>
<td>2,76±0,05</td>
<td>2,81±0,07</td>
<td>2,87±0,05</td>
<td>2,88±0,04</td>
</tr>
<tr>
<td>Поджелудочная железа</td>
<td>2,85±0,03</td>
<td>2,89±0,06</td>
<td>2,95±0,06</td>
<td>2,99±0,04</td>
<td>2,97±0,05</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты исследований показали, что применение пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс в опытных группах способствовало незначительному изменению массы изучаемых желез в сторону их увеличения по сравнению с контрольной группой, но без достоверной разницы. Так, масса щитовидной железы, отвечающая за выработку гормона тироксина, который повышает уровень окислительных процессов в тканях, обладает катаболическим действием, стимулируя процессы диссимиляции, ускоряет дифференцировку тканей и органов, способствует смене оперения сельскохозяйственной птицы, в 1-й и 2-й опытных группах была больше, чем в контрольной, на 0,4 %, а в 3-й и 4-й – на 0,5 %. Масса паращитовидной железы, принимающей косвенное участие в укреплении костного скелета благодаря вырабатываемому гормону, который участвует в регуляции обмена кальция, в 1-й опытной группе была больше, чем в контрольной на 0,8 %, во 2-й опытной группе – на 2,3 %, в 3-й опытной группе – на 4,2 %, а в 4-й группе – на 3,4 %. Большое значение в организме имеют надпочечники, масса которых в опытных группах также была незначительно больше, чем<br />
в контрольной, на 0,2; 0,3; 0,6 и 0,5 %, соответственно. При этом хотелось бы отметить, что корковая часть надпочечников принимает важное участие в приспособительных реакциях организма к факторам окружающей среды, а их гормоны (адреналин и норадреналин) оказывают влияние на обмен веществ в тканях печени и мышц, а также поддерживают водный обмен и кровообращение<br />
в почках. Масса фабрициевой сумки, являющаяся местом активного образования антителопродуцентов, в опытных группах незначительно превосходила изучаемый показатель в контрольной группе на 3,4; 5,2; 7,5 и 7,9 %. Поджелудочная железа, обладающая внешней и внутренней секрецией (вырабатывает панкреатический сок, участвующий в расщеплении белков, жиров, углеводов,<br />
а также за счет выработки гормонов (инсулин и глюкоген) регулирует углеводный обмен), в опытных группах была по массе больше, чем в контрольной на 1,4; 3,5; 4,9 и 4,2 %, соответственно.</p>
<p>Полученные данные свидетельствуют о том, что цыплята-бройлеры, в рационе которых применяли пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс, были меньше подвержены влиянию неблагоприятных факторов окружающей среды, а также<br />
у них лучше протекали процессы обмена веществ, усиление роста и развития птицы, повышалась мясная продуктивность.</p>
<p>Анализ химического состава мяса цыплят представлен в таблице 83.</p>
<p><strong>Таблица 83 </strong>– Химический состав мяса цыплят-бройлеров кросса Росс 308</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Грудные мышцы</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Влага, %</td>
<td>70,94±1,13</td>
<td>70,94±1,21</td>
<td>70,90±1,20</td>
<td>70,84±1,31</td>
<td>70,90±1,24</td>
</tr>
<tr>
<td>Белок, %</td>
<td>23,24±0,53</td>
<td>23,28±0,47</td>
<td>23,36±0,51</td>
<td>23,52±0,56</td>
<td>23,40±0,50</td>
</tr>
<tr>
<td>Жир, %</td>
<td>4,65±0,16</td>
<td>4,60±0,13</td>
<td>4,55±0,15</td>
<td>4,46±0,10</td>
<td>4,51±0,18</td>
</tr>
<tr>
<td>Зола, %</td>
<td>1,17±0,03</td>
<td>1,18±0,02</td>
<td>1,19±0,02</td>
<td>1,18±0,03</td>
<td>1,19±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Индекс<br />
качества мяса</td>
<td>0,20±0,01</td>
<td>0,20±0,01</td>
<td>0,19±0,01</td>
<td>0,18±0,01</td>
<td>0,19±0,01</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Ножные мышцы</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Влага, %</td>
<td>71,84±1,36</td>
<td>71,78±1,31</td>
<td>71,76±1,37</td>
<td>71,72±1,28</td>
<td>71,72±1,33</td>
</tr>
<tr>
<td>Белок, %</td>
<td>22,32±0,51</td>
<td>22,39±0,49</td>
<td>22,47±0,58</td>
<td>22,57±0,47</td>
<td>22,53±0,52</td>
</tr>
<tr>
<td>Жир, %</td>
<td>4,78±0,13</td>
<td>4,75±0,15</td>
<td>4,70±0,13</td>
<td>4,64±0,11</td>
<td>4,67±0,16</td>
</tr>
<tr>
<td>Зола, %</td>
<td>1,06±0,02</td>
<td>1,08±0,03</td>
<td>1,07±0,03</td>
<td>1,07±0,02</td>
<td>1,08±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Индекс<br />
качества мяса</td>
<td>0,21±0,01</td>
<td>0,21±0,01</td>
<td>0,20±0,01</td>
<td>0,20±0,01</td>
<td>0,20±0,01</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Анализ химического состава грудных мышц цыплят-бройлеров не показал статистически достоверных различий в разрезе контрольной и опытных групп, однако по отдельным показателям была выявлена положительная тенденция от применения биопрепарата.</p>
<p>Так, содержание белка в грудных мышцах птиц 1–4-й опытных групп было выше, чем в контрольной, на 0,04; 0,12; 0,26 и 0,16 %, а уровень жира ниже на 0,05; 0,10; 0,19 и 0,14 %. Индекс качества мяса в опытных группах превосходил изучаемый показатель в контрольной группе. При этом во 2-й опытной группе он составил 0,19 ед., в 3-й опытной группе – 0,18 ед., в 4-й опытной группе – 0,19 ед., а в контрольной – 0,20 ед. Химический состав ножных мышц опытных групп также обладал наилучшими показателями по сравнению с контрольной группой. Уровень белка в 1-й опытной группе составил 22,39 %, во 2-й группе – 22,47 %, в 3-й опытной – 22,57 % и в 4-й опытной – 22,53%, что на 0,07; 0,15; 0,25 и 0,23 % выше, чем в контрольной группе. Содержание жира было в опытных группах ниже на 0,03; 0,08; 0,14 и 0,11 %, соответственно. Индекс качества мяса во 2-й, 3-й и 4-й опытных группах был ниже, чем в контрольной, и составил 0,20 ед., против 0,21 ед. в контроле. Полученные результаты говорят о том, что качество мяса цыплят-бройлеров опытных групп было не только более биополноценным за счет высокого содержания белка, но и обладает наилучшими диетическими свойствами за счет низкого уровня жира в мышечной ткани.</p>
<p>Полноценность мясной продукции цыплят определяли по показателю аминокислотного состава мышц птиц (рисунок 33).</p>
<p><img width="641" height="421" class="wp-image-5227" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2603.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2603.png 641w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2603-300x197.png 300w" sizes="(max-width: 641px) 100vw, 641px" alt="word image 2603 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 33 </strong>– Содержание отдельных незаменимых аминокислот<br />
в мышцах птиц, мг/г</p>
<p>Положительная динамика от применения пробиотика была обнаружена при анализе аминокислотного скора мясной продукции цыплят-бройлеров. Установлено, что содержание лизина было выше в опытных группах по сравнению с контрольной на 0,9; 1,6; 2,9 и 2,2 %; триптофана – на 1,0; 2,1; 2,8 и 2,4 %; фенилаланина – на 0,3; 1,0; 1,7 и 1,3 %; лейцина – на 0,5; 1,0; 1,5 и 1,2 %; метионина – на 0,3; 1,1; 2,0 и 1,3 %, соответственно.</p>
<p>Изучение вкусовых качеств продукции бройлерного производства осуществлялась дегустационной оценкой варенного мяса подопытных птиц, а также бульона из него (таблица 84).</p>
<p><strong>Таблица 84 </strong>– Дегустационная оценка мяса цыплят-бройлеров и бульона, баллы</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Грудные мышцы</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,9±0,1</td>
<td>4,9±0,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Ножные мышцы</td>
<td>4,9±0,2</td>
<td>4,9±0,1</td>
<td>4,9±0,2</td>
<td>4,9±0,2</td>
<td>4,9±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Бульон</td>
<td>4,7±0,1</td>
<td>4,7±0,2</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,9±0,1</td>
<td>4,9±0,1</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Бульон, полученный при варке мяса исследуемых групп был наваристым, соломенного цвета, обладал приятным вкусом и ароматом, характерным для мяса с.-х. птицы. На поверхности бульона обнаруживались капли жира. Варенное мясо было приятным, ароматным, нежным и сочным. Посторонние запахи ‒ отсутствовали. По совокупности показателей дегустационная комиссия отдала предпочтение мясу и бульону от птиц, полученных из 3-й и 4-й опытных групп.</p>
<p>В качестве завершающей оценки качества мясной продукции птицеводства была проведена ветеринарно-санитарная экспертиза, которая подтвердила её безопасность для использования в пищу (таблица 85).</p>
<p><strong>Таблица 85 </strong>– Физико-химические и микробиологические показатели качества мяса цыплят-бройлеров</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Р-ция с сернокислой медью</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Р-ция с формалином</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td>Р-ция на пероксидазу</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td>Количество ЛЖК, мг КОН/100 г</td>
<td>1,54±0,03</td>
<td>1,51±0,03</td>
<td>1,50±0,02</td>
<td>1,45±0,02</td>
<td>1,47±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td>Количество микробных<br />
клеток в одном поле зрения микроскопа:</td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>– с поверхности тушки</td>
<td>3,56±0,09</td>
<td>3,48±0,11</td>
<td>3,42±0,10</td>
<td>3,35±0,10</td>
<td>3,38±0,09</td>
</tr>
<tr>
<td>– с глубоких слоев</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
<td>–</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">рН мяса, ед.</td>
</tr>
<tr>
<td>Первые сутки</td>
<td>6,87±0,20</td>
<td>6,86±0,16</td>
<td>6,84±0,15</td>
<td>6,89±0,19</td>
<td>6,88±0,19</td>
</tr>
<tr>
<td>Вторые сутки</td>
<td>6,45±0,21</td>
<td>6,40±0,22</td>
<td>6,44±0,22</td>
<td>6,42±0,24</td>
<td>6,41±0,22</td>
</tr>
<tr>
<td>Третьи сутки</td>
<td>6,08±0,17</td>
<td>6,05±0,16</td>
<td>6,02±0,18</td>
<td>6,01±0,18</td>
<td>6,01±0,17</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Из таблицы 85 видно, что мясо птицы, полученное от изучаемых групп, было свежим и без признаков патологии, так как реакция с сернокислой медью и формалином была отрицательной, а на пероксидазу – положительной. Количество летучих жирных кислот и микробных клеток не выходило за пределы требований нормативной документации. Значение кислотности мяса в течение трех суток во всех группах снижалось до показателей, характерных для свежего и здорового мяса.</p>
<p>Таким образом, применение в составе рациона цыплят-бройлеров кросса Росс 308 пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс способствует улучшению качественных показателей мясной продукции птицеводства, а также повышению сохранности, росту птицы и иммунологического статуса организма. Наилучшие результаты получены в 3-й опытной группе с дозировкой пробиотика равной 0,75 мл/гол.</p>
<p><em>Экономическая эффективность использования пробиотика.</em> Результаты экономической эффективности использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на цыплятах-бройлерах кросса Росс 308 представлены в таблице 86.</p>
<p>В результате проведенного предварительного анализа экономической эффективности применения в рационе цыплят-бройлеров кросса Росс 308 пробиотической добавки Галлобакт-Ф-Плюс выявлено, что прибыль в 1–4-й опытных группах составила 3 201,96; 3 290,45; 3 615,84 и 3 252,26 руб., против 2 898,29 руб. в контрольной группе, что выше на 303,67; 392,16; 717,55<br />
и 353,97 руб., соответственно. В целом, наилучшие результаты были получены в 3-й опытной группе, в которой экономический эффект превышал контрольную группу на 24,76 %.</p>
<p>Таким образом, экономически целесообразно проводить производственную апробацию пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на цыплятах-бройлерах кросса Росс 308 в дозе, составляющей 0,75 мл/гол.</p>
<p><a id="post-5185-_Toc25459438"></a><em>Влияние пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на цыплят-бройлеров<br />
кросса Кобб 500</em></p>
<p>Для изучения влияния пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на сохранность, продуктивность, основные показатели обмена веществ, а также качество продукции от цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 был проведен научно-хозяй­ственный опыт, в котором методом групп-аналогов было сформировано пять групп птиц по 60<em> </em>гол. в каждой: контрольная группа – птица получала стандартный рацион, рекомендованный ВНИТИП, и имела свободный доступ к воде; первая опытная группа – подопытная птица получала стандартный рацион,<br />
а также дополнительно в воду вводился пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс в дозе 0,25 мл/гол.; вторая опытная группа – Галлобакт-Ф-Плюс вводили в дозе 0,5 мл/гол.; третья опытная группа – объекты исследований получали стандартный рацион, рекомендованный ВНИТИП, а также в воду добавляли пробиотик в дозе 0,75 мл/гол.; четвертая опытная группа – объекты исследований получали стандартный рацион, а в воду добавляли пробиотик в дозе 1,0 мл/гол. Опыт продолжался 42 дня.</p>
<p><em>Рост и развитие цыплят-бройлеров. </em>Результаты хозяйственных показателей цыплят-бройлеров представлены в таблице 87 и на рисунке 34.</p>
<p><strong>Таблица 87 </strong>– Изучаемые хозяйственные показатели цыплят-бройлеров<br />
кросса Кобб 500 (n = 60)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Сохранность, %</td>
<td>95,0</td>
<td>98,3</td>
<td>100</td>
<td>100</td>
<td>100</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Прирост живой массы за период выращивания (042 сут)</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Одной головы<br />
в среднем, г</td>
<td>2572,10</td>
<td>2604,24</td>
<td>2622,12</td>
<td>2653,47</td>
<td>2645,50</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Расход комбикорма за период выращивания (042 сут)</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1-й головы, г</td>
<td>4587,81</td>
<td>4608,48</td>
<td>4625,78</td>
<td>4628,59</td>
<td>4627,93</td>
</tr>
<tr>
<td>Конверсия, кг</td>
<td>1,78</td>
<td>1,77</td>
<td>1,76</td>
<td>1,74</td>
<td>1,75</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (Р &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>При изучении хозяйственных показателей цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 были получены аналогичные результаты как на кроссе Росс 308. Применение пробиотика в зависимости от дозы способствовало равномерному превосходству живой массы птицы в опытных группах по сравнению с контрольной. Незначительные изменения по живой массе цыплят-бройлеров были зафиксированы уже на 7-е сутки ее взвешивания, где в 1–4-й опытных группах изучаемый показатель превысила контрольную группу на 0,7; 0,9; 2,0 и 1,3 %, соответственно, но разница была не достоверна.</p>
<p><strong>Таблица 86 </strong>– Экономическая эффективность использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="6">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я опытная</td>
<td colspan="2">2-я опытная</td>
<td>3-я опытная</td>
<td>4-я опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в начале опыта, гол.</td>
<td>60</td>
<td>60</td>
<td colspan="2">60</td>
<td>60</td>
<td>60</td>
</tr>
<tr>
<td>Сохранность, %</td>
<td>93,3</td>
<td>96,6</td>
<td colspan="2">96,6</td>
<td>100</td>
<td>100</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в конце опыта, гол.</td>
<td>56</td>
<td>58</td>
<td colspan="2">58</td>
<td>60</td>
<td>60</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Масса тушки на реализацию</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошенной тушки, г</td>
<td>1813,27±10,56</td>
<td>1853,23±10,87</td>
<td colspan="2">1873,76±11,04</td>
<td>1912,42±11,35*</td>
<td>1903,82±11,42*</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошенной тушки всего, кг</td>
<td>101,54</td>
<td>107,49</td>
<td colspan="2">108,68</td>
<td>114,75</td>
<td>114,23</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Затраты комбикорма за период выращивания</em></td>
</tr>
<tr>
<td>На голову, г</td>
<td>4798,74</td>
<td>4814,25</td>
<td colspan="2">4828,76</td>
<td>4836,41</td>
<td>4843,68</td>
</tr>
<tr>
<td>На все поголовье, кг</td>
<td>268,73</td>
<td>279,23</td>
<td colspan="2">280,07</td>
<td>290,18</td>
<td>290,62</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Затраты пробиотика</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Всего, мл</td>
<td>–</td>
<td>130,5</td>
<td colspan="2">261,0</td>
<td>405,0</td>
<td>540,0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Экономическая эффективность</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 кг комбикорма, руб.</td>
<td colspan="6">27</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма<br />
всего, руб.</td>
<td>7 255,71</td>
<td>7 539,21</td>
<td colspan="2">7 561,89</td>
<td>7 834,86</td>
<td>7 846,74</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 л пробиотика, руб.</td>
<td colspan="3">–</td>
<td colspan="3">60</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость пробиотика всего, руб.</td>
<td>–</td>
<td>7,83</td>
<td colspan="2">15,66</td>
<td>24,30</td>
<td>324,00</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма<br />
и пробиотика, руб.</td>
<td>7 255,71</td>
<td>7 547,04</td>
<td colspan="2">7 577,55</td>
<td>7 859,16</td>
<td>8 170,74</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена реализации 1 кг мяса птицы, руб.</td>
<td colspan="6">100,0</td>
</tr>
<tr>
<td>Выручка от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>10 154,00</td>
<td>10 749,00</td>
<td colspan="2">10 868,00</td>
<td>11 475,00</td>
<td>11 423,00</td>
</tr>
<tr>
<td>Прибыль от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>2 898,29</td>
<td>3 201,96</td>
<td colspan="2">3 290,45</td>
<td>3 615,84</td>
<td>3 252,26</td>
</tr>
<tr>
<td>Экономический эффект от использования пробиотика к контролю,</p>
<p>руб.</p>
<p>%</td>
<td>–</p>
<p>–</td>
<td>303,67</p>
<p>10,48</td>
<td colspan="2">392,16</p>
<p>13,53</td>
<td>717,55</p>
<p>24,76</td>
<td>353,97</p>
<p>12,21</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><img width="919" height="540" class="wp-image-5228" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2604.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2604.png 919w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2604-300x176.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2604-768x451.png 768w" sizes="(max-width: 919px) 100vw, 919px" alt="word image 2604 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 34 </strong>‒ Динамика живой массы, г</p>
<p>Статистически достоверная разница по массе цыплят-бройлеров была выявлена на 35-й день взвешивания в 3-й и 4-й опытных группах по сравнению с контрольной, в которых данный показатель был выше на 57,40<br />
и 49,14 г, или 2,8 и 2,4 % (Р &lt; 0,05). На 42-е сутки взвешивания птицы живая масса во 2–4-й опытных группах превысила изучаемый показатель в контрольной на 1,9; 3,1 и 2,8 % при достоверной разнице (Р &lt; 0,05).</p>
<p>Жизнеспособность птиц оценивали по показателю сохранности, который<br />
в контрольной группе составил 95,0 %, в то время как в 1-й опытной группе он был 98,3 %, а во 2-й, 3-й и 4-й опытных группах – 100,0 %.</p>
<p>Анализируя прирост массы цыплят-бройлеров за весь период исследований установлено, что данный показатель в опытных группах превысил контроль на 32,14 г (1,2 %), 50,02 г (1,9 %), 81,37 г (3,1 %) и 73,40 г (2,9 %), соответственно.</p>
<p>Показатель конверсии корма в опытных группах был ниже, чем в контрольной и составил в 1-й опытной – 1,77 кг, во 2-й опытной – 1,76 кг, в 3-й<br />
и 4-й опытных – 1,74 и 1,75 кг, соответственно. Против 1,78 кг в контрольной группе.</p>
<p>Таким образом, применение пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс положительно сказалось на хозяйственных показателях цыплят-бройлеров кросса Кобб 500, особенно при дозе биопрепарата 0,75 мл/гол.</p>
<p><em>Морфологические и биохимические показатели крови. </em>Результаты морфологических и биохимических показателей крови цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 представлены в таблице 88.</p>
<p>Из таблицы 88 видно, что применение пробиотика не имело существенного влияния на морфо-биохимический статус крови цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 на 21-е сутки исследования. Все показатели в подопытных группах находились на уровне физиологической нормы. Иная картина была установлена при анализе крови на 42-е сутки, где была зафиксирована положительная тенденция по изучаемым показателям в опытных группах. Так, количество эритроцитов во 2-й, 3-й и 4-й опытных группах превысило аналогичный показатель в контрольной на 4,5 и 8,2 % при статистически достоверной разнице (Р &lt; 0,05), при этом в 1-й опытной группе также было превосходство на 1,5 %, но без достоверной разницы.</p>
<p><strong>Таблица 88 </strong>– Морфо-биохимический статус крови цыплят-бройлеров<br />
кросса Кобб 500</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>21-е сутки</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л</td>
<td>2,58±0,03</td>
<td>2,61±0,04</td>
<td>2,62±0,04</td>
<td>2,66±0,04</td>
<td>2,65±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Гемоглобин, г/л</td>
<td>84,23±1,41</td>
<td>84,78±1,50</td>
<td>84,68±1,54</td>
<td>85,05±1,49</td>
<td>84,86±1,55</td>
</tr>
<tr>
<td>Тромбоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>63,56±0,81</td>
<td>63,78±0,78</td>
<td>63,95±0,77</td>
<td>64,08±0,74</td>
<td>63,94±0,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>24,65±0,43</td>
<td>24,49±0,41</td>
<td>24,54±0,36</td>
<td>24,58±0,45</td>
<td>24,61±0,38</td>
</tr>
<tr>
<td>Общий белок, г/л</td>
<td>37,56±0,51</td>
<td>37,71±0,57</td>
<td>38,32±0,53</td>
<td>38,45±0,49</td>
<td>38,38±0,46</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>альбумин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>15,25±0,21</td>
<td>15,32±0,17</td>
<td>15,36±0,19</td>
<td>15,38±0,17</td>
<td>15,35±0,21</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>глобулин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>22,31±0,32</td>
<td>22,39±0,29</td>
<td>22,96±0,35</td>
<td>23,07±0,31</td>
<td>23,03±0,28</td>
</tr>
<tr>
<td>А/Г коэффициент</td>
<td>0,68±0,02</td>
<td>0,68±0,03</td>
<td>0,67±0,02</td>
<td>0,67±0,01</td>
<td>0,67±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td>Холестерин, мМ/л</td>
<td>3,43±0,04</td>
<td>3,47±0,03</td>
<td>3,41±0,04</td>
<td>3,40±0,05</td>
<td>3,41±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>АСТ, Ед/л</td>
<td>205,58±2,63</td>
<td>207,48±2,53</td>
<td>206,38±2,62</td>
<td>205,39±2,57</td>
<td>206,87±2,55</td>
</tr>
<tr>
<td>АЛТ, Ед/л</td>
<td>23,78±0,29</td>
<td>23,58±0,24</td>
<td>23,52±0,25</td>
<td>23,61±0,23</td>
<td>23,61±0,27</td>
</tr>
<tr>
<td>Кальций, мМ/л</td>
<td>9,41±0,12</td>
<td>9,43±0,12</td>
<td>9,42±0,10</td>
<td>9,48±0,09</td>
<td>9,46±0,11</td>
</tr>
<tr>
<td>Фосфор, мМ/л</td>
<td>4,43±0,06</td>
<td>4,47±0,07</td>
<td>4,48±0,05</td>
<td>4,49±0,08</td>
<td>4,45±0,09</td>
</tr>
<tr>
<td>БАСК, %</td>
<td>38,7±1,74</td>
<td>38,8±1,81</td>
<td>39,3±1,77</td>
<td>39,5±1,69</td>
<td>39,2±1,72</td>
</tr>
<tr>
<td>ЛАСК, %</td>
<td>33,5 ±1,31</td>
<td>33,6±1,21</td>
<td>33,8±1,25</td>
<td>34,1±1,28</td>
<td>33,8±1,24</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>42-е сутки</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л</td>
<td>2,69±0,01</td>
<td>2,73±0,03</td>
<td>2,81±0,02*</td>
<td>2,91±0,03*</td>
<td>2,91±0,02*</td>
</tr>
<tr>
<td>Гемоглобин, г/л</td>
<td>85,41±0,81</td>
<td>86,13±0,79</td>
<td>87,54±0,93</td>
<td>89,37±0,72*</td>
<td>89,13±0,77*</td>
</tr>
<tr>
<td>Тромбоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>65,02±0,51</td>
<td>66,41±0,60</td>
<td>67,44±0,54</td>
<td>68,73±0,55*</td>
<td>68,68±0,50*</td>
</tr>
<tr>
<td>Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л</td>
<td>25,70±0,42</td>
<td>25,16±0,39</td>
<td>26,02±0,38</td>
<td>26,21±0,40</td>
<td>26,08±0,38</td>
</tr>
<tr>
<td>Общий белок, г/л</td>
<td>38,31±0,28</td>
<td>39,02±0,31</td>
<td>39,57±0,27</td>
<td>40,71±0,23*</td>
<td>40,39±0,23*</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>альбумин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>15,21±0,20</td>
<td>15,54±0,21</td>
<td>16,11±0,20</td>
<td>17,27±0,20*</td>
<td>17,22±0,19*</td>
</tr>
<tr>
<td>
<ul>
<li>глобулин, г/л</li>
</ul>
</td>
<td>23,10±0,32</td>
<td>23,48±0,31</td>
<td>23,46±0,27</td>
<td>23,44±0,29</td>
<td>23,17±0,29</td>
</tr>
<tr>
<td>А/Г коэффициент</td>
<td>0,65±0,02</td>
<td>0,66±0,01</td>
<td>0,68±0,03</td>
<td>0,73±0,03</td>
<td>0,74±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Холестерин, мМ/л</td>
<td>3,69±0,02</td>
<td>3,65±0,03</td>
<td>3,58±0,04</td>
<td>3,51±0,02*</td>
<td>3,52±0,01*</td>
</tr>
<tr>
<td>АСТ, Ед/л</td>
<td>225,31±2,73</td>
<td>224,74±2,69</td>
<td>225,11±2,63</td>
<td>223,74±2,71</td>
<td>223,92±2,70</td>
</tr>
<tr>
<td>АЛТ, Ед/л</td>
<td>24,18±0,32</td>
<td>23,89±0,41</td>
<td>24,03±0,35</td>
<td>29,91±0,27</td>
<td>24,01±0,33</td>
</tr>
<tr>
<td>Кальций, мМ/л</td>
<td>9,37±0,10</td>
<td>9,41±0,11</td>
<td>9,57±0,09</td>
<td>9,63±0,08</td>
<td>9,61±0,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Фосфор, мМ/л</td>
<td>4,24±0,04</td>
<td>4,28±0,05</td>
<td>4,33±0,04</td>
<td>4,39±0,03</td>
<td>4,40±0,06</td>
</tr>
<tr>
<td>БАСК, %</td>
<td>42,04±0,31</td>
<td>43,02±0,27</td>
<td>43,71±0,28</td>
<td>44,87±0,31*</td>
<td>44,72±0,25*</td>
</tr>
<tr>
<td>ЛАСК, %</td>
<td>33,11±0,21</td>
<td>33,73±0,19</td>
<td>34,22±0,24</td>
<td>35,72±0,22*</td>
<td>35,51±0,21*</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (Р &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Статистически достоверная разница проявилась при анализе гемоглобина, уровень которого в 3-й и 4-й опытных группах был выше, чем в контрольной на 4,6 и 4,4 %; тромбоцитов больше на 5,7 и 5,6%; общего белка – на 6,3 и 5,4 %; альбуминов – на 13,5 и 13,2 %; холестерина ниже на 4,9 и 4,6 %; бактерицидная активность выше на 2,83 и 2,68%; лизоцимная активность – на 2,61 и 2,4 %, соответственно (Р &lt; 0,05). Во всех опытных группах было выявлено превосходство по сравнению с контрольной группой в альбумино-глобулиновом коэффициенте, значение которого составило 0,66; 0,68; 0,73 и 0,74 ед., против 0,65 ед. в контроле. Была выявлена тенденция в превосходстве по отношению к контрольной группе содержания в сыворотки крови цыплят-бройлеров опытных групп кальция и фосфора, соответственно, на 0,4 и 0,9 % (1-я опытная группа); 2,1 и 2,1 % (2-я опытная группа); 2,8 и 3,5 % (3-я опытная группа); 2,6 и 3,8 % (4-я опытная группа).</p>
<p>Таким образом, пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс идентично цыплятам-бройлерам кросса Росс 308 оказывает на кросс Кобб 500 положительное влияние через стимуляцию обменных процессов, с одновременным усилением иммунного потенциала птицы, что и обеспечивает их высокую сохранность<br />
и продуктивность.</p>
<p><em>Влияние пробиотика на пищеварение.</em> Данное влияние оценивали по показателю переваримости компонентов кормосмеси, для чего проводили балансовый опыт в конце выращивания птицы, результаты которого продемонстрированы на рисунке 35.</p>
<p>Из данных рисунка 35 установлено, что применение в составе рациона птицы опытных групп пробиотика оказала наибольший эффект по сравнению с контрольной группой, что выразилось в статистически достоверном повышении<br />
в 3-й и 4-й опытных группах переваримости сырого протеина на 5,08 и 4,76 %,<br />
а также сырой клетчатки – на 2,37 и 2,04 % (Р &lt; 0,05). Была выявлена положительная тенденция в переваримости сырого жира, которая превысила в опытных группах данный показатель контрольной, на 0,42; 1,14; 2,34 и 1,87 %, соответственно. Показатель переваримости БЭВ в опытных группах также был выше, чем в контрольной, и составил в 1-й опытной группе – 52,16 %, во 2-й опытной 53,02 %, в 3-й опытной 54,38 % и в 4-й опытной 54,24%, против 51,37 % в группе контроля.</p>
<p><img width="639" height="487" class="wp-image-5229" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2605.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2605.png 639w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2605-300x229.png 300w" sizes="(max-width: 639px) 100vw, 639px" alt="word image 2605 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 35 </strong>– Переваримость питательных веществ комбикорма<br />
цыплятами-бройлерами кросса Кобб 500, %</p>
<p>Таким образом, применение в составе рациона цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс поспособствовало лучшему перевариванию веществ комбикорма, что обеспечило повышение продуктивности птицы опытных групп.</p>
<p><em>Микробиоценноз химуса кишечника.</em> Результаты микробиологических исследований слепых отростков кишечника цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 после использования в их рационе пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс представлены в таблице 89.</p>
<p>Использование пробиотика положительно сказалось на микробном балансе кишечника цыплят-бройлеров всех опытных групп. Так, уровень молочнокислых микроорганизмов и бифидобактерий был статистически достоверно выше<br />
в 1-й опытной группе по сравнению с контрольной в 1,1 и 1,0 раза; во 2-й опытной группе – в 1,3 и 1,1 раза; в 3-й опытной – 1,5 и 1,3 раза; в 4-й опытной – в 1,4 и 1,2 раза (P &lt; 0,05). Также в опытных группах достоверно снижался титр эшерихий, энтерококков, стафилококков и стрептококков. В изучаемых опытных группах и контрольной не было зарегистрировано в химусе псевдомонад и клостридий. В 3-й и 4-й опытных группах отсутствовали представители энтерококков.</p>
<p><strong>Таблица 89 </strong>– Баланс полезной и условно-патогенной микрофлоры химуса<br />
слепых отростков цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатели</td>
<td colspan="5">Группы</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Молочнокислые<br />
бактерии, 10<sup>8 </sup>КОЕ/г</td>
<td>2,80,04</td>
<td>3,1­0,03*</td>
<td>3,70,05*</td>
<td>4,20,04*</td>
<td>4,10,06*</td>
</tr>
<tr>
<td>Бифидобактерии, 10<sup>8 </sup>КОЕ/г</td>
<td>2,90,02</td>
<td>3,00,03*</td>
<td>3,20,04*</td>
<td>3,80,03*</td>
<td>3,70,04*</td>
</tr>
<tr>
<td>Эшерихии, 10<sup>3 </sup>КОЕ/г</td>
<td>5,30,06</td>
<td>5,00,05*</td>
<td>4,30,05*</td>
<td>3,30,03*</td>
<td>3,50,04*</td>
</tr>
<tr>
<td>Энтерококки, 10<sup>2</sup> КОЕ/г</td>
<td>4,90,05</td>
<td>3,30,03*</td>
<td>4,80,02*</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
</tr>
<tr>
<td>Псевдомонады, 10 КОЕ/г</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
</tr>
<tr>
<td>Стафилококки, 10<sup>2</sup> КОЕ/г</td>
<td>5,70,05</td>
<td>5,10,04*</td>
<td>4,70,03*</td>
<td>3,80,04*</td>
<td>3,80,04*</td>
</tr>
<tr>
<td>Стрептококки, 10<sup>2</sup> КОЕ/г</td>
<td>6,10,06</td>
<td>5,60,04*</td>
<td>5,10,04*</td>
<td>4,50,03*</td>
<td>4,60,05*</td>
</tr>
<tr>
<td>Клостридии, 10 КОЕ/г</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><em>Мясная продуктивность, развитие внутренних органов и качество мяса птиц. </em>Результаты убойного выхода цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 представлены в таблице 90.</p>
<p>Из таблицы 90 видно, что за счет статистически достоверного повышения живой массы тела цыплят-бройлеров во 2–4-й опытных группах наблюдалось достоверная разница по массе потрошенной тушки, которая превысила данное значение в контрольной группе на 2,7; 4,8 и 3,9 % (P &lt; 0,05). Убойный выход<br />
в опытных группах был выше, чем в контрольной, на 0,2; 0,7; 1,4 и 1,0 %, соответственно.</p>
<p>Проводилось изучение влияния пробиотика на соотношение мышечной, кожной и костной тканей составных частей тела тушки (грудь, бедро, голень). Результаты разделки грудной части представлены в таблице 91.</p>
<p><strong>Таблица 90 </strong>– Убойные показатели цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я опытная</td>
<td>2-я опытная</td>
<td>3-я опытная</td>
<td>4-я опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Предубойная масса птицы, г</td>
<td>2620,727,12</td>
<td>2649,116,73</td>
<td>2665,516,81*</td>
<td>2693,326,80*</td>
<td>2685,286,83*</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошеной тушки, г</td>
<td>1810,927,54</td>
<td>1835,837,31</td>
<td>1860,537,45*</td>
<td>1898,797,42*</td>
<td>1882,387,37*</td>
</tr>
<tr>
<td>Убойный выход, %</td>
<td>69,1</td>
<td>69,3</td>
<td>69,8</td>
<td>70,5</td>
<td>70,1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 91 </strong>– Морфологический состав грудки цыплят-бройлеров (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td rowspan="2">Ед. изм.</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я опытная</td>
<td>2-я опытная</td>
<td>3-я опытная</td>
<td>4-я опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошеной тушки</td>
<td>г</td>
<td>1810,927,54</td>
<td>1835,837,31</td>
<td>1860,537,45*</td>
<td>1898,797,42*</td>
<td>1882,387,37*</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса грудных мышц</td>
<td>г</td>
<td>398,403,44</td>
<td>405,713,72</td>
<td>416,764,02</td>
<td>431,034,07*</td>
<td>425,403,77*</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>22,0</td>
<td>22,1</td>
<td>22,4</td>
<td>22,7</td>
<td>22,6</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса кожи</td>
<td>г</td>
<td>56,1410,92</td>
<td>55,070,94</td>
<td>59,540,95</td>
<td>58,860,98</td>
<td>58,351,10</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>3,1</td>
<td>3,0</td>
<td>3,2</td>
<td>3,1</td>
<td>3,1</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса костей</td>
<td>г</td>
<td>68,810,9</td>
<td>71,601,01</td>
<td>72,560,98</td>
<td>74,051,09</td>
<td>73,411,07</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>3,8</td>
<td>3,9</td>
<td>3,9</td>
<td>3,9</td>
<td>3,9</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса всех тканей</td>
<td>г</td>
<td>523,355,63</td>
<td>533,185,21</td>
<td>548,865,42</td>
<td>563,945,70*</td>
<td>557,165,54*</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>28,9</td>
<td>29,0</td>
<td>29,5</td>
<td>29,7</td>
<td>29,6</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Масса грудных мышц в 1-й и 2-й опытных группах имела незначительную тенденцию к увеличению по сравнению с контрольной на 7,31 и 18,36 г. В 3-й<br />
и 4-й опытных по данному показателю наблюдалась статистически достоверное превосходство по сравнению с контрольной группой на 8,2 и 6,8 % (P &lt; 0,05). На долю грудных мышц по отношению к потрошённой тушке в контрольной группе приходится 22,0 %, в то время как в 1-й опытной – 22,1 %, во 2-й опытной – 22,4 %, в 3-й опытной –22,7%, а в 4-й опытной – 22,6 %. Масса кожи грудки 2–4-й опытных групп незначительно превышала данный показатель<br />
в контрольной группе, но без достоверной разницы. В целом, мышечная, кожная и костная ткани опытных групп были больше по сравнению с контрольной группой, но статистически достоверные различия наблюдались в 3-й и 4-й опытных группах, разница составила 40,62 и 33,84 г, или 7,8 и 6,5 % (P &lt; 0,05).</p>
<p>Результаты морфологического состава бедра цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 представлены в таблице 92.</p>
<p>Изучение бедренной части тушки цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 показали, что масса бедренных мышц в 1–4-й опытных группах составила 223,97; 228,85; 235,45 и 231,53 г, что на 1,4; 3,6; 6,6 и 4,8 % выше, чем в контрольной группе. Выход мяса в разрезе групп был почти равнозначным и составил 12,2; 12,3; 12,4 и 12,3 % в опытных группах, против 12,2 % в контрольной. По массе всех тканей бедренной части установлено, что только в 3-й опытной группе было зафиксировано статистически достоверное повышение показателя по сравнению с контрольной группой на 7,4 % (P &lt; 0,05), в остальных опытных группах наблюдалась тенденция к повышению изучаемого показателя.</p>
<p>Морфологический состав голени цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 представлен в таблице 93.</p>
<p>Масса мышц голени в опытных группах, аналогично бедренным, превышала полученные значения в контрольной группе на 1,4; 4,0; 6,1 и 5,2%, соответственно. По сумме всех составляющих частей голени наибольшее значение было выявлено в 3-й опытной группе, которое составило 267,72 г, затем в 4-й опытной – 265,42 г, во 2-й опытной – 262,34 г и в 1-й опытной – 255,18 г против 251,72 г в контрольной группе.</p>
<p><strong>Таблица 92 </strong>– Морфологический состав бедра цыплят-бройлеров (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td rowspan="2">Ед. изм.</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я опытная</td>
<td>2-я опытная</td>
<td>3-я опытная</td>
<td>4-я опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошеной тушки</td>
<td>г</td>
<td>1810,92±7,54</td>
<td>1835,83±7,31</td>
<td>1860,53±7,45*</td>
<td>1898,79±7,42*</td>
<td>1882,38±7,37</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса бедренных мышц</td>
<td>г</td>
<td>220,93±2,51</td>
<td>223,97±2,72</td>
<td>228,85±2,67</td>
<td>235,45±2,69</td>
<td>231,53±2,62</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>12,2</td>
<td>12,2</td>
<td>12,3</td>
<td>12,4</td>
<td>12,3</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса кожи</td>
<td>г</td>
<td>38,03±0,61</td>
<td>40,39±0,63</td>
<td>40,93±0,65</td>
<td>43,67±0,66*</td>
<td>43,29±0,65*</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>2,1</td>
<td>2,2</td>
<td>2,2</td>
<td>2,3</td>
<td>2,3</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса костей</td>
<td>г</td>
<td>43,46±0,61</td>
<td>44,49±0,51</td>
<td>44,65±0,57</td>
<td>45,57±0,60</td>
<td>45,17±0,58</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>2,4</td>
<td>2,4</td>
<td>2,4</td>
<td>2,4</td>
<td>2,4</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса всех тканей</td>
<td>г</td>
<td>302,43±3,43</td>
<td>308,85±3,52</td>
<td>314,43±3,44</td>
<td>324,69±3,43*</td>
<td>319,99±3,48</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>16,7</td>
<td>16,8</td>
<td>16,9</td>
<td>17,1</td>
<td>17,0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Таблица 93 </strong>– Морфологический состав голени цыплят-бройлеров (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td rowspan="2">Ед. изм.</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я опытная</td>
<td>2-я опытная</td>
<td>3-я опытная</td>
<td>4-я опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошеной тушки</td>
<td>г</td>
<td>1810,92±7,54</td>
<td>1835,83±7,31</td>
<td>1860,53±7,45*</td>
<td>1898,79±7,42*</td>
<td>1882,38±7,37</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса мышц голени</td>
<td>г</td>
<td>155,74±2,77</td>
<td>157,88±2,71</td>
<td>161,87±2,82</td>
<td>165,19±2,80</td>
<td>163,77±2,79</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>8,6</td>
<td>8,6</td>
<td>8,7</td>
<td>8,7</td>
<td>8,7</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса кожи</td>
<td>г</td>
<td>38,03±0,62</td>
<td>38,55±0,69</td>
<td>40,93±0,72</td>
<td>41,77±0,66</td>
<td>41,41±0,65</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>2,1</td>
<td>2,1</td>
<td>2,2</td>
<td>2,2</td>
<td>2,2</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса костей</td>
<td>г</td>
<td>57,95±0,74</td>
<td>58,75±0,71</td>
<td>59,54±0,77</td>
<td>60,76±0,78</td>
<td>60,24±0,76</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>3,2</td>
<td>3,2</td>
<td>3,2</td>
<td>3,2</td>
<td>3,2</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Масса всех тканей</td>
<td>г</td>
<td>251,72±3,31</td>
<td>255,18±3,21</td>
<td>262,34±3,34</td>
<td>267,72±3,37</td>
<td>265,42±3,29</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>13,9</td>
<td>13,9</td>
<td>14,1</td>
<td>14,1</td>
<td>14,1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты развития внутренних органов цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 представлены в таблице 94.</p>
<p>Несмотря на то, что соотношение органов в разрезе изучаемых подопытных групп к массе потрошенной тушки были почти идентичны, их масса имела незначительную разницу. Например, масса печени в 1–4-й опытных группах была больше, чем в контрольной группе на 0,14; 0,34; 0,85 и 0,67 г; сердце – на 0,33; 0,62; 0,86 и 0,85 г, соответственно. Данные различия не имели достоверной разницы, патологии не выявлено.</p>
<p>Результаты влияния пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на развитие желез внутренней секреции у цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 представлены в таблице 95.</p>
<p><strong>Таблица 95 </strong>– Развитие эндокринных желез цыплят-бройлеров, мг (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Щитовидная<br />
железа</td>
<td>181,18±1,83</td>
<td>181,27±1,74</td>
<td>181,54±1,81</td>
<td>181,71±1,77</td>
<td>181,72±1,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Паращитовидная железа</td>
<td>14,52±0,63</td>
<td>14,74±0,61</td>
<td>14,84±0,57</td>
<td>14,91±0,60</td>
<td>14,87±0,56</td>
</tr>
<tr>
<td>Надпочечник</td>
<td>163,74±2,11</td>
<td>163,92,=2,02</td>
<td>164,12±1,98</td>
<td>164,20±1,99</td>
<td>164,02±2,04</td>
</tr>
<tr>
<td>Фабрициева<br />
сумка</td>
<td>2,61±0,05</td>
<td>2,67±0,03</td>
<td>2,72±0,05</td>
<td>2,78±0,06</td>
<td>2,77±0,08</td>
</tr>
<tr>
<td>Поджелудочная железа</td>
<td>2,73±0,05</td>
<td>2,79±0,04</td>
<td>2,82±0,06</td>
<td>2,91±0,03</td>
<td>2,88±0,06</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Использование в рационе цыплят-бройлеров опытных групп пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс не имело достоверного влияния на массу эндокринных желез, однако была выявлена незначительная тенденция к повышению изучаемых показателей. Так, масса щитовидной железы, паращитовидной, надпочечника, фабрициевой сумки и поджелудочной железы в 1-й опытной группе были выше, чем в контрольной, на 0,04; 1,5; 0,1; 2,3 и 2,2 %; во 2-й опытной – на 0,2; 2,2; 0,2; 4,2 и 3,3 %; в 3-й опытной – на 0,3; 2,7; 0,3; 6,5 и 3,3 %; в 4-й опытной – на 0,3; 2,4; 0,2; 6,1 и 5,5 %.</p>
<p><strong>Таблица 94 </strong>– Развитие внутренних органов цыплят-бройлеров (n = 10)</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td rowspan="2">Ед. изм.</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я опытная</td>
<td>2-я опытная</td>
<td>3-я опытная</td>
<td>4-я опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Предубойная масса птицы</td>
<td>г</td>
<td>2620,72±7,12</td>
<td>2649,11±6,73</td>
<td>2665,51±6,81*</td>
<td>2693,32±6,80*</td>
<td>2685,28±6,83*</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Печень</td>
<td>г</td>
<td>35,17±0,54</td>
<td>35,31±0,61</td>
<td>35,51±0,59</td>
<td>36,02±0,67</td>
<td>35,84±0,64</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>1,34</td>
<td>1,33</td>
<td>1,33</td>
<td>1,34</td>
<td>1,33</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Сердце</td>
<td>г</td>
<td>11,17±0,29</td>
<td>11,50±0,31</td>
<td>11,79±0,37</td>
<td>12,03±0,34</td>
<td>12,02±0,33</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>0,43</td>
<td>0,43</td>
<td>0,44</td>
<td>0,44</td>
<td>0,44</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Мышечный желудок</td>
<td>г</td>
<td>30,57±0,70</td>
<td>30,89±0,67</td>
<td>31,42±0,66</td>
<td>31,94±0,73</td>
<td>31,84±0,71</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>1,17</td>
<td>1,17</td>
<td>1,18</td>
<td>1,18</td>
<td>1,18</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Железистый желудок</td>
<td>г</td>
<td>10,07±0,28</td>
<td>10,22±0,32</td>
<td>10,41±0,37</td>
<td>10,94±0,29</td>
<td>10,83±0,30</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>0,38</td>
<td>0,38</td>
<td>0,40</td>
<td>0,40</td>
<td>0,40</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Селезенка</td>
<td>г</td>
<td>4,11±0,08</td>
<td>4,09±0,10</td>
<td>4,17±0,08</td>
<td>4,15±0,07</td>
<td>4,17±0,11</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>0,16</td>
<td>0,15</td>
<td>0,16</td>
<td>0,15</td>
<td>0,15</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Кишечник</td>
<td>г</td>
<td>116,56±1,42</td>
<td>117,13±1,34</td>
<td>117,81±1,49</td>
<td>118,76±1,42</td>
<td>118,61±1,44</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>4,44</td>
<td>4,42</td>
<td>4,42</td>
<td>4,41</td>
<td>4,42</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Легкие</td>
<td>г</td>
<td>10,35±0,40</td>
<td>10,54±0,35</td>
<td>10,84±0,39</td>
<td>11,10±0,33</td>
<td>11,05±0,38</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>0,39</td>
<td>0,40</td>
<td>0,40</td>
<td>0,41</td>
<td>0,41</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Почки</td>
<td>г</td>
<td>8,31±0,28</td>
<td>8,37±0,29</td>
<td>8,45±0,30</td>
<td>8,49±0,25</td>
<td>8,47±0,27</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>0,32</td>
<td>0,32</td>
<td>0,32</td>
<td>0,31</td>
<td>0,31</td>
</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Желчный пузырь</td>
<td>г</td>
<td>2,32±0,05</td>
<td>2,33±0,06</td>
<td>2,36±0,07</td>
<td>2,39±0,05</td>
<td>2,38±0,06</td>
</tr>
<tr>
<td>%</td>
<td>0,09</td>
<td>0,09</td>
<td>0,09</td>
<td>0,09</td>
<td>0,09</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Изучалось влияние пробиотика на химический состав мяса цыплят-бройлеров кросса Кобб 500, который представлен в таблице 96.</p>
<p><strong>Таблица 96 </strong>– Химический состав мяса цыплят-бройлеров кросса Кобб 500</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Грудные мышцы</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Влага, %</td>
<td>71,11±1,02</td>
<td>71,09±1,11</td>
<td>70,98±1,17</td>
<td>70,62±1,15</td>
<td>70,84±1,20</td>
</tr>
<tr>
<td>Белок, %</td>
<td>23,11±0,44</td>
<td>23,17±0,47</td>
<td>23,31±0,50</td>
<td>23,74±0,49</td>
<td>23,51±0,48</td>
</tr>
<tr>
<td>Жир, %</td>
<td>4,57±0,11</td>
<td>4,52±0,12</td>
<td>4,47±0,13</td>
<td>4,41±0,12</td>
<td>4,43±0,13</td>
</tr>
<tr>
<td>Зола, %</td>
<td>1,21±0,02</td>
<td>1,22±0,03</td>
<td>1,24±0,02</td>
<td>1,23±0,03</td>
<td>1,22±0,02</td>
</tr>
<tr>
<td>Индекс качества мяса</td>
<td>0,20±0,01</td>
<td>0,19±0,01</td>
<td>0,19±0,01</td>
<td>0,18±0,01</td>
<td>0,19±0,01</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Ножные мышцы</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Влага, %</td>
<td>71,62±1,13</td>
<td>71,49±1,17</td>
<td>71,49±1,21</td>
<td>71,51±1,15</td>
<td>71,50±1,14</td>
</tr>
<tr>
<td>Белок, %</td>
<td>22,44±0,41</td>
<td>22,57±0,43</td>
<td>22,58±0,49</td>
<td>22,61±0,44</td>
<td>22,59±0,47</td>
</tr>
<tr>
<td>Жир, %</td>
<td>4,82±0,07</td>
<td>4,81±0,08</td>
<td>4,78±0,06</td>
<td>4,75±0,08</td>
<td>4,77±0,07</td>
</tr>
<tr>
<td>Зола, %</td>
<td>1,12±0,03</td>
<td>1,13±0,02</td>
<td>1,15±0,02</td>
<td>1,13±0,03</td>
<td>1,14±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Индекс качества мяса</td>
<td>0,21±0,01</td>
<td>0,21±0,01</td>
<td>0,21±0,01</td>
<td>0,20±0,01</td>
<td>0,20±0,01</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты исследований в разрезе групп не показали статистически достоверных различий, но следует обратить внимание, что содержание белка<br />
в грудных мышцах опытных групп было незначительно выше, чем в контрольной на 0,06; 0,2; 0,63 и 0,4 %, а в ножных – на 0,13; 0,14; 0,17 и 0,15 %, соответственно. Содержание жира в грудных мышцах опытных групп было незначительно ниже, чем в контрольной, на 0,05; 0,1; 0,16 и 0,14 %, а в ножных – на 0,01; 0,04; 0,07 и 0,05 %, соответственно. Индекс качества грудных мышц<br />
в опытных группах составил 0,19 и 0,18 ед., против 0,20 ед. в контрольной группе. Индекс качества ножных мышц наилучшим был в 3-й и 4-й опытных группах и составил 0,20 ед., против 0,21 ед. в контрольной группе.</p>
<p>Биополноценность мышц цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 определяли по аминокислотному скору (рисунок 36).</p>
<p>Результаты рисунка 36 показывают, что в белке мяса цыплят-бройлеров опытных групп содержалось более оптимальное количество незаменимых аминокислот. Так, уровень лизина в мышцах опытных групп был выше, чем контрольной на 0,1; 1,2; 2,5 и 2,0 %; триптофана – на 1,4; 3,6; 5,3 и 4,4 %; фенилаланина – на 0,1; 1,1; 2,4 и 1,9 %; лейцина – на 0,9; 1,8; 3,0 и 2,8 %; метионина – на 1,5; 3,3; 5,3 и 4,3 %, соответственно.</p>
<p><img width="634" height="466" class="wp-image-5230" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2606.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2606.png 634w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2606-300x221.png 300w" sizes="(max-width: 634px) 100vw, 634px" alt="word image 2606 Оптимизация характеристик инновационного биопрепарата на основе функционально-адаптированной микрофлоры дикой птицы и разработка технологии получения и идентификация структуры индивидуальных БАВ с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования бактериальных геномов."></p>
<p><strong>Рисунок 36 </strong>– Содержание отдельных незаменимых аминокислот<br />
в мышцах птиц, мг/г</p>
<p>Органолептические качества мясной продукции определяли дегустационной оценкой, результаты которой представлены в таблице 97.</p>
<p>Результаты оценки в разрезе подопытных групп были высокими и существенной разницы не зафиксировано. Бульон, полученный при варке мяса контрольной и опытных групп, был наваристым, немного соломенного цвета, обладал приятным вкусом и ароматом, характерным для мяса птицы. Вареное мясо, полученное от контрольной и опытных групп, по вкусу было приятным, ароматным, нежным и умеренно сочным. Посторонние запахи – отсутствовали. Наивысшую оценку получили мясо и бульон во 2-й , 3-й и 4-й опытных группах.</p>
<p><strong>Таблица 97 </strong>– Дегустационная оценка мяса цыплят-бройлеров и бульона, баллы</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Грудные мышцы</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,9±0,1</td>
<td>4,9±0,2</td>
<td>4,9±0,1</td>
</tr>
<tr>
<td>Ножные мышцы</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,1</td>
<td>4,9±0,2</td>
<td>4,9±0,1</td>
<td>4,9±0,2</td>
</tr>
<tr>
<td>Бульон</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td>4,8±0,2</td>
<td>4,9±0,2</td>
<td>4,9±0,1</td>
<td>4,9±0,1</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Результаты ветеринарно-санитарной безопасности мясной продукции птицеводства представлены в таблице 98.</p>
<p><strong>Таблица 98 </strong>– Физико-химические и микробиологические показатели качества мяса цыплят-бройлеров</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="5">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я<br />
опытная</td>
<td>2-я<br />
опытная</td>
<td>3-я<br />
опытная</td>
<td>4-я<br />
опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Реакция с сернокислой медью</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
</tr>
<tr>
<td>Реакция с формалином</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
<td>‒</td>
</tr>
<tr>
<td>Реакция на пероксидазу</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
<td>+</td>
</tr>
<tr>
<td>Количество ЛЖК, мг КОН/100 г</td>
<td>1,71±0,02</td>
<td>1,70±0,03</td>
<td>1,68±0,03</td>
<td>1,65±0,04</td>
<td>1,66±0,03</td>
</tr>
<tr>
<td>Количество микробных<br />
клеток в одном поле зрения микроскопа:</p>
<ul>
<li>с поверхности тушки</li>
<li>с глубоких слоев</li>
</ul>
</td>
<td>3,42±0,07</p>
<p>‒</td>
<td>3,41±0,10</p>
<p>‒</td>
<td>3,38±0,08</p>
<p>‒</td>
<td>3,37±0,09</p>
<p>‒</td>
<td>3,38±0,09</p>
<p>‒</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6">рН мяса</td>
</tr>
<tr>
<td>Первые сутки</td>
<td>6,77±0,14</td>
<td>6,79±0,17</td>
<td>6,79±0,16</td>
<td>6,77±0,17</td>
<td>6,78±0,18</td>
</tr>
<tr>
<td>Вторые сутки</td>
<td>6,41±0,15</td>
<td>6,40±0,17</td>
<td>6,40±0,19</td>
<td>6,41±0,18</td>
<td>6,40±0,19</td>
</tr>
<tr>
<td>Третьи сутки</td>
<td>6,01±0,18</td>
<td>6,02±0,17</td>
<td>6,01±0,19</td>
<td>5,98±0,15</td>
<td>5,98±0,17</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Как и в ранее проведенных экспериментах установлено, что по изучаемым физико-химическим и микробиологическим показателям мясо цыплят-брой­леров кросса Кобб 500 всех групп было безопасным для применения в пищу не зависимо от дозы пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс.</p>
<p>Таким образом, по совокупности проведенных экспериментов выявлено, что пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс оказывает положительное действие на организм цыплят-бройлеров кросса Кобб 500, стимулирует рост птицы, повышает сохранность, усиливает обмен веществ, повышает иммунный статус организма. Наилучшие показатели были выявлены при использовании биопрепарата<br />
в дозе 0,75 мл/гол.</p>
<p><em>Экономическая эффективность использования пробиотика.</em> Результаты экономической эффективности использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на цыплятах-бройлерах кросса Кобб 500 представлены в таблице 99.</p>
<p>В результате проведенной предварительной экономической эффективности применения в рационе цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 микробной добавки Галлобакт-Ф-Плюс выявлено, что прибыль в 1–4-й опытных группах составила 3 481,94; 3 652,95; 3 870,26 и 3 764,24 руб., против 3 261,23 руб. в контрольной группе, что выше на 220,71; 391,72; 604,03 и 503,01 руб., соответственно. В целом, наилучшие результаты были получены в 3-й опытной группе, в которой экономический эффект превышал контрольную группу на 18,67 %.</p>
<p>Таким образом, экономически целесообразно проводить производственную апробацию пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на цыплятах-бройлерах кросса Кобб 500 в дозе, составляющей 0,75 мл/гол.</p>
<p><strong>Таблица 99 </strong>– Экономическая эффективность использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="6">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>1-я опытная</td>
<td colspan="2">2-я опытная</td>
<td>3-я опытная</td>
<td>4-я опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в начале опыта, гол.</td>
<td>60</td>
<td>60</td>
<td colspan="2">60</td>
<td>60</td>
<td>60</td>
</tr>
<tr>
<td>Сохранность, %</td>
<td>95,0</td>
<td>98,3</td>
<td colspan="2">100</td>
<td>100</td>
<td>100</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в конце опыта, гол.</td>
<td>57</td>
<td>59</td>
<td colspan="2">60</td>
<td>60</td>
<td>60</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Масса тушки на реализацию</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошенной тушки, г</td>
<td>1810,927,54</td>
<td>1835,837,31</td>
<td colspan="2">1860,537,45*</td>
<td>1898,797,42*</td>
<td>1882,387,37*</td>
</tr>
<tr>
<td>Масса потрошенной тушки всего, кг</td>
<td>103,22</td>
<td>108,31</td>
<td colspan="2">111,63</td>
<td>113,93</td>
<td>112,94</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Затраты комбикорма за период выращивания</em></td>
</tr>
<tr>
<td>На голову, г</td>
<td>4587,81</td>
<td>4608,48</td>
<td colspan="2">4625,78</td>
<td>4628,59</td>
<td>4627,93</td>
</tr>
<tr>
<td>На все поголовье, кг</td>
<td>261,51</td>
<td>271,90</td>
<td colspan="2">277,55</td>
<td>277,72</td>
<td>277,68</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Затраты пробиотика</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Всего, мл</td>
<td>–</td>
<td>132,75</td>
<td colspan="2">270,0</td>
<td>405,0</td>
<td>540,0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="7"><em>Экономическая эффективность</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 кг комбикорма, руб.</td>
<td colspan="6">27</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного<br />
корма всего, руб.</td>
<td>7 060,77</td>
<td>7 341,30</td>
<td colspan="2">7 493,85</td>
<td>7 498,44</td>
<td>7 497,36</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 л пробиотика, руб.</td>
<td colspan="3">–</td>
<td colspan="3">60</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость пробиотика всего, руб.</td>
<td>–</td>
<td>7,76</td>
<td colspan="2">16,20</td>
<td>24,30</td>
<td>32,40</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма и пробиотика, руб.</td>
<td>7 060,77</td>
<td>7 349,06</td>
<td colspan="2">7 510,05</td>
<td>7 522,74</td>
<td>7 529,76</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена реализации 1 кг мяса птицы, руб.</td>
<td colspan="6">100,0</td>
</tr>
<tr>
<td>Выручка от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>10 322,00</td>
<td>10 831,00</td>
<td colspan="2">11 163,00</td>
<td>11 393,00</td>
<td>11 294,00</td>
</tr>
<tr>
<td>Прибыль от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>3 261,23</td>
<td>3 481,94</td>
<td colspan="2">3 652,95</td>
<td>3 870,26</td>
<td>3 764,24</td>
</tr>
<tr>
<td>Экономический эффект от<br />
использования пробиотика к контролю,руб.%</td>
<td>–</p>
<p>–</td>
<td>220,71</p>
<p>6,77</td>
<td colspan="2">391,72</p>
<p>12,01</td>
<td>604,03</p>
<p>18,67</td>
<td>503,01</p>
<p>15,42</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<h2><a id="post-5185-_Toc27057866"></a><strong>3 ПРОИЗВОДСТВЕННЫЕ ИСПЫТАНИЯ</strong></h2>
<p>Производственную апробацию эффективности применения разработанного пробиотика осуществляли в крестьянско-фермерских хозяйствах Краснодарского края и Республики Адыгея.</p>
<p><em>Эффективность использования пробиотика на перепелах. </em>Схема производственных испытаний пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на перепелах представлена в таблице 100.</p>
<p><strong>Таблица 100 </strong>– Схема производственных испытаний на перепелах при<br />
использовании пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Группа</td>
<td>Условия кормления и выпаивания</td>
<td>Схема выпаивания, дни</td>
</tr>
<tr>
<td>Контрольная</td>
<td>Стандартный рацион (СР) и питьевая вода (ПВ)</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Опытная</td>
<td>СР, ПВ + 0,5 мл/гол. Галлобакт-Ф-Плюс</td>
<td>1; 3; 5; 7; 14; 21; 28; 35; 42; 49</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Согласно производственной схеме было сформировано две группы перепелов: контрольная группа – перепела получали стандартный рацион и имели свободный доступ к воде; опытная группа – перепела получали стандартный рацион, а также дополнительно в воду вводился пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс в дозе 0,5 мл/гол. Продолжительность производственной апробации ‒ 56 дней. Результаты производственной апробации на перепелах Техасской породы продемонстрированы в таблице 101.</p>
<p><strong>Таблица 101 </strong>– Производственная эффективность использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на перепелах Техасской породы</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="2">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в начале испытаний, гол.</td>
<td>2 000</td>
<td>2 000</td>
</tr>
<tr>
<td>Сохранность, %</td>
<td>95,6</td>
<td>99,0</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в конце испытаний, гол.</td>
<td>1912</td>
<td>1980</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Динамика живой массы, г.</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Суточные</td>
<td>10,74±0,34</td>
<td>10,69±0,28</td>
</tr>
<tr>
<td>56-е сутки</td>
<td>321,23±2,01</td>
<td>346,29±2,05*</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Масса тушки на реализацию</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Потрошенная тушка, г</td>
<td>236,67±1,65</td>
<td>262,59±1,69*</td>
</tr>
<tr>
<td>Всего, кг</td>
<td>452,50</td>
<td>519,92</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Продолжение таблицы 101</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Затраты комбикорма за период выращивания</em></td>
</tr>
<tr>
<td>На голову, г</td>
<td>1059,23</td>
<td>1098,47</td>
</tr>
<tr>
<td>На все поголовье, кг</td>
<td>2 025,24</td>
<td>2 174,96</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Затраты пробиотика</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Пробиотика всего, мл</td>
<td>–</td>
<td>9 900,0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Экономическая эффективность</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 кг комбикорма, руб.</td>
<td colspan="2">30</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма всего, руб.</td>
<td>60 757,20</td>
<td>65 248,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 л пробиотика, руб.</td>
<td>–</td>
<td>60</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость пробиотика, руб.</td>
<td>–</td>
<td>594,00</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма<br />
и добавки, руб.</td>
<td>60 757,20</td>
<td>65 842,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена реализации 1 кг мяса птицы, руб.</td>
<td colspan="2">400,0</td>
</tr>
<tr>
<td>Выручка от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>181 000,00</td>
<td>207 968,00</td>
</tr>
<tr>
<td>Прибыль от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>120 242,80</td>
<td>142 125,20</td>
</tr>
<tr>
<td>Экономический эффект от использования<br />
добавки к контролю,руб.%</td>
<td>–</p>
<p>–</td>
<td>21 884,40</p>
<p>18,19</td>
</tr>
<tr>
<td>Рентабельность затрат, %</td>
<td>197,91</td>
<td>215,86</td>
</tr>
<tr>
<td>к контролю, %</td>
<td>–</td>
<td>17,95</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В результате проведенных производственных испытаний на перепелах Техасской породы установлено, что применение разработанного пробиотика<br />
в опытной группе способствовало повышению жизнеспособности птицы, что отразилось на показателе сохранности, который был выше, чем в группе контроля на 2,4 %. Выявлена статистически достоверная разница в живой массе опытной группы по сравнению с контрольной, которыя была выше на 7,8 % (P &lt; 0,05).</p>
<p>При расчете экономических показателей установлено, что прибыль<br />
в опытной группе составила 142 125,20 руб., что на 14,35 % оказалось выше, чем в контрольной группе. Рентабельность затрат в опытной группе была выше, чем в контрольной группе на 17,95 %.</p>
<p>Результаты производственной апробации на перепелах породы Фараон представлены в таблице 102.</p>
<p>В результате проведенных производственных испытаний на перепелах породы Фараон установлено, что применение разработанного биопрепарата<br />
в опытной группе способствовало повышению жизнеспособности птицы, что отразилось на показателе сохранности, который был выше, чем в группе контроля на 3,6 %. Выявлена статистически достоверная разница в живой массе опытной группы по сравнению с контрольной, которыя была выше на 7,2 % (P &lt; 0,05). Также выявлена статистически достоверная разница по массе потрошенной тушки в опытной группе по сравнению с контрольной, которая составила в опытной группе 234,61 г, что на 7,4 % выше, чем в группе контроля (P &lt; 0,05). В целом, экономический эффект от применения пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс в опытной группе был выше, чем в контрольной, на 18,1 %. Рентабельность затрат в опытной группе была выше, чем в контрольной группе<br />
на 18,43 %.</p>
<p><strong>Таблица 102 </strong>– Производственная эффективность использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на перепелах породы Фараон</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="2">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в начале испытаний, гол.</td>
<td>1 000</td>
<td>1 000</td>
</tr>
<tr>
<td>Сохранность, %</td>
<td>95,1</td>
<td>98,7</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в конце испытаний, гол.</td>
<td>951</td>
<td>987</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Динамика живой массы, г.</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Суточные</td>
<td>8,83±0,15</td>
<td>8,85±0,19</td>
</tr>
<tr>
<td>56-е сутки</td>
<td>293,57±1,87</td>
<td>314,72±1,81*</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Масса тушки на реализацию</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Потрошенная тушка, г</td>
<td>212,38±1,77</td>
<td>234,61±1,70*</td>
</tr>
<tr>
<td>Всего, кг</td>
<td>201,97</td>
<td>231,56</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Затраты комбикорма за период выращивания</em></td>
</tr>
<tr>
<td>На голову, г</td>
<td>959,14</td>
<td>987,29</td>
</tr>
<tr>
<td>На все поголовье, кг</td>
<td>912,14</td>
<td>974,46</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Затраты пробиотика</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Пробиотика всего, мл</td>
<td>–</td>
<td>4 935,0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Экономическая эффективность</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 кг комбикорма, руб.</td>
<td colspan="2">30</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма всего, руб.</td>
<td>27 364,20</td>
<td>29 233,80</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 л пробиотика, руб.</td>
<td>–</td>
<td>60</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость пробиотика, руб.</td>
<td>–</td>
<td>296,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма и добавки, руб.</td>
<td>27 364,20</td>
<td>29 529,90</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена реализации 1 кг мяса птицы, руб.</td>
<td colspan="2">400,0</td>
</tr>
<tr>
<td>Выручка от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>80 788,00</td>
<td>92 624,00</td>
</tr>
<tr>
<td>Прибыль от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>53 423,80</td>
<td>63 094,10</td>
</tr>
<tr>
<td>Экономический эффект от использования<br />
добавки к контролю,руб.%</td>
<td>–</p>
<p>–</td>
<td>9 670,30</p>
<p>18,1</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Продолжение таблицы 102</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Рентабельность затрат, %</td>
<td>195,23</td>
<td>213,66</td>
</tr>
<tr>
<td>к контролю, %</td>
<td>–</td>
<td>18,43</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Таким образом, применение пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс в дозе 0,5 мл/гол. способствуют повышению экономической эффективности и рентабельности выращивания перепелов мясной продуктивности.</p>
<p><em>Эффективность использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на цыплятах-бройлерах быстрорастущих кроссов. </em>Схема производственных испытаний представлена в таблице 103.</p>
<p><strong>Таблица 103 </strong>– Схема производственных испытаний на цыплятах-бройлерах быстрорастущих кроссов при использовании пробиотика<br />
Галлобакт-Ф-Плюс</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Группа</td>
<td>Условия кормления и выпаивания</td>
<td>Схема выпаивания, дни</td>
</tr>
<tr>
<td>Контрольная</td>
<td>Стандартный рацион (СР) и питьевая вода (ПВ)</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Опытная</td>
<td>СР, ПВ + 0,75 мл/гол Галлобакт-Ф-Плюс</td>
<td>1; 3; 5; 7; 14; 21; 28; 35</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Согласно производственной схеме было сформировано две группы птиц: контрольная группа – цыплята-бройлеры получали стандартный рацион и имела свободный доступ к воде; опытная группа – птица получала стандартный рацион, а также дополнительно в воду вводился пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс<br />
в дозе 0,75 мл/гол. Продолжительность производственной апробации ‒ 42 дня. Результаты производственной апробации на цыплят-бройлеров кросса Росс 308 представлены в таблице 104.</p>
<p><strong>Таблица 104</strong> – Производственная эффективность использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на цыплятах-бройлерах кросса Росс 308</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="2">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в начале испытаний, гол.</td>
<td>500</td>
<td>500</td>
</tr>
<tr>
<td>Сохранность, %</td>
<td>96,2</td>
<td>98,8</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в конце испытаний, гол.</td>
<td>481</td>
<td>494</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Динамика живой массы, г.</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Суточные</td>
<td>40,87±0,39</td>
<td>41,05±0,54</td>
</tr>
<tr>
<td>42-е сутки</td>
<td>2672,36±7,02</td>
<td>2755,76±6,87*</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Продолжение таблицы 104</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Масса тушки на реализацию</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Потрошенная тушка, г</td>
<td>1806,74±8,94</td>
<td>1914,38±8,78*</td>
</tr>
<tr>
<td>Всего, кг</td>
<td>869,94</td>
<td>945,71</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Затраты комбикорма за период выращивания</em></td>
</tr>
<tr>
<td>На голову, г</td>
<td>4787,52</td>
<td>4841,87</td>
</tr>
<tr>
<td>На все поголовье, кг</td>
<td>2 305,19</td>
<td>2 391,88</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Затраты пробиотика</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Пробиотика всего, мл</td>
<td>–</td>
<td>3 334,5</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Экономическая эффективность</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 кг комбикорма, руб.</td>
<td colspan="2">27</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма<br />
всего, руб.</td>
<td>62 240,13</td>
<td>64 580,90</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 л пробиотика, руб.</td>
<td>–</td>
<td>60</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость пробиотика, руб.</td>
<td>–</td>
<td>200,9</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма<br />
и пробиотика, руб.</td>
<td>62 240,13</td>
<td>64 780,99</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена реализации 1 кг мяса птицы, руб.</td>
<td colspan="2">100</td>
</tr>
<tr>
<td>Выручка от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>86 994,50</td>
<td>94 570,50</td>
</tr>
<tr>
<td>Прибыль от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>24 754,37</td>
<td>29 789,51</td>
</tr>
<tr>
<td>Экономический эффект от использования пробиотика к контролю,</p>
<p>руб.</p>
<p>%</td>
<td>–</p>
<p>–</td>
<td>5 035,14</p>
<p>20,34</td>
</tr>
<tr>
<td>Рентабельность затрат, %</td>
<td>39,77</td>
<td>45,99</td>
</tr>
<tr>
<td>к контролю, %</td>
<td>–</td>
<td>6,22</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В результате проведенных производственных испытаний на цыплятах-бройлерах кросса Росс 308 установлено, что применение пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс в опытной группе способствовало повышению жизнеспособности птицы, что отразилось на показателе сохранности, который был выше, чем<br />
в группе контроля, на 2,5 %. Выявлена статистически достоверная разница<br />
в живой массе опытной группы по сравнению с контрольной, которыя была выше на 3,1 % (P &lt; 0,05). При расчете экономических показателей установлено, что прибыль в опытной группе составила 29 789,51 руб., что на 20,34 % оказалось выше, чем в контрольной группе. Рентабельность затрат в опытной группе была выше на 6,22 %.</p>
<p>Результаты производственной апробации на цыплят-бройлеров кросса Кобб 500 представлены в таблице 105.</p>
<p><strong>Таблица 105 </strong>– Производственная эффективность использования пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на цыплятах-бройлерах кросса Кобб 500</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Показатель</td>
<td colspan="2">Группа</td>
</tr>
<tr>
<td>контрольная</td>
<td>опытная</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в начале испытаний, гол.</td>
<td>750</td>
<td>750</td>
</tr>
<tr>
<td>Сохранность, %</td>
<td>97,1</td>
<td>98,9</td>
</tr>
<tr>
<td>Поголовье в конце испытаний, гол.</td>
<td>728</td>
<td>742</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Динамика живой массы, г.</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Суточные</td>
<td>42,54±0,33</td>
<td>42,21±0,40</td>
</tr>
<tr>
<td>42-е сутки</td>
<td>2610,52±5,77</td>
<td>2693,73±6,02*</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Масса тушки на реализацию</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Потрошенная тушка, г</td>
<td>1808,667,22</td>
<td>1899,197,30*</td>
</tr>
<tr>
<td>Всего, кг</td>
<td>1 317,16</td>
<td>1 408,73</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Затраты комбикорма за период выращивания</em></td>
</tr>
<tr>
<td>На голову, г</td>
<td>4581,49</td>
<td>4625,87</td>
</tr>
<tr>
<td>На все поголовье, кг</td>
<td>3 336,47</td>
<td>3 431,22</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Затраты пробиотика</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Пробиотика всего, мл</td>
<td>–</td>
<td>5 006,7</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Экономическая эффективность</em></td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 кг комбикорма, руб.</td>
<td colspan="2">27</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма<br />
всего, руб.</td>
<td>90 084,76</td>
<td>92 642,94</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена 1 л пробиотика, руб.</td>
<td>–</td>
<td>60</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость пробиотика, руб.</td>
<td>–</td>
<td>300,41</td>
</tr>
<tr>
<td>Стоимость израсходованного корма<br />
и пробиотика, руб.</td>
<td>90 084,76</td>
<td>92 943,35</td>
</tr>
<tr>
<td>Цена реализации 1 кг мяса птицы, руб.</td>
<td colspan="2">100</td>
</tr>
<tr>
<td>Выручка от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>131 716,00</td>
<td>140 873,00</td>
</tr>
<tr>
<td>Прибыль от реализации мяса птицы, руб.</td>
<td>41 631,24</td>
<td>47 929,65</td>
</tr>
<tr>
<td>Экономический эффект от использования пробиотика к контролю,</p>
<p>руб.</p>
<p>%</td>
<td>–</p>
<p>–</td>
<td>6 298,41</p>
<p>15,13</td>
</tr>
<tr>
<td>Рентабельность затрат, %</td>
<td>46,21</td>
<td>51,57</td>
</tr>
<tr>
<td>к контролю, %</td>
<td>–</td>
<td>5,36</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3">Примечание: * – разница с контролем достоверна (P &lt; 0,05).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В результате проведенных производственных испытаний на цыплятах-брой­лерах кросса Кобб 500 установлено, что применение пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс в опытной группе способствовало повышению прибыли в опытной группе, которая составила 47 929,65 руб., что на 6 298,41 руб. или 15,13 % выше, чем в контрольной группе. Рентабельность затрат в опытной группе была выше на 5,36 %.</p>
<p>Таким образом, применение пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс в дозе 0,75 мл/гол. на цыплятах-бройлерах быстрорастущих кроссов, в частности Росс 308 и Кобб 500, способствует повышению экономических показателей при выращивании данного вида птицы.</p>
<h2><a id="post-5185-_Toc27057868"></a><strong>ЗАКЛЮЧЕНИЕ</strong></h2>
<p>На основании проведенных исследований можно сделать следующие выводы:</p>
<ol>
<li>Получены чистые культуры нескольких кисломолочных штаммов бактерий, выделенных из автохтонных эволюционно закрепленных микробных сообществ ЖКТ диких куриных Краснодарского края. В частности культуры штаммов <em>Lactobacillus salivarius</em> 16РС20, <em>Lactobacillus curvatus </em>13PC723<br />
и <em>Lactobacillus </em>sp. 100PC13.</li>
<li>Созданы геномные библиотеки для высокоэффективного секвенирования с использованием набора Nextera DNA Flex Library Prep компании Illumina для осуществления высокоэффективного полногеномного секвенирования на секвенаторе нового поколения Illumina MiSeq.</li>
<li>Получены полногеномные сиквенсы пробиотических штаммов бактерий, принадлежащих к видам <em>Lactobacillus salivarius</em>, <em>Lactobacillus curvatus</em>, <em>Lactobacillus parabuchneri </em>и <em>Lactobacillus heilongjiangensis</em>. При этом секвенирование некоторых штаммов было выполнено несколько раз.</li>
<li>Полногеномные последовательности подготовлены к депонированию<br />
и размещены в международной базе NCBI (англ. National Center for Bio­technological Information, Национальный центр биотехнологической информации США) с присвоением соответствующих индивидуальных номеров: <em>Lactobacillus salivarius</em> PC20b (VRA_1sq_f) (Assembly: GCA_009683065.1), <em>Lactobacillus salivarius</em> PC20b (VRA_01-1sq_f) (Assembly: GCA_009683115.1), <em>Lactobacillus curvatus</em> PC723_5 (VRA_2sq_f) (Assembly: GCA_009683015.1), <em>Lactobacillus curvatus</em> PC723_5 (VRA_2sq_n) (Assembly: GCA_009683145.1).</li>
<li>Идентифицированы последовательности девяти бактериоцинов и осуществлен их биоинформационный анализ.</li>
<li>Использование в составе рецептуры пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс полисахаридной смеси, в частности альгината натрия в дозе 0,3 %, способствует высокой резистентности выделенных лактобацил к фенолу, желчи, хлориду натрия и желудочному соку, что способствует максимальной приживаемости культур в желудочно-кишечном тракте птиц.</li>
<li>Выделенные лактобациллы обладают свойствами, характерными для молочнокислых бактерий. Они проявляют высокую кислотообразующую способность, способны утилизировать широкий спектр сахаров, что дает им преимущества в конкуренции за субстрат.</li>
<li>Многократный пассаж отобранных культур с терапевтическими дозами антибиотиков позволило повысить устойчивость лактобактерий к ним; по антагонистическим свойствам штаммы обладаот угнетающим действием на полевую и эталонную патогенную микрофлору без ингибирования роста представителей нормофлоры кишечника; по антиадгезивным свойствам исследуемые культуры обладают положительным действием на адгезию <em>E. coli </em>и<em> S. aureus<br />
</em> к эритроцитам крови барана; по адгезивным характеристикам лактокультуры обладают высокоадгезивной активностью по отношению к энтероцитам кишечника куриного эмбриона (коэффициент прикрепительной способности 12,417,5 ед.).</li>
<li>При изучении безопасности лактобактерий установлено, что исследуемые микроорганизмы не продуцируют гемолизин (результат гемолиза – отрицательный), а при даче лактобактерий мышам, не было зафиксировано гибели и заболевания животных. Изучаемые штаммы микроорганизмов безопасны и могут быть использованы в качестве компонентов для пробиотических добавок.</li>
<li>Пробиотик Галлобакт-Ф-Плюс малотоксичен для животных, не вызывает их гибели, как в остром, подостром, так и в хроническом экспериментах, что по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» позволяет отнести его к 4-му классу опасности. Длительное применение пробиотика не оказывает отрицательного воздействия на общее состояние лабораторных животных, на процессы пищеварения, морфологические и биохимические показатели крови. Галлобакт-Ф-Плюс не проявляет раздражающего действия на организм подопытных животных.</li>
<li>Изучение лечебно-профилактического действия пробиотика Галлобакт-Ф-Плюс на модели экспериментального дисбактериоза в кишечнике крыс показало, что биопрепарат способствует повышению концентрации представителей нормофлоры (лакто- и бифидобактерий) и снижает численность представителей патогенной и условно-патогенной микробиоты, с последующим достижением показателей характерных для здоровых животных.</li>
<li>Изучение фармакологических свойств пробиотической добавки Галлобакт-Ф-Плюс на организм перепелов (в дозировке 0,5 мл/гол.) и цыплят-бройлеров (в дозировке 0,75 мл/гол.) мясной продуктивности способствовало следующим изменениям:</li>
</ol>
<ul>
<li>наблюдалось повышение сохранности: перепелов – на 3,5 % (Техасская порода) и 5,0 % (порода Фараон), цыплят-бройлеров – на 6,7 % (кросс Росс 308) и 5,0 % (кросс Кобб 500), живой массы: перепелов – на 6,3 % (Техасская порода) и 7,2 % (порода Фараон), цыплят-бройлеров – на 2,8 % (кросс Росс 308)<br />
и 3,1 % (кросс Кобб 500), прироста: перепелов – на 6,6 % (Техасская порода)<br />
и 7,4 % (порода Фараон), цыплят-бройлеров – на 2,9 % (кросс Росс 308) и 3,1 % (кросс Кобб 500), снижение конверсии комбикорма: у перепелов – на 1,5 % (Техасская порода) и 1,8 % (порода Фараон), цыплят-бройлеров – на 2,2 % (кросс Росс 308) и 1,4 % (кросс Кобб 500);</li>
<li>применение пробиотика способствовало интенсификации обменных процессор организма птицы за счет усиления гемо- и эритропоэза, повышается в крови перепелов количество эритроцитов и гемоглобина на 3,7 и 3,8 % (Техасская порода), 4,9 и 3,4 % (порода Фараон), у цыплят-бройлеров – на 8,1<br />
и 4,7 % (кросс Росс 308), 8,2 и 4,6 % (кросс Кобб 500); стимулирует обмен белков, который характеризуется повышением содержания в сыворотки крови перепелов общего белка и белкового коэффициента (А/Г) на 10,6 и 9,1 % (Техасская порода), 9,3 и 7,9 % (порода Фараон), у цыплят-бройлеров – на 4,6 и 8,2 % (кросс Росс 308), 6,3 и 12,3 % (кросс Кобб 500); обмен жиров – за счет снижением количества холестерина в сыворотки крови перепелов на 5,7 % (Техасская порода) и 7,8 % (порода Фараон), у цыплят-бройлеров – на 9,3 % (кросс Росс 308) и 4,9 % (кросс Кобб 500); обмен минеральных веществ – за счет повышения уровня фосфора и кальция в сыворотки крови перепелов на 4,1 и 7,8 % (Техасская порода), 7,1 и 16,5 % (порода Фараон), у цыплят-бройлеров – на 2,8<br />
и 4,8 % (кросс Росс 308), 3,5 и 2,8 % (кросс Кобб 500); повышается уровень неспецифической резистентности организма птиц за счет достоверного увеличения бактерицидной и лизоцимной активностей сыворотки крови у перепелов на 9,2 и 6,0 % (Техасская порода), 10,4 и 4,0 % (порода Фараон), у цыплят-бройлеров – на 4,5 и 3,6 % (кросс Росс 308), 2,8 и 2,6 % (кросс Кобб 500);</li>
<li>наблюдается положительное влияние на процессы пищеварения, о чем свидетельствует повышение переваримости органического вещества, сырого протеина, сырого жира и клетчатки у перепелов на 6,7; 5,9; 4,9 и 4,8 % (Техасская порода), 6,4; 4,1; 5,2 и 1,8 % (порода Фараон), у цыплят-бройлеров – на 2,4; 5,0; 1,4 и 0,9 % (кросс Росс 308), 3,3; 5,8; 2,3 и 2,3 % (кросс Кобб 500), соответственно; пробиотик стимулирует жизнедеятельность нормофлоры в кишечнике птиц, о чем свидетельствует увеличение количества в их химусе молочнокислой микрофлоры и бифидобактерий у перепелов в 3,5 и 3,0 раза (Техасская порода), 2,2 и 1,5 раза (порода Фараон), у цыплят-бройлеров – на 1,9 и 1,3 раза (кросс Росс 308), 1,5 и 1,3 раза (кросс Кобб 500) при одновременном снижении уровня условно-патогенной микробиоты;</li>
<li>повышается мясная продуктивность и качество продукции птицеводства, а именно увеличивается масса потрошенной тушки у перепелов на 6,3 % (Техасская порода) и 7,1 % (порода Фараон), у цыплят-бройлеров – на 5,5 % (кросс Росс 308) и 4,8 % (кросс Кобб 500); повышается содержание в мышечной ткани белка и снижается уровень жира у перепелов на 0,92 и 0,52 % (Техасская порода) и 0,77 и 0,49 % (порода Фараон), у цыплят-бройлеров – на 0,3 и 0,2 % (кросс Росс 308) и 0,63 и 0,31 % (кросс Кобб 500), соответственно, при одновременном улучшении аминокислотного скора; мясо, полученное от опытных групп птиц, может быть использовано в пищу независимо от дозы применения пробиотика; выявлено положительное влияние пробиотика на массу иммунокомпетентных органов цыплят-бройлеров быстрорастущего кросса.</li>
</ul>
<ol>
<li>Результаты производственных испытаний показали, что применение<br />
в рационе перепелов и цыплят-бройлеров пробиотика Трилактокор по отношению к контролю экономически эффективно:</li>
</ol>
<ul>
<li>использование пробиотика Трилактокор в дозе 0,5 мл/гол. в системе поения перепелов способствовало повышению экономической эффективности на 18,2 %, а рентабельности затрат – на 18,0–18,4 %;</li>
<li>применение пробиотика Трилактокор в дозе 0,75 мл/гол. в рационе цыплят-бройлеров быстрорастущих кроссов способствовало повышению экономической эффективности на 13,2‒20,3 %, а рентабельности затрат – на 4,6‒6,2 %.</li>
</ul>
<p>Исходя из полученных в ходе научно-хозяйственных исследований результатов, были сделаны следующие предложения производству:</p>
<ol>
<li>Для повышения сохранности, продуктивности перепелов мясных пород, снижения расхода корма и повышения рентабельности, рекомендуется использовать путем выпаивания птице жидкую пробиотическую добавку Галлобакт-Ф-Плюс в дозе 0,5 мл/гол. согласно схеме (1-е, 3-е, 5-е, 7-е сутки и далее один раз в неделю до реализации).</li>
<li>Для повышения сохранности, продуктивности цыплят-бройлеров, снижения расхода кормов и повышения рентабельности, рекомендуется выпаивать птице жидкую пробиотическую добавку Галлобакт-Ф-Плюс в дозе 0,75 мл/гол. согласно схеме ‒ 1-е, 3-е, 5-е, 7-е сутки и далее один раз в неделю до реализации.</li>
</ol>
<h2><a id="post-5185-_Toc485416675"></a><a id="post-5185-_Toc27057869"></a><strong>СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ</strong></h2>
<ol>
<li>Андрейчин, М. А. Антимикробные свойства желчи и желчных кислот / М. А. Андрейчин // Антибиотики. – 1980. – № 25(12). – С. 936–939.</li>
<li>Балтрашевич, А. К. Способ определения чувствительности, анаэробных микроорганизмов к антибиотикам с использованием стандартных дисков / А. К. Балтрашевич, Т. П. Комаровская // Антибиотики. – 1982. – № 8. – С. 32–36.</li>
<li>Водоросли – источник биополимеров, биологически активных веществ и субстрат в биотехнологии. Ч. 1. Биополимеры клеток тканей водорослей / И. А. Наумов [и др.] // Вестник Казанского технологического университета. ‒ 2014. ‒ Т. 17, № 1. ‒ С. 188–193.</li>
<li>Воробьёва, Л. И. Промышленная микробиология / Л. И. Воробьёва. – М. : Изд-во МГУ, 1989. – 246 с.</li>
<li>Выделение и отбор бактерий рода <em>Lactobacillus</em> – основы пробиотических препаратов / И. А. Буряко [и др.] // Пробиотики, пребиотики и синбиотики и функциональные продукты питания : материалы Междунар. конф. – М., 2004. – С. 19.</li>
<li>Гвоздяк, Р. И. Микробный полисахарид ксантан / Р. И. Гвоздяк, М. С. Матышевская. Киев : Наукова думка, 1989. – 212 с.</li>
<li>Глушанова, Н. А. Биологические свойства лактобацилл / Н. А. Глу­шанова // Бюл. сиб. медицины. – 2003. – № 4. – С. 50–58.</li>
<li>Горощенко, Г. Российский рынок йогурта / Г. Горощенко // Молочная промышленность. 2003. – № 10. – С. 57.</li>
<li>ГОСТ 10444.11-89. Продукты пищевые. Методы определения молочнокислых микроорганизмов. – Введ. 01.01.1994. – М. : Госстандарт России : Изд-во стандартов, 2010. – 15 с.</li>
<li>ГОСТ 12.1.007-76. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. – М. : Стандартинформ, 2007. – 7 с.</li>
<li>ГОСТ 13496.15-97. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения содержания сырого жира. – Введ. 1999-01-01. – М. : Изд-во стандартов, 2005. – 13 с.</li>
<li>ГОСТ 13496.2-91. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения сырой клетчатки. – Введ. 1992-07-01. – М. : Изд-во стандартов, 2002. – 6 с.</li>
<li>ГОСТ 13496.3-92. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения содержания влаги. – Введ. 1993-01-01. – М. : Изд-во стандартов, 2002. – 4 с.</li>
<li>ГОСТ 13496.4-93. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения содержания азота и сырого протеина. – Введ. 1995-01-01. – М. : Изд-во стандартов, 2002. – 17 с.</li>
<li>ГОСТ 23042-78. Мясо и мясные продукты. Метод определения жира. – Введ. 1988-01-01. – М. : Изд-во стандартов, 2010. – 5 с.</li>
<li>ГОСТ 25011-81. Мясо и мясные продукты. Метод определения белка. – Введ. 1983-01-01. – М. : Изд-во стандартов, 2010. – 7 с.</li>
<li>ГОСТ 26226-95. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения сырой золы. – Введ. 2003-07-01. – М. : Изд-во стандартов, 2010. – 8 с.</li>
<li>ГОСТ 26712-94. Удобрения органические. Общие требования к методам анализа. – Введ. 01.01.1996. – М. : Госстандарт России : Изд-во стандартов, 1996. – 10 с.</li>
<li>ГОСТ 26713-85. Удобрения органические. Метод определения влаги<br />
и сухого остатка. – Введ. 19.12.1985. – М. : Госстандарт Союза ССР : Изд-во стандартов, 1985. – 7 с.</li>
<li>ГОСТ 31962-2013. Мясо кур (тушки кур, цыплят, цыплят-бройлеров<br />
и их части). Технические условия. – Введ. 2014-07-01. – М. : Изд-во стандартов, 2016. – 12 с.</li>
<li>ГОСТ 9225-84. Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа [текст]. – Введ. 1986–01–01. – М. : Стандартинформ, 2009. – 15 с.</li>
<li>ГОСТ 9793-74. Мясные продукты. Метод определения содержания влаги. – Введ. 1975-01-01. – М. : Изд-во стандартов, 2010. – 4 с.</li>
<li>ГОСТ Р 50396.1-92. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Метод определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов. – Введ. 1994-01-01. – М. : Госстандарт России, 1993. – 5 с.</li>
<li>ГОСТ Р 51331-99. Продукты молочные. Йогурты. Общие технические условия. – Введ.19.10.1999. – М. : Стандартинформ, 2008. – 22 с.</li>
<li>ГОСТ Р 51478-99. Мясо и мясные продукты. Контрольный метод определения концентрации водородных ионов (pH). – Введ. 2001-01-01. – М. : Изд-во стандартов, 2010. – 5 с.</li>
<li>ГОСТ Р 51944-2002. Мясо птицы. Методы определения органолептических показателей, температуры и массы. – Введ. 2003-07-01. – М. : Изд-во стандартов, 2010. – 8 с.</li>
<li>ГОСТ Р 54673-2011. Мясо перепелов (тушки). Технические условия. – Введ. 2013-01-01. – М. : Изд-во стандартов, 2013. – 12 с.</li>
<li>ГОСТ Р ИСО 10993.10-99. Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 10. Исследование раздражающего и сенсибилизирующего действия. – Введ. 1999-12-29. – М. : Госстандарт России, 2000. – 38 с.</li>
<li>ГОСТ Р ИСО 10993-11-2009. Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 11. Исследования общетоксического действия. – Введ. 2009-10-20. – М. : Стандартинформ, 2010. – 27 с.</li>
<li>Губанова, Т. С. Йогурт: потребители и предпочтения / Т. С. Губано­ва // Молочная промышленность. 2001. № 10. – С. 89.</li>
<li>Ермоленко, Е. И. Бактериоцины энтерококков: проблемы и перспективы использования / Е. И. Ермоленко // Вестник Санкт-Петербургского университета. Серия 11. – 2009. – Вып. 3.</li>
<li>Забодалова, Л. А. Биотехнология комбинированных молочных продуктов с использованием компонентов сои : автореф. дисс. … д-ра тех. наук : 05.18.04 / Забодалова Людмила Александровна. Кемерово, 2000. – 36 с.</li>
<li>Зельцер, И. З. О прогнозировании дисбиотического эффекта при токсико-гигиенической оценке антибиотиков / И. З. Зельцер // Антибиотики и химиотерапия. – 1989. – № 6. – С. 440–442.</li>
<li>Исследование ферментативных свойств кормовых добавок / А. Н. Швыд­ков, А. Е. Мартышенко, Н. Н. Ланцева, В. П. Чебаков, Л. А. Кобцева // Успехи современного естествознания. – 2014. – № 11-2. – С. 49–53.</li>
<li>Кощаев, А. Г. Биотехнология производства и применение функциональных кормовых добавок для птицы : дисс. &#8230; д-ра биол. наук : 16.00.04 / Кощаев Андрей Георгиевич. – 2008. – 425 с.</li>
<li>Кудрявцев, А. А. Клиническая гематология животных / А. А. Кудрявцев, Л. А. Кудрявцева. – М. : Колос, 1973. – 376 с.</li>
<li>Лабинская, А. С. Микробиология с техникой микробиологических исследований / А. С. Лабинская. – М. : Медицина, 1978. – 394 с.</li>
<li>Липатов, Н. Н. Молочная промышленность в XXI веке / Н. Н. Липатов // Пищевая и перерабатывающая промышленность. 1987. № 10. – С. 4.</li>
<li>Мартынов, А. В. Потенциал молочной продукции пониженной жирности / А. В. Мартынов // Молочная промышленность. 1999. № 8. – С. 1112.</li>
<li>Методика проведения научных и производственных исследований по кормлению сельскохозяйственной птицы : рекомендации / Ш. А. Имангулов, И. А. Егоров, Т. М. Околелова, А. Н. Тишенков. – Сергиев Посад : ВНИТИП, 2013. – 52 с.</li>
<li>Митрохин, С. Д. Микробиологические и биохимические показатели изменения микробной экологии толстой кишки крыс под влиянием рифампицина / С. Д. Митрохин, Б. А. Шендеров // Антибиотики и химиотерапия. ‒ 1989. ‒ Т. 34, № 6. ‒ С. 448‒452.</li>
<li>МУ 2.3.2.2789-10. Методические указания по санитарно-эпидемио­логической оценке безопасности и функционального потенциала пробиотических микроорганизмов, используемых для производства пищевых продуктов. − М. : Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011. – 104 с.</li>
<li>Назырова, Н. Р. Антибиотикорезистентность штаммов, входящих<br />
в состав препаратов-пробиотиков / Н. Р. Назырова, Р. Х. Тимербаева, М. М. Туйгунов // Химия, химическая технология и биотехнология на рубеже тысячелетий : материалы IV Междунар. науч. конф. – Томск, 2006. – Т 2. – С. 436–438.</li>
<li>Назырова, Н. Р. Влияние экстрактов лекарственных растений на биологическую активность штамма <em>Lactobacterium plantarum</em> 8P-A3 : дисс. &#8230; канд. биол. наук : 03.00.07, 03.00.04 / Назырова Наиля Рамилевна. ‒ Уфа, 2007. ‒ 147 с.</li>
<li>Нуртдинова, А. Н. Разработка и изучение биологических свойств комплексного препарата ‒ Бифидоспорина : дисс. &#8230; канд. мед. наук : 03.00.07 / Нуртдинова Айгуль Наилевна. ‒ Уфа, 2003. ‒ 110 с.</li>
<li>Осипова, И. Г. Изучение эффективности пробиотиков на экспериментальных моделях / И. Г. Осипова, Е. А. Васильева // Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней : материалы Всеросс. науч.-практ. конф. «Вакцинология 2006». ‒ М., 2006. ‒ С. 75‒76.</li>
<li>Петров, Л. Н. Основы конструирования пробиотиков повышенной терапевтической активности / Л. Н. Петров // Пробиот. микроорганизмы – современное состояние вопроса и перспективы использования : тез. докл. Междунар. науч.-практ. конф. – М., 2002. – С. 12.</li>
<li>Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов: Ветеринарное законодательство. – Т. 4. – М. : Агропромиздат, 1988. – 38 с.</li>
<li>Романчук, Л. А. Изучение влияния новых антимикробных препаратов, применяемых в комплексе с общей гнотобиологической изоляцией, на выжимаемость и микрофлору кишечника тотально облученных мышей / Л. А. Романчук, Д. А. Елизбаращвили, Г. А. Гинодман // ЖМЭИ. ‒ 1991. ‒ № 6. ‒ С. 4‒6.</li>
<li>Смирнов, А. М. Научно-методологические аспекты исследования токсических свойств фармакологических лекарственных средств для животных / А. А. Смирнов, В. И. Дорожин. ‒ М. : Россельхозакадемия, 2008. – 120 с.</li>
<li>Смирнова, Н. П. Определение бактерицидной активности сыворотки крови методом фотонефелометрии / Н. П. Смирнова, Т. А. Кузьмина // Журн. микробиологии. – 1966. – № 4. – С. 8–13.</li>
<li>СП 2.2.1.3218-14. Санитарно-эпидемиологические правила. Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев). ‒ М., 2014. – 7 с.</li>
<li>Способ определения активности лизоцима в слюне и сыворотке крови / В. И. Стогник [и др.] // Лаб. дело. – 1989. – № 8. – С. 54.</li>
<li>Сультимова, Т. Д. Выделение активных бактериоцинобразующих лактококков и их практическое использование : автореф. дисс. … канд. биол. наук : 03.00.07 / Сультимова Татьяна Доржиевна. – М., 2006. – 30 с.</li>
<li>Токсикологическая оценка новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных : метод. указания / сост. А. И. Тишков, М. Н. Аргунов, Н. И. Ляшко. – Воронеж : ВНИИНБЖ, 1987. – 23 с.</li>
<li>Фисинин, В. И. Использование нетрадиционных кормов в рационе птицы / В. И. Фисинин, И. А. Егоров, Т. Н. Ленкова // Птица и птицепродукты. – 2016. – № 4 – С. 1418.</li>
<li>Хабриев, Р. У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Р. У. Хабриев. – М. : ОАО «Медицина», 2005. – 2-изд., перераб. и доп. – 832 с.</li>
<li>Шацкая, Н. Г. Технологические аспекты производства молочных продуктов с низкими аллергическими свойствами и гипоаллергенных продуктов / Н. Г. Шацкая, П. Ф. Крашенинин, Г. Ю. Сажинов // Вопросы питания. 1994. № 1/2. – С. 49.</li>
<li>Шендеров, Б. А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Т. I: Микрофлора человека и животных и ее функции / Б. А. Шендеров. – М. : ГРАНТЬ, 1998. 288 с.</li>
<li>(<em>Lactobacillus planetarium</em> subsp. <em>plantarum</em>) Zhang-LL Bacteriocin and Nisin Composite Bacteriostatic Agent and its Use in Chilled Meat. (CN104531561 A) / Zhang, Hongxing, Liu, Hui, Bai, Yongqiang, Xu, Hongyuan, Duan, Huixia, Hao, Yanfang, Xie, Yuanhong, Jin, Junhua, Xiong, Lixia, Gao, Xiuzhi, 2015.</li>
<li>‘Normalization’ of germfree mice with anaerobically cultured caecal<br />
flora of ‘normal’ mice / J. P. Koopman [et al.] // Lab Anim. – 1984. – Vol. 18. –<br />
Р. 188–194.</li>
<li>16s rRNA gene-based analysis of mucosa-associated bacterial community and phylogeny in the chicken gastrointestinal tracts: From crops to ceca / J. Gong<br />
[et al.] // FEMS Microbiol Ecol. – 2007. – Vol. 59. – Р. 147–157.</li>
<li>A bacteriocin and food preservative, inhibits head and neck cancer tumorigenesis and prolongs survival / P. Kamarajan, T. Hayami, B. Matte, Y. Liu, T. Danciu, A. Ramamoorthy, F. Worden, S. Kapila, Y. Kapila, Z. P. Nisin // PLoS One. – 2015. – Vol. 10. – e0131008.</li>
<li>A system for heterologous expression of bacteriocins in <em>Lactobacillus sake</em> / L. Axelsson, T. Katla, M. Bjørnslett, V. G. Eijsink, A. Holck // FEMS Microbiol. Lett. – 1998. – Vol. 168. – Р. 137–143.</li>
<li>A tale of three next generation sequencing platforms: comparison of Ion Torrent, Pacific Biosciences and Illumina MiSeq sequencers / M. A. Quail [et al.] // BMC Genomics. – 2012. – Vol. 13. – Р. 341.</li>
<li>Adeola, O. Opportunities and challenges in using exogenous enzymes to improve non-ruminant animal production / O. Adeola, A. J. Cowieson // J Animal Science. – 2011. – Vol. 89. – P. 3189–3218.</li>
<li>Advances and needs for endotoxin-free production strains / S. Taguchi,<br />
T. Ooi, K. Mizuno, H. Matsusaki // Appl Microbiol Biotechnol. – 2015. –<br />
Vol. 99(22). – Р. 9349-9360.</li>
<li>Alloui, M. N. The usefulness of prebiotics and probiotics in modern poultry nutrition: a review / M. N. Alloui, W. Szczurek, S. Swiatkiewicz // Annals of Animal Science. – 2013. – Vol. 13. – P. 17–32.</li>
<li>An antimicrobial peptide-3: effects on growth perfomance, nutrient retention, intestinal and faecal microflora and intestinal morphology of broilers /<br />
S. C. Choi, S. L. Ingale, J. S. Kim, Y. K. Park, I. K. Kwon, B. J. Chae // British Poultry Science. – 2013. – Vol. 54. – P. 738–746.</li>
<li>Analysis, optimization and verification of Illumina-generated 16S rRNA gene amplicon surveys / M. C. Nelson, H. G. Morrison, J. Benjamino, S. L. Grim,<br />
J. Graf // PLoS One. – 2014. – Vol. 9(4). – e94249.</li>
<li>Antibiotic alternatives: the substitution of antibiotics in animal husband­dry? / G. Cheng, H. Hao, S. Xie, X. Wang, M. Dai, L. Huang, Z. Yuan // Frontiers Microbiology. – 2014. – Vol. 5, аrticle 217.</li>
<li>Antimicrobial activity of lactic acid bacteria against pathogenic and spoilage microorganism isolated from food and their control in wheat bread / D. Cizeikiene, G. Juodeikeine, A. Paskevicius, E. Bartkiene // Food Control. – 2013. –<br />
Vol. 31. – Р. 539–545.</li>
<li>Apajalahti, J. Characteristics of the gastrointestinal microbial communities, with special reference to the chicken / J. Apajalahti, A. Kettunen, H. Graham // Worlds Poult Sci J. – 2004. – Vol. 60. – Р. 223–232.</li>
<li>Bacteria within the gastrointestinal tract microbiota correlated with improved growth and feed conversion: Challenges presented for the identification of performance enhancing probiotic bacteria / D. Stanley, R. J. Hughes, M. S. Geier,<br />
R. J. Moore // Front. Microbiol. – 2016. – Vol. 7. – Р. 187.</li>
<li>Bacteriocins from lactic acid bacteria: purification, properties and use as biopreservatives / J. L. Parada, C. R. Caron, A. B. P. Medeiros, C. R. Soccol // Braz. Arch. Biol. Technol. – 2007. – Р. 521–542.</li>
<li>Bacteriocins of Lactobacillus gasseri K7 – Monitoring of gassericin K7 Aand B genes&#8217; expression and isolation of an active component / A. Mavriˇc,<br />
G. Tompa, A. Trmˇci&#8217;c, I. Rogelj, B. B. Matijaˇsi&#8217;c // Process Biochem. – 2014. – Vol. 49. – Р. 1251–1259.</li>
<li>Bacteriocins: Classification, synthesis, mechanism of action and resistance development in food spoilage causing bacteria / R. Kumariya, A. K. Garsa,<br />
Y. S. Rajput, S. K. Sood, N. Akhtar, S. Patel // Microb Pathog. – 2019. – Vol. 128. – Р. 171–177.</li>
<li>Bactofencin A, a new type of cationic bacteriocin with unusual immunity / E. F. O&#8217;Shea, P. M. O&#8217;Connor, O. O&#8217;Sullivan, P. D. Cotter, R. P. Ross, C. Hill //<br />
mBio 4. – 2013. – e00498–e00513.</li>
<li>Beasley, S. Nisin-producing Lactococcus lactis strains isolated from<br />
human milk / S. Beasley, P. Saris // Appl. Environ. Microbiol. – 2004. – Vol. 70. –<br />
P. 5051–5053.</li>
<li>Bedford, M. R. Exogenous enzymes for pigs and poultry / M. R. Bedford, H. Schulze // Nutrition Research Reviews. – 1998. – Vol. 11. – P. 91–114.</li>
<li>Benefits and Inputs From Lactic Acid Bacteria and Their Bacteriocins as Alternatives to Antibiotic Growth Promoters During Food-Animal Production /<br />
N. Vieco-Saiz, Y. Belguesmia, R. Raspoet, E. Auclair, F. Gancel, I. Kempf,<br />
D. Drider // Front Microbiol. – 2019. – Vol. 10. – Р. 57.</li>
<li>Bile acid metabolism by colonic bacteria in continuous culture: effect of starch and pH / S. U. Christl, H. P. Bartram, A. Paul, E. Kelber, W. Scheppach,<br />
H. Kasper // Ann Nutrit Metabol. – 1997. – Vol. 41. – Р. 45–51.</li>
<li>Biodiversity of lactic acid bacteria / W. Liu, H. Pang, H. Zhang, Y. Cai // In: Lactic Acid Bacteria / Y. Zhang, Y. Cai (Eds.). – Springer Science +<br />
Business Media, Dordrecht, The Netherlands, 2014. – Р. 103–203. – doi : https://doi.org/10.1007/978-94-017-8841-0_2.</li>
<li>Borda-Molina, D. Current perspective of the chicken gastrointestinal tract and its microbiome / D. Borda-Molina, J. Seifert, A. Camarinha-Silva // Comput Struct Biotechnol J. – 2018. – Vol. 16. – Р. 131–139.</li>
<li>Borda-Molina, D. Current perspectives of the chicken gastrointestinal tract and its microbiome / D. Borda-Molina, J. Seifert, A. Camarinha-Silva // Comput. Struct. Biotechnol. J. – 2018. – Vol. 16. – Р. 131–139.</li>
<li>Cellulose nanofiber (CNF)-sakacin-A active material: production, characterization and application in storage trials of smoked salmon / C. Mapelli, A. Musatti, A. Barbiroli, S. Saini, J. Bras, D. Cavicchioli, M. Rollini // J Sci Food Agric. – 2019, Aug 15. – Vol. 99(10). – Р. 4731–4738.</li>
<li>Characteristics and genetic determinant of a hydrophobic peptide bacteriocin, carnobacteriocin A, produced by Carnobacterium piscicola LV17A / R. Worobo, T. Henkel, M. Sailer, K. Roy, J. Vederas, M. Stiles // Microbiology. – 1994. –<br />
Vol. 140. – P. 517–526.</li>
<li>Characterization and heterologous expression of a class IIa bacteriocin, plantaricin 423 from Lactobacillus plantarum 423, in Saccharomyces cerevisiae /<br />
C. A. Van Reenen, M. L. Chikindas, W. H. Van Zyl, L. M. Dicks // Int. J. Food Microbiol. – 2003. – Vol. 81. – Р. 29–40.</li>
<li>Characterization of leucocin A-UAL 187 and cloning of the bacteriocin gene from Leuconostoc gelidum / J. Hastings, M. Sailer, K. Johnson, K. Roy,<br />
J. Vederas, M. Stiles // J. Bacteriol. – 1991. – Vol. 173. – P. 7491–7500.</li>
<li>Characterization of leucocin A-UAL 187 and cloning of the bacteriocin gene from Leuconostoc gelidum / J. W. Hastings, M. Sailer, K. Johnson, K. L. Roy, J. C. Vederas, M. E. Stiles // J. Bacteriol. – 1991. – Vol. 173. – Р. 7491–7500.</li>
<li>Characterization of the mesB gene and expression of bacteriocins by Leuconostoc mesenteroides Y105 / Y.Hechard, J. M. Berjeaud, Y. Cenatiempo // Curr. Mi crobiol. – 1999. – Vol. 39. – P. 265–269.</li>
<li>Characterization, production, and purification of leucocin H, a two-peptide bacteriocin from Leuconostoc MF215B / H. Blom, T. Katla, A. Holck, K. Sletten,<br />
L. Axelsson, H. Holo // Curr. Microbiol. – 1999. – Vol. 39. – P. 43–48.</li>
<li>Characterizing and measuring bias in sequence data / M. G. Ross [et al.] // Gen Biol. – 2013. – Vol. 14. – R51.</li>
<li>Chatterjee, M. Bacteriocin in harmony with ABC transporter exhibits antimicrobial activity / M. Chatterjee, A. Raichaudhuri // EC Microbiol. – 2017. –<br />
Vol. 8. – Р. 3–10.</li>
<li>Chemical and genetic characterization of bacteriocins produced by Carnobacterium piscicola LV17B / L. Quadri, M. Sailers, K. L. Ron, J. C. Vederass,<br />
M. Stiles // J. Biol. Chem. – 1994. – Vol. 269. – P. 12204–12211.</li>
<li>Chicken Gut Microbiota: Importance and Detection Technology // Front Vet Sci. – 2018. – Vol. 5. – Р. 254.</li>
<li>Class IIa Bacteriocins: Current Knowledge and Perspectives / Y. Belguesmia, K. Naghmouchi, N.-E. Chihib, D. Drider. – 2011.</li>
<li>Class III bacteriocin helveticin-M causes sublethal damage on target cells through impairment of cell wall and membrane / Z. Sun, X. Wang, X. Zhang, H. Wu, Y. Zou, P. Li, C. Sun, W. Xu, F. Liu, D. Wang // J. Ind. Microbiol. Biotechnol. – 2018. – Vol. 45.</li>
<li>Classification of bacteriocins from grampositive bacteria / M. C. Rea,<br />
R. P. Ross, P. D. Cotter, C. Hill // In: Prokaryotic Antimicrobial Peptides / D. Drider, S. Rebuffat (Eds.). – Springer, New York, NY, 2011. – Р. 29–53.</li>
<li>Cloning and expression of synthetic genes encoding the broad antimicrobial spectrum bacteriocins SRCAM 602, OR-7, E-760, and L-1077, by recombinant Pichia pastoris / S. Arbulu, J. J. Jiménez, L. Gútiez, L. M. Cintas, C. Herranz,<br />
P. E. Hernández // BioMed. Res. Int. – 2015. – Vol. 1–11 (767183).</li>
<li>Cloning and heterologous production of Hiracin JM79, a Sec-Dependent bacteriocin produced by Enterococcus hirae DCH5, in lactic acid bacteria and Pichia pastoris / J. Sánchez, J. Borrero, B. Gómez-Sala, A. Basanta, C. Herranz,<br />
L. M. Cintas, P. E. Hernández // Appl. Environ. Microbiol. – 2008. – Vol. 74. –<br />
Р. 2471–2479.</li>
<li>Cloning strategies for heterologous expression of the bacteriocin enterocin A by Lactobacillus sakei Lb790, Lb. plantarum NC8 and Lb. casei CECT475 /<br />
J. J. Jiménez, D. B. Diep, J. Borrero, L. Gútiez, S. Arbulu, I. F. Nes, C. Herranz,<br />
L. M. Cintas, P. E. Hernández // Microb. Cell Factories. – 2015. – Vol. 14. – Р. 166.</li>
<li>Cloning, expression, and nucleotide sequence of genes involved in production of lactococcin DR, a bacteriocin from lactococcus lactis subsp. lactis /<br />
A. Rince, S. Le Pogam, D. Thuault, C. M. Bourgeois, J. P. Le Pennec // Appl. Environ. Microbiol. – 1994. – Vol. 60. – P. 1652–1657.</li>
<li>Cloning, overexpression, purification of bacteriocin enterocin-B and structural analysis, interaction determination of enterocin-A, B against pathogenic bacteria and human cancer cells / D. Ankaiah, E. Palanichamy, C. B. Antonyraj,<br />
R. Ayyanna, V. Perumal, S. B. Ahamed, V. Arul // Int J Biol Macromol. – 2018. – Vol. 116. – Р. 502–512.</li>
<li>Cloning, production, and functional expression of the bacteriocin enterocin A, produced by Enterococcus faecium T136, by the yeasts Pichia pastoris, Kluyveromyces lactis, Hansenula polymorpha, and Arxula adeninivorans / J. Borrero,<br />
G. Kunze, J. J. Jiménez, E. Böer, L. Gútiez, C. Herranz, L. M. Cintas, P. E. Hernández // Appli. Environ. Microbiol. – 2012. – Vol. 78. – Р. 5956–5961.</li>
<li>Comparison of Next-Generation sequencing systems / L. Liu [et al.] //<br />
J Biomed Biotechnol. – 2012. – 251364.</li>
<li>Comparison of three next-generation sequencing platforms for metagenomic sequencing and identification of pathogens in blood / K. G. Frey, J. E. Herrera-Galeano, C. L. Redden, T. V. Luu, S. L. Servetas, A. J. Mateczun,<br />
V. P. Mokashi, K. A. Bishop-Lilly // BMC Genomics. – 2014. – Vol. 5. – Р. 96.</li>
<li>Cuozzo, S. Methods for the detection and concentration of bacteriocins produced by lactic acid bacteria / S. Cuozzo, F. Sesma // Food Microbiol. – 2001. – Vol. 14. – Р. 141–146.</li>
<li>De Vuyst, L. Bacteriocins from Lactic Acid Bacteria: Production, Purification, and Food Applications / L. De Vuyst, F. Leroy // Mol. Microbiol. Biotechnol. – 2007. – Vol. 13. – P. 194–199.</li>
<li>Deciphering chicken gut microbial dynamics based on high-throughput 16S rRNA metagenomics analyses / M. A. Shaufi, C. C. Sieo, C. W. Chong, H. M. Gan, Y. W. Ho // Gut Pathol. – 2015. – Vol. 7. – Р. 4.</li>
<li>Development of the chick microbiome: how early exposure influences future microbial diversity / A. L. Ballou [et al.] // Front Veter Sci. – 2016. – Vol. 3. –<br />
Р. 2.</li>
<li>Dibner, J. J. Antibiotic growth promoters in agriculture history and mode of action / J. J. Dibner, J. D. Richards // Poult Sci. – 2005. – Vol. 84. – Р. 634–643.</li>
<li>Dibner, J. J. Use of organic acids as a model to study the impact of gut microflora on nutrition and metabolism / J. J. Dibner, P. Buttin // J Appl Poultry Res. – 2002. – Vol. 11. – P. 453–463.</li>
<li>Dicks, L. M. T. Characterization and Cloning of the Genes Encoding Enterocin 1071A and Enterocin 1071B, Two Antimicrobial Peptides Produced by Enterococcus faecalis BFE 1071 / L. M. T. Dicks, E. Balla, M. Toit // Appl. Environ. Microbiol. – 2013. – Vol. 93, № 4. – P. 1298–1304.</li>
<li>Diep, D. B. Characterization of the locus responsible for the bacteriocin production in Lactobacillus plantarum C11 / D. B. Diep, L. S. Havarstein, I. F. Nes // J. Bacteriol. – 1996. – Vol. 178. – P. 4472–4483.</li>
<li>Divercin V41, a new bacteriocin with two disulphide bonds produced by Carnobacterium divergens V41: primary structure and genomic organization /<br />
A. Métivier, M. Pilet, X. Dousset, O. Sorokine, P. Anglade, M. Zagorec, J. Piard,<br />
D. Marion, Y. Cenatiempo, E. Fré maux // Microbiology. – 1998. – Vol. 144. –<br />
P. 2837–2844.</li>
<li>Diversity and succession of the intestinal bacterial community of the maturing broiler chicken / J. Lu, U. Idris, B. Harmon, C. Hofacre, J. J. Maurer,<br />
M. D. Lee // Appl Environ Microbiol. – 2003. – Vol. 69. – Р. 6816–6824.</li>
<li>Effect of antibiotic withdrawal in feed on chicken gut microbial dynamics, immunity, growth performance and prevalence of foodborne pathogens / S. Kumar [et al.] // PloS ONE. – 2018. – Vol. 13. – e0192450.</li>
<li>Effect of bacillus subtilis cgmcc 1.1086 on the growth performance and intestinal microbiota of broilers / Y. Li, Q. Xu, Z. Huang, L. Lv, X. Liu, C. Yin,<br />
H. Yan, J. Yuan // J. Appl. Microbiol. – 2016. – Vol. 120. – Р. 195–204.</li>
<li>Effect of buturic acid on perfomance, gastrointestinal tract helth and carcass characteristics in broiler chickens / A. K. Panda, S. V. Rama, M. N. Raju,<br />
G. Shyam Sunder // Asian-Australasin Journal Animal Science. – 2009. – Vol. 22. – P. 1026–1031.</li>
<li>Effect of carbohydrase and protease on growth performance and gut health of young broilers fed diets containing rye, wheat, and feather meal / F. Yan,<br />
J. J. Dibner, C. D. Knight, M. Vazquez-Anon // Poult Sci. – 2017. – Vol. 96(4). –<br />
Р. 817–828.</li>
<li>Effect of citric acid supplemented diets on aflatoxin degradation, growth perfomance and serum parameters in broiler chickens / L. Salgado-Transito,<br />
J. C. Rio-Garcia, J. L. Moreno-Martinez, A. Mendez-Albores // Archivos de Medicina Veterinaria. – 2011. – Vol. 43. – P. 215–222.</li>
<li>Effect of combination of citric acid and microbial phytase on digestibility of calcium, phosphorous and mineralization parameters of tibia bone in broilers /<br />
Y. E. Nezhad, J. G. Gale-Kandi, T. Farahvash, A. R. Yeganeh // African Journal Biotechnology. – 2011. – Vol.10. – P. 15089–15093.</li>
<li>Effect of dietary supplementation of prebiotics and probiotics on intestinal microarchitecture in broilers reared under cyclic heat stress / S. Ashraf, H. Zaneb,<br />
M. S. Yousaf, A. Ijaz, M. U. Sohail, S. Muti, M. M. Usman, S. Ijaz, H. Rehman //<br />
J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. – 2013. – Vol. 97. – Р. 68–73.</li>
<li>Effect of formic acid on performance, digestibility, intestinal histomorphology and plasma metabolite levels of broiler chickens / F. Hernandez, J. Madrid, V. Garcia, J. Orendo, M. D. Megias // British Poultry Science. – 2006. – Vol. 47. –<br />
P. 50–56.</li>
<li>Effect of supplementation of prebiotic mannan-oligosaccharides and probiotic mixture on growth perfomance of broilers subjected to chronic heat stress /<br />
M. U. Sohail, M. E. Hume, J. A. Byrd, D. J. Nisbet, A. Ijaz, M. Z. Shabbir,<br />
H. Rehman // Poultry Science. – 2012. – Vol. 91. – P. 2235–2240.</li>
<li>Effects of dietary fat source and subtherapeutic levels of antibiotic on the bacterial community in the ileum of broiler chickens at various ages / A. Knarreborg, M. A. Simon, R. M. Engberg, B. B. Jensen, G. W. Tannock // Appl Environ Microbiol. – 2002. – Vol. 68. – Р. 5918–5924.</li>
<li>Effects of dietary fructooligosaccharide on digestive enzyme activities, intestinal microflora and morphology of male broilers / Z. R. Xu, C. H. Hu, M. S. Xia, X. A. Zhan, M. Q. Wang // Poult Sci. – 2003. – Vol. 82. – Р. 1030–1036.</li>
<li>Effects of dietary incusion of probiotic and synbiotic on growth performance, organ weights, and intestinal histomorphology of broiler chickens /<br />
W. A. Awad, K. Ghareeb, S. Abdel-Raheem, J. Bohm // Poultry Science. – 2009. – Vol. 88. – P. 49–55.</li>
<li>Effects of dietary prebiotics, probiotics and synbiotics on perfomance, caecal bacterial populations and caecal fermentation concentrations of broiler chickens / S. Mookiah, C. C. Sieo, K. Ramasamy, N. Abdullah, Y. W. Ho // J Science Food Agriculture. – 2014. – Vol. 94. – P. 341–348.</li>
<li>Effects of enterococcus faecium and dried whey on broiler performance, gut histomorphology and intestinal microbiota / H. E. Samli, N. Senkoylu, F. Koc,<br />
M. Kanter, A. Agma // Arch. Anim. Nutr. – 2007. – Vol. 61. – Р. 42–49.</li>
<li>Effects of galacto-oligosaccharides and a Bifidobacteria lactis-based probiotic strain on the growth performance and fecal microflora of broiler chickens /<br />
S. J. Jung, R. Houde, B. Baurhoo, X. Zhao, B. H. Lee // Poult Sci. – 2008. –<br />
Vol. 87. – Р. 1694–1699.</li>
<li>Effects of swine gut antimicrobial peptides on the intestinal mucosal immunity in specific pathogen –free chickens / D. Wang, W. Ma, R. She, Q. Sun,<br />
Y. Liu, Y. Hu, L. Liu, Y. Yang, K. Peng // Poultry Science. – 2009. – Vol. 88. –<br />
P. 967–974.</li>
<li>Effects of synbiotic feed additive in comparison to antibiotic growth promoter on perfomance and health status of broilers / M. Mohnl, Y. Acosta Aragon,<br />
A. Acosta Ojeda, B. Rodriguez Sanchez, S. Pasteiner // Poultry Science. – 2007. – Vol. 86 (suppl. 1). – P. 217.</li>
<li>Error-correcting barcoded primers for pyrosequencing hundreds of samples in multiplex / M. Hamady, J. J. Walker, J. K. Harris, N. J. Gold, R. Knight // Nat Methods. – 2008. – Vol. 5. – Р. 235–237.</li>
<li>European Parliament. EC 248/97. Regulation of the European Parliament and of the Council concerning novel foods and novel food ingredients : Official Journal. – 1997. – Vol. 14. – Р. 1–7.</li>
<li>Farias, R. N. Letters in Purification and N-terminal acid sequence of enterocin CRL35, a pediocin-like bacteriocin produced by Enterococcus faecium CRL35 / R. N. Farias, M. E. Farias, R. Holgado // Appl. Microbiol. – 2005. – Vol. 56. –<br />
P. 417–419.</li>
<li>Feed-additive probiotics accelerate yet antibiotics delay intestinal microbiota maturation in broiler chicken / P. Gao, C. Ma, Z. Sun, L. Wang, S. Huang,<br />
X. Su, J. Xu, H. Zhang // Microbiome. – 2017. – Vol. 5. – Р. 91.</li>
<li>Fimland, G. Comparative studies of immunity proteins of pediocin-like bacteriocins / G. Fimland, Eijsink, J. Nissen&#8217;Meyer // Microbiology. – 2002. –<br />
Vol. 148. – P. 3661–3670.</li>
<li>Fosgerau, K. Peptide therapeutics: current status and future directiuons /<br />
K. Fosgerau, T. Hoffmann // Drug Discovery Today. – 2015. – Vol. 20. –<br />
P. 122–128.</li>
<li>Franz, C. M. Production and characterization of enterocin 900, a bacteriocin produced by Enterococcus faecium BFE 900 from black olives / C. M. Franz,<br />
U. Schillinger, W. H. Holzapfel // Int. J. Food Microbiol. – 1996. – Vol. 29. –<br />
Р. 255–270.</li>
<li>Gaggia, F. Probiotics and prebiotics in animal feeding for safe food production / F. Gaggia, P. Mattarelli, B. Biavati // Inter J Food Microbiol. – 2010. –<br />
Vol. 141. – Р. 15–28.</li>
<li>Goh, H. F. Purification and characterization of bacteriocin produced by Weissella confusa A3 of Dairy Origin / H. F. Goh, K. Philip // PLoS One. – 2015. – Vol. 10.</li>
<li>Gulluce, M. Bacteriocins: promising antimicrobials. Microbial pathogens and strategies for combating them / M. Gulluce, M. Karadayi, O. Baris // In: Science, Technology and Education / A. Mendes-Vilas (Ed.). – FORMATEX, Madrid, Spain, 2013. – Р. 1016–1027.</li>
<li>Hecht, H. Structural characterization of sodium alginate and calcium<br />
alginate / H. Hecht, S. Srebnik // Biomacromolecules. ‒ 2016. ‒ Vol. 17, № 6. ‒ P. 2160‒2167.</li>
<li>Hegde, N. V. Comparison of antimicrobial resistant genes in chicken gut microbiome grown on organic and conventional diet / N. V. Hegde, S. Kariyawasam, C. DebRoy // Veter Anim Sci. – 2016. – Vol. 1. – Р. 9–16.</li>
<li>Henderson, J. Purification and primary structure of pediocin PA-1 produced by Pediococcus acidilactici PAC-1.0 / J. Henderson, A. Chopko, P. Dick van Wassenaar // Arch. Biochem. Biophys. – 1992. – Vol. 295. – P. 5–12.</li>
<li>Heterologous expression of the bacteriocin mesentericin Y105 using the dedicated transport system and the general secretion pathway / F. Biet, J. M. Berjeaud, R. W. Worobo, Y. Cenatiempo, C. Fremaux // Mircobiology. – 1998. –<br />
Vol. 144. – Р. 2845–2854.</li>
<li>Host and Environmental factors affecting the intestinal microbiota<br />
in chickens / J. G. Kers, F. C. Velkers, E. A. J. Fischer, G. D. A. Hermes,<br />
J. A. Stegeman, H. Smidt // Front Microbiol. – 2018. – Vol. 9. – Р. 235.</li>
<li>Human nutrition, the gut microbiome and the immune system / A. L. Kau, P. P. Ahern, N. W. Griffin, A. L. Goodman, J. I. Gordon // Nature. – 2011. –<br />
Vol. 474. – Р. 327–336.</li>
<li>Hurst, A. Nisin / A. Hurst // Adv. Appl. Microbiol. – 1981. – Vol. 27. –<br />
P. 85–123.</li>
<li>Huyghebaert, G. An update on alternatives to antimicrobial growth promoters for broilers / G. Huyghebaert, R. Ducatelle F. Van Immerseel // Veterinary<br />
J. – 2011. – Vol. 187. – P. 182–188.</li>
<li>Identification and characterization of potential performance-related gut microbiotas in broiler chickens across various feeding trials / V. A. Torok, R. J. Hughes, L. L. Mikkelsen, R. Perez-Maldonado, K. Balding, R. MacAlpine, N. J. Percy,<br />
K. Ophel-Keller // Appl. Environ. Microbiol. – 2011. – Vol. 77. – Р. 5868–5878.</li>
<li>Immune response of chicken gut to natural colonization by gut microflora and to Salmonella enterica serovar enteritidis infection / M. Crhanova [et al.] // Infect Immun. – 2011. – Vol. 79. – Р. 2755–2763.</li>
<li>Influence of Salmonella enterica serovar enteritidis infection on the composition of chicken cecal microbiota / P. Videnska, F. Sisak, H. Havlickova, M. Faldynova, I. Rychlik // BMC Veter Res. – 2013. – Vol. 9. – Р. 140.</li>
<li>Insights into broilers&#8217; gut microbiota fed with phosphorus, calcium and phytase supplemented diets / D. Borda-Molina, M. Vital, V. Sommerfeld, M. Rodehutscord, A. Camarinha-Silva // Front Microbiol. – 2016. – Vol. 7. – Р. 2033.</li>
<li>Insights into the biodiversity of the gut microbiota of broiler chickens /<br />
L. Mancabelli [et al.] // Environ Microbiol. – 2016. – Vol. 18 – Р. 4727–4738.</li>
<li>Intestinal function and gut microflora of broiler chickens as influenced by cereal grains and microbial enzyme supplementation / M. D. Shakouri, P. A. Iji,<br />
L. L. Mikkelsen, A. J. Cowieson // J Anim Physiol Anim Nutrit. – 2009. – Vol. 93. – Р. 647–658.</li>
<li>Jiang, H. Heterologous expression and purification of plantaricin NC8,<br />
a two-peptide bacteriocin against Salmonella spp. from Lactobacillus plantarum ZJ316 / H. Jiang, P. Li, Q. Gu // Protein Expr. Purif. – 2016. – Vol. 127. – Р. 28–34.</li>
<li>Juturu, V. Heterologous protein expression in Pichia pastoris: Latest research progress and applications / V. Juturu, J. C. Wu // Chembiochem. – 2018. – Vol. 19. – Р. 7–21.</li>
<li>Kim, J.W. Dietary organic acids for broiler chickens: a review / J. W. Kim, J. H. Kim, D. Y. Kil // Colombian Journal Animal Science and Veterinary Medicine. – 2015. – Vol. 28. – P. 109–123.</li>
<li>Kogut, M. H. Spatial and temporal changes in the broiler chicken cecal and fecal microbiomes and correlations of bacterial taxa with cytokine gene expression / M. H. Kogut, B. B. Oakley // Front Veter Sci. – 2016. – Vol. 3. – Р. 11.</li>
<li>Kohl, K. D. Diversity and function of the avian gut microbiota /<br />
K. D. Kohl // J. Compar Physiol B Biochem Syst Environ Physiol. – 2012. –<br />
Vol. 182. – Р. 591–602.</li>
<li>Kraus, A. Molecular Mechanisms of Bacterial Resistance to Antimicrobial Peptides / A. Kraus, D. Peschel. – Berlin; Heidelberg, 2006. – P. 231–250.</li>
<li>Kumar, S. Revolution in rumen microbiology / S. Kumar, D. W. Pitta //<br />
In: Rumen Microbiology: From Evolution to Revolution / A. K. Puniya, R. Singh,<br />
D. N. Kamra, ediotrs. – New Delhi : Springer, 2015. – Р. 357–379.</li>
<li>Kumar, V. Halocin HA1: an archaeocin produced by the haloarchaeon Haloferax larsenii HA1 / V. Kumar, S. K. Tiwari // Process Biochem. – 2017. –<br />
Vol. 61. – Р. 202–208.</li>
<li>Lactobacillus alvi sp. nov., isolated from the intestinal tract of chicken /<br />
H. J. Kim, S. J. Eom, S. J. Park, C. J. Cha, G. B. Kim // FEMS Microbiol Lett. – 2011. – Vol. 323. – Р. 83–87.</li>
<li>Lactococcin MMFII, a novel class IIa bacteriocin produced by Lactococcus lactis MMFII, isolated from a Tunisian dairy product / M. Ferchichi, J. Frère, K. Mabrouk, M. Manai // FEMS Microbiol. Lett. – 2001. – Vol. 205. – P. 49–55.</li>
<li>Lagkouvardos, I. Cultured microbes represent a substantial fraction of the human and mouse gut microbiota / I. Lagkouvardos, J. Overmann, T. Clavel //<br />
Gut Microb. – 2017. – Vol. 8. – Р. 493–503.</li>
<li>Lee, S. G. Purification and characterization of mejucin, a new bacteriocin produced by Bacillus subtilis SN7 / S. G. Lee, H. C. Chang // LWT Food. Sci. Technol. – 2018. – Vol. 87. – Р. 8–15.</li>
<li>Lopez-Lara, I. M. Bacterial lipid diversity / I. M. Lopez-Lara, O. Geiger // Biochim. Biophys. Acta Mol. Cell Biol. Lipids. 2017. – Vol. 1862. – Р. 1287–1299.</li>
<li>Maldonado, A. Purification and genetic characterization of plantaricin NC8, a novel coculture-inducible two-peptide bacteriocin from Lactobacillus plantarum NC8 / A. Maldonado, J. Ruiz&#8217;Barba, R. Jiménez&#8217;Díaz // Appl. Environ. Microbiol. – 2003. – Vol. 69. – P. 383–389.</li>
<li>Markowiak, P. The role of probiotics, prebiotics and synbiotics in animal nutrition / P. Markowiak, K. Slizewska // Gut Pathog. – 2018. – Vol. 10. – Р. 21.</li>
<li>Martinez, B. Lactococcin 972 : a homodimeric lactococcal bacteriocin whose primary target is not the plasma membrane / B. Martinez, J. E. Suarez, A. Rodriguez // Microbiology. – 1996. – Vol. 142. – P. 2393–2398.</li>
<li>MiSeq: A Next Generation Sequencing Platform for Genomic Analysis /<br />
R. K. Ravi, K. Walton, M. Khosroheidari // Methods Mol Biol. – 2018. – Vol. 1706. – Р. 223–232. – doi : 10.1007/978-1-4939-7471-9_12. Review.</li>
<li>Modifying the gastrointestinal ecology in alternatively raised poultry and the potential for molecular and metabolomic assessment / S. H. Park, I. Hanning,<br />
A. Perrota, B. J. Bench, E. Alm, S. C. Ricke // Poult Sci. – 2013. – Vol. 92. –<br />
Р. 546–561.</li>
<li>Modulations of the chicken cecal microbiome and metagenome in response to anticoccidial and growth promoter treatment / J. L. Danzeisen, H. B. Kim,<br />
R. E. Isaacson, Z. J. Tu, T. J. Johnson // PLoS ONE. – 2011. – Vol. 6. – e27949.</li>
<li>Molecular analysis of bacterial populations in the ileum of broiler chickens and comparison with bacteria in the cecum / J. Gong [et al.] // FEMS Microbiol Ecol. – 2002. – Vol. 41. – Р. 171–179.</li>
<li>Molecular approaches to the analysis of gastrointestinal microbial ecosystems / H. J. Flint [et al.] // In: Molecular Approaches to the Analysis of Gastrointestinal Microbial Ecosystems / G. C. Perry, editor. – Oxford : CABI Publishing, 2006. – Р. 107–123.</li>
<li>Muriana, P. M. Purification and partial characterization of lactacin F, a bacteriocin produced by Lactobacillus acidophilus 11088 / P. M. Muriana, T. R. Klaenhammer // Appl. Environ. Microbiol. – 1991. – Vol. 57. – P. 114–121.</li>
<li>Next generation sequencing: the future of molecular genetics in poultry production and food safety / S. Diaz-Sanchez, I. Hanning, S. Pendleton, D. D&#8217;souza // Poult Sci. – 2013. – Vol. 92. – Р. 562–572.</li>
<li>Nilsen, T. Enterolysin A, a cell wall degrading bacteriocin from Enterococcus faecalis LMG 2333 / T. Nilsen, I. F. Nes, H. Holo // Appl. Environ. Microbiol. – 2003. – Vol. 69. – Р. 2975–2984.</li>
<li>Nisin is an effective inhibitor of Clostridium difficile vegetative cells and spore germination / C. Le Lay, L. Dridi, M. G. Bergeron, M. Ouellette, I. Fliss //<br />
J. Med. Microbiol. – 2016. – Vol. 65. – Р. 169–175.</li>
<li>Nuclear Magnetic Resonance Structure and Mutational Analysis of the Lactococcin A Immunity Protein / P. E. Kristiansen, C. Persson, V. Fuochi, A. Pedersen, G. B. Karlsson, J. Nissen-Meyer, C. Oppegård // Biochemistry. – 2016,<br />
Nov 15. – Vol. 55(45). – Р. 6250–6257.</li>
<li>Nucleotide and amino acid sequence of pap-gene (pediocin AcH production) in Pediococcus acidilactici H. / A. Motlagh, A. Bhunia, F. Szostek, T. R. Hansen, M. C. Johnson, B. Ray // Lett. Appl. Microbiol. – 1992. – Vol. 15. – P. 45–48.</li>
<li>Oscariz, J. C. Classification and mode of action of membrane-active bacteriocins produced by gram-positive bacteria / J. C. Oscariz, A. G. Pissabarro // Int. Microbiol. – 2011. – № 18. – P. 13–19.</li>
<li>Pan, D. Intestinal microbiome of poultry and its interaction with host and diet / D. Pan, Z. Yu // Gut Microbes. – 2014. – Vol. 5. – Р. 108–119.</li>
<li>Parameters and techniques to determine intestinal health of poultry as constituted by immunity, integrity, and functionality / S. H. Jeurissen, F. Lewis,<br />
J. D. Van der Klis, Z. Mroz, J. M. Rebel, A. A. Ter Huurne // Curr Issues Intest Microbiol. – 2002. – Vol. 3. – Р. 1–14.</li>
<li>Patten, J. D. Use of organic acids in broiler diets / J. D. Patten, P. W. Waldroup // Poultry Sci. – 1988. – Vol. 67. – P. 1178–1182.</li>
<li>Performance comparison of benchtop high-throughput sequencing platforms / N. J. Loman [et al.] // Nat Biotechnol. – 2012. – Vol. 30. – Р. 434–439.</li>
<li>Pourabedin, M.; Guan, L.; Zhao, X. Xylo-oligosaccharides and virginiamycin differentially modulate gut microbial composition in chickens / M. Pourabedin,<br />
L. Guan, X. Zhao // Microbiome. – 2015. – Vol. 3. – Р. 15.</li>
<li>Prevalence of temporomandibular disorder pain in Chinese adolescents compared to an age-matched Swedish population / L. Hongxing, A. N. Astrøm,<br />
T. List, I. M. Nilsson, A. Johansson // J Oral Rehabil. – 2016, Apr. – Vol. 43(4). –<br />
Р. 241–248. – doi : 10.1111/joor.12366.</li>
<li>Probiotics in Animal Nutrition: Production, Impact and Regulation /<br />
Y. S. Bajagai, A. V. Klieve, P. J. Dart, W. L. Bryden. – FAO : Rome, Italy, 2016.</li>
<li>Production of pediocin PA–1 in the methylotrophic yeast Pichia pastoris reveals unexpected inhibition of its biological activity due to the presence of collagen–like material / L. Beaulieu, D. Groleau, C. B. Miguez, J. F. Jette, H. Aomari,<br />
M. Subirade // Protein. Expr. Purifi. – 1999. – Vol. 43. – Р. 111–125.</li>
<li>Purification and amino acid sequence of lactocin 705, a bacteriocin produced by Lactobacillus casei CRL 705 / J. Palacios, G.Vignolo, M. E. Farias,<br />
A. R. de Ruis Holgado, G. Oliver, F. Sesma // Microbiol. Res. – 1999. – Vol. 154. – P. 199–204.</li>
<li>Purification and characterization of plantaricin A, a Lactobacillus plantarum bacteriocin whose activity depends on the action of two peptides / J. Nissen-Meyer, A. G. Larsen, K. Sletten, M. Daeschel, I. F. Nes // J. Gen. Microbiol. –<br />
1993. – Vol. 139. – P. 1973–1978.</li>
<li>Purification and cloning of sakacin 674, a bacteriocin from Lactobacillus sake Lb674 / A. Holck, L. Axelsson, K. Huhne, L. Krockel // FEMS Microbiol Lett. – 1994. – Vol. 115(2-3). – Р. 143–149.</li>
<li>Purification and partial characterization of a novel bacteriocin synthesized by Lactobacillus paracasei HD1-7 isolated from Chinese sauerkraut juice / J. Ge,<br />
Y. Sun, X. Xin, Y. Wang, W. Ping // Sci. Rep. – 2016. – Vol. 6. – 19366.</li>
<li>Purification, characterization and amino acid sequencing of divergicin M35: a novel class IIa bacteriocin produced by Carnobacterium divergens M35 /<br />
I. Tahiri, M. Desbiens, R. Benech, E. Kheadr, C. Lacroix, S. Thibault, D. Ouellet,<br />
I. Fliss // Int. J. Food Microbiol. – 2004. – Vol. 97. – P. 123–136.</li>
<li>QIIME allows analysis of high-throughput community sequencing data /<br />
J. G. Caporaso [et al.] // Nat Methods. – 2010. – Vol. 7. – Р. 335–336.</li>
<li>Ranganath, B. S. Optimisation of media for the growth and production of bacteriocin from Bacillus coagulans / B. S. Ranganath, T. Sharmila, B. V. Balasubramanyam // Res. Technol. Sci. Engine. – 2015. – Vol. 1. – Р. 109–114.</li>
<li>Rappe, M. S. The uncultured microbial majority / M. S. Rappe, S. J. Giovannoni // Ann Rev Microbiol. – 2003. – Vol. 57. – Р. 369–394.</li>
<li>Response of broiler chicken to dietary supplementation of organic acids /<br />
S. Adil, T. Banday, G. A. Bhat, M. Salahuddin, M. Raquib, S. Shanaz // J Central Eur Agriculture. – 2011. – Vol. 12. – P. 498–508.</li>
<li>Review: supplemention of phytase and carbohydrases to diet for poultry / T. A. Woyengo, C. M. Nyachoti // Canadian J Animal Science. – 2011. – Vol. 91. – P. 177–192.</li>
<li>Sakacin g, a new type of antilisterial bacteriocin / L. Simon, C. Fremaux, Y. Cenatiempo, J. M. Berjeaud // Appl. Environ. Microbiol. – 2002. – Vol. 68. –<br />
P. 6416–6420.</li>
<li>Sakacin-A antimicrobial packaging for decreasing Listeria contamination in thin-cut meat: preliminary assessment / A. Barbiroli, A. Musatti, G. Capretti,<br />
S. Iametti, M. Rollini // J Sci Food Agric. – 2017. – Vol. 97(3). – Р. 1042–1047.</li>
<li>Samanta, S. Comparative efficacy of an organic acid blend and bacitracin methylene disalicylate as growth promoters in broiler chickens: effect on performance, gut histology, and small intestinal milieu / S. Samanta, S. Haldar,<br />
T. K. Ghost // Vet Med International. – 2010. – 645150.</li>
<li>Scientific committee. introduction of a qualified presumption of safety (QPS) approach for assessment of selected microorganisms referred to EFSA1. Opinion of the Scientific Committee (Question No EFSA-Q-2005-293) // EFSA J. –<br />
2007. – Vol. 587. – Р. 1–16.</li>
<li>Selective enrichment of bifidobacteria in the intestinal tract of broilers by thermally produced ketoses and effect on broiler performance / J. A. Patterson,<br />
J. I. Orban, A. L. Sutton, G. N. Richards // Poult Sci. – 1997. – Vol. 76. – Р. 497–500.</li>
<li>Sharma, D. Simultaneous production of biosurfactants and bacteriocins by probiotic Lactobacillus casei MRTL3 / D. Sharma, B. Singh Saharan // Int. J. Microbiol. – 2014. – 698713 (7 pages).</li>
<li>Simple and rapid purification of pediocin PA-1 from Pediococcus pentosaceous NCDC 273 suitable for industrial application / V. B. Simha, S. K. Sood,<br />
R. Kumariya, A. K. Garsa // Microbiol. Res. – 2012. – Vol. 167. – Р. 544–549.</li>
<li>Siragusa, G. R. Brochocin-C, a new bacteriocin produced by Brochothrix campestris / G. R. Siragusa, C. N. Cutter // Appl. Environ. Microbiol. – 1993. –<br />
Vol. 59. – Р. 2326–2328.</li>
<li>Streptomyces scopuliridis sp. nov., a bacteriocin-producing soil streptomycete / M. H. Farris, C. Duffy, R. H. Findlay, J. B. Olson // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. – 2011. – Vol. 61. – Р. 2112–2116.</li>
<li>Structural analysis and characterization of lacticin Q, a novel bacteriocin belonging to a new family of unmodified bacteriocins of gram-positive bacteria /<br />
K. Fujita, S. Ichimasa, T. Zendo, S. Koga, F. Yoneyama, J. Nakayama, K. Sonomo­to // Appl. Environ. Microbiol. – 2007. – Vol. 73. – P. 2871–2877.</li>
<li>Sultimova, T. D. Bacteriocins Of Lactic Acid Bacteria / T. D. Sultimova,<br />
E. V. Zakharov // Newsletter of Essutm. – 2016. – Vol. 2(59). – P. 41–47.</li>
<li>Surugau, L. N. Peptide separation by capillary electrophoresis with ultraviolet detection: some simple approaches to enhance detection sensitivity and resolution / L. N. Surugau // The Malaysian Journal of Analytical Sciences. – 2011. –<br />
Vol. 15(2). – P. 273–287.</li>
<li>Suzuki, K. New aspects of IgA synthesis in the gut / K. Suzuki, A. Nakajima // Inter Immunol. – 2014. – Vol. 26. – Р. 489–494.</li>
<li>Tax4Fun: predicting functional profiles from metagenomic 16S rRNA data / K. P. Abhauer, B. Wemheuer, R. Daniel, P. Meinicke // Bioinformatics. – 2015. – Vol. 31. – Р. 2882–2884.</li>
<li>The chicken gastrointestinal microbiome / B. B. Oakley [et al.] // FEMS Microbiol Lett. – 2014. – Vol. 360. – Р. 100–112.</li>
<li>The continuing story of class IIa bacteriocins / D. Drider, G. Fimland,<br />
Y. Hechard, L. M. McMullen, H. Prevost // Microbiol. Mol. Biol. Rev. – 2006. –<br />
Vol. 70. – Р. 564–582.</li>
<li>The development of bactericidal yeast strains by expressing the Pediococcus acidilactici pediocin gene (pedA) in Saccharomyces cesevisiae / H. Schoeman, M. A. Vivier, M. Dutoit, L. M. T. Dicks, I. S. Pretorius // Yeast. – 1999. – Vol. 15. – Р. 647–656.</li>
<li>The effects of different thermal treatments and organic acid llevels in feed on microbial composition and activity in gastrointestinal tract of broilers / F. Boroojeni, W. Vahjen, A. Mader, F. Knorr, I. Ruhnke, I. Rohe, A. Hafees, C. Villodre, K. Manner, J. Zentek // Poultry Science. – 2014. – Vol. 93. – P. 1440–1452.</li>
<li>The membrane topology of immunity proteins for the two-peptide bacteriocins carnobacteriocin XY, lactococcin G, and lactococcin MN shows structural diversity / A. P. Britton, S. R. van der Ende, M. J. van Belkum, L. A. Martin-Visscher // Microbiologyopen. – 2019. – e957. – doi : 10.1002/mbo3.957.</li>
<li>The microbiome of the chicken gastrointestinal tract / C. J. Yeoman,<br />
N. Chia, P. Jeraldo, M. Sipos, N. D. Goldenfeld, B. A. White // Anim Health Res Rev. – 2012. – Vol. 13. – Р. 89–99.</li>
<li>The potency of the broad spectrum bacteriocin, bactofencin A, against staphylococci is highly dependent on primary structure, N-terminal charge and disulphide formation / P. M. O&#8217;Connor, E. F. O&#8217;Shea, P. D. Cotter, C. Hill, R. P. Ross // Sci. Rep. – 2018. – Vol. 8. – Р. 11833.</li>
<li>The two-peptide class II bacteriocins: structure, production, and mode of action / Oppegard, P. Rogne, L. Emanuelsen, P. E. Kristiansen, G. Fimland, J. Nissen-Meyer // J. Mol. Microbiol. Biotechnol. – 2007. – Vol. 13. – Р. 210–219.</li>
<li>The two-peptide class II bacteriocins: structure, production, and mode of action / C. Oppegard, P. Rogne, L. Emanuelsen, P. E. Kristiansen, G. Fimland,<br />
J. NissenMeyer // J. Mol. Microbiol. Biotechnol. – 2007. – Vol. 13. – Р. 210–219.</li>
<li>Thermophilin 13, a nontypical antilisterial poration complex bacteriocin, that functions without a receptor / O. Marciset, M. C. Jeronimus&#8217;Stratingh, B. Mollet, B. Poolman // J. Biol. Chem. – 1997. – Vol. 272. – P. 14277–14284.</li>
<li>Thompson, J. K. Characterization of a proteinaceous antimicrobial produced by Lactobacillus helveticus CNRZ450 / J. K. Thompson, M. A. Collins,<br />
W. D. Mercer // J. Appl. Bacteriol. – 1996. – Vol. 80. – Р. 338–348.</li>
<li>Tiehaczek, P. S. Cloning and sequencing of curA encoding curvacin A, the bacteriocin produced by Lactobacillus curvatus LTH1174 / P. S. Tiehaczek,<br />
R. F. Vogel, W. P. Hammes // Arch. Microbiol. – 1993. – Vol. 160. – P. 279–283.</li>
<li>Updating benchtop sequencing performance comparison / S. Junemann<br />
[et al.] // Nat Biotechnol. – 2013. – Vol. 31. – Р. 294–296.</li>
<li>US patent. US20100129864, A1. Novel bacteriocins, transport and vector system and method of use thereof / E. Stiles Michael, C. Vederas John, J. van Belkum Marius, W. Worobo Randy, J. Worobo Rodney, K. McCormick John,<br />
G. Greer Gordon, M. McMullen Lynn, J. Leisner Jorgen, Alison Poon, Charles<br />
Franz. – MAP, 2010.</li>
<li>US patent. US20100286030 A1. Novel bacteriocin from a new streptomyces species / M. H. Farris, P. F. Churchill, J. B. Olson. – 2010.</li>
<li>US Patent. US20140148379 A1. Control of unwanted bacteria in fermentation systems with bacteriocin / M. Liu, E. J. Summer. – 2014.</li>
<li>US Patent. US20150320829 A1. Broad spectrum bacteriocin for control of unwanted Bacteria / M. Liu, E. J. Summer. – 2015.</li>
<li>US patent. US6403082 B1. Bacteriocins, transport and vector system and method of use thereof / E. Stiles Michael, C. Vederas John, J. van Belkum Marius, W. Worobo Randy, J. Worobo Rodney, K. McCormick John, G. Greer Gordon,<br />
M. McMullen Lynn, J. Leisner Jorgen, Poon Alison, Franz Charles. – MAP, 2002.</li>
<li>US patent. US7960505 B2. Lantibiotics and uses thereof / D. J. O&#8217;Sullivan, J. H. Lee. – 2011.</li>
<li>US patent. US9326523 B2. Class I and II lantibiotics from geobacillus thermodenitrificans / W. A. Van der Donk, N. Garg, Y. Goto, W. Tang. – 2016.</li>
<li>Van Reenen, C. Isolation, purification and partial characterization of plantaricin 423, a bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum / C. Van Reenen, L. Dicks, M. Chikindas // J. Appl. Microbiol. – 1998. – Vol. 84. – P. 1131–1137.</li>
<li>Variations of phosphorous accessibility causing changes in microbiome functions in the gastrointestinal tract of chickens / B. Tilocca, M. Witzig, M. Rodehutscord, J. Seifert // PLoS ONE. – 2016. – Vol. 11. – e0164735.</li>
<li>Vijayakumar, P. P. A Microplate Growth Inhibition Assay for Screening Bacteriocins against Listeria monocytogenes to Differentiate Their Mode-of-Action / P. P. Vijayakumar, P. M. Muriana // Biomolecules. – 2015. – Vol. 5(2). – Р. 1178–1194.</li>
<li>Waite, D. W. Exploring the avian gut microbiota: current trends and future directions / D. W. Waite, M. Taylor // Front Microbiol. – 2015. – Vol. 6. – Р. 673.</li>
<li>Wassels, S. The lactic acid bacteria, the food chain, and their regulation / S. Wessels, L. Axelsson, E. B. Hansen // Trends in Food Science and Technology. 2004. № 15. P. 498505.</li>
<li>Wei, S. Bacterial census of poultry intestinal microbiome / S. Wei,<br />
M. Morrison, Z. Yu // Poult Sci Sympos. – 2013. – Vol. 92. – Р. 671–683.</li>
<li>Willey, M. Lantibiotics: peptides of diverse structure and function /<br />
M. Willey, W. van der Donk // Ann. Rev. Microbiol. – 2007. – Vol. 61. –<br />
P. 477–501.</li>
<li>Yanagida, F. Isolation and characterization of lactic acid bacteria from soils in vineyards / F. Yanagida, Y. Chen, T. J. Shinohara // Gen. Appl. Microbiol. – 2005. – Vol. 52. – P. 21–28.</li>
<li>Yang, Y. Dietary modulation of gut microflora in broiler chickens: a review of the role of six kinds of alternatives to in-feed antibiotics / Y. Yang, P. A. Iji, M. Choct // World Poult Sci J. – 2009. – Vol. 65. – Р. 97.</li>
<li>Yegani, M. Factors affecting intestinal health in poultry / M. Yegani,<br />
D. R. Korver // Poult Sci. – 2008. – Vol. 87. – Р. 2052–2063.</li>
<li>Zendo, T. Lactococcal membrane-permeabilizing antimicrobial peptides / T. Zendo, F. Yoneyama, K. Sonomoto // Appl. Microbiol. Biotech. – 2010. –<br />
Vol. 88. – P. 1–9.</li>
<li>Zhao, W. Antibiotic resistance genes in China: occurrence, risk, and correlation among different parameters / W. Zhao, B. Wang, G. Yu // Environ Sci Pollut Res Int. – 2018. – Vol. 25(22). – Р. 21467–21482.</li>
<li>Zhou, W. Functional cloning and characterization of antibiotic resistance genes from the chicken gut microbiome / W. Zhou, Y. Wang, J. Lin // Appl Environ Microbiol. – 2012. – Vol. 78. – Р. 3028–3032.</li>
</ol>
<h2><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2019-тема-2-Приложения.docx">Приложения</a></h2>
]]></content:encoded>
					
					<wfw:commentRss>https://apknet.ru/optimizaciya-xarakteristik-innovacio/feed/</wfw:commentRss>
			<slash:comments>0</slash:comments>
		
		
			</item>
		<item>
		<title>Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении.</title>
		<link>https://apknet.ru/analiz-geneticheskix-xarakteristik-v/</link>
					<comments>https://apknet.ru/analiz-geneticheskix-xarakteristik-v/#respond</comments>
		
		<dc:creator><![CDATA[redactor]]></dc:creator>
		<pubDate>Fri, 30 Oct 2020 21:26:10 +0000</pubDate>
				<category><![CDATA[Заготовки продукции сельского хозяйства]]></category>
		<category><![CDATA[Сельскохозяйственная биология]]></category>
		<category><![CDATA[ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ]]></category>
		<guid isPermaLink="false">https://apknet.ru/?p=5131</guid>

					<description><![CDATA[Программа «Just Append Cows» предназначена для обработки файлов первичных данных секвенирования на приборе MiSeq (Illumina) и формирования индивидуальных генетических паспортов каждого исследованного животного. Программа «Covers» позволяет на основе первичных данных секвенирования сформировать цветную 2D-диаграмму, позволяющую оперативно оценить генетические характеристики и аллельную структуру модельных групп КРС и стада в целом.]]></description>
										<content:encoded><![CDATA[<h2><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2019-тема-1-Титульный-и-исполнители.docx">Титульный лист и исполнители</a></h2>
<h2><strong>РЕФЕРАТ</strong></h2>
<p>Отчет 143 с., 5 табл., 26 рис., 104 источника литературы.</p>
<p>СКОТОВОДСТВО, СТРУКТУРА ГЕНОФОНДА, МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕ­НЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ, МУТАЦИИ, МАРКЕР, ГЕН, ИДЕНТИФИКАЦИЯ, ГЕНОТИПИРОВАНИЕ, АЛЛЕЛИ, СЕЛЕКЦИЯ, ОДНОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПОЛИМОРФИЗМЫ (SNP), ДОСТОВЕРНОСТЬ ПРОИСХОЖДЕНИЯ, НАСЛЕДУЕМЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ, ПРОДУКТИВНОСТЬ, ЛАКТАЦИЯ, ПЛОДОВИТОСТЬ, ВОСПРОИЗВОДСТВО, ПАНЕЛЬ TRUSEQ BOVINE PARENTAGE SEQUENCING PANEL ILLUMINA (США), БИОИНФОРМАЦИОННЫЙ АНАЛИЗ, ПРОГРАММНЫЙ ПРОДУКТ, ИНТЕРФЕЙС, ПРЕДСТАВЛЕНИЕ,<br />
2D-ДИАГРАММА («КОВЁР»), ИНФОРМАЦИОННЫЕ СИСТЕМЫ</p>
<p>Целью работы было создание рекомендации для внедрения в хозяйствах края разработок по проведению генетического анализа поголовья на современном уровне в соответствии с рекомендациями Международного общества по изучению генетики животных (ISAG), в том числе для создания устойчивого селекционного ядра; проведение анализа статистически достоверной группы животных молочного направления продуктивности суммарным количеством до 300 гол., а также анализа используемых в хозяйстве лидере отросли генотипов спермодоз, используемых для получения потомства; использовать для анализа результаты таргетного секвенирования с использованием панели TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel фирмы Illumina (США); разработка программного продукта, результатом применения которого будет выстраивание ранжированного списка наиболее предпочтительных быков-производителей, относительно индивидуальных генетических характеристик матери; применить данный программный продукт в тестовом режиме в хозяйстве-лидере отросли для максимально эффективного индивидуального подбора отца-производителя.</p>
<p>За отчетный период методом таргетного секвенирования с использованием панели TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel Illumina (США) проведено генотипирование модельных групп КРС (условно низкопродуктивной, высокопродуктивной) и группы телок в возрасте 4,5 мес с неисследованным уровнем продуктивности до начала первой лактации. Исследовано в общей сложности 300 гол. КРС голштинской породы. Для каждого животного определено значение более 250-ти однонуклеотидных замен (SNP), отвечающих за достоверность происхождения и родства, а также за проявление генетически наследуемых заболеваний и факторов продуктивности.</p>
<p>В соответствии с техническим заданием разработаны две компьютерные программы (продукта). Программные продукты полностью работоспособны<br />
и протестированы на реальных экспериментальных базах данных. Программа «Just Append Cows» предназначена для обработки файлов первичных данных секвенирования на приборе MiSeq (Illumina) и формирования индивидуальных генетических паспортов каждого исследованного животного. Программа «Covers» позволяет на основе первичных данных секвенирования сформировать цветную 2D-диаграмму, позволяющую оперативно оценить генетические характеристики и аллельную структуру модельных групп КРС и стада в целом. Описываемая программа дает возможность также вызвать интерактивные окна с описанием соответствующих болезней или факторов продуктивности.</p>
<p>Кроме того, данный тип графического представления данных секвенирования КРС с использованием панели TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel Illumina (США) предложен нами впервые и не имеет российских и зарубежных аналогов.</p>
<p>За отчетный период все исследованные в рамках проекта животные паспортизированы в полном объеме и построены 2D-диаграммы, графически отражающие аллельные профили всего стада КРС. Использование обеих программных продуктов позволяет произвести индивидуальный подбор спермодоз при искусственном осеменении с учетом более 250-ти SNP и дать рекомендации на основе комплексных генетических исследований поголовья для обоснованного формирования устойчивого племенного ядра хозяйства.</p>
<h2><strong>ВВЕДЕНИЕ</strong></h2>
<p>Таргетное секвенирование, лежащее в основе конкретной технической реализации, примененной нами, дает возможность остановить внимание на конкретных участках (областях) генома или отдельных генов. Этот метод применяется в том случае, когда у изучаемого животного подозревается наличие какого-либо генетического заболевания, для которого известны гены или конкретные мутации, а также с целью генетической паспортизации конкретных животных и установления представленности различных аллелей в определенном стаде или группе животных. Аналогично, путем сложных вычислений и статистического анализа полностью секвенированных геномов, проводится поиск однонуклеотидных полиморфизмов (Single nucleotide polymorphism, SNP), не связанных непосредственно с проявлением в фенотипе, но используемых для доказательства достоверности происхождения/родства.</p>
<p>В случае таргетного секвенирования нет необходимости исследовать все гены, достаточно установить структуру только одного гена или некоторых его участков, так называемых горячих точек, где наличие мутации наиболее вероятно. Как правило, для достижения большинства текущих задач современного товарного животноводства необходимо ответить на ограниченное число вопросов, наиболее честно возникающих у специалистов хозяйств, специализирующихся на производстве молока или мяса. К этим вопросам, прежде всего, относится степень гетерозиготности/гомозиготности стада (близость родства, которая может привести к увеличению представленности генетических отклонений и уродств), наличие генетически наследуемых заболеваний или генов, повышающих предрасположенность к болезням, наличие вариантов генов, отвечающих за экономически значимые признаки. Причем в этом случае исследуемые варианты аллелей, как правило, не связаны с развитием патологического состояния, являются вариантами нормы, просто те или иные замены в кодируемых такими генами белках, являются более предпочтительными у пород мясного направления селекции, а другие варианты генов более предпочтительны для коров молочного направления селекции.</p>
<p>Из имеющихся на рынке коммерчески доступных решений для осуществления таргетного секвенирования КРС в практических целях наиболее применима, по нашему мнению, панель TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel (Illumina, США).</p>
<p>Вместе с тем, выбором платформы для исследования признаков и нахождения конкретных SNP, позволяющих доказать степень родства, достоверность происхождения, наличие или отсутствие генетических заболеваний, а также установить тип аллелей, отвечающих за реализацию экономически значимых признаков не ограничиваются запросы хозяйств. Необходимо также разработать программные продукты, которые с одной стороны позволили бы оперативно получить генетический паспорт животного с перечислением всех установленных SNP, с другой представить полученный массив экспериментальных данных в виде понятном специалисту хозяйства, визуализированном до степени возможности наглядного и интуитивно понятного использования. Такую задачу решает разработанный нами программный продукт, позволяющий генерировать цветовые 2D-диаграммы, визуализирующий распределение гомозигот по алель­ным и доменантным признакам, а также гетерозигот в исследуемом стаде<br />
с произвольным количеством голов. Это позволяет специалисту с первого взгляда оценить степень присутствия нежелательных или, наоборот, желательных генетических вариантов и вести мероприятия по осеменению, опираясь на эти данные. Так, сопоставление графических профилей генотипов животных, отраженных в 2D-диаграмме группы телок с графическим представлением по генотипам отдельных образцов спермодоз, позволяет подобрать оптимальное сочетание аллелей предков и исключить или свести к минимуму вероятность закрепления в ядре стада наследственных заболеваний. Этот подход не является чем-то абсолютно новым, более того, в последние годы подобного рода услуги активно рекламируются для человека. Этичность такого «генетически детерминированного» подбора пар в случае людей спорна, однако в ветеринарии она становится, и станет в ближайшем будущем «золотым стандартом». Наша работа, выполненная в продолжении годичного периода, всего лишь позволяет оптимизировать и автоматизировать анализ первичных данных секвенирорвания<br />
с использованием панели TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel, а разработанные программные продукты предназначены для генерации генетических паспортов животных единого образца (содержащих информацию о 265 отдельных SNP) и визуализации данных при помощи построения цветовых 2D-диа­грамм, которые могут быть использованы, в том числе и для быстрого подбора оптимальной спермодозы при искусственном осемениеии/оплодотвуорении.</p>
<h2><a id="post-5131-__DdeLink__21545_2859748360"></a><strong>1 ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ</strong></h2>
<h3><strong>1.1 Типы полиморфизма ДНК</strong></h3>
<p>В связи с развитием методов молекулярно-генетического анализа за прошедшие десятилетия было доказано, что до трети локусов эукариотического генома представлены аллельными вариантами со средней гетерозиготностью на особь вплоть до 12 % и более (Brookes, A. J., 1999). В природных популяциях эта изменчивость постоянно поддерживается c помощью известных микроэволюционных факторов – мутациями, миграцией генов, случайным генетическим дрейфом и естественным отбором. Генетический полиморфизм может быть выявлен на фенотипическом, биохимическом, хромосомном, молекулярном уровнях.</p>
<p>В случае молекулярно-генетического полиморфизма речь идет об изменениях в структуре ДНК, обусловленных различными типами мутаций: точечными мутациями, делециями и инсерциями от одного до большего числа нуклеотидов. Схема образования гаплотипов в случае нарушения аллельного равновесия на примере единичных точечных мутаций на локусе одной хромосомы показана на рисунке 1.</p>
<p><img width="1278" height="419" class="wp-image-5132" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-121.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-121.jpeg 1278w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-121-300x98.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-121-1024x336.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-121-768x252.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1278px) 100vw, 1278px" alt="word image 121 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 1</strong> – Схема образования гаплотипов:</p>
<p>1 – точечная замена T<img src="https://s.w.org/images/core/emoji/13.1.0/72x72/2194.png" alt="↔" class="wp-smiley" style="height: 1em; max-height: 1em;" />C и образование 2-го возможного гаплотипа; 2 – точечная замена A<img src="https://s.w.org/images/core/emoji/13.1.0/72x72/2194.png" alt="↔" class="wp-smiley" style="height: 1em; max-height: 1em;" />G и образование 3-го возможного гаплотипа; 3 – вариант меойтической<br />
рекомбинации, приводящей к образованию четырех гаплотипов [5]</p>
<p>После открытия явления полиморфизма ДНК в середине 80-х гг. для создания насыщенных генетических карт и маркирования QTL появился новый класс генетических маркеров. Огромную роль в их появлении сыграло развитие методов клонирования и рестрикции генов. Но открытие полимеразной цепной реакции (ПЦР) имело решающее значение. Суть метода состоит в том, что предназначенный для амплификации участок ДНК служит матрицей для синтеза <em>in vitro</em> комплементарной последовательности. Реакция катализируется Taq-полимеразой в присутствии двух олигонуклеотидных праймеров, комплементарных к последовательностям, окружающим анализируемый фрагмент. Число анализируемых фрагментов ДНК в каждом цикле удваивается, и после 30 циклов репликации количество исходной ДНК увеличивается в миллион раз.</p>
<p>Поскольку преобладающая часть эукариотического генома не вовлечена<br />
в какие-либо известные и важные функции, соответствующие участки некодирующей ДНК обнаруживают уровни полиморфизма, многократно превосходящие данные, которые известны о полиморфизме генов. В случае структурных генов, которые колируют белки, изменения в структуре ДНК могут обуславливать изменения в аминокислотных последовательностях белков, и как следствие нарушения действия генов. Так, например, точечные мутации могут приводить<br />
к появлению стоп-кодона в кодирующей последовательности, приводя к остановке трансляции и образованию белков с нарушениями их функциональности. Точечные мутации также могут приводить к замене одного аминокислотного остатка на другой, изменяя тем самым структуру молекулы белка, а, следовательно, и его функцию. Как и в случае обрыва белковой цепи, это может приводить к различным генетическим заболеваниям.</p>
<p>Основные типы полиморфизмов ДНК эукариотических геномов представлены в таблице 1 (Алтухов Ю. П., Салменкова Е. А., 2002).</p>
<h4><strong><em>1.1.1 Рестрикционные фрагменты ДНК</em></strong></h4>
<p>Геномная ДНК эукариот имеет существенные размеры, в частности, геном коровы составляет 3,1 млрд пар оснований (Van Eenennaam A. L., Weigel K. A., Young A. E., Cleveland M. A., J. C. M. Dekkers, 2014). Сайт-специфические ДНК-эндонуклеазы – это бактериальные ферменты, расщепляющие ДНК по определенным последовательностям, называемым сайтами узнавания. Наиболее известными среди этих ферментов являются эндонуклеазы рестрикции II типа, первая из которых (HindII) была обнаружена 45 лет назад, и которые сыграли большую роль в развитии генной инженерии, поскольку их использование позволило специфично проводить фрагментацию протяженных геномных ДНК. А затем клонировать участки генома в различные векторные конструкции (цит. по Ю. П. Алтухову, Е. А. Салменковой, 2002). Эти эндонуклеазы вступают<br />
в реакцию лишь со специфическими состоящими из 4–6 пар оснований, деметилированными участками ДНК – сайтами узнавания, которые в гомологичных бактериальных ДНК защищены метильными группами.</p>
<p><strong>Таблица 1</strong> – Типы полиморфизма ДНК</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Характер<br />
изменчивости</td>
<td>Причина возникновения<br />
полиморфизма</td>
<td>Методы выявления</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Полиморфизм длины<br />
рестрикционных<br />
фрагментов (RFLP)</td>
<td>Нуклеотидные различия<br />
в сайтах рестрикции</td>
<td>Разрезание цепи ДНК с помощью рестриктаз, электрофорез продуктов рестрикции, их визуализация</td>
</tr>
<tr>
<td>Минисателлиты,<br />
варьирующее число<br />
тандемных повторов<br />
(VNTR)</td>
<td>Варьирующее число<br />
тандемно повторенных<br />
нуклеотидных последовательностей с размером<br />
повтора 10–100 нуклеотидов</td>
<td>Разрезание цепи ДНК с помощью рестриктаз, электрофорез, Саузерн-блоттинг со специфической пробой к повторяющейся последовательности. Полилокусные пробы комплементарны к часто встречающимся в геноме повторам, однолокусные –<br />
к уникальным повторам</td>
</tr>
<tr>
<td>Микросателлиты,<br />
простые тандемные<br />
повторы (STR),<br />
простые нуклеотидные<br />
повторы (SSR)</td>
<td>Варьирующее число<br />
тандемно повторенных<br />
коротких нуклеотидных<br />
последовательностей<br />
с размером повтора<br />
1–6 нуклеотидов</td>
<td>ПЦР-амплификация с праймерами, комплементарными уникальным последовательностям, фланкирующим семейство повторов, электрофорез продуктов</td>
</tr>
<tr>
<td>Полиморфизм<br />
фрагментов ДНК,<br />
амплифицированных<br />
с произвольными<br />
праймерами (RAPD)</td>
<td>Нуклеотидные различия<br />
в сайтах связывания<br />
с праймерами</td>
<td>ПЦР-амплификация случайных сегментов ДНК с использованием 10–20 членных нуклеотидных праймеров с произвольной нуклеотидной последовательностью, электрофорез продуктов амплификации</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3"><em>Продолжение таблицы 1</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Полиморфизм длины<br />
амплифицированных<br />
фрагментов (AFLP)</td>
<td>Нуклеотидные различия<br />
в сайтах рестрикции<br />
и фланкирующих их<br />
областях</td>
<td>Рестрикция с помощью двух рестриктаз, действующих на частые и редкие сайты рестрикции, присоединение олигонуклеотидных адаптеров, ПЦР-амплификация, электрофорез</td>
</tr>
<tr>
<td>Однонуклеотидный<br />
полиморфизм (SNP)</td>
<td>Замены отдельных нуклеотидов в последовательности ДНК</td>
<td>Гибридизация меченых ПЦР-продуктов с микропанелями ДНК-проб для выявления вариантов, ДНК-чипы, Секвенирование ДНК-проб (фрагментов, полногеномное)</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Несмотря на то, что развитие ПЦР-технологий и методов полногеномного секвенирования несколько снизило интерес к использованию ферментов рестрикции, их значимость для научно-практических исследований остается высокой. Они находят широкое применение в полногеномном поиске молекулярных маркеров для исследований в области популяционной и адаптационной генетики. Геномы эукариот могут различаться по нескольким миллионам нуклеотидов, часть из которых входит в сайты узнавания коммерчески доступных ферментов. Как известно, полиморфизм ДНК вызывается несколькими причинами: либо точечными заменами, либо ошибками при репликации ДНК в виде инсерций или делеций протяженностью от одного до тысяч нуклеотидов. Все изменения в первичной структуре ДНК ведут к изменениям в длине фрагментов, образующихся под действием рестриктаз.</p>
<p>Сравнение секвенированных рестрикционных фрагментов из различных популяций организмов позволяет легко выявлять фрагменты, свойственные лишь одной из исследуемых групп и тем самым обнаружить нуклеотидные различия. При этом фрагменты используются в качестве простейших генетических маркеров. Основанный на этом подходе метод анализа получил название RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism).</p>
<p>Смесь фрагментов ДНК разделяют электрофорезом в агарозном или полиакриламидном геле и идентифицируют с помощью метки с последующей авторадиографией. Метод малоэффективен для разделения множества фрагментов. Для избирательного выявления в геле каких-либо определенных фрагментов ДНК используется гибридизация со специфической пробой методом Саузерна. Такая проба представляет нуклеотидную последовательность, комплементарную исследуемой области и снабженную радиоактивной или флуоресцентной меткой. Благодаря метке нужный фрагмент специфично визуализируется.</p>
<p>Первоначально для гибридизации с фрагментами ДНК, полученными<br />
в результате действия рестриктаз, использовались универсальные мультилокусные пробы, которые содержали структуры, часто встречающиеся в геноме<br />
в виде семейств многочисленных повторов. При использовании таких проб<br />
в геле выявляется одновременно много сходных локусов, находящихся в гетерозиготном состоянии из-за большого числа аллелей. Эти сложные картины фрагментов ДНК, специфичные для отдельных особей, получили название «ДНК-фингерпринтов» или «фингерпринтов».</p>
<p>Несмотря на то, что было проведено несколько исследований на растениях с целью выявления QTL посредством сцепления с RFLP-маркерами (Pater­son A. H., Lander E. S., Hewitt J. D., Paterson S., Lincoln S. E., Tanksley S. D., 1988), эти маркеры оказались не очень полиморфными у домашних животных.</p>
<h4><strong><em>1.1.2 Мини- и микросателлиты</em></strong></h4>
<p>С 1969 г. было известно, что ДНК высших организмов содержит много повторяющихся фрагментов. В 1989 г. сразу несколько лабораторий независимо друг от друга обнаружили, что короткие последовательности повторяющихся ДНК были полиморфными в отношении числа повторяющихся ДНК. Наиболее распространенной из этих повторяющихся последовательностей является poly-[TG], которая, как было установлено, очень часто встречается у всех высших видов (цит. по Дж. И. Веллеру, 2018).</p>
<p>Геном сельскохозяйственных животных насыщен (до 30 %) такого рода повторами, называемыми короткими тандемными (Shot Tandem Repeats – STR) или простыми структурными повторами (Single Sequence Repeats – SSR). Помимо выше упомянутого [TG]n, повторяющейся единицей может быть, например, мононуклеотид [A]n или динуклеотид [AC]n (Ellegren H., 2004; Mason, A. S., 2015). Но повторяющейся единицей может быть и тринуклеотид, и тетра, и т. д. Очень часто в одном и том же локусе на разных хромосомах присутствует разное количество таких повторов. Количество аллелей может быть значительно больше за счет изменения числа повторов «n» (см. таблицу 2). Следует отметить, что хотя каждый из таких локусов отличается в своих аллелях числом повторов, нуклеотидные последовательности по краям этих повторов для одинаковых локусов одинаковы. И если такой повтор попадает между двумя соседними сайтами какой-либо рестриктазы, то длины полученных рестрикционных фрагментов для разных аллелей будут различаться (Zane L., Bargelloni L., Patarnello T., 2002).</p>
<p>Особое внимание исследователей в семействах тандемных повторов в качестве генетических маркеров получили минисателлиты, состоящие из повторяющихся копий («мотива») длиной от 9–10 до сотни нуклеотидов каждая,<br />
и микросателлиты, повторяющиеся копии которых обычно имеют длину от 1 до 4, иногда 6 нуклеотидов. Минисателлитный локус может насчитывать от двух до нескольких сотен повторов, микросателлитный локус – от 10 до 100 повторов. Эти маркеры – кодоминантные, т. е. гетерозиготный генотип всегда отличается от любой гомозиготы. Кроме того, микросателлиты почти всегда полиаллельны, т. е. в популяциях всегда присутствует более двух аллелей. Высокополиморфный характер и менделевский тип наследования делает микросателлиты идеальными ДНК-маркерами сельскохозяйственных животных.</p>
<p>Высокая достоверность и специфичность ДНК анализа может быть достигнута при использовании любых видов биологического материала: кровь, слюна, волосы, сперма, образцы мягких тканей. Для анализа микросателлитов требуется очень малое количество крови и какой-либо ткани организма, поэтому возможно прижизненное взятие образцов. Микросателлиты одинаковы<br />
у близких видов. Что позволяет использовать одни и те же праймеры и сходные протоколы анализа.</p>
<p>В настоящее время микросателлитные ДНК-маркерные системы находят применение при решении различных фундаментальных и прикладных задач сельскохозяйственной биологии и биотехнологии таких как геномное картирование, характеристика генетической структуры популяции и степени инбредности, оценка генетических расстояний между линиями, породами и популяциями, филогенетические исследования, контроль происхождения (Эрнст Л. К., Зиновьева Н. А., 2008; Guichoux E., Lagache L., Wagner S., Chaumell P., Leger P., Lepais O., Lepoittevin C., Malausa T., Revardel E., Salin F., Petit R. J., 2011). Таким образом, технология ДНК-анализа микросателлитов становится незаменимым инструментом для решения задач селекции и целенаправленного повышения продуктивных качеств выращиваемых животных и является «золотым» стандартом современной-молекулярно-генетической идентификации животных, рекомендованным Международным обществом по изучению генетики животных (ISAG).</p>
<p>Наиболее распространенным методом анализа SSR является метод ПЦР,<br />
с использованием праймеров, комплементарных уникальным последовательностям (доменам), которыми фланкирован каждый микросателлитный локус. Использование ПЦР для анализа микросателлитных локусов впервые было предложено в 1989 г. для анализа [CA]n[GT]n, которые являются одним из наиболее встречаемых мотивов повторов в геномной ДНК человека (Weber J. L., May P. E., 1989). Разделение продуктов амплификации проводили электрофорезом в полиакриламидном геле, что позволило резко повысить чувствительность и скорость анализа по сравнению с методами, основанными на гибридизации геномных блотов.</p>
<p>В настоящее время стандартной методикой анализа ДНК-микросателлитов с известными фланкирующими последовательностями является мультиплексный ПЦР с последующим разделением продуктов амплификации методом капиллярного электрофореза и их одновременной лазерной детекцией. Она отвечает современным требованиям молекулярно-генетического анализа: высокая информативность анализа, минимальные сроки исследования, простота проведения и низкая себестоимость исследования.</p>
<p>В практической части настоящей работы будут использоваться готовые отечественные современные решения для всех этапов генетического анализа. Компания «Гордиз» на сегодняшний день является единственным российским производителем продукции для молекулярно-генетической идентификации животных на основе микросателлитных маркеров ДНК (набор «COrDIS Cattle»).</p>
<p>ISAG в качестве стандартных маркеров рекомендовало использовать<br />
11 локусов: ETH3, INRA023, TGLA227, TGLA126, TGLA122, SPS115, ETH225, TGLA53, BM2113, BM1824, ETH10. Кроме того, в набор фирмы Гордиз для определения молекулярно-генетической характеристики крупного рогатого скота с целью анализа родства и ДНК-индивидуализации животных на основе мультиплексного ПЦР-анализа локусов, содержащих STR, входят три дополнительных высокополиморфных микросателлитных локуса: CSSM66, ILSTS006<br />
и CSRM60 (таблица 2).</p>
<p><strong>Таблица 2</strong> – Описание микросателлитных маркеров</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Название<br />
локуса</td>
<td>Хромосомная локализация</td>
<td>Нуклеотидная последовательность<br />
единицы повтора</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3">Основные</td>
</tr>
<tr>
<td>ETH3</td>
<td>D19S2</td>
<td>(GT)nAC(GT)6</td>
</tr>
<tr>
<td>INRA023</td>
<td>D3S10</td>
<td>(AC)n</td>
</tr>
<tr>
<td>TGLA227</td>
<td>D18S1</td>
<td>(TG)n</td>
</tr>
<tr>
<td>TGLA126</td>
<td>D20S1</td>
<td>(TG)n</td>
</tr>
<tr>
<td>TGLA122</td>
<td>D21S6</td>
<td>(AC)n(AT)n</td>
</tr>
<tr>
<td>SPS115</td>
<td>D15</td>
<td>(CA)nTA(CA)6</td>
</tr>
<tr>
<td>ETH225</td>
<td>D9S2</td>
<td>(TG)4CG(TG)(CA)n</td>
</tr>
<tr>
<td>TGLA53</td>
<td>D16S3</td>
<td>(TG)6CG(TG)4(TA)n</td>
</tr>
<tr>
<td>BM2113</td>
<td>D2S26</td>
<td>(CA)n</td>
</tr>
<tr>
<td>BM1824</td>
<td>D1S34</td>
<td>(GT)n</td>
</tr>
<tr>
<td>ETH10</td>
<td>D5S3</td>
<td>(AC)n</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3">Дополнительные</td>
</tr>
<tr>
<td>CSSM66</td>
<td>D14S31</td>
<td>(AC)n</td>
</tr>
<tr>
<td>ILSTS006</td>
<td>D7S8</td>
<td>(GT)n</td>
</tr>
<tr>
<td>CSRM60</td>
<td>D10S5</td>
<td>(AC)n</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В стандартном наборе праймеры для ПЦР подбираются с учетом проведения амплификации всех 14-ти локусов в одной пробирке. Размер всех амплифицируемых ПЦР продуктов &lt; 320 пар нуклеотидов (с учетом всех известных аллелей). Анализ результатов ПЦР обычно проводится методом капиллярного электрофореза с использованием автоматических генетических анализаторов<br />
с лазериндуцированной флуоресцентной детекцией. В наборе COrDIS Cattle используется пять флуоресцентных красителей, характеризующихся разными длинами волн эмиссии для возможности одновременной детекции в разных каналах флуоресценции. Праймеры мечены четырьмя флуоресцентными красителями, детектируемыми в каналах Blue, Green, Yellow, Red. Стандарт длины S450 мечен пятым, флуоресцентным красителем и детектируется в отдельном канале Orange одновременно с продуктами ПЦР. С использованием этих реагентов для получения полного STR-профиля образца достаточно 0,2 нанограмм. Оптимальное количество – 0,5 нанограмм.</p>
<p>RAPD, AFLP. В отличие от микросателлитов или однолокусных минисателлитов, с помощью которых исследуются отдельные локусы генома, маркеры, обозначаемые как RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) и AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism), позволяют исследовать геном в целом, получая соответствующие фингерпринты.</p>
<p>Для анализа RAPD используют 10–20-членные нуклеотидные праймеры<br />
с произвольно выбранными последовательностями. С их помощью амплифицируют анонимные участки ДНК, после чего амплифицированные фрагменты анализируют с помощью гель-электрофореза. Число и размер фрагментов зависят от длины и структуры произвольно выбранных праймеров. Комплементарные сайты связывания праймеров случайно распределены по геному, а полиморфизм в таких сайтах выражается в присутствии или отсутствии в геле соответствующих фрагментов (Алтухов Ю. П., Салменкова Е. А., 2002).</p>
<p>Метод AFLP основан на избирательной амплификации рестрикционных фрагментов геномной ДНК и их анализе. Фрагментацию ДНК обычно проводят двумя рестриктазами. Образующиеся «липкие» концы связывают с олигонуклеотидными адаптерами, которые и служат мишенью для отжига праймеров. Тем самым достигается избирательная амплификация только тех фрагментов, рестрикционные сайты которых фланкированы комплементарными нуклеотидами (Алтухов Ю. П., Салменкова Е. А., 2002; Grover A., Sharma P. C., 2016). Как и в случае метода RAPD полиморфизм фингерпринта проявляется в наличии или отсутствия конкретных полос в геле, но в отличие от RAPD обладает очень хорошей воспроизводимостью.</p>
<h4><strong><em>1.1.3 Полиморфизм единичного нуклеотидного сайта</em></strong></h4>
<p>SNP (Single Nucleotide Polymorphism) как новый тип маркеров стал использоваться в 1995 г. (цит. по A. J. Brookes, 1999). SNP обычно определяют как местоположение пары оснований ДНК, в которой частота появления наиболее распространенного основания пары ниже 99 %. В отличие от микросателлитов, которые имеют несколько аллелей, SNP, как правило, являются диаллельными, но гораздо более распространены во всем геноме, с оценочной частотой одного SNP на 300–500 пар оснований. В популяциях человека различия в нуклеотидной последовательности любых двух случайно выбранных особей встречаются с частотой примерно 1 на 1000 кб (Brookes A. J., 1999). Таким образом, SNP могут быть найдены в геномных областях, бедных микросателлитами. Вероятно, большинство полиморфизмов возникло в результате мутаций, закрепившихся в популяции. Наиболее часто встречающийся SNP – вариация оснований одного типа, т. е. пуринов или пиримидинов. SNP с аллелями пурин/пи­римидин встречаются значительно реже. Частота встречаемости разных типов в геноме человека описывается следующим соотношением: A/G – 63 %, A/C – 17 %, G/C – 8 %, A/T – 4 %. На оставшиеся вставки и делеции приходится 8 % (Miller R. D., Taillon-Miller P., Kwok P.-Y., 2001).</p>
<p>Наибольший практический интерес представляют полиморфизмы, лежащие в пределах кодирующих областей генома. SNP, находящиеся в них, могут быть ассоциированы с определенными фенотипами, в частности, связанные<br />
с индивидуальной предрасположенностью к заболеваниям, с устойчивостью<br />
к воздействию окружающей среды и лекарственных препаратов или с биохимическим профилем. Особенности последовательности четырех нуклеотидов<br />
в нетранскрибируемых регионах ДНК могут отражать различия между отдельными животными, популяциями и породами. SNP более стабильны, чем микросателлиты и имеют более низкую частоту мутации. В 2001 г. были впервые описаны условия генотипирования большого числа особей по любым SNP,<br />
а также методы вычислений, которые в будущем позволили автоматизировать процесс генотипирования (Ranade K., Chang M. S., Ting G. T., Pei D., Hsiao C. F., Olivier M., Pesich R., Hebert J., Chen Y.-D., Dzau V. J., Curb D., Olshen R., Rish N., Cox D. R., Botstein D., 2001). Все вышесказанное объясняет появление огромного числа методов детекции SNP.</p>
<h4><strong><em>1.1.4 Методы детекции SNP</em></strong></h4>
<p>В самом простом случае для детекции SNP можно использовать две пары праймеров. В каждой паре один из праймеров общий для двух аллелей, другой – комплементарный только данному аллелю. Вариабельный нуклеотид располагается в 3&#8242;-концевой позиции аллель-специфичных праймеров. ПЦР для каждой пары проводят в отдельных пробирках (Кофиади И. А., Ребриков Д. В., 2006). Основной недостаток подхода в том, что поскольку анализ идет в различных пробирках, необходима четкая стандартизация исходного количества ДНК.</p>
<p>Проведение реакции в одной пробирке исключает ошибки смешивания реактивов и обеспечивает наличие конкуренции на стадии отжига, что в свою очередь ведет к лучшему разрешению аллелей.</p>
<p>Существует несколько подходов проведения аллель-специфичной ПЦР<br />
в одной пробирке, схемы метода проведения которой изображены на рисунках 2–6 (Кофиади И. А., Ребриков Д. В., 2006).</p>
<p>Использование детектирующих амплификаторов для оценки количества продуктов накопления ПЦР имеет неоспоримые преимущества для разработки систем детекции SNP, позволяя упростить подбор условий реакции и, что самое главное, работать практически с любыми стартовыми количествами ДНК. Практически для любого из вышеупомянутых подходов требуется стандартное оборудование для ПЦР и возможность получения меченых нуклеотидов. Однако они являются относительно низкопропускными и позволяют силами одного сотрудника проводить анализ лишь нескольких сотен полиморфизмов в день, что не позволяет их использовать для широкомасштабного скрининга SNP на уровне целого генома (Кофиади И. А., Ребриков Д. В., 2006).</p>
<p><img width="1091" height="653" class="wp-image-5133" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-122.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-122.jpeg 1091w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-122-300x180.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-122-1024x613.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-122-768x460.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1091px) 100vw, 1091px" alt="word image 122 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 2</strong> – Схема работы праймеров-«скорпионов»:</p>
<p>5&#8242;-концевая адаптерная часть праймера отделена от 3&#8242;-концевой аллель-специфичной части препятствующим синтезу второй цепи ДНК блокатором (обозначен ломаной линией).<br />
При амплификации адаптер свободного праймера формирует шпилечную структуру со сближенным флуорофором и гасителем. Поскольку петлевая часть адаптера комплементарна внутренней части амплифицируемого фрагмента, после встраивания в ДНК адаптер<br />
гибридизуется с фрагментом, приводя к разобщению флуорофора и гасителя и возрастанию флуоресценции</p>
<p><img width="1091" height="716" class="wp-image-5134" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-123.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-123.jpeg 1091w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-123-300x197.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-123-1024x672.jpeg 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-123-768x504.jpeg 768w" sizes="(max-width: 1091px) 100vw, 1091px" alt="word image 123 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 3</strong> – Схема работы «вытесняющей пробы»:</p>
<p>Флуорофор и гаситель флуоресценции расположены на комплементарных нуклеотидах<br />
так, что при образовании дуплекса они оказываются сближенными. В случае образования<br />
специфичного продукта ПЦР часть проб гибридизуется с продуктом реакции,<br />
приводя к увеличению уровня флуоресценции</p>
<p><img width="987" height="674" class="wp-image-5135" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-124.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-124.jpeg 987w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-124-300x205.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-124-768x524.jpeg 768w" sizes="(max-width: 987px) 100vw, 987px" alt="word image 124 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 4</strong> – Схема работы «разрушающей пробы»:</p>
<p>Пробы несут флуорофор и гаситель флуоресценции. Пока проба находится в растворе<br />
за счет близкого расположения гаситель поглощает энергию флуорофора. В случае отжига<br />
на специфический продукт реакции проба разрушается за счет 5&#8242;- экзонуклеазной активности полимеразы, что ведет к разобщению флуорофора и гасителя. Интенсивность сигнала<br />
возрастает с каждым циклом ПЦР, пропорционально накоплению ампликонов</p>
<p><img width="987" height="758" class="wp-image-5136" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-125.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-125.jpeg 987w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-125-300x230.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-125-768x590.jpeg 768w" sizes="(max-width: 987px) 100vw, 987px" alt="word image 125 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 5</strong> – Схема работы «молекулярных маячков»:</p>
<p>Пробы несут короткий инвертированный концевой повтор, по краям которого расположены флуорофор и гаситель флуоресценции. В растворе проба формирует шпилечную структуру,<br />
в которой флуорофор и гаситель сближены. При отжиге на специфический продукт реакции проба «разворачивается», что ведет к разобщению флуорофора и гасителя и повышению уровня флуоресценции</p>
<p><img width="961" height="722" class="wp-image-5137" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-126.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-126.jpeg 961w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-126-300x225.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-126-768x577.jpeg 768w" sizes="(max-width: 961px) 100vw, 961px" alt="word image 126 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 6</strong> – Схема работы «примыкающих проб»:</p>
<p>Система состоит их двух нуклеотидов, гибридизующихся на матрицу рядом. Один из<br />
нуклеотидов несет флуорофор-донор, другой флуорофор-акцептор. Акцептор может<br />
эффективно поглощать энергию, излучаемую донором. При образовании специфичного<br />
продукта реакции олигонуклеотиды гибридизуются рядом, что ведет к эффективному<br />
переносу энергии с донора на акцептор, а накопление продукта реакции амплификации<br />
регистрируют по увеличению флуоресценции акцептора</p>
<p>Платформы для одновременного и высокопроизводительного генотипирования сотен и даже сотен тысяч SNP разработаны несколькими кампаниями.<br />
К 2008 г. затраты на генотипирование были снижены до уровня ниже 0,01 долл. за генотип. Сейчас стоимость такого рода анализа составляет приблизительно 0, 0002 долл. за генотип (Веллер Дж. И., 2018). В настоящее время ведущей технологией высокопроизводительного SNP-генотипирования является «Infinium HD assay» (<a href="https://support.illumina.com/downloads/%20infinium_hd_ultra_assay_protocol_guide_11328087_b.html" target="_blank" rel="noopener">https://support.illumina.com/downloads/ infinium_hd<br />
_ultra_assay_protocol_guide_11328087_b.html</a>). По этой технологии были разработаны чипы средней плотности «BeadChips», включающие 50–60 тыс. маркеров для всех основных сельскохозяйственных животных. Был разработан чип «BovineHD BeadChip» (Illumina, Сан-Диего, Калифорния), который включает в себя 777 тыс. SNP, охватывающих весь геном КРС. Теперь доступен и чип для курицы, включающий более 580 тыс. маркеров (Веллер Дж. И., 2018). Для других основных сельскохозяйственных видов разрабатываются маркерные чипы высокой плотности, включающие более 500 тыс. маркеров.</p>
<h3><strong>1.2 Однонуклеотидные маркеры экономически важных признаков молочного скота</strong></h3>
<p>Гены-кандидаты маркеров экономически важных признаков, как правило, отбирают для исследования на основании их потенциальной способности влиять на интересующий фенотип. Критерии отбора включают влияние на физиологические процессы, место в метаболических путях и локализацию уже описанных QTLs. За последнее время было опубликовано много исследований по поиску QTLs с фенотипическими проявлениями: удой (М), выход молочного белка (Р), содержание белка в молоке (%Р), выход молочного жира (F), количество соматических клеток в молоке (SCS) и мастита (MST). Например, в работах (Смарагдов М. Г., 2006; Maiorano A., Lourenco D., Tsuruta S., Ospina A., Sta­fuzza N., Masuda Y., Filho A., Cyrillo J., Curi R., Silva J., 2018; Mokhber M., Moradi-Shahrbarak M., Sadeghi M., Moradi-Shahrbarak H., Stella A., Nicolzzi E., Rahmaninia J., Williams J. L., 2018) собраны все доступные сведения о локализации QTLs в аутосомах КРС. По данным 869 публикаций в настоящее время<br />
в различных породах и популяциях КРС выявлено 116067 QTLs (<a href="https://www.animalgenom.org/" target="_blank" rel="noopener">https://www.animalgenom.org</a>; обращение 13.11.2018).</p>
<p>Расчеты свидетельствуют, что каждый показатель молока КРС могут контролироваться вплоть до 100 QTLs (Hayes B., Goddard M. E., 2001). Причем<br />
17 % этих локусов – мажорные, т. е. дающие существенный вклад (0,2–0,6)<br />
в фенотипическую вариансу. Остальные являются умеренными и минорными. Большинство мажорных QTLs уже выявлено. 15 важнейших из них перечислены в таблице 3 (<a href="https://www.animalgenom.org/" target="_blank" rel="noopener">https://www.animalgenom.org</a>).</p>
<p>Процедура анализа включает в себя взятие биологического материала (кровь, семя, волосы, выщипы), выделение ДНК, генотипирование на чипах, т. е. идентификация SNP, которые достоверно коррелируют с хозяйственно полезными признаками, и статистический анализ полученных данных (Лукъянов К. И., Солошенко В. А., Клименюк И. И., Юдин Н. С., 2015; Смарагдов М. Г., 2009).</p>
<p><strong>Таблица 3</strong> – Важнейшие экономически важные признаки КРС и количество определяющих их мажорных генетических локусов</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Признак</td>
<td>Число<br />
идентифицированных QTLs</td>
</tr>
<tr>
<td>Возраст полового созревания</td>
<td>10545</td>
</tr>
<tr>
<td>Окружность вымени</td>
<td>10435</td>
</tr>
<tr>
<td>Процентное содержание жира</td>
<td>6652</td>
</tr>
<tr>
<td>Выход жирного молока</td>
<td>5489</td>
</tr>
<tr>
<td>Процентное содержание каппа-казеина</td>
<td>4784</td>
</tr>
<tr>
<td>Процентное содержание нормальной спермы</td>
<td>3596</td>
</tr>
<tr>
<td>Легкость отела</td>
<td>3540</td>
</tr>
<tr>
<td>Процентное содержание молока</td>
<td>3540</td>
</tr>
<tr>
<td>Процентное содержание гликозилированной формы каппа-казеина</td>
<td>2753</td>
</tr>
<tr>
<td>Процентное содержание негликозилированной формы каппа-казеина</td>
<td>2542</td>
</tr>
<tr>
<td>Non return rate</td>
<td>2419</td>
</tr>
<tr>
<td>Продолжительность использования коров</td>
<td>2233</td>
</tr>
<tr>
<td>Выход молока</td>
<td>2037</td>
</tr>
<tr>
<td>Интервал между первой и последней лактацией</td>
<td>1900</td>
</tr>
<tr>
<td>Эффективность осеменения</td>
<td>1705</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Для оценки на уровень продуктивности того или иного признака необходимо разработать специальную математическую модель влияния каждого полиморфизма. Разрабатывают такую модель на стандартной или референсной популяции. Референсная популяция – это группа животных одной породы, оцененных по качеству потомства и по данным SNP-генотипирования. Эти животные должны иметь достоверные значения индексной оценки по селекционным признакам. Точность геномных оценок возрастает при увеличении объема референсной выборки (Лукъянов К. И., Солошенко В. А., Клименюк И. И., Юдин Н. С., 2015).</p>
<p>Для отбора QTL с использованием GS-моделей можно использовать несколько математических подходов. Очень подробно они изложены в работах (Веллер Дж. И., 2018; Смарагдов М. Г., 2009; Wiggans G. R., Cole J. B., Hub­bard S. M., Sonstegard T. S., 2017). Если коротко, то:</p>
<p>1) каждый маркер – это QTL. Вычисляют одновременно влияние всех маркеров одновременно по их вкладу в генетическую вариансу. Этот подход предполагает, что каждый полиморфизм возникает один раз и существует в коммерческих популяциях животных в масштабе всей популяции. Варианса каждого маркера зависит от неравновесности по сцеплению «LD» (Linkage Disequi­librium), мерой которой служит r2 – квадрат коэффициента корреляции между локусами. LD измеряется между каждой парой локусов.</p>
<p><img width="584" height="243" class="wp-image-5138" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-127.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-127.jpeg 584w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-127-300x125.jpeg 300w" sizes="(max-width: 584px) 100vw, 584px" alt="word image 127 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 7</strong> – Формула вычисления квадрата корреляции двух аллелей<br />
для расчета LD, где РАВ – частота гаплотипа АВ, РА частота аллеля А,<br />
РВ – аллеля В (Смарагдов М. Г., 2009)</p>
<p>Чем больше расстояние между маркером и QTL, тем меньше r2. При расстоянии между локусами 50 т.п.о. для голштинской породы КРС он составляет 0,35 (Смарагдов М. Г., 2009; McKay S. D., Schnabel R. D., Murdoch B. M., Matu­kumalli L., Aerts J., Coppieters W., Crews D., Neto E., Gill C., Gao C., Mannen H., Stothard P., Wang Z., Tassell C., Williams J., Taylor J., Moore S., 2007). Этот подход предполагает, что гаплотипы между парами локусов известны точно. Для особей, гетерозиготных для обоих локусов, гаплотипы можно определить однозначно, только если соответствующая родословная генотипирована для обоих локусов. Существует большое количество литературы для определения гаплотипов более сложных родословных, например (Веллер Дж. И., 2018; Weng Z., Zhang Zh., Zhang Q., He S., Ding X., 2013);</p>
<p>2) SNP конструируется из нескольких гаплотипов. В этом случае увеличивается LD между гаплотипом и QTL и, следовательно, величина вариансы QTL. При этом уменьшается точность определения каждого гаплотипа;</p>
<p>3) вместилищем всех QTL является гамета, эффекты которой в будущем определяют через маркеры. Анализ сцепления аллелей с QTLs прослеживают через родословные животных с помощью расчета вероятностей при условии, что любые два маркера идентичны по происхождению IBD (Identity By Descent) от общего предка в родословной.</p>
<p>Учитывая выгоды, получаемые от популяции внутри страны, программы разведения КРС на основе GS отличаются от большинства других экономических проектов тремя аспектами (Веллер Дж. И., 2018):</p>
<p>1. В связи с биологическими ограничениями, особенно относительно длительным интервалом между поколениями, программу разведения можно оценить только после длительного периода времени.</p>
<p>2. Генетические маркеры, как правило, одновременно определяют множество признаков.</p>
<p>3. В отличие от других агротехнических достижений, генетические тренды являются устойчивыми. Они «не изнашиваются», их техническое обслуживание не требует дополнительных инвестиций.</p>
<p>Основополагающие работы по результатам геномной селекции были осуществлены Мовиссеном с соавторами, в которых были проведены оценки распределения QTLs от эффектов маркеров и показана множественная их зависимость от используемых математических моделей (Meuwissen T. H., Hayes B. J., Goddart M. E., 2001; Meuwissen T. H., Karlsen A., Lien S., Olsaker I., Goddard M. E., 2002; Meuwissen T. H., Goddard M. E., 2004). Кроме того, коммерческие популяции КРС находятся между экстремальными состояниями, поскольку снижение генетического разнообразия всегда компенсируется увеличением количества мутаций, т. е. увеличением полиморфизма ДНК.</p>
<p>Все предыдущие разделы касались методов определения фактических полиморфизмов, ответственных за наблюдаемую генетическую вариантность<br />
в количественных экономически важных признаках КРС. Они включены в программы отбора в качестве фиксированных эффектов. С появлением технологии ZFN, TALEN и CRISPR/Cas9 фактически стало возможным изменять тип эмбрионов. Эти технологии теперь позволяют модифицировать эпигеном целого локуса для изменения регуляторных путей, что, в конечном счете, приведет<br />
к значительным изменениям фенотипа животного. Однако в настоящее время применение этих технологий для сельскохозяйственных животных вызывает большие этические возражения.</p>
<h3><strong>1.3 Выбор платформы для реализации исследования.Описание панели TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel (Illumina, США)</strong></h3>
<p>Идентификация животных играет ключевую роль в государственной сельскохозяйственной политике, позволяя управлять выплатами субсидий, перемещением скота, составлением графиков испытаний и борьбы с болезнями. Достижения в области геномики крупного рогатого скота позволили использовать врожденную генетическую изменчивость для уникальной идентификации отдельных животных с помощью профилирования ДНК, во многом благодаря тому, что было получено в области генотипирования человека за последние<br />
20 лет. Тест на ДНК-профилирование, основанный на маркерах биаллельных однонуклеотидных полиморфизмах (SNP), обеспечивает значительные преимущества по сравнению с текущими отраслевыми тестами на основе стандартных коротких тандемных повторов (STR), его легче анализировать и интерпретировать.</p>
<p>Выявление и регистрация скота и контроль его перемещения является важной частью сельскохозяйственной политики национальных правительств. Такие схемы лежат в основе борьбы с болезнями, управления грантами и субсидиями, обеспечения гигиены пищевых продуктов и безопасности, все это облегчает отзыв продукции при необходимости.</p>
<p>В результате этих преимуществ, а также в ответ на основные проблемы со здоровьем животных, такие как BSE (губчатая энцефалопатия) и ящур, которые влияют на домашний скот, производителей и потребителей, во многих странах развитого мира приняли национальные базы данных, основанные на пронумерованных ушных бирках, для регистрации личности и перемещений крупного рогатого скота (Buick W., 2004; Houston R., 2001).</p>
<p>Глобализация торговли также усилила аргументы в пользу улучшения отслеживания животных. Современные потребители, сталкивающиеся с расширением выбора из нескольких источников, могут также столкнуться с повышенными рисками в результате повышенной вероятности химического (атогенного) загрязнения пищевых продуктов (Caporale V., Giovannini A., Di Francesco C., Calistri P., 2001; McKean J. D., 2001). Такие кризисы могут поставить под угрозу экономическое благополучие агропродовольственных отраслей, а также повлиять на здоровье и доверие потребителей. Кризис БФБ 1990-х гг. наглядно продемонстрировал это, и показал, что действия одного государства могут негативно повлиять на общественное здоровье других (McGrann J., Wiseman H., 2001).</p>
<p>В свете потенциальных опасностей, о которых говорилось выше, Европейский союз (ЕС) принял Директиву Совета 92/102/EEC, в которой говорится, что все коровы в государствах-членах должны быть идентифицированы с помощью ушной бирки с уникальным идентификационным кодом (Ammendrup S., Fus­sel A. E., 2001). Более расширенные правила Совета 1760/2000 (Regulation (EC) № 1760/2000, 2000) и ст. 18 правила 178/2002 (Council Regulation (EC) № 178/2002, 2002) устанавливают необходимость для государств-членов контролировать регистрацию и отслеживание крупного рогатого скота через компьютеризированную базу данных, основанную на системе с двумя ушными бирками. Эти расширенные правила отслеживаемости также распространяются на продукты, полученные от животного после убоя, гарантируя возможность отследить партию мяса вплоть до происхождения животного с помощью маркировки на тушах, отрубах и упаковке. Эти правила были разработаны для обеспечения того, чтобы полная прослеживаемость животных и мяса была «установлена на всех этапах производства, обработки и распределения».</p>
<p>Дальнейшая разработка схем меток может включать использование электронных идентификационных устройств, таких как метки радиочастотной идентификации (RFID), рубцовые болюсы и инъекционные транспондеры, которые автоматизируют считывание идентификационных данных животных, тем самым уменьшая ошибки перевода (Ribo O., Korn C., Meloni U., Cropper M., De Winne P., Cuypers M., 2001).</p>
<p>Недавний отчет ЕС об использовании электронной идентификации в агропродовольственной промышленности (проект IDEA – IDentification Electronique des Animaux; http://idea.jrc.it/), хотя и приветствовал способность таких систем улучшать управление сельским хозяйством, тем не менее подтвердил, что предпочтительный вариант – ушные бирки RFID – все еще страдает от той же случайной потери меток и проблем с мошеннической перестановкой, которыми страдают традиционные схемы (Report From The Commission To The Council And The European Parliament, 2005).</p>
<p>Неправильная идентификация животных в результате потери метки имеет серьезные эпидемиологические последствия и проблемы с трекингом, которые могут привести к дорогостоящим последствиям для производителей. Степень потерь метки и отрицательное влияние этого на способность восстановить правильный идентификатор были определены в недавнем исследовании на активно размножаемых буйволах, которое показало, что среднее время сохранения ушной метки составляет 272 дня (Fosgate G. T., Adesiyun A. A., Hird D. W., 2006). Аналогичным образом, недостатки в маркировке мяса на скотобойнях и в торговых точках приводят к потере коррекции между номерами партий и образцов. В недавнем исследовании с использованием типирования ДНК было показано, что 2 % случайно выбранных образцов из меченых тушек в скотобойне не соответствовали профилям животных, от которых они якобы исходили. Этот показатель увеличивался до 3 %, когда отбор проб проводился в торговой точке (Capoferri R., Bongioni G., Galli A., Aleandri R., 2006).</p>
<p>Корень этих проблем в обычных и электронных системах мечения/мар­кировки возникает из-за их зависимости от методов, с помощью которых отслеживают устройства, прикрепленные к животным и их продуктам, но не самих животных или продуктов. Тем не менее, профилирование ДНК, которое использует неизменные биологические свойства отдельных животных для получения уникального идентификатора, предлагает потенциальное решение для научной проверки идентичности животных (Pettitt R. G., 2001). В настоящее время не существует технологии, позволяющей считывать профили ДНК в режиме реального времени, в отличие от меток и ярлыков. Это ограничивает использование профилирования по ДНК в качестве основного идентификатора животных и производных пищевых продуктов. Тем не менее, несмотря на эти ограничения, профилирование по ДНК можно эффективно использовать в ретроспективных аудитах для проверки идентичности и качества меток для обеспечения существующих технологий отслеживания мяса (Cunningham E. P., Meghen C. M. , 2001; Pettitt R. G., 2001; Raspor P., 2004). Дополнительное преимущество проверки происхождения на основе ДНК делает ее мощным методом проверки информации из базы данных по национальным стадам.</p>
<h4><strong><em>1.3.1 ДНК-маркеры и ДНК-профилирование</em></strong></h4>
<p>Уровень полиморфной изменчивости, наблюдаемый для бычьих коротких тандемных повторов (STR), позволяет использовать относительно немного локусов для идентификации крупного рогатого скота и определения его происхождения (Glowatzki-Mullis M. L., Gaillard C., Wigger G., Fries R., 1995; Heyen D. W., Beever J. E., Da Y., Evert R. E., Green C., Bates S. R., Ziegle J. S., Lewin H. A., 1997).</p>
<p>Несколько хорошо определенных панелей STR для крупного рогатого скота имеются в продаже. Одна такая 11-маркерная панель была одобрена Международным обществом генетики животных (ISAG) для использования племенными сообществами для регистрации племенных быков, телок и их потомства.</p>
<p>Одиночные нуклеотидные полиморфизмы (SNP) представляют собой гораздо более простую форму вариации ДНК, чем микросателлиты, включая изменение одного нуклеотида в одной позиции генетического кода. Это отсутствие разнообразия делает маркеры SNP менее информативными, чем микросателлиты.<br />
В результате, одиночные SNP нельзя использовать для профилирования индивидуумов. Тем не менее, генотипирование нескольких SNP может решить эту проблему (Werner F. A. O., Durstewitz G., Habermann F. A., Thaller G., Kramer W., Kollers S., Buitkamp J., Georges M., Brem G., Mosner J., Fries R., 2004).</p>
<p>Генотипирование с использованием SNP также имеет явные преимущества перед генотипированием с помощью STR. Из-за своего меньшего размера они менее подвержены мутациям в гаметах, и поэтому не имеют проблемы потери идентичности при смене поколений, которые могут влиять на анализ с использованием STR, поскольку они мутируют между поколениями (Werner F. A. O., Durstewitz G., Habermann F.A., Thaller G., Kramer W., Kollers S., Buitkamp J., Georges M., Brem G., Mosner J., Fries R., 2004). SNP также являются более надежными при их интерпретации/анализе по сравнению с STR (Krawczak M., 1999), и они могут быть генотипированы с помощью различных методов с высокой пропускной способностью на различных платформах, многие из которых могут быть автоматизированы с экономией при масштабировании (Kruglyak L., 1997). С появлением постоянно улучшающихся технологий генотипирования (Kim S., Misra A., 2007) в последнее время стало привлекательным создание системы профилирования ДНК на основе SNP для идентификации крупного рогатого скота. Для этой цели недавно были собраны две панели SNP (Heaton M. P., Harhay G. P., Bennett G. L., Stone R. T., Grosse W. M., Casas E., Keele J. W., Smith T. P. L., Chitkon-McKown C. G., Laegreid W. W., 2002; Werner F. A. O., Durstewitz G., Habermann F.A., Thaller G., Kramer W., Kollers S., Buitkamp J., Georges M., Brem G., Mosner J., Fries R., 2004).</p>
<p>TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel – это ценное решение для тестирования родства для нескольких пород мясного и молочного скота. В данном анализе предлагается больше информации в одном анализе, чем в одном только тесте родства, благодаря чему сервисные лаборатории могут использовать панель секвенирования TruSeq Bovine для получения более информированных рекомендаций по управлению стадом.</p>
<h4><strong><em>1.3.2 Преимущества</em></strong></h4>
<p>Расширенное содержание повышает ценность – панель включает в себя все рекомендуемые материалы от Международного общества генетики животных (ISAG), а также связанные с заболеваниями и экономически важные признаки.</p>
<p>Надежный анализ лимитирует затраты – интеллектуальный дизайн контента, высокая точность и надежность исключают необходимость в дорогостоящем многократном или повторном тестировании.</p>
<p>Интуитивно понятное программное обеспечение упрощает анализ интерпретации данных – программное обеспечение автоматически преобразует результаты секвенирования в генетический профиль без необходимости экспертизы в области биоинформатики.</p>
<p>Хотя микросателлиты или короткие тандемные повторы (STR) являлись предпочтительными генетическими маркерами для контроля происхождения<br />
у крупного рогатого скота, мировая индустрия переходит к методам на основе однонуклеотидных полиморфизмов – SNP (ISAG cattle core and additional SNP panel 2013). SNP обладают рядом преимуществ (Allen A. R. [et al.], 2010; Fernández M. E. [et al.], 2013; Schütz E., Brenig B., 2015):</p>
<ul>
<li>низкая частота мутаций между поколениями;</li>
<li>надежная интерпретация данных;</li>
<li>совместимость с автоматизированным, высокопроизводительным<br />
анализом;</li>
<li>подходит для стандартизированного представления результатов генотипирования.</li>
</ul>
<p>В панели TruSeq Bovine Parentage используется проверенная технология секвенирования следующего поколения Illumina (NGS), обеспечивающая точные результаты генотипирования для определения происхождения на основе SNP. Оптимизированный рабочий процесс, включая подготовку библиотеки посредством анализа данных, повышает эффективность. Высокая точность<br />
и надежность уменьшают необходимость повторного тестирования, помогая лимитировать расходы. В панели TruSeq Bovine объединены SNP для определения происхождения и добавлено генотипирование биологически значимых признаков в едином тесте.</p>
<p>Разработанная учеными Illumina в соответствии с рекомендациями ISAG, панель секвенирования коров TruSeq Bovine содержит 263 гена. Они охватывают весь рекомендуемый ISAG контент и дополнительные экономически ценные и связанные с заболеванием маркеры (таблица 4).</p>
<p><strong>Таблица 4</strong> – Содержимое панели секвенирования TruSeq Bovine</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Описание</td>
<td>Число SNP</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>SNP, используемые для оценки происхождения</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Основная панель SNP для оценки происхождения<br />
согласно ISAG (ISAG Core SNP Targets)</td>
<td>100</td>
</tr>
<tr>
<td>Дополнительная панель SNP для оценки происхождения согласно ISAG (ISAG Additional SNP Targets)</td>
<td>100</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><em>Продолжение таблицы 4</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Вариантные мишени, ассоциированные с генетическими<br />
нарушениями/заболеваниями</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Пренатальные/перинатальные смертельные заболевания (HH1, HH3, HH4, MH1 и т. д.)</td>
<td>12</td>
</tr>
<tr>
<td>Постнатальные смертельные заболевания<br />
(цитруллинемия, врожденная мышечная дистония,<br />
кардиомиопатия, миоклонус и т. д.)</td>
<td>17</td>
</tr>
<tr>
<td>Нелетальные патологии, ухудшающие состояние<br />
(синдром Марфана, сращение пальцев, протопорфирия, гемофилия A и т. д.)</td>
<td>19</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2"><strong>Вариантные мишени, ассоциированные с экономически<br />
ценными признаками</strong></td>
</tr>
<tr>
<td>Мужская фертильность</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>Высота в холке и внешний вид</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Качество мяса</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>Качество молока</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>Общее количество SNP/вариантных мишеней</td>
<td>263</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<h4><strong><em>1.3.3 Панель SNP, используемая для оценки происхождения</em></strong></h4>
<p>Международное общество генетики животных (ISAG) создало набор однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) для тестирования происхождения (родства) крупного рогатого скота – <em>Bos taurus</em>, который следует использовать на международном уровне, чтобы сделать результаты сопоставимыми между лабораториями. Панель состоит из 100 основных SNP и дополнительного набора из 100 маркеров (CMMPT 2012). SNP в основной панели были отобраны преимущественно на основе данных по европейским тауринным породам и, таким образом, могут не быть идеальными для установления родства в родословно родственных породах (Lachance J., Tishkoff S. A. , 2013; Strucken E., Gudex B., Ferdosi M., Lee H., Song K., Gibson J, Kelly M., Piper E., Porto-Neto L., Lee S. H., Gondro C., 2014). Для решения этой проблемы<br />
в ISAG была предложена дополнительная маркерная панель для увеличения мощности исключения в индиковых и синтетических породах, и эти породы были добавлены в сравнительные тесты общества (<a href="http://www.isag.us/comptest.asp?autotry=true&amp;ULnotkn=true" target="_blank" rel="noopener">http://www.isag.us/<br />
comptest.asp?autotry=true&amp;ULnotkn=true</a>).</p>
<h4><strong><em>1.3.4 SNP, ассоциированные с генетическими нарушениями/заболеваниями</em></strong></h4>
<p><strong>Пренатальная/перинатальная смертность</strong></p>
<p>Аборты, происходящие во время поздней беременности, приводят к значительным экономическим потерям. Оценка стоимости аборта для производителя варьировалась от 90 до 1900 долл. США (De Vries A., 2006; Hovingh E., 2009; Peter A. T., 2000) в зависимости от времени аборта, различий в прогнозируемой производительности коров, а также решениях о разведении и замене. Для голштинской породы известно несколько рецессивных патологических аномалий, связанных с гибелью и абортом плода, и отдельных локусов, которые снижают жизнеспособность эмбрионов или раннее развитие плода у крупного рогатого скота. Одной из распространенных генетических аномалий, вызывающих аборт у коров голштинской породы, является сложный порок позвоночника – CVM (Agerholm J. S., Bendixen C., Andersen O., Arnbjerg J., 2001). CVM вызывает пороки развития во время средней и поздней беременности, хотя некоторые беременности достигают срока и приводят к мертворождению.</p>
<p>Недавно генотипирование сотен тысяч животных в популярных молочных породах США с использованием панелей однонуклеотидного полиморфизма (SNP) по всему геному дало возможность найти области генома с несбалансированным H-W равновесием. Отсутствие ожидаемых гомозиготных гаплотипов в геномной области может быть связано с пагубными последствиями для развития плода и может вызвать аборт и мертворождение у голштинского крупного рогатого скота (Glusman G., Cox H. C., Roach J. C., 2014; VanRaden P. M., Olson K. M., Null D. J., Hutchison J. L., 2011)]. В 2011 г. три летальных гаплотипа, влияющих на развитие плода у крупного рогатого скота голштинской породы, были идентифицированы и локализованы на бычьих хромосомах 5 (HH1),<br />
1 (HH2) и 8 (HH3) (VanRaden P. M., Olson K. M., Null D. J., Hutchison J. L., 2011). Два года спустя во всем мире было зарегистрировано 14 дополнительных летальных гаплотипов (HH4–HH17) у крупного рогатого скота голштинской породы, и тем временем некоторые из них были разрешены на молекулярном уровне, то есть HH1 (APAF1) и HH3 (SMC2), HH4 (GART) и HH5 (TFB1M).</p>
<p>Большинство рецессивных генов, связанных со снижением фертильности<br />
и потерями беременности у крупного рогатого скота, весьма трудно обнаружить, и они передаются без обнаружения, поэтому они не включены в список факторов, ведущих к абортам. HH1 приводит к абортам в течение всего периода беременности, но HH3 приводит к потере эмбриона вскоре после зачатия (VanRaden P. M., O’Connell J. R., Wiggans G. R., Weigel K. A., 2011). В случае<br />
с HH1, потеря фертильности на 34, 51 и 63 % связана с этим гаплотипом и происходит через 60, 100 и 140 дней после оплодотворения, соответственно. Для HH2 – 56 % связаны с этим гаплотипом и происходят через 60 дней после оплодотворения и 94 % – через 100 дней. Для HH3 потерей фертильности на<br />
93 % связана с этим гаплотипом и происходят через 60 дней после оплодотворения (Norman H. D., Miller R. H., Wright J. R., Hutchison J. L., Olson K. M., 2012).</p>
<p><strong><em>HH1</em></strong> был картирован в бычьей хромосоме 5 (BTA5), на 58–66Mb (сборка генома UMD 3.0). Используя секвенирование всего генома быка Arlinda Chief из фермы Pawnee Farm (родился в 1962 г. и был одним из самых плодовитых быков в истории разведения голштинов) и трех его сыновей, Адамс с соавторами в 2016 г. идентифицировали причинную нонсенс-мутацию (p.Q579X) в факторе 1, активирующем апоптотическую протеазу (APAF1) в HH1 (Adams H. A., Sonstegard T. S., VanRaden P. M., Null D. J., Van Tassell C. P., Larkin D. M., Lewin H. A., 2016). Предполагается, что эта мутация отрезает 670 аминокислот (53,7 %) в белке APAF1, которые включают домен WD40 – критический для межбелковых взаимодействий. Белок, кодируемый APAF1, является центральным элементом апоптотического каскада, опосредованного цитохромом С (Apweiler R., Bairoch A., Wu C. H., Barker W. C., Boeckmann B., Ferro S., Gasteiger E., Huang H., Lopez R., Magrane M., Martin M. J., Natale D. A., O’Donovan C., Redaschi N., Yeh L. S., 2004), и напрямую связан с нарушениями развития и нейродегенеративными заболеваниями (Blake J. A., Bult C. J., Ka­din J. A., Richardson J. E., Eppig J. T., 2011; Honarpour N., Gilbert S. L., Lahn B. T., Wang X., Herz J., 2001). Экспрессия APAF1 во время мышиного развития начинается на ранних стадиях в различных эмбриональных тканях и имеет важное значение для развития центральной нервной системы. Гомозиготный по нокаутному аллелю гена APAF1 у мышей приводит к эмбриональной летальности<br />
к 16,5-му дню, а у APAF1-дефицитных мышей обнаруживается чрезмерный рост головного мозга и черепно-лицевые пороки развития (Honarpour N., Gil­bert S. L., Lahn B. ., Wang X., Herz J., 2001; Müller M., Berger J., Gersdorff N., Cecconi F., Herken R., Quondamatteo F., 2005).</p>
<p>Гомозиготность по этому аллелю приводит к самопроизвольному аборту<br />
и, следовательно, к снижению фертильности у быков-носителей, если они спариваются с коровами-носителями, потому что функциональный пептид APAF1 необходим для развития эмбрионов. По оценкам, спонтанные аборты, вызванные этой мутацией во всем мире, за последние 35 лет составили 525000, что составляет около 420 млн долл. убытков. После генотипирования 246773 голштинов было обнаружено, что 5299 коров являлись гетерозиготами по APAF1, и не было обнаружено гомозиготных коров по этой мутации, поэтому частота носителей мутации APAF1 составила 2,1 % (Adams H. A., Sonstegard T. S., VanRa­den P. M., Null D. J., Van Tassell C. P., Larkin D. M., Lewin H. A., 2016).</p>
<p><strong><em>HH2</em>. </strong>В 2014 г. МакКлюр с соавторами уточнили картирование гаплотипа HH2 на BTA1 с 94860836 до 96553339 (UMD3.1) (McClure M. C., Bickhart D., Null D., Vanraden P., Xu L., Wiggans G., Liu G., Schroeder S., Glasscock J., Armstrong J., Cole J. B., Van Tassell C. P., Sonstegard T. S., 2014). В обширном исследовании, включающем захват экзома и секвенирование следующего поколения, МакКлюр с соавторами не смогли обнаружить какой-либо потенциально причинный вариант для гаплотипа HH2. Эффекты фертильности для HH2 были в значительной степени подтверждены путем сравнения нормальных показателей зачатия для голштинов (31 %) с частотой спаривания гетерозиготных быков с дочерями гетерозиготных быков (VanRaden P. M., Olson K. M., Null D. J., Hutchison J. L., 2011). Показатели зачатия носителей HH2 были ниже среднего. Большинство потерь эмбрионов для HH2 происходило до 100-го дня беременности (VanRaden P. M., Olson K. M., Null D. J., Hutchison J. L., 2011). Частота мертворождения для HH2 была невысока, но все-таки незначительно выше обычной. Бык-основатель гаплотипа HH2 был прослежен по происхождению до отца по имени Willowholme Mark Anthony (McClure M. C., Bickhart D., Null D., Vanraden P., Xu L., Wiggans G., Liu G., Schroeder S., Glasscock J., Armstrong J., Cole J. B., Van Tassell C. P., Sonstegard T. S., 2014).</p>
<p><strong><em>HH3</em>.</strong> В своей статье от 2014 г. МакКлюр с соавторами также уточнили картирование гаплотипа HH3 на BTA8 с 95,057,877 до 95,468,310 (UMD3.1) (McClure M. C., Bickhart D., Null D., Vanraden P., Xu L., Wiggans G., Liu G., Schroeder S., Glasscock J., Armstrong J., Cole J. B., Van Tassell C. P., Sonstegard T. S., 2014). Кроме того, в своей статье Детуайлер с совторами заявили, что в проекте, включающем 1000 бычьих геномов, в качестве носителя гаплотипа HH3 был идентифицирован один бык (Daetwyler H. D., Capitan A., Pausch H., Stothard P., van Binsbergen R., Brøndum R. F., Liao X., Djari A., Rodriguez S. C., Grohs C., Esquerré D., Bouchez O., Rossignol M. N., Klopp C., Rocha D., Fritz S., Eggen A., Bowman P. J., Coote D., Chamberlain A. J., Anderson C., Van Tassell C. P., Hulseg­ge I., Goddard M. E., Guldbrandtsen B., Lund M. S., Veerkamp R. F., Boichard D. A., Fries R., Hayes B. J., 2014). С использованием методик экзомного захвата и секвенирования следующего поколения, МакКлюр с соавторами установили, что данная мутация представляла SNP-замену (T/C) в 24 экзоне гена структурной сохранности хромосом 2 (SMC2). Для подтверждения этого, мутация была генотипирована путем секвенирования панели геномов 10 известных носителей HH3; все они были гетерозиготными по мутации, подтверждая связь между областью HH3 и аллелем g.95410507C. Из-за жизненно важной роли SMC2 в репарации ДНК и конденсации хромосом во время клеточного деления, эта мутация вызывает ненейтральную и непереносимую замену в НТФ-азном домене кодируемого белка из-за смены аминокислоты с фенилаланина на серин.</p>
<p>Кроме того, 5606 голштинских особей были генотипированы по мутации T&gt;C с использованием стандартизированного метода Illumina BeadChip, и не было выявлено ни одного индивида с генотипом CC, что подтверждает гипотезу, что эта мутация вызывает эмбриональную летальность. Более того, частота зачатия была ниже, чем частота зачатия у здоровых голштинов (31 %), при спаривании гетерозиготных быков HH3 с дочерями гетерозиготных быков. Большинство потерь зачатия для HH3 происходило до 60 дней (VanRaden P. M., Olson K. M., Null D. J., Hutchison J. L., 2011). Бык-основатель для HH3 был прослежен до производителей по имени Glendell Arlinda Chief и Gray View Skyliner (McClure M. C., Bickhart D., Null D., Vanraden P., Xu L., Wiggans G., Liu G., Schroeder S., Glasscock J., Armstrong J., Cole J. B., Van Tassell C. P., Sonste­gard T.S., 2014).</p>
<p><strong><em>HH4</em>.</strong> Фритц с соавторами в 2013 г. локализовали HH4 на BTA1 в области 1,9–3,3 Мб (сборка генома UMD 3.1) и предоставили значительные доказательства возможной причинной мутации в гене GART, который кодирует глицинамид рибонуклеотидтрансформазу, что привело к p.N290T (Fritz S., Capitan A., Djari A., Rodriguez S. C., Barbat A., Baur A., Grohs C., Weiss B., Boussaha M., Esquerré D., Klopp C., Rocha D., Boichard D., 2013). Было предсказано, что две мутации, связанные с HH4, приводят к патологии: трансверсия А-С в положении g.1277227A.C и переход G-A в положении g.2490314G.A на BTA1. Первая из них приводит к замене аспарагина в предполагаемом сайте связывания марганца треонином (p.N290T) в белке GART. Аспарагин-290 полностью консервативен среди эукариот, что доказывает ключевую роль этой аминокислоты<br />
в функционировании GART. Кроме того, GART жизненно важен для биосинтеза пуринов <em>de novo</em>, которые являются важными элементами ДНК и РНК. Поэтому, ожидается, что потеря функции GART приведет к гибели эмбриона на ранних стадиях эмбриональной жизни. Эти данные убедительно подтверждают потенциальную роль мутации в GART (p.N290T) в снижении фертильности, наблюдаемой при спаривании между носителями HH4 и дочерями носителей HH4 (Fritz S., Capitan A., Djari A., Rodriguez S. C., Barbat A., Baur A., Grohs C., Weiss B., Boussaha M., Esquerré D., Klopp C., Rocha D., Boichard D., 2013). Вторая мутация – g.2490314G.A – приводит к замене цистеина на тирозин в остатке 13 гомолога A белка кинетохоры MIS18 (S. pombe) (MIS18A p.C13Y) (Fritz S., Capitan A., Djari A., Rodriguez S. C., Barbat A., Baur A., Grohs C., Weiss B., Boussaha M., Esquerré D., Klopp C., Rocha D., Boichard D., 2013). Хотя гомозиготный по нокаутному аллелю MIS18A является летальным на стадии эмбриона у мышей (Kim I. S., Lee M., Park K. C., Jeon Y., Park J. H., Hwang E. J., Jeon T. I., Ko S., Lee H., Baek S. H., Kim K. I., 2012), и хотя эта мутация, как было предсказано, является вредной в соответствии с SIFT и Polyphen для функции белка человека, менее вероятно, что эта мутация отвечает за данный фенотип, поскольку остаток 13 и соседняя аминокислотная последовательность имеют слабую консервативность у плацентарных млекопитающих (Fritz S., Capitan A., Dja­ri A., Rodriguez S. C., Barbat A., Baur A., Grohs C., Weiss B., Boussaha M., Esquerré D., Klopp C., Rocha D., Boichard D., 2013).</p>
<p>Генотипирование 72 производителей-быков, представляющих все гаплотипы с частотой выше 1 %, выявило, что мутация g.1277227A.C была связана только с гаплотипом HH4, тогда как мутация g.2490314G.A могла быть связана с другими гаплотипами. Последующее генотипирование четырех животных, которые были составными гетерозиготами по гаплотипам, связанным<br />
с g.2490314G.A, подтвердило их гомозиготность и определенно исключило эту кандидатурную мутацию.</p>
<p><strong><em>HH5</em>.</strong> С использованием стратегии, аналогичной стратегии ван Радена<br />
и его соавторов (VanRaden P. M., O’Connell J. R., Wiggans G. R., Weigel K. A., 2011), Купером с соавторами был выделен гаплотип HH5, связанный со сниженной рождаемостью, который находится на 92350052–93910957 п.н. на BTA9 (Cole J. B., VanRaden P. M., Null D. J., Hutchison J. L., Cooper T. A., Hubbard S. M., 2015; Cooper T. A., Wiggans G. R., Null D. J., Hutchison J. L., 2013). Шульц с соавторами определили вероятную причину этого гаплотипа – мутацию в виде делеции 138kb, охватывающей от 93233 до 93371 kb на BTA9, содержащую только диметиладенозинтрансферазу 1 (TFB1M) (Schütz E., Wehrhahn C., Wanjek M., Bortfeld R., Wemheuer W. E., Beck J., Brenig B., 2016). Края делеции фланкированы бычьими длинными вкрапленными ядерными элементами Bov-B (выше делеции) и L1ME3 (ниже делеции), что позволяет предположить, что гомологичная рекомбинация ответственна за это событие. TFB1M необходима для синтеза и функционирования малой рибосомальной субъединицы митохондрий. Связь этой делеции с данным гаплотипом подтверждается тем фактом, что гомозиготные мыши, нокаутированные по TFB1M, нежизнеспособны<br />
и гибнут на стадии эмбриона. Летальность мышей HH5 – TFB1M-/- демонстрирует эмбриональную гибель на 8,5 день (Metodiev M. D., Lesko N., Park C. B., Camara Y., Shi Y., Wibom R., Hultenby K., Gustafsson C. M., Larsson N. G., 2009).</p>
<p>Кроме того, клеточный нокаут подтвердил серьезное летальное воздействие на клетки млекопитающих вследствие полной потери трансляции белка<br />
в митохондриях (Metodiev M. D., Lesko N., Park C. B., Camara Y., Shi Y., Wi­bom R., Hultenby K., Gustafsson C. M., Larsson N. G., 2009). Шульц с соавторами проверили имеет ли делеция TFB1M ко-доминантный эффект у крупного рогатого скота-носителя <em>in vivo</em>, для этого соотношение митохондриальной ДНК<br />
к ядерной ДНК было определено с помощью ddPCR в ДНК, выделенной из лейкоцитов у случайным образом выбранных представителей крупного рогатого скота. По данному параметру не наблюдалось существенной разницы между носителями и диким типом, что предполагает рецессивный эффект, который согласуется с фенотипом животных-носителей, у которых не наблюдается каких-либо заметных отклонений. Учитывая тот факт, что никакой другой ген не находится в делетированном участке, вместе с вышеупомянутыми данными<br />
и высокой сегрегацией по данным HH5, эти результаты могут служить доказательством того, что эта делеция является причиной HH5 (Schütz E., Wehr­hahn C., Wanjek M., Bortfeld R., Wemheuer W. E., Beck J., Brenig B., 2016). Бык-основатель HH5 восходит к Thornlea Texal Supreme, родившемуся в 1957 г. Частота гетерозиготных носителей составляет примерно 4–5 % в европейской<br />
и североамериканской фризской популяции голштинов, и приводит к преждевременному прерыванию беременности до 60-го дня беременности (Schütz E., Wehrhahn C., Wanjek M., Bortfeld R., Wemheuer W. E., Beck J., Brenig B., 2016).</p>
<p>Частое использование определенных производителей и их потомков в современном скотоводстве несет риск появления генетических нарушений в популяции в течение короткого периода времени. Было показано, что после выявления причинной мутации генотипирование очень эффективно устраняет патологических носителей в популяции. За последнее время с использованием большого массива данных по SNP у коров голштинской породы были обнаружены несколько гаплотипов, связанных с летальными фенотипами, и для некоторых из них были определены гены, вызывающие данные гаплотипы. Одной из эффективных стратегий в случае определенных рецессивных мутаций является обнаружение носителей с целью их исключения из размножающейся популяции или применении различных стратегий спаривания для контроля распространения нежелательных аллелей внутри популяции или сохранения их частот на низких уровнях.</p>
<h2><strong>2 ОПИСАТЕЛЬНАЯ ЧАСТЬ</strong></h2>
<h3><strong>2.1 Описание экспериментальной площадки – учхоза «Краснодарское» Кубанского ГАУ</strong></h3>
<p>Государственный племенной завод учебно-опытное хозяйство «Крас-нодарское» Кубанского ордена Трудового Красного Знамени аграрного университета организован в апреле 1958 г. на базе племенного свиноводческого совхоза «Краснодарский», созданного еще в 1939 г. Как племенной завод хозяйство было утверждено приказом Министерства сельского хозяйства СССР в августе 1979 г.</p>
<p>Учхоз «Краснодарское» расположен в пригороде г. Краснодара на Прикубанской равнине, рельеф которой имеет слабый уклон с востока на запад. Земельный массив учхоза вытянут с востока на запад на 10 км, с севера на юг – на 3,5 км. Центральная усадьба учхоза находится в 20 км от железнодорожной станции « Краснодар-2» и в 6 км от автомагистрали Краснодар–Ростов. Жилые поселки, фермы и другие производственные участки племзавода связаны между собой и базами снабжения и сбыта дорогами с асфальтным покрытием.</p>
<p>На январь 2018 г. земельная площадь учхоза составляет 4080 га, в том числе сельскохозяйственные угодья – 3755 га, из них пашни – 3146 га.</p>
<p>По агрономическим свойствам почвы преимущественно западно-прикав­казские тяжелосуглинистые черноземы разной степени выщелоченности, которые характеризуются высоким плодородием и вполне пригодны для выращивания основных сельскохозяйственных культур. По пониженным элементам рельефа размещаются деградированные глинистые черноземы и черноземно-луговые тяжело-суглинистые почвы. Среднегодовое количество осадков составляет около 600 мм. В течение года осадки распределяются неравномерно, при этом большая их часть выпадает осенью и зимой. Средняя продолжительность безморозного периода 180–200 дней. Зима сравнительно теплая. Вегетационный период продолжается 230–250 дней. Отрицательными моментами климата являются восточные суховеи, град, в отдельные годы засуха. Потребности хозяйства в воде удовлетворяются за счет скважин по водопроводу.</p>
<p>В учхозе выращивают озимые зерновые культуры, кукурузу на зерно и силос, сою, подсолнечник и многолетние травы. Однако основная задача отрасли растениеводства – обеспечить животноводство полноценными кормами.</p>
<p>До 2009 г. животноводство было представлено двумя отраслями: свиноводство – это разведение племенных свиней крупно-белой породы и скотоводство – выращивание племенного молодняка черно-пестрой породы и производство товарной продукции молока и мяса. В 2009 г. произошло закрытие фермы по выращиваю свиней в связи с отсутствием эффективности их производства.</p>
<p>В настоящее время животноводство представлено одной отраслью: производство товарной продукции молока и мяса КРС. За весь изучаемый период большую долю в структуре товарной продукции хозяйства занимает продукция животноводства, в основном это молоко (в 2017 г. доля составляла 57 %). Следовательно, основное направление производственной деятельности учхоза – это молочное скотоводство.</p>
<p>Доля растениеводческой продукции в общей структуре товарной продукции за три года колеблется с 25 до 32 %. С 2014 г. хозяйство стало выращивать сою, а с 2015 г. реализовывает ее, удельный вес которой в структуре товарной продукции составил 5 %.</p>
<p>За период с 2013 г. по 2015 г. площадь земель сократилась на 231 га. Это связано с расширением границ города.</p>
<p>Незначительно выросла численность работников по сравнению с 2013 г. на 16 человек, а занятых в сельском хозяйстве – на 21 человека.</p>
<p>Увеличилась стоимость основных производственных фондов на 54 %. Причинами такой динамики является то, что Племзавод УОХ «Краснодарское» ведет постоянную инвестиционную деятельность, связанную с расширением производства и модернизацией имеющихся зданий и сооружений, обновлением техники.</p>
<p>Поголовье крупного рогатого скота остается неизменным, а численность дойного стада за три года увеличилась на 13 %.</p>
<p>Производство молока в 2017 г. составило 8686 т, что на 1859 т больше, чем в 2013 г., или на 27 %. Увеличилось и производство мяса КРС на 30 т, или на 7 %. Увеличение производства продукции животноводства произошло за счет повышения продуктивности животных. Такие показатели были достигнуты благодаря современной системе управления стадом, позволяющая отслеживать производительность работы фермы как ежедневно, так и за длительный период, и новым кормораздатчикам с модулем Wi-Fi в комплексе с современным программным обеспечением, позволяющим оптимизировать систему кормления.</p>
<p>Хозяйство достигло высоких показателей продуктивности коров. Удой на одну корову в 2014 г. составил 9443 кг, а в 2015 г. – 9905 кг. Это позволило занять учхозу в 2013 г. 3-е место, а в 2014, 2015 гг. – 4-е место среди животноводческих хозяйств края.</p>
<p>Увеличился среднесуточный прирост молодняка КРС на 19 % и составил<br />
в 2017 г. 895 г. Незначительно вырос показатель, характеризующий получение приплода телят, – на 13 % по сравнению с 2013 г. Однако показатель по воспроизводству стада остается довольно низким – это 93 теленка на 100 коров, нетелей и телок старше 2-х лет и 68 телят на 100 коров.</p>
<p>В целом, финансовое состояние Племзавода УОХ «Краснодарское» Кубанского ГАУ можно определить как хорошее. Такое состояние позволяет учхозу вкладывать средства в долгосрочные инвестиции.</p>
<p>В 2013 г. было выполнено капитальных вложений на сумму 54399 тыс. руб., а в 2015 – в 1,4 раза больше – на сумму 77320 тыс. руб. Из этих средств<br />
на реконструкцию и строительство в 2013 г. было потрачено 2,5 млн руб.,<br />
а в 2015 г. – 3,1 млн руб.</p>
<p>За 2013–2015 гг. проведены реконструкция корпусов дойного стада и техническое перевооружение доильного зала. В 2013 г. установлена современная система управления стадом, позволяющая отслеживать производительность работы фермы как ежедневно, так и за длительный период. Тогда же были приобретены для растениеводства два трактора Challenger. В 2014 г. приобретены современные кормораздатчики на ферму КРС, трактор «Axion» в подразделение «Растениеводство». В 2015 г. установлен навигатор стада – пока единственный в стране. Также в 2015 г. приобретены сеялка Optima за 7,5 млн руб., автосамосвал КАМАЗ, дисковые бороны Challenger, был полностью реконструирован заправочный комплекс.</p>
<p>Источниками финансирования всех капитальных вложений являются только собственные средства хозяйства.</p>
<h3><strong>2.2 Применяемые для получения первичных данных подходы, материалы и методы</strong></h3>
<p>Для наиболее полого и качественного выполнения поставленных в проекте задач, нами был разработан ряд методических указаний и карт выполнения процедур. В процессе работы это значительно сократило вероятность ошибок<br />
и применяется нами не только в экспериментальных научно-практических, но<br />
и в педагогических целях при обучении персонала, аспирантов и студентов новым методам и подходам.</p>
<h4><strong><em>2.2.1 Подготовка прибора MiSeq к запуску процесса секвенирования</em></strong></h4>
<p><strong>Перед началом работы:</strong></p>
<ol>
<li>В ночь перед секвенированием поместить в холодильник:
<ol>
<li>картридж и реагенты (MiSeq Reagent Kit v3 – две коробки);</li>
<li>пробирку с PAL-библиотекой.</li>
</ol>
</li>
<li>Убедиться, что есть свежий (1–2 мес) 10%-й Tween 20. Если его нет, то добавить 5 ml 100%-го Tween 20 to 45 ml laboratory-grade water. This results in 10 % Tween 20.</li>
</ol>
<p>ИНФО:</p>
<ol>
<li>Ни в коем случае не менять региональные настройки (в том числе не менять язык на русский)!!!</li>
<li>Перед и после запуска прибора выполняем «Post-Run Wash» (промывка водой).</li>
<li>Раз в две недели выполняем «Maintenance Wash» (три промывки – «Tween – Вода – Вода»).</li>
<li>После «Maintenance Wash» ставим либо секвенирование, либо «Post-Run Wash» и выключаем. В растворе Tween не оставляем!!!</li>
</ol>
<p><a id="post-5131-_heading=h.gjdgxs"></a><strong>Приготовление свежего раствора Tween:</strong></p>
<p><a id="post-5131-_heading=h.swqos5f30gef"></a> Всегда используйте свежий моющий раствор для каждого этапа мойки инструмента. Повторное использование моющего раствора может возвращать отходы в линии подачи жидкости.</p>
<p>Для приготовления моющего раствора:</p>
<ul>
<li>добавить к 5 мл 100%-го Tween от 20 до 45 мл лабораторной воды. Это создаст 10%-й Tween 20;</li>
<li>добавьте 25 мл 10%-го Tween от 20 до 475 мл лабораторной воды;</li>
<li>перевернуть пробирку несколько раз, чтобы смешать содержимое;</li>
<li>заполните каждый из моющих компонентов свежим моющим раствором. Добавьте 6 мл моющего раствора в каждый резервуар моющего лотка;</li>
<li>добавьте 350 мл моющего раствора в бутылку на 500 мл.</li>
</ul>
<p><strong>Подготовительный этап:</strong></p>
<p>Включить прибор MiSeq (за два часа до предполагаемого запуска, чтобы успел охладиться холодильник).</p>
<p>Термостат для денатурации – 98 °C для пробирки 1,5 мл.</p>
<p>Лёд – для денатурации библиотеки.</p>
<p>12 мл 70–80%-го EtOH – смешать 10 мл спирта и 2 мл воды.</p>
<p>Носики: на 10 или 20 мкл – 1 шт.; на 1000 мкл – 1 уп.; на 5 мл.</p>
<p>Самплер: на 10–20 мкл; на 1000 мкл; на 5 мл.</p>
<p>Если не было возможности разморозить картридж с реагентами с вечера, то надо набрать в емкость воду комнатной температуры до ватерлинии на картридже и оставить его на час в ней.</p>
<p><strong>Подготовка прибора к запуску:</strong></p>
<p>Включить прибор (загрузка занимает 5–10 мин).</p>
<p>Если после прошлого запуска прибора прошло менее 7 дней, то выполняем «Post-Run Wash» (промывка водой):</p>
<ul>
<li>наполнить все лунки промывочного картриджа (с меткой «H2O») деионизованной водой (по 6 мл);</li>
<li>налить в PR2-бутыль порядка 200 мл деионизованной воды (треть<br />
бутылки);</li>
<li>запустить промывку.</li>
</ul>
<p><img width="449" height="298" class="wp-image-5139" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2542.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2542.png 449w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2542-300x199.png 300w" sizes="(max-width: 449px) 100vw, 449px" alt="word image 2542 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><a id="post-5131-_heading=h.30j0zll"></a> Если прибор стоял более 7 дней, он потребует сделать «Standby-Wash». При этом, если прошло всего около двух недель – игнорируем это предупреждение, и запускаем «Maintenance Wash» (один час, три шага):</p>
<ul>
<li>нажать «Perform wash»;</li>
<li>выбираем «Maintenance Wash»;</li>
<li>необходимо убедиться, что использованная ячейка (flow cell) находится в приборе;</li>
<li>приготовьте свежий моющий раствор: добавьте 25 мл 10%-го Tween 20<br />
к 475 мл лабораторной чистой воды (деионизованной воды);</li>
<li>перевернуть пробирку несколько раз, чтобы смешать содержимое;</li>
<li>выбрать команду «Next»;</li>
<li>заполните каждый резервуар промывочного лотка 6 мл промывочного раствора;</li>
<li>заполните моющую бутылку объемом 500 мл на 350 мл моющим<br />
раствором;</li>
<li>установите лоток «wash tray» и бутылку на прибор;</li>
<li>выбрать команду «Next»;</li>
<li>повторить цикл еще два раза с ВОДОЙ вместо раствора Tween!!!</li>
<li>остатки раствора Tween вылить из использованного картриджа, сполоснуть его водой и поставить сушиться вверх дном;</li>
<li>создать файл запуска при помощи «Illumina Experiment Manager».</li>
</ul>
<h4><a id="post-5131-_heading=h.3znysh7"></a><strong><em>2.2.2 Секвенирование</em></strong></h4>
<p><a id="post-5131-_heading=h.2et92p0"></a><strong>Денатурация библиотеки:</strong></p>
<p>Взять чистую LoBind пробирку на 1,5 мл, подписать ее как «DAL» (Diluted Amplicon Library) и поставить текущую дату.</p>
<p>Внести в пробирку 600 мкл гибридизационного буфера (HT1 из коробки<br />
с реагентами), 8 мкл Pooled DNA (из PAL-пробирки). Перемешать пипетированием (носиком на 1 мл). Медленно!</p>
<p>98 °C 2 мин → в лёд.</p>
<p><strong>Подготовить файл со списком образцов:</strong></p>
<p>Открыть «Illumina Experiment Manager» – «create sample plate», а потом «create sample sheet». Чтобы найти «manifest file» на рабочем столе компьютера выбрать ярлык «sample sheets» и там найти папку «manifests».</p>
<h4><a id="post-5131-_heading=h.tyjcwt"></a><a id="post-5131-_heading=h.3dy6vkm"></a><strong><em>2.2.3 Выключение прибора</em></strong></h4>
<p>Запустить «Post-Run Wash» (промывка водой).</p>
<p>Наполнить все лунки промывочного картриджа (с меткой «H2O») деионизованной водой (по 6 мл).</p>
<p>Налить в PR2-бутыль порядка 200 мл деионизованной воды (треть бутылки).</p>
<p>Запустить промывку.</p>
<p>После окончания промывки ВСЁ (и ячейка, и картридж, и реагенты) остается в приборе!</p>
<p>Запустить Internet Explorer. Откроется страница MiSeq Reporter (<a href="http://localhost:8042/default.htm" target="_blank" rel="noopener">http://localhost:8042/default.htm</a>). Убедиться, что в левом окошке в списке анализов появился наш анализ и рядом с ним стоит зеленая галочка. Это значит, что прибор закончил расчеты и его можно выключать. Если галочки нет,<br />
то ждем пока появится.</p>
<p>Выключить прибор.</p>
<h4><strong><em>2.2.4 Промывка прибора</em></strong></h4>
<p>Включить прибор.</p>
<p>Дождаться, когда на экране появится окно «Welcome to Illumina MySeq».</p>
<p>В это время сделать в журнале запись о запуске прибора (указать дату).</p>
<p>«Maintenance Wash» используется, если прибор стоял без дела/был выключен/бездействовал две недели.</p>
<ol>
<li>Проверить наличие 100% Tween 20, воды mq, большой пипетки (на<br />
10 мл) и наконечников к ней.</li>
<li>Одеть перчатки. Важно! 10%-й Tween 20 всегда готовится новый, вне зависимости от свежести.</li>
<li>Вставить в подставку пробирку на 50 мл и подписать «10% Tween 20».</li>
<li>В нее налить 45 мл воды и в воду добавить 5 мл 100%-го Tween 20<br />
и хорошо пропипетировать.</li>
<li>Из прозрачной бутылки с надписью Tween (стоит справа от секвенатора) вылить все содержимое вне зависимости от свежести, так как Tween хорошо загрязняется цветением. Промыть эту бутылку водой (воды брать немного).</li>
<li>В промытую бутылку налить 475 мл воды и 25 мл 10%-го Tween 20 (можно тем же наконечником, которым готовили 10%-й Tween 20).</li>
<li>Перевернуть аккуратно несколько раз бутылку, чтобы хорошо перемешать. Если появились пузырьки (а они появятся), то подождать пока перестанут идти.</li>
<li>Справа от секвенатора взять плату с надписью «Wash Tray», которая подписана «Tween».</li>
<li>В каждую из ячеек (круглые дырки) этой платы налить 6 мл Tween 20 из большой бутылки, которую только что приготовили (можно использовать тот же наконечник).</li>
<li>На экране прибора нажимаем «perform wash» → «perform maintenance wash».</li>
<li>Проверяем на месте ли ячейка (на экране изображается как и где проверять: слева поднять черную крышка и, придерживая держатель ячейки, нажимаем белую кнопку. Если ячейка на месте, аккуратно закрываем до шелчка держатель, и опускаем на место черную крышку). При этом важно, что ячейка должна ровно стоять на месте для нее предназначенном, при этом может чуть-чуть люфтить, что является нормальным.</li>
<li>Нажимаем на экране прибора кнопку «Next».</li>
<li>Открываем черную дверцу, поднимаем серую ручку справа до щелчка вверх (эта ручка располагается между бутылками).</li>
<li>Выливаем в раковину все из «waste bottle» (бутылка справа) и вставляем ее обратно на место.</li>
<li>Вытаскиваем бутылку с водой и закрываем крышкой с надписью H2O.</li>
<li>На место этой бутылки вставляем бутылку с Tween 20.</li>
<li>Опускаем серую ручку до упора вниз.</li>
<li>Опускаем ручку (белая ручка справа от бутылки с Tween 20/водой) холодильника и вытаскиваем «wash tray» с водой (воду не выливаем). «Wash tray» с водой ставим внутрь пластикового пакета, чтобы ничего не попало внутрь бутылки.</li>
<li>На место «wash tray» с водой ставим «wash tray» с Tween 20.</li>
<li>Нажимаем на экране прибора кнопку «Next».</li>
<li>После завершения промывания раствором Tween 20 программа на экране покажет «поменяйте wash tray».</li>
<li>Сменить наконечник у большой пипетки на новый (чистый).</li>
<li>Достать из полиэтиленового пакета «wash tray» с водой и в каждую дырку долить воды (из бутылки с водой) до уровня отмеченного.</li>
<li>Открываем черную дверцу. Поднимаем серую ручку, меняем (ВНИМАНИЕ!) бутылку с Tween 20 на бутылку с водой. Опускаем серую ручку до упора.</li>
<li>Открываем дверцу холодильника и меняем «wash tray» с Tween 20 на «wash tray» с водой.</li>
<li>Нажимаем «Next».</li>
<li>Из «wash tray» с Tween 20 выливаем все в раковину. Промываем «wash tray», где был раствор Tween 20, водой. Воду выливаем.</li>
<li>После окончания работы прибор предложит поменять картриджи<br />
и нажать «Next». Менять ничего не нужно. Тем не менее, мы вытаскиваем бутылку (предварительно подняв серую ручку), потом вытаскиваем из холодильника «wash tray» с водой и доливаем необходимое количество воды в лунки (холодильник держим закрытым). Вставляем обратно бутылку, а также «wash tray» с долитой до визуально адекватного уровня водой.</li>
<li>Нажимаем «Next».</li>
<li>Внимательно следим за прибором.</li>
<li>Нажимаем «Done».</li>
<li>Выключаем компьютер.</li>
</ol>
<h3><strong>2.3 Работа с панелью TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel Illumina</strong></h3>
<p><strong>Структура карты исполнения:</strong></p>
<p>1. Гибридизация олигов.</p>
<p>2. Удаление несвязавшихся олигонуклеотидов.</p>
<p>3. Удлинение и лигирование связавшихся олигов.</p>
<p>4. Амплификация библиотеки.</p>
<p>5. Очистка библиотек.</p>
<p>6. Нормализация библиотек.</p>
<p>7. Пулирование библиотек.</p>
<p>8. Приложение.</p>
<p><strong>Перед началом работы:</strong></p>
<p>Достать из первой коробки размораживаться буфер <strong>OHS2</strong> (он размораживается очень долго).</p>
<p>Приготовить свежий 10 мл 50 mM NaOH (возраст менее одной недели; приготовленный из 10N NaOH) – <strong>9950</strong> мл Н<sub>2</sub>О + <strong>50 мкл</strong> 10N NaOH.</p>
<p>Убедиться, что в амплификатор внесена программа отжига <strong>TruSeq Bovine Hyb</strong> и программа амплификации библиотеки<strong> Lib_amp</strong>.</p>
<p><strong>Подготовить:</strong></p>
<ul>
<li>любой заклеивающийся 96-луночный планшет для разведения ДНК;</li>
<li>носики: на 20 мкл – 3 уп., на 100 мкл – 5 уп., на 1000 мкл – 1 уп.;</li>
<li>пленку для заклеивания планшета – 1 шт.;</li>
<li>самплер: на 20 мкл, на 100–200 мкл, на 1000 мкл.</li>
</ul>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><strong>Box 1</strong> (минус 20 °C)</td>
<td><img width="712" height="534" class="wp-image-5140" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-128.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-128.jpeg 712w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-128-300x225.jpeg 300w" sizes="(max-width: 712px) 100vw, 712px" alt="word image 128 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Box 4</strong> (минус 20 °C)</td>
<td><img width="712" height="534" class="wp-image-5141" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-129.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-129.jpeg 712w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-129-300x225.jpeg 300w" sizes="(max-width: 712px) 100vw, 712px" alt="word image 129 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></td>
</tr>
<tr>
<td>TruSeq Custom Amplicon<br />
Index Kit (384 samples)</td>
<td><img width="712" height="534" class="wp-image-5142" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-130.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-130.jpeg 712w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-130-300x225.jpeg 300w" sizes="(max-width: 712px) 100vw, 712px" alt="word image 130 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></td>
</tr>
<tr>
<td>Index Adapter Replacement Caps</td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Исходная ДНК:</strong></p>
<p>High-quality genomic DNA 50 ng (10–25 ng/?l). При необходимости разведите ДНК до данных концентраций (10–25 ng/?l).</p>
<p>Разводим до 75 нг в 15 мкл в отдельной плашке. Из нее потом будем многоканальной пипеткой отбирать по 10 мкл (50 нг).</p>
<p><strong>ACD1 и ACP1</strong></p>
<p>Включайте ACD1 и ACP1 в каждый синтез библиотеки. Использование этих контролей поможет специалистам из техподдержки Illumina оказать нам помощь в случае необходимости. При отсутствии данного контроля помощь не предоставляется!</p>
<p><strong>Внимание!</strong> Запишите информацию об образцах ПЕРЕД началом приготовления библиотеки.</p>
<p>С этого момента до <strong>«Безопасной Точки Остановки»</strong> все выполняется без перерыва и остановок!</p>
<p>Используются ТОЛЬКО наконечники <strong>с фильтром</strong>.</p>
<h4><strong><em>2.3.1 Гибридизация пула олигонуклеотидов</em></strong></h4>
<p><strong>Расходники на минус 20 °C</strong></p>
<p><strong>Box 1:</strong></p>
<ul>
<li>ACD1 – Amplicon Control DNA;</li>
<li>ACP1 – Control Oligo Pool;</li>
<li>OHS2 – Oligo Hybridization for Sequencing 2.</li>
</ul>
<p>Эта коробка также содержит метки штрих-кодов HYP, FPU и IAP.</p>
<p><strong>Box 4:</strong></p>
<ul>
<li>BVP1 – Bovine Parentage Oligo Tube.</li>
</ul>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><strong>Геномная ДНК коров</strong></td>
<td>Достать из заморозки <strong>за 30 мин до начала исследования </strong>для достижения образца комнатной температуры.</p>
<p><strong>Не вортексировать!</strong></p>
<p>Перемешать обстукиванием, сбросить кратким центрифугированием</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>– ACD1</strong></p>
<p><strong>– ACP1</strong></p>
<p><strong>– BVP1</strong></td>
<td>1. Разморозить <strong>при комнатной температуре</strong>.</p>
<p>2. Вортексировать.</p>
<p>3. Сбросить центрифугированием.</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>– OHS2</strong></td>
<td>1. Разморозить <strong>при комнатной температуре</strong>.</p>
<p>2. Энергично вортексировать перед <strong>каждым</strong> использованием.</p>
<p>3. Ввиду вязкости реагента отбирать и перемешивать <strong>медленно!</strong></p>
<p>4. Посмотреть на просвет, убедиться, что весь осадок (мелкие прозрачные кристаллы) растворился. Важно его долго и тщательно вортексировать!!! До полного растворения!</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>Внимание! </strong>Не смешивайте <strong>BVP1</strong> и <strong>OHS2</strong> для хранения. В смешанном виде BVP1 становится нестабильным, даже если хранится в замороженном виде.</p>
<p>При сбрасывании планшетов в противовесный планшет внести по 1,5 мл воды!</p>
<ol>
<li>Установить программу для «<strong>TruSeq Bovine Hyb</strong>» на амплификаторе «Applied Biosystems» (либо прогреть <strong>воздушный </strong>инкубатор до 37 °C).</li>
<li>Наклеить «<strong>HYP barcode label» </strong>на новую 96-луночную ПЦР-плашку.</li>
<li>Смешать 3,5 мл (3 × 1 мл + 500 мкл) <strong>OHS2 </strong>и 500 мкл <strong>BVP1</strong>. Тщательно перемешать пипетированием.</li>
<li>Внести в 95 лунок (оставить одну для контроля) по 40 мкл полученной смеси (описано в п. 3).</li>
<li>В последнюю лунку:
<ol>
<li>внести 5 μl TE или воды и 5 μl <strong>ACD1</strong>;</li>
<li>добавить 5 μl <strong>ACP1 </strong>в контрольную лунку, содержащую ACD1 (96-я);</li>
<li>добавить 35 μl <strong>OHS2 </strong>в контрольную лунку (96-я).</li>
</ol>
</li>
<li>Добавить 50 ng (по 10 мкл) gDNA в первые 95 лунок.</li>
<li>Заклеить планшет термопленкой.</li>
<li>Центрифугировать при 1000×g в течение минуты.</li>
<li>Установить плашку в термостат (Veriti) и запустить программу <strong>TruSeq Bovine Hyb</strong>.</li>
<li>Пока инкубируется (1 ч 15 мин) – остатки разведенной ДНК упаковать в самоклеющуюся пленку и выбросить в биоотходы.</li>
<li>Переходим к следующему этапу – достаем реактивы из морозильной камеры и холодильника.</li>
<li>Через 30 мин от начала инкубации собираем <strong>FPU</strong> <strong>(Filter Plate Unit) </strong><br />
и промываем ее.</li>
</ol>
<h4><strong><em>2.3.2 Удаление несвязавшихся олигонуклеотидов</em></strong></h4>
<p>Этот этап удаляет несвязавшиеся олигонуклеотиды из геномной ДНК, используя размерный фильтр. Две промывки с использованием SW1 гарантируют удаление несвязавшихся олигов. Третья промывка использующая UB1 удаляет остатки буфера SW1 и подготавливает пробы к следующему шагу.</p>
<p><strong>Реагенты на минус 20 °С</strong></p>
<p><strong>Box 1:</strong></p>
<ul>
<li>ELM4 – Extension-ligation Mix 4 – достать из морозилки и оставить нагреваться до комнатной температуры.</li>
</ul>
<p><strong>Реагенты на 2–8 °C</strong></p>
<p><strong>Box 1:</strong></p>
<ul>
<li>SW1 – Stringent Wash 1;</li>
<li>UB1 – Universal Buffer 1.</li>
</ul>
<p>Достать реагенты из холодильника и оставить нагреваться до комнатной температуры.</p>
<p><strong>Дополнительные приспособления</strong></p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Filter plate with lid</td>
<td><img width="876" height="657" class="wp-image-5143" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-131.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-131.jpeg 876w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-131-300x225.jpeg 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-131-768x576.jpeg 768w" sizes="(max-width: 876px) 100vw, 876px" alt="word image 131 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></td>
</tr>
<tr>
<td>Adapter collar</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td>Midi plate</td>
<td><img width="608" height="345" class="wp-image-5144" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-132.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-132.jpeg 608w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-132-300x170.jpeg 300w" sizes="(max-width: 608px) 100vw, 608px" alt="word image 132 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Носики на 100 мкл (для многоканальной пипетки) – 2 уп.</p>
<p>Собрать <strong>FPU</strong> <strong>– Filter Plate Unit – </strong>от <strong>верха к низу:</strong></p>
<p><img width="371" height="518" class="wp-image-5145" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2543.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2543.png 371w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2543-215x300.png 215w" sizes="(max-width: 371px) 100vw, 371px" alt="word image 2543 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p>1. Маркируйте законченную сборку FPU.</p>
<p>2. Промыть лунки для анализа следующим образом. Используйте только новые чистые лунки:</p>
<ul>
<li>добавить 45 мкл SW1 в каждую лунку (одним наконечником);</li>
<li>накройте пластину FPU;</li>
<li>центрифугировать при 2400×g в течение 10 мин.</li>
</ul>
<p><strong>Внимание!</strong> Если значительное количество (&gt; 15 мкл / лунка) остаточного буфера остается в нескольких лунках (≥ 10 лунок / пластина), переключитесь на новую фильтровальную пластину.</p>
<p>3. Убедитесь, что нагревательный блок остыл до 40 °C.</p>
<p>4. Снять блок с нагрева.</p>
<p>5. Центрифугировать при 1000 × g в течение минуты.</p>
<p>6. Перенести каждый образец на пластину FPU (каждой лунке свой наконечник).</p>
<p>7. Накрыть и центрифугировать при 2400×g в течение 2 мин.</p>
<p>8. Промыть два раза следующим образом:</p>
<ul>
<li>добавить 45 мкл SW1 в каждую лунку для образца;</li>
<li>накрыть и центрифугировать при 2400×g в течение 2 мин;</li>
<li>если SW1 не полностью удален, центрифугируйте в течение 10 мин.</li>
</ul>
<p>9. Откажитесь от потока.</p>
<p>10. Соберите пластину FPU для дальнейшего использования.</p>
<p>11. Добавить 45 мкл UB1 в каждую лунку для образца.</p>
<p>12. Накройте и центрифугируйте при 2400×g в течение 2 мин.</p>
<p>13. Если UB1 не полностью удален, отцентрифугируйте в течение 10 мин.</p>
<h4><strong><em>2.3.3 Достройка и лигирование связавшихся олигонуклеотидов</em></strong></h4>
<p>Этот шаг включает в себя гибридизацию прямого и обратного олигонуклеотидов, построение начиная с прямого праймера ДНК-полимеразой комплиментарной копии целевого участка, с последующим лигированием с 5&#8242;-концом обратного праймера с использованием ДНК-лигазы. Результатом является образование продуктов, содержащих целевые области ДНК, фланкированные последовательностями, необходимыми для амплификации.</p>
<p><strong>Реагенты – ELM4 </strong>(уже разморожен на предыдущем шаге).</p>
<p><strong>Процесс:</strong></p>
<p>1. Добавьте 45 мкл ELM4 в каждую лунку для образцов в планшете FPU.</p>
<p>2. Запечатайте и инкубируйте при 37 °С в течение 45 мин.</p>
<p>3. Во время инкубации перейдите к следующему шагу.</p>
<h4><strong><em>2.3.4 Амплификация библиотеки</em></strong></h4>
<p>Этот шаг усиливает продукты расширения-лигирования и добавляет адаптеры индекса 1 (i7), адаптеры индекса 2 (i5) и последовательности, необходимые для формирования кластера.</p>
<p><strong>Реагенты на минус 20 °С</strong></p>
<p><strong>Box 1:</strong></p>
<ul>
<li><strong>PMM2</strong>– PCR Master Mix 2;</li>
<li><strong>TDP1</strong> – TruSeq DNA Polymerase 1.</li>
</ul>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><strong>PMM2 </strong></td>
<td>1. Разморозить при комнатной температуре<br />
(20 мин).2. Перемешать вортексированием.3. Сбросить центрифугированием.</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>Index i5 adapters (A5XX)</strong></p>
<p><strong>Index i7 adapters (A7XX)</strong></td>
<td>1. Разморозить при комнатной температуре<br />
(20 мин).2. Перемешать вортексированием.3. Сбросить центрифугированием (используя<br />
пробирки объемом 1,5 мл в качестве адаптеров).</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>TDP1 </strong></td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p><strong>TruSeq Custom Amplicon Index Kit</strong></p>
<p><strong>Box 1 (минус 20 °C) </strong>– i5 и i7 Index Primers.</p>
<p><strong>Box 2 (Room Temp) </strong>– белые и оранжевые одноразовые крышечки для праймеров.</p>
<p><strong>About Reagents</strong></p>
<ul>
<li><strong>PMM2/TDP1:</strong></li>
<li>комбинируйте PMM2 и TDP1 непосредственно перед использованием. Не смешивайте и не храните комбинированную смесь PMM2 / TDP1;</li>
<li>при смешивании перемешивайте тщательно.</li>
</ul>
<p><strong>Расходники</strong></p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>96-well skirted PCR plate</td>
<td><img width="250" height="130" class="wp-image-5146" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-133.jpeg" alt="word image 133 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></td>
</tr>
<tr>
<td>IAP (Indexed Amplification Plate)<br />
barcode label</td>
<td></td>
</tr>
</tbody>
</table>
<ul>
<li>Расположите адаптеры Index 1 (i7) в столбцах 1–12.</li>
<li>Расположите адаптеры Index 2 (i5) в строках A – H.</li>
</ul>
<p><img width="524" height="424" class="wp-image-5147" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2544.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2544.png 524w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2544-300x243.png 300w" sizes="(max-width: 524px) 100vw, 524px" alt="word image 2544 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><img width="397" height="65" class="wp-image-5148" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2545.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2545.png 397w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2545-300x49.png 300w" sizes="(max-width: 397px) 100vw, 397px" alt="word image 2545 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p>1. Нанесите метку IAP на новый 96-луночный планшет для ПЦР.</p>
<p>2. Разместите планшет на TruSeq Index Plate Fixture.</p>
<p>3. Используя многоканальную пипетку, добавьте 4 мкл каждого адаптера Index 1 (i7) в каждую колонку. Замените крышку на каждой переходной трубке i7 новой оранжевой крышкой.</p>
<p>4. Используя многоканальную пипетку, добавьте 4 мкл каждого адаптера Index 2 (i5) в каждый ряд. Замените крышку на каждой переходной трубке i5 новой белой крышкой.</p>
<p>5. Добавьте 56 мкл TDP1 в полную пробирку (2,8 мл) к PMM2. переверните, чтобы смешать.</p>
<p>6. Перенести 22 мкл смеси PMM2 / TDP1 на планшет IAP.</p>
<p>7. Извлеките пластину FPU из инкубатора и сделайте следующее:</p>
<ul>
<li>
<ol>
<li>заменить алюминиевую фольгу на крышку фильтра;</li>
<li>центрифугировать при 2400×g в течение 2 мин (40 мин ×<br />
2000 об./мин);</li>
<li>добавить 25 мкл 50 mm NaOH в каждую лунку. Перемешать пипетированием;</li>
<li>инкубировать при комнатной температуре в течение 5 мин.</li>
</ol>
</li>
</ul>
<p>8. Перенесите элюированные образцы с планшета FPU на планшет IAP следующим образом:</p>
<ul>
<li>
<ol>
<li>используя тонкие наконечники, пипеткой перемешать в первой колонке планшета FPU;</li>
<li>перенести 20 мкл NaOH в соответствующий столбик планшета IAP. Перемешать пипетированием;</li>
<li>перенести оставшиеся колонки с планшета FPU на IAP;</li>
<li>выбросить планшет midi для сбора отходов.</li>
</ol>
</li>
</ul>
<p>9. Закрыть плашку силиконовым матом. Центрифугировать при 1000×g в течение минуты.</p>
<p>10. Перенесите планшет IAP в зону пост-амплификации.</p>
<p>11. Поместите на предварительно запрограммированный термоциклер<br />
и запустите программу ПЦР (Lib_amp).</p>
<p><strong>Безопасная Точка Остановки!</strong></p>
<p>Если вы останавливаетесь, закройте пластину и храните при температуре от 2 до 8 °C до 2 дней. Кроме того, оставьте ее на термоциклере на ночь.</p>
<h4><strong><em>2.3.5 Очистка синтезированной библиотеки</em></strong></h4>
<p><strong>Подготовить:</strong></p>
<ul>
<li>достать AMPure XP beads (хранится в холодильнике ПЦР-зоны) нагреваться до комнатной температуры (~ 30 мин).</li>
<li>EBT – Elution Buffer with Tris (хранится в форезной комнате при комнатной температуре).</li>
<li>96-well midi plates (2 шт.).</li>
<li>Баркодированные метки (в Box 3 в ПЦР-зоне):</li>
<li>CLP – Cleanup Plate – нанести на «midi plate»;</li>
<li>LNP – Library Normalization Plate – нанести на другую «midi plate».</li>
<li>Самоклеющаяся пленка для планшета.</li>
<li>Приготовить 40 мл свежего 80%-го ethanol (EtOH).</li>
<li>96-луночный магнитный штатив.</li>
</ul>
<p><strong>Процесс:</strong></p>
<p>1. Центрифугировать планшет IAP при 1000×g в течение минуты.</p>
<p>2. Опционально: отобрать по 5 мкл и прогнать их в 4%-м агарозном геле. Должны быть ПЦР-продукты в районе 200–300 п.о.</p>
<p>3. Добавьте 60 мкл гранул AMPure XP в каждую лунку планшета CLP.</p>
<p>4. Перенесите весь супернатант из каждой лунки планшета IAP в соответствующую лунку планшета CLP.</p>
<p>5. Закупорить и встряхнуть при 1800 rpm в течение 2 мин.</p>
<p>6. Инкубировать при комнатной температуре в течение 10 мин.</p>
<p>7. Сбросить капли кратковременным центрифугированием.</p>
<p>8. Поместите на магнитную подставку и подождите, пока жидкость не станет прозрачной (~ 2 мин).</p>
<p>9. Удалите весь супернатант из каждой лунки.</p>
<p>10. Промыть два раза следующим образом:</p>
<ul>
<li>добавьте 200 мкл 80%-го EtOH в каждую лунку для образца;</li>
<li>инкубировать на магнитной подставке в течение 30 с;</li>
<li>удалить весь супернатант из каждой лунки.</li>
</ul>
<p>11. Используя 20 мкл пипетки, удалите остаточный EtOH из каждой лунки.</p>
<p>12. Снимите с магнитной подставки и высушите на воздухе в течение 10 мин.</p>
<p>13. Добавьте 30 мкл EBT в каждую лунку.</p>
<p>14. Запечатать и встряхнуть при 1800 rpm в течение 2 мин.</p>
<p>15. Убедитесь, что все шарики ресуспендированы. При необходимости, пипеткой перемешать и повторить шаг встряхивания.</p>
<p>16. Инкубировать при комнатной температуре в течение 2 мин.</p>
<p>17. Сбросить капли кратковременным центрифугированием.</p>
<p>18. Поместить на магнитную подставку и подождать, пока жидкость не станет прозрачной (~ 2 мин).</p>
<p>19. Перенести 20 мкл супернатанта из каждой лунки планшета CLP<br />
в соответствующую лунку планшета LNP.</p>
<p>20. Запечатать и центрифугировать при 1000×g в течение минуты.</p>
<h4><strong><em>2.3.6 Нормализация (выравнивание) библиотеки</em></strong></h4>
<p>Этот шаг нормализует количество каждой библиотеки для сбалансированного представления в объединенных библиотеках. Только образцы, содержащие ДНК, требуют обработки на последующих этапах.</p>
<p><strong>Подготовить</strong></p>
<p><strong>Box 2:</strong></p>
<ul>
<li>LNB1 – Library Normalization Beads 1.</li>
</ul>
<p><strong>Box 3:</strong></p>
<ul>
<li>LNA1 – Library Normalization Additives 1;</li>
<li>LNW1 – Library Normalization Wash 1;</li>
<li>LNS2 – Library Normalization Storage buffer 2;</li>
<li>SGP – Storage Plate – barcode label.</li>
</ul>
<table>
<tbody>
<tr>
<td><strong>LNB1 </strong></td>
<td>8 °C</td>
<td>Оставить на 30 мин на столе для доведения до RT.</p>
<p>Вортексировать <strong>как минимум </strong>минуту. Периодически <strong>переворачивать </strong>для перемешивания.</p>
<p>Убедиться, что дно пробирки свободно от осадка.</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>LNA1 </strong></td>
<td>Минус 20 °C</td>
<td>Разморозить при комнатной температуре.</p>
<p>Оставить на 30 мин на столе для доведения до RT.</p>
<p>Перемешать вортексированием.</p>
<p>Убедиться, что весь осадок растворился.</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>LNW1 </strong></td>
<td>8 °C</td>
<td>Оставить на 30 мин на столе для доведения до RT. Убедиться, что весь осадок растворился.</td>
</tr>
<tr>
<td><strong>LNS2 </strong></td>
<td>RT</td>
<td>Если заморожено, разморозить при комнатной температуре 20 мин. Перемешать вортексированием.</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<ul>
<li>0,1N NaOH (свежеприготовленный).</li>
<li>96-well PCR plate, skirted.</li>
<li>Коническая пробирка объемом 15 мл.</li>
</ul>
<p><strong>Процесс:</strong></p>
<p>1. Для 96 образцов добавьте 4,4 мл LNA1 в новую коническую пробирку на 15 мл.</p>
<p>2. Используйте пипетку на 1000 мкл для того, чтобы ресуспендировать LNB1.</p>
<p>3. Перенести 800 мкл LNB1 в пробирку объемом 15 мл с LNA1. Перемешать переворачиванием.</p>
<p>4. Добавьте 45 мкл LNA1 / LNB1 в каждую лунку планшета LNP.</p>
<p>5. Заклеить планшет пленкой и перемешать при 1800 rpm в течение 30 мин. Длительность, не превышающая 30 мин, может повлиять на представление библиотеки и плотность кластера.</p>
<p>6. Поместить на магнитную площадку и подождать, пока жидкость не стнает прозрачной (~ 2 мин).</p>
<p>7. Удалить весь супернатант.</p>
<p>8. Убрать с магнитной платформы.</p>
<p>9. Промыть два раза следующим образом:</p>
<ul>
<li>добавить 45 мкл LNW1 в каждую лунку библиотеки;</li>
<li>закрыть и встряхнуть при 1800 rpm в течение 5 мин;</li>
<li>поместить на магнитную платформу и подождать пока жидкость не станет прозрачной (~ 2 мин);</li>
<li>удалить весь супернатант.</li>
</ul>
<p>10. Использовать 20 мкл пипетки для удаления остатков LNW1 из каждой лунки.</p>
<p>11. Снять плашку с магнитного штатива.</p>
<p>12. Добавить 30 мкл свежего 0,1N NaOH в каждую лунку.</p>
<p>13. Закрыть и встряхнуть при 1800 rpm в течение 5 мин.</p>
<p>14. Если библиотеки не ресуспендируют, пипеткой перемешать, а затем встряхнуть при 1800 rpm в течение 5 мин.</p>
<p>15. Поместить планшет LNP на магнитную платформу и подождать пока жидкость не станет прозрачной (~ 2 мин).</p>
<p>16. Пометить новую плашку меткой SGP.</p>
<p>17. Добавить 30 мкл LNS2 в каждую лунку планшета SGP.</p>
<p>18. Перенести 30 мкл супернатанта из каждой лунки планшета LNP в соответствующую лунку планшета SGP. Перемешать пипетированием.</p>
<p>19. Закрыть и центрифугировать при 1000×g в течение минуты.</p>
<p><strong>Безопасная Точка Остановки!</strong></p>
<p>Если вы останавливаетесь, закройте пластину и храните при температуре от минус 25 до минус 15 °С до 30 дней.</p>
<h4><strong><em>2.3.7 «Пулирование» (объединение) библиотек</em></strong></h4>
<p>Объединение библиотек соединяет одинаковые объемы нормализованных библиотек в одной пробирке. После объединения разбавьте и денатурируйте пул библиотек перед загрузкой библиотек для запуска секвенирования.</p>
<p><strong>Подготовить:</strong></p>
<ul>
<li>PAL – Pooled Amplicon Library – этикетка со штрих-кодом.</li>
<li>Микроцинтрефужные пробирки LoBind (объемом 1,5 мл).</li>
<li>RNase/DNase-free 8-tube strips and caps.</li>
</ul>
<p><strong>Процесс:</strong></p>
<p>1. Если SGP плашка хранилась замороженной, то:</p>
<ul>
<li>разморозить ее при комнатной температуре;</li>
<li>центрифугироват при 1000×g в течение минуты;</li>
<li>перемешать пипетированием.</li>
</ul>
<p>2. Поставить размораживаться реагенты для секвенатора (см. инструкцию «Запуск секвенирования»).</p>
<p>3. Наклеить на новую пробирку объемом 1,5 мл метку PAL.</p>
<p>4. Центрифугировать при 1000×g в течение минуты.</p>
<p>5. Разместить 5 мкл каждой библиотеки на 8 колонок, колонку за колонкой. Закрыть планшет и хранить при минус 15–25 °С.</p>
<p>6. Поместить содержимое 8-ми колонок на планшет PAL. Перемешать пипетированием.</p>
<p>7. Денатурируйте и разбавляйте объединенные библиотеки до концентрации нагрузки для используемого вами инструмента. Смотрите руководство по денатурированию и разбавлению библиотек для вашего инструмента (600 мкл гибридизационного буфера (HT1 из коробки с картриджем) + 8 мкл Pooled DNA. 98 °C 2 мин → в лёд).</p>
<p>8. Хранить планшет PAL при минус 15–25 °C для дальнейшего использования.</p>
<h4><strong><em>2.3.8 Приложение</em></strong></h4>
<p>Программа для отжига праймеров (TruSeq Bovine Hyb):</p>
<p>Программа для амплификации библиотеки (Lib_amp):</p>
<ul>
<li>95 °C for 3 minutes;</li>
<li>25 cycles of:</li>
<li>95 °C for 30 seconds</li>
<li>66 °C for 30 seconds</li>
<li>72 °C for 60 seconds</li>
<li>72 °C for 5 minutes</li>
</ul>
<p>Хранить при 10 °C.</p>
<p><img width="886" height="347" class="wp-image-5149" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2546.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2546.png 886w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2546-300x117.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2546-768x301.png 768w" sizes="(max-width: 886px) 100vw, 886px" alt="word image 2546 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."><a id="post-5131-_b50mom8oayro"></a></p>
<h3><strong>2.4 Измерение концентрации ДНК</strong></h3>
<p>Для измерения концентрации использовать краситель PicoGreen либо Qubit dsDNA Assay Kit. (УФ-методы детекции в нашем случае гораздо менее точные).</p>
<p>Внимание! Не использовать для раствора стеклянную посуду!</p>
<p><strong>Содержимое набора Invitrogen «Quant-iTTM PicoGreenTM dsDNA Assay Kit»:</strong></p>
<p><img width="640" height="480" class="wp-image-5150" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-134.jpeg" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-134.jpeg 640w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-134-300x225.jpeg 300w" sizes="(max-width: 640px) 100vw, 640px" alt="word image 134 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Подготовка красителя:</strong></p>
<p>Внимание! Дайте реагенту Quant-iT<img src="https://s.w.org/images/core/emoji/13.1.0/72x72/2122.png" alt="™" class="wp-smiley" style="height: 1em; max-height: 1em;" /> PicoGreen® нагреться до комнатной температуры, прежде чем открывать пробирку с ним.</p>
<p>Для наилучшего результата раствор необходимо использовать в течение нескольких часов после приготовления.</p>
<p>Защищайте приготовленный раствор с красителем от света (помещая его<br />
в темное место или накрывая фольгой).</p>
<p>Проверить корректность установки даты и времени в приборе (Settings → «Instrument settings» → «Date/Time»). При необходимости установить верные значения.</p>
<p>1. В чистую, объемом 15 мл пробирку внести 1005 мкл 20х TE буфера.</p>
<p>2. Добавить в пробирку 19095 мкл Н<sub>2</sub>О.</p>
<p>3. Добавить к ним <strong>101 </strong>мкл красителя.</p>
<p>4. Тщательно перемешать.</p>
<p><strong>Приготовить контрольную ДНК для построения кривой (0 и 100 нг в 5 мкл):</strong></p>
<p>1. Внести в пробирку объемом 0,2мл <strong>8 мкл</strong> 1хТЕ буфера.</p>
<p>2. Добавить 2 мкл контрольной ДНК из набора (100нг/мкл). Хорошо перемешать пипетированием.</p>
<p>3. Подготовить две оптически прозрачные пробирки объемом 0,5 мл.</p>
<p>4. Одну подписать как <strong>К1</strong>, другую – <strong>К2</strong>:</p>
<ul>
<li>в К1 внести 200 мкл раствора для измерения концентрации;</li>
<li>в К2 внести 195 мкл раствора для измерения и 5 мкл разведенной контрольной ДНК (с шага b).</li>
</ul>
<p>5. В оптически прозрачные пробирки объемом 0,5 мл внести по 195 мкл.</p>
<p>6. Внести в каждую пробирку по 5 мкл соответствующей коровьей ДНК.</p>
<p>7. Внести в пробирку К1 <strong>5 мкл </strong>раствора ДНК второго разведения<br />
(38 + 2 мкл).</p>
<p>8. Внести в пробирку К2 <strong>5 мкл</strong> раствора ДНК первого разведения<br />
(8 + 2 мкл).</p>
<p>9. Включить прибор, подключить его USB-шнуром к компьютеру.</p>
<p>10. Выбрать на первом экране программу <strong>PicoGreen</strong>.</p>
<p><strong>Опционально. </strong>Если было проведено новое разведение красителя, то нажимаем строку «Read standarts». Если краситель из того же разведения, то сразу нажимаем «Run samples».</p>
<p><a id="post-5131-_30j0zll"></a><strong><em>Разведение до нужной концентрации</em></strong></p>
<p>High-quality genomic DNA 50 ng (10–25 ng/?l). При необходимости разведите ДНК до данных концентраций (10–25 ng/?l).</p>
<p>Разводим до 75 нг в 15 мкл в отдельной плашке. Из нее потом будем многоканальной пипеткой отбирать по 10 мкл (50 нг).</p>
<h2><strong>3 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ</strong></h2>
<h3><strong>3.1 Выделение геномной ДНК и создание библиотек для секвенирования с использованием панели TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel Illumina</strong></h3>
<p>Выделение тотальной геномной ДНК производилось из образцов цельной крови коров по ранее освоенным методикам. В частности использовались наборы ДНК-ЭКСТРАН-1 («Синтол», Россия) и К-сорб («Синтол», Россия).</p>
<h4><strong><em>3.1.1 Выделение ДНК набором ДНК-ЭКСТРАН-1 («Синтол», Россия)</em></strong></h4>
<p><em>Примечание:</em></p>
<p>– для выделения следует использовать цельную кровь с антикоагулянтами;</p>
<p>– если в лизирующем растворе № 2 есть осадок, раствор следует прогреть при 60 °С в течение 15–30 мин до растворения осадка;</p>
<p>– если после лизиса с лизирующим буфером № 2 не происходит выпадение белого осадка и активного помутнения раствора, следует охладить раствор во льду 1–5 мин.</p>
<p><em>Протокол:</em></p>
<p>1. В чистые, объемом 1,5 мл пробирки внести по 300 мкл цельной крови.</p>
<p>2. В пробирки с образцами добавить по 900 мкл лизирующего буфера № 1.</p>
<p>3. Содержимое пробирок тщательно перемешать переворачиванием, избегая образования пены.</p>
<p>4. Инкубировать образцы при комнатной температуре в течение 10 мин, периодически перемешивая их переворачиванием.</p>
<p>5. Центрифугировать пробирки 2 мин при 1300 об./мин.</p>
<p>6. Убрать супернатант, оставив в пробирке ~ 20 мкл надосадочной<br />
жидкости.</p>
<p>7. Ресуспендировать осадок на вортексе.</p>
<p>8. Добавить в пробирки по 300 мкл лизирующего буфера № 2 и 10 мкл протеиназы К.</p>
<p>9. Перемешать содержимое пробирок на вортексе.</p>
<p>10. Инкубировать образцы при температуре 65 °С до полного растворения осадка.</p>
<p>11. Охладить пробирки во льду 3–5 мин.</p>
<p>12. Сбросить пробирки на центрифуге.</p>
<p>13. К лизату добавить 100 мкл осаждающего раствора № 1. Убедиться в образовании белого осадка, если осадок не образуется – дополнительно охладить образец во льду в течение минуты.</p>
<p>14. Перемешать содержимое пробирок на вортексе.</p>
<p>15. Центрифугировать пробирки 2 мин при 13000 об./мин.</p>
<p>16. Супернатант перенести в чистые, объемом 1,5 мл пробирки и подписать.</p>
<p>17. Добавить к супернатанту осаждающий раствор № 2 и перемешать переворачиванием до конденсации видимого осадка ДНК (12–15 раз).</p>
<p>18. Центрифугировать смесь № 2 мин при 13000 об./мин.</p>
<p>19. Очень осторожно удалить супернатант, отслеживая положение осадка.</p>
<p>20. К осадку добавить 400 мкл промывающего раствора.</p>
<p>21. Тщательно перемешать содержимое пробирки, переворачивая ее<br />
(10–15 раз).</p>
<p>22. Центрифугировать содержимое пробирки 2 мин при 13000 об./мин.</p>
<p>23. Тщательно, с максимальной осторожностью удалить супернатант, отслеживая положение осадка.</p>
<p>24. Оставить пробирки открытыми (в штативе) в чистом, работающем ПЦР-боксе для просушки при комнатной температуре до полного испарения жидкости.</p>
<p>25. Внести в пробирки по 50 мкл элюирующего раствора.</p>
<p>26. Тщательно перемешать содержимое пробирок на вортексе.</p>
<p>27. Инкубировать пробирки в термостате 5 мин при температуре 60 °С, после чего остудить их при комнатной температуре и снова перемешать на вортексе.</p>
<p>28. Кратковременно центрифугировать пробирки для удаления раствора ДНК со стенок и крышки пробирки.</p>
<p>29. Полученный раствор ДНК можно использовать немедленно или оставить для кратковременного (до двух недель) хранения при плюс 4–8 °С либо долговременного хранения при минус 20 °С.</p>
<h4><strong><em>3.1.2 Выделение ДНК набором К-сорб («Синтол», Россия)</em></strong></h4>
<p>1. Перед началом работы сделать аликвоту элюирующего буфера требуемого объема (от 50 до 120 мкл на образец).</p>
<p>2. Внести во все пробирки для исследуемых образцов и тщательно перемешать:</p>
<p>– 400–500 мкл физиологического раствора;</p>
<p>– 200 мкл лизирующего буфера (раствор № 2);</p>
<p>– 10 мкл протеиназы К (хранение при минус 20 °С);</p>
<p>– 10 мкл 1M раствора DTT.</p>
<p>3. Приготовить и внести в пробирки образцы, которые готовятся путем иссечения фрагмента марли с предварительно нанесенной на нее и высушенной кровью, площадь фрагмента – от 0,3 до 1 см<sup>2</sup>.</p>
<p>4. Тщательно перемешать содержимое пробирок.</p>
<p>5. Термостатировать пробирки при 65 °С в течение 1–2 ч.</p>
<p>6. По окончании термостатирования извлечь пробирки с образцами из термостата, перевести его на 70 °С, поставить в него пробирки с аликвотами элюирующего буфера (до окончания выделения).</p>
<p>7. Выполнить краткосрочное центрифугирование пробирки с образцами для удаления испарений и капель со дна крышки и стенок, минимальная длительность центрифугирования при максимальном числе оборотов в минуту.</p>
<p>8. В каждую пробирку внести по 200 мкл осаждающего раствора. Тщательно перемешать. Выполнить краткосрочное центрифугирование.</p>
<p>9. Жидкость из пробирок перенести в колонки К-сорб. Центрифугировать колонки минуту при 8.000 rpm. По окончанию центрифугирования проконтролировать полное прохождение элюента через колонку. В случае неполного прохождения увеличить время центрифугирования и/или число оборотов.</p>
<p>10. Элюат удалить из пробирок-коллекторов в контейнер для жидких медицинских отходов. Колонки вернуть в пробирки-коллекторы.</p>
<p>11. Внести в колонки по 400 мкл промывочного раствора № 1. Центрифугировать минуту при 8.000 rpm, удалить элюат, колонки вернуть в пробирки-коллекторы.</p>
<p>12. Внести в колонки по 400 мкл промывочного раствора № 2. Центрифугировать минуту при 8.000 rpm, удалить элюат, колонки вернуть в пробирки-коллекторы.</p>
<p>13. Внести в колонки по 200 мкл промывочного раствора № 2. Центрифугировать 2 мин при 13.000 rpm (или при максимальном числе оборотов центрифуги).</p>
<p>14. Перенести колонки в чистые пробирки. Центрифугировать 3 мин при 13.000 rpm (или при максимальном числе оборотов центрифуги).</p>
<p>15. Перенести колонки в чистые пробирки.</p>
<p>16. Внести в каждую колонку требуемую аликвоту элюирующего буфера, прогретого до 70 ºС. Пробирки брать из термостата по мере расходования предыдущих.</p>
<p>17. Инкубировать колонки под элюирующим буфером 3–5 мин при комнатной температуре в горизонтальном положении.</p>
<p>18. Центрифугировать минуту при 8.000 rpm.</p>
<p>19. По окончании центрифугирования проконтролировать полноту прохождения элюирующего буфера во всех пробирках. Колонки поместить в пакет для твердых медицинских отходов. Пробирки маркировать с указанием данных образца и даты выделения.</p>
<p>20. Полученные образцы ДНК хранить при 4–8 °С (до одной недели). При более длительном сроке хранения температура должна быть минус 20 °С.</p>
<h4><strong><em>3.1.3 Протокол для фрагментации дцДНК и приготовления NSG-библиотек из 5–500 нг очищенной дцДНК</em></strong></h4>
<p>Исходный материал: 5–500 нг очищенной дцДНК (например, бактериальной геномной ДНК или геномной ДНК человека).</p>
<p>1. <em>Фрагментация дцДНК</em>.</p>
<p>В ПЦР-пробирку, установленную на лед, внести следующие компоненты:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Компонент</td>
<td>Объем, мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>10x SD-буфер</td>
<td>2,5</td>
</tr>
<tr>
<td>MgCl<sub>2</sub> (50 мМ)</td>
<td>1,75</td>
</tr>
<tr>
<td>дцДНК (50–500 нг)</td>
<td>1–5</td>
</tr>
<tr>
<td>Смесь ферментов для фрагментации (SDpol + ДНКаза I)</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>ddH<sub>2</sub>O</td>
<td>До 25</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Инкубировать в ПЦР-амплификаторе в следующем режиме:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Температура, <sup>о</sup>С</td>
<td>Время</td>
</tr>
<tr>
<td>30</td>
<td>10–60* мин</td>
</tr>
<tr>
<td>70</td>
<td>20 мин</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>2. <em>Лигирование индексированных вилочковых адаптеров с фрагментированной ДНК</em>.</p>
<p>В пробирку с фрагментированной ДНК добавляют следующие компоненты, и перемешивают их встряхиванием:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Компонент</td>
<td>Объем, мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>Фрагментированная дцДНК</td>
<td>25</td>
</tr>
<tr>
<td>10x T4 лигазный буфер</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>Индексированные вилочковые адаптеры* (12,5 мкM)</td>
<td>2</td>
</tr>
<tr>
<td>ddH<sub>2</sub>O</td>
<td>16</td>
</tr>
<tr>
<td>T4 ДНК-лигаза (5 Ед/мкл)</td>
<td>2</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Инкубировать лигазную смесь (50 мкл) в течение 20 мин при комнатной температуре. После инкубации развести лигазную смесь 0,1х ТЕ-буфером до конечного объема 100 мкл. Образцы на этом этапе можно заморозить для хранения при минус 20 °C.</p>
<p>*В наборе используются индексированные адаптеры Illumina. Набор содержит следующие адаптеры:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>№</td>
<td>Индекс<br />
Illumina</td>
<td>Структура</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>Universal</td>
<td>5’AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T</td>
</tr>
<tr>
<td>2</td>
<td>Index 2</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACCGATGTATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>3</td>
<td>Index 3</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACTTAGGCATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>Index 4</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACTGACCAATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>Index 5</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACACAGTGATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>6</td>
<td>Index 6</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACGCCAATATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>7</td>
<td>Index 9</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACGATCAGATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>8</td>
<td>Index 10</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACTAGCTTATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>9</td>
<td>Index 11</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACGGCTACATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>Index 12</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACCTTGTAATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>11</td>
<td>Index 14</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACAGTTCCGTATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>12</td>
<td>Index 15</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACATGTCAGAATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
<tr>
<td>13</td>
<td>Index 16</td>
<td>5’PGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACCCGTCCCGATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>3. <em>Очистка ДНК, лигированной с адаптерами</em>.</p>
<p>Необходимо дать шарикам AMPure XP прогреться до комнатной температуры не менее 30 мин перед использованием. Для ресуспендирования встряхнуть шарики AMPure XP на вортексе.</p>
<p>Добавить 80 мкл (0,8X) ресуспендированных шариков к реакции лигирования адаптеров. Хорошо перемешать пипетированием по меньшей мере 10 раз. Манипуляции следует проводить осторожно, чтобы исключить всю жидкость из наконечника во время последнего смешивания. Также можно воспользоваться смешивание на вортексе в течение 3–5 с. Если после центрифугирования<br />
образцы центрифугируются, необходимо остановить центрифугирование до того, как шарики начнут оседать.</p>
<p>Инкубировать образцы на столе не менее 5 мин при комнатной температуре.</p>
<p>Чтобы отделить шарики от супернатанта, планшет/пробирки помещают на соответствующую магнитную подставку. При необходимости образец центрифугируют, чтобы собрать жидкость со стенок лунки пробирки или планшета перед постановкой на магнитную подставку. Через 5 мин (или когда раствор станет прозрачным) удаляют супернатант. Это действие надо проводить осторожно, чтобы не потревожить шарики, содержащие целевую ДНК.</p>
<p>Добавить 200 мкл 80%-го свежеприготовленного этанола в пробирку/план­шет, находящиеся в магнитной подставке. Инкубировать при комнатной температуре в течение 30 с, а затем осторожно удалить и отбросить супернатант.</p>
<p>Повторяют эту стадию промывки один раз, чтобы получить в итоге две стадии промывки. Обязательно удаляют всю видимую жидкость после второй промывки. При необходимости, кратковременно центрифугируйте пробирку/планшет, поместите обратно на магнит и удалите следы этанола с помощью автоматического дозатора на 20 мкл. Это действие надо проводить осторожно, чтобы не потревожить шарики, содержащие целевую ДНК.</p>
<p>Высушить шарики на воздухе до 5 мин, пока пробирка/планшет находятся на магнитной подставке с открытой крышкой.</p>
<p>Внимание: важно не пересушивать шарики! Это может привести к снижению выделения ДНК-мишени. Образцы следует элюировать, когда шарики остаются темно-коричневого цвета и выглядят блестящими, но при этом вся видимая жидкость испарилась. Когда шарики становятся светло-коричневыми,<br />
и их поверхность начинает покрываться трещинами, они являются уже пересушенными.</p>
<p>Снимите пробирку/планшет с магнитной подставки. Элюируйте ДНК-мишень с шариков, добавляя 22–23 мкл 10 мМ Трис-HCl или 0,1X TE. Хорошо перемешайте суспензию пипетированием 10 раз или встряхиванием на вортексе. Инкубируйте суспензию не менее 2 мин при комнатной температуре. При необходимости шарики можно центрифугировать в течение короткого времени, чтобы собрать жидкость со стенок пробирки или лунок планшета, прежде чем поставить их обратно на магнитную подставку.</p>
<p>Поместите пробирку/планшет на магнитную подставку. Через 5 мин (или когда раствор станет прозрачным) перенести 20 мкл образца в новую ПЦР-пробирку для амплификации.</p>
<p>Примечание: образцы можно хранить при минус 20 °C.</p>
<p>4. <em>ПЦР-амплификация лигированной ДНК адаптера</em>.</p>
<p>В новую ПЦР-пробирку обавить следующие компоненты:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Компонент</td>
<td>Объем, мкл</td>
</tr>
<tr>
<td>ДНК, лигированная с адаптерами</td>
<td>20</td>
</tr>
<tr>
<td>Смесь праймеров для ПЦР*<br />
(20 мкM – по 10 мкМ каждого праймера)</td>
<td>4</td>
</tr>
<tr>
<td>10x SD-буфер</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>MgCl<sub>2 </sub> (50 мM)</td>
<td>3,5</td>
</tr>
<tr>
<td>Смесь ферментов для амплификации (20 Ед/мкл)</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>ddH<sub>2</sub>O</td>
<td>16,5</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Примечание: * – ПЦР-праймеры: P5.2_PCR 5’ AATGATACGGCGACCACCGA 3’; P7.1_PCR 5’ CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT 3’</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Смешать компоненты быстрым встряхиванием на вортексе и сбросить капли центрифугированием. Поместить пробирку в термоциклер и провести ПЦР-амплификации с использованием следующих условий циклов:</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Температура, <sup>о</sup>С</td>
<td>Время, с</td>
<td>Циклы</td>
</tr>
<tr>
<td>94</td>
<td>120</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>95</td>
<td>20</td>
<td rowspan="3">5–12**</td>
</tr>
<tr>
<td>62</td>
<td>20</td>
</tr>
<tr>
<td>68</td>
<td>45</td>
</tr>
<tr>
<td>68</td>
<td>45</td>
<td>1</td>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>∞</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="3">Примечание: ** – количество циклов ПЦР следует выбирать, исходя из количества введенной ДНК. Число циклов должно быть достаточно большим, чтобы обеспечить достаточное количество фрагментов библиотеки для успешного секвенирования, но также должно быть достаточно низким, чтобы избежать появления артефактов вследствие ПЦР<br />
и избыточной амплификации (появления высокомолекулярных фрагментов на Биоаналайзере).</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>Рекомендованное количество циклов ПЦР приведено ниже. Его можно использовать в качестве отправной точки для определения числа циклов ПЦР, наилучшего для приготовления образцов библиотек ДНК.</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>Количество исходной ДНК, нг</td>
<td>Число циклов ПЦР, требуемое для выхода<br />
библиотеки примерно 250–500 нг</td>
</tr>
<tr>
<td>≥ 250</td>
<td>5</td>
</tr>
<tr>
<td>200</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>100</td>
<td>7</td>
</tr>
<tr>
<td>40–50</td>
<td>8–9</td>
</tr>
<tr>
<td>20</td>
<td>10</td>
</tr>
<tr>
<td>10</td>
<td>11</td>
</tr>
<tr>
<td>5</td>
<td>12</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>5. <em>Очистка ПЦР-реакции</em>.</p>
<p>Необходимо дать шарикам AMPure XP прогреться до комнатной температуры не менее 30 мин перед использованием. Для ресуспендирования встряхнуть шарики AMPure XP на вортексе.</p>
<p>Добавить 45 мкл (0,9X) ресуспендированных шариков к ПЦР-реакции. Хорошо перемешать с пипетированием по меньшей мере 10 раз. Манипуляции следует проводить осторожно, чтобы исключить всю жидкость из наконечника во время последнего смешивания. Также можно использоваться смешивание на вортексе в течение 3–5 с. Если после центрифугирования образцы центрифугируются, необходимо остановить центрифугирование до того, как шарики начнут оседать.</p>
<p>Инкубировать образцы на столе не менее 5 мин при комнатной температуре.</p>
<p>Чтобы отделить шарики от супернатанта, планшет/пробирки помещают на соответствующую магнитную подставку. При необходимости образец центрифугируют, чтобы собрать жидкость со стенок лунки пробирки или планшета перед постановкой на магнитную подставку. Через 5 мин (или когда раствор станет прозрачным) удаляют супернатант. Это действие надо проводить осторожно, чтобы не потревожить шарики, содержащие целевую ДНК.</p>
<p>Добавить 200 мкл 80%-го свежеприготовленного этанола в пробирку/планшет, находящиеся в магнитной подставке. Инкубируют при комнатной температуре в течение 30 с, а затем осторожно удаляют и отбрасывают супернатант.</p>
<p>Повторяют эту стадию промывки один раз, чтобы получить в итоге две стадии промывки. Обязательно удаляют всю видимую жидкость после второй промывки. При необходимости, кратковременно центрифугируют пробирку/планшет, помещая обратно на магнит и удаляя следы этанола с помощью автоматического дозатора на 20 мкл. Это действие надо проводить осторожно, чтобы не потревожить шарики, содержащие целевую ДНК.</p>
<p>Высушить шарики на воздухе до 5 мин, пока пробирка/планшет находятся на магнитной подставке с открытой крышкой.</p>
<p>Внимание: важно не пересушивать шарики! Это может привести к снижению выделения ДНК-мишени. Образцы следует элюировать, когда шарики остаются темно-коричневого цвета и выглядят блестящими, но при этом видно, что вся видимая жидкость испарилась. Когда шарики становятся светло-коричневыми, и их поверхность начинает покрываться трещинами, они являются уже пересушенными.</p>
<p>Снимите пробирку/планшет с магнитной подставки. Элюируйте ДНК-мишень с шариков, добавляя 32–33 мкл 0,1X TE. Хорошо перемешайте суспензию пипетированием 10 раз или встряхиванием на вортексе. Инкубируйте суспензию не менее 2 мин при комнатной температуре. При необходимости шарики можно центрифугировать в течение короткого времени, чтобы собрать жидкость со стенок пробирки или лунок планшета, прежде чем поставить их обратно на магнитную подставку.</p>
<p>Поместите пробирку/планшет на магнитную подставку. Через 5 мин (или когда раствор станет прозрачным) перенести 30 мкл в новую ПЦР-пробирку для хранения при минус 20 °C.</p>
<p>Далее необходимо проверить распределение фрагментов библиотеки (например, с использованием Agilent Bioanalyzer High Sensitivity DNA chip).</p>
<h4><strong><em>3.1.4 Измерение концентрации ДНК с помощью PicoGreen dsDNA Assay Kit</em></strong></h4>
<p>В ходе работы не следует использовать для раствора стеклянную посуду.</p>
<p><em>Подготовка красителя:</em></p>
<p>Перед началом работы следует дать реагенту Quant-iT<img src="https://s.w.org/images/core/emoji/13.1.0/72x72/2122.png" alt="™" class="wp-smiley" style="height: 1em; max-height: 1em;" /> PicoGreen® нагреться до комнатной температуры, прежде чем открывать пробирку с ним. Для наилучшего результата раствор необходимо использовать в течение нескольких часов после приготовления. Приготовленный раствор с красителем следует защищать от света (поместив его в темное место или накрыв фольгой).</p>
<ol>
<li>Проверить корректность установки даты и времени в приборе («Set­tings» → «Instrument settings» → «Date/Time»). При необходимости установить верные значения.</li>
<li>В чистую, объемом 15 мл пробирку внести 1005 мкл 20х TE буфера.</li>
<li>Добавить в пробирку 19095 мкл Н<sub>2</sub>О, а также 101 мкл красителя.</li>
<li>Тщательно перемешать.</li>
<li>Приготовить контрольную ДНК для построения кривой (0 и 100 нг в 5 мкл):
<ol>
<li>внести в пробирку на 0,2 мл 8 мкл 1хТЕ буфера;</li>
<li>добавить 2 мкл контрольной ДНК из набора (100 нг/мкл). Хорошо перемешать пипетированием;</li>
<li>подготовить две оптически прозрачные пробирки объемом 0,5 мл;</li>
<li>одну подписать как К1, другую – К2;</li>
<li>в К1 внести 200 мкл раствора для измерения концентрации;</li>
<li>в К2 внести 195 мкл раствора для измерения и 5 мкл разведенной контрольной ДНК (из шага b).</li>
</ol>
</li>
<li>Внести по 195 мкл в оптически прозрачные пробирки объемом 0,5 мл.</li>
<li>Добавить в каждую пробирку по 5 мкл соответствующей коровьей ДНК.</li>
<li>В пробирку К1 внести 5 мкл раствора ДНК второго разведения<br />
(38 + 2 мкл).</li>
<li>В пробирку К2 внести 5 мкл раствора ДНК первого разведения (8 + 2 мкл).</li>
<li>Включить прибор, подключить его к компьютеру.</li>
<li>Выбрать на первом экране программу PicoGreen.</li>
<li>Произвести измерения.</li>
</ol>
<h4><strong><em>3.1.5 Подготовка библиотеки к нанесению в картридже</em></strong></h4>
<p>После объединения образцов измерить концентрацию ДНК.</p>
<p>Произвести пересчет массовой концентрации в молярность: http://molbiol.ru/scripts/01_07.html (программа выдает данные в пикомолях, необходимо пересчитать в наномоли).</p>
<p>Далее необходимо следовать инструкциям Protocol A из «MiSeq System Denature and Dilute Libraries Guide».</p>
<h4><strong><em>3.1.6 Разведение щелочи (NaOH)</em></strong></h4>
<p>К 100 мкл стокового раствора (10М) добавить 900 мкл Н<sub>2</sub>О.</p>
<p>К отобранным 200 мкл полученного раствора (1N NaOH) добавить<br />
800 мкл Н<sub>2</sub>О.</p>
<p>В результате получится 1 мл 0,2N NaOH.</p>
<h4><strong><em>3.1.7 Денатурация библиотеки</em></strong></h4>
<p>1. В микроцентрифужной пробирке смешать следующие объемы.</p>
<ul>
<li>4 нM библиотека (5 мкл);</li>
<li>0,2N NaOH (5 мкл).</li>
</ul>
<p>2. Перемешать кратким встряхиванием на вортексе и центрифугировать при 280×g в течение минуты.</p>
<p>3. Инкубировать при комнатной температуре в течение 5 мин.</p>
<p>4. В пробирку, содержащую денатурированную библиотеку, добавить<br />
990 мкл холодного НТ1-буфера.</p>
<p>5. В результате получается 1 мл денатурированной библиотеки с концентрацией 20 пМ.</p>
<p>6. Нанести в картридж 600 мкл.</p>
<h3><strong>3.2 Перечень однонуклеотидных полиморфизмов (SNP), входящих в использованную панель TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel</strong></h3>
<p>Все исследуемые SNP можно разделить на Блок 1 и Блок 2.</p>
<p><strong>Блок 1. Родство и достоверность происхождения (200 SNP)</strong></p>
<p>Исходя из рекомендаций Международного общества по изучению генетики животных (ISAG), по каждому животному определяются важные индивидуальные мутации. Достоверность происхождения контролируется по 200 SNP.</p>
<p><strong>Блок 2. Генетически наследуемые заболевания (53 SNP)</strong></p>
<p>В таблице 5 приведен подробный перечень SNP, которые были использованы нами для характеристики исследуемых экспериментальных стад.</p>
<p><strong>Таблица 5</strong> – Исследованные мутации</p>
<table>
<tbody>
<tr>
<td rowspan="2">№ п/п</td>
<td rowspan="2">Идентификатор SNP</td>
<td rowspan="2">Значение замены</td>
<td colspan="3">Сочетание аллелей</td>
</tr>
<tr>
<td>позитивно</td>
<td>нейтрально<br />
(носительство)</td>
<td>негативно</td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>201</td>
<td>_SNPchr19_27956790</td>
<td>Мутация в белке, продукте гена SHBG, связывающем и транспортирующем стероидные половые гормоны. Ассоциирована с потерей плодовитости, связанным с гаплотипом MH1 и эмбриональной смертностью</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>202</td>
<td>_SNPchr26_36951321</td>
<td>Мышечная аномалия переднего пояса у КРС – аутосомно-рецессивное расстройство</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>203</td>
<td>_SNPchr6_89169686</td>
<td>Синдром легочной гипоплазии и анасарка (РНА) – редкая врожденная аномалия у крупного рогатого скота, которая характеризуется водянкой плода, включая сильный подкожный отек (anasarca) и неразвитые или слабо сформированные легкие (легочная гипоплазия)</td>
<td>A/A</td>
<td>A/G</td>
<td>G/G</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 5</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>204</td>
<td>FBN1_SNPchr10_62054844</td>
<td>Синдром Марфана (MFS) – наследственное аутосомно-доминантное заболевание крупного рогатого скота, связанное с мутацией в гене FBN1 10 хромосомы <em>Вos taurus</em></td>
<td>G/G</td>
<td></td>
<td>A/G</p>
<p>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>205</td>
<td>FBN1_SNPchr10_62141461</td>
<td>Синдром Марфана (MFS) – наследственное аутосомно-доминантное заболевание. Патологические процессы развиваются в сердечно-сосудистой и костно-мышечной системах, глазах, коже и кожных покровах</td>
<td>G/G</td>
<td></td>
<td>A/G</p>
<p>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>206</td>
<td>_SNPchr7_17645428</td>
<td>Мутация, вызывающая нейропатическую гидроцефалию (NH). Большинство случаев NH приводят к ранним абортам. NH телят, которые рождаются намного меньшим весом для регистрационного возраста</td>
<td>A/A</td>
<td>A/G</td>
<td>G/G</td>
</tr>
<tr>
<td>207</td>
<td>_SNPchr8_108833985</td>
<td>Кератоконъюктивит – быстро распространяющаяся, доброкачественно протекающая болезнь животных различных видов, вызываемая риккетсиоподобными микроорганизмами. С каждым аллелем &#8216;G&#8217; животное уменьшает свой риск заражения на 8–13 %. Таким образом, животное, которое является гомозиготным G/G аллелей, имеет риск инфицирования меньше на 16–<br />
26 % по сравнению с гомозиготой A/A</td>
<td>G/G</td>
<td>A/G</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>209</td>
<td>ASS1_SNPchr11_100802781</td>
<td>Цитруллинемия – это аутосомно-рецес­сивное расстройство, которое для животных является летальным в раннем постнатальном периоде</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>210</td>
<td>CWC15_SNPchr15_15707169</td>
<td>Гаплотип джерсейского скота (JH1). Аутосомно-рецессивная смертельная мутация гомолога CWC15 (гомолог сплайсосома-ассоциированного белка CWC15) на хромосоме 15</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>211</td>
<td>LRP4_SNPchr15_77667135</td>
<td>Синдактилия (мулья нога). Во многих странах у многих пород крупного рогатого скота сообщалось о синдактилии. Однако большая часть документации связана с ее появлением у голштинской породы, разводимой в Америке</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 5</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>212</td>
<td>LRP4_SNPchr15_77675440+LRP4_SNPchr15_77675516+LRP4_SNPchr15_77675517</td>
<td>Множественные мутации в гене белка 4, связанным с рецептором LDL. Син­дактилия (мулья нога). Пораженный крупный рогатый скот может иметь 1–4 объединенных копыта, проявляет разную степень хромоты, имеет высокую ступенчатую походку и медленно ходит</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>213</td>
<td>LRP4_SNPchr15_77682052</td>
<td>Мутация обнаружена в гене белка 4, связанным с рецептором LDL. Сопровождается синдактилией (нога мула)</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>214</td>
<td>LRP4_SNPchr15_77686731</td>
<td>Мутация обнаружена в гене белка 4, связанным с рецептором LDL. Сопровождается синдактилией (нога мула)</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>217</td>
<td>GART_SNPchr1_1277227</td>
<td>Гаплотип голштинского скота (HH4). Повышенная вероятность эмбриональ­ной и постэмбриональной смертности</td>
<td>A/A</td>
<td>A/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>218</td>
<td>ITGB2_SNPchr1_145114963</td>
<td>Синдром врожденного иммунодефицита (Bovine Leukocyte Adgesion Defiency, BLAD)</td>
<td>T/T</td>
<td>T/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>219</td>
<td>CLCN7_SNPchr25_1137017+CLCN7_SNPchr25_1137019</td>
<td>Остеопетроз (OS) – заболевание костей, приводящее к тяжелым нарушениям в организме животного. Дефект активности остеокластов приводит к образованию чрезмерно хрупких костей. Больные телята рождаются, как правило, раньше срока мертвыми. Заболевание имеет аутосомно-рецессив­ный тип наследования</td>
<td>G/G</td>
<td>G/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>220</td>
<td>COL7A1_SNPchr22_51873390</td>
<td>Буллезный эпидермолиз (БЭ) – нас­ледственное буллезное заболевание животных, характеризующееся крайней хрупкостью кожи и слизистых оболочек при механическом воздействии</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>221</td>
<td>FECH_SNPchr24_57298883</td>
<td>Врожденная эритропоэтическая протопорфирия – генетическое заболевание, приводящее к тяжелой форме фотосенсибилизации (повышенной чувствительности организма, чаще кожи к свету). Кроме боязни света у животных наблюдается повреждение кожи<br />
и слизистых оболочек, иногда случаются припадки и судороги</td>
<td>G/G</td>
<td>G/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 5</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>223</td>
<td>FANCI_SNPchr21_21184873</td>
<td>Синдром брахиспина (BS) – редкий рецессивный генетический дефект молочного голштинского крупного рогатого скота. Риск эмбриональной смертности</td>
<td>T/T</td>
<td>T/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>225</td>
<td>ATP2A1_SNPchr25_26197204</td>
<td>Врожденная мышечная дистония 1-го и 2-го типов – наследственное заболевание с аутосомно-рецес­сивным типом наследования, широко распространенное в бельгийской голубой породе. У всех телят с CMD наблюдаются генерализованные мышечные контрактуры (непроизвольное обширное напряжение мышц), нарушение глотания, высокая степень утомляемости, длительные мышечные спазмы</td>
<td>C/C</td>
<td>C/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>226</td>
<td>ATP2A1_SNPchr25_26197429</td>
<td>Врожденная мышечная дистония 1-го и 2-го типов</td>
<td>C/C</td>
<td>C/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>227</td>
<td>ATP2A1_SNPchr25_26198573</td>
<td>Врожденная мышечная дистония 1-го и 2-го типов</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>229</td>
<td>SLC6A5_SNPchr29_24610561</td>
<td>Врожденная мышечная дистония 1-го и 2-го типов</td>
<td>A/A</td>
<td>A/G</td>
<td>G/G</td>
</tr>
<tr>
<td>230</td>
<td>SLC37A2_SNPchr29_28879810</td>
<td>Аборт из-за гаплотипа MH2<br />
у <em>Bos taurus</em></td>
<td>T/T</td>
<td>T/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>231</td>
<td>PYGM_SNPchr29_43611783</td>
<td>Гликогенное заболевание (V). Наследственное заболевание с аутосомно-рецессивным типом наследования</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>235</td>
<td>KRT5_SNPchr5_27545478</td>
<td>Врожденный буллезный эпидермолиз – наследственное заболевание,<br />
которое характеризуется преимущественно хрупкостью и другими дефектами кожи и слизистых оболочек. Может наблюдаться деформация и отслоение копыт. Пораженные телята чаще всего погибают в возрасте 1–4 нед. Буллезный эпидермолиз распространен в голштинской породе КРС</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>236</td>
<td>APAF1_SNPchr5_63150400</td>
<td>Гаплотип (HH1), связанный с эмбриональной смертностью. Гаплотип HH1, связанный с эмбриональной смертностью на разных сроках стельности, картирован на 5-й хромосоме</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 5</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>237</td>
<td>HEPHL1_SNPchr29_695072</td>
<td>Гипотрихоз. У крупного рогатого скота с мутацией в гене HEPHL1 отсутствуют волосяной покров при рождении частично или по всему телу: часто грудь, шея и ноги. Пострадавшие животные более чувствительны к окружающей среде, кожным инфекциям, вредителям, солнечным ожогам, холодовому стрессу</td>
<td>T/T</td>
<td>T/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>238</td>
<td>IFNGR2_SNPchr1_1390292</td>
<td>Мутация в гене IFNGR2 ассоциирована с туберкулезом. Дефекты в IFNGR2 являются причиной менделевской восприимчивости к микобактериальному заболеванию (MSMD), также известному как семейная диссеминированная атипичная микобактериальная инфекция. MSMD представляет собой генетически гетерогенное заболевание с аутосомно-рецессивным, аутосомно-доминантным или X-связанным наследованием</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>239</td>
<td>KDM2B_SNPchr17_56010031</td>
<td>ДисплазияPaunch Calf Syndrome. Телята обычно мертворожденны, имеют аномальное развитие нескольких органов, лицевые деформации и расширенный желудок, наполненный жидкости. У некоторых пораженных телят также есть выступающий язык и расщепленное нёбо</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>240</td>
<td>KDSR_SNPchr24_62138835</td>
<td>Спинальная мышечная атрофия (SMA). Относится к нейродегенеративным заболеваниям. Причиной болезни является мутация в гене KDSR, кодирующем 3-кетодигидросфингозинредуктазу, которая катализирует важнейшие процессы в метаболизме гликосфинголипидов</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>241</td>
<td>KRT74_SNPchr5_27490704</td>
<td>Мутация в гене кератин 74. Аутосомно-доминантная патология волосяного покрова животного (ADWH), также связана с мутацией гена KRT74 – это редкое заболевание, характеризующееся плотно скрученными волосами</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 5</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>245</td>
<td>LYST_SNPchr28_8508619</td>
<td>Синдром Чедиак-Хигаси (CHS) представляет собой аутосомно-рецессив­ное расстройство, которое поражает несколько видов, включая мышей, людей и крупный рогатый скот. Вызывает нарушение работы белка регулятора транспорта лизосом, что приводит к изменениям в размере, структуре и функции лизосом</td>
<td>T/T</td>
<td>T/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>246</td>
<td>MFN2_SNPchr16_42562057</td>
<td>Aксонопатия. Телята часто имеют широкую постановку ног и начинают терять контроль над задними лапами<br />
в возрасте 1 мес, в дальнейшем они<br />
не могут стоять. Хотя болезнь не смертельна, пораженные телята, как правило, подвергаются эвтаназии<br />
в возрасте 10 мес</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>247</td>
<td>MITF_SNPchr22_31746502</td>
<td>Синдром белого симментала (GWFS) – аутосомально-доминантное генетическое заболевание, которое характеризуется гипопигментацией, гетерохромией радужки, дефектами оболочки глаз и двусторонней потерей слуха</td>
<td>C/C</td>
<td></td>
<td>C/A</p>
<p>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>248</td>
<td>MAN2B1_SNPchr7_13956640</td>
<td>Маннозидоз – это рецессивное генетическое заболевание, связанное с нарушением работы лизосомальной альфа-маннозидазы – низкоспецифичной экзогликозидазы, основная функция которой – деградация гликопротеинов</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>249</td>
<td>MAN2B1_SNPchr7_13957949</td>
<td>Маннозидоз. AM_961 (обнаружена<br />
в линиях Angus и Murray Grey):</td>
<td>T/T</td>
<td>T/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>250</td>
<td>MITF_SNPchr22_31769189</td>
<td>Синдром белого симментала (GWFS) – аутосомально-доминантное генетическое заболевание, которое характеризуется гипопигментацией, гетерохромией радужки, дефектами оболочки глаз и двусторонней потерей слуха</td>
<td>T/T</td>
<td></td>
<td>T/A</p>
<p>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>251</td>
<td>OPA3_SNPchr18_53546443</td>
<td>Кардиомиопатии – тяжелые дегенеративные заболевания миокарда, которые приводят к сердечной недостаточности. В течение последних трех десятилетий дилатационная кардиомиопатия быков (BDCMP) получила широкое распространение в голштинской и симментальской породах крупного рогатого скота</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 5</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>252</td>
<td>GLRA1_SNPchr7_65080197</td>
<td>Врожденный миоклонус – это наследственное аутосомно-рецес­сивное заболевание, которое ранее было известно, как нейроаксиальный отек. У животных с ICM наблюдается аномальная реакция на различные тактильные, зрительные и слуховые раздражители в виде гиперестезии и миоклонических судорог скелетных мышц</td>
<td>G/G</td>
<td>G/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>253</td>
<td>PLD4_SNPchr21_71001232</td>
<td>Врожденный дефицит цинка (ZDL).Это заболевание характеризуется нарушением функции иммунной системы, замедлением роста и кожными изменениями, вследствие нарушения абсорбции цинка в кишечнике</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>254</td>
<td>RASGRP2_SNPchr29_43599204</td>
<td>Тромбопатия – генетическое заболевание, связанное с нарушением свертываемости крови, происходящим в результате блокировки высвобождения АДФ из тромбоцитов. У больных животных количество тромбоцитов находится в норме, но их функция нарушена, что приводит к нарушению свертываемости крoви</td>
<td>A/A</td>
<td>A/G</td>
<td>G/G</td>
</tr>
<tr>
<td>255</td>
<td>RNF11_SNPchr3_95601697</td>
<td>Карликовость. Мутация в гене RNF11 (ассоциирована с нарушением регуляции белкового комплекса А20, что приводит к различным патологиям роста и развития)</td>
<td>A/A</td>
<td>A/G</td>
<td>G/G</td>
</tr>
<tr>
<td>256</td>
<td>SLC35A3_SNPchr3_43412427</td>
<td>Комплексный порок позвоночника (CVM) – сложный тератологический синдром телят голштинской породы, заключающийся, прежде всего, в выкидышах, преждевременных родах, мертворождении или смерти телят в первые дни жизни, а значит увеличивающий смертность молодняка и воспроизводительные способности скота. Самым ярким проявлением этой аномалии, о чем говорит уже само ее название, являются многочисленные уродства скелета. Cмертность на стадии эмбриона</td>
<td>G/G</td>
<td>G/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 5</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>257</td>
<td>SLC39A4_SNPchr14_1723331</td>
<td>Акродерматит энтеропатический. Заболевание, обусловленное нарушением всасываемости в кишечнике за счет дефицита цинка и отсутствия фермента олигопептидазы. Мутации в гене SLC39A4 приводят к дефициту протеина, ответственного за всасывание цинка, что ведет к грубому изменению метаболизма цинка</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>258</td>
<td>IARS_SNPchr8_85341291</td>
<td>Перинатальный синдром слабого теленка. Соответствует понятию «физиологическая незрелость» новорожденных (иногда называют «синдром слабых телят»). У таких животных снижен мышечный тонус, тормозится реализация позы стояния (они не могут подняться на ноги в течение первых двух часов после рождения), сосательный рефлекс появляется с запозданием и слабо выражен, отмечают безучастное отношение к окружающему, сгорбленную позу</td>
<td>C/C</td>
<td>C/G</td>
<td>G/G</td>
</tr>
<tr>
<td>259</td>
<td>SMC2_SNPchr8_95410507</td>
<td>Голштинский гаплотип НН3. Оказывает влияние на процент успешных осеменений (с наступлением стельности) и ассоциирован с эмбриональной и ранней постэмбриональной смертностью</td>
<td>T/T</td>
<td>T/C</td>
<td>C/C</td>
</tr>
<tr>
<td>260</td>
<td>SPAST_SNPchr11_14760164</td>
<td>Спинальная демиелинизация (SDM). Нейродегенаритивное заболевание характеризуется патологическими изменениями миелиновой оболочки спинного мозга. Болезнь связана с нарушением работы белка спастина, которое приводит к потере АТФазной активности этого белка</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>261</td>
<td>TG_SNPchr14_9487659</td>
<td>Врожденный зоб щитовидной железы (CG) – это аутосомно-рецессивное на­следственное заболевание, вызванное мутацией в гене TG, который кодирует белок тиреоглобулин. CG является первым генетическим заболеванием среди всех доместицированных видов животных, для которых была описана молекулярно-генетическая природа</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="6"><em>Продолжение таблицы 5</em></td>
</tr>
<tr>
<td>1</td>
<td>2</td>
<td>3</td>
<td>4</td>
<td>5</td>
<td>6</td>
</tr>
<tr>
<td>262</td>
<td>TYRP1_SNPchr8_31711945</td>
<td>Глазокожный альбинизм</td>
<td>G/G</td>
<td>G/A</td>
<td>A/A</td>
</tr>
<tr>
<td>263</td>
<td>UBE3B_SNPchr17_65921497</td>
<td>Мутация в гене UBE3B – убиквитин-белковой лигазы E3B</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>264</td>
<td>UMPS_SNPchr1_69756880</td>
<td>Дефицит уридинмонофосфатсинтетазы (Deficiency of Uridine-5-Monophos­phate Synthase, DUMPS).</p>
<p>DUMPS – это наследственное летальное аутосомно-рецессивное заболевание в голштинской популяции, приводящее к ранней эмбриональной смерт­ности на стадии имплантации эмбриона в матку. Это связано с нарушением синтеза уридин-монофосфата в организме, который является одним из ключевых элементов при синтезе de novo пиримидиновых нуклеотидных оснований. Смертность эмбриона наступает примерно на 40 день после оплодотворения</td>
<td>C/C</td>
<td>C/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
<tr>
<td>265</td>
<td>F8_SNPchrX_38971744</td>
<td>Гемофилия А (FVIIID; OMIA 000437-9913) представляет собой нарушение свертываемости крови, описанное как у человека, так и у многих видов домашних животных (лошадей, овец),<br />
в том числе у крупного рогатого скота. Заболевание связано с дефицитом фактора VIII свертывания крови – плазменного гликопротеина, ген которого расположен на Х хромосоме</td>
<td>A/A</td>
<td>A/T</td>
<td>T/T</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<p>В первом столбце указан порядковый номер SNP на панели. Во втором столбце приведено наименование <a id="post-5131-__DdeLink__27549_2048640829"></a>однонуклеотидного полиморфизма (SNP) (например, для SNP с порядковым номером 2 – это «ARS-BFGL-BAC-19454» (один из 100 дополнительно введенных в целях более точного определения родства полиморфизм), а для SNP с порядковым номером 265 – это «F8_SNPchrX_38971744» (мутация, приводящая к развитию гемофилии А, дефицит фактора VIII свертываемости крови). В столбце 3 описано влияние замены на физиологическое состояние индивида, т. е. дана информация о генетически наследуемом признаке или заболевании, с которым ассоциирован данный однонуклеотидный полиморфизм (так для SNP с порядковым номером 265 – «F8_SNPchrX_38971744», в таблице это гемофилия А).</p>
<p>В четвертом столбце указан конкретный нуклеотид аллеля, представленный в качестве референсного (наиболее представленного) для соответствующего SNP в базах данных (так, для SNP № 2 «ARS-BFGL-BAC-19454» – это цитозин – С), а в пятом столбце указаны альтернативные аллели в соответствующей популяции (или возможные, помимо референсного), в случае «ARS-BFGL-BAC-19454» – это тимин.</p>
<h2><strong>4 РАЗРАБОТКА ПРОГРАММНОГО ПРОДУКТА</strong></h2>
<h3><strong>4.1 Основные цели и задачи, поставленные при разработке созданного программного продукта</strong></h3>
<p>Прибор для высокопроизводительного секвенирования MiSeq (Illumina, США) за один цикл работы (запуск) с использованием панели TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel Illumina способен обработать до 96 образцов ДНК-материала. В итоге, на выходе прибор генерирует CSV-файл объемом примерно 1,03 Мб, который включает себя 25440 строк данных, в случае обработки<br />
96 образцов генетического материала – библиотеки полногеномной ДНК КРС. Соответственно, время обработки такого объема информации вручную будет нерационально велико, особенно, если необходимо получить на выходе сразу несколько документов, к примеру, и индивидуальные паспорта, и 2D-диаграм­му (ковер) для всего стада.</p>
<p>Данная работа занимает слишком много человеко-часов и является экономически невыгодной, так как для того, чтобы обрабатывать предложенный объем данных в сутки (время берется с учетом максимальной суточной производительности работы прибора в размере 96 образцов), потребуется около 30 специально обученных работников.</p>
<p>Таким образом, в целях рационализации экономических затрат и человеческих ресурсов, возникает необходимость в разработке комплекса программного обеспечения, которое сможет выполнять необходимые аналитические задачи<br />
и автоматизировать документооборот компании.</p>
<p>Что касается основных целей, которые предъявляются будущему программному продукту, то их можно выделить в следующий список:</p>
<ul>
<li>мультисистемность;</li>
<li>высокая скорость работы;</li>
<li>гибкость настройки;</li>
<li>удобство для пользователя.</li>
</ul>
<p>Требование <em>мультисистемности</em> выражается в том, что программный комплекс должен запускаться на электронно-вычислительных машинах с любой современной операционной системой и при условии того, что ЭВМ может не обладать большой вычислительной мощностью. Для этого на перспективу поставлены задачи по переносу пакета ПО в web-интерфейс с целью обеспечить вышеперечисленные требования. Выбор такого подхода обусловлен тем, что для работы с wed-интерфейсом нет необходимости установки на вычислительную машину каких-либо дополнительных программ, пакетов или сред визуализации, так как браузер присутствует в списке базового оборудования в любой современной операционной системе, будь то системы семейства Windows или же ОС, в основе которых лежит Linux-подобная система, к примеру, MacOS.</p>
<p><em>Высокая скорость работы</em> необходима для того, чтобы не возникало очереди при обработке данных, которая может повлечь простои в работе всей фирмы, и соответственно, негативно отразиться на ее экономической картине.</p>
<p><em>Гибкость настройки</em> необходима для того, чтобы пользователям не было необходимости изучать структуру программы и саму среду программирования. То есть пользователи, у которых есть доступ к файлам, могут изменять, к примеру, структуру паспорта или ковра, просто меняя исходный Excel файл, при учете согласования этих изменений с программистом, таким образом, им нет необходимости разбираться в структуре программы и каким-либо образом изменять исходный код, что также поможет избежать ненужных задержек при ежедневной эксплуатации программного пакета.</p>
<p>Ну, и наконец, продукт должен быть <em>удобен для рядового пользователя</em>,<br />
с таким условием, чтобы человеку не пришлось специально переобучаться для работы с ним. Это достигается, опять же, за счет введения в будущем web-интерфейса с выверенным UI дизайном, который позволит выполнять необходимые цели уже после получаса инструктажа.</p>
<p>Теперь остановимся на задачах с точки зрения программиста.</p>
<p>Для начала, при разработке программы необходимо учитывать то, что ей необходимо взаимодействовать с пакетами MS Office, а именно с Microsoft Excel, так как шаблоны как для паспорта, так и для ковра создавались именно<br />
в MS Excel и имеют соответствующий формат «.xlsx».</p>
<p>Также, одним из требований было то, что результирующие файлы, получаемые в итоге, также должны быть «.xlsx» и «.pdf», что также означает, что программный код должен быть написан с учетом поддержки MS Excel.</p>
<p>Еще одним требованием является то, что программа не должна слишком перегружать ресурсы вычислительной машины промежуточными данными, так как предполагается ее дальнейшее использование в Web-интерфейсе, где перегрузка хостинга данными будет вести к неминуемому снижению скорости работы программы или даже непредвиденным ошибкам переполнения выделенной памяти. Для этого было принято решение сохранять промежуточные данные также в формате «.xlsx» c последующим удалением их после целевой отработки.</p>
<p>В качестве следующего требования выделялось то, что программному обеспечению предстоит работать с «.csv» форматом, для которого необходимы специфические библиотеки, таким образом, был выбран язык программирования Python 3.6 с библиотекой Pandas, так как данная библиотека оптимально подходит как для работы с «.csv» форматом, так и для обработки данных, получаемых из таких файлов посредством встроенной в нее структуры DataFrame. Данная структура представляет собой особый вид массивов, отличительной чертой которого является его автоматическая нумерация по строкам и озаглавливание по столбцам.</p>
<p>Данные особенности также крайне необходимы, когда дело доходит до занесения результирующих DataFrame-массивов на лист рабочей книги Excel.</p>
<p>Для обеспечения гибкости настройки файлы-шаблоны всегда доступны<br />
к редактированию пользователям, у которых есть на это доступ, так как программа при каждом своем запуске заново инициализирует шаблон, что позволяет изменять результирующие файлы согласно требованиям практически мгновенно при необходимости и без прямого участия программиста.</p>
<p>Для обеспечения удобства использования уже на данном этапе применен вывод некоторой информации о ходе работы программы в консоль, что позволяет пользователю отслеживать прогресс обработки данных, а также пользователь в консоли сам может вводить определенные данные, такие как порода коровы, ее возраст и т. д., что позволяет ему лишний раз не редактировать результирующий файл, и соответственно, экономить время.</p>
<h3><strong>4.2 Обоснование выбора средств и достижения целей</strong></h3>
<p>Нами был проведен анализ рынка программного обеспечения, распространяемого открыто по свободной лицензии, ограниченной лицензии и иным формам приобретения. Производился поиск программы или программного пакета, которые удовлетворяли бы цели и задачи, выдвигаемые к ним, такие как мультисистемность, высокая скорость работы, гибкость настройки. Также немаловажным являлось то, что софт предполагалось использовать в узкоспециализированной предметной области и, поэтому он должен быть разработан с учетом требований данной отрасли.</p>
<p>В результате анализа рынка было принято решение создать оригинальный (самостоятельно разработанный) комплекс программ, так как адекватные альтернативы попросту отсутствуют в свободном доступе или же не подходят под требования, предъявляемые программам.</p>
<p>Также немаловажным фактором является то, что в команде работают вместе специалисты в области генной инженерии и программирования, что позволяет обеспечить диалог, в результате которого программный продукт пишется<br />
в соответствии с учетом всех требований генной инженерии. Также тесный диалог между программистом и специалистами в области генотипирования обеспечивает более глубокое понимание целей и задач, выдвигаемых программному продукту. Так как программист находится непосредственно внутри группы разработчиков, он может изменять и добавлять функциональность программ в соответствии с требованиями, избегая взаимодействия между предприятием-заказчиком и предприятием-исполнителем, тем самым сокращая время исполнения поставленных задач.</p>
<p>На данный момент в лаборатории имеются две программы.</p>
<h4><strong><em>4.2.1 Разработка программ Just Append Cows и Covers</em></strong></h4>
<p>Первая программа имеет рабочее название «Just Append Cows» и находится в полностью рабочем состоянии, ее актуальная версия 2.0. Данный программный продукт отвечает за автоматизированное создание паспортов на каждое конкретное животное в стаде.</p>
<p>Вторая программа имеет рабочее название «Covers» и также находится<br />
в полностью рабочем состоянии, ее актуальная версия 1.1. Данный программный продукт отвечает за анализ генетических показателей каждой отдельной особи в стаде и сведения полученной информации в общую наглядную таблицу, цветную 2D-диаграмму, так называемый «ковер».</p>
<p>Для разработки комплекта программного обеспечения была выбрана среда Python актуальной версии 3.6.</p>
<p>Python – современный язык программирования, имеющий возможность работать на всех актуальных операционных системах для персональных компьютеров. Язык программирования Python находится в стадии разработки чуть более 20 лет. На сегодняшний день параллельно активно используется две версии языка – более старая версия 2 и современная версия (третья). Версия 2 более не развивается, но до сих пор еще используется, поскольку очень много программного обеспечения и библиотек разработано именно для этой версии.</p>
<p>Между версиями есть существенная несовместимость, в том числе в синтаксисе команд ввода-вывода (программа на языке Python 2-й версии может не работать в 3-й версии и наоборот), но в целом они очень похожи. В случае<br />
с разработкой описанных выше продуктов было принято решение использовать именно третью версию, она является актуальной, и соответственно, будет обновляться и поддерживаться разработчиком, а также только с ней работают актуальные версии необходимых в разработке библиотек.</p>
<p>Python – современный универсальный интерпретируемый язык программирования. Особенностями его являются кроссплатформенность, современность, наличие обширной встроенной библиотеки и множества сторонних библиотек.</p>
<p>Одной из ключевых особенностей выбора данного языка являлась его гибкость. С одной стороны, Python является объектно-ориентированным языком. Вся мощь объектно-ориентированного подхода доступна при разработке на Python. С другой стороны, язык Python не вынуждает программиста всегда использовать ООП.</p>
<p>Ключевой особенностью, из-за которой был выбран именно этот язык, является то, что код выполняется (интерпретируется) из исходного текста, без предварительного перевода в машинный код. Код, написанный на компилируемых языках, типа C++, сначала переводятся в машинный код.</p>
<p>Принято считать, что интерпретируемые языки программирования работают медленнее, чем компилируемые – из-за того, что трансляция осуществляется не сразу. Но отладка и написание кода происходит быстрее, потому что не нужно ожидать, пока компилятор закончит работать.</p>
<p>Python работает как интерпретируемый, его код перед выполнением компилируется. Многие его компоненты работают на полной скорости компьютера, поскольку написаны они на языке С.</p>
<p>Данная особенность крайне важна, так как планируется дальнейший перевод программного комплекса на web-платформу, где интерпретируемость является необходимым условием.</p>
<p>В качестве дистрибутива было принято решение об использовании пакета Anaconda.</p>
<p>Anaconda – дистрибутив языка программирования Python, в который входит набор популярных свободных библиотек, позволяющих, в том числе, производит работу с данными. Основная особенность Anaconda – поставка единым согласованным комплектом наиболее необходимых библиотек и модулей (таких как NumPy, SciPy, Pandas и др.) с разрешением возникающих зависимостей и конфликтов, которые могут возникать при одиночной установке. По состоянию на 2019 г. Anaconda содержит более 1,5 тыс. модулей.</p>
<p>Основной особенностью дистрибутива является оригинальный менеджер разрешения зависимостей conda с графическим интерфейсом Anaconda Navigator, которые позволяет отказаться от стандартных менеджеров пакетов для Python, таких, как pip, к примеру. Дистрибутив скачивается единожды,<br />
и вся последующая конфигурация, в том числе установка дополнительных модулей, возможна без подключения к сети Интернет. Кроме того, обеспечивается возможность ведения нескольких изолированных сред с раздельным разрешением версионных зависимостей в каждой.</p>
<p>В качестве среды разработки была выбрана IDE Spyder, так как она имеет ряд преимуществ и удобна для проектирования и написания программного кода.</p>
<p>Spyder (ранее Pydee) – свободная среда разработки для Python. Она входит в стандартный пакет Anaconda, является кроссплатформенной и доступна для Windows, Linux и MacOS. Название Spyder расшифровывается как Scientific PYthon Development EnviRonment, что в переводе означает «научная среда разработки для Python». Данная среда разработки создавалась для научных расчетов, и в этой сфере она действительно удобна.</p>
<p>Spyder является высокопроизводительной и дружелюбной по отношению<br />
к разработчику интерактивной средой разработки для языка программирования Python с продвинутыми возможностями редактирования, интерактивного тестирования, отладки и интроспекции.</p>
<p>Также Spyder представляет из себя часть модуля spyderlib для Python, являющегося совокупностью мощных виджетов на PyQt4, таких как редактор кода, консоль Python (при необходимости доступная для встраивания в приложения), редактор списков/кортежей и массивов Pandas.</p>
<p>При разработке пакета программного обеспечения, используются следующие библиотеки: Pandas, Openpyxl, os, Datetame.</p>
<p>Выбор данного перечня библиотек обусловлен задачами, которые предъявляются к программам. Перечисленные библиотеки, с точки зрения разработчика, наиболее оптимально подходят для их выполнения. Ниже приведена краткая характеристика каждой из них и указаны особенности, которые послужили причиной их выбора.</p>
<p>Библиотека os включает в себя множество функций для работы с операционной системой, причем их поведение, как правило, не зависит от ОС, что позволяет сделать программу универсальной и переносимой. В данном случае библиотека os отвечает за работу с директориями, а конкретно за удаление при необходимости временных файлов, в которых хранятся неупорядоченные данные по каждому конкретному образцу.</p>
<p>Библиотека DateTime представляет собой классы для обработки времени<br />
и даты различными способами. Эта библиотека выполняет задачу получения актуальной даты, которая в дальнейшем интегрируется в документ с целью уменьшить ручную работу, выполняемую пользователем.</p>
<p>Pandas является программной библиотекой на языке <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/Python" target="Python" rel="noopener noreferrer">Python</a> для обработки и анализа данных. Работа Pandas с данными строится поверх библиотеки <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/NumPy" target="NumPy" rel="noopener noreferrer">NumPy</a>, являющейся инструментом более низкого уровня. Предоставляет специальные структуры данных, такие как DataFrame, и операции для манипулирования ими. Корректное использование библиотеки Pandas в купе с другими использованными библиотеками обеспечивается пакетом Anaconda.</p>
<p>Основной областью применения данной библиотеки является обеспечение работы в рамках языка программирования Python в целях сбора (очистки), анализа и моделирования данных, без необходимости перехода на более ориентированные для данных целей языки, такие как R и Octave.</p>
<p>В данной библиотеке одной из ключевых особенностей является использование объектов DataFrame, необходимых для манипулирования индексированными массивами двумерных данных. В концепции рассматриваемой программы объекты DataFrame играют ведущую роль, в связи с этим использование библиотеки Pandas является необходимым.</p>
<p>Также данная библиотека позволяет реализовать удобную и мало затратную с точки зрения ресурсов обработку и редактирование DataFrame-объектов, что позволяет быстро и качественно интегрировать данные объекты на Excel-листы.</p>
<p>Не стоит забывать, что данная библиотека также помогает преобразовывать CSV-данные в DataFrame массивы, и обеспечивает дальнейшую корректную работу с ними.</p>
<p>Библиотека Openpyxl предназначена для того, чтобы обеспечивать возможность чтения и редактирования файлов Excel-форматов, таких как «.xlsx», «.xlsm», «.xltx» и др.</p>
<p>Целью обеих программ является создание результирующих документов<br />
в формате «.xlsx» по заранее созданному шаблону, таким образом, для выполнения этих целей была выбрана именно библиотека Openpyxl, так как она наиболее точно подходила для реализации поставленной задачи.</p>
<p>Данная библиотека отвечает за загрузку в память программы файла-шаблона и последующее заполнение шаблона необходимыми данными, чтобы на выходе получать необходимые результирующие документы, будь то генетический паспорт или ковер (2D-диаграмма) для всего стада.</p>
<h4><strong><em>4.2.2 Организация работы программных продуктов. Блок-схемы программ Just Append Cows и Covers</em></strong></h4>
<h5><em>4.2.2.1 Блок-схемы программы Just Append Cows </em></h5>
<p>На рисунках 8–10 представлена полная блок-схема программы, которая реализует обработку данных для создания паспортов для каждого определенного животного. Данная блок схема включает в себя описание вспомогательных<br />
и главной функций.</p>
<p>Рассмотрим <em>первую вспомогательную функцию report</em>. Данная функция необходима для корректного заполнения результирующего документа для каждой конкретной особи. На вход функции поступают три DataFrame (на схеме df1, df2, df3), которые являются массивами данных блоков SNP для каждой конкретной особи. Так, df1 отвечает за блок 200 SNP «Родство и достоверность происхождения», df2 – за блок 53 SNP «Генетически наследуемые заболевания», df3 – за блок 12 SNP «Экономически значимые признаки». Данные DataFrame уже являются упорядоченными и отсортированными согласно спецификации, так как формирование паспорта происходит на финальной стадии работы программы. Также на вход в функцию поступает переменная idat, которая является идентификатором очередного образца, для которого формируется документ.</p>
<p><img width="753" height="1077" class="wp-image-5151" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2547.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2547.png 753w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2547-210x300.png 210w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2547-716x1024.png 716w" sizes="(max-width: 753px) 100vw, 753px" alt="word image 2547 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 8</strong> – Блок-схема реализации первой вспомогательной функции report</p>
<p>При вызове функции report происходит инициализация функции, далее<br />
в переменную shablrep заносится путь, по которому программа определяет директорию, в которой хранится шаблон паспорта, после этого в переменной filenamer описывается соответствующая папка, в которой хранятся все паспорта для стада и формируется имя файла для каждой конкретной особи. После этого происходит инициализация переменной wb с помощью библиотеки openpyxl. Данная переменная является интерпретированной для работы в Python Excel-книгой, а в переменной ws указывается на каком именно листе будет производится работа с этой самой книгой. Далее идут три цикла занесения данных на лист. Они подобны друг другу, опишем первый, в остальных меняются лишь некоторые переменные и их значения.</p>
<p>Для начала переменной d1 присваиваются значения df1-массива с указанием того, что эти значения будут занесены на лист. Далее следует цикл, суть которого заключается в том, что мы берем все строки со стартовой (в данном случае это двадцать девятая строка, согласно шаблона), далее мы заносим в эту строку в каждый столбец со стартового (в данном случае это второй столбец, согласно шаблона) и заносим поочередно в каждую ячейку строки значения, где номер прохода соответствует номеру строки в переменной d1. Так, к примеру, в двадцать девятую строку заносится первая строка массива, в тридцатую вторая и так до окончания массива.</p>
<p>Как уже говорилось выше, два следующих цикла идентичны, меняются только значения (d2 присваиваются значения df2, стартовая строка у второго блока 234-ая, d3 присваиваются значения df3, стартовая строка у третьего блока 292-ая).</p>
<p>Далее следует блок, который отвечает за запрашивание у пользователя через консоль необходимых для окончательного формирования паспорта данных, таких как порода, возраст, половозрастная группа, идентификационный номер и занесения их в паспорт. Для начала в консоли пишется номер очередного образца, для которого происходит создание паспорта, а потом последовательно запрашиваются при помощи консоли необходимые данные. Также в данном блоке определяется дата формирования паспорта, она автоматически получается из системного времени с помощью библиотеки datetime. Полученные данные заносятся в соответствующие переменные: cowtype, sex, age, number, nowdate.</p>
<p>После этого следует блок записи этих данных на Excel-лист в тех местах, где это необходимо согласно требованиям.</p>
<p>На этом функция report завершает свою работу.</p>
<p>Рассмотрим работу <em>вспомогательной функции sort</em>, которая отвечает за сортировку данных каждого конкретного образца по блокам, при этом в каждом блоке происходит распределение по порядку, который необходим для занесения этих данных в результирующий документ.</p>
<p>Функция получает на вход идентификатор очередного образца (inpdata). Далее происходит инициализация переменных shabl1, shabl2, shabl3, в которые заносятся пути расположения шаблонов, согласно которым происходит сортировка данных. Далее происходит чтение временного файла, в котором находятся данные для очередного образца, представляющие собой массив из 265 строк в произвольном порядке, так как прибор для секвенирования заранее не упорядочивает их. Данные из временного файла заносятся в переменную dfdata. После этого происходит чтение файлов шаблонов – dfshabl1, dfshabl2, dfshabl3 для первого, второго и третьего блоков соответственно.</p>
<p>После получения всех необходимых данных, в переменные a, b, d заносятся размеры блоков (200, 53 и 12 строк соответственно), а в переменную b заносится размер всего массива данных (265 строк). После этого можно приступать к циклам сортировки.</p>
<p>Все три алгоритма сортировки работают аналогичным способом, поэтому будет описан принцип работы алгоритма для сортировки и заполнения массива первого шаблона, в остальных циклах меняются лишь некоторые переменные.</p>
<p>Внешний цикл алгоритма отвечает за последовательный построчный перебор DataFrame-массива первого шаблона. Перебирается i от 0 до 264, при этом на каждом проходе переменной ind присваивается значение, соответствующее i-ому наименованию маркера первого шаблона. Внутри этого цикла происходит построчный перебор исходного массива данных, притом при каждом проходе переменной prov присваивается значение, соответствующее j-ому наименованию маркера исходного набора данных. Далее проверяется, равна ли переменная ind переменной prov, и если да, то в массив шаблона с очередным наименованием маркера вносятся значения соответствующего маркера из исходного массива данных. Цикл устроен таким образом, что на каждом очередном проходе для строки шаблона подыскивается соответствующая строка в исходном массиве, таким образом, на выходе получается DF-массив dfshabl1, который уже упорядочен, так как за основу его взят массив из шаблона, и заполнен соответствующими данными из исходного массива.</p>
<p>Для остальных двух циклов меняются лишь величина внешних проходов согласно размерности шаблонных массивов (вместо а подставляется c и d)<br />
и сами шаблонные массивы (вместо dfshabl1 подставляется dfshabl2 и dfshabl3).</p>
<p>Далее происходит вызов функции report, суть и цели которой описаны выше, в которую отправляются полученные заполненные массивы dfshabl1, dfshabl2, dfshabl3 и идентификатор очередного образца inpdata.</p>
<p>Далее рассмотрим главную функцию программы. Блок-схема этой функции представлена на рисунках 9а и 9б. При запуске программы происходит инициализация данной функции, другими словами, данная функция срабатывает при запуске программы, и в ней уже происходит вызов вспомогательных функций, рассмотренных выше. В программе, отвечающей за генерацию паспортов, используются следующие библиотеки: Pandas, Openpyxl, os, Datetame.</p>
<p>Pandas – программная библиотека на языке <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/Python" target="Python" rel="noopener noreferrer">Python</a> для обработки и анализа данных. Работа Pandas с данными строится поверх библиотеки <a href="https://ru.wikipedia.org/wiki/NumPy" target="NumPy" rel="noopener noreferrer">NumPy</a>, являющейся инструментом более низкого уровня. Предоставляет специальные структуры данных, такие как DataFrame, и операции для манипулирования ими.</p>
<p>Основная область применения – обеспечение работы в рамках языка программирования Python в целях сбора (очистки), анализа и моделирования данных, без необходимости перехода на более ориентированные для данных целей языки, такие, как R и Octave.</p>
<p><img width="826" height="375" class="wp-image-5152" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2548.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2548.png 826w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2548-300x136.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2548-768x349.png 768w" sizes="(max-width: 826px) 100vw, 826px" alt="word image 2548 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."> <img width="827" height="683" class="wp-image-5153" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2549.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2549.png 827w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2549-300x248.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2549-768x634.png 768w" sizes="(max-width: 827px) 100vw, 827px" alt="word image 2549 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 9а </strong>– Блок-схема главной функции программы Just Append Cows</p>
<p><img width="826" height="490" class="wp-image-5154" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2550.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2550.png 826w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2550-300x178.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2550-768x456.png 768w" sizes="(max-width: 826px) 100vw, 826px" alt="word image 2550 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 9б (продолжение 9а) </strong>– Блок-схема главной функции программы<br />
Just Append Cows</p>
<p>В данной библиотеке одной из ключевых особенностей является использование объектов DataFrame, необходимых для манипулирования индексированными массивами двумерных данных. В концепции рассматриваемой программы объекты DataFrame играют ведущую роль, соответственно, по этой причине использование библиотеки Pandas является необходимым.</p>
<p>Также данная библиотека позволяет реализовать удобную и мало затратную с точки зрения ресурсов работу с DataFrame объектами, что позволяет быстро и качественно интегрировать данные объекты на Excel-листы.</p>
<p>Не стоит забывать, что данная библиотека также помогает преобразовывать CSV-данные в DataFrame массивы и обеспечивает дальнейшую корректную работу с ними.</p>
<p>Библиотека Openpyxl необходима для того, чтобы читать и редактировать файлы Excel-форматов, таких как «.xlsx», «.xlsm», «.xltx» и др.</p>
<p>Целью программы является создание результирующих документов в формате «.xlsx», причем по определенному шаблону, таким образом, для выполнения этих целей была выбрана именно библиотека Openpyxl, так как она наиболее точно подходила под выдвигаемые требования.</p>
<p>Данная библиотека отвечает за загрузку в память программы файла-шаблона и последующее его заполнение необходимыми данными, чтобы на выходе получить заполненный паспорт для каждого образца в соответствии с требованиями.</p>
<p>Библиотека os включает в себя множество функций для работы с операционной системой, причем их поведение, как правило, не зависит от ОС, что позволяет сделать программу универсальной и переносимой. В данной программе библиотека os отвечает за работу с директориями, а конкретно за удаление при необходимости временных файлов, в которых хранятся неупорядоченные данные по каждому конкретному образцу.</p>
<p>Библиотека DateTime представляет собой классы для обработки времени<br />
и даты различными способами. Нас в данной библиотеке интересует именно дата, а точнее получение актуальной даты для занесения ее в определенную ячейку результирующего документа.</p>
<p>После инициализации главной функции и подключения необходимых библиотек, пользователю предлагается в консоли ввести имя «.csv» файла, который он получил в результате работы прибора для секвенирования. Важно заметить, что для обеспечения корректности работы программы имя файла вводится без расширения и сам файл должен находится в корневой папке с исполняемым «.py» файлом.</p>
<p>Далее в переменной on происходит преобразование введенного пользователем имени файла в необходимы для дальнейшей работы формат, а после этого происходит открытие файла и запись данных из него в переменную df. После этого мы имеем DataFrame массив, хранимый в переменной df, с которым уже<br />
и будет производится дальнейшая обработка.</p>
<p>В переменной filename инициализируется имя первого временного файла,<br />
в который будут занесены данные о первом образце. Далее инициализируется список filenames, который включает в себя информацию обо всех временных файлах, сгенерированных программой. В данный список заносится имя первого файла, хранимое в переменной filename.</p>
<p>В переменной last хранится индекс последней строки, или, другими словами, строковая размерность массива df. Далее инициализируется переменная listzn, в которую заносится пустой объект DataFrame. Данный объект будет использоваться для накопления данных о каждом очередном образце, с целью последующего занесения этих данных в соответствующий временный файл. Вначале в listzn заносится значение первой строки из переменной df. Этот шаг необходим для корректной работы цикла в дальнейшем. Далее создается переменная t, которая также необходима для корректной работы цикла.</p>
<p>После этого в цикле, который поочередно отрабатывает все строки массива df, происходит сортировка данных по образцам и сохранение их во временных файлах. Алгоритм сортировки в цикле построен по принципу сравнения с пре­дыдущим (именно поэтому были манипуляции с listzn и создание переменной t). Если очередная строка массива df равна предыдущей, то эта строка заносится в массив listzn в строку с номером t, где t является счетчиком. Если же очередная строка не совпадает с предыдущей, это означает, что получена вся информация по данному образцу. При этом массив listzn сохраняется во временный файл с необходимым именем, после чего массив обнуляется и на место его первой строки заносится не совпавшая строка, таким образом, происходит формирование массива, содержащего информацию о следующем образце. Также происходит присвоение нового значения переменной filename, так как это уже будет новый временный файл с данными о следующем образце. Новое значение filename добавляется в список filenames. После завершения работы цикла записывается последний временный файл с соответствующим именем.</p>
<p>Далее происходит преобразование каждого временного файла с помощью функции sort, в которую поочередно передаются все файлы, которые сгенерировала программа. Имена данных файлов располагаются в списке filenames.</p>
<p>В конце пользователю предлагается выбрать, необходимо ли удалять временные файлы. В случае, если нет необходимости, программа завершает работу, а ином случае, программа удаляет все временные файлы из списка filenames с помощью функции remove из библиотеки os (рисунок 10).</p>
<p><img width="829" height="807" class="wp-image-5155" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2551.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2551.png 829w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2551-300x292.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2551-768x748.png 768w" sizes="(max-width: 829px) 100vw, 829px" alt="word image 2551 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."> <img width="828" height="355" class="wp-image-5156" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2552.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2552.png 828w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2552-300x129.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2552-768x329.png 768w" sizes="(max-width: 828px) 100vw, 828px" alt="word image 2552 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 10 </strong>– Блок-схема функций завершающих генерацию генетического<br />
паспорта программой Just Append Cows</p>
<h5><em>4.2.2.2. Блок-схемы программы Covers для генерации цветной 2D-диаграммы («ковра»)</em></h5>
<p>На рисунках 11–13 представлена полная блок-схема программы, которая реализует анализ данных для генерации 2D-диаграммы («ковра») для экспериментальных групп животных. Данная блок схема включает в себя описание вспомогательных и главной функций.</p>
<p><img width="786" height="387" class="wp-image-5157" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2553.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2553.png 786w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2553-300x148.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2553-768x378.png 768w" sizes="(max-width: 786px) 100vw, 786px" alt="word image 2553 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 11 </strong>– Блок-схема реализации вспомогательной функции vspom1</p>
<p>Рассмотрим вспомогательную функцию vspom. Данная функция предназначения для анализа пары аллелей определенного признака, присвоения им условного коэффициента (веса) и сохранения информации о результате в список. При вызове функции в нее передается информация о номере строки, в которой располагается необходимый для анализа признак. Номер строки обозначен в функции vspom в качестве переменной idnum. Также в функцию передаются сочетания аллелей для анализа, где p1 – это оптимальное сочетание, p2 – серединное сочетание, p3 – негативное сочетание. Стоит отметить, что данная функция предназначена только для работы со вторым блоком «Генетически наследуемые заболевания», данные о котором после сортировки попадают<br />
в DataFrame массив df2.</p>
<p>После инициализации функции и передачи в нее необходимых атрибутов, начинается ее работа. В начале в переменную prizn заносится значение сочетания аллелей Allele1 и Allele2 для рассматриваемого признака. Далее прописывается несколько условий. Если сочетание аллелей равно переменной p1, т. е. совпадает с оптимальным сочетанием, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен единице.</p>
<p>Если сочетание аллелей не равно значению переменной p1, то проверяется, равен ли оно значению p2, т. е. совпадает ли с серединным сочетанием. Если обнаружено равенство, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен 0,5.</p>
<p>Если сочетание аллелей не равно значению переменной p1 и переменной p2, то проверяется, равен ли оно значению p3, т. е. совпадает ли с негативным сочетанием. Если обнаружено равенство, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен нулю.</p>
<p>В противном случае, если сочетание аллелей не равно ни одному из сочетаний, переменной bo присваивается значение «-1000», что означает, что для данного образца (или для всего стада) отсутствует условие для поиска конкретной болезни по данному признаку.</p>
<p>После анализа сочетания аллелей переменная bo заносится в список check_list1, в котором сохраняются все значения переменных bo для очередного образца. Список check_list1 используется для хранения аналитических коэффициентов для второго блока «Генетически наследуемые заболевания».</p>
<p>Рассмотрим вспомогательную функцию vspom2 (рисунок 12). Данная функция предназначена для анализа пары аллелей определенного признака, присвоения им условного коэффициента (веса) и сохранения информации о результате в список. При вызове функции в нее передается информация о номере строки, в которой располагается необходимый для анализа признак. Номер строки обозначен в функции vspom2 в качестве переменной idnum. Также<br />
в функцию передаются сочетания аллелей для анализа, где p1 – это оптимальное сочетание, p2 – серединное сочетание, p3 – негативное сочетание. Стоит отметить, что данная функция предназначена только для работы с третьим блоком «Экономически значимые признаки», данные о котором после сортировки попадают в DataFrame массив df3.</p>
<p><img width="792" height="377" class="wp-image-5158" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2554.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2554.png 792w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2554-300x143.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2554-768x366.png 768w" sizes="(max-width: 792px) 100vw, 792px" alt="word image 2554 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 12 </strong>– Блок-схема реализации вспомогательной функции vspom2</p>
<p>После инициализации функции и передачи в нее необходимых атрибутов начинается ее работа. В начале в переменную prizn заносится значение сочетание аллелей Allele1 и Allele2 для рассматриваемого признака. Далее прописывается несколько условий. Если сочетание аллелей равно переменной p1, т. е. совпадает с оптимальным сочетанием, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен единице.</p>
<p>Если сочетание аллелей не равно значению переменной p1, то проверяется, равен ли оно значению p2, т. е. совпадает ли с серединным сочетанием. Если обнаружено равенство, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен 0,5.</p>
<p>Если сочетание аллелей не равно значению переменной p1 и переменной p2, то проверяется, равен ли оно значению p3, т. е. совпадает ли с негативным сочетанием. Если обнаружено равенство, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен нулю.</p>
<p>В противном случае, если сочетание аллелей не равно ни одному из сочетаний, переменной bo присваивается значение «-1000», что означает, что для данного образца (или для всего стада) отсутствует условие для поиска конкретной болезни по данному признаку.</p>
<p>После анализа сочетания аллелей переменная bo заносится в список check_list2, в котором сохраняются все значения переменных bo для очередного образца. Список check_list2 используется для хранения аналитических коэффициентов для второго блока «Экономически значимые признаки».</p>
<p>Рассмотрим вспомогательную функцию vspom3 (рисунок 13). Данная функция предназначения для анализа пары аллелей определенного признака, присвоения им условного коэффициента (веса) и сохранения информации о результате в список. При вызове функции, в нее передается информация о номере строки, в которой располагается необходимый для анализа признак. Номер строки обозначен в функции vspom3 в качестве переменной idnum. Также<br />
в функцию передаются сочетания аллелей для анализа, где p1 – это оптимальное сочетание, p2 и p3 – серединное сочетание. Стоит отметить, что данная функция предназначена только для работы с третьим блоком «Экономически значимые признаки», данные о котором после сортировки попадают в DataFrame массив df3.</p>
<p><img width="789" height="388" class="wp-image-5159" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2555.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2555.png 789w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2555-300x148.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2555-768x378.png 768w" sizes="(max-width: 789px) 100vw, 789px" alt="word image 2555 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 13 </strong>– Блок-схема реализации функции vspom3</p>
<p>После инициализации функции и передачи в нее необходимых атрибутов начинается ее работа. В начале в переменную prizn заносится значение сочетание аллелей Allele1 и Allele2 для рассматриваемого признака. Далее прописывается несколько условий. Если сочетание аллелей равно переменной p1, т. е. совпадает с оптимальным сочетанием, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен единице.</p>
<p>Если сочетание аллелей не равно значению переменной p1, то проверяется, равен ли оно значению p2 или p3, т. е. совпадает ли с серединным сочетанием. Если обнаружено равенство, то переменной bo присваивается условный коэффициент оптимальности, который в данном случае равен 0,5.</p>
<p>В противном случае, если сочетание аллелей не равно ни одному из сочетаний, переменной bo присваивается значение «-1000», что означает, что для данного образца (или для всего стада) сочетания для анализа по данному признаку.</p>
<p>После анализа сочетания аллелей переменная bo заносится в список check_list2, в котором сохраняются все значения переменных bo для очередного образца. Список check_list2 используется для хранения аналитических коэффициентов для третьего блока «Экономически значимые признаки».</p>
<p>Рассмотрим функцию bol (рисунок 14). Функция предназначена для проведения анализа данных по каждому образцу и занесения полученной информации в массивы dff1 и dff2 для последующей генерации ковра для всего стада.</p>
<p><img width="829" height="346" class="wp-image-5160" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2556.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2556.png 829w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2556-300x125.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2556-768x321.png 768w" sizes="(max-width: 829px) 100vw, 829px" alt="word image 2556 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 14 </strong>– Блок-схема реализации завершения функции bol</p>
<p>Функция получает на вход массивы df2 и df3, в которых содержатся данные о признаках, отсортированные в соответствии с установленным шаблоном, также в функцию передаются массивы dff1 и dff2, которые содержат в себе результаты аналитики в виде коэффициентов для всего стада, причем массив dff1 содержит информацию об анализе блока 53SNP, а dff2 – информацию об анализе блока 12SNP.</p>
<p>Стоит заметить, что признаки находятся в определенной последовательности, так как массив df2 и df3 уже отсортирован в соответствии с установленным шаблоном, поэтому допустимо использовать индексы строк, так как они привязаны к признакам, т. е. вне зависимости от исходного массива, содержащего информацию о стаде, в каждой строке всегда будет один и тот же заранее известный признак.</p>
<p>После инициализации функции и передачи в нее необходимых атрибутов она начинает свою работу. Вначале происходит очистка списка check_list1,<br />
в который будет сохранятся результат анализа для каждой особи. Далее идет блок с вызовами функций vspom и vspom1, которые отвечают за обработку данных второго блока 53SNP. В каждую функцию vspom или vspom1 передается индекс строки, в которой находятся данные о признаке, анализ которого проводится и сочетания аллелей согласно интерпретатору. Всего происходит 49 вызовов функции vspom и четыре вызова функции vspom1, в итоге все 53 признака в блоке анализируются. После анализа список check_list1 добавляется<br />
в итоговый массив dff1 в строку под индексом t, где t – это номер прохода (очередного образца).</p>
<p>Далее происходит очистка списка check_list2, в который будет сохранятся результат анализа для каждой особи. Далее идет блок с вызовами функций vspom2 и vspom3, которые отвечают за обработку данных второго блока 12SNP. В каждую функцию vspom2 или vspom3 передается индекс строки, в которой находятся данные о признаке, анализ которого проводится и сочетания аллелей согласно интерпретатору. Всего происходит три вызова функции vspom2<br />
и девять вызовов функции vspom3, в итоге все 12 признаков в блоке анализируются. После анализа список check_list2 добавляется в итоговый массив dff2<br />
в строку под индексом t, где t – это номер прохода (очередного образца).</p>
<p>После этого функция завершает свою работу.</p>
<p>Рассмотрим работу вспомогательной функции sort (рисунок 15), которая отвечает за сортировку данных каждого конкретного образца по блокам, при этом в каждом блоке происходит распределение по порядку, который необходим для занесения этих данных в результирующий документ.</p>
<p>Функция получает на вход идентификатор очередного образца (inpdata),<br />
а также DataFrame массивы dff1, dff2, dff3, которые содержат информацию<br />
о результатах анализа для всего стада и переменную t, содержащую информацию о номере итерации, происходящей в главной функции. Далее происходит инициализация переменных shabl2, shabl3, в которые заносятся пути расположения шаблонов, согласно которым происходит сортировка данных. Далее совершается чтение временного файла, в котором находятся данные для очередного образца, представляющие собой массив из 265 строк в произвольном порядке, так как прибор для секвенирования заранее не упорядочивает их. Данные из временного файла заносятся в переменную dfdata. После этого происходит чтение файлов шаблонов dfshabl2, dfshabl3 для второго и третьего блоков соответственно.</p>
<p>Далее происходит служебное дублирование переменных dff1, dff2 и t, необходимое для дальнейшей корректной работы программы на этапе вызова функции.</p>
<p>После получения всех необходимых данных, в переменные b, d заносятся размеры блоков (53 и 12 строк соответственно), а в переменную b заносится размер всего массива данных (265 строк). После этого можно приступать<br />
к циклам сортировки.</p>
<p>Оба алгоритма сортировки работают аналогичным способом, поэтому будет описан принцип работы алгоритма для сортировки и заполнения массива второго шаблона, в остальных циклах меняются лишь некоторые переменные.</p>
<p>Внешний цикл алгоритма отвечает за последовательный построчный перебор DataFrame-массива первого шаблона. Перебирается i от 0 до 264, при этом на каждом проходе переменной ind присваивается значение, соответствующее i-ому наименованию маркера первого шаблона.</p>
<p><img width="815" height="682" class="wp-image-5161" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2557.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2557.png 815w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2557-300x251.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2557-768x643.png 768w" sizes="(max-width: 815px) 100vw, 815px" alt="word image 2557 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."> <img width="816" height="443" class="wp-image-5162" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2558.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2558.png 816w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2558-300x163.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2558-768x417.png 768w" sizes="(max-width: 816px) 100vw, 816px" alt="word image 2558 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 15 </strong>– Блок-схема реализации функции sort</p>
<p>Внутри этого цикла происходит построчный перебор исходного массива данных, притом при каждом проходе переменной prov присваивается значение, соответствующее j-ому наименованию маркера исходного набора данных. Далее проверяется, равна ли переменная ind переменной prov, и если да, то в массив шаблона с очередным наименованием маркера вносятся значения соответствующего маркера из исходного массива данных. Цикл устроен таким образом, что на каждом очередном проходе для строки шаблона подыскивается соответствующая строка в исходном массиве, таким образом, на выходе получается<br />
DF-массив dfshabl2, который уже упорядочен, так как за основу его взят массив из шаблона, и заполнен соответствующими данными из исходного массива.</p>
<p>Для второго цикла меняются лишь величина внешних проходов согласно размерности шаблонных массивов (d вместо c) и сам шаблонный массив (вместо dfshabl2 подставляется dfshabl3).</p>
<p>Далее происходит вызов функции bol, суть и цели которой описаны выше,<br />
в которую передаются полученные заполненные массивы dfshabl2, dfshabl3, результирующие массивы dff1 и dff2 и переменную t, содержащую номер итерации.</p>
<p>В массив dff3 заносится имя очередного образца, данный массив далее будет необходим при переносе данных ковра на Excel-лист.</p>
<p>Далее рассмотрим главную функцию программы. Блок-схема этой функции представлена на рисунках 16а–16в. При запуске программы происходит инициализация данной функции, другими словами, данная функция срабатывает при запуске программы, и в ней уже происходит вызов вспомогательных функций, рассмотренных выше. В программе, отвечающей за генерацию паспортов, используются следующие библиотеки: Pandas, Openpyxl, os, Datetame.</p>
<p>Pandas – программная библиотека на языке Python для обработки и анализа данных. Работа Pandas с данными строится поверх библиотеки NumPy, являющейся инструментом более низкого уровня. Предоставляет специальные структуры данных, такие как DataFrame, и операции для манипулирования ими. Основной областью применения библиотеки является обеспечение работы в рамках языка программирования Python в целях сбора (очистки), анализа и моделирования данных, без необходимости перехода на более ориентированные для данных целей языки, такие, как R и Octave.</p>
<p>В данной библиотеке одной из ключевых особенностей является использование объектов DataFrame, необходимых для манипулирования индексированными массивами двумерных данных. В концепции рассматриваемой программы объекты DataFrame играют ведущую роль, соответственно, по этой причине использование библиотеки Pandas является необходимым.</p>
<p>Также данная библиотека позволяет реализовать удобную и малозатратную с точки зрения ресурсов работу с DataFrame-объектами, что позволяет быстро и качественно интегрировать данные объекты на Excel-листы.</p>
<p>Не стоит забывать, что данная библиотека также помогает преобразовывать CSV-данные в DataFrame-массивы и обеспечивает дальнейшую корректную работу с ними.</p>
<p>Библиотека Openpyxl необходима для того, чтобы читать и редактировать файлы Excel-форматов, таких как «.xlsx», «.xlsm», «.xltx» и др.</p>
<p>Целью программы является создание результирующих документов в формате «.xlsx», причем по определенному шаблону, таким образом, для выполнения этих целей была выбрана именно библиотека Openpyxl, так как она наиболее точно подходила под выдвигаемые требования.</p>
<p>Данная библиотека отвечает за загрузку в память программы файла-шаблона и последующее заполнение шаблона необходимыми данными, чтобы на выходе получить заполненный паспорт для каждого образца в соответствии с требованиями.</p>
<p>Библиотека os включает в себя множество функций для работы с операционной системой, причем их поведение, как правило, не зависит от ОС, что позволяет сделать программу универсальной и переносимой. В данной программе библиотека os отвечает за работу с директориями, а конкретно за удаление при необходимости временных файлов, в которых хранятся неупорядоченные данные по каждому конкретному образцу.</p>
<p>После инициализации главной функции и подключения необходимых библиотек, создаются три пустых DataFrame-массива, которые впоследствии будут нести в себе информацию об анализе для стада в целом и использоваться для построения ковра.</p>
<p>После этого пользователю предлагается в консоли ввести имя «.csv» файла, который он получил в результате работы прибора для секвенирования. Важно заметить, что для обеспечения корректности работы программы имя файла вводится без расширения и сам файл должен находится в корневой папке с исполняемым «.py» файлом.</p>
<p>Далее в переменной on происходит преобразование введенного пользователем имени файла в необходимы для дальнейшей работы формат, а после этого происходит открытие файла и запись данных из него в переменную df.<br />
Вследствии чего мы имеем DataFrame массив, хранимый в переменной df, с которым уже и будет производиться дальнейшая обработка.</p>
<p>В переменной filename инициализируется имя первого временного файла,<br />
в который будут занесены данные о первом образце. Далее инициализируется список filenames, который включает в себя информацию обо всех временных файлах, сгенерированных программой. В данный список заносится имя первого файла, хранимое в переменной filename.</p>
<p>В переменной last хранится индекс последней строки, или, другими словами, строковая размерность массива df. Далее инициализируется переменная listzn, в которую заносится пустой объект DataFrame. Данный объект будет использоваться для накопления данных о каждом очередном образце, с целью последующего занесения этих данных в соответствующий временный файл. Вначале в listzn заносится значение первой строки из переменной df. Этот шаг необходим для корректной работы цикла в дальнейшем. Далее создается переменная t, которая также необходима для корректной работы цикла.</p>
<p>После этого в цикле, который поочередно отрабатывает все строки массива df, происходит сортировка данных по образцам и сохранение их во временных файлах. Алгоритм сортировки в цикле построен по принципу сравнения<br />
с предыдущим (именно поэтому были манипуляции с listzn и создание переменной t). Если очередная строка массива df равна предыдущей, то эта строка заносится в массив listzn в строку с номером t_1, где t_1 является счетчиком. Если же очередная строка не совпадает с предыдущей, это означает, что получена вся информация по данному образцу. При этом массив listzn сохраняется во временный файл с необходимым именем, после чего массив обнуляется и на место его первой строки заносится не совпавшая строка, таким образом, происходит формирование массива, содержащего информацию о следующем образце. Также происходит присвоение нового значения переменной filename, так как это уже будет новый временный файл с данными о следующем образце. Новое значение filename добавляется в список filenames. После завершения работы цикла записывается последний временный файл с соответствующим именем.</p>
<p>Далее происходит преобразование каждого временного файла с помощью функции sort, в которую поочередно передаются все файлы, которые сгенерировала программа. Имена данных файлов располагаются в списке filenames.</p>
<p>После разбиения исходного массива df на временные файлы можно приступать к анализу данных. Для обеспечения вывода информации о прогрессе работы программы объявляются переменные prog и rg. В качестве счетчика объявляется переменная nmb.</p>
<p>Далее следует цикл, который обрабатывает поштучно каждый временный файл, вызывает функцию, анализирующую полученную информацию из этого файла, и графически выводит прогресс выполнения.</p>
<p>Работа алгоритма заключается в том, что он извлекает имя очередного временного файла, передает это имя, а также массивы df1, df2, df3 и значение счетчика в функцию sort, принцип работы которой описан выше. После этого<br />
к счетчику прибавляется единица, выводится в консоль состояние прогресса анализа и удаляется очередной, уже отработанный, временный файл.</p>
<p>Следующим шагом работы программы является открытие шаблона ковра посредством функции openpyxl и указание листа, на который будут заносиьтся данные.</p>
<p>После выполнения цикла анализа в программе имеется три итоговых массива df1, df2 и df3, которые далее следует перенести на лист результирующего документа.</p>
<p><img width="1035" height="674" class="wp-image-5163" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2559.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2559.png 1035w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2559-300x195.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2559-1024x667.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2559-768x500.png 768w" sizes="(max-width: 1035px) 100vw, 1035px" alt="word image 2559 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."> <img width="1036" height="638" class="wp-image-5164" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2560.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2560.png 1036w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2560-300x185.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2560-1024x631.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2560-768x473.png 768w" sizes="(max-width: 1036px) 100vw, 1036px" alt="word image 2560 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 16а </strong>– Блок-схема реализации главной функции программы Covers<br />
для генерации цветной 2D-диаграммы («ковра»)</p>
<p><img width="1035" height="608" class="wp-image-5165" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2561.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2561.png 1035w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2561-300x176.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2561-1024x602.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2561-768x451.png 768w" sizes="(max-width: 1035px) 100vw, 1035px" alt="word image 2561 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."> <img width="1035" height="832" class="wp-image-5166" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2562.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2562.png 1035w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2562-300x241.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2562-1024x823.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2562-768x617.png 768w" sizes="(max-width: 1035px) 100vw, 1035px" alt="word image 2562 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 16б (продолжение) </strong>– Блок-схема реализации главной функции<br />
программы Covers для генерации цветной 2D-диаграммы («ковра»)</p>
<p><img width="1036" height="859" class="wp-image-5167" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2563.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2563.png 1036w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2563-300x249.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2563-1024x849.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2563-768x637.png 768w" sizes="(max-width: 1036px) 100vw, 1036px" alt="word image 2563 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 16в (продолжение) </strong>– Блок-схема реализации главной функции<br />
программы Covers для генерации цветной 2D-диаграммы («ковра»)</p>
<p>Для этого используются три идентичных цикла, в которых изменяются лишь имена и значения некоторых переменных, опишем первый цикл.</p>
<p>Для начала переменной d1 присваиваются значения df1-масиива с указанием того, что эти значения будут занесены на лист. Далее из переменной d1 построчно извлекается информация, затем строки делятся на ячейки (по четыре ячейки в каждой строке) и значения этих ячеек заносятся на Excel-лист в строку, начиная со стартовой (в данном случае с третьей) и в столбец, начиная со стартового (в данном случае третий).</p>
<p>В остальных циклах меняется соответственно исходные массивы и переменные, в которые они загружаются для занесения (d2 для df2, d3 для df3),<br />
а также стартовая строка для массива d2.</p>
<p>Далее в результирующем документе необходимо выделить строки с соответствующим значением требуемыми цветами согласно техническому заданию. Для этого в библиотеке openpyxl предусмотрены модули, позволяющие внутри программы указать стили и условия для условного форматирования.</p>
<p>Для этого необходимо создать стили заливки и текста, которые будут далее применяться при условном форматировании, за что и отвечают два блока создания стилей для заливки (четыре функции PatternFill) и цвета текста (четыре функции Font), в которых указываются необходимые атрибуты.</p>
<p>Далее указывается область, к которой будет применяться условное форматирование, причем область может быть с любым размером строк согласно исходному количеству образов, что сделано для более гибкой работы программы с разными размерами стада.</p>
<p>После этого применяется условное форматирование для указанной области согласно указанных стилей.</p>
<p>Для ячеек, где сочетание аллелей положительно, т. е. их значение равно единице, используется зеленый цвет заливки (код цвета 32F000).</p>
<p>Для ячеек, где сочетание аллелей отрицательно, т. е. их значение равно нулю, используется красный цвет заливки (код цвета FF0000).</p>
<p>Для ячеек, где сочетание аллелей нейтрально, т. е. их значение равно 0,5, используется желтый цвет заливки (код цвета FFEE11).</p>
<p>Для ячеек, где сочетание аллелей не определенно, используется серый цвет заливки (код цвета 787878).</p>
<p>После выполнения условного форматирования результирующий документ сохраняется, и программа завершает свою работу.</p>
<h4><strong><em>4.2.3 Обеспечение диалога программ Just Append Cows и Covers с пользователем</em></strong></h4>
<h5><em>4.2.3.1 Обеспечение диалога программы Just Append Cows (генерация генетических паспортов)</em></h5>
<p>Для обеспечения диалога с пользователем в программе предусмотрен вывод графической информации. Для начала программа запрашивает у пользователя имя файла, в котором содержится исходные результаты секвенирования для стада. Имя файла должно вводиться без расширения. В данном случае исходным будет файл с именем «group1.csv» (также предусмотрен вариант программы для работы с «.xlsx» файлами). Пример запроса имени файла представлен на рисунке 17.</p>
<p><img width="250" height="60" class="wp-image-5168" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2564.png" alt="word image 2564 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 17 </strong>– Пример запроса имени файла</p>
<p>Далее программа с помощью консольного интерфейса будет уведомлять пользователя о состоянии выполнения обработки данных и создания временных файлов для каждого конкретного образца (рисунок 18).</p>
<p><img width="372" height="231" class="wp-image-5169" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2565.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2565.png 372w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2565-300x186.png 300w" sizes="(max-width: 372px) 100vw, 372px" alt="word image 2565 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 18 </strong>– Пример уведомления пользователя о состоянии выполнения<br />
обработки данных и создания временных файлов для каждого<br />
конкретного образца</p>
<p>После разбиения исходного файла по образцам и создания временных файлов программа приступает к сортировке данных и созданию паспортов. Так как для заполнения паспорта необходимы помимо результатов секвенирования такие данные, как порода, возраст, половозрастная группа и идентификационный номер, то пользователю будет предложено ввести требуемые данные последовательно для каждого указанного образца (рисунок 19).</p>
<p><img width="256" height="194" class="wp-image-5170" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2566.png" alt="word image 2566 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 19 </strong>– Окно заполнения сопутствующих данных по животному</p>
<p>После генерации результирующих документов по каждому образцу пользователю будет предложено удалить временные файлы. Допустимые варианты ответа: Да, Нет (без учета регистра) (рисунок 20).</p>
<p><img width="276" height="45" class="wp-image-5171" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2567.png" alt="word image 2567 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 20 </strong>– Диалоговое окно выбора решения о удалении<br />
или сохранении временных файлов</p>
<p>В конце работы программа уведомить пользователя о своем состоянии,<br />
а также о месте расположении результирующих документов (рисунок 21).</p>
<p><img width="346" height="25" class="wp-image-5172" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2568.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2568.png 346w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2568-300x22.png 300w" sizes="(max-width: 346px) 100vw, 346px" alt="word image 2568 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 21 </strong>– Финальное диалоговое окно программы Just Append Cows</p>
<p><em>4.2.3.2 Обеспечение диалога программы Covers («Ковра»)<br />
(генерация цветной 2D-диаграммы)</em></p>
<p>Для обеспечения диалога с пользователем в программе предусмотрен вывод графической информации. Для начала программа запрашивает у пользователя имя файла, в котором содержится исходные результаты секвенирования для стада. Имя файла должно вводится без расширения. В данном случае исходным будет файл с именем group1.csv (также предусмотрен вариант программы для работы с .xlsx файлами). Пример запроса имени файла представлен на рисунке 22.</p>
<p><img width="250" height="60" class="wp-image-5173" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2569.png" alt="word image 2569 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 22 </strong>– Начальное диалоговое окно программы Covers</p>
<p>Далее программа с помощью консольного интерфейса будет уведомлять пользователя о состоянии выполнения обработки данных и создания временных файлов для каждого конкретного образца (рисунок 23).</p>
<p><img width="372" height="231" class="wp-image-5174" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2570.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2570.png 372w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2570-300x186.png 300w" sizes="(max-width: 372px) 100vw, 372px" alt="word image 2570 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 23 </strong>– Диалоговое окно уведомления о состоянии выполнения<br />
обработки данных и создания временных файлов для каждого<br />
конкретного образца</p>
<p>После этого программа приступает к анализу полученных данных и занесению его результатов в конечный массив. Для удобства использования также предусмотрено уведомление пользователя о ходе выполнения анализа (рисунок 24).</p>
<p><img width="347" height="232" class="wp-image-5175" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2571.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2571.png 347w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2571-300x201.png 300w" sizes="(max-width: 347px) 100vw, 347px" alt="word image 2571 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 24 </strong>– Диалоговое окно уведомления о ходе выполнения анализа</p>
<p>После заполнения результирующих массивов, происходит запись их в результирующий файл, и применяется к нему условное форматирование. После выполнения этих действий программа уведомляет пользователя о завершении своей работы, а также указывает расположение конечного файла (рисунок 25).</p>
<p><img width="494" height="30" class="wp-image-5176" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2572.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2572.png 494w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2572-300x18.png 300w" sizes="(max-width: 494px) 100vw, 494px" alt="word image 2572 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 25 </strong>– Диалоговое окно уведомления о завершении своей работы,<br />
а также указывает расположение конечного файла</p>
<h5><a id="post-5131-__DdeLink__8158_51898843"></a><em>4.2.3.3 Описание исходного Excel-файла для программы Covers</em></h5>
<p>С целью унификации результирующих документов было принято решение разработать общий шаблон для генерации 2D-диаграмм («генетического ковра»), в котором бы содержалась информация о результатах анализа всего стада, а также некоторая справочная информация для обеспечения более удобной дальнейшей работы с документом.</p>
<p>В итоге был реализован шаблонный документ в формате Excel-книги, который включает в себя два листа, на одном из которых отображаются визуализированные цветами данные, а на втором содержится таблица с интерпретацией и кратким описанием каждого признака.</p>
<p>Информация на первом листе представлена в виде таблицы. Все признаки были сгруппированы по блокам и упорядочены. В шапке таблицы присутствуют подписи блоков. Для каждого признака выделен свой столбец, для удобства реализованы ссылки на лист со справочной информацией, т. е. при клике на любой из признаков, пользователю будет предоставлена справочная информация по конкретному признаку, которая включает в себя его порядковый номер, идентификатор SNP, краткое описание, а также сочетания пар аллелей и их расшифровка (является ли сочетание позитивным, нейтральным или негативным).</p>
<p>Каждому образцу соответствует отдельная строка, в которой указывается его номер, а также результаты его анализа.</p>
<p>С целью более удобного и наглядного представления данных к таблице внутри программы применяется условное форматирование, согласно которому ячейки с позитивным прогностическим сочетанием аллелей выделяются зеленым цветом, ячейки с нейтральным прогностическим сочетанием аллелей – желтым цветом, ячейки с негативным прогностическим сочетанием аллелей – красным цветом, ячейки с неопределенным прогностическим сочетанием аллелей – серым цветом.</p>
<p>Пример ковра для 15 образцов можно увидеть на рисунке ниже (рисунок 26).</p>
<p><img width="1171" height="330" class="wp-image-5177" src="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2573.png" srcset="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2573.png 1171w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2573-300x85.png 300w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2573-1024x289.png 1024w, https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/word-image-2573-768x216.png 768w" sizes="(max-width: 1171px) 100vw, 1171px" alt="word image 2573 Анализ генетических характеристик высокопродуктивного молочного поголовья методом таргетного секвенирования и разработка программного продукта с целью оптимизации и индивидуализации подбора семени при искусственном оплодотворении."></p>
<p><strong>Рисунок 26 </strong>– Пример 2D-диаграммы («ковра») для 15 образцов (животных)</p>
<h2><strong>ВЫВОДЫ</strong></h2>
<p>1. Методом таргетного секвенирования на приборе MiSeq проведено исследование более 300 образцов (цельная кровь и спермодозы) биоптантов КРС с целью определения конкретных значений SNP из списка входящих в коммерчески доступную панель TruSeq Bovine Parentage Sequencing Panel Illumina (США).</p>
<p>2. Создана и проверена на материале первичных экспериментальных данных секвенирования работоспособная программа (программный продукт)<br />
Just Append Cows – для генерации генетического паспорта животного.</p>
<p>3. Создана и проверена на материале первичных экспериментальных данных секвенирования работоспособная программа (программный продукт) <a id="post-5131-__DdeLink__11665_51898843"></a>Covers («Ковер») – для генерации цветной 2D-диаграммы, описывающей распределение гомозигот и гетерозигот в аллельном спектре произвольной экспериментальной группы животных. Данная программа может быть использована для сопоставления данных представленности аллелей у родительской пары<br />
и подбора оптимального донора для искуственного осеменения.</p>
<p>4. С применением программы Just Append Cows проведена паспортизация экспериментальныхгруппы животных общей численностью более 300.</p>
<p>5. На полученном оригинальном экспериментальном материале продемонстрирована применимость программы Covers для генерации цветной 2D-диа­граммы и контроля аллельного спектра групп, а также оптимизации сравнительного подбора спермодоз быка определенного генотипа для конкретной коровы при искусственном осеменении.</p>
<h2><strong>СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ</strong></h2>
<ol>
<li>Алтухов, Ю. П. Полиморфизм ДНК в популяционной генетике /<br />
Ю. П. Алтухов, Е. А. Салменкова // Генетика. – 2002. – Т. 38. – С. 1173–1195.</li>
<li>Бек, К. Экстремальное программирование: разработка через тестирование / К. Бек. – СПб. : Питер, 2003. – 224 с.</li>
<li>Вандер Плас, Дж. Python для сложных задач. Наука о данных и машинное обучение / Дж. Вандер Плас. – СПб. : Питер, 2018. – 576 с.</li>
<li>Веллер, Дж. И. Геномная селекция животных / Дж. И. Веллер. – СПб. : Изд. «Проспект Науки», 2018. – 208 с.</li>
<li>ГОСТ 19.701-90 ЕСПД (ISO 5807:1985). Схемы алгоритмов программ, данных и систем. – 1992.</li>
<li>Дасгупта, С. Алгоритмы / С. Дасгупта, Х. Пападимитриу, У. Вазирани; пер. с англ.; под ред. А. Шеня. – М. : МЦНМО, 2014. – 320 с.</li>
<li>Клименко, И. С. Теория систем и системный анализ / И. С. Клименко. – М. : Российский новый университет, 2014. – 264 c.</li>
<li>Кофиади, И. А. Методы детекции однонуклеотидных полиморфизмов: аллель-специфичная ПЦР и гибридизация с олигонуклеотидной пробой /<br />
И. А. Кофиади, Д. В. Ребриков // Генетика. – 2006. – Т. 42. – С. 22–32.</li>
<li>Мартин, Р. Чистый код. Создание, анализ и рефакторинг / Р. Мартин; пер. с англ. Е. А. Матвеев. – СПб. : Питер, 2019.</li>
<li>Мировые тенденции в селекции молочного скота / К. И. Лукъянов, В. А. Солошенко, И. И. Клименюк, Н. С. Юдин // Генетика и разведение животных. – 2015. – Т. 3. – С. 63–69.</li>
<li>Мюллер, А. Введение в машинное обучение с помощью Python. Руководство для специалистов по работе с данными / А. Мюллер, С. Гвид; пер.<br />
с англ. – СПб. : ООО «Альфа-книга», 2017.</li>
<li>Попов, В. П. Теория и анализ систем / В. П. Попов, И. В. Крайнюченко. – Пятигорск : ПГГТУ, 2012. – 236 с.</li>
<li>Приемы объектно-ориентированного программирования: паттерны проектирования / Э. Гамма, Р. Хелм, Р. Джонсон, Дж. Влиссидес; пер. с англ.<br />
А. Слинкин. – СПб. : Питер, 2001.</li>
<li>Рамальо, Л. Python. К вершинам мастерства / Л. Рамальо; пер. с англ. – М. : ДМК-Пресс, 2016.</li>
<li>Рейтц, К. Автостопом по Python / К. Рейтц, Т. Шлюссер; пер. с англ.<br />
Е. Зазноба. – СПб. : Питер, 2017.</li>
<li>Ресурс с документацией по Python [Электронный ресурс]. – URL : https://www.python.org/doc/.</li>
<li>Ресурс с документацией по библиотеке Openpyxl [Электронный ресурс]. – URL : https://openpyxl.readthedocs.io/en/stable/index.html.</li>
<li>Ресурс с документацией по библиотеке Pandas [Электронный ресурс]. – URL : https://pandas.pydata.org/pandas-docs/stable/.</li>
<li>Ресурс с информацией о работе с библиотекой DateTime [Электронный ресурс]. – URL : https://python-scripts.com/datetime-time-python.</li>
<li>Ресурс с информацией о работе с м<a id="post-5131-_GoBack1"></a>одулем os [Электронный ресурс]. – URL : https://pythonworld.ru/moduli/modul-os.html.</li>
<li>Рыбчин, В. Н. Основы генетической инженерии : учеб. пособие для вузов / В. Н. Рыбчин, В. С. Гайцхоки. – Минск : Выш. шк., 1986. – 186 с.</li>
<li>Саммерфилд, М. Программирование на Python 3. Подробное руководство / М. Саммерфилд; пер. с англ. – М. : Символ-Плюс, 2009. – 608 с.</li>
<li>Смарагдов, М. Г. Генетическое картирование локусов, ответственных за качественные показатели молока у крупного рогатого скота / М. Г. Смарагдов // Генетика. – 2006. – Т. 42. – С. 5–21.</li>
<li>Смарагдов, М. Г. Тотальная геномная селекция с помощью SNP как возможный ускоритель традиционной селекции / М. Г. Смарагдов // Генетика. – 2009. – Т. 45. – С. 725–728.</li>
<li>Статья о интеграции Python и Excel [Электронный ресурс]. – URL : <a href="https://habr.com/ru/company/otus/blog/331998/" target="_blank" rel="noopener">https://habr.com/ru/company/otus/blog/331998/</a>.</li>
<li>Фаулер, М. Архитектура корпоративных программных приложений / М. Фаулер; пер. с англ. – Вильямс, 2004.</li>
<li>Фаулер, М. Рефакторинг. Улучшение существующего кода / М. Фаулер, К. Бек; пер. с англ. – М. : Символ-Плюс, 2008.</li>
<li>Хейдт, М. Изучаем pandas. Высокопроизводительная обработка и анализ данных в Python / М. Хейдт, А. Груздев; пер. с англ. – М. : ДМК-Пресс, 2019.</li>
<li>Шевелуха, В. С. Сельскохозяйственная биотехнология и биоинженерия / В. С. Шевелуха. – Изд. 4, знач. перераб. и доп. – URSS, 2015. – 704 с.</li>
<li>Щелкунов, С. Н. Генетическая инженерия / С. Н. Щелкунов. – Новосибирск : Изд-во Новосиб. ун-та, 1997.</li>
<li>Эрнст, Л. К. Биологические проблемы животноводства в XXI веке / Л. К. Эрнст, Н. А. Зиновьева. – М. : РАСХН, 2008. – 508 с.</li>
<li>A genome-wide scan for signatures of selection in Azeri and Khuzestani buffalo breeds / M. Mokhber, M. Moradi-Shahrbarak, M. Sadeghi, H. Moradi-Shahrbarak, A. Stella, E. Nicolzzi, J. Rahmaninia, J. L. Williams // BMC Geno­mics. – 2018. – DOI 10.1186/s12864-018-4759-x.</li>
<li>Ammendrup, S. Legislative requirements for the identification and traceability of farm animals within the European Union / S. Ammendrup, A. E. Fussel // Revue Scientifique et Technique. – 2001. – Vol. 20. – P. 437–444.</li>
<li>Animal Passports and Identification / W. Buick // Defra Veterinary Jour­nal. – 2004. – Vol. 15. – P. 20–26.</li>
<li>Apaf-1 deficiency and neural tube closure defects are found in fog mice /<br />
N. Honarpour, S. L. Gilbert, B. T. Lahn, X. Wang, J. Herz // Proceeding of the National Academy of Sciences USA. – 2001. – Vol. 98. – P. 9683–9687.</li>
<li>Assessing genetic architecture and signatures of selection of dual purpose Gir cattle populations using genomic information / A. Maiorano, D. Lourenco,<br />
S. Tsuruta, A. Ospina, N. Stafuzza, Y. Masuda, A. Filho, J. Cyrillo, R. Curi, J. Silva // PLOS One. – 2018. – Vol. 13. – e0200694.</li>
<li>Bovine exome sequence analysis and targeted SNP genotyping of recessive fertility defects BH1, HH2, and HH3 reveal a putative causative mutation in SMC2 for HH3 / M. C. McClure, D. Bickhart, D. Null, P. Vanraden, L. Xu, G. Wiggans,<br />
G. Liu, S. Schroeder, J. Glasscock, J. Armstrong, J. B. Cole, C. P. Van Tassell,<br />
T. S. Sonstegard // PLOS One. – 2014. – Vol. 9. – P. e92769.</li>
<li>Brookes, A. J. The essence of SNPs / A. J. Brookes // Gene. – 1999. –<br />
Vol. 234. – P. 177–186.</li>
<li>Brookes, A. J. The essence of SNPs / A. J. Brookes // Gene. – 1999. – Vol. 234. – P. 177–186.</li>
<li>Commission of the European Communities 2000, Regulation (EC) No 1760/2000 of the European Parliament and of the Council of 17 July 2000: Establishing a system for the identification and registration of bovine animals and regarding the labelling of beef and beef products and repealing Council Regulation (EC) No. 820/97. Off J Eur Communities L 204:1-10.</li>
<li>Comparision of different imputation methods from low- to high-density panels using Chinese Holstein cattle / Z. Weng, Zh. Zhang, Q. Zhang, S. He, X. Ding // Animal. – 2013. – Vol. 7. – P. 729–735.</li>
<li>Comparison of the effectiveness of microsatellites and SNP panels for genetic identification, traceability and assessment of parentage in an inbred Angus herd / M. E. Fernández [et al.] // Genet and Mol Biol. – 2013. – Vol. 36(2). – P. 185–191.</li>
<li>Compilation of a panel of informative single nucleotide polymorphisms for bovine identification in the Northern Irish cattle population / A. R. Allen [et al.] // BMC Genet. – 2010. – Vol. 11. – P. 5.</li>
<li>Complex vertebral malformation in Holstein calves / J. S. Agerholm,<br />
C. Bendixen, O. Andersen, J. Arnbjerg // The Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. – 2001. – Vol. 13. – P. 283–289.</li>
<li>Council Regulation (EC) No 178/2002 of the European Parliament and of the Council of 28 January 2002: Laying down the general principles and requirements of food law, establishing the European Food Safety Authority and laying down procedures in matters of food safety. Off J Eur Communities L 31:1-24.</li>
<li>Cunningham, E. P. Biological Identification Systems: genetic markers /<br />
E. P. Cunningham, C. M. Meghen // Revue Scientifique et Technique. – 2001. –<br />
Vol. 20. – P. 491–499.</li>
<li>Current trends in microsatellite genotyping / E. Guichoux, L. Lagache,<br />
S. Wagner, P. Chaumell, P. Leger, O. Lepais, C. Lepoittevin, T. Malausa, E. Revardel, F. Salin, R. J. Petit // Molecular Ecology Resources. – 2011. – Vol. 11. – P. 591–611.</li>
<li>De Vries, A. Economic value of pregnancy in dairy cattle / A. De Vries // Joural of Dairy Science. – 2006. – Vol. 89. – P. 3876–3885.</li>
<li>Detection and characterization of SNPs useful for identity control and parentage testing in major European dairy breeds / F. A. O. Werner, G. Durstewitz,<br />
F. A. Habermann, G. Thaller, W. Kramer, S. Kollers, J. Buitkamp, M. Georges,<br />
G. Brem, J. Mosner, R. Fries // Animal Genetics. – 2004. – Vol. 35. – P. 44–49.</li>
<li>Detection of haplotypes associated with prenatal death in dairy cattle and identification of deleterious mutations in GART, SHBG and SLC37A2 S./ Fritz,<br />
A. Capitan, A. Djari, S. C. Rodriguez, A. Barbat, A. Baur, C. Grohs, B. Weiss,<br />
M. Boussaha, D. Esquerré, C. Klopp, D. Rocha, D. Boichard // PLOS One. – 2013. – Vol. 8. – P. e65550.</li>
<li>Ellegren, H. Microsatellites: simple sequences with complex evolution /<br />
H. Ellegren // Nat. Rev. Genet. – 2004. – Vol. 5. – P. 435–445.</li>
<li>Exclusion probabilities of 22 bovine microsatellite markers in fluorescent multiplexes for semi automated parentage testing / D. W. Heyen, J. E. Beever, Y. Da, R. E. Evert, C. Green, S. R. Bates, J. S. Ziegle, H. A. Lewin // Animal Genetics. – 1997. – Vol. 28. – P. 21–27.</li>
<li>Factors associated with frequency of abortions recorded through Dairy Herd Improvement test plans / H. D. Norman, R. H. Miller, J. R. Wright, J. L. Hutchison, K. M. Olson // Journal of Dairy Science. – 2012. – Vol. 95. – P. 4074–4084.</li>
<li>Fine mapping of a quantitative trait locus for twinning rate using combined linkage and linkage disequilibrium mapping / T. H. Meuwissen, A. Karlsen, S. Lien, I. Olsaker, M. E. Goddard // Genetics. – 2002. – Vol. 161. – P. 373–379.</li>
<li>Fosgate, G. T. Ear-tag retention and identification methods for extensively managed water buffalo (Bubalus bubalis) in Trinidad / G. T. Fosgate,<br />
A. A. Adesiyun, D. W. Hird // Preventive Veterinary Medicine. – 2006. – Vol. 73. – P. 287–296.</li>
<li>Genetic Control of Conventional Labelling through the Bovine Meat Production Chain by Single Nucleotide Polymorphisms Using Real Time PCR /<br />
R. Capoferri, G. Bongioni, A. Galli, R. Aleandri // Journal of Food Protection. – 2006. – Vol. 69. – P. 1971–1977.</li>
<li>Genomic evaluation and identification of a haplotype affecting fertility for Ayrshire dairy cattle / T. A. Cooper, G. R. Wiggans, D. J. Null, J. L. Hutchison // Journal of Dairy Science. – 2013. – Vol. 96 (E-Suppl. 1). – P. 74.</li>
<li>Genomic evaluations with many more genotypes / P. M. VanRaden,<br />
J. R. O’Connell, G. R. Wiggans, K. A. Weigel // Genetics Selection Evolution. – 2011. – Vol. 43. – P. 10.</li>
<li>Genomic Selection in Dairy Cattle: The USDA Experience / G. R. Wiggans, J. B. Cole, S. M. Hubbard, T. S. Sonstegard // Annu. Rev. Anim. Biosci. – 2017. – Vol. 5. – P. 13.1–13.19.</li>
<li>Glusman, G. Whole-genome haplotyping approaches and genomic medicine / G. Glusman, H. C. Cox, J. C. Roach // Genome Medicine. – 2014. – Vol. 6. – P. 73.</li>
<li>Grover, A. Development and use of molecular markers: past and present /<br />
A. Grover, P. C. Sharma // Critical Rev. Biotech. – 2016. – Vol. 36. – P. 290–302.</li>
<li>Haplotype tests for recessive disorders that affect fertility and other traits /<br />
J. B. Cole, P. M. VanRaden, D. J. Null, J. L. Hutchison, T. A. Cooper, S. M. Hub­bard // Aip Research Report Genomics. – 2015. – P. 9–13.</li>
<li>Harmful recessive effects on fertility detected by absence of homozygous haplotypes / P. M. VanRaden, K. M. Olson, D. J. Null, J. L. Hutchison // Journal of Dairy Science. – 2011. – Vol. 94. – P. 6153–6161.</li>
<li>Hayes, B. The distribution of the effects of genes affecting QTL in live­stock / B. Hayes, M. E. Goddard // Genet. Sel. Evol. – 2001. – Vol. 33. – P. 209–229.</li>
<li>High-throughput genotyping with single nucleotide polymorphism /<br />
K. Ranade, M. S. Chang, G. T. Ting, D. Pei, C. F. Hsiao, M. Olivier, R. Pesich,<br />
J. Hebert, Y.-D. Chen, V. J. Dzau, D. Curb, R. Olshen, N. Rish, D. R. Cox, D. Botstein // Genome Res. – 2001. – Vol. 11. – P. 1262–1268.</li>
<li>Houston, R. A сomputerised database system for bovine traceability /<br />
R. Houston // Revue Scientifique et Technique. – 2001. – Vol. 20. – P. 652–661.</li>
<li>Hovingh, E. Abortions in dairy cattle: I. Common causes of abortions /<br />
E. Hovingh // Virginia Cooperation Extension Publication. – 2009. – Vol. 404. – P. 288.</li>
<li>IDEA: a large scale project on electronic identification of livestock / O. Ribo, C. Korn, U. Meloni, M. Cropper, P. De Winne, M. Cuypers // Revue Scientifique et Technique. – 2001. – Vol. 20. – P. 426–436.</li>
<li>Identification of a nonsense mutation in APAF1 that is likely causal for a decrease in reproductive efficiency in Holstein dairy cattle / H. A. Adams,<br />
T. S. Sonstegard, P. M. VanRaden, D. J. Null, C. P. Van Tassell, D. M. Larkin,<br />
H. A. Lewin // Journal of Dairy Science. – 2016. – Vol. 99. – P. 6693–6701.</li>
<li>Idris, I. Python Data Analysis / I. Idris. – Packt Publishing Ltd, 2014.</li>
<li>Importance of the traceability of animal products in epidemiology / V. Caporale, A. Giovannini, C. Di Francesco, P. Calistri // Revue Scientifique et Technique. – 2001. – Vol. 20. – P. 372–378.</li>
<li>ISAG cattle core and additional SNP panel 2013. International Society for Animal Genetics (ISAG) Web site. – URL : www.isag.us/committees.asp?autotry=­true&amp;ULnotkn=true. Accessed June 13, 2016.</li>
<li>Kim, S. SNP genotyping: technologies and biomedical applications / S. Kim, A. Misra // Annual Review of Biomedical Engineering. – 2007. – Vol. 9. – P. 289–320.</li>
<li>Krawczak, M. Informativity assessment for bi-allelic single nucleotide polymorphisms / M. Krawczak // Electrophoresis. – 1999. – Vol. 20. – P. 1676–1681.</li>
<li>Kruglyak, L. The use of a genetic map of biallelic markers in linakage studies / L. Kruglyak // Nature Genetics. – 1997. – Vol. 17. – P. 21–24.</li>
<li>Lachance, J. SNP ascertainment bias in population genetic analyses: why<br />
it is important, and how to correct it / J. Lachance, S. A. Tishkoff // BioEssays. – 2013. – Vol. 35. – P. 780–786.</li>
<li>Localization of Apaf1 gene expression in the early development of the mouse by means of in situ reverse transcriptase-polymerase chain reaction / M. Müller, J. Berger, N. Gersdorff, F. Cecconi, R. Herken, F. Quondamatteo // Developmental Dynamics. – 2005. – Vol. 234. – P. 215–221.</li>
<li>Marrero, Y. P. B. Python Tutorial / Y. P. B. Marrero. – Lean Publishing, 2014.</li>
<li>Mason, A. S. SSR Genotyping / A. S. Mason // Methods Mol. Biol. – 2015. – Vol. 1245. – DOI 10.1007/978-1-4939-1966-6_6.</li>
<li>McGrann, J. Animal traceability across national frontiers in the European Union / J. McGrann, H. Wiseman // Revue Scientifique et Technique. – 2001. –<br />
Vol. 20. – P. 406–412.</li>
<li>McKean, J. D. The importance of traceability for public health and consumer protection / J. D. McKean // Revue Scientifique et Technique. – 2001. – Vol. 20. – P. 363–371.</li>
<li>Methylation of 12S rRNA is necessary for in vivo stability of the small subunit of the mammalian mitochondrial ribosome / M. D. Metodiev, N. Lesko,<br />
C. B. Park, Y. Camara, Y. Shi, R. Wibom, K. Hultenby, C. M. Gustafsson,<br />
N. G. Larsson // Cell Metabolism. – 2009. – Vol. 9. – P. 386–397.</li>
<li>Meuwissen, T. H. Mapping multiple QTL using linkage disequilibrium and linkage analysis information and multitrait data / T. H. Meuwissen, M. E. Goddard // Genet. Sel. Evol. – 2004. – Vol. 36. – P. 261–279.</li>
<li>Meuwissen, T. H. Prediction of total genetic value using genome –wide dense marker maps / T. H. Meuwissen, B. J. Hayes, M. E. Goddart // Genetics. – 2001. – Vol. 157. – P. 1819–1829.</li>
<li>Micorsatellite based parentage control in cattle / M. L. Glowatzki-Mullis,<br />
C. Gaillard, G. Wigger, R. Fries // Animal Genetics. – 1995. – Vol. 26. – P. 7–12.</li>
<li>Miller, R. D. Regions of Low Single Nucleotide Polymorphism Incidence in Human and Orangutan Xq: Deserts and Recent Coalescences / R. D. Miller,<br />
P. Taillon-Miller, P.-Y. Kwok // Genomics. – 2001. – Vol. 1. – P. 78–88.</li>
<li>Performance of different SNP panels for parentage testing in two East Asian cattle breeds / E. Strucken, B. Gudex, M. Ferdosi, H. Lee, K. Song, J. Gibson,<br />
M. Kelly, E. Piper, L. Porto-Neto, S. H. Lee, C. Gondro // Animal Genetics. –<br />
2014. – Vol. 45. – P. 572–575.</li>
<li>Peter, A. T. Abortions in dairy cows: New insights and economic impact /<br />
A. T. Peter // Advances in Dairy Technology. – 2000. – Vol. 12. – P. 233–244.</li>
<li>Pettitt, R. G. Traceability in the food animal industry and supermarket chains / R. G. Pettitt // Revue Scientifique et Technique. – 2001. – Vol. 20. – P. 584–597.</li>
<li>Rance, D. Necaise. Data structures and algorithm using Python / D. Rance. – Wiley, 2010.</li>
<li>Raspor, P. Bio-markers: traceability in food safety issues / P. Raspor // Acta Biochimica Polonica. – 2004. – Vol. 52. – P. 659–664.</li>
<li>Report From The Commission To The Council And The European Parliament: On the possibility of introduction of electronic identification for bovine animals. – 2005. – URL : http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do? uri=COM:2005:0009:FIN:EN:PDF.</li>
<li>Resolution of quantitative traits into Mendelian factors by using a complete linkage map of restriction fragments length polymorphism / A. H. Paterson,<br />
E. S. Lander, J. D. Hewitt, S. Paterson, S. E. Lincoln, S. D. Tanksley // Nature. – 1988. – Vol. 335. – P. 721–726.</li>
<li>Roles of Mis18a in epigenetic regulation of centromeric chromatin and CENP-A loading / I. S. Kim, M. Lee, K. C. Park, Y. Jeon, J. H. Park, E. J. Hwang,<br />
T. I. Jeon, S. Ko, H. Lee, S. H. Baek, K. I. Kim // Molecular Cell. – 2012. –<br />
Vol. 46. – P. 260–273.</li>
<li>Schütz, E. Analytical and statistical consideration on the use of the ISAG-ICAR-SNP bovine panel for parentage control, using the Illumina BeadChip technology: example on the German Holstein population / E. Schütz, B. Brenig // Genet Sel Evol. – 2015. – Vol. 47(1). – P. 3.</li>
<li>Selection and use of SNP markers for animal identification and paternity analysis in U.S. beef cattle / M. P. Heaton, G. P. Harhay, G. L. Bennett, R. T. Stone, W. M. Grosse, E. Casas, J. W. Keele, T. P. L. Smith, C. G. Chitkon-McKown,<br />
W. W. Laegreid // Mammalian Genome. – 2002. – Vol. 13. – P. 272–281.</li>
<li>The Holstein Friesian lethal haplotype 5 (HH5) results from a complete deletion of TFB1M and cholesterol deficiency (CDH) from an ERV-(LTR) insertion into the coding region of APOB / E. Schütz, C. Wehrhahn, M. Wanjek, R. Bortfeld,<br />
W. E. Wemheuer, J. Beck, B. Brenig // PLOS One. – 2016. – Vol. 11. – P. e0154602.</li>
<li>The Mouse Genome Database (MGD): Premier model organism resource for mammalian genomics and genetics / J. A. Blake, C. J. Bult, J. A. Kadin,<br />
J. E. Richardson, J. T. Eppig // Nucleic Acids Research. – 2011. – Vol. 39. –<br />
P. D842–D848.</li>
<li>UniProt: The Universal Protein knowledgebase / R. Apweiler, A. Bairoch, C. H. Wu, W. C. Barker, B. Boeckmann, S. Ferro, E. Gasteiger, H. Huang, R. Lopez, M. Magrane, M. J. Martin, D. A. Natale, C. O’Donovan, N. Redaschi, L. S. Yeh // Nucleic Acids Research. – 2004. – Vol. 32. – P. D115–D119.</li>
<li>Weber, J. L. Abudant class of human DNA polymorphism which can be typed using the polymerase chain reaction / J. L. Weber, P. E. May // American J. Human Genet. – 1989. – Vol. 44. – P. 388–396.</li>
<li>Whole genome linkage disequilibrium maps in cattle / S. D. McKay,<br />
R. D. Schnabel, B. M. Murdoch, L. Matukumalli, J. Aerts, W. Coppieters, D. Crews, E. Neto, C. Gill, C. Gao, H. Mannen, P. Stothard, Z. Wang, C. Tassell, J. Williams,<br />
J. Taylor, S. Moore // BMC Genetics. – 2007. – Vol. 8. – P. 1–12.</li>
<li>Whole-genome sequencing of 234 bulls facilitates mapping of monogenic and complex traits in cattle / H. D. Daetwyler, A. Capitan, H. Pausch, P. Stothard,<br />
R. van Binsbergen, R. F. Brøndum, X. Liao, A. Djari, S. C. Rodriguez, C. Grohs,<br />
D. Esquerré, O. Bouchez, M. N. Rossignol, C. Klopp, D. Rocha, S. Fritz, A. Eggen, P. J. Bowman, D. Coote, A. J. Chamberlain, C. Anderson, C. P. Van Tassell, I. Hulsegge, M. E. Goddard, B. Guldbrandtsen, M. S. Lund, R. F. Veerkamp, D. A. Boichard, R. Fries, B. J. Hayes // Nature Genetics. – 2014. – Vol. 46. – P. 858–865.</li>
<li>Zane, L. Strategies for microsatellite isolation: a review / L. Zane,<br />
L. Bargelloni, T. Patarnello // Mol. Ecology. – 2002. – Vol. 11. – P. 1–16.</li>
<li>Абельсон, Х. Структура и интерпретация компьютерных программ /<br />
Х. Абельсон, Д. Сассман; пер. с англ. Г. К. Бронников. – 2-е изд. – М. : Добросвет, 2018.</li>
</ol>
<h2>Приложения</h2>
<h3><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2019-тема-1-Приложения-Часть-1.docx">Часть &#8212; 1</a></h3>
<h3><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2019-тема-1-Приложения-Часть-2.docx">Часть &#8212; 2</a></h3>
<h3><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2019-тема-1-Приложения-Часть-3.docx">Часть &#8212; 3</a></h3>
<h3><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2019-тема-1-Приложения-Часть-4.docx">Часть &#8212; 4</a></h3>
<h3><a href="https://apknet.ru/wp-content/uploads/2020/10/ФГБОУ-ВО-Кубанский-ГАУ-2019-тема-1-Приложения-Часть-5.docx">Часть &#8212; 5</a></h3>
]]></content:encoded>
					
					<wfw:commentRss>https://apknet.ru/analiz-geneticheskix-xarakteristik-v/feed/</wfw:commentRss>
			<slash:comments>0</slash:comments>
		
		
			</item>
	</channel>
</rss>

<!--
Performance optimized by W3 Total Cache. Learn more: https://www.boldgrid.com/w3-total-cache/

Кэширование страницы с использованием disk: enhanced 

Served from: apknet.ru @ 2025-01-23 07:33:17 by W3 Total Cache
-->